专利名称：用于治疗癌症和癌痛的中药制剂及其制法和质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种中药制剂及其制法和质量控制方法，特别涉及一种用于治疗癌症和癌痛的中药制剂及其制法和质量控制方法。
背景技术：
据世界卫生组织统计，全球平均每年死于恶性肿瘤者达690万人，新发病为870万例，且这一数字还在逐年增加；一半以上的癌症患者会有疼痛，据统计，70％的晚期癌症以疼痛为主诉，而肝癌、胰腺癌、骨肉瘤等常在一开始时就有疼痛；目前用于治疗癌症的药物大多为细胞毒性药物，近年大量的来自天然药物的提取物如紫彬醇，苦参素注射液等大量上市，但目前还没有对癌症和癌性疼痛具有双重治疗作用的中成药。
发明内容
本发明的目的在于提供一种效果显著的治疗癌症和癌痛的中药制剂及其制法和质量控制方法。
本发明技术方案是这样实现的本发明中药制剂主要由如下重量份的原料制备而成斑蝥5-15份、川乌300-700份；优选斑蝥10份、川乌500份。所述中药制剂可以是药剂学上可接受的剂型，例如丸剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液体制剂及注射剂等剂型，注射剂包括小水针、大输液、冻干粉针；优选冻干粉针。
本发明冻干粉针制备方法是斑蝥细粉用盐酸-丙酮液浸泡，回收丙酮，残留物用无水乙醇-乙醚洗涤，滤取沉淀，干燥得斑蝥提取物；川乌粗粉用乙醇冷提，提取液备用，药渣水煮后滤过浓缩，加入乙醇提取液，搅拌滤过，回收乙醇并浓缩，得川乌提取物，加水煮沸，滤过，调节pH值，与甘露醇煮沸溶解后，加活性炭吸附，滤过，滤液备用；取斑蝥提取物，加水，调节pH值，溶解，滤过，滤液加入上述川乌提取物和甘露醇混合液中，加水，调节pH值，微孔滤膜精滤，分装，冻干，封口，即得。最佳地斑蝥粉碎成细粉，置层析柱中，加配比为5∶95的盐酸-丙酮液浸泡2次，每次5小时，合并浸泡液，在60℃左右下减压回收丙酮，残留物用配比为4∶6的无水乙醇-乙醚洗涤3～4次，滤取沉淀，从滤器上用无水乙醇再洗涤1次，沉淀在60℃下干燥得斑蝥提取物，备用；川乌粉碎成粗粉，用乙醇冷浸提取二次，每次8小时，合并乙醇提取液，备用，药渣加pH4～5的注射用水前煮三次，每次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至1000g，加入乙醇提取液，搅拌均匀，静置24小时，滤过，回收乙醇并浓缩至50℃时测定相对密度为1.05左右，加pH3的注射用水2000ml煮沸1小时，冷却，滤过，用氢氧化钠调节pH值至6.5～7.0，加甘露醇煮沸溶解后，加入W/V比为0.15％活性炭，煮沸10分钟，滤过，滤液备用；取斑蝥提取物，加注射用水，并用10％氢氧化钠调节pH9，温热溶解后，滤过，滤液加入上述川乌提取物和甘露醇混合液中，加注射用水至2000ml，调节pH7.5左右，搅匀，用0.65um、0.45um和0.22um微孔滤膜组成的不锈钢微膜终端滤器精滤澄明，在无菌条件按每瓶2ml分装，于已灭菌的7ml冻干西林瓶中，在-40～-50℃下预冻2～3小时，然后冷冻干燥，在抽真空前，凝结器应先降温至-50～-60℃，在第一阶段，真空度维持在0.1mmHg柱左右，升华温度-20～-30℃干燥6～8小时，当看到制品中无水晶存在时，即已除去90％以上水份时，然后进入第二阶段干燥，此时，将干燥箱中搁板的温度升至30℃左右并保持恒定，继续干燥5～6小时左右，取出封口，制成1000瓶，即得。
本发明冻干粉针的质量控制方法如下一、性状本发明为淡黄色块状物。
二、鉴别1、取本发明0.4g，加水10ml溶解，加氨试液使显碱性，用氯仿振摇提取3次，每次5ml，合并氯仿液，挥干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。另取乌头碱对照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。取该对照品溶液3ml，蒸干，残渣加盐酸5ml，加热回流48小时，加氨试液使显碱性，用氯仿振摇提取2次，每次5ml，合并氯仿液，挥干，加氯仿1ml使溶解，作为水解产物对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲醇-氯仿-乙醚(1∶2∶1)为展开剂，展开，展距约19cm，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得出现斑点；在与水解产物对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2、本发明在斑蝥含量测定项下所得色谱中的保留时间，应与对照品的保留时间一致。
三、、检查1、乌头碱照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.5％三乙胺(80∶20)为流动相；检测波长为235nm。理论板数按乌头碱峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备精密称取乌头碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含10ug的溶液。即得。
供试品溶液的制备取本发明0.4g，精密称定，加水10ml溶解，加氨试液使显碱性，用二氯甲烷振摇取3次，每次20ml，合并二氯甲烷液，挥干，加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45um)滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图。
供试品色谱中，如出现与对照品相应的色谱峰，该峰面积不得大于对照品的峰面积。
2、pH值取本发明0.2g，加水溶解并稀释至100ml，依法测定(中国药典2005年版一部附录VII G)。应为5.5～7.5。
3、水分取本发明0.2g，依法测定(中国药典2005年版一部附录IX H第三法)。含水分不得过5.0％。
4、溶液颜色取本发明0.2g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，取10ml置于纳氏比色管中，依法检查(中国药典2005年版一部附录XI A第一法)，与黄色9号标准比色液比较，不得更深。
5、蛋白质取本发明0.2g，加水溶解并稀释至50ml，取1ml，加入新配制的30％磺基水杨酸试液0.5ml，混合，放置5分钟，溶液不得出现浑浊。
6、鞣质取本发明0.2g，加水溶解并稀释至50ml，取1ml，加入新鲜配制的含1％鸡蛋清生理盐水5ml，放置10分钟，溶液不得出现浑浊或沉淀。
7、树脂取本发明0.2g，加水溶解并稀释至50ml，取5ml，加盐酸1滴，放置30分钟，应无絮状物析出。
8、草酸盐取本发明0.2g，加水溶解并稀释至50ml，取2ml，用稀盐酸调节pH值至1～2，滤过，滤液调节pH值为5～6，加3％氯化钙溶液2～3滴，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀。
9、钾离子取本发明0.2g，加水溶解并稀释至50ml，取2ml，依法测定(中国药典2000年版一部附录IX S)。应符合规定。
10、热原取本发明0.2g，加0.9％氯化钠注射液溶解并稀释至100ml，依法检查(中国药典2005年版一部附录X III A)，剂量按家兔体重每1kg注射10ml。应符合规定。
11、澄明度在超净台内操作。取洁净具塞纳氏比色管5支，分别加入预先滤过的注射用水20ml，按《澄明度检查细则和判断标准》注射用无菌粉末项，于伞盆边沿处轻轻旋转，使溶剂形成旋流，随即用目检视，记录瓶中毛、点数，作为空白，然后分别加入0.2g供试品，使完全溶解，于伞盆边沿处横置观察，轻轻旋转或左右摆动，用目检视，记录毛、点数，扣除空白，即得。
本发明不得检出500μm以上的不溶性异物。0.2g所含短于500μm的毛及200～500μm的白点、白块和色点总数不得超过10个。
12、不溶性微粒取本发明0.2g，用净化水溶解并稀释至100ml，用净化水做空白，依法检查(中国药典2005年版一部附录IX R显微计数法)。应符合规定。
13、炽灼残渣取本发明0.2g，精密称定，加水溶解，并定容于100ml，精密量取10m1，依法检查(中国药典2005年版一部附录IX J)。炽灼残渣不得过1.0％(g/ml)。
14、重金属取本发明1.0g，依法检查(中国药典2005年版一部附录IX E第二法)。含重金属不得过百万分之十。
15、砷盐取本发明1.0g，加2％硝酸镁乙醇溶液5ml，点燃，燃尽后，小火灼炽至炭化，再在500～600℃炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水21ml使溶解，依法检查(中国药典2005年版一部附录IX F第一法)。含砷盐不得过百万分之二。
16总固体取本发明0.2g，精密称定，加水溶解并稀释至100ml，精密量取10ml，置于恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干后，在105℃干燥3小时，移置干燥器中冷却30分钟，迅速称定重量。计算出注射剂中含总固体的量(mg/ml，应按实际扣除辅料量)，应符合规定。
本发明含总固体不得过1.9mg/ml。
17、指标成分总含量为总固体量的百分率用指标成分总含量÷总固体量×100％加以计算，应不得少于25％。
18、其他应符合注射剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版一部附录IU)。
四、含量测定1、斑蝥照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI E)测定。
色谱条件与系统适用性试验；甲基硅橡胶(SE-30)为固定液，涂布浓度为3.5％；柱温为165±10℃。理论板数按斑蝥峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备精密称取斑蝥素对照品4mg，置25ml量瓶中，加氯仿使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含斑蝥素0.16mg)。
供试品溶液的制备精密称取本发明约1.0g，精密称定，加50ml水使溶解，用5％硫酸溶液调节PH值为3.5～4.0左右，加用水饱和的氯仿振摇提取5次，每次40ml，合并氯仿提取液，经铺有少量无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液置60℃以下水浴上蒸去氯仿至约10ml，自然挥散至2～3ml，定量转移至5ml量瓶中，加氯仿稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液2μl和供试品溶液4ul，注入气相色谱仪，计算，即得。
本发明每瓶含斑蝥以斑蝥素(C10H12O4)计，应为0.07～0.09mg。
2、总生物碱精密称取本发明约0.4g，精密称定，加50ml水使溶解，加浓氨试液5ml使呈碱性，用氯仿振摇提取5次，每次20ml，振摇10～15分钟，每次均同一水20ml洗涤，洗液用氯仿10ml振摇提取，合并氯仿液，用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液置250ml锥形瓶中，回收氯仿至干，加入乙醚2ml，继续蒸发至干，精密加硫酸滴定液(0.01mol/L)20ml，微热使溶解，放冷，加甲基红指示液2滴，用氢氧化钠滴定液(0.02mol/L)滴定，即得。每1ml的硫酸滴定液(0.01mol/L)相当于9.992mg的(C25H41NO9)。
本发明每瓶含生物碱以乌头原碱(C25H41NO9)计，应为0.56～0.68mg。
中医学认为癌瘤是产生癌痛的重要病理生理基础，且其与瘀血关系密切。血瘀既是癌瘤发生的病理机制之一，又是癌瘤病变过程中的病理产物。瘀血内阻而致络脉通，不通则痛。针对癌症与癌痛互为因果的机理关系。本发明中斑蝥功能破血消癥，攻毒蚀疮，用于癥瘕肿块，积年顽癣，瘰疬，赘疣，痈疽不溃，恶疮死肌”。南宋名医杨士瀛在其著作《仁摘直指方论》中明确记载斑蝥可以治疗癌症，迄今已历7个世纪。现代药理研究表明，斑蝥虫体所含的斑蝥素为抗癌有效物质，其对原发性肝癌、贲门癌、食道癌、消化道肿瘤等癌症，尤其对原发性肝癌有特效。川乌功能祛风除湿，温经止痛。用于风寒湿痹，关节疼痛，寒疝作痛，麻醉止痛。乌头类药物在我国已有2000多年的使用历史，功能显著，疗效确切，长于镇痛。中医在临床上一直用于对多种疼痛，类风湿关节炎有良好的效果，张仲景在《金匮要略》204方中，用乌头类药物有20方，其中13方中的功效为止痛，治多种疼痛，具有特效。两药相合，具有消癥散结，散寒止痛的作用。用于原发性肝癌、肺癌、食道癌、胃和喷门癌、直肠癌、妇科恶性肿瘤的治疗和癌症的疼痛的治疗，有标本兼治之效。
下面以冻干粉针为例，说明本发明的主要药效学一、本发明对小鼠实验性肿瘤的抑制作用
(一)本发明对小鼠S180实体瘤抑制作用试验1、动物试验用昆明种小白鼠，体重为18-22g，每组动物数均为10只，雌雄各半。
2、药物本发明冻干粉针每瓶0.2g，加入0.9％生理盐水1ml；顺铂每支100mg、足叶乙苷每支100mg，均以生理盐水为溶剂。
3、试验方法在无菌条件下，从接种7～8天生长良好的种鼠体内抽取瘤液，取瘤液0.2ml(100万/0.1ml)接种于小白鼠右前肢腋部皮下，24小时后随机分为4组，从小白鼠尾静脉给药，试验组给予本发明，空白对照组给予生理盐水，阳性药物对照组顺铂和足叶乙苷联合给药。试验组高剂量组一次给药剂量为1193.4mg/kg，中剂量为596.7mg/kg，低剂量组为397.8mg/kg。阳性药物对组顺铂高剂量组0.8mg/kg、足叶乙苷为1.25mg/kg；中剂量组顺铂0.6mg/kg、足叶乙苷0.63mg/kg；低剂量组顺铂0.4mg/kg、足叶乙苷0.32mg/kg。各组小白鼠每次给药容积为0.5ml/只，空白对照组0.5ml/只生理盐水。试验组和空白性对照组每日一次，连续七日。阳性药物对照组每周一次给药法，共给药一次。给药后第九天，记录体重后处死动物，进行解剖，记录瘤重，并按下面公式计算瘤重抑制率
试验共进行三次。
4、试验结果本发明对小鼠S180实体瘤的作用(三批平均)
本发明小剂量、中剂量组对瘤重的抑制率与相应的阳性药物对照小、中剂量组比较，经统计学处理，P＜0.05，有显著性差异，表明本发明小、中剂量组对瘤重的抑制率优于阳性药物小、中剂量组。本发明高剂量组对瘤重的抑制率与阳性对照药物高剂量组比较，经统计学处理，P＞0.05，无显著性差异。本试验结果表明本发明对小鼠S180实体瘤有明显抑制作用，中、小剂量的抑制作用优于中、小剂量的足叶乙苷加顺铂的作用。
此外，发明人还试验观察了本发明冻干粉针对实验小鼠艾氏腹水癌的抑制作用，结果表明本发明高、中、低剂量组小鼠平均生存天数与相应的阳性药物对照组比较，经统计学处理，p＜0.01，有极显著性差异，本发明高、中、低剂量组延长生存时间的作用明显优于环磷酰胺高、中、低剂量组。本发明可明显延长实验性艾氏腹水癌小白鼠的生存时间，并有明显优于环磷酰胺。发明人还实验观察了本发明冻干粉针配合化疗对小鼠S180实体瘤及小鼠实体型肝癌的抑制作用，结果表明本发明加足叶乙苷、顺铂合用的高、中、低三个剂量组对小白鼠实体型肝癌的抑制分别为55.34％、58.2％和55.2％，与单用化疗药物相应的高、中、低三个剂量组的抑制率35.1％、12.9％、11.0％相比较，经统计学处理，p＜0.01，有极显著性差异，说明前者对小白鼠实体型肝癌的抑制作用明显优于后者。单用化疗药物中、小剂量组的抑制率为12.9％和11.0％，与空白对照组相比较，经统计学处理，p＞0.05，无显著性差异，表明单用化疗药物的中、小剂量组对小白鼠实体型肝癌无明显抑制作用，而本发明联用化疗药物组的抑制作用却非常明显。以上结果说明本发明与化疗药物联用对小鼠S180实体瘤和小鼠实体性肝癌有明显抑制作用，其抑制率较单用化疗药物有非常明显的增加，说明本发明对化疗药物有增效作用。发明人还实验观察了本发明冻干粉针对对早幼粒细胞白血病细胞HL60的抑制作用，结果表明(1)本发明能抑制早幼粒细胞白血病细胞HL60细胞生长。培养三天后，其抑制率为30-50％左右(本发明浓度4.24％)。(2)小剂量的本发明对蛋白质生物合成有刺激作用。(3)流式细胞仪对HL60细胞周期分布的分析表明，本文所用剂量的本发明对HL60细胞周期影响不大。S期及G2/M期细胞略有增多，而G1细胞少许减少可能与蛋白质生物合成刺激有关。以上结果说明本发明能抑制HL60细胞生长。
二、本发明镇痛和抗应激作用1、动物试验用昆明种小白鼠，体重为18-22g，每组动物数均为10只。
2、药物本发明冻干粉针每瓶0.2g，加入0.9％生理盐水1ml；强痛定每支50mg/lm，以生理盐水为溶剂；0.3％醋酸。
3、试验方法(1)、镇痛实验小鼠随机分为5组，每组10只，雌雄各半。各组小鼠腹腔注射0.3％的醋酸溶液0.2ml/只，然后，空白对照组生理盐水0.3ml/只，腹腔注射。强痛定对照组强痛定5mg/kg，腹腔注射。本发明高剂量组1193.4mg/kg，中剂量组596.7mg/kg，低剂量组397.8mg/kg，尾静脉注射，给药容积均为0.5ml/只。在一定时间内，小鼠产生“歪扭”反应(腹部内凹，躯干与后腿伸张，臀部高起等)，计算扭体次数，扭体减少50％定为镇痛有效。
(2)抗应激试验取健康雄性小鼠，去掉不会游泳者及游泳时间过长者，尽量消除动物的个体差异，过筛后选入30只，分三组，每组10只。空白对照组蒸馏水，0.3ml/只。本发明大剂量组1193.4mg/kg，中剂量组596.7mg/kg，给药容积0.5ml/只。各组均尾静脉注射，每日1次，连续15日。本发明小剂量组本发明397.8mg/kg(给药容积0.5ml/只)，尾静脉注射，每日1次，连续15日。于给药最后一次的24小时后，下水游泳至下沉3次计时，游泳时间测定后做统计学处理。
4、试验结果(1)本发明镇痛试验结果见表1。
表1 本发明的镇痛作用(小鼠扭体法)
扭体次数较空白对照组减少50％以上为镇痛有效指标，结果表明本发明无论大、中、小剂量组均有效，且大剂量组强痛定的止痛效果近似。
(2)本发明抗应激试验结果见表10表2 本发明对小白鼠游泳时问的影响(x±SD)
结果表明本发明二个剂量组小白鼠游泳时间与空白对照组比较，经统计学处理，P＜0.001和P＜0.01，前者明显长于后者，说明本发明可使小白鼠游泳时间明显增加，具有抗应激作用。
结论本发明具有镇痛和抗应激作用，其大剂量组(1193.4mg/kg)的镇痛强度与强痛定相似。
三、本发明的其它药效学试验发明人还做了其它药效学试验，试验包括本发明对小鼠试验肿瘤组织中cAMP/cGMP的影响，对5-Fu引起的小鼠骨髓抑制的保护作用、对环磷酰胺引起小鼠外周血细胞抑制的保护作用，对活性氧自由基的清除作用共四项试验。试验结果表明本发明可能通过抑制肿瘤内cGMP增长和改变cAMP/cGMP的比值来达到抑制肿瘤的作用；本发明对5-Fu引起的小鼠骨髓抑制，具有明显的保护作用，且优于鲨肝醇，对环磷酰胺引起小鼠白细胞、血小板抑制，也具有明显的保护作用。
在整个发明过程中，我们做了大量的实验，进行摸索和筛选，确定了可行和最佳的技术方案。例如目前国内临床常用的含斑蝥的抗癌注射剂均采用煎煮提取石硫法精制，此方法不但脂溶性色素等杂质未除去，呈深棕色，而且斑蝥素等有效成分损失大，严重影响注射液的质量。本发明采用复合有机溶媒提取法，提高产品的质量与稳定性。
我们根据斑蝥中的主要有效成分斑蝥素的理化性质，设计了丙酮浸泡和乙醇-乙醚洗涤法和氯仿浸泡和乙醇-乙醚洗涤法两种提取精制方法进行了筛选。
(1)丙酮浸泡和乙醇-乙醚洗涤法取斑蝥细粉20g，用5倍量盐酸-丙酮(5∶95)液浸泡2次，每次5小时，合并浸泡液，60℃下减压回收丙酮，残留物用10倍量无水乙醇-乙醚(4∶6)混合溶剂洗涤3次，滤取沉淀，用适量无水乙醇从滤取上洗涤沉淀1次，沉淀在60℃左右干燥即得。结果见表1。
盐酸可使斑蝥素钠转成斑蝥素，斑蝥素易溶于丙酮而被提出乙醇-乙醚混合溶剂可将脂溶性色素等杂质洗脱而除去，提高提取物纯度，达到精制目的。
(2)氯仿浸泡和乙醇-乙醚洗涤法取斑蝥细粉20g，加5倍量盐酸-氯仿(5∶95)混合液浸泡2次，每次5小时，合并浸泡液，在65℃下回收氯仿，残留物用10倍量无水乙醇-乙醚(4∶6)混合溶剂洗涤3次，滤取沉淀，用适用无水乙醇从滤器上洗涤沉淀1次，取沉淀在60℃左右下干燥即得。结果见表1。
盐酸是为了将斑蝥素钠转成斑蝥素，斑蝥素易溶于氯仿而被提取出来；斑蝥素不溶于乙醇-乙醚混合液，混合溶剂可将色素等脂溶性杂质洗脱而除去。
表1.两种提取精制方法所得结果之比较
结果表明，两种方法所得结果基本一致，鉴于氯仿为2类溶剂，毒性大，可不选用氯仿法，而丙酮为3类溶剂，为低毒溶剂，故用丙酮法。
具体实施例方式本发明具体实施例1斑蝥细粉5g用盐酸-丙酮液浸泡，回收丙酮，残留物用无水乙醇-乙醚洗涤，滤取沉淀，干燥得斑蝥提取物；川乌粗粉300g用乙醇冷提，提取液备用，药渣水煮后滤过浓缩，加入乙醇提取液，搅拌滤过，回收乙醇并浓缩，得川乌提取物，加水煮沸，滤过，调节pH值，与甘露醇煮沸溶解后，加活性炭吸附，滤过，滤液备用；取斑蝥提取物，加水，调节pH值，溶解，滤过，滤液加入上述川乌提取物和甘露醇混合液中，加水，调节pH值，微孔滤膜精滤，分装，冻干，封口，即得。
本发明具体实施例2斑蝥细粉15g用盐酸-丙酮液浸泡，回收丙酮，残留物用无水乙醇-乙醚洗涤，滤取沉淀，干燥得斑蝥提取物川乌粗粉700g用乙醇冷提，提取液备用，药渣水煮后滤过浓缩，加入乙醇提取液，搅拌滤过，回收乙醇并浓缩，得川乌提取物，加水煮沸，滤过，调节pH值，与甘露醇煮沸溶解后，加活性炭吸附，滤过，滤液备用；取斑蝥提取物，加水，调节pH值，溶解，滤过，滤液加入上述川乌提取物和甘露醇混合液中，加水，调节pH值，微孔滤膜精滤，分装，冻干，封口，即得。
本发明具体实施例3斑蝥细粉8g用盐酸-丙酮液浸泡，回收丙酮，残留物用无水乙醇-乙醚洗涤，滤取沉淀，干燥得斑蝥提取物；川乌粗粉600g用乙醇冷提，提取液备用，药渣水煮后滤过浓缩，加入乙醇提取液，搅拌滤过，回收乙醇并浓缩，得川乌提取物，加水煮沸，滤过，调节pH值，与甘露醇煮沸溶解后，加活性炭吸附，滤过，滤液备用取斑蝥提取物，加水，调节pH值，溶解，滤过，滤液加入上述川乌提取物和甘露醇混合液中，加水，调节pH值，微孔滤膜精滤，分装，冻干，封口，即得。
本发明具体实施例4斑蝥10g粉碎成细粉，置层析柱中，加配比为5∶95的盐酸-丙酮液浸泡2次，每次5小时，合并浸泡液，在60℃左右下减压回收丙酮，残留物用配比为4∶6的无水乙醇-乙醚洗涤3～4次，滤取沉淀，从滤器上用无水乙醇再洗涤1次，沉淀在60℃下干燥得斑蝥提取物，备用；川乌500g粉碎成粗粉，用乙醇冷浸提取二次，每次8小时，合并乙醇提取液，备用，药渣加pH4～5的注射用水前煮三次，每次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至1000g，加入乙醇提取液，搅拌均匀，静置24小时，滤过，回收乙醇并浓缩至50℃时测定相对密度为1.05左右，加pH3的注射用水2000ml煮沸1小时，冷却，滤过，用氢氧化钠调节pH值至6.5～7.0，加甘露醇煮沸溶解后，加入W/V比为0.15％活性炭，煮沸10分钟，滤过，滤液备用；取斑蝥提取物，加注射用水，并用10％氢氧化钠调节pH9，温热溶解后，滤过，滤液加入上述川乌提取物和甘露醇混合液中，加注射用水至2000ml，调节pH7.5左右，搅匀，用0.65um、0.45um和0.22um微孔滤膜组成的不锈钢微膜终端滤器精滤澄明，在无菌条件按每瓶2ml分装，于已灭菌的7ml冻干西林瓶中，在-40～-50℃下预冻2～3小时，然后冷冻干燥，在抽真空前，凝结器应先降温至-50～-60℃，在第一阶段，真空度维持在0.1mmHg柱左右，升华温度-20～-30℃干燥6～8小时，当看到制品中无水晶存在时，即已除去90％以上水份时，然后进入第二阶段干燥，此时，将干燥箱中搁板的温度升至30℃左右并保持恒定，继续干燥5～6小时左右，取出封口，制成1000瓶，即得。每瓶0.2g，成人每次4～6瓶，临用前，用注射用水溶解后，稀释于5％葡萄糖注射液或生理盐水500ml中，静脉滴注，一日1次；或遵医嘱。每疗程首次用量减半，并将药液再稀释1倍后使用，每分钟不超过15滴，如无不良反应，半小时后可逐渐增加滴速，但以每分钟不超过60滴为宜。如病人出现尿路刺激，可改为每疗程首次用药浓度。每一疗程45天，停药一周后，可进行下一疗程或遵医嘱。
本发明具体实施例5斑蝥12g粉碎成细粉，置层析柱中，加配比为5∶95的盐酸-丙酮液浸泡2次，每次5小时，合并浸泡液，在60℃左右下减压回收丙酮，残留物用配比为4∶6的无水乙醇-乙醚洗涤3～4次，滤取沉淀，从滤器上用无水乙醇再洗涤1次，沉淀在60℃下干燥得斑蝥提取物，备用；川乌400g粉碎成粗粉，用乙醇冷浸提取二次，每次8小时，合并乙醇提取液，备用，药渣加pH4～5的注射用水前煮三次，每次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至1000g，加入乙醇提取液，搅拌均匀，静置24小时，滤过，回收乙醇并浓缩至50℃时测定相对密度为1.05左右，加pH3的注射用水2000ml煮沸1小时，冷却，滤过，用氢氧化钠调节pH值至6.5～7.0，加甘露醇煮沸溶解后，加入W/V比为0.15％活性炭，煮沸10分钟，滤过，滤液备用；取斑蝥提取物，加注射用水，并用10％氢氧化钠调节pH9，温热溶解后，滤过，滤液加入上述川乌提取物和甘露醇混合液中，加注射用水至2000ml，调节pH7.5左右，搅匀，用0.65um、0.45um和0.22um微孔滤膜组成的不锈钢微膜终端滤器精滤澄明，在无菌条件按每瓶2ml分装，于已灭菌的7ml冻干西林瓶中，在-40～-50℃下预冻2～3小时，然后冷冻干燥，在抽真空前，凝结器应先降温至-50～-60℃，在第一阶段，真空度维持在0.1mmHg柱左右，升华温度-20～-30℃干燥6～8小时，当看到制品中无水晶存在时，即已除去90％以上水份时，然后进入第二阶段干燥，此时，将干燥箱中搁板的温度升至30℃左右并保持恒定，继续干燥5～6小时左右，取出封口，制成1000瓶，即得。
权利要求
1.一种用于治疗癌症和癌痛的中药制剂，其特征在于它主要由如下重量份的原料制备而成斑蝥5-15份、川乌300-700份。
2.如权利要求1所述的治疗癌症和癌痛的中药制剂，其特征在于它主要由如下重量份的原料制备而成斑蝥10份、川乌500份。
3.如权利要求1或2所述的治疗癌症和癌痛的中药制剂，其特征在于所述制剂为药剂学上可接受的剂型。
4.如权利要求3所述的治疗癌症和癌痛的中药制剂，其特征在于所述制剂为丸剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液体制剂或注射剂。
5.如权利要求4所述的治疗癌症和癌痛的中药制剂，其特征在于所述注射剂为冻干粉针。
6.如权利要求5所述的治疗癌症和癌痛的冻干粉针的制备方法，其特征在于斑蝥细粉用盐酸—丙酮液浸泡，回收丙酮，残留物用无水乙醇—乙醚洗涤，滤取沉淀，干燥，得斑蝥提取物；川乌粗粉用乙醇冷浸提取，提取液备用，药渣加水煎煮后，滤过，浓缩，加入乙醇提取液，搅拌滤过，回收乙醇并浓缩，得川乌提取物，加水煮沸，滤过，调节pH值，与甘露醇煮沸溶解后，加活性炭吸附，滤过，滤液备用；取斑蝥提取物，加水，调节pH值，溶解，滤过，滤液加入上述川乌提取物和甘露醇混合液中，加水，调节pH值，微孔滤膜精滤，分装，冻干，封口，即得。
7.如权利要求6所述的治疗癌症和癌痛的冻干粉针的制备方法，其特征在于斑蝥粉碎成细粉，置层析柱中，加配比为5∶95的盐酸—丙酮液浸泡2次，每次5小时，合并浸泡液，在60℃左右下减压回收丙酮，残留物用配比为4∶6的无水乙醇—乙醚洗涤3～4次，滤取沉淀，从滤器上用无水乙醇再洗涤1次，沉淀在60℃下干燥得斑蝥提取物，备用；川乌粉碎成粗粉，用乙醇冷浸提取二次，每次8小时，合并乙醇提取液，备用，药渣加pH4～5的注射用水前煮三次，每次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至1000g，加入乙醇提取液，搅拌均匀，静置24小时，滤过，回收乙醇并浓缩至50℃时测定相对密度为1.05左右，加pH3的注射用水2000ml煮沸1小时，冷却，滤过，用氢氧化钠调节pH值至6.5～7.0，加甘露醇煮沸溶解后，加入W/V比为0.15％活性炭，煮沸10分钟，滤过，滤液备用；取斑蝥提取物，加注射用水，并用10％氢氧化钠调节PH9，温热溶解后，滤过，滤液加入上述川乌提取物和甘露醇混合液中，加注射用水至2000ml，调节pH7.5左右，搅匀，用0.65um、0.45um和0.22um微孔滤膜组成的不锈钢微膜终端滤器精滤澄明，在无菌条件按每瓶2ml分装，于已灭菌的7ml冻干西林瓶中，在-40～-50℃下预冻2～3小时，然后冷冻干燥，在抽真空前，凝结器应先降温至-50～-60℃，在第-阶段，真空度维持在0.1mmHg柱左右，升华温度-20～-30℃干燥6～8小时，当看到制品中无水晶存在时，即已除去90％以上水份时，然后进入第二阶段干燥，此时，将干燥箱中搁板的温度升至30℃左右并保持恒定，继续干燥5～6小时左右，取出封口，制成1000瓶，即得。
8.如权利要求5所述的治疗癌症和癌痛的冻干粉针的质量控制方法，其特征在于所述方法为如下方法中的一种或几种的组合(1)川乌的鉴别取本发明0.4g，加水10ml溶解，加氨试液使显碱性，用氯仿振摇提取3次，每次5ml，合并氯仿液，挥干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；另取乌头碱对照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；取该对照品溶液3ml，蒸干，残渣加盐酸5ml，加热回流48小时，加氨试液使显碱性，用氯仿振摇提取2次，每次5ml，合并氯仿液，挥干，加氯仿1ml使溶解，作为水解产物对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以配比为1∶2∶1的甲醇-氯仿-乙醚为展开剂，展开，展距约19cm，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得出现斑点；在与水解产物对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)斑蝥的鉴别用甲基硅橡胶为固定液，涂布浓度为3.5％；柱温为165±10℃；理论板数按斑蝥峰计算应不低于2500；精密称取斑蝥素对照品4mg，置25ml量瓶中，加氯仿使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含斑蝥素0.16mg的对照品溶液；精密称取本发明约1.0g，精密称定，加50ml水使溶解，用5％硫酸溶液调节PH值为3.5～4.0左右，加用水饱和的氯仿振摇提取5次，每次40ml，合并氯仿提取液，经铺有少量无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液置60℃以下水浴上蒸去氯仿至约10ml，自然挥散至2～3ml，定量转移至5ml量瓶中，加氯仿稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液；照中国药典气相色谱法试验，分别精密吸取对照品溶液2μl和供试品溶液4ul，注入气相色谱仪，供试品色谱中的保留时间，应与对照品的保留时间一致。(3)乌头碱的检查用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；配比为80∶20的甲醇-0.5％三乙胺为流动相；检测波长为235nm；理论板数按乌头碱峰计算应不低于3000；精密称取乌头碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含10ug的溶液，即得对照品溶液；取本发明0.4g，精密称定，加水10ml溶解，加氨试液使显碱性，用二氯甲烷振摇取3次，每次20ml，合并二氯甲烷液，挥干，加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用直径为0.45um的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；照中国药典高效液相色谱法试验，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图；试品色谱中，如出现与对照品相应的色谱峰，该峰面积不得大于对照品的峰面积。(4)pH值的检查取本发明0.2g，加水溶解并稀释至100ml，依中国药典pH值测定法测定，应为5.5～7.5。(5)水分的检查取本发明0.2g，依中国药典水分测定法第三法测定，含水分不得过5.0％。(6)溶液颜色的检查取本发明0.2g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，取10ml置于纳氏比色管中，依中国药典溶液颜色检查法第一法检查，与黄色9号标准比色液比较，不得更深。(7)蛋白质的检查取本发明0.2g，加水溶解并稀释至50ml，取1ml，加入新配制的30％磺基水杨酸试液0.5ml，混合，放置5分钟，溶液不得出现浑浊。(8)鞣质的检查取本发明0.2g，加水溶解并稀释至50ml，取1ml，加入新鲜配制的含1％鸡蛋清生理盐水5ml，放置10分钟，溶液不得出现浑浊或沉淀。(9)树脂的检查取本发明0.2g，加水溶解并稀释至50ml，取5ml，加盐酸1滴，放置30分钟，应无絮状物析出。(10)草酸盐的检查取本发明0.2g，加水溶解并稀释至50ml，取2ml，用稀盐酸调节pH值至1～2，滤过，滤液调节pH值为5～6，加3％氯化钙溶液2～3滴，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀。(11)钾离子的检查取本发明0.2g，加水溶解并稀释至50ml，取2ml，依中国药典注射剂有关物质检查法检查，应符合规定。(12)热原的检查取本发明0.2g，加0.9％氯化钠注射液溶解并稀释至100ml，依中国药典热原检查法检查，剂量按家兔体重每1kg注射10ml，应符合规定。(13)澄明度的检查在超净台内，取洁净具塞纳氏比色管5支，分别加入预先滤过的注射用水20ml，按中国药典《澄明度检查细则和判断标准》注射用无菌粉末项，于伞盆边沿处轻轻旋转，使溶剂形成旋流，随即用目检视，记录瓶中毛、点数，作为空白，然后分别加入0.2g供试品，使完全溶解，于伞盆边沿处横置观察，轻轻旋转或左右摆动，用目检视，记录毛、点数，扣除空白，本发明不得检出500μm以上的不溶性异物；0.2g所含短于500μm的毛及200～500μm的白点、白块和色点总数不得超过10个。(14)不溶性微粒的检查取本发明0.2g，用净化水溶解并稀释至100ml，用净化水做空白，依中国药典不溶性微粒检查法显微计数法，应符合规定。(15)炽灼残渣的检查取本发明0.2g，精密称定，加水溶解，并定容于100ml，精密量取10ml，依中国药典炽灼残渣检查法检查，炽灼残渣g/ml不得过1.0％。(16)重金属的检查取本发明1.0g，依中国药典重金属检查法第二法检查，含重金属不得过百万分之十。(17)砷盐的检查取本发明1.0g，加2％硝酸镁乙醇溶液5ml，点燃，燃尽后，小火灼炽至炭化，再在500～600℃炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水21ml使溶解，依中国药典砷盐检查法第一法检查，含砷盐不得过百万分之(18)总固体的检查取本发明0.2g，精密称定，加水溶解并稀释至100ml，精密量取10ml，置于恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干后，在105℃干燥3小时，移置干燥器中冷却30分钟，迅速称定重量。应按实际扣除辅料量，本发明含总固体不得过1.9mg/ml。(19)指标成分总含量为总固体量的百分率的检查用指标成分总含量÷总固体量×100％加以计算，应不得少于25％。(20)斑蝥的含量测定用甲基硅橡胶为固定液，涂布浓度为3.5％；柱温为165±10℃；理论板数按斑蝥峰计算应不低于2500；精密称取斑蝥素对照品4mg，置25ml量瓶中，加氯仿使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含斑蝥素0.16mg的对照品溶液；精密称取本发明约1.0g，精密称定，加50ml水使溶解，用5％硫酸溶液调节pH值为3.5～4.0左右，加用水饱和的氯仿振摇提取5次，每次40ml，合并氯仿提取液，经铺有少量无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液置60℃以下水浴上蒸去氯仿至约10ml，自然挥散至2～3ml，定量转移至5ml量瓶中，加氯仿稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液；照中国药典气相色谱法试验，分别精密吸取对照品溶液2μl和供试品溶液4ul，注入气相色谱仪，计算，本发明每瓶含斑蝥以分子式为C10H12O4的斑蝥素计，应为0.07～0.09mg。(21)总生物碱的含量测定精密称取本发明约0.4g，精密称定，加50ml水使溶解，加浓氨试液5ml使呈碱性，用氯仿振摇提取5次，每次20ml，振摇10～15分钟，每次均同一水20ml洗涤，洗液用氯仿10ml振摇提取，合并氯仿液，用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液置250ml锥形瓶中，回收氯仿至干，加入乙醚2ml，继续蒸发至干，精密加浓度为0.01mol/L的硫酸滴定液20ml，微热使溶解，放冷，加甲基红指示液2滴，用浓度为0.02mol/L的氢氧化钠滴定液滴定，每1ml的硫酸滴定液相当于9.992mg的乌头原碱，本发明每瓶含生物碱以分子式为C25H41NO9的乌头原碱计，应为0.56～0.68mg。
全文摘要
本发明涉及一种治疗癌症和癌痛的中药制剂及其制法和质量控制方法，该制剂由斑蝥和川乌制成；具有消癥散结，散寒止痛的作用，用于原发性肝癌、肺癌、食道癌、胃和喷门癌、直肠癌、妇科恶性肿瘤的治疗和癌症的疼痛；该冻干粉针制剂的质量控制方法包括川乌、斑蝥的鉴别，乌头碱、pH值、水分、溶液颜色、蛋白质、鞣质、树脂、草酸盐、钾离子、热原、澄明度、不溶性微粒、炽灼残渣、重金属、砷盐、总固体、指标成分总含量为总固体量的百分率的检查，斑蝥、总生物碱的含量测定。
文档编号A61K9/08GK1742833SQ20051009604
公开日2006年3月8日 申请日期2005年9月20日 优先权日2005年9月20日
发明者孙晓兰 申请人:孙晓兰