专利名称：一种中药提取物的制备方法和质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种中药提取物的制备方法，属中药领域。
背景技术：
辽东楤木系五加科Araliaceae楤木属植物辽东楤木Aralia elata(Miq)Seem、楤木Aralia chinensis L.或黄毛楤木Aralia decaisneana Hance，含有多种楤木皂苷。皂苷经过水解后得到皂苷元，经研究结果表明楤木皂苷元具有明显的适应原样作用，并有强心、降压、降糖、降脂、保肝等多方面生理活性。对于从楤木药材中提取总皂苷的方法已有很多文献，但的这些文献仅止于对楤木总皂苷的提取或精制，实际应用时还要将总皂苷再水解得到皂苷元，然后用于临床制剂。不管是正丁醇萃取法还是树脂吸附法都存在着工业规模化生产成本高昂，有机试剂污染及树脂不易重复利用的缺点，这些不足之处阻碍了辽东楤木广泛用于临床。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，巧妙的绕过楤木总皂苷提取精制的技术难点，不是用正丁醇萃取或过大孔树脂来精制楤木皂苷，而是将楤木总皂苷酸水解，用简易的方法来精制水解后的皂苷元。
发明人的思路是这样的由于皂苷类为水溶性物质，不便与水溶性杂质如有机酸、鞣质和多糖等分离，工业生产中要用正丁醇或大孔树脂来处理，生产成本大大提高，生产公式辽东楤木提取→正丁醇或大孔树脂精制总皂苷→水解总皂苷用于制剂；而本发明的工艺为先将提取提取出来的皂苷水解，使其成为酯溶性的皂苷元，很简易的与大量水溶性的杂质分离，比精制皂苷节约了大量生产成本，生产公式辽东楤木提取→皂苷粗提取物酸水解→氨水洗去大量水溶性杂质→精制的皂苷元用于制剂。
楤木总皂苷水解后得到以齐墩果酸为代表的皂苷元提取物，此皂苷元酯溶性极强，溶于乙醚、乙醇中，在水中几乎不溶，故采用碱水洗涤法除去有机酸，鞣质、多糖等杂质，皂苷元用乙醇提取出来应用。
本发明的方法简便易行，适合大生产，相比先精制皂苷再水解节约大量生产成本，获得的楤木皂苷元提取物，用于制备胶囊、软胶囊、片剂、微丸等临床上可以接收的各种剂型，并建立产品的质控方法。
下面具体叙述本发明的技术方案欲得到最后的总皂苷元，需经过如下两步a、取楤木药材，加40％～50％乙醇回流提取2～4次，每次3～5小时，合并乙醇液，滤过；滤液回收乙醇并继续浓缩至60℃时相对密度1.10～1.20的浸膏，加入0.5～2mol/L的硫酸或盐酸水解5～10小时，加碱中和后静置，滤过，收集沉淀；b、取a中沉淀物，加氧化镁拌合，用2～5mol/L的氨水洗涤拌合物，氨水弃去，另用90％以上的乙醇提取拌合物3次，合并提取液，回收乙醇至稠膏，减压干燥，得总皂苷元提取物。
优选后的步骤为a、取楤木药材，加45％～50％乙醇回流提取3～4次，每次3～4小时，合并乙醇液，滤过；滤液回收乙醇并继续浓缩至60℃时相对密度1.10～1.15的浸膏，加入0.5mol/L的硫酸或盐酸水解6～8小时，加1mol/L的NaOH溶液中和后静置，滤过，收集沉淀；b、取a中沉淀物，加氧化镁拌合，用4mol/L的氨水洗涤拌合物，氨水弃去，另用90％以上的乙醇提取拌合物3次，合并提取液，回收乙醇至稠膏，减压干燥，得总皂苷元提取物。
实现还发再，如果在步骤a中将乙醇提取液先调整其醇浓度达70％～85％，再滤过，进行其他操作，会更有效地降低杂质量，提高效率。确切地说，a的步骤可以是取楤木药材，加45％～50％乙醇回流提取3～4次，每次3～4小时，合并乙醇液，调整醇浓度达70％～85％，滤过；滤液回收乙醇并继续浓缩至60℃时相对密度1.10～1.15的浸膏，加入0.5mol/L的硫酸或盐酸水解6～8小时，加1mol/L的NaOH溶液中和后静置，滤过，收集沉淀在步骤a中，醇提过程也以用水提醇沉工艺代替，即取楤木药材，加入1％碳酸钙后加水煎煮提取2～4次，每次2～5小时，提取后水液，滤过，滤液加乙醇使含醇量达60％～70％，静置，滤过。然后滤液再进行回收乙醇、浓缩和水解。
优选后的醇提步骤为取楤木药材，加入1％碳酸钙后加水煎煮提取2～3次，每次3～4小时，提取后水液，滤过，滤液加乙醇使含醇量达70％，静置，滤过。然后滤液再进行回收乙醇、浓缩和水解。
应用以上方法，可以快速高效地制得楤木总皂苷元提取物，发明人对产物做了如下含量测定取提取物少量，以甲醇超声处理，加入新配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，加塞，摇匀，于70℃水浴加热20分钟，取出，冷却至室温后精密加入醋酸乙酯5ml，摇匀，以相同溶剂为空白，于560nm处测定吸收度，以齐墩果酸计a、b各步楤木皂苷元分别大于30％，50％。充分说明了本发明技术方案的有益效果。
应用本发明的技术方案，可以方便地将楤木直接用于制备多种含楤木的中药制剂，可以包括胶囊、软胶囊、片剂、微丸、颗粒等常见剂型，因而这些应用的行为都应属本发明的保护范围。
为了保证本发明制得的提取物质量，发明人还为其建立了质量控制方法。需要注意的是，该质量控制方法应与制备方法属同一发明构思，因为提取过程需有质量控制方法来保证中间产品及最终产品的品质，这个质控方法就是伴随着新的生产方法而产生的。具体方法如下。
色谱条件与系统适用性试验 高效液相色谱法；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；90∶10的甲醇-1％醋酸混合液为流动相，流速1.0ml/min，柱温40℃，紫外或蒸发光散射检测器检测；对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品适量，加甲醇溶解，制成确定浓度溶液，作为对照品溶液I；取对照品溶液I，加甲醇稀释1～2倍，制成对照品溶液II；供试品溶液的制备 取楤木总皂苷元提取物或其产品，研匀，精密称定，加甲醇提取30分钟，放冷，滤过，以适量甲醇洗涤残渣，滤过，合并甲醇液，水浴蒸干，残渣加20％硫酸20ml，沸水浴水解5小时，放冷，以乙醚萃取5次，合并乙醚液，以水洗涤至近中性，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并定量转移至量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，以微孔滤膜滤过，即得。
测定法 精密吸取对照品溶液I、II及供试品溶液一定量，注入液相色谱仪，测定，即得。
在上面方法中，如果用紫外检测器，则其检测波长应为190nm～230nm；如果用蒸发光散射检测器(ELSD 800)，则其检测条件是漂移管温度40～60℃，载气压力3.0～3.2bar；而用蒸发光散射检测器(ELSD 2000)的检测条件是漂移管温度95～125℃，载气流量1.5～2.5L/min。
以下通过具体实施方式
来进一步阐述本发明的技术方案，但本发明所要保护的不仅于实施例中所述剂型。
具体实施例方式
实施例1制备辽东楤木软胶囊取辽东楤木15kg，加50％乙醇10倍量回流4次，每次4小时，合并乙醇液，调整醇浓度至85％，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10～1.15(60℃)，加0.5mol/L硫酸回流水解5小时，挥散乙醇，加1mol/LNaoH调pH值至7，滤过，弃去滤液，沉淀物烘干，粉碎成细粉，加1.2倍的植物油和蜂蜡混合物，压制软胶囊3000粒，即得。
本品为胶囊剂，内容物为棕褐色，气微香，味苦、涩。
实施例2制备龙牙楤木微丸取楤木药材15kg，加入1％碳酸钙后加水煎煮提取3次，每次3小时，合并提取后的水液，滤过，滤液加乙醇使含醇量达65％，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.15～1.18(60℃)，加1mol/L硫酸回流水解7小时，挥散乙醇，加1mol/LNaoH调pH值至7，滤过，弃去滤液，沉淀物加氧化镁拌合，2mol当量的氨试液洗涤拌合物2次，弃去，95％乙醇提取拌合物3次，合并提取液，回收乙醇至稠膏，减压干燥，制成微丸。
实施例3制备辽东楤木注射液取辽东楤木，加40％乙醇10倍量回流4次，每次4小时，合并乙醇液，调整醇浓度至85％，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10～1.15(60℃)，加0.5mol/L硫酸回流水解8小时，挥散乙醇，加1mol/LNaoH调pH值至7，滤过，弃去滤液，沉淀物加氧化镁拌合，5mol当量的氨试液洗涤拌合物2次，弃去，90％乙醇提取拌合物3次，合并提取液，回收乙醇至稠膏，减压干燥，干浸膏加适量注射用水稀释，真空纤维超滤，即得。
本品为注射剂，内容物为淡黄色液体。
实施例4高效液相配合蒸发光散射检测器测定楤木软胶囊中的齐墩果酸的含量色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相乙腈-水(90∶10)，流速1.0ml/min，柱温40℃。蒸发光散射检测器(ELSD 800)检测条件漂移管温度40℃，载气压力3.08bar；蒸发光散射检测器(ELSD 2000)检测条件漂移管温度105℃，载气流量2.0L/min。
对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品适量，加甲醇溶解，制成每1ml含齐墩果酸0.25mg的溶液，作为对照品溶液I；取浓度为0.25mg/ml的对照品溶液，加甲醇稀释制成每1ml含齐墩果酸0.125mg的溶液，作为对照品溶液II，即得。
供试品溶液的制备 取本品20粒，倾出内容物，称取4g，精密称定，加甲醇50ml，超声提取(250W，50KHz)30分钟，放冷，滤过，以适量甲醇洗涤残渣，滤过，合并甲醇液，水浴蒸干，残渣加20％硫酸20ml，沸水浴水解5小时，放冷，以乙醚萃取三次，每次25ml，合并乙醚液，以水洗涤至近中性，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并定量转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，以微孔滤膜滤过，即得。
测定法精密吸取对照品溶液I、II及供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例5UV法对楤木皂苷元提取物的含量测定标准曲线的制备取齐墩果酸对照品5.0mg精密称定于5ml量瓶中，甲醇溶解定容，制成对照品溶液，精密吸取50ul，80ul，100ul，120ul，150ul对照品溶液于具塞试管中，挥去甲醇，精密加入新配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml高氯酸0.8ml，加塞，摇匀，于70℃水浴加热20分钟，取出，冷却至室温后精密加入醋酸乙酯5ml，摇匀，以相同溶剂为空白，于560nm处测定吸收度。
供试样品的制备精密称定本品于具塞试管中，精密吸取甲醇加入试管中，超声处理10分钟，过滤，弃去出滤液，收集续滤液作为供试品溶液，精密吸取，按标准曲线项下方法进行测定。
本品总皂苷以齐墩果酸计，含量不得低于50％。
权利要求
1.一种中药楤木总皂苷元提取物的制备方法，其特征在于该方法含有如下a、b两个步骤a、取楤木药材，加40％～50％乙醇回流提取2～4次，每次3～5小时，合并乙醇液，滤过；滤液回收乙醇并继续浓缩至60℃时相对密度1.10～1.20的浸膏，加入0.5～2mol/L的硫酸或盐酸水解5～10小时，加碱中和后静置，滤过，收集沉淀；b、取a中沉淀物，加氧化镁拌合，用2～5mol/L的氨水洗涤拌合物，氨水弃去，另用90％以上的乙醇提取拌合物3次，合并提取液，回收乙醇至稠膏，减压干燥，得总皂苷元提取物。
2.如权利要求1所述提取物的制备方法，其特征在于该方法含有如下步骤a、取楤木药材，加45％～50％乙醇回流提取3～4次，每次3～4小时，合并乙醇液，滤过；滤液回收乙醇并继续浓缩至60℃时相对密度1.10～1.15的浸膏，加入0.5mol/L的硫酸或盐酸水解6～8小时，加1mol/L的NaOH溶液中和后静置，滤过，收集沉淀；b、取a中沉淀物，加氧化镁拌合，用4mol/L的氨水洗涤拌合物，氨水弃去，另用90％以上的乙醇提取拌合物3次，合并提取液，回收乙醇至稠膏，减压干燥，得总皂苷元提取物。
3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于合并乙醇提取液后，先调整醇浓度至70％～85％，再滤过。
4.如权利要求3所述提取物的制备方法，其特征在于步骤a中的醇提过程也以用水提醇沉工艺代替，其过程是取楤木药材，加入1％碳酸钙后加水煎煮提取2～4次，每次2～5小时，提取后水液，滤过，滤液加乙醇使含醇量达60％～70％，静置，滤过。
5.如权利要求4所述提取物的制备方法，其特征在于步骤a中的水提醇沉工艺为取楤木药材，加入1％碳酸钙后加水煎煮提取2～3次，每次3～4小时，提取后水液，滤过，滤液加乙醇使含醇量达70％，静置，滤过。
6.如权利要求1至5中任一项所述方法制得产品的含量测定方法，其特征在于该方法如下色谱条件与系统适用性试验 高效液相色谱法；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；90∶10的甲醇-1％醋酸混合液为流动相，流速1.0ml/min，柱温40℃，紫外或蒸发光散射检测器检测；对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品适量，加甲醇溶解，制成确定浓度溶液，作为对照品溶液I；取对照品溶液I，加甲醇稀释1～2倍，制成对照品溶液II；供试品溶液的制备 取楤木总皂苷元提取物或其产品，研匀，精密称定，加甲醇提取30分钟，放冷，滤过，以适量甲醇洗涤残渣，滤过，合并甲醇液，水浴蒸干，残渣加20％硫酸20ml，沸水浴水解5小时，放冷，以乙醚萃取5次，合并乙醚液，以水洗涤至近中性，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并定量转移至量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，以微孔滤膜滤过，即得；测定法 精密吸取对照品溶液I、II及供试品溶液一定量，注入液相色谱仪，测定，即得。
7.如权利要求6所述的含量测定方法，其特征在于紫外检测器检测波长为190nm～230nm。
8.如权利要求6所述的含量测定方法，其特征在于ELSD 800型蒸发光散射检测器的检测条件为漂移管温度40～60℃，载气压力3.0～3.2bar。
9.如权利要求6所述的含量测定方法，其特征在于ELSD 2000型蒸发光散射检测器的检测条件为漂移管温度95～125℃，载气流量1.5～2.5L/min。
10.如权利要求1至5中任一项所述方法在将中药楤木用于制药中的应用。
11.如权利要求1至5中任一项所述方法制得的楤木总皂苷元提取物。
全文摘要
本发明公开了一种中药楤木的提取物的制备方法，确切地说是公开了楤木总皂苷元的制备方法，属中药领域。该方法通过水提或醇提得到楤木总皂苷提取物，然后通过水解、醇洗而使其中的皂苷元分离出来。该方法比树脂分离方法简单易行，且提取物中皂苷元的含量可达50％以上。本发明同时还公开了该提取物的质量控制方法。
文档编号A61K36/185GK1900106SQ20051020041
公开日2007年1月24日 申请日期2005年7月20日 优先权日2005年7月20日
发明者高淑英 申请人:北京凯瑞创新医药科技有限公司