专利名称：一种黄岑苷注射液的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种黄芩苷注射液的制备方法。
背景技术：
黄芩为唇形科植物黄芩的根，具有清热、泻火、解毒、止血、安胎等作用，药理作用广泛。近年来，国内外学者对其进行了大量的研究，且达到了较高的水平，现代研究证明黄芩的主要有效成分为黄芩苷。黄芩苷为黄酮类化合物，它在清除体内自由基，减轻组织缺血再灌注损伤，调节免疫功能，保肝利胆、抗感染、抗肿瘤等方面均有一定的作用，是多种中药制剂的组成成分，但是目前尚无国家批准生产的黄芩苷注射制剂用于临床。这是因为黄芩苷难溶于水，制成注射剂型有一定的困难。
找到一种好的黄芩苷注射液的制备方法，显得尤为迫切。
发明内容
本发明的目的是将黄芩苷溶解于一定的溶剂中，并提供一种黄芩苷注射液的制备方法。
我们提供了一种黄芩苷注射液的制备方法，先采用复合溶剂溶解黄芩苷，再利用注射液常规技术制成注射液。
我们所用的黄芩苷的纯度为90％以上。
优选黄芩苷的纯度为95％以上。
其中复合溶剂通过大量的试验筛选我们确定可以选用乙醇和甘油的混合溶剂，乙醇和甘油的比例为3-5∶5-7，优选乙醇和甘油的比例为4∶6；也可以选用乙醇和丙二醇的混合溶剂，乙醇和丙二醇的比例为3-5∶5-7，优选乙醇和丙二醇的比例为4∶6。
以乙醇∶丙二醇(4∶6)为复合溶剂的黄芩苷注射液可以按以下步骤完成1)先取黄芩苷充分溶解于乙醇和丙二醇的比例为4∶6的复合溶剂中，冷藏过夜；2)溶液钛棒过滤，加入0.05-0.15％的活性炭，80℃保持30分钟，钛棒过滤，精滤后分装于2ml或5ml安瓿中，熔封，灭菌，即得。
本发明很好地解决了目前黄芩苷因为水溶性差不能做成注射剂的问题，能较大量的溶解黄芩苷。对通过本发明的方法制成的黄芩苷注射液进一步研究表明，该制剂具有抗菌消炎效果显著，稳定性好，质量可控，毒副作用小等优点。
具体实施例实施例1黄芩苷注射液的制备取黄芩苷10g(四川广汉本草生产，经检测黄芩苷纯度为97.0％)、加入乙醇丙二醇(3∶7)复合溶剂350ml充分溶解均匀，至冷库中冷藏过夜，过滤，滤液补充相应比例复合溶剂至400ml，加入0.40g活性炭，保持温度80℃30分钟，过滤，精滤，分装于2ml安瓿中，熔封，灭菌，即得黄芩苷注射液。批号040115实施例2黄芩苷注射液的制备取黄芩苷10g(四川广汉本草生产，经检测黄芩苷纯度为97.0％)、加入乙醇丙二醇(4∶6)复合溶剂350ml充分溶解均匀，至冷库中冷藏过夜，过滤，滤液补充相应比例复合溶剂至400ml，加入0.32g活性炭，保持温度80℃30分钟，过滤，精滤，分装于2ml安瓿中，熔封，灭菌，即得黄芩苷注射液。批号040120实施例3黄芩苷注射液的制备取黄芩苷10g(四川广汉本草生产，经检测黄芩苷纯度为97.0％)、加入乙醇丙二醇(5∶5)复合溶剂350ml充分溶解均匀，至冷库中冷藏过夜，过滤，滤液补充相应比例复合溶剂至400ml，加入0.50g活性炭，保持温度80℃30分钟，过滤，精滤，分装于2ml安瓿中，熔封，灭菌，即得黄芩苷注射液。批号040125实施例4黄芩苷注射液的制备取黄芩苷10g(四川广汉本草生产，经检测黄芩苷纯度为97.0％)、加入乙醇甘油(3∶7)复合溶剂350ml充分溶解均匀，至冷库中冷藏过夜，过滤，滤液补充相应比例复合溶剂至400ml，加入0.28g活性炭，保持温度80℃30分钟，过滤，精滤，分装于2ml安瓿中，熔封，灭菌，即得黄芩苷注射液。批号040205实施例5黄芩苷注射液的制备取黄芩苷10g(四川广汉本草生产，经检测黄芩苷纯度为97.0％)、加入乙醇丙二醇(4∶6)复合溶剂350ml充分溶解均匀，至冷库中冷藏过夜，过滤，滤液补充相应比例复合溶剂至400ml，加入0.40g活性炭，保持温度80℃30分钟，过滤，精滤，分装于2ml安瓿中，熔封，灭菌，即得黄芩苷注射液。批号040210实施例6黄芩苷注射液的制备取黄芩苷10g(四川广汉本草生产，经检测黄芩苷纯度为97.0％)、加入乙醇丙二醇(5∶5)复合溶剂350ml充分溶解均匀，至冷库中冷藏过夜，过滤，滤液补充相应比例复合溶剂至400ml，加入0.40g活性炭，保持温度80℃30分钟，过滤，精滤，分装于2ml安瓿中，熔封，灭菌，即得黄芩苷注射液。批号040215实施例7对小鼠热刺激疼痛反应的影响实验药物黄芩苷注射液，50mg/支。本发明注射液溶液配制取100mg和200mg，以pH7.4的PBS缓冲液稀释成10mg/ml，20mg/ml两种不同浓度的溶液。
阿司匹林，取100mg，以pH7.4的PBS缓冲液溶解制成阿司匹林溶液10mg/ml。
PH7.4的PBS缓冲液。配制方法，精密称取8.5gNaCl，2.2gNa2HPO4，0.2NaH2PO4，用1000ml蒸馏水溶解，即得PH7.4PBS缓冲液。
实验动物昆明种小鼠40只，雌性。
实验方法取雌性昆明种小鼠40只，在15-20℃室温条件下，置55±5℃热板，以小鼠接触热板至舔后足所经历的时间为痛阈值；剔除痛阈≤3s和≥30s小鼠。合格小鼠随机分为黄芩苷高剂量组(200mg/kg)黄芩甘低剂量组(100mg/kg)、阿司匹林对照组(100mg/kg)及PBS缓冲液空白对照组。各组小鼠腹腔注射受试药物后，分别测定其药后15，30，60，90nin时的痛阈值，(凡痛阈值＞60s者以60s计)，计算痛阈提高百分率％＝[药后痛阈值-药前痛阈值]/药前痛阈值×100％]。结果见表1。
表1 对小鼠热刺激疼痛反应的影响
注与空白组比较*P＜0.05**P＜0.01实施例8对小鼠化学刺激疼痛反应的影响实验药物黄芩苷注射液，50mg/支。本发明注射液溶液配制取100mg和200mg，以pH7.4的PBS缓冲液稀释成10mg/ml，20mg/ml两种不同浓度的溶液。
阿司匹林，取100mg，以pH7.4的PBS缓冲液溶解成阿司匹林溶液10mg/ml。
PH7.4的PBS缓冲液。配制方法，精密称取8.5gNaCl，2.2gNa2HPO4，0.2NaH2PO4，用1000ml蒸馏水溶解，即得PH7.4PBS缓冲液。
实验动物昆明种小鼠40只，雌雄各半。
实验方法昆明种小鼠，雌雄各半，随机分为黄芩苷高剂量组(200mg/kg)黄芩苷低剂量组(100mg/kg)、阿司匹林及PBS缓冲液空白对照组。皮下注射受试药物30min后腹腔注射0.1ml/LAA 0.2ml，计数15min内小鼠扭体次数，计算疼痛抑制率(％)＝[(对照组扭体次数-实验组扭体次数)/对照组扭体次数×100％]。结果见表2。
表2 对小鼠化学刺激疼痛反应的影响
注与空白对照组比较*P＜0.05**P＜0.01实施例9体外抗菌作用试验实验药物黄芩苷注射液。以pH7.4的PBS缓冲液稀释成10mg/ml浓度。
PH7.4的PBS缓冲液。配制方法，精密称取8.5gNaCl，2.2gNa2HPO4，0.2NaH2PO4，用1000ml蒸馏水溶解，即得PH7.4PBS缓冲液。
菌种金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、流感杆菌、枯草杆菌、大肠杆菌、甲型链球菌、乙型链球菌、肺炎球菌。
实验方法配制固体和液体培养基，调pH7.6，105℃消毒1h备用。药液稀释，采用连续倍比稀释法，取洁净试管10支，分别加入液体培养基1.0ml，第1管加10mg/ml浓度的黄芩苷溶液1.0ml，混匀后取出1.0ml加入第2管，依次稀释至第9管，取出1.0ml弃去，第10管加液体培养基1.0ml作对照。各管加塞置消毒锅105℃消毒1h。菌液制备，将贮藏菌各取少许分别接种于固体斜面培养基上，37℃培养24h使菌种活化。将活化菌种各取一接种环分别接种于1.0ml液体培养基中，37℃培养8h，随后再取菌液0.1ml，加入液体培养基至100ml稀释1000倍。将稀释1000倍的菌液各取0.1ml分别加入各药液稀释管中，置37℃培养箱中培养24h，观察各管的变化。如试管出现混浊，表明有菌生长，药液无抑菌作用；如试管澄清，则表明无菌生长，药液有抑菌作用。最低抑菌浓度(MIC)即为抑制细菌生长的药液最大稀释倍数。观察澄清、无菌生长的各药液管继续置37℃培养箱中培养48h，仍澄清无菌生长的药液最大稀释倍数，即为最低杀菌浓度MBC。结果见表3。
表3 黄芩苷的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)
注-试管澄清，无菌生长；+试管混浊，有菌生；(+)继续培养48h，试管混浊，有菌生长.
实施例10对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响实验药物黄芩苷注射液，50mg/支。本发明注射液溶液配制取100mg和200mg，以pH7.4的PBS缓冲液稀释成10mg/ml，20mg/ml两种不同浓度的溶液。
阿司匹林，取100mg，以pH7.4的PBS缓冲液溶解成阿司匹林溶液10mg/ml。
PH7.4的PBS缓冲液。配制方法，精密称取8.5gNaCl，2.2gNa2HPO4，0.2NaH2PO4，用1000ml蒸馏水溶解，即得PH7.4PBS缓冲液。
实验动物昆明种小鼠40只，雌雄各半。
实验方法选取体重18-22g健康昆明种小白鼠40只，雌雄各半，随机分为黄芩苷高剂量组(200mg/kg)黄芩甘低剂量组(100mg/kg)、阿司匹林及PBS缓冲液空白对照组，每组10只。将各剂量组药物腹腔注射，每天一次，连续7天，末次给药0.5h后，对小白鼠右耳廓均匀涂布二甲苯0.05ml/只，致炎1h后，处死小鼠，剪下左、右两耳，两耳重叠用直径8mm孔器凿取耳片，用称重，以两耳片重量差值为肿胀值。结果见表4。
表4对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响
注与空白组对照**P＜0.01实施例11对大鼠蛋清足肿胀影响实验药物黄芩苷注射液，50mg/支。本发明注射液溶液配制取100mg和200mg，以pH＝7.4的PBS缓冲液稀释成10mg/ml，20mg/ml两种不同浓度的溶液。
阿司匹林，取100mg，以pH7.4的PBS缓冲液溶解成阿司匹林溶液10mg/ml。
PH7.4的PBS缓冲液。配制方法，精密称取8.5gNaCl，2.2gNa2HPO4，0.2NaH2PO4，用1000ml蒸馏水溶解，即得PH7.4PBS缓冲液。
实验动物SD大鼠40只，雌雄各半。
实验方法取SD大鼠40只，雌雄各半，随机分为黄芩苷高剂量组(200mg/kg)黄芩苷低剂量组(100mg/kg)、阿司匹林及PBS缓冲液空白对照组，每组10只。先用软窄尺测量每只大白鼠的右足踝周长。将各剂量组药物腹腔注射，每天一次，连续7天，末次给药0.5h后，于每只大鼠右足跖部皮下注射100％新鲜鸡蛋清0.1ml致炎，注射蛋清后1h，2h，3h，4h分别测量右足踝周长，以致炎后周长减去致炎前的右足踝周长，即为炎症肿胀度。结果见表5。
表5 对大鼠蛋清足肿胀影响
注与空白组对照**P＜0.0权利要求
1.一种黄芩苷注射液的制备方法，其特征是先采用复合溶剂溶解黄芩苷，再利用注射液常规技术制成注射液。
2.如权力要求1所述的黄芩苷注射液的制备方法，其特征是所用的黄芩苷的纯度为90％以上。
3.如权力要求1所述的黄芩苷注射液制备方法，其特征是所用的黄芩苷的纯度为95％以上。
4.如权力要求1或3所述的黄芩苷注射液的制备方法，其特征是复合溶剂乙醇和甘油的比例为3-5∶5-7。
5.如权力要求1或3所述的黄芩苷注射液的制备方法，其特征是所用的复合溶剂乙醇和丙二醇的比例为3-5∶5-7。
6.如权力要求4所述的黄芩苷注射液的制备方法，其特征是所述的复合溶剂乙醇∶甘油为4∶6。
7.如权力要求5所述的黄芩苷注射液的制备方法，其特征是所述的复合溶剂乙醇∶丙二醇为4∶6。
8.如权力要求7说述的黄芩苷注射液制备方法，其特征是按以下步骤完成的1)取黄芩苷充分溶解于乙醇和丙二醇的比例为4∶6的复合溶剂中，冷藏过夜；2)溶液钛棒过滤，加入0.05-0.15％的活性炭，80℃保持30分钟，钛棒过滤，精滤后分装于2ml或5ml安瓿中，熔封，灭菌，即得。
全文摘要
本发明涉及一种黄芩苷注射液的制备方法，其特征是先采用复合溶剂溶解黄芩苷，再利用注射液常规技术制成注射液。复合溶剂优选乙醇和丙二醇，或乙醇和甘油的混合溶剂，更优选乙醇∶丙二醇(4∶6)的复合溶剂。通过复合溶剂的溶解很好地解决了黄芩苷不溶于水难以制成注射液的问题，利用注射液的剂型优点可以更好的将黄芩苷临床应用。本发明制备的黄芩苷注射液起效迅速，疗效确切，进一步研究表明该方法制备的黄芩苷注射液质量可控，制剂稳定。
文档编号A61P39/06GK1813778SQ20051010132
公开日2006年8月9日 申请日期2005年11月18日 优先权日2005年11月18日
发明者王伟, 刘二伟 申请人:广东大光药业有限公司