专利名称：一种清开灵冻干粉针剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于中药制药技术领域，具体涉及一种清开灵冻干粉针剂及其制备方法。
背景技术：
清开灵注射液由安宫牛黄丸化裁而得，为一现代中药复方制剂。它主要由胆酸、猪去氧胆酸、珍珠母、水牛角、黄芩苷、桅子、板蓝根、金银花8味药材经提取、精制、混合配制而成，具有清热解毒，化痰通络，醒神开窍功效。用于热病神昏，中风偏瘫，神志不清，亦可用于急、慢性肝炎，乙型肝炎，上呼吸道感染，肺炎，高烧，以及脑血栓形成、脑出血见上述证候者。
清开灵注射液是全国中医院急诊必备中成药之一，临床应用疗效显著，但随着临床的广泛应用，其不良反应时有报道，其中最为严重的过敏性体克占有一定比重，究其原因，我们认为水针剂制备工艺比较传统，其制剂工艺基本上采用注射剂的常规工艺，即配液、滤过、灌封、灭菌，而滤过的方法是采用滤纸、陶瓷砂芯或砂棒等过滤，后经0.22-0.45μm的微孔薄膜过滤，经这样的滤过工序处理的药液灌封后灭菌，按国家药典标准检测，常出现热原不合格的现象及用药后有过敏反应。因热原不合格而造成产品的合格率仅在70％-80％，制剂安全性不高，达不到现代中药注射剂的技术要求，且其配制工艺复杂，生产周期长，导致生产成本高，制剂质量不易控制，为此，必须从清开灵注射剂的生产工艺上解决出现热原不合格现象，提高产品的合格率及用药安全性。现有技术制备的清开灵制剂由于成分复杂，既有动物药又有植物药，在贮藏过程中稳定性比较差，这也限制了清开灵制剂的应用。
申请号为200310111036的专利采用两次醇沉的方法对清开灵处方各药味进行提取纯化，这种方法虽然提高了制剂的安全性，使得不容性微粒大大降低，但随着第二次醇沉的产生裹挟了一部分有效成分的沉淀，使得中药使用率降低，造成资源浪费；申请号为03126699专利采用三级过滤的方法处理药液，这种方法虽然提高了产品的合格率，但因为存在正电荷正压过滤，使得中药中带电荷的有效成分如氨基酸被过滤去除，造成资源浪费；申请号为03109422的专利采用高速离心和0.22μm过滤的方法处理药液，该方法不能很好解决药液中热源的问题，只能达到去除不溶性微粒和细菌的问题；申请号为96103347的专利采用0.65μm滤芯的过滤方法，得不到除去细菌和热源的要求；申请号为95116716的专利只是简单介绍了除菌过滤，并没有介绍具体工艺。
发明内容
基于上述原因，我们根据应用现代科学技术手段，通过运用水体醇沉、有机溶剂萃取、超滤等一系列的方法对清开灵处方中各药味进行提取纯化，与优选的药用辅料注射用甘露醇混合，冷冻干燥，制备成清开灵冻干粉针剂，药理实验表明，本申请清开灵冻干粉针剂具有更好的安全性和药理作用。
本发明通过以下技术方案实现的。
一.工艺制法本申请处方为胆酸15-18重量份、猪去氧胆酸16-20重量份、黄芩苷24-26重量份、水牛角100-150重量份、珍珠母240-260重量份、栀子100-125重量份、金银花90-110重量份、板蓝根900-1100重量份，注射用甘露醇850-950重量份。
(1)取栀子，粉碎成最粗粉，用5-7倍量水煎煮2-4次，每次1-2小时，合并提取液，滤过，上清液减压浓缩至50℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达70％-90％，静置16-32小时，滤过，上清液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.15-1.25的浸膏，冷藏24小时，滤过，滤过液用等量水饱和正丁醇萃取3-5次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇并浓缩至50℃时相对密度为1.15-1.25的浸膏，干燥，得到栀子提取物；(2)取处方量金银花，用7-9倍量水85-95℃温浸提取2-4次，每次1-2小时，合并提取液，静置24小时，高速离心20000转/分钟，上清液减压浓缩至50℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达60％-80％，静置24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.05-1.10的浸膏，冷藏24小时，滤过，滤过液用HCl调pH值为1.5-2.5，再用等体积醋酸乙酯萃取7-9次，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯并浓缩至50℃时相对密度为1.15-1.25的浸膏，干燥，得金银花提取物；(3)取板蓝根，切段，用5-7倍量水煎煮2-4次，每次1-2小时，合并提取液，滤过，滤过液减压浓缩至50℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，加乙醇使含醇量达65％-75％，静置24小时，去沉淀，上清液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达75％-85％％，放置24小时，去沉淀，上清醇液用浓氨水调pH值为7.5-8.0，冷藏放置24小时，滤过，续滤液回收乙醇并减压浓缩至50℃时相对密度为1.15-1.25的浸膏，干燥，得板蓝根提取物；(4)取水牛角，超微粉碎，超微粉加入5-7倍量4N的Ba(OH)2加热煮沸，水解3小时，水解液冷却至50℃，趁热过滤，滤渣用少量热水洗涤；取珍珠母，超微粉碎，超微粉加入5-7倍量4N的H2SO4加热煮沸，水解3小时，水解液冷却至50℃，趁热过滤，滤渣用少量热水洗涤；将水牛角水解液在不断搅拌的情况下并入到珍珠母水解液中，静置24小时，倾出上清液，沉淀滤过并用少量水洗涤，滤液与上清液合并，用稀H2SO4调pH值为4.0，Ba2+检查应呈阴性，水解液减压浓缩至50℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，加乙醇使含醇量达65％-75％，静置24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，加乙醇使含醇量达75％-85％，冷藏24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度为1.15-1.25的浸膏，干燥，得水牛角、珍珠母提取物；(5)取板蓝根提取物、水牛角珍珠母提取物、栀子提取物、金银花提取物混合粉碎，加入注射用水，搅拌使溶解，加热煮沸8-12分钟，自然放冷，用20％的氢氧化钠调pH值为5-6，冷藏24小时，滤过，滤过液过截留分子量为10000的超滤膜超滤，收集超滤液备用；取黄芩苷，加入上述超滤液1/8倍体积的超滤液，搅拌使分散，用20％的氢氧化钠调pH值为5.5-6.5，使之完全溶解，备用；取胆酸、猪去氧胆酸，加入到pH值为9.0-11.0的注射用水中，搅拌加热、调pH使完全溶解后，用20％的氢氧化钠调pH值为7.0-8.0，备用；将板蓝根等五味的超滤液用20％的氢氧化钠调pH值为6.5-7.5，分别加入黄芩苷溶液及胆酸、猪去氧胆酸溶液；再加入甘露醇用20％的氢氧化钠调pH值为7.0-7.5，用注射用水补足体积，除菌滤过，灌封至西林瓶中，加丁基橡胶塞，冷冻干燥，压铝塑组合盖，检验包装即得。
二.检测分析1.含氮量检测分析按中国药典2000版一部附录IX L氮测定法第二法(半微量法)测定，实验结果见表12.黄芩苷检测分析照高效液相色谱法(中国药典2000年版二部附录VI D)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)为流动相；检测波长为280nm。理论板数按黄芩苷峰计算，应不低于2500。
对照品与供试品溶液的制备精密称取在60℃减压干燥6小时的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，作为对照品溶液；另精密称取清开灵注射制剂7mg(将清开灵注射液干燥)，置250ml烧瓶中，加甲醇适量，置水浴回流提取30分钟，放冷，移至100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，实验结果见表1表1 不同清开灵制剂有效成分比较
实验结论通过上述实验表明，本申请清开灵冻干粉针剂有效成分含量进一步提高，充分说明本申请工艺具有实际意义。
三.毒理实验急性毒性研究实验药物本申请清开灵冻干粉针剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；市售清开灵注射液(山西太行制药有限公司)实验动物健康小鼠18-22g，，雌雄各半。
实验方法取小鼠，分为本申请冻干粉针剂组、市售清开灵注射液组，腹腔给药，按照体表面积换算成小鼠给药剂量，每天给药3次，连续7天，观察小鼠死亡情况，记录数据，按改良寇氏法计算注射制剂的LD50值，实验结果见表2
表2 不同清开灵注射制剂LD50值比较
实验结论通过以上实验表明，本申请清开灵冻干粉针剂比市售清开灵注射液具有更好的安全性。
四.水牛角、珍珠母的提取优选实验水牛角常用的提取方法有酸水解法、碱水解法，总氨基酸收率以碱水解法为最多。珍珠母主要含有碳酸钙，含量在92-96％之间，还含多种氨基酸，常用的提取方法有酸水解法。由于水牛角系动物角类药材、珍珠母为动物贝壳，质地坚硬，完全水解所需时间较长，耗时耗能。本申请工艺在原工艺的基础上，将水牛角、珍珠母粉碎方法优选为超微粉，分别用6倍量4N的Ba(OH)2及H2SO4水解。
实验方案方案1取水牛角100克、珍珠母200克不粉碎，按照本申请工艺方法进行提取，测定总固体量及氨基酸含量，计算总提取物收率及总氨基酸收率；方案2取水牛角100克、珍珠母200克普通粉碎，按照本申请工艺方法进行提取，测定总固体量及氨基酸含量，计算总提取物收率及总氨基酸收率；方案3取水牛角100克、珍珠母200克超微粉碎，按照本申请工艺方法进行提取，测定总固体量及氨基酸含量，计算总提取物收率及总氨基酸收率；总氮量测定测定方法按中国药典2000版一部附录IX L氮测定法第二法(半微量法)测定；实验结果见表3表3 不同方法总氨基酸得率
实验结论由上表知将水牛角及珍珠母粉碎成超微粉，水解物中总氨基酸的含量及提取物收率明显提高，充分说明将水牛角和珍珠母进行超微粉碎的必要性。
五.冻干赋形剂优选实验超滤液中加入黄芩苷、胆酸、猪去氧胆酸后(按处方比例加)的预冻液，经测定固容物含量为46.4mg/ml，即4.65％。溶液固容物含量过低，冻干时内容物会同水一道升华掉，不能成型，须加入一定量的填充剂以增加固容物的量。
冻干针常用的赋型剂有葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露醇及氯化钠，葡萄糖作赋型剂对冻干设备的要求太高，会造成设备的投入增大，又因是静脉注射，氯化钠的量不能太大；故选择甘露醇、蔗糖、乳糖作赋型剂进行优选实验，实验结果见表3表4 不同冻干赋形剂优选实验
实验结论通过上述实验表明，选择甘露醇作为冻干赋形剂制备制剂效果最好。
六.药理实验实验1与戊巴比妥钠协同镇静作用实验动物雄性昆明种小鼠，体重20±2克。
实验药物清开灵注射液(山西太行药业股份有限公司)；本申请清开灵冻干粉针剂(将本申请冻干粉针剂进行处理成与市售注射液相同密度的溶液，广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)实验方法将小鼠分为1％羧甲基纤维素钠溶液组、清开灵注射液组、本申请冻干粉针剂组，各组尾静脉给药量0.3ml/kg，对照组给予等体积的1％羧甲基纤维素钠溶液，各组给药后30分钟均腹腔注射38mg/kg戊巴比妥钠，0.1ml/10g，然后观察小鼠睡眠起始时间及睡眠时间，以翻正反射作为睡眠指标，实验结果见表5表5 不同制剂与戊巴比妥钠催眠剂量下合用的镇静作用研究
注与1％羧甲基纤维素钠溶液组比较**P＜0.05，与阳性对照组比较[*]P＜0.05实验2对NaNO2诱导的小鼠缺氧死亡的影响实验动物雄性昆明种小鼠，体重20±2克。
实验药物清开灵注射液(山西太行药业股份有限公司)；本申请清开灵冻干粉针剂(将本申请冻干粉针剂进行处理成与市售注射液相同密度的溶液，广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)实验方法将小鼠分为1％羧甲基纤维素钠溶液组、市售清开灵注射液组、本申请清开灵冻干粉针剂组，各组尾静脉给药量0.3ml/kg，给药1小时后，各组腹腔注射NaNO20.1ml/kg，立即在给药，给药量同上，立即观察1小时之内小鼠出现死亡的潜伏期及死亡的动物数，结果见6表6各组制剂对NaNO2诱导的小鼠缺氧死亡的保护作用
注*P＜0.05，**P＜0.01实验3抗病毒作用实验药物清开灵注射液(山西太行药业股份有限公司)；本申请清开灵冻干粉针剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；甲型流感病毒，广东省防疫站提供；实验方法实验分3组生理盐水组、清开灵注射液组和本申请清开灵冻干粉针剂组，清开灵粉针剂稀释成与清开灵注射液相同药物浓度，将鸡胚在实验室39℃下孵育至12d胚龄，备用。将病毒以0.1ml/胚接种至鸡胚内，4h后再以0.1ml/胚接种药液。接种5个鸡胚，35℃孵育3d，4℃过夜后收获尿囊液，进行血凝实验。在大孔塑料板内用生理盐水将尿囊液先按1∶10稀释，再进行倍比稀释1∶20，1∶40，1∶80，1∶160，1∶320，1∶640，共得7个浓度梯度。每孔加入1％的鸡红细胞悬液，摇匀，静置45min后观察。根据血细胞凝集程度的不同来进行判断，以“++”为终点，即观察到红细胞在孔底形成一个环状，四周有小凝集块，以此为标准测定血凝滴度。判断结果时如果药物实验组血凝滴度为病毒对照组的1/4以下，即说明药物对病毒增殖有抑制作用。结果见表7。
表7 清开灵制剂抗流感病毒作用
实验4解热作用实验药物清开灵注射液(山西太行药业股份有限公司)；本申请清开灵冻干粉针剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)实验动物新西兰大耳白兔，体重1.8-2.2kg；实验方法取新西兰大耳白兔30只，体重2.0±0.2kg，雌雄兼用，随机分为3组，每组10只。禁食不禁水12h。在20±1℃室温下，固定家兔，待安静后，用PD-u型数字温度计(丹麦产)连续测2次肛温，实验前均经标准温度计(上海医用仪表厂产)校正。每次隔30min，求平均值作为正常体温。正常体温确定后，各组动物按1.0ml/kg静注伤寒副伤寒甲乙三联菌液。60min时，按上述方法测定致热后体温变化。然后，生理盐水组耳静脉注射生理盐水，清开灵注射液组耳静脉注射清开灵注射液(给药剂量为1ml/kg)，本发明清开灵冻干粉针剂组耳静脉注射清开灵冻干粉针剂(给药剂量为1ml/kg，冻干粉针剂稀释成与注射液相同密度的溶液)，给药后依次测定0.5h、1h、3h、5h时的体温，并将各组动物的正常体温与该组动物致热后给药前的体温进行配对t检验，求其正常体温与致热后体温的统计学意义。同时将给药动物组体温与对照组进行组间t检验，分别计算并比较致热后的体温变化。结果见表8。
表8 清开灵制剂的解热作用(℃)
实验5对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤的影响实验动物Wistar大鼠，180-220g。
实验药物清开灵注射液(山西太行药业股份有限公司)；本申请清开灵冻干粉针剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)实验方法取Wistar大鼠60只，雌雄各半，随机分成生理盐水组、模型组、清开灵注射液组、本发明清开灵冻干粉针剂组。参照文献方法(李仪奎，等.中药药理实验方法学.上海上海科学技术出版社，1991834)，除生理盐水组外，模型及给药各组均以15％四氯化碳橄榄油溶液，按2ml/kg体重，每隔一天皮下注射一次，连续注射4次。同时，生理盐水组耳静脉注射生理盐水，清开灵注射液组耳静脉注射清开灵注射液(给药剂量为0.8ml/kg)，本发明清开灵冻干粉针剂组耳静脉注射清开灵冻干粉针剂(给药剂量为0.8ml/kg，将冻干粉针剂稀释成与注射液相同密度的溶液)，连续7天，末次给药24h后，采集血液，分离血清，测定谷丙转氨酶(SGPT)、谷草转氨酶(SGOT)及乳酸脱氨酶(LDH)，结果见表9，并取肝脏样品，10％甲醛溶液固定，作病理学切片检查。
表9 清开灵制剂对CCl4肝损伤的影响
注与生理盐水组比较，△△p＜0.01，与模型组组比较，*P＜0.05，**P＜0.01实验结论通过以上药理实验表明，本申请清开灵冻干粉针剂比市售清开灵注射液具有很好的药理作用。
六.制备实施例实施例1本申请处方为胆酸15克、猪去氧胆酸16克、黄芩苷24克、水牛角100克、珍珠母240克、栀子100克、金银花90克、板蓝根900克，注射用甘露醇850克。
(1)取栀子，粉碎成最粗粉，用5倍量水煎煮2次，每次1小时，合并提取液，滤过，上清液减压浓缩至50℃时相对密度为1.10的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达70％，静置16小时，滤过，上清液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.15的浸膏，冷藏24小时，滤过，滤过液用等量水饱和正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇并浓缩至50℃时相对密度为1.15的浸膏，干燥，得到栀子提取物；(2)取处方量金银花，用7倍量水85℃温浸提取2次，每次1小时，合并提取液，静置24小时，高速离心20000转/分钟，上清液减压浓缩至50℃时相对密度为1.10的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达60％，静置24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.05的浸膏，冷藏24小时，滤过，滤过液用HCl调pH值为1.5，再用等体积醋酸乙酯萃取7次，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯并浓缩至50℃时相对密度为1.15的浸膏，干燥，得金银花提取物；(3)取板蓝根，切段，用5倍量水煎煮2次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤过液减压浓缩至50℃时相对密度为1.10的浸膏，加乙醇使含醇量达65％，静置24小时，去沉淀，上清液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.10的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达75％，放置24小时，去沉淀，上清醇液用浓氨水调pH值为7.5，冷藏放置24小时，滤过，续滤液回收乙醇并减压浓缩至50℃时相对密度为1.15的浸膏，干燥，得板蓝根提取物；(4)取水牛角，超微粉碎，超微粉加入5倍量4N的Ba(OH)2加热煮沸，水解3小时，水解液冷却至50℃，趁热过滤，滤渣用少量热水洗涤；取珍珠母，超微粉碎，超微粉分别加入5倍量4N的H2SO4加热煮沸，水解3小时，水解液冷却至50℃，趁热过滤，滤渣用少量热水洗涤，将水牛角水解液在不断搅拌的情况下并入到珍珠母水解液中，静置24小时，倾出上清液，沉淀滤过并用少量水洗涤，滤液与上清液合并，用稀H2SO4调pH值为4.0，Ba2+检查应呈阴性，水解液减压浓缩至50℃时相对密度为1.10的浸膏，加乙醇使含醇量达65％，静置24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.10的浸膏，加乙醇使含醇量达75％，冷藏24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度为1.15的浸膏，干燥，得水牛角、珍珠母提取物；(5)取板蓝根提取物、水牛角珍珠母提取物、栀子提取物、金银花提取物混合粉碎，加入注射用水，搅拌使溶解，加热煮沸8分钟，自然放冷，用20％的氢氧化钠调pH值为5，冷藏24小时，滤过，滤过液过截留分子量为10000的超滤膜超滤，收集超滤液备用；取黄芩苷，加入上述超滤液1/8倍体积的超滤液，搅拌使分散，用20％的氢氧化钠调pH值为5.5，使之完全溶解，备用；取胆酸、猪去氧胆酸，加入到pH值为9.0的注射用水中，搅拌加热、调pH使完全溶解后，用20％的氢氧化钠调pH值为7.0，备用；将板蓝根等五味的超滤液用20％的氢氧化钠调pH值为6.5，分别加入黄芩苷溶液及胆酸、猪去氧胆酸溶液；再加入甘露醇用20％的氢氧化钠调pH值为7.0，用注射用水补足体积，除菌滤过，灌封至西林瓶中，加丁基橡胶塞，冷冻干燥，压铝塑组合盖，检验包装即得清开灵冻干粉针剂1000瓶。
实施例2
本申请处方为胆酸18克、猪去氧胆酸20克、黄芩苷26克、水牛角150克、珍珠母260克、栀子125克、金银花110克、板蓝根1100克，注射用甘露醇950克。
(1)取栀子，粉碎成最粗粉，用7倍量水煎煮4次，每次2小时，合并提取液，滤过，上清液减压浓缩至50℃时相对密度为1.20的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达90％，静置32小时，滤过，上清液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.25的浸膏，冷藏24小时，滤过，滤过液用等量水饱和正丁醇萃取5次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇并浓缩至50℃时相对密度为1.25的浸膏，干燥，得到栀子提取物；(2)取处方量金银花，用9倍量水95℃温浸提取4次，每次2小时，合并提取液，静置24小时，高速离心20000转/分钟，上清液减压浓缩至50℃时相对密度为1.20的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达80％，静置24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.10的浸膏，冷藏24小时，滤过，滤过液用HCl调pH值为2.5，再用等体积醋酸乙酯萃取9次，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯并浓缩至50℃时相对密度为1.25的浸膏，干燥，得金银花提取物；(3)取板蓝根，切段，用7倍量水煎煮4次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤过液减压浓缩至50℃时相对密度为1.20的浸膏，加乙醇使含醇量达75％，静置24小时，去沉淀，上清液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.20的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达85％％，放置24小时，去沉淀，上清醇液用浓氨水调pH值为8.0，冷藏放置24小时，滤过，续滤液回收乙醇并减压浓缩至50℃时相对密度为1.25的浸膏，干燥，得板蓝根提取物；(4)取水牛角，超微粉碎，超微粉加入7倍量4N的Ba(OH)2加热煮沸，水解3小时，水解液冷却至50℃，趁热过滤，滤渣用少量热水洗涤，取珍珠母，超微粉碎，超微粉加入7倍量4N的H2SO4加热煮沸，水解3小时，水解液冷却至50℃，趁热过滤，滤渣用少量热水洗涤，将水牛角水解液在不断搅拌的情况下并入到珍珠母水解液中，静置24小时，倾出上清液，沉淀滤过并用少量水洗涤，滤液与上清液合并，用稀H2SO4调pH值为4.0，Ba2+检查应呈阴性，水解液减压浓缩至50℃时相对密度为1.20的浸膏，加乙醇使含醇量达75％，静置24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.20的浸膏，加乙醇使含醇量达85％，冷藏24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度为1.25的浸膏，干燥，得水牛角、珍珠母提取物；(5)取板蓝根提取物、水牛角珍珠母提取物、栀子提取物、金银花提取物混合粉碎，加入注射用水，搅拌使溶解，加热煮沸12分钟，自然放冷，用20％的氢氧化钠调pH值为6，冷藏24小时，滤过，滤过液过截留分子量为10000的超滤膜超滤，收集超滤液备用；取黄芩苷，加入上述超滤液1/8倍体积的超滤液，搅拌使分散，用20％的氢氧化钠调pH值为6.5，使之完全溶解，备用；取胆酸、猪去氧胆酸，加入到pH值为11.0的注射用水中，搅拌加热、调pH使完全溶解后，用20％的氢氧化钠调pH值为8.0，备用；将板蓝根等五味的超滤液用20％的氢氧化钠调pH值为7.5，分别加入黄芩苷溶液及胆酸、猪去氧胆酸溶液；再加入甘露醇用20％的氢氧化钠调pH值为7.5，用注射用水补足体积，除菌滤过，灌封至西林瓶中，加丁基橡胶塞，冷冻干燥，压铝塑组合盖，检验包装即得清开灵冻干粉针剂1000瓶。
实施例3本申请处方为胆酸16.25克、猪去氧胆酸18.75克、黄芩苷25.0克、水牛角125克、珍珠母250克、栀子125克、金银花100克、板蓝根1000克，注射用甘露醇900克。
(1)取栀子，粉碎成最粗粉，用6倍量水煎煮2次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，上清液减压浓缩至50℃时相对密度为1.15的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达80％，静置24小时，滤过，上清液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.20的浸膏，冷藏24小时，滤过，滤过液用等量水饱和正丁醇萃取4次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇并浓缩至50℃时相对密度为1.20的浸膏，干燥，得到栀子提取物；(2)取处方量金银花，用8倍量水90℃温浸提取2次，每次1.5小时，合并提取液，静置24小时，高速离心20000转/分钟，上清液减压浓缩至50℃时相对密度为1.15的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达70％，静置24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.10的浸膏，冷藏24小时，滤过，滤过液用HCl调pH值为2.0，再用等体积醋酸乙酯萃取8次，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯并浓缩至50℃时相对密度为1.20的浸膏，干燥，得金银花提取物；(3)取板蓝根，切段，用6倍量水煎煮2次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤过液减压浓缩至50℃时相对密度为1.15的浸膏，加乙醇使含醇量达70％，静置24小时，去沉淀，上清液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.15的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达80％％，放置24小时，去沉淀，上清醇液用浓氨水调pH值为7.8，冷藏放置24小时，滤过，续滤液回收乙醇并减压浓缩至50℃时相对密度为1.20的浸膏，干燥，得板蓝根提取物；(4)取水牛角，超微粉碎，超微粉加入6倍量4N的Ba(OH)2加热煮沸，水解3小时，水解液冷却至50℃，趁热过滤，滤渣用少量热水洗涤，取珍珠母，超微粉碎，超微粉加入6倍量4N的H2SO4加热煮沸，水解3小时，水解液冷却至50℃，趁热过滤，滤渣用少量热水洗涤，将水牛角水解液在不断搅拌的情况下并入到珍珠母水解液中，静置24小时，倾出上清液，沉淀滤过并用少量水洗涤，滤液与上清液合并，用稀H2SO4调pH值为4.0，Ba2+检查应呈阴性，水解液减压浓缩至50℃时相对密度为1.15的浸膏，加乙醇使含醇量达70％，静置24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.15的浸膏，加乙醇使含醇量达80％，冷藏24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度为1.20的浸膏，干燥，得水牛角、珍珠母提取物；(5)取板蓝根提取物、水牛角珍珠母提取物、栀子提取物、金银花提取物混合粉碎，加入注射用水，搅拌使溶解，加热煮沸10分钟，自然放冷，用20％的氢氧化钠调pH值为5.5，冷藏24小时，滤过，滤过液过截留分子量为10000的超滤膜超滤，收集超滤液备用；取黄芩苷，加入上述超滤液1/8倍体积的超滤液，搅拌使分散，用20％的氢氧化钠调pH值为6.0，使之完全溶解，备用；取胆酸、猪去氧胆酸，加入到pH值为10的注射用水中，搅拌加热、调pH使完全溶解后，用20％的氢氧化钠调pH值为7.5，备用；将板蓝根等五味的超滤液用20％的氢氧化钠调pH值为7.0，分别加入黄芩苷溶液及胆酸、猪去氧胆酸溶液；再加入甘露醇用20％的氢氧化钠调pH值为7.3，用注射用水补足体积，除菌滤过，灌封至西林瓶中，加丁基橡胶塞，冷冻干燥，压铝塑组合盖，检验包装即得清开灵冻干粉针剂1000瓶。
实施例4本申请处方为胆酸15.5克、猪去氧胆酸17.3克、黄芩苷24.2克、水牛角115克、珍珠母244克、栀子109克、金银花97克、板蓝根941克，注射用甘露醇876克。
(1)取栀子，粉碎成最粗粉，用5倍量水煎煮3次，每次1.2小时，合并提取液，滤过，上清液减压浓缩至50℃时相对密度为1.12的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达75％，静置19小时，滤过，上清液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.17的浸膏，冷藏24小时，滤过，滤过液用等量水饱和正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇并浓缩至50℃时相对密度为1.18的浸膏，干燥，得到栀子提取物；(2)取处方量金银花，用7倍量水87℃温浸提取2次，每次1.2小时，合并提取液，静置24小时，高速离心20000转/分钟，上清液减压浓缩至50℃时相对密度为1.13的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达65％，静置24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.07的浸膏，冷藏24小时，滤过，滤过液用HCl调pH值为1.8，再用等体积醋酸乙酯萃取7次，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯并浓缩至50℃时相对密度为1.18的浸膏，干燥，得金银花提取物；(3)取板蓝根，切段，用5倍量水煎煮3次，每次1.3小时，合并提取液，滤过，滤过液减压浓缩至50℃时相对密度为1.12的浸膏，加乙醇使含醇量达68％，静置24小时，去沉淀，上清液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.13的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达77％，放置24小时，去沉淀，上清醇液用浓氨水调pH值为7.6，冷藏放置24小时，滤过，续滤液回收乙醇并减压浓缩至50℃时相对密度为1.18的浸膏，干燥，得板蓝根提取物；(4)取水牛角，超微粉碎，超微粉加入5倍量4N的Ba(OH)2加热煮沸，水解3小时，水解液冷却至50℃，趁热过滤，滤渣用少量热水洗涤，取珍珠母，超微粉碎，超微粉加入5倍量4N的H2SO4加热煮沸，水解3小时，水解液冷却至50℃，趁热过滤，滤渣用少量热水洗涤，将水牛角水解液在不断搅拌的情况下并入到珍珠母水解液中，静置24小时，倾出上清液，沉淀滤过并用少量水洗涤，滤液与上清液合并，用稀H2SO4调pH值为4.0，Ba2+检查应呈阴性，水解液减压浓缩至50℃时相对密度为1.12的浸膏，加乙醇使含醇量达67％，静置24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.13的浸膏，加乙醇使含醇量达78％，冷藏24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度为1.18的浸膏，干燥，得水牛角、珍珠母提取物；(5)取板蓝根提取物、水牛角珍珠母提取物、栀子提取物、金银花提取物混合粉碎，加入注射用水，搅拌使溶解，加热煮沸9分钟，自然放冷，用20％的氢氧化钠调pH值为5.3，冷藏24小时，滤过，滤过液过截留分子量为10000的超滤膜超滤，收集超滤液备用；取黄芩苷，加入上述超滤液1/8倍体积的超滤液，搅拌使分散，用20％的氢氧化钠调pH值为5.7，使之完全溶解，备用；取胆酸、猪去氧胆酸，加入到pH值为9.5的注射用水中，搅拌加热、调pH使完全溶解后，用20％的氢氧化钠调pH值为7.3，备用；将板蓝根等五味的超滤液用20％的氢氧化钠调pH值为6.8，分别加入黄芩苷溶液及胆酸、猪去氧胆酸溶液；再加入甘露醇用20％的氢氧化钠调pH值为7.1，用注射用水补足体积，除菌滤过，灌封至西林瓶中，加丁基橡胶塞，冷冻干燥，压铝塑组合盖，检验包装即得清开灵冻干粉针剂1000瓶。
实施例5本申请处方为胆酸17.3克、猪去氧胆酸19.4克、黄芩苷25.7克、水牛角143克、珍珠母257克、栀子123克、金银花108克、板蓝根1091克，注射用甘露醇941克。
(1)取栀子，粉碎成最粗粉，用7倍量水煎煮4次，每次1.8小时，合并提取液，滤过，上清液减压浓缩至50℃时相对密度为1.18的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达85％，静置30小时，滤过，上清液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.23的浸膏，冷藏24小时，滤过，滤过液用等量水饱和正丁醇萃取5次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇并浓缩至50℃时相对密度为1.23的浸膏，干燥，得到栀子提取物；(2)取处方量金银花，用9倍量水93℃温浸提取4次，每次1.8小时，合并提取液，静置24小时，高速离心20000转/分钟，上清液减压浓缩至50℃时相对密度为1.18的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达75％，静置24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.09的浸膏，冷藏24小时，滤过，滤过液用HCl调pH值为2.3，再用等体积醋酸乙酯萃取9次，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯并浓缩至50℃时相对密度为1.23的浸膏，干燥，得金银花提取物；(3)取板蓝根，切段，用7倍量水煎煮4次，每次1.8小时，合并提取液，滤过，滤过液减压浓缩至50℃时相对密度为1.18的浸膏，加乙醇使含醇量达74％，静置24小时，去沉淀，上清液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.19的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达83％，放置24小时，去沉淀，上清醇液用浓氨水调pH值为7.8，冷藏放置24小时，滤过，续滤液回收乙醇并减压浓缩至50℃时相对密度为1.23的浸膏，干燥，得板蓝根提取物；(4)取水牛角，超微粉碎，超微粉加入7倍量4N的Ba(OH)2加热煮沸，水解3小时，水解液冷却至50℃，趁热过滤，滤渣用少量热水洗涤，取珍珠母，超微粉碎，超微粉加入7倍量4N的H2SO4加热煮沸，水解3小时，水解液冷却至50℃，趁热过滤，滤渣用少量热水洗涤，将水牛角水解液在不断搅拌的情况下并入到珍珠母水解液中，静置24小时，倾出上清液，沉淀滤过并用少量水洗涤，滤液与上清液合并，用稀H2SO4调pH值为4.0，Ba2+检查应呈阴性，水解液减压浓缩至50℃时相对密度为1.18的浸膏，加乙醇使含醇量达72％，静置24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.17的浸膏，加乙醇使含醇量达83％，冷藏24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度为1.22的浸膏，干燥，得水牛角、珍珠母提取物；(5)取板蓝根提取物、水牛角珍珠母提取物、栀子提取物、金银花提取物混合粉碎，加入注射用水，搅拌使溶解，加热煮沸11分钟，自然放冷，用20％的氢氧化钠调pH值为5.8，冷藏24小时，滤过，滤过液过截留分子量为10000的超滤膜超滤，收集超滤液备用；取黄芩苷，加入上述超滤液1/8倍体积的超滤液，搅拌使分散，用20％的氢氧化钠调pH值为6.3，使之完全溶解，备用；取胆酸、猪去氧胆酸，加入到pH值为10.8的注射用水中，搅拌加热、调pH使完全溶解后，用20％的氢氧化钠调pH值为7.8，备用；将板蓝根等五味的超滤液用20％的氢氧化钠调pH值为7.3，分别加入黄芩苷溶液及胆酸、猪去氧胆酸溶液；再加入甘露醇用20％的氢氧化钠调pH值为7.4，用注射用水补足体积，除菌滤过，灌封至西林瓶中，加丁基橡胶塞，冷冻干燥，压铝塑组合盖，检验包装即得清开灵冻干粉针剂1000瓶。
实施例6本申请处方为胆酸162.5克、猪去氧胆酸187.5克、黄芩苷250克、水牛角1250克、珍珠母2500克、栀子1250克、金银花1000克、板蓝根10000克，注射用甘露醇9000克。
(1)取栀子，粉碎成最粗粉，用6倍量水煎煮2次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，上清液减压浓缩至50℃时相对密度为1.15的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达80％，静置24小时，滤过，上清液减压回收乙醇，开浓缩至50℃时相对密度为1.20的浸膏，冷藏24小时，滤过，滤过液用等量水饱和正丁醇萃取4次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇并浓缩至50℃时相对密度为1.20的浸膏，干燥，得到栀子提取物；(2)取处方量金银花，用8倍量水90℃温浸提取2次，每次1.5小时，合并提取液，静置24小时，高速离心20000转/分钟，上清液减压浓缩至50℃时相对密度为1.15的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达70％，静置24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.10的浸膏，冷藏24小时，滤过，滤过液用HCl调pH值为2.0，再用等体积醋酸乙酯萃取8次，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯并浓缩至50℃时相对密度为1.20的浸膏，干燥，得金银花提取物；(3)取板蓝根，切段，用6倍量水煎煮2次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤过液减压浓缩至50℃时相对密度为1.15的浸膏，加乙醇使含醇量达70％，静置24小时，去沉淀，上清液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.15的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达80％％，放置24小时，去沉淀，上清醇液用浓氨水调pH值为7.8，冷藏放置24小时，滤过，续滤液回收乙醇并减压浓缩至50℃时相对密度为1.20的浸膏，干燥，得板蓝根提取物；(4)取水牛角，超微粉碎，超微粉加入6倍量4N的Ba(OH)2加热煮沸，水解3小时，水解液冷却至50℃，趁热过滤，滤渣用少量热水洗涤，取珍珠母，超微粉碎，超微粉加入6倍量4N的H2SO4加热煮沸，水解3小时，水解液冷却至50℃，趁热过滤，滤渣用少量热水洗涤，将水牛角水解液在不断搅拌的情况下并入到珍珠母水解液中，静置24小时，倾出上清液，沉淀滤过并用少量水洗涤，滤液与上清液合并，用稀H2SO4调pH值为4.0，Ba2+检查应呈阴性，水解液减压浓缩至50℃时相对密度为1.15的浸膏，加乙醇使含醇量达70％，静置24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.15的浸膏，加乙醇使含醇量达80％，冷藏24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度为1.20的浸膏，干燥，得水牛角、珍珠母提取物；(5)取板蓝根提取物、水牛角珍珠母提取物、栀子提取物、金银花提取物混合粉碎，加入注射用水，搅拌使溶解，加热煮沸10分钟，自然放冷，用20％的氢氧化钠调pH值为5.5，冷藏24小时，滤过，滤过液过截留分子量为10000的超滤膜超滤，收集超滤液备用；取黄芩苷，加入上述超滤液1/8倍体积的超滤液，搅拌使分散，用20％的氢氧化钠调pH值为6.0，使之完全溶解，备用；取胆酸、猪去氧胆酸，加入到pH值为10的注射用水中，搅拌加热、调pH使完全溶解后，用20％的氢氧化钠调pH值为7.5，备用；将板蓝根等五味的超滤液用20％的氢氧化钠调pH值为7.0，分别加入黄芩苷溶液及胆酸、猪去氧胆酸溶液；再加入甘露醇用20％的氢氧化钠调pH值为7.3，用注射用水补足体积，除菌滤过，灌封至西林瓶中，加丁基橡胶塞，冷冻干燥，压铝塑组合盖，检验包装即得清开灵冻干粉针剂10000瓶。
权利要求
1.一种清开灵冻干粉针剂，其特征在于它是由胆酸15-18重量份、猪去氧胆酸16-20重量份、黄芩苷24-26重量份、水牛角100-150重量份、珍珠母240-260重量份、栀子100-125重量份、金银花90-110重量份、板蓝根900-1100重量份，注射用甘露醇850-950重量份制备而成。
2.一种清开灵冻干粉针剂的制备方法，其特征为(1)取栀子，粉碎成最粗粉，用5-7倍量水煎煮2-4次，每次1-2小时，合并提取液，滤过，上清液减压浓缩至50℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达70％-90％，静置16-32小时，滤过，上清液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.15-1.25的浸膏，冷藏24小时，滤过，滤过液用等量水饱和正丁醇萃取3-5次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇并浓缩至50℃时相对密度为1.15-1.25的浸膏，干燥，得到栀子提取物；(2)取处方量金银花，用7-9倍量水85-95℃温浸提取2-4次，每次1-2小时，合并提取液，静置24小时，高速离心20000转/分钟，上清液减压浓缩至50℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达60％-80％，静置24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.05-1.10的浸膏，冷藏24小时，滤过，滤过液用HCl调pH值为1.5-2.5，再用等体积醋酸乙酯萃取7-9次，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯并浓缩至50℃时相对密度为1.15-1.25的浸膏，干燥，得金银花提取物；(3)取板蓝根，切段，用5-7倍量水煎煮2-4次，每次1-2小时，合并提取液，滤过，滤过液减压浓缩至50℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，加乙醇使含醇量达65％-75％，静置24小时，去沉淀，上清液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，搅拌下加乙醇使含醇量达75％-85％％，放置24小时，去沉淀，上清醇液用浓氨水调pH值为7.5-8.0，冷藏放置24小时，滤过，续滤液回收乙醇并减压浓缩至50℃时相对密度为1.15-1.25的浸膏，干燥，得板蓝根提取物；(4)取水牛角，超微粉碎，超微粉加入5-7倍量4N的Ba(OH)2加热煮沸，水解3小时，水解液冷却至50℃，趁热过滤，滤渣用少量热水洗涤；取珍珠母，超微粉碎，超微粉加入5-7倍量4N的H2SO4加热煮沸，水解3小时，水解液冷却至50℃，趁热过滤，滤渣用少量热水洗涤；将水牛角水解液在不断搅拌的情况下并入到珍珠母水解液中，静置24小时，倾出上清液，沉淀滤过并用少量水洗涤，滤液与上清液合并，用稀H2SO4调pH值为4.0，Ba2+检查应呈阴性，水解液减压浓缩至50℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，加乙醇使含醇量达65％-75％，静置24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，加乙醇使含醇量达75％-85％，冷藏24小时，滤过，滤过液减压回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度为1.15-1.25的浸膏，干燥，得水牛角、珍珠母提取物；(5)取板蓝根提取物、水牛角珍珠母提取物、栀子提取物、金银花提取物混合粉碎，加入注射用水，搅拌使溶解，加热煮沸8-12分钟，自然放冷，用20％的氢氧化钠调pH值为5-6，冷藏24小时，滤过，滤过液过截留分子量为10000的超滤膜超滤，收集超滤液备用；取黄芩苷，加入上述超滤液1/8倍体积的超滤液，搅拌使分散，用20％的氢氧化钠调pH值为5.5-6.5，使之完全溶解，备用；取胆酸、猪去氧胆酸，加入到pH值为9.0-11.0的注射用水中，搅拌加热、调pH使完全溶解后，用20％的氢氧化钠调pH值为7.0-8.0，备用；将板蓝根等五味的超滤液用20％的氢氧化钠调pH值为6.5-7.5，分别加入黄芩苷溶液及胆酸、猪去氧胆酸溶液；再加入甘露醇用20％的氢氧化钠调pH值为7.0-7.5，用注射用水补足体积，除菌滤过，灌封至西林瓶中，加丁基橡胶塞，冷冻干燥，压铝塑组合盖，检验包装即得。
全文摘要
本发明公开了一种清开灵冻干粉针剂及其制备方法，其特征在于采用现代中药技术手段对清开灵处方中原料药进行提取纯化，得到的提取物与优选药用辅料混合制备成冻干粉针剂，药理实验结果表明，本申请清开灵冻干粉针剂与市售清开灵注射液比较具有更好安全性和药理作用。
文档编号A61K9/19GK1813982SQ20051010529
公开日2006年8月9日 申请日期2005年11月30日 优先权日2005年11月30日
发明者张海峰 申请人:张海峰