专利名称：淫羊藿总黄酮提取工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药材淫羊藿中提取总黄酮的方法。
背景技术：
朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai为《中华人民共和国药典》收载的常用中药淫羊藿品种之一。本品以地上部分入药，具有补肾壮阳，强筋骨，祛风湿的功效，药理实验显示具有补肾壮阳、扩张血管、抗氧化、抗菌抗病毒作用，提高机体免疫功能和预防骨质疏松的作用。淫羊藿属植物的化学成分，主要为黄酮、木酯素、生物碱和多糖，此外有挥发油、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚麻酸等。随着新的分离技术在天然药物分离方面的不断应用，从淫羊藿中分离获得活性更高的化合物，为新药的开发和研制提供更多的先导化合物。经文献检索，已有报导对其进行了大量的化学研究工作，朝鲜淫羊藿药材的化学成分较多，对其有效部位进行了技术研究，共鉴定出16个化合物，分别是淫羊藿苷A(Epimedoside A)、朝藿定A(Epimedin A)、淫羊藿次苷-I(IcarisideI)、朝藿定B(Epimedin B)、朝藿定C(Epimedin C)、淫羊藿苷(Icariin)、朝藿苷丙(KorepimedosideC)、大花淫羊藿苷F(Ikarisoside F)、朝藿苷A(Caohuoside A)、朝藿苷B(Caohuoside B)、朝藿苷E(Caohuoside E)、宝藿苷-I(icariside-II)、EpimedokoreanosideI、Epimedoside C、2″-O-rhamnoylicariside II、Epimedokoreanoside C。这些主要药效成分的鉴定，为阐明朝鲜淫羊藿的药理作用，制剂质量的安全可控性做好基础。
药理学研究结果表明不同种淫羊藿在化学成分和药理作用方面虽相似，但主成分黄酮类化合物的含量有很大差异，即使为同一种亦会因产地、采收季节不同而影响含量。淫羊藿植株各部位中，叶和根茎所含的黄酮类成分量较高，而茎中非常少。根茎中除黄酮类成分外，尚含较多量生物碱，故地上部分和根茎应分开使用。淫羊藿具一定的免疫抑制作用。从成分来看，起免疫抑制作用的主要是黄酮部位，起免疫增强作用的可能为多糖部位，故淫羊藿常显示双相调节作用。
目前淫羊藿中淫羊藿总黄酮提取分离的方法，大多数是采用水煎煮(或醇提取)，乙酸乙酯(或正丁醇)反复萃取的方法。得到产品的纯度只有70％左右，方法比较繁琐，且有机溶媒对生产人员有一定的危害性，亦带来一定的不安全隐患。
技术内容本发明的目的是提供通过一种提取纯度较高的淫羊藿总黄酮提取工艺。
本发明取淫羊藿药材用乙醇浸泡，置回流提取罐中加热回流提取，滤液过滤后减压浓缩成稠膏，加入乙醇，静置分层，收集上清液，过滤，滤液减压回收乙醇，减压浓缩成稠膏，再用乙醇浸泡，静置分层，收集上清液，过滤，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏，取稠膏上于已处理好的DM130型大孔吸附树脂柱；先用水洗脱至洗脱液无色，再用乙醇洗脱至无色，收集乙醇洗脱液，浓缩成稠膏，用乙醇醇沉，过滤，滤液回收乙醇，浓缩至稠膏，真空干燥，粉碎，过筛即得淫羊藿总黄酮提取物。
本发明中淫羊藿主要是朝鲜淫羊藿。
本发明中所获得的淫羊藿总黄酮提取物中主要是淫羊藿苷和总黄酮。
本发明仅单味淫羊藿一药，中医称作“单方”，药物七情中属“单行”。淫羊藿即为本方君药，无臣、佐、使药配伍。淫羊藿总黄酮则是其有效部位的提取物，温肾助阳，对主病主症针对性更强，功能专一，作用更加明确。古代淫羊藿常作煎剂服用，上世纪八十年代有人报告用淫羊藿浸膏片剂治疗冠心病，现在将其有效部位提取制成注射液，改变用药途径，使本药通过心脉直达病所，更有利、更有效治疗冠心病。冠心病，根据其临床表现，与中医胸痹心痛病相当。“胸痹”病名最早见于《内经》，对本病的病因、一般症状及真心痛的表现均有记载。《金匮要略》认为“心痛”是胸痹的临床表现，“胸痹缓急”即心痛时发时缓为其特点，其病机以阳微阴弦为主。根据辨证求因、审因论治原则，针对这类冠心病的治疗，宜采用温肾助阳法。本制剂选用淫羊藿为原材料，提取其有效部位总黄酮为原料，制剂而成。淫羊藿，又名仙灵脾《雷公炮炙论》，为小檗科植物淫羊藿的地上部分。其味辛、甘，性温，归肝、肾经。功能补肾助阳，祛风除湿，强筋健骨。“治一切冷风劳气，补腰膝，强心力，丈夫绝阳不起，女子绝阴无子，筋骨挛急，四肢不任，老人昏耄，中年健忘”。由此可以看到，淫羊藿的功能较多，临床治疗适应范围较广，“强心力”是其中一个重要方面。淫羊藿通过温肾助阳，鼓动心阳，温养心脉，改善心脉痹阻的病理，恢复心脉畅通，通则不痛，以达到消除症状、改善病情的目的。
具体实施例方式本发明取淫羊藿药材用乙醇浸泡，置回流提取罐中加热回流提取，滤液过滤后减压浓缩成稠膏，加入乙醇，静置分层，收集上清液，过滤，滤液减压回收乙醇，减压浓缩成稠膏，再用乙醇浸泡，静置分层，收集上清液，过滤，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏，取稠膏上于已处理好的DM130型大孔吸附树脂柱(DM130型大孔吸附树脂柱的预处理以95％乙醇冷浸24小时，湿法上柱，先用95％乙醇洗柱至洗出液无色，后用纯化水洗柱，至洗出液无醇味，待上柱)；先用水洗脱至洗脱液无色，再用乙醇洗脱至无色，收集乙醇洗脱液，浓缩成稠膏，用乙醇醇沉，过滤，滤液回收乙醇，浓缩至稠膏，真空干燥，粉碎，过筛即得淫羊藿总黄酮提取物。
实施例1本发明取朝鲜淫羊藿药材，以50～70％乙醇浸泡12～24小时，置回流提取罐中加热回流提取二～三次，每次加50～70％乙醇10～20倍量，每次回流提取1～2小时，滤过，合并滤液；滤液减压浓缩至密度约为1.05～1.30(60℃测定)的稠膏，加以10％～30％乙醇放置12～24小时，静置分层，收集上清液，滤过，滤液减压回收乙醇，减压浓缩至密度约为1.05～1.30(60℃测定)的稠膏，再以70％～85％乙醇放置12～24小时，静置分层，收集上清液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至密度约为1.05～1.30(60℃测定)的稠膏，取稠膏上于已处理好的DM130型大孔吸附树脂柱(DM130型大孔吸附树脂柱的预处理以95％乙醇冷浸24小时，湿法上柱，先用95％乙醇洗柱至洗出液无色，后用纯化水洗柱，至洗出液无醇味，待上柱)；先用水洗脱至洗脱液无色(水洗目的是除去水溶性的杂质，如鞣质、多糖等)，再用10％～30％乙醇(可除去叶绿素)和50～70％乙醇洗脱，洗至洗脱液无色(可洗出黄酮苷类成分)，收集50～70％乙醇洗脱液，浓缩成稠膏，用70％～85％乙醇醇沉12～24小时(可除去提取物中大多糖)，滤过，滤液回收乙醇，浓缩成稠膏，70～80℃真空干燥，粉碎，过筛，即得淫羊藿总黄酮提取物。
实施例2本发明取朝鲜淫羊藿药材，以60％乙醇回流提取，滤过，滤液浓缩成稠膏，再以不同浓度的乙醇醇沉，滤过，滤液回收乙醇，浓缩成稠膏，取稠膏上于已处理好的DM130型大孔吸附树脂柱；先用水洗脱至洗脱液无色，再用25％乙醇和60％乙醇洗脱，洗至洗脱液无色，收集60％乙醇洗脱液，浓缩成稠膏，用85％乙醇醇沉，滤过，滤液回收乙醇，浓缩成稠膏，干燥，粉碎，过筛，即得淫羊藿总黄酮提取物。
按本发明方法所得淫羊藿总黄酮提取物，以淫羊藿苷和总黄酮计，其中总黄酮含量可达80％以上，淫羊藿苷的含量可达30％以上。而佘白蓉、秦达念、佘运初的《淫羊藿黄酮精制方法的建立》中淫羊藿总黄酮的含量在54％左右。
功能与主治温阳通脉，扩张冠状血管，增加冠脉流量，用于冠心病心绞痛引起的胸痹阳气虚衰证，症见胸闷气短；胸痛彻背；心悸汗出；畏寒；肢冷等。
药理作用通过对淫羊藿总黄酮进行主要药效学、一般药理学、急性毒性、长期毒性及过敏性、溶血性和局部刺激性的全身给药相关的特殊安全性试验，证明本品疗效确切，无毒无刺激性，是可供临床使用的安全制剂。
1、淫羊藿总黄酮对大鼠血液流变学的影响试验表明淫羊藿总黄酮能明显降低全血粘度，红细胞压积，纤维蛋白原含量，与模型组比较有显著性差异。
2、淫羊藿总黄酮对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血的影响试验表明淫羊藿总黄酮模型组及溶媒组大鼠注射垂体后叶素后，T波发生明显变化。S点明显抬高模型组静注垂体后叶素后，可使大鼠心电图p-p间期延长，心率减慢，淫羊藿总黄酮注射液各剂量组对之影响不明显。
3、淫羊藿总黄酮对犬血流动力学的影响试验表明淫羊藿总黄酮对麻醉犬的血压(收缩压SAP，舒张压DAP，平均动脉压MAP)以及心率(HR)与伪手术比较无显著性差异(P＞0.05)。能明显增加冠脉流量(CBF)、心输出量(CO)、每搏输出量(SV)、心指数(CI)、心搏指数(SI)、左室内峰压(LVSP)、心室收缩参数(+dp/dtmax)和心室舒张参数(-dp/dtmax)，明显降低血管总外周阻力(TPVR)和左室舒张末期压(LVEDP)(P＜0.05，P＜0.01)；但对心肌耗氧量和每搏功指数(SWI)影响不明显(P＞0.05)。
4、淫羊藿总黄酮对麻醉犬心肌缺血的影响试验表明淫羊藿总黄酮与模型组、溶媒对照组、伪手术组以及自身给药前比较对心率、收缩压、舒张压均无显著性影响(P＞0.05)；并能明显缩小心肌梗塞范围，与模型组及溶媒组比较有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)。对犬冠状动脉结扎所致心肌梗塞的Δ∑-ST和ΔN-ST与模型组及溶媒对照组比均有明显下降(P＜0.05，P＜0.01)；能明显降低血清中LD、LDH、MDA、CK含量，增加SOD活性，与模型组及溶媒对照组比较有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)。
5、通过对淫羊藿总黄酮注射液及注射用淫羊藿总黄酮的安全性试验血管刺激性试验、过敏反应试验、溶血与凝集试验表明，淫羊藿总黄酮注射液及注射用淫羊藿总黄酮对血管无刺激性，淫羊藿总黄酮注射液及注射用淫羊藿总黄酮无过敏反应，淫羊藿总黄酮注射液及注射用淫羊藿总黄酮无溶血与凝集现象。临床可供安全使用。
本发明开发的淫羊藿总黄酮提取物、淫羊藿总黄酮注射液、注射用淫羊藿总黄酮，对其药材的化学成分研究结果表明，40种黄酮类化合物，其中以8-异戊烯基黄酮苷类化合物为主要成分。对淫羊藿总黄酮制剂进行了药效学以扩张冠状动脉血管、降低血压等动物模型为对象，进行了药效学实验。结果表明本品的扩张冠状动脉血管的作用比较显著，很有开发研究的价值。我们将朝鲜淫羊藿总黄酮研制成静脉注射剂供临床使用。严格按照国家新药审评办法的有关要求，对本品的药学研究、药理毒理、临床研究等内容进行了科学、系统的研究和开发，研究结果表明本品及其制剂安全可靠，无毒无刺激性。
权利要求
1.一种淫羊藿总黄酮提取工艺，其特征在于取淫羊藿药材用乙醇浸泡，置回流提取罐中加热回流提取，滤液过滤后减压浓缩成稠膏，加入乙醇，静置分层，收集上清液，过滤，滤液减压回收乙醇，减压浓缩成稠膏，再用乙醇浸泡，静置分层，收集上清液，过滤，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏，取稠膏上于已处理好的DM130型大孔吸附树脂柱；先用水洗脱至洗脱液无色，再用乙醇洗脱至无色，收集乙醇洗脱液，浓缩成稠膏，用乙醇醇沉，过滤，滤液回收乙醇，浓缩至稠膏，真空干燥，粉碎，过筛即得淫羊藿总黄酮提取物。
2.根据权利要求1所述的淫羊藿总黄酮提取工艺，其特征在于淫羊藿主要是朝鲜淫羊藿。
3.根据权利要求1所述的淫羊藿总黄酮提取工艺，其特征在于所获得的淫羊藿总黄酮提取物中主要是淫羊藿苷和总黄酮。
全文摘要
一种淫羊藿总黄酮提取工艺，涉及中药材淫羊藿中提取总黄酮的方法。本发明的目的是提供通过一种提取纯度较高的淫羊藿总黄酮提取工艺。本发明取淫羊藿药材，以乙醇回流提取，滤过，滤液浓缩成稠膏，再以不同浓度的乙醇醇沉，滤过，滤液回收乙醇，浓缩成稠膏，取稠膏上于已处理好的DM130型大孔吸附树脂柱；先用水洗脱至洗脱液无色，再用乙醇和乙醇洗脱，洗至洗脱液无色，收集乙醇洗脱液，浓缩成稠膏，用乙醇醇沉，滤过，滤液回收乙醇，浓缩成稠膏，干燥，粉碎，过筛，即得淫羊藿总黄酮提取物。淫羊藿总黄酮是淫羊藿有效部位的提取物，温肾助阳，对主病主症针对性更强，功能专一，作用更加明确。
文档编号A61P39/06GK1977873SQ20051011906
公开日2007年6月13日 申请日期2005年12月9日 优先权日2005年12月9日
发明者潘宇, 孙淑娜, 李欣 申请人:长春至宝药业科技开发有限责任公司