专利名称：一种白花蛇舌草、人参和黄芪配伍的抗肿瘤的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种由白花蛇舌草、人参和黄芪或其提取物制成的用于抗肿瘤疾病的药物组合物，及其制备方法和用途，属于医药技术领域。
2、背景技术目前，癌症已经成为人类的头号杀手，近数十年癌症的发病率和死亡率都有明显增高的趋势。肿瘤是人体中正在发育的或成熟的正常细胞，在某些不良因素的长期作用下，某部的细胞群，出现的过度增生或异常分化而生成的新生物，在局部形成肿块。但它与正常的组织利细胞不同，不按正常细胞的新陈代谢规律生长，而变得不受约束和控制，不会正常死亡，导致了细胞呈现异常的形态、功能和代谢，以致可以破坏正常的组织器官的结构并影响其功能。而恶性肿瘤细胞还能向周围浸润蔓延，甚至扩散转移到其他器官组织，继续成倍增生，造成对人体或生命极大的威胁。中医药治疗癌症有成功的经验和独特的优势，尤其是非杀伤性疗法，在治疗恶性肿瘤中所表现的优势为世人所瞩目。
白花蛇舌草(Oldenlandiadiffusa(Willd)Roxb)始载于《广西中药志》，为茜草科植物白花蛇舌草的带根全草。其叶形似蛇舌，开白花，故名。别名蛇舌草、矮脚白花蛇利草、目目生珠草、节节结蕊草等，广泛分布于长江流域及以南，主产福建、广东、广西等地、其性味苦、甘、寒，入心、肝、脾三经，功效清热解毒，活血化瘀，消炎止痛等。现代药理研究表明白花蛇舌草具有抗菌消炎、清热解毒、活血化瘀、利水通淋及抗肿瘤等作用，可用于治疗胃癌、食管癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、肺癌、肝癌、子宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌等，临床应用广泛。白花蛇舌草中的黄酮类、三萜混合酸，香豆素类和多糖类为抗癌的有效成分。
人参为五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey.)的干燥根及根茎，以其根部入药，具有“大补元气，固脱生津，安神益智”等良好作用，是著名的珍贵药材。经国内外学者研究证实，人参中含人参总皂苷、人参多糖、人参挥发油等有效成分，人参多糖药理实验研究证实人参多糖对免疫功能有刺激作用，可以促进人体非特异性免疫力的的提高，人参多糖主要由半乳糖，半乳糖醛酸，阿拉伯糖和鼠李糖等组成，毒理实验证实其无毒副作用；人参总皂苷具有抑制肿瘤细胞增殖，诱导凋亡的作用。
黄芪为豆科植物蒙古黄芪(Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao)或膜荚黄芪(Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.)的干燥根，是一种常用中药，味甘、性温，有补气升阳、固表止汗、托毒排脓和生肌等功效，近年来研究发现黄芪中除黄芪甲苷、黄酮等小分子化合物具有较强的生物活性，大分子化合物如黄芪多糖(APS)也同样具有多方面的活性，黄芪多糖能提高人体免疫功能，增强细胞生理代谢，提高巨噬细胞活性，是理想的免疫增强剂，它能促进T细胞、B细胞、NK细胞等免疫细胞的功能，还有抑制EAS，双向调节血糖等作用，延缓细胞衰老，有利于延年益寿。黄芪与人参配伍，可显著提高抗癌活性，降低化疗副作用。
但是，目前利用白花蛇舌草、人参和黄芪的相互作用，配伍组方，用于抗肿瘤方面的药物，尚未见报道。本发明人做了大量的药理和药效研究，证明白花蛇舌草在抗肿瘤方面有很好的疗效，人参和黄芪作为辅助用药可显著提高抗癌活性，降低化疗副作用。
3、发明内容为了满足临床需要，更好的治疗癌症疾病等，提高人民健康水平，本发明提供了一种新的药物组合物及其制备方法。
本发明药物组合物由下列原料药制成白花蛇舌草、人参和黄芪，其重量份数为白花蛇舌草50～800份、人参25～1600份、黄芪75～1600份；优选为白花蛇舌草100～400份、人参50～800份、黄芪150～800份；最优为白花蛇舌草200份、人参100～400份、黄芪300～400份。
上述药物组合物中的原料药可以用适宜的溶剂和方法单提或混提制备得到提取物，总提取物再与药学上可接受的辅料混合制成任一制剂。组合物的总提取物中主要的有效成分为白花蛇舌草总黄酮、人参多糖或皂苷、黄芪多糖或皂苷，总提取物中主要有效成分总的含量不低于30％。
上文所述的白花蛇舌草可以用适宜的溶剂经过提取加工得到白花蛇舌草提取物，其中的溶剂优选水或醇，白花蛇舌草的提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。如可通过水提醇沉、乙醇渗漉、醇提上柱制备得到白花蛇舌草提取物。本发明提供了一种白花蛇舌草提取物的优选提取工艺，具体过程如下取白花蛇舌草，粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法(附录IO)，用80％乙醇作溶剂，浸渍24小时，缓缓渗漉，漉液减压浓缩至无醇味，加水稀释成每1ml相当于1g原药材的量，冷藏，静置12小时，滤过，滤液加乙醇进行三次梯度醇沉，第一次使含醇量60％，第二次使含醇量70％，第三次使含醇量80％，每次均冷藏24小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.10～1.15，喷雾干燥，即得。
通过本工艺制得的白花蛇舌草提取物得率为0.5～1.5％；总黄酮含量(以芦丁计)不少于50％。
白花蛇舌草还可由如下工艺制备，但不仅限于下述方法工艺一取白花蛇舌草，粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法(附录IO)，用75％乙醇作溶剂，浸渍12小时，缓缓渗漉，漉液减压浓缩至无醇味，加水稀释成每1ml相当于1g原药材的量，冷藏，静置12小时，滤过，滤液加到已处理好的聚酰胺树脂上，先用2～3倍柱体积的水冲柱，再用10％乙醇冲柱，弃去洗涤液，最后用3～4倍柱体积的80％的乙醇洗脱，收集洗脱液。洗脱液减压浓缩至相对密度1.10～1.15，喷雾干燥，即得。通过本工艺制得的白花蛇舌草提取物得率为0.5～1.5％；总黄酮含量(以芦丁计)不少于45％。
工艺二取白花蛇舌草，粉碎成粗粉，80％乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液减压浓缩至无醇味，加水稀释成每1ml相当于1g原药材的量，冷藏，静置12小时，滤过，滤液加乙醇进行二次梯度醇沉，第一次使含醇量60％，第二次使含醇量80％，每次均冷藏12小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.10～1.15，喷雾干燥，即得。通过本工艺制得的白花蛇舌草提取物得率为0.5～1.5％；总黄酮含量(以芦丁计)不少于40％。
上文所述的人参可以用适宜的溶剂经过提取加工得到人参提取物，提取溶剂优选水或乙醇，提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法，提取物的有效成分为人参总皂苷或人参多糖，有效成分的含量最好不低于50％。
人参的提取方法也可参照文献方法制备如人参总皂苷可根据中国专利申请CN00110418.7制备，人参多糖可根据中国专利申请CN200410000209.4制备。
本发明提供了人参的优选提取工艺，具体过程如下以多糖为主要有效成分的人参提取物(以下简称人参多糖)的优选制备工艺如下取人参药材，切碎，用75％乙醇，回流提取4小时，滤过，药渣晾干，加水煎煮五次，合并煎煮液，加入0.3％活性炭，搅拌30分钟，静置过夜，滤过，滤液过树脂柱，收集流出液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达95％，冷藏，滤过，取沉淀用丙酮洗涤，抽干丙酮，取出沉淀于60～80℃干燥，粉碎，得粉末即得。
通过本工艺制备的人参提取物中人参多糖的含量不低于50％，人参提取物得率为0.5-2％。
人参多糖还可由如下工艺制备，但不仅限于下述方法方法一取人参，切碎，加水回流提取三次，每次2小时，第一次加水10倍量，二、三次为8、8倍量，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.16～1.24，过大孔树脂柱，收集流出液，减压浓缩至稠膏状，真空干燥，即得。通过本工艺制备的人参提取物，得率为4～6％，人参多糖的含量不低于40％。
方法二取人参，切碎，用80％乙醇，回流提取3小时，滤过，药渣晾干，加水煎煮三次，每次1.5小时，加水10倍量，合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15～1.20，过大孔树脂，流出液减压浓缩至稠膏状，喷雾干燥即得。通过本工艺制备的人参提取物，得率为2～4％，人参多糖含量不低于45％。
本发明提供了以总皂苷为主要有效成分的人参提取物(以下简称人参总皂苷)的优选制备工艺，具体如下取人参药材，粉碎成细粒，加10倍量乙醇回流提取二次，每次3小时，合并提取液，冷藏，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，加水至适量(使每1ml相当于原药材1g)，搅匀，冷藏，滤过，滤液加于已处理好的大孔树脂柱上，先用2V～3V柱体积的水进行洗脱，弃去水洗液，再用3倍柱体积的80％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并减压浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。
通过本工艺制备得到的人参总皂苷提取物得率为1～2％，人参总皂苷含量不低于50％，人参皂苷Re、人参皂苷Rg1含量不低于30％。
人参总皂苷还可由如下工艺制备，但不仅限于下述方法
方法一取人参药材，粉碎成细粒，加乙醇回流提取二次，每次4小时，每次加醇10倍量，合并提取液，冷藏，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，加水稀释至相对密度为1.5～1.20，加1/2倍量水饱和正丁醇提取3次，合并正丁醇液，减压回收正丁醇至稠膏状，喷雾干燥即得。通过本工艺制备的人参提取物得率为4～5％，人参总皂苷含量不低于35％，人参皂苷Re、人参皂苷Rg1含量和不低于20％。
方法二取人参药材，粉碎成细粒，加乙醇同流提取三次，第一次加醇10倍量，二、三次为8、8倍量，每次2小时，合并提取液，滤过，同收乙醇并浓缩至稠膏，加水至适量，搅匀，冷藏，滤过，滤液加1/2倍量水饱和正丁醇提取3次减压浓缩，合并正丁醇液，减压同收正丁醇至稠膏状，喷雾干燥即得。通过本工艺制备的人参提取物得率为3～5％，人参总皂苷含量为不低于40％，人参皂苷Re、人参皂苷Rg1含量和不少于20％。
黄芪可以用适宜的溶剂经过提取加工得到黄芪提取物，提取溶剂优选水或乙醇，黄芪的提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。如可通过水提醇沉制备得到黄芪提取物，还可以通过根据文献方法制备。
本发明提供了一种以多糖为主要有效成分的黄芪提取物(以下简称黄芪多糖)的优选制备工艺，具体如下取黄芪药材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，提取液合并，浓缩至提取液体积与生药材的比例为1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量达到70％，过滤，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗涤，再用适量水溶解，过滤，滤液过大孔树脂，用水洗脱，收集水洗液，将水洗液浓缩至药液体积与药材比例为1∶2.5，加入乙醇使含醇量达到70％，得沉淀，将沉淀用95％乙醇和丙酮洗涤脱水，减压干燥(60℃)，即得。
通过本工艺制备的黄芪提取物中黄芪总多糖的含量不低于70％，得率为0.5～2％。
黄芪多糖还可由如下工艺制备，但不仅限于下述方法方法一取黄芪药材，加水回流提取三次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15～1.23，加乙醇使含醇量达80％，静置24小时，滤过，沉淀加水溶解，滤过，再加乙醇使含醇量达85％，静置24小时，滤过，收集沉淀，真空干燥即得。通过本工艺制备的黄芪提取物得率为2～4％，黄芪多糖含量不低于40％。
方法二取黄芪药材，加10倍量80％乙醇提取4小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，每次2小时，每次加水10倍量，提取液合并，过滤，滤液加乙醇使含醇量达85％，过滤，滤液减压浓缩至稠膏状，喷雾干燥即得。通过本工艺制备的黄芪提取物得率为3～4％，黄芪多糖含量不低于35％。
本发明提供了一种以总皂苷为主要有效成分的黄芪提取物(以下简称黄芪总皂苷)的优选制备工艺，具体如下取黄芪，加水煎煮三次，每次1.5小时，第一次加水10倍量，二、三次均为8倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含醇量为75％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，加于已处理好的大孔吸附树脂柱上，先用2倍体积的水冲柱，再用4倍体积的70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、真空干燥，即得。通过本工艺制备的黄芪总皂苷提取物得率为0.5～2％，总皂苷含量不低于50％，黄芪甲苷含量不低于2.0％。黄芪总皂苷还可由如下方法制备，但不仅限于下述方法方法一取黄芪，加水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含乙醇量为60％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，减压浓缩、真空干燥，即得。通过本工艺制备的黄芪提取物得率为3～5％，总皂苷含量不低于30％，黄芪甲苷含量不低于1％。
方法二取黄芪，加水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理1次使含乙醇量为60％，冷藏放置，同收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，并减压浓缩、真空干燥，即得。通过本工艺制备的黄芪提取物得率为2～4％，总皂苷含量为不低于40％，黄芪甲苷含量不低于1％。
本发明药物组合物除可用上述药材直接投料制得外，还可以由白花蛇舌草、人参、黄芪的提取物投料制成，其主要有效成分分别为白花蛇舌草总黄酮、人参多糖或皂苷、黄芪多糖或皂苷，白花蛇舌草提取物含总黄酮(以芦丁计)最好不低于20％，人参提取物含人参总皂苷最好不低于20％或者含人参多糖最好不低于20％，黄芪提取物含黄芪总皂苷最好不低于20％或者含黄芪多糖最好不低于20％。按照提取物相对于药材的得率计算，本发明组合物可以有以下4种不同配比，按重量份数比分别为配比1白花蛇舌草提取物5～80份、人参多糖2～40份、黄芪多糖7～120份；优选为白花蛇舌草提取物10～40份、人参多糖5～20份、黄芪多糖15～60份；最优为白花蛇舌草提取物20份、人参多糖10份、黄芪多糖30份；配比2白花蛇舌草提取物5～80份、人参总皂苷10～160份、黄芪总皂苷10～160份；优选为白花蛇舌草提取物10～40份、人参总皂苷20～80份、黄芪总皂苷20～80份；最优为白花蛇舌草提取物20份、人参总皂苷40份、黄芪总皂苷40份；配比3白花蛇舌草提取物5～80份、人参总皂苷10～160份、黄芪多糖7～120份；优选为白花蛇舌草提取物10-40份、人参总皂苷20～80份、黄芪多糖15～60份；最优为白花蛇舌草提取物20份、人参总皂苷40份、黄芪多糖30份；配比4白花蛇舌草提取物5～80份、人参多糖2～40份、黄芪总皂苷10～160份；优选为白花蛇舌草提取物10～40份、人参多糖5～20份、黄芪总皂苷20～80份；最优为白花蛇舌草提取物20份、人参多糖10份、黄芪总皂苷40份。
上述4种配比得到的总提取物，主要有效成分总的含量均不低于30％。
以上组成是按重量份作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减小，如大规模生产可以以千克为原料，或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或者减小，但各组成之间重量配比的比例不变。
以上组成，若以克为单位，可以制成100～10000次用量的制剂，如作为注射剂，可制成100～10000支，每次用量1～10支。如作为片剂，可制成100～10000片，每次服用1～10片。
以上重量配比的比例是经过科学筛选得到的，对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100％。
本发明药物组分的用量是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量在上述重量份范围内都具有较好疗效。
本发明提供了一种用于制备治疗肿瘤等方面疾病的药物。本发明药物组合物具有抗肿瘤作用，白花蛇舌草可直接抑制癌细胞的核分裂，使其丧失繁殖能力，并对癌细胞的耗氧能力有直接抑制作用，人参和黄芪作辅助可显著提高抗癌活性，降低化疗副作用。主要用于治疗胃癌、食管癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、肺癌、肝癌、子宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌等恶性肿瘤。
该组合物可以加一种或多种药学上可接受的载体，以口服、鼻吸入或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊、软胶囊、分散片、口服液、颗粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、缓释片、缓释胶囊、控释片、控释胶囊，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如糖浆等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油悬浮剂等，如水针、冻干粉针、无菌粉针、输液等。本组合物的优选的剂型是注射剂或口服制剂。
本发明的药物组合物可采用现有制药领域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受的载体。所述的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
本发明的药物组合物在制成注射剂时，为了增加其溶解度，可以加入吐温-80等增溶剂。输液中可以加入用于调节渗透压的等渗调节剂，例如，氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、乳酸钠、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，优选氯化钠或葡萄糖。粉针中可加入赋形剂，例如，甘露醇、葡萄糖等。
本发明经过药理学研究和药效动物实验研究结果表明，由白花蛇舌草、人参和黄芪为主要成分制成的药物，对S180肉瘤有一定的抑制作用；此外还对EAC小鼠的生存时间有明显的延长作用；与化疗药(CTX)和放疗(60Co照射)合用可增加抗肿瘤(S180肉瘤)作用。本发明实验研究结果证明，白花蛇舌草、人参和黄芪合并用药呈协同作用，药效明显增强。
本发明组合物具有以下优点(1)提供了一种用于抗肿瘤疾病的药物组合物及其制备方法和用途，满足了临床急需；(2)对白花蛇舌草、人参和黄芪的相互作用和配伍组方进行了药效学研究，发现了组合物具有明显的抗肿瘤作用和放疗、化疗增效作用，对S180肉瘤的抑瘤率分别为超过了45％，对EAC小鼠的生命延长率分别为超过30％，对化疗的抑瘤增效率分别为超过35％，对放疗的抑瘤增效率分别为超过30％，表明三药协同增效，疗效显著，明显优于单用白花蛇舌草提取物，统计学差异极其显著(p＜0.01)，其结果是本技术领域的普通技术人员所意想不到的；(3)对本发明组合物各配比进行了药效学研究，得出了本发明组合物的最优配比；(4)本发明可以以原料或提取物直接投料，制备工艺简单，可以使不同批次药品间质量差异小，药品质量更均匀稳定；(5)进行的稳定性实验表明本发明药物组合物注射液各项指标均比较稳定，保证了临床用药的安全；(6)白花蛇舌草抗肿瘤作用明显，人参和黄芪作辅助可显著提高抗癌活性，降低化疗副作用，合并用药疗效确切，且减小了相对用药剂量，具有广泛的应用前景。
以下通过实验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些实验例包括本发明药物组合物的药效学实验，白花蛇舌草提取物、人参多糖和黄芪多糖的组合物以下简称BRH组合物I，白花蛇舌草提取物、人参总皂苷和黄芪总皂苷的组合物以下简称BRH组合物II，白花蛇舌草提取物、人参总皂苷和黄芪多糖的组合物以下简称BRH组合物III，白花蛇舌草提取物、人参多糖和黄芪总皂苷的组合物以下简称BRH组合物IV。实验例中所用的白花蛇舌草提取物取自实施例1第2批，人参多糖取自实施例2第2批、人参总皂苷取自实施例3第1批；黄芪多糖取自实施例4第1批、黄芪总皂苷取自实施例5第2批。
实验例1 BRH组合物合并用药药效研究供试品 空白对照组0.9％生理盐水注射液，自制；阳性对照组环磷酰胺注射液，自制；白花蛇舌草提取物组白花蛇舌草提取物注射液，自制；BRH组合物注射液I组，自制(制备方法参见实施例7)；BRH组合物注射液II组，自制(制备方法参见实施例7)；BRH组合物注射液III组，自制(制备方法参见实施例7)；BRH组合物注射液IV组，自制(制备方法参见实施例7)。
受试动物ICR种小鼠，体重18～22g，雄性，270只，随机分为27组。
瘤种S180瘤液。
实验方法取ICR小鼠270只，均皮下接种S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日随机分为27组，称体重。腹腔注射给药，给药剂量见表1，共10天，停药次日称体重，处死小鼠并剥离皮下瘤块，称瘤重，并计算抑瘤率。结果见表1。
实验结果各给药组都具有明显的抑制S180肿瘤生长作用(*P＜0.05、***P＜0.01和***P＜0.001)。其中BRH组合物注射液I组、BRH组合物注射液II组、BRH组合物注射液III组、BRH组合物注射液IV组的作用都明显强于单用白花蛇舌草提取物(#P＜0.01)，抑瘤率分别为47.00％～59.00％、49.00％～60.00％、47.50％～57.50％、47.50％～58.50％。证明白花蛇舌草、人参和黄芪配伍有很好的抑制肿瘤生长的作用，且与组合物的剂量配比有关，BRH组合物注射液I中白花蛇舌草提取物+人参多糖+黄芪多糖＝20mg+10mg+30mg、BRH组合物注射液II中白花蛇舌草提取物+人参总皂苷+黄芪总皂苷＝20mg+40mg+40mg、BRH组合物注射液III中白花蛇舌草提取物+人参总皂苷+黄芪多糖＝20mg+40mg+30mg、BRH组合物注射液IV中白花蛇舌草提取物+人参多糖+黄芪总皂苷＝20mg+10mg+40mg时作用最好。
表1 BRH组合物注射液对S180实体瘤生长的影响(X±SD)
注*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001与对照组相比；#P＜0.01，与白花蛇舌草提取物组相比实验例2 BRH组合物对艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延长率的影响供试品空白对照组0.9％生理盐水注射液，自制；阳性对照组环磷酰胺注射液，自制；
白花蛇舌草提取物组白花蛇舌草提取物注射液，自制；BRH组合物注射液I组(白花蛇舌草提取物+人参多糖+黄芪多糖＝20mg+10mg+30mg)分为低、中、高三个剂量组，自制(制备方法参见实施例7)；BRH组合物注射液II组(白花蛇舌草提取物+人参总皂苷+黄芪总皂苷＝20mg+40mg+40mg)分为低、中、高三个剂量组，自制(制备方法参见实施例7)；BRH组合物注射液III组(白花蛇舌草提取物+人参总皂苷+黄芪多糖＝20mg+40mg+30mg)分为低、中、高三个剂量组，自制(制备方法参见实施例7)；BRH组合物注射液IV组(白花蛇舌草提取物+人参多糖+黄芪总皂苷＝20mg+10mg+40mg)分为低、中、高三个剂量组，自制(制备方法参见实施例7)。
受试动物ICR种小鼠，体重18～22g，雄性，150只，随机分为15组。
瘤种EAC腹水。
实验方法取ICR小鼠150只，无菌抽取EAC腹水，以生理盐水1∶2倍稀释，每鼠腹腔接种0.2ml，24小时随机分为15组，分别为空白对照组、阳性对照组、白花蛇舌草提取物组、BRH组合物注射液I低、中、高三个剂量组、BRH组合物注射液II低、中、高三个剂量组、BRH组合物注射液III低、中、高三个剂量组、BRH组合物注射液IV低、中、高三个剂量组，称体重。腹腔注射给药，给药剂量见表2，共10天，此后观察小鼠的死亡时间，结果用平均存活天数和生命延长率表示。结果见表2。
表2 BRH组合物对EAC腹水癌小鼠生命延长率的影响(X±SD)
注*P＜0.05，**P＜0.01，与对照组相比；#P＜0.01，与白花蛇舌草提取物组相比实验结果各给药组都具有明显使EAC小鼠的生命延长率提高(*P＜0.05和**P＜0.01)。其中BRH组合物注射液I组、BRH组合物注射液II组、BRH组合物注射液III组、BRH组合物注射液IV组的作用都明显强于单用白花蛇舌草提取物(#P＜0.01)，生命延长率分别为34.92％～50.79％、30.95％～46.82％、34.92％～50.79％、34.92％～58.54％。证明白花蛇舌草、人参和黄芪配伍有很好的抑制肿瘤生长，延长小鼠生命的作用，且与各组合物的给药剂量有关，给药剂量为20mg/kg时作用都最好。
实验例3 BRH组合物对化疗的增效作用供试品空白对照组0.9％生理盐水注射液，自制；阳性对照组环磷酰胺(CTX)注射液，自制；CTX+白花蛇舌草提取物组CTX+白花蛇舌草提取物注射液，自制；CTX+BRH组合物注射液I组(白花蛇舌草提取物+人参多糖+黄芪多糖＝20mg+10mg+30mg)分为低、中、高三个剂量组，自制(制备方法参见实施例7)；CTX+BRH组合物注射液II组(白花蛇舌草提取物+人参总皂苷+黄芪总皂苷＝20mg+40mg+40mg)分为低、中、高三个剂量组，自制(制备方法参见实施例7)；CTX+BRH组合物注射液III组(白花蛇舌草提取物+人参总皂苷+黄芪多糖＝20mg+40mg+30mg)分为低、中、高三个剂量组，自制(制备方法参见实施例7)；CTX+BRH组合物注射液IV组(白花蛇舌草提取物+人参多糖+黄芪总皂苷＝20mg+10mg+40mg)分为低、中、高三个剂量组，自制(制备方法参见实施例7)。
受试动物ICR种小鼠，体重18～22g，雄性，150只，随机分为15组。
瘤种S180瘤液。
实验方法取ICR小鼠150只，均皮下接种S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日随机分为15组，分别为空白对照组、阳性对照组、CTX+白花蛇舌草提取物组、CTX+BRH组合物注射液I低、中、高三个剂量组、CTX+BRH组合物注射液II低、中、高三个剂量组、CTX+BRH组合物注射液III低、中、高三个剂量组、CTX+BRH组合物注射液IV低、中、高三个剂量组，称体重。除空白对照组外，其余各组均在接种后第2、第6天腹腔注射环磷酰胺(CTX)30mg/kg，给药组次日灌胃给药，给药剂量见表3，共10天，停药次日称体重，处死动物，剥离皮下瘤块，称瘤重，并计算抑瘤率和增效率。结果见表3。增效率(％)＝(化疗药加水组平均瘤重-化疗药加给药组平均瘤重)/化疗药加水组平均瘤重×100％。
实验结果各给药组与环磷酰胺合用都有明显的化疗增效作用(*P＜0.05和**P＜0.01)。其中BRH组合物注射液I组、BRH组合物注射液II组、BRH组合物注射液III组、BRH组合物注射液IV组的增效作用都明显强于单用白花蛇舌草提取物(#P＜0.01)，其抑瘤增效率分别为36.57％～38.69％、35.47％～39.54％、36.7％～38.69％、35.47％～38.06％。证明白花蛇舌草、人参和黄芪配伍与化疗药环磷酰胺合用有很好的化疗增效作用，且与各组合物的给药剂量有关，给药剂量为20mg/kg时作用都最好。
表3 BRH组合物对化疗的增效作用(X±SD)
注*P＜0.05，**P＜0.01，与对照组相比；#P＜0.01，与CTX+白花蛇舌草提取物组相比实验例4 BRH组合物对放疗的增效作用供试品空白对照组0.9％生理盐水注射液，自制；阳性对照组60Co组；60Co+白花蛇舌草提取物组60Co+白花蛇舌草提取物注射液，自制；60Co+BRH组合物注射液I组(白花蛇舌草提取物+人参多糖+黄芪多糖＝20mg+10mg+30mg)分为低、中、高三个剂量组，自制(制备方法参见实施例7)；60Co+BRH组合物注射液II组(白花蛇舌草提取物+人参总皂苷+黄芪总皂苷＝20mg+40mg+40mg)分为低、中、高三个剂量组，自制(制备方法参见实施例7)；60Co+BRH组合物注射液III组(白花蛇舌草提取物+人参总皂苷+黄芪多糖＝20mg+40mg+30mg)分为低、中、高三个剂量组，自制(制备方法参见实施例7)；60Co+BRH组合物注射液IV组(白花蛇舌草提取物+人参多糖+黄芪总皂苷＝20mg+10mg+40mg)分为低、中、高三个剂量组，自制(制备方法参见实施例7)。
受试动物ICR种小鼠，体重18～22g，雄性，150只，随机分为15组。
瘤种S180瘤液。
实验方法取ICR小鼠150只，均皮下接种S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日随机分为15组，分别为空白对照组、阳性对照组、白花蛇舌草提取物组、BRH组合物注射液I低、中、高三个剂量组、BRH组合物注射液II低、中、高三个剂量组、BRH组合物注射液III低、中、高三个剂量组、BRH组合物注射液IV低、中、高三个剂量组，称体重。除空白对照组外，其余各组均在接种后第3、第6天用60Co全身照射，照射剂量为0.05Gy/min。给药组次日灌胃给药，给药剂量见表4，共10天，停药次日称体重，处死动物，剥离皮下瘤块，称瘤重，并计算抑瘤率和增效率。结果见表4。
表4 BRH组合物对放疗的增效作用(X±SD)
注*P＜0.05，**P＜0.01，与对照组相比；#P＜0.01，与60Co+白花蛇舌草提取物组相比实验结果各给药组与放疗60Co照射合用都有明显的放疗增效作用(*P＜0.05和**P＜0.01)。其中BRH组合物注射液I组、BRH组合物注射液II组、BRH组合物注射液III组、BRH组合物注射液IV组的增效作用都明显强于单用白花蛇舌草提取物(#P＜0.01)，其抑瘤增效率分别为32.34％～34.51％、33.64％～34.85％、33.52％～35.34％、32.34％～35.05％。证明白花蛇舌草、人参和黄芪配伍与放疗60Co照射合用有很好的放疗增效作用，且与组合物的给药剂量有关，给药剂量为20mg/kg时作用都最好。
实验例5 小鼠注射给药急性毒性实验(1)实验方法供试品BRH组合物注射液I组(自制，1ml白花蛇舌草提取物+人参多糖+黄芪多糖＝20mg+10mg+30mg)；BRH组合物注射液II组(自制，1ml白花蛇舌草提取物+人参总皂苷+黄芪总皂苷＝20mg+40mg+40mg)；BRH组合物注射液III组(自制，1ml白花蛇舌草提取物+人参总皂苷+黄芪多糖＝20mg+40mg+30mg)；BRH组合物注射液IV组(自制，1ml白花蛇舌草提取物+人参多糖+黄芪总皂苷＝20mg+10mg+40mg)。
受试动物小鼠，每组雌雄各5只，雄性体重25～28g，雌性体重21～24g。
给药途径静脉注射、腹腔注射。
观察项目死亡数、一般状态、体重、剖检、半数致死剂量。
(2)实验结果按照急性毒性实验要求进行预试，腹腔注射及静脉注射两给药途径皆无法测出药物的半数致死量，也未见明显的毒性反应，故进行一日内最大给药量实验。给药剂量尾静脉分别注射BRH组合物注射液I、BRH组合物注射液II、BRH组合物注射液III、BRH组合物注射液IV各0.1ml/10g，腹腔分别注射BRH组合物注射液I、BRH组合物注射液II、BRH组合物注射液III、BRH组合物注射液IV各0.1ml/10g，一日2次。
死亡数未出现死亡。
一般状态未见异常变化。
体重于给药前1天，给药日，给药后1、3、7、14天测量；未见异常变化。
剖检心、肝、肺、肾等组织未见异常变化。
(3)结论本实验中未出现死亡，推测BRH组合物注射液I、II、III、IV对雌雄小鼠静脉和腹腔注射给药的最大耐受量均为0.2ml/10g，相当于50kg体重人日最大用量10ml的100倍。表明本品低毒，安全性高。
实验例6 BRH组合物注射液稳定性实验供试品BRH组合物注射液I组(自制，1ml白花蛇舌草提取物+人参多糖+黄芪多糖＝20mg+10mg+30mg)；BRH组合物注射液II组(自制，1ml白花蛇舌草提取物+人参总皂苷+黄芪总皂苷＝20mg+40mg+40mg)；BRH组合物注射液III组(自制，1ml白花蛇舌草提取物+人参总皂苷+黄芪多糖＝20mg+40mg+30mg)；BRH组合物注射液IV组(自制，1ml白花蛇舌草提取物+人参多糖+黄芪总皂苷＝20mg+10mg+40mg)。
考察项目性状、PH值、澄明度长期稳定性实验方法及结果将本品各组合物置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置6个月、12个月，各项指标均无明显变化，实验结果表明本品各组合物注射液长期放置基本稳定。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式
，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。实施例4～13中所用的白花蛇舌草提取物取自实施例1第2批，人参多糖取自实施例2第2批、人参总皂苷取自实施例3第1批；黄芪多糖取自实施例4第1批、黄芪总皂苷取自实施例5第2批。
实施例1 白花蛇舌草提取物的制备白花蛇舌草提取物的制备工艺取白花蛇舌草，粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法(中国药典2000年版一部附录IO)，用80％乙醇做溶剂，浸渍24小时，缓缓渗漉，漉液减压浓缩至无醇味，加水稀释成每1ml相当于1g原药材的量，冷藏，静置12小时，滤过，滤液加乙醇进行三次梯度醇沉，第一次使含醇量60％，第二次使含醇量70％，第三次使含醇量80％，每次均冷藏24小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.10～1.15，喷雾干燥，即得。
通过本工艺制得的白花蛇舌草提取物得率为0.5～1.5％；总黄酮含量(以芦丁计)不少于50％。
白花蛇舌草提取物的含量测定对照品溶液的制备 精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品10mg，置50ml量瓶中，加适量70％乙醇，置水浴上微热使溶解，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0.2mg)。
标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0与6.0ml，分别置25ml量瓶中，各加70％乙醇至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加乙醇至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，在507nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法 精密量取本品适量，加于已处理好的聚酰胺柱(50目，2g，内径12～15mm，湿法装柱)上，用50ml水洗脱，弃去洗脱液，用70％乙醇洗脱，收集洗脱液约25ml，置25ml量瓶中，加70％的乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取5ml，置甲、乙两个25ml量瓶中，甲瓶中加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，在甲、乙两瓶中各加氢氧化钠试液10ml，再加乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，以乙瓶为空白，在507nm的波长处测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的量，计算，即得。
本品按干燥品计算，含总黄酮以芦丁(C27H30016)计，应不少于50％。
根据上述工艺，制得白花蛇舌草提取物三批样品，其含量和得率见下表。
白花蛇舌草提取物中黄芪多糖含量和得率
实施例2 以多糖为主要有效成分的人参提取物即人参多糖的制备人参多糖制备工艺取生晒参，切碎，用75％乙醇，回流提取4小时，滤过，药渣晾干，加水煎煮五次，合并煎煮液，加入0.3％活性炭，搅拌30分钟，静置过夜，滤过，滤液过树脂柱，收集流出液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达95％，冷藏，滤过，取沉淀用丙酮洗涤，抽干丙酮，取出沉淀于60～80℃干燥，粉碎即得。
人参多糖鉴别实验(1)取本品约0.2g，加水5ml溶解后，加碱性酒石酸铜试液5滴，加热即产生红色沉淀，冷却，滤过，取滤液加盐酸1滴使成酸性，水浴加热10分钟，放冷，调节PH值至中性，加碱性酒石酸铜试液0.5ml，水浴加热即产生红色的氧化亚铜沉淀。
(2)取本品约0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml摇匀，缓缓加入硫酸3ml，两液面交界处显紫红色环。
人参多糖的含量测定对照品溶液的制备精密称取60℃真空干燥至恒重的半乳糖醛酸约100mg，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备精密称取本品50mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法精密量取对照品溶液、供试品溶液及水各1ml，分别精密加入0.25mol/L硼砂硫酸溶液6ml，置水浴中加热30分钟，放冷，再分别精密加入0.125％咔唑无水乙醇溶液0.4ml，置水浴中加热10分钟，放冷至室温，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)实验，在530nm波长处测定吸收度，计算，即得。
根据上述工艺，制得人参提取物三批样品，其含量和得率见下表。由结果可以看出，通过本工艺制备的人参多糖提取物中人参多糖的含量不低于50％，提取物得率为0.5～2％。
人参提取物中人参多糖含量和得率
实施例3 以总皂苷为主要有效成分的人参提取物即人参总皂苷的制备人参总皂苷制备工艺取人参药材，粉碎成细粒，乙醇回流提取二次，每次3小时，每次加醇10倍量，合并提取液，冷藏，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，加水至适量(使每1ml相当于原药材1g)，搅匀，冷藏，滤过，滤液加于已处理好的大孔树脂柱上，先用2V～3V柱体积的水进行洗脱，弃去水洗液，再用3倍柱体积的80％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并减压浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。
人参总皂苷的鉴别取本品0.5g，加水0.5ml搅拌润湿，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Re、Rg1对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。
人参总皂苷的含量测定对照品溶液制备取人参皂甙Rg1对照品约10mg，经60℃真空干燥2小时，精密称定，置100ml量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得每1ml含Rg1对照品0.1mg的溶液，即得。
供试品溶液制备精密称取本品50mg，置50ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法精密量取供试品溶液和对照品溶液各1ml，分别置10ml具塞试管中，在水浴上蒸干，放冷，加入5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml，再加入高氯酸0.8ml，于60℃保温15分钟，冷却至室温，加冰醋酸5ml，摇匀；同时作空白对照。照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，在560nm波长处测定吸收度，计算，即得。
人参皂苷Re、人参皂苷Rg1含量测定色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈—水(22∶78)为流动相；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1对照品、Re对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的混合溶液。
供试品溶液的制备取本品0.2g，精密称定，精密加入水饱和正丁醇30ml，密塞，放置过夜，超声处理(功率250W，频率50kHz)30分钟，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液15ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见下表。
根据上述工艺，制得人参总皂苷三批样品，其含量和得率见下表。由结果可以看出，通过本工艺制备得到的人参总皂苷提取物得率为1～2％，人参总皂苷含量不低于50％，人参皂苷Re、人参皂苷Rg1含量不低于30％。
人参提取物含量测定结果及得率
实施例4 以多糖为主要有效成分的黄芪提取物即黄芪多糖的制备黄芪多糖制备工艺取黄芪药材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，提取液合并，浓缩至提取液体积与生药材的比例为1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量达到70％，过滤，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗涤，再用适量水溶解，过滤，滤液过大孔树脂，用水洗脱，收集水洗液，将水洗液浓缩至药液体积与药材比例为1∶2.5，加入乙醇使含醇量达到70％，得沉淀，将沉淀用95％乙醇和丙酮洗涤脱水，减压干燥(60℃)，即得。
黄芪多糖的含量测定标准溶液的制备取经105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，备用。
标准曲线绘制精密量取标准溶液0.1ml～0.6ml共6份，分别置25ml量瓶中，加水至2.0ml，并加苯酚溶液(取苯酚300g，铝片0.3g，碳酸氢钠0.15g，混合蒸馏，收集182℃馏分，配制成5％水溶液)1.0ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0ml，摇匀，放置5min，置水浴中加热15min，取出，迅速冷却至室温，另以2.0ml水同上平行操作作为空白对照，在490nm波长处测定吸收值，计算回归方程。
测定方法取黄芪提取物0.5g置25ml量瓶中，照标准曲线绘制项下的方法自“加水至2.0ml”起，依法测定吸收值，依回归方程计算多糖的含量。
黄芪多糖的鉴别(1)取本品约0.2g，加水5ml溶解后，加碱性酒石酸铜试液5滴，加热即产生红色沉淀，冷却，滤过，取滤液加盐酸1滴使成酸性，水浴加热10分钟，放冷，调节PH值至中性，加碱性酒石酸铜试液0.5ml，水浴加热即产生红色的氧化亚铜沉淀。
(2)取本品约0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml摇匀，缓缓加入硫酸3ml，两液面交界处显紫红色环。
根据上述工艺，制得黄芪提取物三批样品，其含量和得率见下表。由结果可以看出，通过本工艺制备的黄芪提取物中黄芪总多糖的含量不低于50％，提取物得率为0.5～2％。
黄芪多糖的含量和得率
实施例5 以总皂苷为主要有效成分的黄芪提取物即黄芪总皂苷的制备黄芪总皂苷制备工艺取黄芪，加水煎煮三次，每次1.5小时，第一次加水10倍量，二、三次均为8倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含醇量为75％，第二次为85％，每次均冷藏放置，同收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，加于已处理好的大孔吸附树脂柱上，先用2倍体积的水冲柱，再用4倍体积的70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、真空干燥，即得。
黄芪总皂苷鉴别实验鉴别实验一 取本品0.01g，加甲醇20ml，加热同流1小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100～120目，5g，内径10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗涤2次，每次20ml；弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—甲醇—水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯(365nm)下显相同的橙黄色荧光斑点。
鉴别实验二 取本品0.01g，加乙醇30ml，加热回流20分钟，滤过，滤液加0.3％氢氧化钠溶液15ml使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至5～6，用乙酸乙脂15ml振摇提取，分取乙酸乙脂液，用铺有无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙脂1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材2g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同—硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—甲醇(10∶1)作为展开剂，展开，取出，凉干，置氨蒸气中熏后置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。
黄芪总皂苷含量测定总皂苷的含量测定对照品溶液的制备 精密称取于105℃干燥至恒重的黄芪甲苷对照品约10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含黄芪甲苷0.1mg)。
供试品溶液的制备 取本品0.1g，精密称定，加水25ml使溶解，移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤两次，每次10ml，弃去水液，正丁醇至水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，移至25ml量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 精密量取对照品溶液、供试品溶液各1ml，置25ml钠氏比色管，置水浴中蒸干，放冷，加新鲜配制的5％香草醛—冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，摇匀，放置5分钟，置沸水浴中显色15分钟，取出，立即置冰浴中冷却至室温，加入8ml冰醋酸，摇匀，在538nm波长处测定吸光度，计算，即得。
黄芪甲苷的含量测定色谱条件与系统适用性实验 以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙睛—水(32∶68)为流动相；蒸发光散射检测器。理论板数以黄芪甲苷峰计算不低于4000。
对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 精密称取本品0.04g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl与供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点对数方程计算，即得。
根据上述工艺，制得黄芪提取物三批样品，其含量和得率见下表。由结果可以看出，通过本工艺制备的黄芪总皂苷提取物得率为0.5～2％，总皂苷含量不低于50％，黄芪甲苷含量不低于2.0％。
黄芪总皂苷和黄芪甲苷的含量及得率
实施例6 BRH组合物粉针剂的制备1、处方BRH组合物I处方白花蛇舌草提取物 20g人参多糖 10g黄芪多糖 30g甘露醇 300g无菌注射用水 加至3000ml共制备 1000支注总有效成分的总含量能达到74.87％
BRH组合物II处方白花蛇舌草提取物 20g人参总皂苷 40g黄芪总皂苷 40g甘露醇 300g无菌注射用水 加至3000ml共制备 1000支注总有效成分的总含量能达到63.78％BRH组合物III处方白花蛇舌草提取物 20g人参总皂苷 40g黄芪多糖 30g甘露醇 300g无菌注射用水 加至3000ml共制备 1000支注总有效成分的总含量能达到71.47％BRH组合物IV处方白花蛇舌草提取物 20g人参多糖 10g黄芪总皂苷 40g甘露醇 300g无菌注射用水 加至3000ml共制备 1000支注总有效成分的总含量能达到63.39％2、具体步骤1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)取配液量40％的注射用水加入处方量的白花蛇舌草提取物，加热搅拌溶解完全。人参多糖(或人参总皂苷)和黄芪多糖(或黄芪总皂苷)加少量注射用水，加热后使之溶解。合并上述溶液，再加入甘露醇加热搅拌溶解完全，补加无菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.22um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞。将样品放入冻干机中冷冻干燥。预冻-45℃5小时，低温真空干燥-45℃～0℃20小时，然后升温至25℃真空干燥3小时。
9)冻干结束，压塞，轧盖。
10)成品全检，包装入库。
实施例7 BRH组合物水针剂的制备1、处方BRH组合物I处方白花蛇舌草提取物 20g人参多糖 10g黄芪多糖 30g注射用水 加至1000ml共制备 1000支注总有效成分的总含量能达到74.87％BRH组合物II处方白花蛇舌草提取物 20g人参总皂苷 40g黄芪总皂苷 40g注射用水 加至1000ml共制备 1000支注总有效成分的总含量能达到63.78％BRH组合物III处方白花蛇舌草提取物 20g人参总皂苷 40g黄芪多糖 30g注射用水 加至1000ml共制备 1000支注总有效成分的总含量能达到71.47％BRH组合物IV处方白花蛇舌草提取物 20g人参多糖 10g黄芪总皂苷 40g注射用水 加至1000ml共制备 1000支注总有效成分的总含量能达到63.39％2、具体步骤1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)取配液量40％的注射用水，加入处方量的白花蛇舌草提取物，加热搅拌溶解完全。人参多糖(或人参总皂苷)和黄芪多糖(或黄芪总皂苷)加少量注射用水，加热使之溶解。
3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)将溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽灭菌30分钟。
10)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏。
11)灯检，成品全检，包装入库。
实施例8 BRH组合物氯化钠输液的制备1、处方BRH组合物I处方白花蛇舌草提取物 20g人参多糖 10g黄芪多糖 30g氯化钠 900g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶注总有效成分的总含量能达到74.87％BRH组合物II处方白花蛇舌草提取物 20g人参总皂苷 40g黄芪总皂苷 40g氯化钠 900g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶注总有效成分的总含量能达到63.78％BRH组合物III处方白花蛇舌草提取物 20g人参总皂苷 40g黄芪多糖 30g氯化钠 900g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶注总有效成分的总含量能达到71.47％
BRH组合物IV处方白花蛇舌草提取物 20g人参多糖 10g黄芪总皂苷 40g氯化钠 900g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶注总有效成分的总含量能达到63.39％2、具体步骤1)前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)取配液量40％的注射用水，加入处方量的白花蛇舌草提取物，加热搅拌溶解完全。人参多糖(或人参总皂苷)和黄芪多糖(或黄芪总皂苷)加少量注射用水，加热使之溶解。将氯化钠用配液量40％的注射用水溶解完全。
3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)灌装于100ml的输液瓶中。
9)115℃热压灭菌30分钟。
10)灯检，成品全检，包装入库。
实施例9 BRH组合物葡萄糖输液的制备1、处方BRH组合物I处方白花蛇舌草提取物 20g人参多糖 10g黄芪多糖 30g葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶注总有效成分的总含量能达到74.87％
BRH组合物II处方白花蛇舌草提取物 20g人参总皂苷 40g黄芪总皂苷 40g葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶注总有效成分的总含量能达到63.78％BRH组合物III处方白花蛇舌草提取物 20g人参总皂苷 40g黄芪多糖 30g葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶注总有效成分的总含量能达到71.47％BRH组合物IV处方白花蛇舌草提取物 20g人参多糖 10g黄芪总皂苷 40g葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶注总有效成分的总含量能达到63.39％2、具体步骤1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)取配液量40％的注射用水，加入处方量的白花蛇舌草提取物，加热搅拌溶解完全。人参多糖(或人参总皂苷)和黄芪多糖(或黄芪总皂苷)加少量注射用水，加热后使之溶解。将葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全。
3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)灌装于100ml的输液瓶中。
9)115℃热压灭菌30分钟。
10)灯检，成品全检，包装入库。
实施例10 BRH组合物片剂的制备1、处方BRH组合物I处方白花蛇舌草提取物20g人参多糖10g黄芪多糖30g淀粉100.0g微晶纤维素 40.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁2.0g羧甲淀粉钠 4.0g共制备 1000片注总有效成分的总含量能达到74.87％BRH组合物II处方白花蛇舌草提取物20g人参总皂苷 40g黄芪总皂苷 40g淀粉100.0g微晶纤维素 40.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁2.0g羧甲淀粉钠 4.0g共制备 1000片注总有效成分的总含量能达到63.78％BRH组合物III处方白花蛇舌草提取物20g人参总皂苷 40g黄芪多糖30g淀粉100.0g微晶纤维素 40.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁2.0g羧甲淀粉钠 4.0g共制备 1000片注总有效成分的总含量能达到71.47％
BRH组合物IV处方白花蛇舌草提取物 20g人参多糖 10g黄芪总皂苷 40g淀粉 100.0g微晶纤维素 40.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁 2.0g羧甲淀粉钠 4.0g共制备 1000片注总有效成分的总含量能达到63.39％2、具体步骤1)将白花蛇舌草提取物、人参多糖(或人参总皂苷)和黄芪多糖(或黄芪总皂苷)粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
4)将白花蛇舌草提取物、人参多糖(或人参总皂苷)、黄芪多糖(或黄芪总皂苷)、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
5)过20筛制颗粒。
6)颗粒在60℃的条件下烘干。
7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀。
8)取样，半成品化验。
9)按照化验确定的片重压片。
10)成品全检，包装入库。
实施例11 BRH组合物胶囊剂的制备1、处方BRH组合物I处方白花蛇舌草提取物20g人参多糖10g黄芪多糖30g淀粉60.0g微晶纤维素 20.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁1.0g共制备 1000粒注总有效成分的总含量能达到74.87％
BRH组合物II处方白花蛇舌草提取物20g人参总皂苷 40g黄芪总皂苷 40g淀粉60.0g微晶纤维素 20.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁1.0g共制备 1000粒注总有效成分的总含量能达到63.78％BRH组合物III处方白花蛇舌草提取物20g人参总皂苷 40g黄芪多糖30g淀粉60.0g微晶纤维素 20.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁1.0g共制备 1000粒注总有效成分的总含量能达到71.47％BRH组合物IV处方白花蛇舌草提取物20g人参多糖10g黄芪总皂苷 40g淀粉60.0g微晶纤维素 20.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁1.0g共制备 1000粒注总有效成分的总含量能达到63.39％2、具体步骤1)将白花蛇舌草提取物、人参多糖(或人参总皂苷)和黄芪多糖(或黄芪总皂苷)粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
4)将白花蛇舌草提取物、、人参多糖(或人参总皂苷)、黄芪多糖(或黄芪总皂苷)、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
5)过20目筛制颗粒。
6)颗粒在60℃的条件下烘干。
7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀。
8)取样，半成品化验。
9)按照化验确定的装量装入胶囊。
10)成品全检，包装入库。
实施例12 BRH组合物软胶囊剂的制备1、处方BRH组合物I处方白花蛇舌草提取物20g人参多糖10g黄芪多糖30g大豆油 500.0g大豆磷脂50g蜂蜡50g共制备 1000粒注总有效成分的总含量能达到74.87％BRH组合物II处方白花蛇舌草提取物20g人参总皂苷 40g黄芪总皂苷 40g大豆油 500.0g大豆磷脂50g蜂蜡50g共制备 1000粒注总有效成分的总含量能达到63.78％BRH组合物III处方白花蛇舌草提取物20g人参总皂苷 40g黄芪多糖30g大豆油 500.0g大豆磷脂50g蜂蜡50g共制备 1000粒注总有效成分的总含量能达到71.47％
BRH组合物IV处方白花蛇舌草提取物20g人参多糖10g黄芪总皂苷 40g大豆油 500.0g大豆磷脂50g蜂蜡50g共制备 1000粒注总有效成分的总含量能达到63.39％2、具体步骤将白花蛇舌草提取物和人参多糖(或人参总皂苷)和黄芪多糖(或黄芪总皂苷)分别粉碎过100目筛，将处方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蜡加热熔融，混匀，放冷，加入白花蛇舌草提取物、人参多糖(或人参总皂苷)和黄芪多糖(或黄芪总皂苷)研匀，压制成软胶囊即可。
实施例13 BRH组合物颗粒剂的制备1、处方BRH组合物I处方白花蛇舌草提取物20g人参多糖10g黄芪多糖30g糖粉1000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 适量共制备 1000包注总有效成分的总含量能达到74.87％BRH组合物II处方白花蛇舌草提取物20g人参总皂苷 40g黄芪总皂苷 40g糖粉1000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 适量共制备 1000包注总有效成分的总含量能达到63.78％BRH组合物III处方白花蛇舌草提取物20g人参总皂苷 40g黄芪多糖30g糖粉1000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 适量共制备 1000包注总有效成分的总含量能达到71.47％
BRH组合物IV处方白花蛇舌草提取物20g人参多糖10g黄芪总皂苷 40g糖粉1000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 适量共制备 1000包注总有效成分的总含量能达到63.39％2、具体步骤1)将蔗糖粉碎过100目筛备用。将白花蛇舌草提取物和人参多糖(或人参总皂苷)和黄芪多糖(或黄芪总皂苷)粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)将白花蛇舌草提取物、人参多糖(或人参总皂苷)和黄芪多糖(或黄芪总皂苷)与糖粉以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材，4)过20目筛制颗粒。
5)颗粒在60℃的条件下烘干。
6)干颗粒过18目筛整粒。
7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量。
8)包装，成品全检，包装入库。
实施例14 BRH组合物滴丸剂的制备1、处方BRH组合物I处方白花蛇舌草提取物20g人参多糖10g黄芪多糖30g聚乙二醇6000600g注总有效成分的总含量能达到74.87％BRH组合物II处方白花蛇舌草提取物20g人参总皂苷 40g黄芪总皂苷 40g聚乙二醇6000600g注总有效成分的总含量能达到63.78％
BRH组合物III处方白花蛇舌草提取物20g人参总皂苷 40g黄芪多糖30g聚乙二醇6000600g注总有效成分的总含量能达到71.47％BRH组合物IV处方白花蛇舌草提取物20g人参多糖10g黄芪总皂苷 40g聚乙二醇6000600g注总有效成分的总含量能达到63.39％2、具体步骤将聚乙二醇6000在水浴中加热熔融，待全部熔融后加入白花蛇舌草提取物、人参多糖(或人参总皂苷)和黄芪多糖(或黄芪总皂苷)，搅拌溶解，60目筛过滤，保持60℃滴入冷至10℃以下的液体石蜡中制成丸。
实施例15 BRH多糖组合物口服液制备1、处方BRH组合物I处方白花蛇舌草提取物20g人参多糖10g黄芪多糖30g聚山梨酯80 50g氢氧化钠适量苯甲酸钠15g甜菊甙 10g水 加至10000ml共制备 1000支注总有效成分的总含量能达到74.87％BRH组合物II处方白花蛇舌草提取物20g人参总皂苷 40g黄芪总皂苷 40g聚山梨酯80 50g氢氧化钠适量苯甲酸钠15g甜菊甙 10g水 加至10000ml共制备 1000支注总有效成分的总含量能达到63.78％
BRH组合物III处方白花蛇舌草提取物20g人参总皂苷 40g黄芪多糖30g聚山梨酯80 50g氢氧化钠适量苯甲酸钠15g甜菊甙 10g水 加至10000ml共制备 1000支注总有效成分的总含量能达到71.47％BRH组合物IV处方白花蛇舌草提取物20g人参多糖10g黄芪总皂苷 40g聚山梨酯80 50g氢氧化钠适量苯甲酸钠15g甜菊甙 10g水 加至10000ml共制备 1000支注总有效成分的总含量能达到63.39％2、具体步骤1)先将聚山梨酯80用配液量40％的水溶解完全，再将白花蛇舌草提取物加入加热搅拌溶解完全。人参多糖(或人参总皂苷)和黄芪多糖(或黄芪总皂苷)加少量水加热后加适量氢氧化钠溶解完全。
2)将苯甲酸钠和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全。
3)合并上述溶液，补加水至全量。
4)过0.8um的微孔滤膜过滤。
5)半成品化验，灌装，成品全检，包装入库。
权利要求
1.一种药物组合物，其特征在于，该组合物由下列原料药制成白花蛇舌草、人参和黄芪，其重量份数为白花蛇舌草50～800份、人参25～1600份、黄芪75～1600份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，原料药的重量份数为白花蛇舌草200份、人参100～400份、黄芪300～400份。
3.如权利要求1-2所述的任一药物组合物的制备方法，其特征在于，其中的原料药可以用适宜的溶剂和方法单提或混提制备得到提取物，总提取物再与药学上可接受的辅料混合制成任一制剂。
4.如权利要求3所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，总提取物中所含的主要有效成分为白花蛇舌草总黄酮、人参多糖或皂苷、黄芪多糖或皂苷。
5.如权利要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，总提取物中的主要有效成分的总含量不低于30％。
6.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该组合物还可以由下列原料约制成白花蛇舌草提取物，人参、黄芪的提取物，其主要有效成分分别为白花蛇舌草总黄酮、人参多糖或皂苷、黄芪多糖或皂苷，其原料药的重量配比为白花蛇舌草提取物5～80份、以多糖为主要有效成分的人参提取物即人参多糖2～40份、以多糖为主要有效成分的黄芪提取物即黄芪多糖7～120份；或者为白花蛇舌草提取物5～80份、以皂苷为主要有效成分的人参提取物即人参总皂苷10～160份、以皂苷为主要有效成分的黄芪提取物即黄芪总皂苷10～160份；或者为白花蛇舌草提取物5～80份、以皂苷为主要有效成分的人参提取物即人参总皂苷10～160份、以多糖为主要有效成分的黄芪提取物即黄芪多糖7～120份；或者为白花蛇舌草提取物5～80份、以多糖为主要有效成分的人参提取物即人参多糖2～40份、以皂苷为主要有效成分的黄芪提取物即黄芪总皂苷10～160份。
7.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，其原料药的重量配比为白花蛇舌草提取物20份、人参多糖10份、黄芪多糖30份；或者为白花蛇舌草提取物20份、人参总皂苷40份、黄芪总皂苷40份；或者为白花蛇舌草提取物20份、人参总皂苷40份、黄芪多糖30份；或者为白花蛇舌草提取物20份、人参多糖10份、黄芪总皂苷40份。
8.如权利要求6、7所述的任一药物组合物，其特征在于，总提取物中主要有效成分的总含量不低于30％。
9.如权利要求6、7所述的任一药物组合物，其特征在于，所述的白花蛇舌草提取物含总黄酮不低于20％，人参提取物含人参总皂苷不低于20％或者含人参多糖不低于20％，黄芪提取物含黄芪总皂苷不低于20％或者含黄芪多糖不低于20％。
10.如权利要求1、2、6、7所述的任一药物组合物，其特征在于该组合物可以加药学上可接受的辅料制成临床上或药学上可接受的任一剂型。
11.如权利要求10所述的药物组合物，其特征在于临床上或药学上可接受的剂型为注射剂或口服制剂。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，公开了一种用于抗肿瘤作用的药物组合物及其制备方法和用途，该组合物由白花蛇舌草或其提取物、人参或其提取物和黄芪或其提取物制成，其重量份为白花蛇舌草50～800份、人参25～1600份、黄芪75～1600份或相应重量份的提取物份数比。其中的人参提取物可以为人参多糖或皂苷、黄芪提取物可以为黄芪多糖或皂苷，可制成各种药学上可接受的剂型；该组合物具有协同增效作用，稳定性好，比单用同剂量的白花蛇舌草的效果大大提高，产生了意想不到的效果，具有广泛的应用前景。
文档编号A61K36/481GK1954849SQ20051010435
公开日2007年5月2日 申请日期2005年10月26日 优先权日2005年10月26日
发明者黄振华 申请人:黄振华