5,10－亚甲基四氢叶酸在癌症治疗中的用途的制作方法

专利名称：5,10－亚甲基四氢叶酸在癌症治疗中的用途的制作方法
本申请要求以下美国临时申请的优先权2004年4月2日提交的序号为60/558,889的美国临时申请，题目为“用5，10-亚甲基四氢叶酸治疗癌症的方法”的，指定Mark Cantwell和Joan Robbins为发明人；2004年11月4日提交的序号为60/625,479的美国临时申请，题目为“用5，10-亚甲基四氢叶酸治疗癌症的方法”指定Mark Cantwell和JoanRobbins为发明人；2005年3月4日提交的序号为60/658,745的美国临时申请，题目为“用5，10-亚甲基四氢叶酸联合治疗癌症的方法”，指定Mark Cantwell和Joan Robbins为发明人。
背景技术：
癌症是公共健康关注的主要问题。在美国，每年仅结肠直肠癌引起大约50,000人死亡。每年在诊断出的近130,000例结肠直肠癌中，几乎一半的患者出现或者发展为肿瘤转移性疾病，对此化学治疗是唯一的治疗方法。迫切寻求新的有效的基于药物的疗法来不仅治疗结肠直肠癌，而且治疗其它癌症，例如乳腺癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、膀胱癌、子宫颈癌、头颈癌、肺癌、卵巢癌和前列腺癌。
抗癌药物5-氟尿嘧啶(5-FU)在体内转化为胸苷酸合成酶(TS)(核酸生物合成所必需的酶)的抑制剂，FdUMP。5-FU通常用于治疗癌症，如结肠直肠癌和乳腺癌、以及头颈癌、胰腺癌、胃癌和非小细胞肺癌。5-FU通常与亚叶酸(FA，甲酰四氢叶酸(leucovorin))一起使用，亚叶酸在细胞内转化为还原形式的叶酸(5，10-亚甲基四氢叶酸或5，10-亚甲基四氢叶酸的聚谷氨酸盐)，该还原形式的叶酸是胸苷酸合成酶的辅因子。人们发现与5-FU的单独应用相比，5-FU与甲酰四氢叶酸的组合具有增加的抗肿瘤作用。5-FU和5-FU与甲酰四氢叶酸的组合可与其它抗癌剂联合使用，以改进患有再发性结肠直肠癌、乳腺癌、胃癌或其它癌症患者的存活能力。
5，10-亚甲基四氢叶酸(“5，10-CH2-THFA”)是还原的叶酸，其直接或者在转化为其聚谷氨酸盐后，作为胸苷酸合成酶的辅因子起作用与5-FU相关的毒性包括口腔炎、粘膜炎、胃肠道症状和血液毒性，特别是中性粒细胞减少、血小板减少和白细胞减少。毒性可对患者可利用的治疗产生限制，或者通过对抗癌剂的剂量进行限制，或者通过对癌症患者治疗中临床医师可利用的手段进行限制。因此亟需开发具有减少的毒性并有效地延长患者存活能力的改进的抗癌药物方案。
发明的简要概述本发明提供了5，10-亚甲基四氢叶酸(“5，10-CH2-THFA”)在癌症治疗中的新用途，与当前的形式相比，其为患者提供了减少的毒性和更高的有效性。
本发明是根据以下惊人的结果5，10-CH2-THFA在增加5-FU在减少肿瘤生长率并增加存活能力方面的有效性的同时，还减少5-FU对患者的毒性。如本发明所公开的，与单独用5-FU或者用5-FU与甲酰四氢叶酸(亚叶酸；FA)联合治疗相比，用5，10-CH2-THFA和5-FU的治疗减少肿瘤生长率并增加患有肿瘤的动物的存活能力，同时证实比上述两种治疗方法的任一种方法具有更低的毒性。
本发明还根据以下发现与单一形式的治疗或包括使用5-FU和甲酰四氢叶酸的可选择的联合治疗相比，用5，10-CH2-THFA和5-FU与另外的抗癌药物治疗患有肿瘤的动物也可改进结果。
一方面，本发明提供了用包括5-氟尿嘧啶(5-FU)或5-FU的类似物或前药；5，10-CH2-THFA；以及一种或多种另外的抗癌药物的组合化学疗法治疗癌症患者的方法。所述的一种或多种另外的抗癌药物可以是一种或多种任何类型的化学治疗剂，包括但不限于包括特异性结合成员、蛋白、核酸、脂类、类固醇、大分子、小分子或金属的化学治疗剂。所述的一种或多种抗癌药物可包括一种或多种烷化剂、抗代谢物、有丝分裂抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、微管破坏药物、核酸合成抑制剂、激酶抑制剂、激素阻断药物、蛋白体抑制剂、血管生成抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、细胞因子、细胞因子抑制剂、受体-结合药物或5-FU调节剂。所述方法包括以5-FU或其类似物或其前药、5，10-CH2-THFA和至少一种另外的抗癌药物对患有癌症的患者给药。
本发明的第二方面提供了治疗癌症的组合物，所述组合物包含5-FU或其类似物或其前药、5，10-CH2-THFA和至少一种另外的抗癌药物。所述的一种或多种另外的抗癌药物可以是一种或多种任何类型的化学治疗剂，包括但不限于包括特异性结合成员、蛋白、核酸、脂类、类固醇、大分子、小分子或金属的化学治疗剂。所述的一种或多种抗癌药物可包括一种或多种烷化剂、抗代谢物、有丝分裂抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、微管破坏药物、核酸生物合成抑制剂、激酶抑制剂、激素阻断药物、蛋白体抑制剂、血管生成抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、细胞因子、细胞因子抑制剂、受体-结合药物或5-FU调节剂。本发明的多药组合物可以一种或多种制剂的形式提供。
本发明的第三方面为5，10-CH2-THFA与5-FU或其类似物或其前药和至少一种另外的化学治疗剂的组合在制备用于治疗癌症的组合物中的用途，其中所述至少一种另外的化学治疗剂选自烷化剂、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、微管破坏药物、核酸生物合成抑制剂、激酶抑制剂、激素阻断药物、蛋白体抑制剂、血管生成抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、细胞因子、细胞因子抑制剂、受体-结合药物或5-FU调节剂。所述用途包括将所述药物组合物制造为以单一制剂或多种制剂。
在第四方面中，本发明提供了通过同时以5，10-CH2-THFA给药来减少癌症药物治疗方案对癌症患者的毒性的方法，该药物治疗方案包括以5-FU或5-FU的类似物或前药对癌症患者给药。
在此方面的一些优选实施方案中，本发明包括通过同时以5，10-CH2-THFA给药来减少诸如但不限于卡培他滨的5-FU的类似物或前药的毒性的方法。
在此方面的一些优选实施方案中，本发明包括通过同时以5，10-CH2-THFA给药来减少抗癌治疗毒性的方法，所述抗癌治疗包括以5-FU或5-FU的类似物或前药和另外的抗癌药物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)对癌症患者给药。
本发明的第五方面为减少包括5-FU或5-FU的类似物或前药和甲酰四氢叶酸的抗癌药物治疗方案对患者的毒性的方法，所述方法包括用5，10-5，10-CH2-THFA代替在该抗癌药物方案中的甲酰四氢叶酸。
在此方面的一些优选实施方案中，本发明包括减少抗癌药物方案的毒性的方法，该抗癌药物方案包括诸如但不限于卡培他滨的5-FU的类似物或前药和甲酰四氢叶酸，其中该方案的毒性通过用5，10-CH2-THFA代替该方案中的甲酰四氢叶酸而减少。
在此方面的一些优选实施方案中，本发明包括减少抗癌治疗对癌症患者的毒性的方法，该抗癌治疗包括5-FU或5-FU的类似物或前药、甲酰四氢叶酸和至少一种另外的抗癌药物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)，这通过用5，10-5，10-CH2-THFA代替在所述药物方案中的甲酰四氢叶酸而实现。
在第六方面中，本发明提供了通过同时以5，10-5，10-CH2-THFA给药来增加癌症药物治疗方案的有效性的方法，该癌症药物治疗方案包括以5-FU或5-FU的类似物或前药对癌症患者给药。
在此方面的一些优选实施方案中，本发明包括通过同时以5，10-CH2-THFA给药来增加诸如但不限于卡培他滨的5-FU类似物或前药的有效性的方法。
在此方面的其它优选实施方案中，本发明包括通过同时以5，10-CH2-THFA给药来增加抗癌治疗的有效性的方法，该抗癌治疗包括以5-FU或5-FU的类似物或前药和另外的抗癌药物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)对癌症患者给药。
本发明的第七方面为增加抗癌药物治疗方案对患者的有效性的方法，所述抗癌药物治疗方案包括5-FU或5-FU的类似物或前药和甲酰四氢叶酸，所述方法包括用5，10-5，10-CH2-THFA代替所述抗癌药物方案中的甲酰四氢叶酸。
在此方面的一些优选实施方案中，本发明包括增加抗癌药物方案的有效性的方法，所述抗癌药物方案包括诸如但不限于卡培他滨的5-FU类似物或前药和甲酰四氢叶酸，其中通过用5，10-CH2-THFA代替该方案中的甲酰四氢叶酸来增加该方案的有效性。
在此方面的一些优选实施方案中，本发明包括增加抗癌治疗对癌症患者的有效性的方法，所述抗癌治疗包含5-FU或5-FU的类似物或前药、甲酰四氢叶酸和至少一种另外的抗癌药物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)，这通过用5，10-CH2-THFA代替所述药物方案中的甲酰四氢叶酸而实现。
在相关方面，本发明提供了增加包括5-FU和甲酰四氢叶酸的抗癌药物方案中的5-FU或5-FU的类似物或前药的剂量的方法。所述方法包括获得包括5-FU或5-FU的类似物或前药和甲酰四氢叶酸的抗癌药物方案；用5，10-5，10-CH2-THFA代替所述抗癌药物方案中的甲酰四氢叶酸；以及增加该抗癌药物方案中的5-FU或5-FU的类似物或前药的剂量。在这一方面，用5，10-CH2-THFA代替所述抗癌中的甲酰四氢叶酸且同时增加5-FU的剂量可增加治疗的有效性，且可能不增加毒性。
在另一相关方面，本发明提供了增加抗癌药物方案中的另外的抗癌药物的剂量的方法，所述抗癌药物方案包括5-FU或5-FU的类似物或前药、甲酰四氢叶酸和另外的抗癌药物。所述方法包括获得包括5-FU或5-FU的类似物或前药、甲酰四氢叶酸和至少一种另外的抗癌药物(其不同于5-FU或5-FU的类似物或前药或胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)的抗癌药物方案；用5，10-CH2-THFA代替所述抗癌药物方案中的甲酰四氢叶酸；以及增加该抗癌药物方案中的一种或多种另外的抗癌药物的剂量。在这一方面，用5，10-CH2-THFA代替所述抗癌中的甲酰四氢叶酸且同时增加在该方案中使用的另外的抗癌药物的剂量可增加治疗的有效性，且可能不增加毒性。
附图简要说明

图1为描述在以5-FU、此处以“辅因子”代表的5，10-CH2-THFA、抗VEGF(阿瓦斯汀)和甲酰四氢叶酸的组合治疗的裸小鼠中HT-29瘤的生长动力学曲线图。对于指出的药物，从治疗初始相对时间绘制HT-29瘤体积。绘制平均瘤体积±平均值的标准误差。通过最佳拟合分析生成曲线。
图2为描述在以5-FU、此处以“辅因子”代表的5，10-CH2-THFA和奥沙利铂的组合治疗的裸小鼠中HT-29瘤的生长动力学曲线图。对于指出的药物，从治疗初始相对时间绘制HT-29瘤体积。绘制平均瘤体积±±平均值的标准误差。通过最佳拟合分析生成曲线。
图3为描述以5-FU、此处以“辅因子”代表的5，10-CH2-THFA、抗VEGF(阿瓦斯汀)和甲酰四氢叶酸的组合治疗带有HT-29瘤的裸小鼠后的平均瘤体积图。治疗开始后22天对每一治疗组绘制平均瘤体积。误差棒代表平均值的标准误差。
图4为描述在以5-FU、此处以“辅因子”代表的5，10-CH2-THFA和奥沙利铂的组合治疗带有HT-29瘤的裸小鼠后的平均瘤体积图。治疗开始后22天对每一治疗组绘制平均瘤体积。误差棒代表平均值的标准误差。
图5描述以5-FU、此处以“辅因子”代表的5，10-CH2-THFA、甲酰四氢叶酸和抗VEGF(阿瓦斯汀)的组合治疗带有HT-29瘤的裸小鼠后的存活率的Kaplan-Meier图。
图6描述以5-FU、此处以“辅因子”代表的5，10-CH2-THFA和奥沙利铂的组合治疗带有HT-29瘤的裸小鼠后的存活率的Kaplan-Meier图。
图7为描述在以5-FU、此处以“辅因子”代表的5，10-CH2-THFA、甲酰四氢叶酸和抗VEGF(阿瓦斯汀)的组合处理的裸小鼠中HT-29瘤的生长动力学曲线图。对于指出的药物，从治疗初始相对时间绘制HT-29瘤体积。绘制平均瘤体积±平均值的标准误差。通过最佳拟合分析生成曲线。
图8为描述在以5-FU、此处以“辅因子”代表的5，10-CH2-THFA、甲酰四氢叶酸和抗VEGF(阿瓦斯汀)的组合治疗带有HT-29瘤的裸小鼠后的平均瘤体积图。治疗开始后19天对每一治疗组绘制平均瘤体积。误差棒代表平均值的标准误差。
图9描述以5-FU、此处以“辅因子”代表的5，10-CH2-THFA和抗VEGF(阿瓦斯汀)的组合治疗带有HT-29瘤的裸小鼠后的存活率的Kaplan-Meier图。
图10为以5-FU、5-FU/甲酰四氢叶酸和5-FU/5，10-CH2-THFA(5，10-CH2-THFA表示为“辅因子”)治疗带有HT-29瘤的Balb/c小鼠后的存活率的Kaplan-Meier图。
图11为描述以5-FU、5-FU/甲酰四氢叶酸和5-FU/5，10-CH2-THFA(5，10-CH2-THFA表示为“辅因子”)治疗的Balb/c小鼠的血液分析图。通过将药物治疗后1周进行的血液测量除以治疗前血液的测量以计算绘制在图中的基线测量百分数。对每一治疗组绘制平均数据值±平均值的标准误差。WBC，白细胞；RBC，红细胞；HGB，血红蛋白；HCT，红细胞压积；MCV，平均细胞体积；MCH，平均细胞血红蛋白；MCHC，平均细胞血红蛋白量；PLT，血小板。
图12为描述以5-FU、5-FU/甲酰四氢叶酸和5-FU/5，10-CH2-THFA(5，10-CH2-THFA表示为“辅因子”)治疗后Balb/c小鼠的血小板毒性等级图。药物处理后一周，对每只小鼠计算血小板毒性等级。对每一治疗组绘制具有1或2、3和4级毒性的小鼠百分数。
图13为描述以5-FU、5-FU/甲酰四氢叶酸和5-FU/5，10-CH2-THFA(5，10-CH2-THFA表示为“辅因子”)治疗后Balb/c小鼠的中性粒细胞毒性等级图。药物处理后一周，对每只小鼠计算中性粒细胞毒性等级。对每一治疗组绘制具有1或2、3和4级毒性的小鼠百分数。
图14为描述以5-FU、5-FU/甲酰四氢叶酸和5-FU/5，10-CH2-THFA(5，10-CH2-THFA表示为“辅因子”)治疗后Balb/c小鼠的中性粒细胞毒性分析图。药物处理后一周，基于它们的绝对中性粒细胞数将具有4级中性粒细胞毒性的小鼠细分。对每一治疗组绘制具有指出的中性粒细胞数的小鼠百分数。
图15为描述以5-FU、甲酰四氢叶酸和此处以“辅因子”表示的10-CH2-THF的组合治疗后Balb/c小鼠的体重减轻毒性等级图。药物处理后一周，对每只鼠计算体重减轻毒性等级。对每一治疗组绘制具有0、1、2和3级毒性的小鼠百分数。Gem＝吉西他滨图16为描述以5-FU、甲酰四氢叶酸、此处以“辅因子”表示的10-CH2-THF和吉西他滨的组合治疗后Balb/c小鼠的体重减轻百分数的图。药物处理后一周，对每只鼠计算自起始基线体重的体重减轻百分数。然后对每一处理组绘制落入图中指出的体重减轻范围的小鼠百分数。Gem＝吉西他滨。
图17为描述以5-FU、甲酰四氢叶酸、此处以“辅因子”代表的10-CH2-THFA和吉西他滨的组合处理Balb/c小鼠后的存活率的Kaplan-Meier图。
图18为描述以5-FU、5-FU/甲酰四氢叶酸和5-FU/5，10-CH2-THF(5，10-CH2-THF表示为“辅因子”)处理后Balb/c小鼠的淋巴细胞减少的毒性等级图。药物处理后一周，对每只鼠计算淋巴细胞减少的毒性等级。对每一治疗组绘制具1/2级、3级和4级毒性的小鼠的百分数。
图19为描述以卡培他滨(希罗达)、希罗达/甲酰四氢叶酸和希罗达/5，10-CH2-THFA(5，10-CH2-THFA表示为“辅因子”)治疗带有HT-29瘤的裸小鼠后的HT-29瘤生长动力学图。从治疗初始相对时间绘制HT-29瘤体积。绘制平均瘤体积±平均值的标准误差。通过最佳拟合分析生成曲线。
图20为以卡培他滨(希罗达)、希罗达/甲酰四氢叶酸和希罗达/5，10-CH2-THFA(5，10-CH2-THFA表示为“辅因子”)治疗Balb/c小鼠后的存活率的Kaplan-Meier图。
图21为描述在以卡培他滨(希罗达)、希罗达/甲酰四氢叶酸和希罗达/5，10-CH2-THFA(5，10-CH2-THFA表示为“辅因子”)治疗后8天的Balb/c小鼠的体重减轻毒性图。
发明的详细说明定义“抗癌药物”为任何用于治疗癌症的药物。可用于本发明的方法及组合物中的一些研究中的抗癌药物的一些非限制性实例提供于表1中。
“化学治疗剂”为任何具有生物活性且在疾病治疗中有用的化学实体。在癌症治疗中，化学治疗剂为直接或间接引起癌细胞死亡的化学实体。化学治疗剂作为单独的试剂或是与一种或多种其它的化学治疗剂组合可具有抗癌效果。
抗癌药物或化疗剂的“类似物”为在结构上与抗癌药物或化学治疗剂相似但在组成上稍有不同的(如，以一种不同元素的原子替换一个原子或添加或取代特定的功能团)化合物。本文使用的“类似物”也可表示在结构上相似或相同，但也包括例如能提高可溶性、延缓降解、增加在循环中的半衰期、赋予膜通透性或直接靶向组织或细胞的附加部分。优选当化合物、抗癌药物或化学治疗剂的类似物以治疗有效量给予患者时，基本上与所述化合物、抗癌药物或化学治疗剂具有相同活性的。
抗癌药物或化学治疗剂的“前药”为在体内转换为抗癌药物或治疗剂，但其自身无活性或者在数量和性质上具有不同于所述抗癌药物活性的分子。
本文使用的“抗癌药物方案(anticancer drug regimen)”、“化疗药物方案(chemotherapy drug regimen)”、“抗癌药物方案(anticancer drugprotocol)”或“化疗方案(chemotherapy protocol)”为癌症患者将接受何种治疗、每一种确切地何时及以何种剂量给予的正式的概要或计划。
本文使用的“胸苷酸合成酶的叶酸辅因子”或“TS的叶酸辅因子”为诸如5，10-CH2-THFA或5，10-CH2-THFA聚谷氨酸盐的还原叶酸分子，其能通过5-FU加强对胸苷酸合成酶的抑制作用。本文使用的“胸苷酸合成酶的叶酸辅因子”也可为加强胸苷酸合成酶的抑制作用的叶酸分子的前体或前药。例如，诸如亚叶酸(5-甲酰基-四氢叶酸酯，甲酰四氢叶酸)的叶酸辅因子在体内可转换为5，10-CH2-THFA和5，10-CH2-THFA的聚谷氨酸盐。
“毒性”指实体对细胞、组织、器官或机体系统的有害作用。毒性作用来自实体与治疗个体的细胞或组织的生物化学反应，可为普遍的或特异的，涉及特定系统或器官。作为非限制性实例，毒性可例如包括流泪增加，粘膜炎，esophagopharyngitis，诸如感觉异常、失眠和眩晕的神经毒性，诸如恶心、呕吐和腹泻的胃肠毒性，体重减轻毒性，心脏毒性，包括脱发、出汗和皮疹在内的皮肤病学毒性，诸如但不限于中性粒细胞减少、血小板减少、淋巴细胞减少、白细胞减少的血液毒性。毒性参数的临床定义可见于国家癌症研究所常用毒性标准(第三版)或世界卫生组织毒性标准。
抗癌治疗或化学治疗方案的“有效性”由其抗肿瘤或抗癌细胞作用和改善临床治疗结果的能力来确定，所述临床治疗结果例如为缓和、进展时间、应答率和存活能力。在癌症治疗领域内已充分建立了用于评价抗癌治疗或化学治疗方案的有效性的公认的方法。例如，可通过检测例如在血清或血浆中的癌细胞或标志物评价抗癌作用。可被检测的肿瘤蛋白或抗原的例子包括用于结肠癌的CEA和用于胰腺癌的CA19-9。对于实体瘤、可通过监测肿瘤大小和肿瘤大小随时间的变化测定抗肿瘤作用。在临床研究中，可通过放射线照相术、断层摄影术以及通过对肿瘤质量的直接测量(如果可能)监测损伤的数目、肿瘤大小和肿瘤生长率。抗肿瘤作用也可用分子生物学和生物化学技术测定，如ELISA、PCR、western印迹法或免疫细胞化学。
表1结肠直肠药物的研究
1微管抑制剂6细胞因子2疫苗7碳水化合物/脂3EGFR/VEGFR靶8细胞凋亡调节剂4酪氨酸激酶/转录因子抑制剂9核苷类似物5非甾体类抗炎药10其它I.用包括5-FU、5，10-CH2-THFA和至少一种另外的抗癌药物的联合疗法治疗癌症患者的方法本发明提供了用联合化学疗法治疗癌症患者的方法，所述联合化学疗法包括5-5-FU或5-FU的类似物或前药；5，10-CH2-THFA；和一种或多种另外的抗癌药物。所述一种或多种另外的抗癌药物可以是一种或多种任何类型的化学治疗剂，包括但不限于包含特异性结合成员、蛋白、核酸或核酸类似物(例如，但不限于反义分子、核酶和siRNA)、脂类、类固醇、大分子、小分子或金属的化学治疗剂。该一种或多种抗癌药物可包含一种或多种化学治疗剂，例如但不限于拓扑异构酶抑制剂(例如，依立替康、托泊替康)、抗代谢药物(例如，甲氨喋呤、吉西他滨、tezacitabine)、5-FU调节剂、烷化剂(例如，环磷酰胺、卡氮芥)、核酸生物合成抑制剂(例如，丝裂霉素C、多柔比星、顺铂、奥沙利铂)、微管破坏药物(例如，太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、长春瑞滨、长春新碱)、激素阻断药物(例如，他莫昔芬)、包括但不限于受体和非受体酪氨酸激酶的激酶抑制剂(例如，易瑞沙(Iressa)、它赛瓦(Tarceva)、SU5416、PTK787、格列卫(Gleevec))、蛋白体抑制剂(例如，硼替佐米(bortezomib))、免疫调节剂(例如，左旋咪唑)、抗炎药物、血管生成抑制剂、细胞因子(例如，白介素、肿瘤坏死因子)和抑制细胞因子、激素或者细胞因子或激素的受体活性的药物(例如，抗VEGF抗体贝伐单抗(bevacizumab)或“阿瓦斯汀”)。抗癌药物也可是正在研究中的可能具有抗癌活性的药物，如表1中所列的那些药物。抗癌药物包括单克隆抗体，例如但不限于结合细胞因子、激素或激素受体等等的单克隆抗体(例如，阻断EFG或VEGF生长因子活化的抗体，如阿瓦斯汀、erbutux、赫赛汀(herceptin))。
所述方法包括以5-FU或其类似物或其前药；5，10-CH2-THFA；和至少一种另外的抗癌药物对癌症患者进行给药。如本发明所用的，“另外的”抗癌药物不是5，10-CH2-THFA、5-FU或5-FU的类似物或前药或者甲酰四氢叶酸。
癌症患者可以是患有任何类型癌症的患者。在本发明的一些优选实施方案中，该患者患有在当前的实践中通常用5-FU治疗的肿瘤类型，例如结肠直肠癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、食管癌或胃癌。在本发明的一些优选实施方案中，该患者患有在当前的实践中通常不用5-FU治疗的肿瘤类型，例如但不限于卵巢癌或子宫颈癌。本发明也关注联合治疗在除了那些目前通常用5-FU治疗的癌症之外的其它癌症治疗中的可能性，该联合治疗采用5，10-CH2-THFA、5-FU(或其类似物或其前药)和一种或多种另外的抗癌药物。
癌症治疗和化学治疗领域内的技术人员能够采用已充分建立的用于评估毒性和有效性的方案确定5，10-CH2-THFA和5-FU的最佳剂量和方案。一些用5-FU和5，10-CH2-THFA治疗癌症患者的优选方案采用每m210毫克至1克的5，10-CH2-THFA，优选每m220毫克至500毫克的5，10-CH2-THFA，且更优选每m230毫克至250毫克的5，10-CH2-THFA。例如，5，10-CH2-THFA的优选剂量可为30毫克至约120毫克每m2。上述剂量只是一般性的指导方针，其可根据以下因素来扩展或改变，如癌症类型和级别、患者年龄、健康状况和性别、联合应用中使用的特定药物、给药途径和频率以及采用多药联合的实验和临床发现。
5-FU的剂量可为25毫克至约5克每m2，并优选约50毫克至2.5克每m2，且更优选约100毫克至约1克每m2。例如，5-FU的优选剂量可为250毫克至约700毫克每m2。上述剂量只是一般性的指导方针，其可根据以下因素来扩展或改变，如癌症类型和级别、患者年龄、健康状况和性别、联合应用中使用的特定药物、给药途径和频率以及采用多药联合的实验和临床发现。5-FU可以任何可行的方法给药，包括注射或IV给药。
在一些优选的实施方案中，5-FU的前药或类似物而不是5-FU本身用于联合治疗中。在患者的组织中，5-FU转化为胸苷酸合成酶抑制剂5-氟-2’-脱氧尿苷酸(FdUMP)。在本申请中，“5-FU的类似物或前药”用于指可直接或间接转化为诸如FdUMP的胸苷酸合成酶抑制剂的类似物或前药。可用于本发明所述方法的一种5-FU的前药为N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)。在一种优选的实施方案中，本发明所述方法包括以N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)；5，10-CH2-THFA；和至少一种另外的抗癌药物对癌症患者给药。卡培他滨的剂量可由熟练的临床医师确定并部分依赖于给药的频率。例如，卡培他滨的日剂量可为约500mg至约7500mg每m2，优选为约1000mg至约5000mg每m2，且更优选为约1500mg至约3000mg每m2。可将所述剂量分为每天一至六次(优选两次)给药。上述剂量只是一般性的指导方针，其可根据以下因素来扩展或改变，如癌症类型和级别、患者年龄、健康状况和性别、联合应用中使用的特定药物、给药途径和频率以及采用多药联合的实验和临床发现。卡培他滨可以任何可行的方法给药，包括注射、IV给药或以口服制剂形式给药。
可用于本发明所述方法的类似物组合为称为UFT的以1∶4的比例联合使用的替加氟(Tegafur，TF)和尿嘧啶(U)。在一种优选的实施方案中，本发明所述方法包括以UFT；5，10-CH2-THFA；和至少一种另外的抗癌药物对癌症患者给药。UFT的剂量可由熟练的临床医师确定并部分依赖于给药的频率。例如，UFT的日剂量可为约50mg至约3000mg每m2，优选为约100mg至约2000mg每m2，且更优选为约200mg至约1000mg每m2。包括UFT的抗癌方案也可任选地包括同UFT给药的亚叶酸钙。上述剂量只是一般性的指导方针，其可根据以下因素来扩展或改变，如癌症类型和级别、患者年龄、健康状况和性别、联合应用中使用的特定药物、给药途径和频率以及采用多药联合的实验和临床发现。UFT可以任何可行的方法给药，包括注射、IV给药或以口服制剂形式给药。
在本发明所述多药方案中使用的一种或多种另外的抗癌药物的剂量也可通过采用逐步增加剂量和监测毒性和有效性的研究确定。对于已独立地用于化学治疗方案中的联合治疗来说，在确定欲用于该联合治疗中的抗癌药物的剂量时，执业医生可考虑在已建立的化学治疗方案中使用的药物剂量。
当与5，10-CH2-THFA联合时，5-FU(或其类似物或其前药)毒性的减少可允许以下药物方案5，10-CH2-THFA和5-FU(或其类似物或其前药)与一种或多种另外的抗癌药物联合使用，该另外的抗癌药物在不存在CH2-THFA时具有被禁止使用的毒性。
根据可由有资格的临床医师确定的方案，所述药物可静脉内、口服或以任何其它可行的方式给药。在本发明的联合方案中使用的抗癌药物可单独给药，或者在该联合方案中使用的一种或多种抗癌药物可共同给药。当一种或多种抗癌药物单独进行给药时，每种药物给药的时间选择和时间表可改变。
例如，每种药物的团注可每周给予一次，持续数周。优选地，在5-FU或5-FU的类似物或前药之前，进行5，10-CH2-THFA给药。例如，在接受5-FU给药之前约10分钟至约4小时，患者可接受5，10-CH2-THFA给药。在联合治疗中使用的另外的抗癌药物可在5-FU(或其类似物或其前药)给药之前、过程中或之后给药，或者在患者未接受5-FU(或其类似物或其前药)和5，10-CH2-THFA的过程中进行给药。用于所述联合治疗的方案不是限制性的，并且对于频率、持续时间和剂量可包括多种任何可行性给药方案。
在本发明此方面的一些实施方案中，当与在5，10-CH2-THFA和5-FU(或其类似物或其前药)不存在时用一种或多种另外的抗癌药物治疗患者进行比较时，或者当与在5，10-CH2-THFA不存在时用5-FU(或其类似物或其前药)和所述一种或多种另外的抗癌药物治疗患者进行比较时，用5，10-CH2-THFA、5-FU(或其类似物或其前药)和一种或多种另外的抗癌药物治疗癌症患者可减少癌症患者体内的肿瘤生长率。
在本发明此方面的一些实施方案中，当与在5，10-CH2-THFA和5-FU(或其类似物或其前药)不存在时用一种或多种另外的抗癌药物治疗癌症患者进行比较时，或者当与在5，10-CH2-THFA不存在时用5-FU(或其类似物或其前药)和所述一种或多种另外的抗癌药物治疗癌症患者进行比较时，用5，10-CH2-THFA、5-FU(或其类似物或其前药)和一种或多种另外的抗癌药物治疗癌症患者可增加癌症患者的存活能力。
II.包含5-FU、5，10-亚甲基四氢叶酸和至少一种另外的抗癌药物的用于癌症治疗的组合物本发明的第二方面为用于癌症治疗的组合物，其包括5-FU或其类似物或其前药、5，10-CH2-THFA和至少一种另外的抗癌药物。所述一种或多种另外的抗癌药物可以是一种或多种任何类型的化学治疗剂，包括但不限于包含特异性结合成员、蛋白、核酸或核酸类似物(例如，但不限于反义分子、核酶和siRNA)、脂类、类固醇、大分子、小分子或金属的化学治疗剂。该一种或多种抗癌药物可包含一种化学治疗剂，例如但不限于拓扑异构酶抑制剂(例如，依立替康、托泊替康)、抗代谢药物(例如，甲氨喋呤、吉西他滨)、有丝分裂抑制剂、5-氟尿嘧啶调节剂、烷化剂(例如，环磷酰胺、卡氮芥)、核酸生物合成抑制剂(例如，丝裂霉素C、多柔比星、顺铂、奥沙利铂)、微管破坏药物(例如，太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、长春瑞滨、长春新碱)、激素阻断药物(例如，他莫昔芬)、包括但不限于受体和非受体酪氨酸激酶的激酶抑制剂(例如，易瑞沙、它赛瓦、SU5416、PTK787、格列卫)、蛋白体抑制剂(例如，硼替佐米)、免疫调节剂(例如，左旋咪唑)、抗炎药物、血管生成抑制剂、细胞因子(例如，白介素、肿瘤坏死因子)和抑制细胞因子、激素或者细胞因子或激素的受体活性的药物(例如，抗VEGF抗体贝伐单抗或“阿瓦斯汀”)。抗癌药物也可是正在研究中的可能具有抗癌活性的药物，如表1中所列的那些药物。抗癌药物包括单克隆抗体，例如但不限于结合细胞因子、激素或激素受体等等的单克隆抗体(例如，阻断EFG或VEGF生长因子活化的抗体，如阿瓦斯汀、erbutux、赫赛汀)。
本发明包括抗癌药物组合，该抗癌药物组合包括组方为药物组合物的5-FU(或其类似物或其前药)、5，10-CH2-THFA和一种或多种另外的抗癌药物。抗癌药物组合可包含一种或多种药物制剂。例如，可以单独制剂的形式提供每一5-FU(或其类似物或其前药)、5，10-CH2-THFA和一种或多种另外的抗癌药物。或者，可将5-FU(或其类似物或其前药)、5，10-CH2-THFA和一种或多种另外的抗癌药物的两种或多种共同提供于制剂中。可将在本发明的多药抗癌方案中使用的单独制剂设计成相同或不同的给药途径。
III.5-FU、5，10-亚甲基四氢叶酸和至少一种另外的抗癌药物在制造用于治疗癌症的药物组合物中的用途本发明还包括5-FU或其类似物或其前药、5，10-CH2-THFA和至少一种另外的抗癌药物在制造用于治疗癌症的药物组合物中的用途。所述至少一种另外的抗癌药物可以是如下抗癌药物中的任意药物拓扑异构酶抑制剂(例如，依立替康、托泊替康)、抗代谢药物(例如，甲氨喋呤、吉西他滨)、有丝分裂抑制剂、5-FU调节剂、烷化剂(例如，环磷酰胺、卡氮芥)、核酸生物合成抑制剂(例如，丝裂霉素C、多柔比星、顺铂、奥沙利铂)、微管破坏药物(例如，太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、长春瑞滨、长春新碱)、激素阻断药物(例如，他莫昔芬)、包括但不限于受体和非受体酪氨酸激酶的激酶抑制剂(例如，易瑞沙、它赛瓦、SU5416、PTK787、格列卫)、蛋白体抑制剂(例如，硼替佐米)、免疫调节剂(例如，左旋咪唑)、抗炎药物、血管生成抑制剂、细胞因子(例如，白介素、肿瘤坏死因子)和抑制细胞因子、激素、或者细胞因子或激素的受体活性的药物(例如，贝伐单抗或“阿瓦斯汀”)。所述用途包括将所述药物组合物制造为单一制剂或多于一种形式的制剂。例如，可将5-FU作为注射用部分来提供，并且在5-FU给药之前，可将5，10-CH2-THFA和至少一种另外的抗癌药物作为另外的注射用部分来提供给药。或者，可均以单独制剂的形式提供5-FU、5，10-CH2-THFA和至少一种另外的抗癌药物，以便每一种均可分别给药，且其中将每一药物部分制造为具有适于特定联合药物方案的适当剂量。
所述药物组合物包含准备用于贮存和优选随后给药的药物可接受的载体，该药物组合物在药物可接受载体或稀释剂中含有药物有效量所述化合物。用于治疗应用的可接受的载体或稀释剂在药物领域内是公知的，并且例如描述在Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷明顿制药学)，18th Ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA(1990))中。防腐剂、稳定剂、染料甚至调味剂均可提供于该药物组合物中。例如，可加入作为防腐剂的苯甲酸钠、抗坏血酸和对羟基苯甲酸的酯。另外，可使用抗氧化剂和助悬剂。
依赖于靶组织，可将本发明的药物组合物进行组方并用作用于口服给药的片剂、胶囊或溶液；用于局部给药的油膏剂或软膏剂；用于直肠给药的栓剂；适于用作吸入剂或鼻腔喷雾剂的无菌溶液、混悬液等等。注射剂也可以制备为下列常规形式作为溶液或悬浮液、在注射前适合制成溶液或悬浮液的固体剂型、或作为乳剂。适合的赋形剂例如是水、盐水、葡萄糖、甘露醇、乳糖、卵磷脂、白蛋白、谷氨酸钠、半胱氨酸盐酸盐等等。另外，如果需要，所述的注射用药药物组合物可包含较少量的无毒性辅助物，例如湿润剂、pH缓冲剂等等。
作为剂量所要求的组合物的药物有效量将依赖于给药途径、待治疗的癌症类型和患者的身体特征。可调整所述剂量来实现预期效应，但是依赖于下列因素例如体重、饮食、同时的药物治疗和在医药领域的技术人员公认的其它因素。在本发明所述的方法的实施中，所述药物组合物可单独使用或与其它的治疗试剂或诊断试剂联合使用。可以多种方式采用多种剂型以所述药物组合物对患者给药，包括局部的、肠胃外的、静脉内的、皮下的、肌内的、结肠的、经直肠的、鼻内和腹膜内给药。优选地，将所述药物组合物肠胃外、静脉内和口服给药。这些方法也可用于测试试验化合物在体内的活性。
当作为混悬液口服给药时，本发明的组合物可根据药物制剂领域内公知的技术来制备，并可包含用于增大体积的微晶纤维素、作为助悬剂的藻酸或藻酸钠、作为粘性增强剂的甲基纤维素和本领域内公知的甜味剂/调味剂。作为即刻释放的片剂，这些组合物可保哈微晶纤维素、磷酸二钙、淀粉、硬脂酸镁和乳糖和/或其它本领内公知的赋形剂、粘合剂、膨胀剂、崩解剂、稀释剂和润滑剂。在漱口制剂或冲洗制剂中的组分包括本领域内公知的抗菌剂、表面活性剂、辅助表面活性剂、油、水和诸如甜味剂/调味剂的其它添加剂。
当通过饮用溶液给药时，所述组合物包含溶于含有适当pH调节剂的水中一种或多种本发明的组合物和载体。可将所述化合物溶于蒸馏水、自来水、泉水等水中。可优选地将pH调为约3.5至约8.5。可加入甜味剂，如1％(w/v)蔗糖。
可将本发明的制剂加以改变，以包括；(1)调节pH的其它酸和碱；(2)其它张力赋予剂，例如山梨糖醇、甘油和葡萄糖的；(3)其它抗菌性防腐剂，如其它对羟基苯甲酸酯、山梨酸酯、苯甲酸酯、丙酸酯、氯代丁醇、苯乙醇、苯扎氯铵和汞剂；(4)其它赋予粘性剂，如羧甲基纤维素钠、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇和其它树胶；(5)适合的吸收促进剂；(6)诸如抗氧化剂的稳定剂，诸如重亚硫酸盐和抗坏血酸，诸如依地酸钠的金属络合剂和诸如聚乙二醇的药物溶解促进剂。
IV.减少包括5-FU的抗癌药物治疗方案对患者的毒性的方法本发明也提供了通过将5，10-CH2-THFA加入包括5-FU、5-FU的类似物或前药的药物方案中，以减少该药物治疗方案对癌症患者的毒性的方法。
一方面，所述方法包括获得包含5-FU或其类似物或其前药的抗癌药物方案，并将10-CH2-THFA加入该抗癌药物方案中以得到对所述患者减少毒性的抗癌药物方案。减少包括以5-FU或其类似物或其前药给药的癌症药物治疗的毒性的方法，包括在5-FU给药之前、之后或同时，以5，10-5，10-CH2-THFA对所述患者进行给药以减少5-FU的毒性。优选地，在5-FU给药之前进行5，10-CH2-THFA给药。在本发明此方面的一些优选实施方案中，将5，10-CH2-THFA对接受5-FU的患者给药，以减少5-FU的血液毒性。在本发明此方面的优选实施方案中，在甲酰四氢叶酸(亚叶酸，FA)不存在时以5-FU和5，10-CH2-THFA对所述患者进行给药。
癌症患者可以是患有任何类型癌症的患者。在本发明的以5，10-CH2-THFA对接受5-FU的癌症患者进行给药的一些优选实施方案中，该患者患有通常用5-FU治疗的肿瘤类型，例如，结肠直肠癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、食管癌或胃癌。
本发明是基于以下令人惊讶的结果5，10-CH2-THFA在增加5-FU在减少肿瘤生长率和增加存活能力方面的有效性的同时，也减少5-FU对非肿瘤细胞的毒性。如实施例1和实施例2中所公开的，与单独用5-FU治疗或者用5-FU与甲酰四氢叶酸(亚叶酸)的联合治疗相比，用5，10-CH2-THFA和5-FU的治疗减少具有肿瘤的动物的肿瘤生长率并增加存活能力。
本发明所用的“减少毒性”是指减少对所述患者的毒性全身作用，或对该患者的非癌细胞的毒性作用。作为非限制性实例，毒性可包括，流泪增加；粘膜炎；esophagopharyngitis；神经上的毒性，如感觉异常、失眠和头晕；胃肠道毒性，如恶心、呕吐和腹泻；体重减轻毒性；心脏毒性；皮肤病学毒性，包括脱发、出汗和起疹；以及血液毒性，例如但不限于嗜中性粒细胞减少、血小板减少、淋巴细胞减少和白细胞减少。
在本发明此方面的一些优选实施方案中，5，10-CH2-THFA与5-FU联合治疗给药以减少与5-FU治疗相关的血液毒性程度。例如，5，10-CH2-THFA与5-FU一同给药可减少与包括5-FU的化学治疗方案相关的嗜中性粒细胞减少、血小板减少、淋巴细胞减少和白细胞减少，该包括5-FU的化学治疗方案包括但不限于为包括5-FU和甲酰四氢叶酸(亚叶酸)的化学治疗方案。
癌症治疗和化学治疗领域内的技术人员能够采用已充分建立的用于评估毒性和有效性的方案确定5，10-CH2-THFA和5-FU的最佳剂量和方案。一些用5-FU和5，10-CH2-THFA治疗癌症患者的优选方案采用每m210毫克至1克的5，10-CH2-THFA，优选每m220毫克至500毫克的5，10-CH2-THFA，且更优选每m230毫克至250毫克的5，10-CH2-THFA。例如，5，10-CH2-THFA的优选剂量可为30毫克至约120毫克每m2。上述剂量只是一般性的指导方针，其可根据以下因素来扩展或改变，如癌症类型和级别、患者年龄、健康状况和性别、联合应用中使用的特定药物、给药途径和频率以及采用多药联合的实验和临床发现。
5-FU的剂量可为25毫克至约5克每m2，并优选约50毫克至2.5克每m2，且更优选约100毫克至约1克每m2。例如，5-FU的优选剂量可为250毫克至约700毫克每m2。上述剂量只是一般性的指导方针，其可根据以下因素来扩展或改变，如癌症类型和级别、患者年龄、健康状况和性别、联合应用中使用的特定药物、给药途径和频率以及采用多药联合的实验发现和临床发现。5-FU可以任何可行的方法给药，包括注射或IV给药。
在一些优选的实施方案中，5-FU的前药或类似物而不是5-FU本身用于联合治疗中。在患者的组织中，5-FU转化为胸苷酸合成酶抑制剂5-氟-2’-脱氧尿苷酸(FdUMP)。在本申请中，“5-FU的前药或类似物”用于指可直接或间接转化为诸如FdUMP的胸苷酸合成酶抑制剂的类似物或前药。可用于本发明所述方法的一种5-FU的前药为N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)。在一种优选的实施方案中，本发明所述方法包括以N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)；5，10-CH2-THFA；和至少一种另外的抗癌药物对癌症患者给药。卡培他滨的剂量可由熟练的临床医师确定并部分依赖于给药的频率。例如，卡培他滨的日剂量可为约500mg至约7500mg每m2，优选为约1000mg至约5000mg每m2，且更优选为约1500mg至约3000mg每m2。可将所述剂量分为每天一至六次(优选两次)给药。上述剂量只是一般性的指导方针，其可根据以下因素来扩展或改变，如癌症类型和级别、患者年龄、健康状况和性别、联合应用中使用的特定药物、给药途径和频率以及采用多药联合的实验和临床发现。卡培他滨可以任何可行的方法给药，包括注射、IV给药或以口服制剂形式给药。
可用于本发明所述方法的类似物组合为称为UFT的以1∶4的比例联合使用的替加氟(TF)和尿嘧啶(U)。在一种优选的实施方案中，本发明所述方法包括以UFT；5，10-CH2-THFA；和至少一种另外的抗癌药物对癌症患者给药。UFT的剂量可由熟练的临床医师确定并部分依赖于给药的频率。例如，UFT的日剂量可为约50mg至约3000mg每m2，优选为约100mg至约2000mg每m2，且更优选为约200mg至约1000mg每m2。包括UFT的抗癌方案也可任选地包括同UFT一起给药的亚叶酸钙。上述剂量只是一般性的指导方针，其可根据以下因素来扩展或改变，如癌症类型和级别、患者年龄、健康状况和性别、联合应用中使用的特定药物、给药途径和频率以及采用多药联合的实验和临床发现。UFT可以任何可行的方法给药，包括注射、IV给药或以口服制剂形式给药。
使用卡培他滨的抗癌药物方案的一些实例描述在Blum JL等人“Multicenter phase II study of capecitabine in paclitaxel-refractorymetastatic breast cancer(卡培他滨在耐太平洋紫杉醇的转移性乳腺癌中的多中心的II期研究).”J Clin Oncol 1999；17485-93；Hoff等人“Comparison of oral capecitabine versus intravenous fluorouracil plusleucovorin as first-line treatment in 605 patients with metastatic colorectalcancerresults of a randomized phase III study(在患有转移性结肠直肠癌的605名患者的一线治疗中口服的卡培他滨与静脉注射的氟尿嘧啶加甲酰四氢叶酸的比较随机的III期研究结果).”J Clin Oncol2001；19(8)2282-92；和Van Cutsem E等人“Oral capecitabine comparedwith intravenous fluorouracil plus leucovorin in patients with metastaticcolorectal cancerresults of a large phase III study(在患有转移性结肠直肠癌的患者中口服的卡培他滨与静脉注射的氟尿嘧啶加甲酰四氢叶酸的比较大规模的III期研究结果).”J Clin Oncol 2001；19(21)4097-106中，在此将其全部引入作为参考，特别引入关于采用卡培他滨的化学治疗方案的公开。本发明包括在包括卡培他滨的方案中以5，10-CH2-THFA给药以便减少卡培他滨治疗的毒性。
例如，一种方案包括每天两次给药卡培他滨(1000-1250mg每m2)，持续两周，随后再休息一周时间，然后再进一步进行三周循环。可将5，10-CH2-THFA加入诸如此类的方案中，并且所述方案可根据关于毒性和有效性的临床试验最优化。
在此方面的一些优选实施方案中，本发明包括通过同时以5，10-CH2-THFA给药来减少以下抗癌治疗的毒性的方法，所述抗癌治疗包括将5-FU或5-FU的类似物和前药和另外的抗癌药物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)对癌症患者给药。所述方法包括获得包括5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药和至少一种另外的抗癌药物的抗癌药物方案，然后将5，10-CH2-THFA加入该抗癌药物方案中以得到对该患者减少毒性的抗癌药物方案。
另外的抗癌药物可以是任何类型的抗癌药物，包括但不限于拓扑异构酶抑制剂(例如，依立替康、托泊替康)、抗代谢药物(例如，甲氨喋呤、吉西他滨)、5-氟尿嘧啶调节剂、烷化剂(例如，环磷酰胺、卡氮芥)、核酸生物合成抑制剂(例如，丝裂霉素C、多柔比星、顺铂、奥沙利铂、卡铂)、微管破坏药物(例如，太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、长春瑞滨、长春新碱)、激素阻断药物(例如，他莫昔芬)、包括但不限于受体和非受体酪氨酸激酶的激酶抑制剂(例如，易瑞沙、它赛瓦、SU5416、PTK787、格列卫)、蛋白体抑制剂(例如，硼替佐米)、免疫调节剂(例如，左旋咪唑)、抗炎药物、血管生成抑制剂、细胞因子(例如，白介素、肿瘤坏死因子)和抑制细胞因子、激素、或者细胞因子或激素的受体活性的药物(例如，贝伐单抗(阿瓦斯汀)、西妥昔单抗(艾比特斯))。抗癌药物也可是正在研究中的可能具有抗癌活性的药物，如表1中所列的那些药物。抗癌药物包括单克隆抗体，例如但不限于结合细胞因子、激素或激素受体等等的单克隆抗体(例如，阻断EFG或VEGF生长因子活化的抗体，如阿瓦斯汀、erbutux、赫赛汀)。本发明所述方法包括多于一种的另外的抗癌药物与5-FU联合应用的方法。
减少包括以5-FU或其类似物或其前药和另外抗癌药物给药的癌症药物治疗的毒性的方法，包括在5-FU(或其类似物或其前药)给药之前、之后或同时，以5，10-CH2-THFA对患者进行给药。优选地，在5-FU给药之前进行5，10-CH2-THFA给药。可在5-FU给药之前、之后或同时，以另外一种抗癌药物给药。
在本发明所述多药方案中使用的一种或多种另外的抗癌药物剂量也可通过采用逐步增加剂量和监测毒性和有效性的研究来确定。对于已独立地用于化学治疗方案中的联合治疗来说，在确定欲用于该联合治疗中的抗癌药物的剂量时，执业医生可考虑在已建立的化学治疗方案中使用的药物剂量。
将5-FU与一种或多种抗癌药物(其不同于胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)联合的多种化学治疗方案在癌症治疗领域内是众所周知的。例如，包括5-FU与一种或多种另外的药物(其不同于叶酸辅因子)的组合的抗癌方案包括但不限于包括环磷酰胺、表柔比星和氟尿嘧啶的用于乳腺癌的治疗(参见，例如，Levine MN，Bramwell VH，Pritchard KI等人“Randomized trial of intensive cyclophosphamide，epirubicin，andfluorouracil chemotherapy compared with cyclophosphamide，methotrexate，and fluorouracil in premenopausal women withnode-positive breast cancer(在患有淋巴结阳性乳腺癌的绝经前妇女中，环磷酰胺、表柔比星和氟尿嘧啶的加强型化学治疗与环磷酰胺、甲氨喋呤和氟尿嘧啶进行对照的随机试验).”J Clin Oncol 1998；16(8)2651-8；在此引入作为参考，特别是引入采用5-FU的抗癌方案的公开作为参考)。包括5-FU与一种或多种另外的药物(其不同于叶酸辅因子)的组合的抗癌方案也包括包含环磷酰胺、多柔比星和氟尿嘧啶的用于乳腺癌的治疗(参见，例如，Bennett JM，Muss HB，Doroshaw JH，等人“A randomized multicenter trial comparing mitoxantrone，cyclophophamide，and fluorouracil with doxorubicin，cyclophosphamide，and fluorouracil in the therapy of metastatic breast cancer(在转移性乳腺癌的治疗中，米托蒽醌、环磷酰胺和氟尿嘧啶与多柔比星、环磷酰胺和氟尿嘧啶进行对照的随机多中心试验).”J Clin Oncol1988；6(10)1611-20；在此引入作为参考，特别是引入包括5-FU的抗癌方案的公开作为参考)。本发明包括将5，10-CH2-THFA加入诸如这类方案的化学治疗方案中以便减少该化学治疗方案的毒性。
可加入5，10-CH2-THFA以减少治疗毒性的抗癌方案的另一实例为包括采用丝裂霉素C和氟尿嘧啶的用于治疗头颈癌的方案，如KeaneTJ，Cummings BJ，O′Sullivan B，Payne D，Rawlinson E，MacKenzie R，Danjoux C，Hodson I在“A randomized trial of radiation therapycompared to split course radiation therapy combined with mitomycin Cand 5-fluorouracil as initial treatment for advanced laryngeal andhypopharyngeal squamous carcinoma(作为用于晚期喉及喉咽部鳞状细胞癌的初始治疗，放射治疗与联合丝裂霉素C和5-氟尿嘧啶的分段放射治疗进行对照的随机试验).”IJ Radiation Oncology Biol Phys，199325(4)613-8中所公开的，在此引入作为参考，特别是引入与采用5-FU的抗癌方案相关的公开作为参考。在此情况下，所述抗癌治疗方案除化学治疗之外还包括放射治疗。
可加入5，10-CH2-THFA以减少治疗毒性的其它类型方案还为将5-FU与丝裂霉素C联合的抗癌方案，例如在Keane TJ，Cummings BJ，O’Sullivan B，Payne D，Rawlinson E，MacKenzie R，Danjoux C，Hodson I.“A randomized trial of radiation therapy compared to split courseradiation therapy combined with mitomycin C and 5-fluorouracil as initialtreatment for advanced laryngeal and hypopharyngeal squamouscarcinoma(作为用于晚期喉及喉咽部鳞状细胞癌的初始治疗，放射治疗与联合丝裂霉素C和5-氟尿嘧啶的分段放射治疗进行对照的随机试验).”IJ Radiation Oncology Biol Phys，199325(4)中所公开的，在此引入作为参考，特别是引入与包括5-FU的抗癌方案相关的公开作为参考，以及将卡铂与5-FU联合应用的其它方案，如Calais G，Alfonsi M，Bardet E等人在“Randomized trial of radiation therapy versusconcomitant chemotherapy and radiation therapy for advanced-stageoropharynx carcinoma(作为用于晚期口咽癌的治疗，放射治疗与化学治疗和放射治疗共存进行对比的随机试验).”J Natl Cancer Inst 1999；912081-6中所公开的，在此引入作为参考，特别是引入与包括5-FU的抗癌方案相关的公开作为参考。在这些治疗中，抗癌治疗方案除化学治疗之外还包括放射治疗。
本发明包括通过同时以5，10-CH2-THFA给药来减少包括5-FU的类似物或前药和另外抗癌药物(其不同于胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)的方案的毒性的方法。包括卡培他滨和多烯紫杉醇的抗癌方案的实例在O’Shaughnessy J，等人的Superior survival with capecitabine plusdocetaxel combination therapy in anthracycline pre-treated patients withadvanced breast cancerphase III trial results(在用蒽环类化合物预处理的患有晚期乳腺癌的患者中，用卡培他滨加多烯紫杉醇的联合治疗进行治疗的患者具有出众的存活能力III期试验结果).J Clin Oncol 2002；202812-23中所公开，在此引入作为参考，特别是引入采用卡培他滨的抗癌方案的公开作为参考。也可将5，10-CH2-THFA加入包括替加氟-尿嘧啶(UFT)与另外的癌症药物联合的方案中，例如包括奥沙利铂的方案中，如Feliu J.等人在“Phase II study of UFT and oxaliplatin infirst-line treatment of advanced colorectal cancer(UFT和奥沙利铂在晚期结肠直肠癌的一线治疗中的II期研究).”Br.J.Cancer 2004 911758-62中所公开的，在此引入作为参考，特别是引入采用UFT的抗癌方案的公开作为参考。
上述参考方案只是实例，且不应以任何方式理解为对本发明的限制。可加入5，10-CH2-THFA以减少治疗毒性的抗癌方案可从任何公认的来源中获得，包括科学和医学文献以及医院、癌症中心和临床资源。在本发明的范围内，在通过5，10-CH2-THFA给药以减少方案的毒性方面，可对5-FU、5，10-CH2-THFA两者之一或者两者以及相关的一种或多种另外的抗癌药物的剂量和时间方案进行修改。这种修改可由监测患者对治疗反应的经训练的临床医师根据公认的医学实践进行。
本发明此方面的一些优选实施方案包括减少包括5-FU(或其类似物或其前药)和胸苷酸合成酶的叶酸辅因子的抗癌药物方案的毒性的方法，其中用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氢叶酸作为胸苷酸合成酶的叶酸辅因子。所述方法包括获得包含5-FU或其类似物或其前药和甲酰四氢叶酸的抗癌药物方案，并用5，10-CH2-THFA代替该抗癌药物方案中的甲酰四氢叶酸。
在此方面的一些优选实施方案中，本发明包括减少抗癌药物方案的毒性的方法，该抗癌药物方案包括诸如但不限于卡培他滨或UFT的5-FU的类似物或前药和甲酰四氢叶酸，其中通过用5，10-CH2-THFA代替该方案中的甲酰四氢叶酸减少该方案的毒性。
在此方面的一些优选实施方案中，本发明包括通过用5，10-CH2-THFA代替药物方案中的甲酰四氢叶酸来减少抗癌治疗对癌症患者的毒性的方法，所述抗癌治疗包括5-FU或5-FU的类似物或前药、甲酰四氢叶酸和至少一种另外的抗癌药物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)。所述方法包括获得包含5-FU或其类似物或其前药；甲酰四氢叶酸和至少一种另外的抗癌药物的抗癌药物方案，并用5，10-CH2-THFA代替该抗癌药物方案中的甲酰四氢叶酸。
因为与甲酰四氢叶酸相比，5，10-CH2-THFA具有抗肿瘤活性和减少的全身毒性，并且因为甲酰四氢叶酸和5，10-CH2-THFA具有相似的化学和代谢途径，所以发明人考虑在目前的一系列化学治疗方案内，5，10-CH2-THFA可代替甲酰四氢叶酸。目前通常用于与5-FU加甲酰四氢叶酸联合的药物的非限制性实例为依立替康(GPT-11)、奥沙利铂、吉西他滨、丝裂霉素C、左旋咪唑和长春瑞滨。本发明包括用5，10-CH2-THFA代替这些方案中的甲酰四氢叶酸的治疗。用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氢叶酸可提供增强的治疗作用及减少的毒性。作为非限制性实例，可用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氢叶酸的目前的联合用药方案包括在结肠直肠癌治疗中使用的以下方法·AIO方案(亚叶酸、5-FU、依立替康)·第一天依立替康(100mg/m2)进行2小时输注；第一天甲酰四氢酸(500mg/m2)进行2小时输注；随后通过携带式泵在24小时静脉(IV)团注5-FU(2,000mg/m2)，连续四周，每52周重复一次。
·Douillard方案(亚叶酸、5-FU、依立替康)·第一天依立替康(180mg/m2)进行2小时输注；第一天和第二天甲酰四氢叶酸(200mg/m2)进行2小时输注；随后IV团注负荷剂量的5-FU(400mg/m2)，然后在第一天和第二天通过携带式泵IV在22小时注入5-FU(600mg/m2)，每2周重复一次。
·FOLFOX4方案(奥沙利铂、甲酰四氢叶酸、5-FU)·第一天奥沙利铂(85mg/m2)进行2小时输注；第一天和第二天甲酰四氢叶酸(200mg/m2)进行2小时输注；随后IV团注负荷剂量的5-FU(400mg/m2)，然后在第一天和第二天通过携带式泵在22小时IV注入5-FU(600mg/m2)，每2周重复一次。
·FOLFOX6方案(奥沙利铂、甲酰四氢叶酸、5-FU)·第一天奥沙利铂(85-100mg/m2)进行2小时输注；第一天甲酰四氢叶酸(400mg/m2)进行2小时输注；随后在第一天IV团注负荷剂量的5-FU(400mg/m2)，然后通过携带式泵在46小时IV注入5-FU(2,400-3,000mg/m2)，每2周重复一次。
·FOLFIRI方案(亚叶酸、5-FU、依立替康)·第一天依立替康(180mg/m2)进行2小时输注；第一天甲酰四氢叶酸(400mg/m2)进行2小时输注；随后在第一天IV团注负荷剂量的5-FU(400mg/m2)，然后通过携带式泵在46小时IV注入5-FU(2,400-3,000mg/m2)，每2周重复一次。
·IFL(或Saltz)方案(依立替康、5-FU、甲酰四氢叶酸)·对于6周中的4周，每周IV团注依立替康(125mg/m2)、5-FU(500mg/m2)，以及IV团注甲酰四氢叶酸(20mg/m2)。
可用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氢叶酸的其它方案包括与5-FU和至少一种其它抗癌药物的联合应用，包括，例如，用于治疗胰腺癌的FOLFUGEM 1(甲酰四氢叶酸400mg/m2，联合5-氟尿嘧啶(FU)团注400mg/m2，然后5-FU 2-3g/m2/46小时，及30分钟内吉西他滨1000mg/m2)和FOLFUGEM 2(2小时内甲酰四氢叶酸400mg/m2，随后22小时内5-FU 1000mg/m2，然后吉西他滨800mg/m2(10mg/m2/分钟)，每14天循环一次)(如Andre等人在“Phase II study of leucovorin，5-fluorouracil，and gemcitabine for locally advanced and metastaticpancreatic cancer(FOLFUGEM 2)(适于局部晚期和转移的胰腺癌的甲酰四氢叶酸、5-氟尿嘧啶和吉西他滨的II期研究(FOLFUGEM 2)).Gastroeneterol Clin Biol；2004 28645-650中所公开的，在此引入作为参考，特别引入包括5-FU的癌症治疗方案的公开作为参考)。
在另一实例中，5，10-CH2-THFA可代替还包括5-FU和左旋咪唑的联合治疗中的甲酰四氢叶酸(如Poplin等人在“Phase III SouthwestOncology Group 9415/Intergroup 0153 randomized trial of fluorouracil，leucovorin，and levamisole versus fluorouracil continuous infusion andlevamisole for adjuvant treatment of stage III and high-risk stage II coloncancer(用于III期和高危II期结肠癌的辅助治疗的氟尿嘧啶、甲酰四氢叶酸和左旋咪唑与氟尿嘧啶连续输注和左旋咪唑进行对照的III期Southwest Oncology Group 9415/Intergroup 0153的随机试验).”J.ClinOncol.2005 231819-25中所公开的；在此引入作为参考，特别引入包括5-FU的癌症治疗方案的公开作为参考)。
在另一实例中，5，10-CH2-THFA可代替还包括5-FU和长春瑞滨的联合治疗中的甲酰四氢叶酸(如Yeh等人“Phase II study of weeklyvinorelbine and 24-hr infusion of high-dose 5-fluorouracil plus leucovorinas first-line treatment of advanced breast cancer(作为晚期乳腺癌的一线治疗，每周长春瑞滨和24小时输注高剂量的5-氟尿嘧啶加甲酰四氢叶酸的II期研究).”Br.J.Cancer 2005 921013-8；在此引入作为参考，特别引入包括5-FU的癌症治疗方案的公开作为参考)。
上述实例不应以任何方式理解为对本发明的限制，例如，可对剂量和方案进行改变和优化以最小化对患者的毒性或改善有效性。另外，本发明未描述的许多抗癌药物可与5，10-CH2-THFA和5-FU联合使用。也可用5，10-CH2-THFA代替以下方案中的甲酰四氢叶酸，在该方案中5-FU和甲酰四氢叶酸与多于一种的另外的抗癌药物联合应用。我们也包括将5，10-CH2-THFA用在与下一代形式的5-FU，尤其是口服形式的5-FU(如，希罗达、卡培他滨)和UFT的联合治疗中。
5，10-CH2-THFA的其它用途为与新类型的生物抗肿瘤试剂的联合治疗，如具有抗肿瘤活性的单克隆抗体。可与5，10-CH2-THFA(优选地与5-FU)联合的抗体实例包括抗VEGF抗体(例如，贝伐单抗或“阿瓦斯汀”)和抗EGF受体(例如，艾比特斯、西妥昔单抗、赫赛汀)。如实施例1和实施例2所示，与其它药物组合相比，5-FU/5，10-CH2-THFA/阿瓦斯汀对裸小鼠中结肠直肠癌的联合治疗更能抑制肿瘤生长。
因为本发明公开的5，10-CH2-THFA具有较低毒性特征，本发明也包括5，10-CH2-THFA与通常被认为具有非常高的毒性以致不适于广泛应用的药物联合应用。例如，5-FU/5，10-CH2-THFA/顺铂治疗就是这种组合。顺铂为基于铂的化学治疗剂，其具有高毒性。另外，5，10-CH2-THFA的较低毒性特征可允许增加药物(如5-FU)的浓度或延长服药期。因而这可增加药物有效性。
本发明也包括用5，10-CH2-THFA替换未采用5-FU的疗法中的甲酰四氢叶酸(甲酰四氢叶酸)。例如，根据5，10-CH2-THFA比甲酰四氢叶酸(甲酰四氢叶酸)具有更低的毒性特征和增加的活性，5，10-CH2-THFA可用于甲氨喋呤救援治疗。这种治疗模式目前使用甲酰四氢叶酸。
V.增加包括5-FU的抗癌药物治疗方案的有效性的方法本发明还提供了通过同时以5，10-CH2-THFA给药，来增加包括将5-FU或5-FU的类似物或前药对癌症患者给药的抗癌药物治疗方案的有效性的方法。
在一方面，所述方法包括获得包含5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药的抗癌药物方案，并且将5，10-CH2-THFA加入该药物方案中以增加该抗癌药物方案的有效性。在本发明此方面的优选实施方案中，在甲酰四氢叶酸(亚叶酸，FA)不存在时，以5-FU和5，10-CH2-THFA对患者给药。增加包括以5-FU或其类似物或其前药给药的癌症药物治疗有效性的方法包括在5-FU给药之前、之后或同时，以5，10-CH2-THFA对患者进行给药以减少5-FU的毒性。优选地，在5-FU给药之前进行5，10-CH2-THFA给药。
在相关方面，本发明提供了通过将5，10-CH2-THFA加入对所述患者进行给药的抗癌药物方案中以增加癌症患者的存活能力的方法，所述抗癌药物方案包括5-FU或5-FU的类似物或前药。所述方法包括获得包含5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药的抗癌药物方案，将5，10-CH2-THFA加入该抗癌药物方案中；以及用该改良的抗癌药物方案治疗癌症患者。所述方法包括在5-FU给药之前、之后或同时，以5，10-CH2-THFA对患者进行给药。在本发明此方面的优选实施方案中，在甲酰四氢叶酸(亚叶酸，FA)不存在时，以5-FU和5，10-CH2-THFA对患者给药。
癌症患者可以是患有任何类型癌症的患者。在以5，10-CH2-THFA对接受5-FU的癌症患者进行给药的本发明的一些优选实施方案中，，该患者患有通常用5-FU治疗的肿瘤类型，例如结肠直肠癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌或胃癌。
通过诸如但不限于以下方法确定抗癌药物方案的有效性治疗后的肿瘤大小、肿瘤生长(或收缩)率、癌细胞或标志物的检测、治疗后缓和持续时间以及用该方案进行治疗的癌症患者的存活能力。
癌症治疗和化学治疗领域内的技术人员能够采用已充分建立的用于评估毒性和有效性的方案确定5，10-CH2-THFA和5-FU的最佳剂量和方案。一些用5-FU和5，10-CH2-THFA治疗癌症患者的优选方案采用每m210毫克至1克的5，10-CH2-THFA，优选每m220毫克至500毫克的5，10-CH2-THFA，且更优选每m230毫克至250毫克的5，10-CH2-THFA。例如，5，10-CH2-THFA的优选剂量可为30毫克至约120毫克每m2。上述剂量只是一般性的指导方针，其可根据以下因素来扩展或改变，如癌症类型和级别、患者年龄、健康状况和性别、联合应用中使用的特定药物、给药途径和频率以及采用多药联合的实验和临床发现。
5-FU的剂量可为25毫克至约5克每m2，并优选约50毫克至2.5克每m2，且更优选约100毫克至约1克每m2。例如，5-FU的优选剂量可为250毫克至约700毫克每m2。上述剂量只是一般性的指导方针，其可根据以下因素来扩展或改变，如癌症类型和级别、患者年龄、健康状况和性别、联合应用中使用的特定药物、给药途径和频率以及采用多药联合的实验和临床发现。5-FU可以任何可行的方法给药，包括注射或IV给药。
在一些优选的实施方案中，5-FU的前药或类似物而不是5-FU本身用于联合治疗中。在患者的组织中，5-FU转化为胸苷酸合成酶抑制剂5-氟-2’-脱氧尿苷酸(FdUMP)。在本申请中，“5-FU的前药或类似物”用于指可直接或间接转化为诸如FdUMP的胸苷酸合成酶抑制剂的类似物或前药。可用于本发明所述方法的一种5-FU的前药为N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)。在一种优选的实施方案中，本发明所述方法包括以N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)；5，10-CH2-THFA；和至少一种另外的抗癌药物对癌症患者给药。卡培他滨的剂量可由熟练的临床医师确定并部分依赖于给药的频率。例如，卡培他滨的日剂量可为约500mg至约7500mg每m2，优选为约1000mg至约5000mg每m2，且更优选为约1500mg至约3000mg每m2。可将所述剂量分为每天一至六次(优选两次)给药。上述剂量只是一般性的指导方针，其可根据以下因素来扩展或改变，如癌症类型和级别、患者年龄、健康状况和性别、联合应用中使用的特定药物、给药途径和频率以及采用多药联合的实验和临床发现。卡培他滨可以任何可行的方法给药，包括注射、IV给药或以口服制剂形式给药。
可用于本发明所述方法的类似物组合为称为UFT的以1∶4的比例联合使用的替加氟(TF)和尿嘧啶(U)。在一种优选的实施方案中，本发明所述方法包括以UFT；5，10-CH2-THFA；和至少一种另外的抗癌药物对癌症患者给药。UFT的剂量可由熟练的临床医师确定并部分依赖于给药的频率。例如，UFT的日剂量可为约50mg至约3000mg每m2，优选为约100mg至约2000mg每m2，且更优选为约200mg至约1000mg每m2。包括UFT的抗癌方案也可任选地包括同UFT一起给药的亚叶酸钙。上述剂量只是一般性的指导方针，其可根据以下因素来扩展或改变，如癌症类型和级别、患者年龄、健康状况和性别、联合应用中使用的特定药物、给药途径和频率以及采用多药联合的实验和临床发现。UFT可以任何可行的方法给药，包括注射、IV给药或以口服制剂形式给药。
使用卡培他滨的抗癌药物方案的一些实例描述在Blum JL，等人“Multicenter phase II study of capecitabine in paclitaxel-refractorymetastatic breast cancer(卡培他滨在耐太平洋紫杉醇的转移性乳腺癌中的多中心的II期研究).”J Clin Oncol 1999；17485-93；Hoff等人“Comparison of oral capecitabine versus intravenous fluorouracil plusleucovorin as first-line treatment in 605 patients with metastatic colorectalcancerresults of a randomized phase III study(在患有转移性结肠直肠癌的605名患者的一线治疗中口服的卡培他滨与静脉注射的氟尿嘧啶加甲酰四氢叶酸的比较随机的III期研究结果).”J Clin Oncol2001；19(8)2282-92；和Van Cutsem E等人“Oral capecitabine comparedwith intravenous fluorouracil plus leucovorin in patients with metastaticcolorectal cancerresults of a large phase III study(在患有转移性结肠直肠癌的患者中口服的卡培他滨与静脉注射的氟尿嘧啶加甲酰四氢叶酸的比较大规模的III期研究结果).”J Clin Oncol 2001；19(21)4097-106中进行描述，在此将其全部引入作为参考，特别引入关于采用卡培他滨的化学治疗方案的公开。本发明包括在包括卡培他滨的方案中以5，10-CH2-THFA给药以便减少卡培他滨治疗的毒性。
例如，一种方案包括每天两次给药卡培他滨(1000-1250mg每m2)，持续两周，随后再休息一周时间，然后再进一步进行三周循环。可将5，10-CH2-THFA加入诸如此类的方案中，并且所述方案可根据关于毒性和有效性的临床试验最优化。
在此方面的其它优选实施方案中，本发明包括通过同时以5，10-CH2-THFA给药来增加以下抗癌治疗的有效性的方法，所述抗癌治疗包括将5-FU或5-FU的类似物和前药和至少一种另外的抗癌药物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)对癌症患者给药。所述方法包括获得包括5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药和至少一种另外的抗癌药物的抗癌药物方案，然后将5，10-亚甲基-四氢叶酸加入该抗癌药物方案中以得到具有增加的有效性的抗癌药物方案。
增加包括以5-FU或其类似物或其前药和另外抗癌药物给药的癌症药物治疗的有效性的方法，包括在5-FU(或其类似物或其前药)给药之前、之后或同时，以5，10-5，10-CH2-THFA对患者进行给药。优选地，在5-FU给药之前进行5，10-CH2-THFA给药。可在5-FU给药之前、之后或同时，进行另外抗癌药物给药。
在相关方面，本发明提供了通过将5，10-CH2-THFA加入对患者进行给药的抗癌药物方案中以增加癌症患者的存活能力的方法，所述抗癌药物方案包括5-FU或5-FU的类似物或前药和至少一种另外的抗癌药物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)。所述方法包括获得包含5-FU或其类似物或其前药和至少一种另外抗癌药物的抗癌药物方案；将5，10-CH2-THFA加入该抗癌药物方案中；以及用该改进的抗癌药物方案治疗癌症患者。所述方法包括在5-FU给药之前、之后或同时，以5，10-CH2-THFA对患者进行给药。在本发明此方面的优选实施方案中，在甲酰四氢叶酸(亚叶酸，FA)不存在时，以5-FU和5，10-CH2-THFA对患者给药。可在5-FU给药之前、之后和同时，以另外的抗癌药物进行给药。
在本发明所述多药方案中使用的一种或多种另外的抗癌药物的剂量也可通过采用逐步增加剂量和监测毒性和有效性的研究来确定。对于已独立地用于化学治疗方案中的联合治疗来说，在确定欲用于该联合治疗中的抗癌药物的剂量时，执业医生可考虑在已建立的化学治疗方案中使用的药物剂量。
将5-FU与一种或多种抗癌药物(其不同于胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)联合的多种化学治疗方案在癌症治疗领域内是众所周知的。例如，包括5-FU与一种或多种另外的药物(其不同于叶酸辅因子)的组合的抗癌方案包括但不限于包括环磷酰胺、表柔比星和氟尿嘧啶的用于乳腺癌的治疗(参见，例如，Levine MN，Bramwell VH，Pritchard KI等人“Randomized trial of intensive cyclophosphamide，epirubicin，andfluorouracil chemotherapy compared with cyclophosphamide，methotrexate，and fluorouracil in premenopausal women withnode-positive breast cancer(在患有淋巴结阳性乳腺癌的绝经前妇女中，环磷酰胺、表柔比星和氟尿嘧啶的加强型化学治疗与环磷酰胺、甲氨喋呤和氟尿嘧啶进行对照的随机试验).”J Clin Oncol 1998；16(8)2651-8；在此引入作为参考，特别是引入采用5-FU的抗癌方案的公开作为参考)。包括5-FU与一种或多种另外的药物(其不同于叶酸辅因子)的组合的抗癌方案也包括包含环磷酰胺、多柔比星和氟尿嘧啶的用于乳腺癌的治疗(参见，例如，Bennett JM，Muss HB，Doroshaw JH，等人“A randomized multicenter trial comparing mitoxantrone，cyclophophamide，and fluorouracil with doxorubicin，cyclophosphamide，and fluorouracil in the therapy of metastatic breast cancer(在转移性乳腺癌的治疗中，米托蒽醌、环磷酰胺和氟尿嘧啶与多柔比星、环磷酰胺和氟尿嘧啶进行对照的随机多中心试验).”J Clin Oncol1988；6(10)1611-20；在此引入作为参考，特别是引入包括5-FU的抗癌方案的公开作为参考)。5，10-CH2-THFA的加入可增加这些化学治疗方案的有效性并改进用该改良的方法进行治疗的患者的生存能力。
可加入5，10-CH2-THFA以增加治疗有效性的抗癌方案的另一实例为包括采用丝裂霉素C和氟尿嘧啶的用于治疗头颈癌的方案，如KeaneTJ，Cummings BJ，O′Sullivan B，Payne D，Rawlinson E，MacKenzie R，Danjoux C，Hodson I在“A randomized trial of radiation therapycompared to split course radiation therapy combined with mitomycin Cand 5-fluorouracil as initial treatment for advanced laryngeal andhypopharyngeal squamous carcinoma(作为用于晚期喉及喉咽部鳞状细胞癌的初始治疗，放射治疗与联合丝裂霉素C和5-氟尿嘧啶的分段放射治疗进行对照的随机试验).”IJ Radiation Oncology Biol Phys，199325(4)613-8中所公开的，在此引入作为参考，特别是引入与采用5-FU的抗癌方案相关的公开作为参考。在此情况下，所述抗癌治疗方案除化学治疗之外还包括放射治疗。
可加入5，10-CH2-THFA以增加治疗有效性的其它类型方案还为将5-FU与丝裂霉素C联合的抗癌方案，例如在Keane TJ，Cummings BJ，O’Sullivan B，Payne D，Rawlinson E，MacKenzie R，Danjoux C，Hodson I.“A randomized trial of radiation therapy compared to split courseradiation therapy combined with mitomycin C and 5-fluorouracil as initialtreatment for advanced laryngeal and hypopharyngeal squamouscarcinoma(作为用于晚期喉及喉咽部鳞状细胞癌的初始治疗，放射治疗与联合丝裂霉素C和5-氟尿嘧啶的分段放射治疗进行对照的随机试验).”IJ Radiation Oncology Biol Phys，199325(4)中所公开的，在此引入作为参考，特别是引入与包括5-FU的抗癌方案相关的公开作为参考，以及将卡铂与5-FU联合应用的其它方案，如Calais G，Alfonsi M，Bardet E等人在“Randomized trial of radiation therapy versusconcomitant chemotherapy and radiation therapy for advanced-stageoropharynx carcinoma(作为用于晚期口咽癌的治疗，放射治疗与化学治疗和放射治疗共存进行对比的随机试验).”J Natl Cancer Inst 1999；912081-6中所公开的，在此引入作为参考，特别是引入与采用5-FU的抗癌方案相关的公开作为参考。在这些治疗中，抗癌治疗方案除化学治疗之外还包括放射治疗。
本发明包括通过同时以5，10-CH2-THFA给药来增加包括5-FU的类似物或前药和另外抗癌药物(其不同于胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)的方案有效性的方法。包括卡培他滨和多烯紫杉醇的抗癌方案的实例由O’Shaughnessy J，等人在Superior survival with capecitabine plusdocetaxel combination therapy in anthracycline pre-treated patients withadvanced breast cancerphase III trial results(在用蒽环类化合物预处理的患有晚期乳腺癌的患者中，用卡培他滨加多烯紫杉醇的联合治疗进行治疗的患者具有出众的存活能力III期试验结果).J Clin Oncol 2002；202812-23中所公开，在此引入作为参考，特别是引入采用卡培他滨的抗癌方案的公开作为参考。也可将5，10-CH2-THFA加入包括替加氟-尿嘧啶(UFT)与另外的癌症药物联合的方案中，例如包括奥沙利铂的方案中，如Feliu J.等人在“Phase II study of UFT and oxaliplatin infirst-line treatment of advanced colorectal cancer(UFT和奥沙利铂在晚期结肠直肠癌的一线治疗中的II期研究).”Br.J.Cancer 2004 911758-62中所公开的，在此引入作为参考，特别是引入采用UFT的抗癌方案的公开作为参考。
上述参考方案只是实例，且不应以任何方式理解为对本发明的限制。可加入5，10-CH2-THFA以增加治疗有效性的抗癌方案可从任何公认的来源中获得，包括科学和医学文献，以及医院、癌症中心和临床资源。在本发明的范围内，在通过5，10-CH2-THFA给药以增加方案的有效性方面，可对5-FU、5，10-CH2-THFA两者之一或者两者以及相关的一种或多种另外的抗癌药物的剂量和时间方案进行修改。这种修改可由监测患者对治疗反应的经训练的临床医师根据公认的医学实践进行。
在一些优选实施方案中，本发明包括增加包括5-FU和胸苷酸合成酶的叶酸辅因子的抗癌药物方案的有效性的方法，其中用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氢叶酸作为胸苷酸合成酶的辅因子。本发明包括增加抗癌药物方案的有效性的方法，其中所述抗癌药物方案包括5-FU和胸苷酸合成酶的叶酸辅因子，通过用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氢叶酸作为胸苷酸合成酶的辅因子而增加有效性。
在本发明此方面的优选实施方案中，所述方法包括获得包含5-FU或其类似物或其前药、甲酰四氢叶酸和另外抗癌药物的抗癌药物方案；并用5，10-CH2-THFA代替该药物方案中的甲酰四氢叶酸以获得具有改进的有效性的药物方案。
在相关方面，本发明提供了通过用5，10-5，10-CH2-THFA代替包括5-FU或5-FU的类似物或前药的抗癌药物方案中的甲酰四氢叶酸对患者给药，以增加癌症患者的存活能力的方法。所述方法包括获得包含5-FU或其类似物或其前药和甲酰四氢叶酸的抗癌药物方案，用5，10-CH2-THFA代替该抗癌药物方案中的甲酰四氢叶酸；以及用该改良的抗癌药物方案治疗癌症患者。所述方法包括在5-FU给药之前、之后或同时，以5，10-CH2-THFA对患者给药。
在此方面的一些优选实施方案中，本发明包括增加以下抗癌药物方案的有效性的方法，所述抗癌药物方案包括诸如但不限于卡培他滨或UFT的5-FU类似物或前药和甲酰四氢叶酸，其中通过用5，10-CH2-THFA代替该方案中的甲酰四氢叶酸增加该方案的有效性。
本发明也提供了通过用5，10-5，10-CH2-THFA代替抗癌药物方案中的甲酰四氢叶酸以增加癌症患者的存活能力的方法，对所述患者进行给药的所述抗癌药物方案包括5-FU的类似物或前药，例如但不限于卡培他滨或UFT。
在此方面的一些优选实施方案中，本发明包括通过用5，10-5，10-CH2-THFA代替药物方案中的甲酰四氢叶酸以增加抗癌治疗对患者的有效性的方法，所述抗癌治疗包括5-FU或5-FU的类似物或前药、甲酰四氢叶酸和至少一种另外的抗癌药物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)。所述方法包括获得包含5-FU或其类似物或其前药、甲酰四氢叶酸和至少一种另外的抗癌药物的抗癌药物方案；用5，10-CH2-THFA代替该抗癌药物方案中的甲酰四氢叶酸。
在相关方面，本发明提供了通过用5，10-5，10-CH2-THFA代替抗癌药物方案中的甲酰四氢叶酸以增加癌症患者的存活能力的方法，对所述患者进行给药的所述抗癌药物方案包括5-FU或5-FU的类似物或前药和至少一种另外的抗癌药物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)。所述方法包括获得包含5-FU或其类似物或其前药、甲酰四氢叶酸和至少一种另外的抗癌药物的抗癌药物方案；用5，10-CH2-THFA代替该抗癌药物方案中的甲酰四氢叶酸；以及用该改良的抗癌药物方案治疗癌症患者。所述方法包括在5-FU给药之前、之后或同时，以5，10-CH2-THFA对患者进行给药。可在5-FU给药之前、之后或同时，以另外抗癌药物给药。
因为与甲酰四氢叶酸相比，5，10-CH2-THFA具有抗肿瘤活性和减少的全身毒性，并且因为甲酰四氢叶酸和5，10-CH2-THFA具有相似的化学和代谢途径，所以发明人考虑在目前的一系列化学治疗方案内，可用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氢叶酸。目前通常用于与5-FU加甲酰四氢叶酸联合的药物的非限制性实例为依立替康(GPT-11)、奥沙利铂、吉西他滨、左旋咪唑、丝裂霉素C和长春瑞滨。本发明包括用5，10-CH2-THFA代替这些方案中的甲酰四氢叶酸的治疗。用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氢叶酸可提供增强的治疗作用及减少的毒性。作为非限制性实例，可用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氢叶酸的目前的联合用药方案包括
·AIO方案(亚叶酸、5-FU、依立替康)·第一天依立替康(100mg/m2)进行2小时输注；第一天甲酰四氢叶酸(500mg/m2)进行2小时输注；随后通过携带式泵在24小时静脉(IV)团注5-FU(2,000mg/m2)24小时，连续四周，每52周重复一次。
·Douillard方案(亚叶酸、5-FU、依立替康)·第一天依立替康(180mg/m2)进行2小时输注；第一天和第二天甲酰四氢叶酸(200mg/m2)进行2小时输注；随后IV团注负荷剂量的5-FU(400mg/m2)，然后在第一天和第二天通过携带式泵在22小时IV注入5-FU(600mg/m2)，每2周重复一次。
·FOLFOX4方案(奥沙利铂、甲酰四氢叶酸、5-FU)·第一天奥沙利铂(85mg/m2)进行2小时输注；第一天和第二天甲酰四氢叶酸(200mg/m2)进行2小时输注；随后IV团注负荷剂量的5-FU(400mg/m2)，然后在第一天和第二天通过携带式泵在22小时IV注入5-FU(600mg/m2)，每2周重复一次。
·FOLFOX6方案(奥沙利铂、甲酰四氢叶酸、5-FU)·第一天奥沙利铂(85-100mg/m2)进行2小时输注；第一天甲酰四氢叶酸(400mg/m2)进行2小时输注；随后在第一天IV团注负荷剂量的5-FU(400mg/m2)，然后通过携带式泵在46小时IV注入5-FU(2,400-3,000mg/m2)，每2周重复一次。
·FOLFIRI方案(亚叶酸、5-FU、依立替康)·第一天依立替康(180mg/m2)进行2小时输注；第一天甲酰四氢叶酸(400mg/m2)进行2小时输注；随后在第一天IV团注负荷剂量的5-FU(400mg/m2)，然后通过携带式泵在46小时IV注入5-FU(2,400-3,000mg/m2)，每2周重复一次。
·IFL(或Saltz)方案(依立替康、5-FU、甲酰四氢叶酸)·对于6周中的4周，每周IV团注依立替康(125mg/m2)、5-FU(500mg/m2)，以及IV团注甲酰四氢叶酸(20mg/m2)。
可用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氢叶酸的其它方案包括与5-FU和至少一种其它抗癌药物的联合应用，包括，例如，用于治疗胰腺癌的FOLFUGEM 1(甲酰四氢叶酸400mg/m2，联合5-氟尿嘧啶(FU)团注400mg/m2，然后5-FU 2-3g/m2/46小时，及30分钟内吉西他滨1000mg/m2和FOLFUGEM 2(2小时内甲酰四氢叶酸400mg/m2，随后22小时内5-FU 1000mg/m2，然后吉西他滨800mg/m2(10mg/m2/分钟)，每14天循环一次)(如Andre等人在“Phase II study of leucovorin，5-fluorouracil，and gemcitabine for locally advanced and metastaticpancreatic cancer(FOLFUGEM 2)(适于局部晚期和转移的胰腺癌的甲酰四氢叶酸、5-氟尿嘧啶和吉西他滨的II期研究(FOLFUGEM 2)).Gastroeneterol Clin Biol；2004 28645-650中所公开的，在此引入作为参考，特别引入包括5-FU的癌症治疗方案的公开作为参考)。
在另一实例中，5，10-CH2-THFA可代替还包括5-FU和左旋咪唑的联合治疗中的甲酰四氢叶酸(如Poplin等人在“Phase III SouthwestOncology Group 9415/Intergroup 0153 randomized trial of fluorouracil，leucovorin，and levamisole versus fluorouracil continuous infusion andlevamisole for adjuvant treatment of stage III and high-risk stage II coloncancer(在用于III期和高危II期结肠癌的辅助治疗中，氟尿嘧啶、甲酰四氢叶酸和左旋咪唑与氟尿嘧啶连续输注和左旋咪唑进行对照的III期Southwest Oncology Group 9415/Intergroup 0153的随机试验).”J.Clin Oncol.2005 231819-25中所公开的；在此引入作为参考，特别引入采用5-FU的癌症治疗方案的公开作为参考)。
在另一实例中，5，10-CH2-THFA可代替还包括5-FU和长春瑞滨的联合治疗中的甲酰四氢叶酸(如Yeh等人“Phase II study of weeklyvinorelbine and 24-hr infusion of high-dose 5-fluorouracil plus leucovorinas first-line treatment of advanced breast cancer(作为晚期乳腺癌的一线治疗，每周长春瑞滨和24小时输注高剂量的5-氟尿嘧啶加甲酰四氢叶酸的II期研究).”Br.J.Cancer 2005 921013-8；在此引入作为参考，特别引入包括5-FU的癌症治疗方案的公开作为参考)。
上述实例不应以任何方式理解为对本发明的限制，例如，可对剂量和方案进行改变和优化以最小化对患者的毒性或改善有效性。另外，本发明未描述的许多抗癌药物可与5，10-CH2-THFA和5-FU联合使用。也可用5，10-CH2-THFA代替以下方案中的甲酰四氢叶酸，在该方案中5-FU和甲酰四氢叶酸与多于一种的另外的抗癌药物联合应用。我们也建议5，10-CH2-THFA与下一代形式的5-FU，尤其是口服形式的5-FU(如，希罗达、卡培他滨)和UFT用于联合治疗中。
5，10-CH2-THFA的其它用途为与新类型的生物抗肿瘤试剂的联合治疗，如具有抗肿瘤活性的单克隆抗体。可与5，10-CH2-THFA(优选地与5-FU)联合的抗体实例包括抗VEGF抗体(例如，阿瓦斯汀或贝伐单抗)和抗EGF受体(例如，艾比特斯、西妥昔单抗、赫赛汀)。如实施例1和实施例2所示，与其它药物组合相比，5-FU/5，10-CH2-THFA/阿瓦斯汀对裸小鼠中结肠直肠癌的联合治疗更能抑制肿瘤生长。
在将5，10-CH2-THFA加入包括5-FU(或其类似物或其前药)和另外的抗癌药物的治疗方案中的方法的其它方面，发明人考虑相对于在包括5-FU的方案中另外的抗癌药物通常使用的剂量，可将一种或多种另外抗癌药物中的至少一种抗癌药物以增加的剂量给药。因此，本发明包括通过将5，10-CH2-THFA加入药物方案中并增加一种或多种另外抗癌药物中的至少一种抗癌药物的剂量来增加抗癌药物方案的有效性，所述抗癌药物方案包括5-FU和至少一种另外的抗癌药物(其不同于5-FU，或胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)。所述方法包括获得包括5-FU或5-FU的类似物或前药和至少一种另外的抗癌药物(其不同于5-FU或5-FU的类似物或前药或胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)的抗癌药物方案；将5，10-CH2-THFA加入该抗癌药物方案中；以及增加在该抗癌药物方案中的一种或多种另外抗癌药物的剂量。在此方面，将5，10-CH2-THFA加入该抗癌方案中且同时增加另外抗癌药物的剂量可增加治疗的有效性，且可能不增加毒性。
在相关方面，本发明包括通过将5，10-CH2-THFA加入抗癌方案中并增加在该方案中的一种或多种另外抗癌药物中的至少一种抗癌药物的剂量，以增加癌症患者的存活能力的方法，所述抗癌方案包括5-FU和一种或多种另外的抗癌药物(其不同于5-FU或5-FU的类似物或前药或胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)将5-FU与一种或多种抗癌药物(其不同于胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)联合的多种化学治疗方案在癌症治疗领域内是众所周知的。例如，本申请中引用的方案包括将5-FU与环磷酰胺、表柔比星、docorubicin、卡铂或丝裂霉素C联合的方案。这些实例不以任何方式对本发明的范围进行限制。在癌症治疗领域内公知的或在将来使用的、将5-FU与这些或其它抗癌药物联合应用的其它方案也可通过包含5，10-CH2-THFA并增加一种或多种另外抗癌药物中的至少一种抗癌药物的剂量来进行修改。
本发明包括通过同时以5，10-CH2-THFA给药增加以下方案的有效性的方法，所述方案包括5-FU和至少一种另外的抗癌药物(其不同于胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)。包括卡培他滨和多烯紫杉醇的抗癌方案和包括UFT和奥沙利铂的抗癌方案作为方案的非限制性实例在此引用，该方案可通过包含5，10-CH2-THFA并增加另外抗癌药物中的剂量来进行修改。
上述参考方案只是实例，且不应以任何方式理解为对本发明的限制。可加入5，10-CH2-THFA的抗癌方案可从任何公知的来源中获得，包括科学和医学文献，以及医院、癌症中心和临床资源。可根据监测毒性和有效性的已建立的方案实施剂量递增研究。在优化抗癌治疗方案中，对5-FU、5，10-CH2-THFA两者之一或两者以及一种或多种另外抗癌药物的剂量和时间表进行修改也是在本发明的范围内。这些修改可由监测患者对治疗反应的有经验的临床医师根据公认的医学实践来进行。
在另一相关方面，本发明提供了通过用5，10-CH2-THFA替换以下方案中的甲酰四氢叶酸并增加至少一种另外抗癌药物的剂量，以增加抗癌药物方案的有效性的方法，所述抗癌药物方案包括5-FU或5-FU的类似物或前药、甲酰四氢叶酸和至少一种另外的抗癌药物。所述方法包括获得包括5-FU或5-FU的类似物或前药、甲酰四氢叶酸和至少一种另外的抗癌药物(其不同于5-FU或5-FU的类似物或前药或胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)的抗癌药物方案；用5，10-CH2-THFA代替该抗癌药物方案中的甲酰四氢叶酸；并增加该抗癌药物方案中的至少一种另外抗癌药物的剂量。在此方面，用5，10-CH2-THFA代替该方案中的甲酰四氢叶酸且同时增加该方案中使用的另外抗癌药物的剂量可增加治疗的有效性，且可能不增加毒性。
在相关方面，本发明包括通过用5，10-CH2-THFA代替抗癌方案中的甲酰四氢叶酸并增加在该方案中使用的一种或多种另外抗癌药物中的至少一种抗癌药物的剂量，以增加癌症患者的存活能力的方法，所述抗癌方案包括5-FU和一种或多种另外的抗癌药物(其不同于5-FU或5-FU的类似物或前药或胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)将5-FU和甲酰四氢叶酸与一种或多种抗癌药物(其不同于胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)联合的多种化学治疗方案在癌症治疗领域内是众所周知的。例如，本申请中引用的方案包括将5-FU与吉西他滨、长春瑞滨、左旋咪唑、依立替康、奥沙利铂或丝裂霉素C联合的方案。这些实例不以任何方式对本发明的范围进行限制。在癌症治疗领域内公知的或在将来使用的、将5-FU与这些或其它抗癌药物联合应用的其它方案也可通过用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氢叶酸并增加一种或多种另外抗癌药物中的至少一种抗癌药物的剂量来进行修改。
本发明包括通过用5，10-CH2-THFA进行代替并增加另外抗癌药物的剂量，以增加方案的有效性的方法，所述方案包括5-FU的类似物或前药、甲酰四氢叶酸和至少一种另外的抗癌药物(其不同于胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)。
上述参考方案只是实例，且不应以任何方式理解为对本发明的限制。包含多种抗癌药物的、可用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氢叶酸的抗癌方案可从任何公知的来源中获得，包括科学和医学文献以及医院、癌症中心和临床资源。可根据监测毒性和有效性的已建立的方案实施剂量递增研究。在优化抗癌治疗方案中，对5-FU、5，10-CH2-THFA两者之一或两者以及一种或多种另外抗癌药物的剂量和时间表进行修改也是在本发明的范围内。这些修改可由监测患者对治疗反应的有经验的临床医师根据公认的医学实践来进行。
发明人也关注当将5，10-CH2-THFA加入药物方案时，相对于通常用于联合治疗中的剂量，可将5-FU以增加的剂量给药。因此，本发明包括通过增加在治疗癌症的药物方案中使用的5-FU剂量来增加抗癌药物方案的有效性的方法，所述抗癌药物方案包括5-FU(或其类似物或其前药)和另外的抗癌药物(其不同于胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)，所述方法通过将5，10-CH2-THFA加入该药物方案中而实现。所述方法包括获得包括5-FU或5-FU的类似物或前药和至少一种另外的抗癌药物(其不同于胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)的抗癌药物方案；将5，10-CH2-THFA加入该抗癌药物方案中；以及增加该抗癌药物方案中的5-FU剂量。在此方面，将5，10-CH2-THFA加入所述抗癌方案中且同时增加该方案中使用的5-FU剂量可增加治疗的有效性，且可能不增加毒性。
在另一相关方面，本发明提供了通过用5，10-CH2-THFA替换甲酰四氢叶酸增加抗癌药物方案中的5-FU剂量的方法，所述抗癌药物方案包括5-FU或5-FU的类似物或前药、甲酰四氢叶酸和另外的抗癌药物。所述方法包括获得包括5-FU或5-FU的类似物或前药、甲酰四氢叶酸和至少一种另外的抗癌药物(其不同于胸苷酸合成酶的叶酸辅因子)；用5，10-CH2-THFA代替该抗癌药物方案中的甲酰四氢叶酸；以及增加该抗癌药物方案中的5-FU(或其类似物或其前药)剂量。在此方面，用5，10-CH2-THFA代替所述抗癌方案中的甲酰四氢叶酸且同时增加该方案中使用的5-FU剂量可增加治疗的有效性，且可能不增加毒性。
实施例实施例1关于使用5-FU、5，10-CH2-THFA、甲酰四氢叶酸、抗VEGF和奥沙利铂治疗结肠直肠肿瘤HT-29的裸小鼠研究材料和方法小鼠裸(nu/nu)小鼠得自Charles River实验室。在所有的研究开始时，小鼠均为6-8周龄。将小鼠饲养在LAB国际动物饲养所(San Diego，CA)中的隔离的、高效微粒空气过滤器(hepa-filter)通风的笼子内，每只笼子中饲养4只小鼠。
细胞系人结肠癌HT-29得自美国组织培养物收藏所(American TissueCulture Collection)(ATCC)。将细胞系维持在37℃，5％CO2增湿的培养箱内的含10％胎牛血清(FBS)、2mM 1-谷氨酰胺、100单位/ml青霉素和100微克/ml链霉素的DMEM(DMEM-10)中。在体内实验前，细胞系每2-3天进行传代。
药物5-氟尿嘧啶(5-FU)得自Calbiochem。甲酰四氢叶酸(leucovorin)和奥沙利铂得自Sigma-Aldrich。5，10-CH2-THFA由Eprova AG生产。针对血管内皮生长因子的单克隆抗体(抗VEGF)得自R&D Systems(识别人VEGF异体形式(isoform)165的克隆26530)或Genentech(阿瓦斯汀)。
HT-29结肠直肠癌裸小鼠研究#1以如下方式制备注射用的HT-29细胞。用PBS洗涤铺满组织培养瓶的HT-29细胞一次，随后用胰蛋白酶进行细胞分离。分离的细胞然后在DMEM-10中洗涤一次，接着用PBS洗涤一次。最后，以2×107细胞/ml将细胞重悬于PBS中。采用28规格的胰岛素针/注射器，以100微升(2×106细胞)HT-29细胞对裸小鼠(nu/nu)进行皮下接种。当肿瘤体积达到100至300mm3时，通过腹膜内注射给药，用5-FU、5，10-CH2-THFA、甲酰四氢叶酸、奥沙利铂和抗-VEGF(R&D Systems抗体)的多种组合对小鼠进行治疗。除了抗-VEGF和奥沙利铂以外，所有药物均每日给药(0.6mg/小鼠/药物)，连续给药五天。抗-VEGF在第五天时给药一次(100微克/小鼠)。奥沙利铂在第一天时给药一次(0.3mg/小鼠)。另外，在5-FU注射前20分钟，注射5，10-CH2-THFA或甲酰四氢叶酸。每2至3天，使用测径器测量肿瘤大小。使用以下公式计算肿瘤体积肿瘤体积＝(长×宽2)/2。当肿瘤直径＞2cm或者肿瘤溃疡时，使用CO2对小鼠进行无痛处死，接着进行颈脱位。
数据分析采用GraphPad Prism科学软件对肿瘤和血的数据进行统计学分析。进行Bonferonni′s T检验比较多组之间的肿瘤大小。Logrank检验用于测定组存活曲线之间的统计学差异。在一些情况中，其中只有两组进行比较，Student′s T检验用于测定组测量结果之间的显著性。
结果用如表2的药物组合治疗裸小鼠。在此研究中，我们希望检验5-FU/5，10-CH2-THFA与奥沙利铂或抗-VEGF(得自R&D Systems)联合治疗是否可以比其它药物组合更能够抑制结肠直肠肿瘤生长。药物浓度和治疗天数已在“材料和方法”部分中描述。治疗之后，每2-3天测量一次肿瘤大小并计算肿瘤体积。然后以肿瘤体积对从治疗开始时的时间进行绘图(图1及2)。为了简化该图，我们将分析分为含有抗-VEGF数据的图及另一副含有奥沙利铂数据的图。计算每个治疗组的最佳拟合曲线并绘在这些图中。如图1可见，以5-FU/5，10-CH2-THFA/抗-VEGF治疗的小鼠具有最慢的肿瘤生长曲线，接下来是以5-FU/5，10-CH2-THFA或以5-FU/抗VEGF治疗的小鼠。
表2小鼠治疗组
我们还分析了在治疗之后平均肿瘤体积之间的差异。比较了抗-VEGF组数据的多种治疗组合(图3)，我们观察到用5-FU/5，10-CH2-THFA/抗-VEGF治疗的小鼠的平均肿瘤体积(478.6±102.7，平均值±SEM，n＝7)小于用5-FU(752.5±104.2，n＝8)、5-FU/甲酰四氢叶酸(707.5±93.6，n＝8)、5-FU/5，10-CH2-THFA(522.5±78.2，n＝8)及用5-FU/抗-VEGF(502.5±64.1，n＝8)治疗的小鼠。用奥沙利铂治疗的小鼠具有最大的肿瘤(肿瘤体积为875.0±90.6，平均值±SEM，n＝8)(图4)，这表明HT-29肿瘤对此药物无反应(见Plasencia等人(2002)American Society for Clinical Oncology Annual MeetingAbstract No.2188.)。当与在任何抗-VEGF组合中具有最小肿瘤大小的用5-FU/5，10-CH2-THFA/抗-VEGF三联组合治疗的小鼠(图3)相比，HT-29肿瘤对奥沙利铂的抗药性可能解释了在接受5FU/5，10-CH2-THFA/奥沙利铂(735.0±80.3，n＝8)(图4)三联药物组合的治疗组中，缺少等效的肿瘤抑制作用。
还计算了所有治疗组的小鼠存活曲线。当出现明显的全身毒性、肿瘤溃疡，或当肿瘤直径＞2cm时，小鼠被无痛处死。当研究期(42天)结束以后，75％的用5-FU/5，10-CH2-THFA治疗的小鼠仍然存活(图5)。此存活期明显比仅用5-FU治疗的小鼠(25％，p＜0.05，Logrank检验)的存活期长。除了用5-FU/5，10-CH2-THFA治疗的小鼠之外，用5-FU/5，10-CH2-THFA/抗-VEGF治疗的小鼠(57％)比所有其它治疗组的小鼠存活时间都更长。用5-FU/5，10-CH2-THFA/奥沙利铂治疗的小鼠(25％)(图6)与其它治疗组相比缺乏保护，这最可能归因于HT-29肿瘤对奥沙利铂有明显的耐药性(图3)。对于奥沙利铂治疗亚组分析，5-FU/5，10-CH2-THFA治疗组提供了最大的存活益处。
实施例2关于采用5-FU、5，10-CH2-THFA，FA和抗VEGF治疗结肠直肠肿瘤HT-29的裸小鼠研究材料和方法小鼠裸(nu/nu)小鼠得自Charles River实验室。在所有的研究开始时，小鼠均为6-8周龄。将小鼠饲养在LAB国际的动物饲养所(San Diego，CA)中的隔离的、高效微粒空气过滤器通风的笼子内，每只笼子中饲养4只小鼠。
细胞系人结肠癌HT-29得自美国组织培养物收藏所(ATCC)。将细胞系维持在37℃，5％CO2增湿的培养箱内的含10％胎牛血清(FBS)、2mM 1-谷氨酰胺、100单位/ml青霉素和100微克/ml链霉素的DMEM(DMEM-10)中。在体内实验前，细胞系每2-3天进行传代。
药物5-氟尿嘧啶(5-FU)得自Calbiochem。甲酰四氢叶酸(leucovorin)和奥沙利铂得自Sigma-Aldrich。5，10-CH2-THFA由Eprova AG生产。对血管内皮生长因子的单克隆抗体(抗VEGF)得自R&D Systems(识别人VEGF异体形式165的克隆26530)或Genentech(阿瓦斯汀)。
HT-29结肠直肠癌裸小鼠研究#2以如下方式制备注射用的HT-29细胞。用PBS洗涤铺满组织培养瓶的HT-29细胞一次，随后用胰蛋白酶进行细胞分离。然后分离的细胞在DMEM-10中洗涤一次，接着用PBS洗涤一次。最后，以1×107细胞/ml将细胞重新混悬于PBS中。采用28规格的胰岛素针/注射器，以100微升(106细胞)HT-29细胞对裸小鼠(nu/nu)进行皮下接种。当肿瘤体积达到100至300mm3时，通过腹膜内注射给药，用5-FU、5，10-CH2-THFA、甲酰四氢叶酸和抗-VEGF(Genentech’s阿瓦斯汀抗体)的多种组合对小鼠进行治疗。除了抗-VEGF在第一天和第七天给药两次(100微克/小鼠)以外，所有药物均每日给药(0.6mg/小鼠/药物)，连续给药七天。另外，在5-FU注射前20分钟，注射5，10-CH2-THFA或甲酰四氢叶酸。每2至3天，使用测径器测量肿瘤的大小。使用以下公式计算肿瘤体积肿瘤体积＝(长×宽2)/2。当肿瘤直径＞2cm或者肿瘤溃疡时，使用CO2对小鼠进行无痛处死，接着进行颈脱位。
数据分析采用GraphPad Prism科学软件对肿瘤和血的数据进行统计学分析。进行Bonferonni’s T检验用于比较多组之间的肿瘤大小。Logrank检验用于测定组存活曲线之间的统计学差异。在一些情况中，其中只有两组进行比较，Student’s T检验用于测定组测量结果之间的显著性。
结果根据上述第一次裸小鼠研究中获得的试验结果，我们重复了另一次HT-29裸小鼠研究，在研究设计上进行了一些修改。修改包括更大的组规模，用Genentech’s的抗-VEGF阿瓦斯汀抗体代替了R&DSystem的抗体，排除奥沙利铂，增加治疗天数，以及增加抗-VRGF抗体的剂量数。用如表3所述的药物组合治疗裸小鼠。在此次研究中，我们想检验5-FU/5，10-CH2-THFA与抗-VEGF抗体阿瓦斯汀的联合治疗是否比其它药物组合更能抑制结肠直肠肿瘤生长。药物浓度和治疗天数已在“材料和方法”部分叙述。治疗之后，每2-3天测量一次肿瘤大小并计算肿瘤体积。然后以肿瘤体积对从治疗开始时的时间进行绘图(图7)。计算每个治疗组的最佳拟合曲线并绘在此图中。根据最佳拟合曲线分析，计算每组的平均倍增时间(表4)。与所有其它组相比，用5-FU/5，10CH2-THFA/阿瓦斯汀的组合治疗的小鼠表现出最慢的生长动力学(倍增时间＝9.9天)。这些结果与先前描述的第一次裸小鼠肿瘤研究中得到的结果相一致。
表3小鼠治疗组
表4肿瘤倍增时间
我们还分析了在治疗开始后19天时确定的平均肿瘤体积之间的差异。平均肿瘤体积±SEM绘于图8中。我们观察到用5-FU/5，10-CH2-THFA/阿瓦斯汀治疗的小鼠的平均肿瘤体积(94.0±10.2，平均值±SEM，n＝12)明显小于(p＜0.05，Bonferonni’s T检验)用5-FU(368.5±63.7，n＝10)、5-FU/甲酰四氢叶酸(262.0±36.5，n＝11)、5-FU/5，10-CH2-THFA(225.4±32.0，n＝12)、5-FU/阿瓦斯汀(225.5±28.8，n＝12)治疗的小鼠，但并不明显小于用5-FU/甲酰四氢叶酸/阿瓦斯汀(140.8±20.3，n＝12)治疗的小鼠。相反，5-FU/甲酰四氢叶酸/阿瓦斯汀治疗的小鼠的平均肿瘤体积只明显小于5-FU治疗的小鼠的肿瘤体积，而并不明显小于其它治疗组。
还计算了所有治疗组的小鼠存活曲线。当出现明显的全身毒性、肿瘤溃疡，或当肿瘤直径＞2cm时，小鼠被无痛处死。在研究完成前(从治疗开始起38天)，≤50％的用盐水、5-FU、或5-FU加阿瓦斯汀治疗的小鼠依然存活(图9)。相反，92％的用5-FU加阿瓦斯汀与5，10-CH2-THFA或者与甲酰四氢叶酸的组合治疗的小鼠依然存活。多种药物组合的存活模式与上述的第一次裸小鼠结肠直肠肿瘤研究中得到的结果相似。
实施例3用5-FU、甲酰四氢叶酸和5，10-CH2-THFA的组合处理的Balb/c小鼠的血液分析材料和方法小鼠Balb/c小鼠得自Charles River实验室。在所有的研究开始时，小鼠均为6-8周龄。将小鼠饲养在LAB国际动物饲养所(San Diego，CA)中的隔离的、高效微粒空气过滤器通风的笼子内，每只笼子中饲养4只小鼠。
药物5-氟尿嘧啶(5-FU)得自Calbiochem。甲酰四氢叶酸(亚叶酸)得自Sigma-Aldrich。5，10-亚甲基四氢叶酸(5，10-CH2-THFA)由Eprova AG生产。
Balb/c血液分析研究用5-FU、甲酰四氢叶酸和5，10-CH2-THFA的组合对Balb/c小鼠(7周龄的雌性小鼠)连续注射7天。采用28规格的胰岛素针/注射器将全部药物进行腹膜内注射(100微升/小鼠，0.6mg/小鼠/药物)。在第0天(药物注射前)、第8天和第13天时通过眶后穿刺，用EDTA涂布的微量采血管(VWR International)采集200-250微升血/小鼠。由LabcorpCorporation of America采用Bayer Advia 120血液学分析仪确定全血细胞计数加血细胞分类计数。
结果除了其杀灭肿瘤活性之外，5-FU对正常细胞具有细胞毒性，尤其是由于其骨髓抑制作用对造血系统的细胞具有细胞毒性。因为甲酰四氢叶酸和5，10-CH2-THFA具有相关的化学特征和作用方式，我们想确定5-FU/5，10-CH2-THFA联合治疗是否有相似的毒性特征。由此，我们用5-FU、甲酰四氢叶酸和5，10-CH2-THFA的多种组合对正常Balb/c小鼠进行注射(表5)。预处理时、处理后一周、两周，我们分析全血细胞计数加分类计数在血液参数方面的变化。此外，我们分析了药物毒性的定性和定量测量。
表5.Balb/c小鼠处理组
在给药一周后，我们观察到所有的小鼠均有药物-相关的毒性，包括褶皱的皮毛、濒死和脱水。在药物处理开始12天内，只用5-FU处理和用5-FU/甲酰四氢叶酸处理的组中的全部小鼠死亡。相反，14天后在5-FU/5，10-CH2-THFA处理组中38％的小鼠存活。对于全部处理组，绘制Kaplan-Meier存活曲线(图10)。5-FU/5，10-CH2-THFA处理组对5-FU/甲酰四氢叶酸处理的Logrank统计学对比表明在存活能力方面存在显著差异(p＜0.05)。
血液分析也显示在选择血细胞类型方面存在差异(图11)。我们测量了以下血液参数白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、平均细胞容积(MCV)、平均细胞血红蛋白(MCH)、平均细胞血红蛋白含量(MCHC)、嗜中性粒细胞、淋巴细胞、血小板(PLT)、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和单核细胞。药物处理后一周，相对于5-FU/甲酰四氢叶酸处理的小鼠，我们观察到在5-FU/5，10-CH2-THFA处理的小鼠中白细胞明显地更多(p＜0.05，Student’s t检验)。在白细胞亚型中，我们观察到5-FU/5，10-CH2-THFA处理组比其它处理组具有明显更多的血小板和嗜中性粒细胞。
因为我们观察到5-FU/5，10-CH2-THFA处理后在血小板和嗜中性粒细胞水平方面具有差异，我们进一步评价了这些细胞类型。采用对毒性的NCI分级标准，我们以组合的1/2级毒性、3级毒性或者4级毒性计算小鼠的百分比。对于血小板，我们观察到25％的单独用5-FU处理的小鼠发展为4级毒性(图12)。相反，5-FU/甲酰四氢叶酸或者5-FU/5，10-CH2-THFA处理的小鼠未注意到4级毒性。但是，不同于具有3级毒性的5-FU/甲酰四氢叶酸处理的小鼠(45％)，仅15％的5-FU/5，10-CH2-THFA处理的小鼠发展为3级血小板毒性。剩余的5-FU/5，10-CH2-THFA处理的小鼠(85％)发展为1级或2级毒性。因此，这些数据表明5-FU/5，10-CH2-THFA比单独5-FU或者5-FU/甲酰四氢叶酸引起更温和的血小板毒性。
同样地，我们评价了嗜中性粒细胞毒性特征。和血小板差异形成对比，所述标准的NCI分级系统在处理组之间不显示显著的嗜中性粒细胞差异。例如，100％的单独用5-FU和5-FU/甲酰四氢叶酸处理的小鼠发展为4级毒性，而92％的5-FU/5，10-CH2-THFA处理的小鼠发展为相同的4级毒性。剩余8％的5-FU/5，10-CH2-THFA处理的小鼠发展为3级毒性(图13)。但是，对发展为4级毒性的小鼠的进一步分析显示了可量化的嗜中性粒细胞差异。我们根据处理后其嗜中性粒细胞计数范围将具有4级毒性的小鼠分为亚组(图14)。此分析显示100％的仅用5-FU处理的小鼠和80％的5-FU/甲酰四氢叶酸处理的小鼠具有0-99的嗜中性粒细胞计数。相反，仅40％的5-FU/5，10-CH2-THFA处理的小鼠发展为该最低水平的嗜中性粒细胞计数。大多数定为4级的5-FU/5，10-CH2-THFA处理的小鼠(50％)具有200-499的嗜中性粒细胞计数。因此，这些数据表明5-FU/5，10-CH2-THFA引起比单独5-FU或5-FU/甲酰四氢叶酸更温和的嗜中性粒细胞毒性。
实施例4用5-FU、甲酰四氢叶酸、5，10-CH2-THFA和吉西他滨的组合处理的Balb/c小鼠的体重减轻毒性分析材料和方法小鼠Balb/c小鼠得自Charles River实验室。在研究开始时，小鼠均为6-8周龄。将小鼠饲养在LAB国际动物饲养所(San Diego，CA)中的隔离的、高效微粒空气过滤器通风的笼子内，每只笼子中饲养4只小鼠。
药物5-氟尿嘧啶(5-FU)和甲酰四氢叶酸(leucovorin)得自Sigma-Aldrich。5，10亚甲基四氢叶酸(5，10-CH2-THFA)由Eprova AG生产。吉西他滨由Eli Lilly生产并购自Myoderm Inc.。
Balb/c体重分析研究用5-FU、甲酰四氢叶酸、5，10-CH2-THFA和吉西他滨的组合对Balb/c雌性小鼠进行注射。5-FU、甲酰四氢叶酸和5，10-CH2-THFA(100微升/小鼠，0.6mg/小鼠/药物)腹膜内连续注射5天(1-5天)。吉西他滨每三天(第1、4和7天)腹膜内注射一次(100微升/小鼠，100微克/小鼠/药物)。所有药物均用27规格的胰岛素针/注射器进行注射。在药物开始给药之前(预处理)和第8天时用分析天平测量小鼠体重。
结果公知5-FU的毒性为胃肠毒性并与体重减轻相关。据报道甲酰四氢叶酸可能加重胃肠毒性。此外，吉西他滨目前为胰腺癌的标准疗法，其本身具有相关的毒性特征。虽然5-FU/吉西他滨和5-FU/甲酰四氢叶酸/吉西他滨的联合治疗已在临床上进行了检查并表现出具有增强的临床活性，但是这些组合通常显示出比单独吉西他滨或单独5-FU/甲酰四氢叶酸更严重的毒性。因为甲酰四氢叶酸和5，10-CH2-THFA具有相关的化学特性和作用方式，我们想研究5-FU/5，10-CH2-THFA与吉西他滨联合的毒性特征，因为5-FU/5，10-CH2-THFA/吉西他滨的联合治疗是适用于胰腺癌的可能的治疗方案。此外，我们想将我们先前的关于5-FU/5，10-CH2-THFA组合的毒性分析进行扩展，并且确定与5-FU/甲酰四氢叶酸或者单独的5-FU相比，这种组合是否具有另外的不明显的毒性特征。因此，我们用5-FU、甲酰四氢叶酸、5，10-CH2-THFA和吉西他滨的多种组合对正常的Balb/c小鼠进行注射(表6)。预处理和处理开始后一周时，我们检查了作为胃肠毒性测量结果的体重减轻/增加。
表6.Balb/c小鼠处理组
在开始给药之前(预处理)，小鼠的随机分组显示了相似的平均体重。处理后(第8天)，所有处理组中的小鼠体重均降低。采用不良事件(Adverse Events)的国立癌症研究所(NCI)通用的术语学标准(National Cancer Institute’s(NCI)Common Terminology Criteria)，对每一处理组的体重减轻严重性进行绘图(图15)。根据来自起始基线体重的体重减轻百分比对毒性分级(表7)。这些结果显示与单独5-FU或者5-FU/甲酰四氢叶酸处理组合相比(两个处理组中100％小鼠为2-3级毒性)，5-FU/5，10-CH2-THFA引起明显较低的2-3级毒性(50％)(p＜0.05，Fisher’s精确检验)。
表7.国立癌症研究所体重减轻毒性级别
虽然由于以亚毒性浓度给药，吉西他滨单独处理不诱导比1级更大的体重减轻毒性，但是将吉西他滨加入至5-FU/甲酰四氢叶酸或5-FU/5，10-CH2-THFA处理中导致100％小鼠具有3级毒性(图15)。但是，在这些处理组之间可检测出体重减轻百分比的数量差异(图16)。这些数据表明当与二重细胞毒性药物5-FU和吉西他滨联合时，5，10-CH2-THFA比甲酰四氢叶酸更有效地保护小鼠免于体重减轻。92％的5-FU/甲酰四氢叶酸/吉西他滨处理的小鼠具有＞25％的体重减轻，而具有如此严重的体重减轻毒性(33％的小鼠)的5-FU/5，10-CH2-THFA/吉西他滨处理的小鼠明显地更少(p＜0.05，Fisher’s精确检验)。
对于每一处理组，也随时间注意了小鼠存活能力(图17)。与用5-FU单独处理的小鼠相比(36％)，5-FU/甲酰四氢叶酸和5-FU/5，10-CH2-THFA组都具有多至14天的明显更大的小鼠存活百分比(对于每组有83％的小鼠)(p＜0.05，Logrank检验)。在5-FU/甲酰四氢叶酸/吉西他滨或者5-FU/5，10-CH2-THFA/吉西他滨三联药物组合中观察到了最短的存活时间，其中在第14天前100％的小鼠死亡。但是，5-FU/5，10-CH2-THFA/吉西他滨处理的小鼠比5-FU/甲酰四氢叶酸/吉西他滨处理的小鼠(8天)具有明显更长的存活时间(9天，p＜0.05，Logrank检验)。这与5-FU/5，10-CH2-THFA/吉西他滨联合组具有上述较轻严重性的体重减轻毒性相关，并再次表明当与5-FU/吉西他滨方案联合应用时，相对于甲酰四氢叶酸，5，10-CH2-THFA引起更温和的体重减轻。
实施例5用5-FU、甲酰四氢叶酸和5，10-CH2-THFA的组合处理的Balb/c小鼠的淋巴细胞分析材料和方法小鼠Balb/c小鼠得自Charles River实验室。在所有研究开始时，小鼠均为6-8周龄。将小鼠饲养在LAB国际动物饲养所(San Diego，CA)中的隔离的、高效微粒空气过滤器通风的笼子内，每只笼子中饲养4只小鼠。
药物5-氟尿嘧啶(5-FU)得自Calbiochem。甲酰四氢叶酸(leucovorin)得自Sigma-Aldrich。5，10-亚甲基四氢叶酸(5，10-CH2-THFA)由Eprova AG生产。
Balb/c血液分析研究用5-FU、甲酰四氢叶酸和5，10-CH2-THFA的组合对Balb/c小鼠(7周龄的雌性小鼠)连续注射7天。采用28规格的胰岛素针/注射器将全部药物进行腹膜内注射(100微升/小鼠，0.6mg/小鼠/药物)。在第0天(药物注射前)、第8天和第13天时通过眶后穿刺，用EDTA涂布的微量采血管(VWR International)采集200-250微升血/小鼠。由LabcorpCorporation of America采用Bayer Advia 120血液学分析仪确定全血细胞计数加血细胞分类计数。
结果实施例3中所述试验的补充分析进一步显示了处理组之间的毒性差异。如最初所述的，我们注意到与5-FU/甲酰四氢叶酸和5-FU单独处理相比，5-FU/5，10-CH2-THFA处理组保护白细胞，包括血小板和嗜中性粒细胞。采用基于基线淋巴细胞水平百分比的NCI毒性分级(表8)对所述数据进行新的分析，该分析也显示出与其它组相比，5-FU/5，10-CH2-THFA处理组中具有更好的淋巴细胞保护(图18)。在5-FU单独处理组和5-FU/甲酰四氢叶酸处理组中100％的小鼠发展为3-4级淋巴细胞减少症，而5-FU/5，10-CH2-THFA处理组中明显更少的小鼠(62％)发展为此毒性水平(p＜0.05，Fisher’s精确检验)。因此，此数据表明与5-FU单独或者5-FU/甲酰四氢叶酸相比，5-FU/5，10-CH2-THFA引起更温和的淋巴细胞毒性。
表8.国立癌症研究所淋巴细胞减少症毒性级别
实施例6关于用卡培他滨(希罗达)、5，10-亚甲基四氢叶酸(5，10-CH2-THFA)和甲酰四氢叶酸治疗HT-29结肠直肠肿瘤的裸小鼠研究材料和方法小鼠裸(nu/nu)小鼠得自Simonsen实验室。在所有研究开始时，小鼠均为6-8周龄。将小鼠饲养在Perry Scientific’s动物饲养所(San Diego，CA)中的隔离的、高效微粒空气过滤器通风的笼子内，每只笼子中饲养4只小鼠。
细胞系人结肠癌HT-29得自美国组织培养物收藏所(ATCC)。将细胞系维持在37℃，10％CO2增湿的培养箱内的含10％胎牛血清(FBS)、2mM 1-谷氨酰胺、100单位/ml青霉素和100微克/ml链霉素的DMEM(DMEM-10)中。在体内实验前，细胞系每2-3天进行传代。
药物卡配他滨(希罗达)由Roche实验室生产(Nutley，新泽西)。甲酰四氢叶酸(leucovorin)得自Sigma-Aldrich。5，10-亚甲基四氢叶酸(5，10-CH2-THFA)由Eprova AG生产。
治疗以如下方式制备注射用的HT-29细胞用PBS洗涤铺满组织培养瓶的HT-29细胞一次，随后用胰蛋白酶进行细胞分离。分离的细胞然后在DMEM-10中洗涤一次，接着用PBS洗涤一次。最后，以107细胞/ml将细胞重悬于PBS中。采用28规格的针/1ml胰岛素注射器，用100微升(106细胞)HT-29细胞对裸小鼠(nu/nu)进行皮下接种。当肿瘤体积达到100至300mm3时，用希罗达、5，10-CH2-THFA、甲酰四氢叶酸或水的多种组合对小鼠进行治疗。通过口腔管饲法进行水和希罗达的给药(72mg/小鼠/天)。大约在希罗达给药前20分钟，通过腹腔内注射进行5，10-CH2-THFA和甲酰四氢叶酸的给药(0.6mg/小鼠/药物/天)。所有药物均每天给药，连续持续14天。每2-4天测量肿瘤大小和小鼠体重。使用以下公式计算肿瘤体积肿瘤体积＝(长×宽2)/2。当肿瘤直径＞2cm或者肿瘤溃疡时，使用CO2对小鼠进行无痛处死，接着进行颈脱位。
数据分析采用GraphPad Prism科学软件实施肿瘤生长、存活能力和体重减轻的统计学分析和曲线拟合。
结果肿瘤生长用如表9所示的药物组合对带有肿瘤的小鼠进行治疗。
与用于人体的经批准的临床方案相似，将希罗达口服给药。与对照治疗的小鼠相比(水)，所有含希罗达的治疗组具有较小的肿瘤生长(图19)。此外，甲酰四氢叶酸和5，10-CH2-THFA都增加希罗达的抗肿瘤活性。这些差异可在肿瘤倍增时间中看到，所述肿瘤倍增时间是从指数肿瘤生长的最佳拟合线性回归中计算出，并显示于表10中。
表9.小鼠治疗组
表10.肿瘤倍增时间
存活率在实验过程中，自始至终关注小鼠存活率(图20)。这些结果表明与甲酰四氢叶酸加希罗达(25％)和单独希罗达(38％)相比，在实验第33天时(将药物给药的首日限定为第一天)，5，10-CH2-THFA加希罗达导致最大的存活率(67％)。此外，这些数据表明用甲酰四氢叶酸加希罗达治疗的小鼠具有更快速的死亡率，如具有19天生存中值所表明的，而所有其它治疗组＞30天。
药物毒性作为药物毒性的替代标记，我们检查了小鼠体重随时间的变化。采用适用于体重减轻的国立癌症研究所通用毒性标准第3版分级系统(表11)，对体重减轻的最大毒性级别进行绘图(图21)。虽然希罗达本身相对无毒性，其仅在36％的小鼠中诱导1级毒性，但是甲酰四氢叶酸将所有1-3级毒性的小鼠增加至90％。这增加的毒性与II期人临床试验结果一致，该结果显示甲酰四氢叶酸增加诸如腹泻、呕吐和粘膜炎症的希罗达毒性参数(参见Van Cutsem，E.，M.Findlay，B.Osterwalder，M Kocha，D.Dalley，R.Pazdur，J.Cassidy，L.Dirix，C.Twelves，D.Allman，J.F.Seitz，J.Scholmerich，H.U.Burger，and J.Verweij.2000.Capecitabine，an oral fluoropyrimidine carbamate withsubstantial activity in advanced colorectal cancerresults of a randomizedphase II study(作为口服的氟嘧啶氨基甲酸酯，卡培他滨在晚期结肠直肠癌中具有相当大的活性随机的II期研究结果).J ClinOncol181337)。相反，5，10-CH2-THFA不像甲酰四氢叶酸一样在小鼠中增加希罗达毒性，仅50％的小鼠具有1-3级体重减轻，与甲酰四氢叶酸治疗组相比将毒性减少了40％。
表11.体重减轻毒性标准
结论综上所述，这些数据表明5，10-CH2-THFA增加希罗达的抗肿瘤有效性且具有比甲酰四氢叶酸更小的毒性。
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所有标题皆是为了读者方便，且除非如此说明，不应理解为用来限制紧随该标题后的正文的含义。
本发明引用的所有参考文献，包括参考数目中所列的那些参考文献均全部引入作为参考。
权利要求
1.(a)5，10亚甲基四氢叶酸；和(b)5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药；和(c)至少一种另外的化学治疗剂，在制备治疗癌症的药物组合物中的用途，其中所述至少一种另外的化学治疗选自烷化剂、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、微管破坏药物、核酸合成抑制剂、激酶抑制剂、激素阻断药物、蛋白体抑制剂、血管生成抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、细胞因子、细胞因子抑制剂、受体-结合药物和5-氟尿嘧啶调节剂。
2.如权利要求1所述的用途，其中所述被治疗的癌症为结肠直肠癌、乳腺癌、胃癌、非小细胞肺癌、子宫颈癌、卵巢癌、胰腺癌、食管癌或头颈癌。
3.如权利要求1所述的用途，其中至少一种另外的化学治疗剂为特异性结合成员、或核酸或核酸类似物分子、或小分子。
4.如权利要求3所述的用途，其中所述特异性结合成员包括结合生长因子的抗体。
5.如权利要求4所述的用途，其中所述结合生长因子的抗体至少为一种结合VEGF的抗体。
6.如权利要求5所述的用途，其中所述结合VEGF的抗体为贝伐单抗。
7.如权利要求3所述的用途，其中所述特异性结合成员包括结合生长因子受体的抗体。
8.如权利要求7所述的用途，其中所述结合生长因子的抗体至少为一种结合EGFR的抗体。
9.如权利要求8所述的用途，其中所述结合EGFR的抗体为西妥昔单抗。
10.如权利要求1所述的用途，其中所述至少一种另外的化学治疗剂选自依立替康(CPT-11))、二氟脱氧胞嘧啶核苷(吉西他滨)、(E)-2’-脱氧-2’-(氟亚甲基)胞苷(tezacitabine)、多柔比星、表柔比星、丝裂霉素C、环磷酰胺、顺铂、奥沙利铂、太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、长春新碱、长春碱和长春瑞滨。
11.如权利要求1所述的用途，其中所述药物组合物被组方为通过注射或通过静脉内输入给药。
12.如权利要求1所述的用途，其中所述药物组合物的(a)、(b)和(c)组分被组方为单一制剂。
13.如权利要求1所述的用途，其中所述药物组合物的(a)、(b)和(c)组分被分别组方。
14.治疗癌症患者的方法，所述方法包括以5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药；5，10-亚甲基四氢叶酸；和至少一种另外的抗癌药物对患者给药。
15.如权利要求14所述的方法，其中5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药为5-氟尿嘧啶。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶通过注射给药。
17.如权利要求15所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的剂量为约25毫克至约5克每m2。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的剂量为约50毫克至约2.5克每m2。
19.如权利要求18所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的剂量为约100毫克至约1克每m2。
20.如权利要求14所述的方法，其中5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药为N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)的日剂量为约500mg至约7.5g每m2。
22.如权利要求21所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)的日剂量为约1000mg至约5g每m2。
23.如权利要求22所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)的日剂量为约1500mg至约3000mg每m2。
24.如权利要求14所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸通过注射给药。
25.如权利要求14所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约10毫克至1克每m2。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约20毫克至500毫克每m2。
27.如权利要求14所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约50毫克至250毫克每m2。
28.如权利要求14所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物包括至少一种烷化剂、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、微管破坏药物、核酸合成抑制剂、激酶抑制剂、激素阻断药物、蛋白体抑制剂、血管生成抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、细胞因子、细胞因子抑制剂、受体-结合药物或5-氟尿嘧啶调节剂。
29.如权利要求14所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物包括至少一种特异性结合成员、或核酸或核酸类似物分子、或小分子。
30.如权利要求1所述的方法，其中所述癌症为结肠直肠癌、乳腺癌、胃癌、非小细胞肺癌、子宫颈癌、卵巢癌、胰腺癌、食管癌或头颈癌。
31.如权利要求30所述的方法，其中所述癌症为结肠直肠癌。
32.如权利要求30所述的方法，其中所述癌症为乳腺癌。
33.如权利要求30所述的方法，其中所述癌症为胰腺癌。
34.如权利要求30所述的方法，其中所述癌症为胃癌。
35.如权利要求29所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物包括特异性结合成员。
36.如权利要求23所述的方法，其中所述特异性结合成员包括结合VEGF的抗体。
37.如权利要求36所述的方法，其中所述结合VEGF的抗体为贝伐单抗。
38.如权利要求23所述的方法，其中所述特异性结合成员包括结合EGFR的抗体。
39.如权利要求38所述的方法，其中所述结合EGFR的抗体为西妥昔单抗。
40.如权利要求28所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为拓扑异构酶抑制剂。
41.如权利要求40所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为依立替康。
42.如权利要求28所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为抗代谢物。
43.如权利要求42所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为二氟脱氧胞嘧啶核苷(吉西他滨)、(E)-2’-脱氧-2’-(氟亚甲基)胞苷(tezacitabine)、多柔比星或表柔比星。
44.如权利要求38所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为烷化剂。
45.如权利要求44所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为丝裂霉素C、环磷酰胺、顺铂或奥沙利铂。
46.如权利要求45所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为奥沙利铂。
47.如权利要求28所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为激酶抑制剂。
48.如权利要求47所述的方法，所述激酶抑制剂为酪氨酸激酶抑制剂。
49.如权利要求48所述的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制剂为EGFR酪氨酸激酶抑制剂或VEGFR酪氨酸激酶抑制剂。
50.如权利要求28所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为微管破坏剂。
51.如权利要求50所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、长春新碱、长春碱或长春瑞滨。
52.减少欲对诊断为癌症的患者给药的抗癌药物方案的毒性的方法，所述方法包括获得抗癌药物方案，所述抗癌药物方案包括5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药；亚叶酸；和至少一种另外的抗癌药物；以及用5，10亚甲基四氢叶酸代替所述的欲对诊断为癌症的患者给药的抗癌药物方案中的亚叶酸。
53.如权利要求42所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药为5-氟尿嘧啶。
54.如权利要求52所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药为N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)。
55.如权利要求52所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约10毫克至约1克每m2。
56.如权利要求55所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约20毫克至500毫克每m2。
57.如权利要求56所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约30毫克至250毫克每m2。
58.如权利要求52所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物包括至少一种烷化剂、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、微管破坏药物、核酸合成抑制剂、激酶抑制剂、激素阻断药物、蛋白体抑制剂、血管生成抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、细胞因子、细胞因子抑制剂、受体-结合药物或5-氟尿嘧啶调节剂。
59.如权利要求52所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中的至少一种抗癌药物包括至少一种特异性结合成员、或核酸或核酸类似物分子、或小分子。
60.如权利要求1所述的方法，其中所述癌症为结肠直肠癌、乳腺癌、胃癌、非小细胞肺癌、子宫颈癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌或头颈癌。
61.如权利要求60所述的方法，其中所述癌症为结肠直肠癌。
62.如权利要求60所述的方法，其中所述癌症为乳腺癌。
63.如权利要求60所述的方法，其中所述癌症为胰腺癌。
64.如权利要求60所述的方法，其中所述癌症为胃癌。
65.如权利要求49所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物包括特异性结合成员。
66.如权利要求65所述的方法，其中所述特异性结合成员包括结合生长因子的抗体。
67.如权利要求66所述的方法，其中所述结合生长因子的抗体至少为一种结合VEGF的抗体。
68.如权利要求67所述的方法，其中所述结合VEGF的抗体为贝伐单抗。
69.如权利要求65所述的方法，其中所述结合生长因子的抗体至少为一种结合EGFR的抗体。
70.如权利要求69所述的方法，其中所述结合EGFR的抗体为西妥昔单抗。
71.如权利要求58所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为拓扑异构酶抑制剂。
72.如权利要求71所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为依立替康。
73.如权利要求58所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为抗代谢物。
74.如权利要求73所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为二氟脱氧胞嘧啶核苷吉西他滨、(E)-2’-脱氧-2’-(氟亚甲基)胞苷(tezacitabine)、多柔比星或表柔比星。
75.如权利要求58所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为烷化剂。
76.如权利要求75所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为丝裂霉素C或环磷酰胺。
77.如权利要求75所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为顺铂或奥沙利铂。
78.如权利要求77所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为奥沙利铂。
79.如权利要求58所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为激酶抑制剂。
80.如权利要求79所述的方法，所述激酶抑制剂为酪氨酸激酶抑制剂。
81.如权利要求80所述的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制剂为EGFR酪氨酸激酶抑制剂或VEGFR酪氨酸激酶抑制剂。
82.如权利要求58所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为微管破坏剂。
83.如权利要求82所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、长春新碱、长春碱或长春瑞滨。
84.减少欲对诊断为癌症的患者给药的抗癌药物的毒性的方法，所述方法包括获得抗癌药物方案，所述抗癌药物方案包括
5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药；和至少一种另外的抗癌药物；以及将5，10亚甲基四氢叶酸加入到所述的欲对诊断为癌症的患者给药的抗癌药物方案中。
85.如权利要求84所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药为5-氟尿嘧啶。
86.如权利要求85所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶通过注射给药。
87.如权利要求85所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的剂量为约25毫克至约5克每m2。
88.如权利要求87所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的剂量为约50毫克至约2.5克每m2。
89.如权利要求88所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的剂量为约100毫克至约1克每m2。
90.如权利要求84所述的方法，其中5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药为N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)。
91.如权利要求80所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)的日剂量为约500mg至约7.5g每m2。
92.如权利要求82所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)的日剂量为约1000mg至约5g每m2。
93.如权利要求83所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)的日剂量为约1500mg至约3000mg每m2。
94.如权利要求84所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸能通过注射给药。
95.如权利要求84所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约10毫克至1克每m2。
96.如权利要求95所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约20毫克至500毫克每m2。
97.如权利要求96所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约30毫克至250毫克每m2。
98.如权利要求84所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物包括至少一种烷化剂、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、微管破坏药物、核酸合成抑制剂、激酶抑制剂、激素阻断药物、蛋白体抑制剂、血管生成抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、细胞因子、细胞因子抑制剂、受体-结合药物或5-氟尿嘧啶调节剂。
99.如权利要求74所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物包括至少一种特异性结合成员、或核酸或核酸类似物分子、或小分子。
100.如权利要求84所述的方法，其中所述癌症为结肠直肠癌、乳腺癌、胃癌、非小细胞肺癌、子宫颈癌、卵巢癌、胰腺癌、食管癌或头颈癌。
101.如权利要求100所述的方法，其中所述癌症为结肠直肠癌。
102.如权利要求100所述的方法，其中所述癌症为乳腺癌。
103.如权利要求100所述的方法，其中所述癌症为胰腺癌。
104.如权利要求100所述的方法，其中所述癌症为胃癌。
105.如权利要求99所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物包括特异性结合成员。
106.如权利要求105所述的方法，其中所述特异性结合成员包括结合生长因子的抗体。
107.如权利要求106所述的方法，其中所述结合生长因子的抗体至少为一种结合VEGF的抗体。
108.如权利要求107所述的方法，其中所述结合VEGF的抗体为贝伐单抗。
109.如权利要求105所述的方法，其中所述特异性结合成员包括结合生长因子受体的抗体。
110.如权利要求109所述的方法，其中所述结合生长因子的抗体至少为一种结合EGFR的抗体。
111.如权利要求110所述的方法，其中所述结合EGFR的抗体为西妥昔单抗。
112.如权利要求98所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为拓扑异构酶抑制剂。
113.如权利要求112所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为依立替康。
114.如权利要求98所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为抗代谢物。
115.如权利要求114所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为二氟脱氧胞嘧啶核苷(吉西他滨)、(E)-2’-脱氧-2’-(氟亚甲基)胞苷(tezacitabine)、多柔比星或表柔比星。
116.如权利要求98所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为烷化剂。
117.如权利要求116所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为丝裂霉素C、环磷酰胺、顺铂或奥沙利铂。
118.如权利要求117所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为奥沙利铂。
119.如权利要求98所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为激酶抑制剂。
120.如权利要求119所述的方法，所述激酶抑制剂为酪氨酸激酶抑制剂。
121.如权利要求120所述的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制剂为EGFR酪氨酸激酶抑制剂或VEGFR酪氨酸激酶抑制剂。
122.如权利要求98所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为微管破坏剂。
123.如权利要求122所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、长春新碱、长春碱或长春瑞滨。
124.减少欲对癌症患者给药的抗癌药物方案的毒性的方法，所述方法包括获得抗癌药物方案，所述抗癌药物方案包括5-氟尿嘧啶的类似物或前药和亚叶酸；以及用5，10亚甲基四氢叶酸代替在所述的欲对诊断为癌症的患者给药的抗癌药物方案中的亚叶酸。
125.如权利要求124所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的类似物或前药为N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)。
126.如权利要求125所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)的日剂量为约500mg至约7.5g每m2。
127.如权利要求126所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)的日剂量为约1000mg至约5g每m2。
128.如权利要求127所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)的日剂量为约200mg至约1500mg每m2。
129.如权利要求124所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸能通过注射给药。
130.如权利要求114所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约10毫克至1克每m2。
131.如权利要求121所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约20毫克至500毫克每m2。
132.如权利要求122所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约30毫克至250毫克每m2。
133.增加欲对诊断为癌症的患者给药的抗癌药物方案的有效性的方法，所述方法包括获得抗癌药物方案，所述抗癌药物方案包括5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药；亚叶酸；和和至少一种另外的抗癌药物；以及用5，10亚甲基四氢叶酸代替在所述的欲对诊断为癌症的患者给药的抗癌药物方案中的亚叶酸。
134.如权利要求133所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药为5-氟尿嘧啶。
135.如权利要求134所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药为N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)。
136.如权利要求135所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约10毫克至1克每m2。
137.如权利要求136所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约20毫克至500毫克每m2。
138.如权利要求137所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约30毫克至250毫克每m2。
139.如权利要求133所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物包括至少一种烷化剂、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、微管破坏药物、核酸合成抑制剂、激酶抑制剂、激素阻断药物、蛋白体抑制剂、血管生成抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、细胞因子、细胞因子抑制剂、受体-结合药物或5-氟尿嘧啶调节剂。
140.如权利要求133所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物包括至少一种特异性结合成员、或核酸或核酸类似物分子、或小分子。
141.如权利要求133所述的方法，其中所述癌症为结肠直肠癌、乳腺癌、胃癌、非小细胞肺癌、子宫颈癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌或头颈癌。
142.如权利要求133所述的方法，其中所述癌症为结肠直肠癌。
143.如权利要求133所述的方法，其中所述癌症为乳腺癌。
144.如权利要求133所述的方法，其中所述癌症为胰腺癌。
145.如权利要求133所述的方法，其中所述癌症为胃癌。
146.如权利要求140所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物包括特异性结合成员。
147.如权利要求146所述的方法，其中所述特异性结合成员包括结合生长因子的抗体。
148.如权利要求147所述的方法，其中所述结合生长因子的抗体至少为一种结合VEGF的抗体。
149.如权利要求148所述的方法，其中所述结合VEGF的抗体为贝伐单抗。
150.如权利要求146所述的方法，其中所述结合生长因子的抗体至少为一种结合EGFR的抗体。
151.如权利要求141所述的方法，其中所述结合EGFR的抗体为西妥昔单抗。
152.如权利要求139所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为拓扑异构酶抑制剂。
153.如权利要求152所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为依立替康。
154.如权利要求139所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为抗代谢物。
155.如权利要求154所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为二氟脱氧胞嘧啶核苷(吉西他滨)、(E)-2’-脱氧-2’-(氟亚甲基)胞苷(tezacitabine)、多柔比星或表柔比星。
156.如权利要求139所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为烷化剂。
157.如权利要求156所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为丝裂霉素C或环磷酰胺。
158.如权利要求156所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为顺铂或奥沙利铂。
159.如权利要求158所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为奥沙利铂。
160.如权利要求139所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为激酶抑制剂。
161.如权利要求160所述的方法，所述激酶抑制剂为酪氨酸激酶抑制剂。
162.如权利要求161所述的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制剂为EGFR酪氨酸激酶抑制剂或VEGFR酪氨酸激酶抑制剂。
163.如权利要求139所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为微管破坏剂。
164.如权利要求163所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、长春新碱、长春碱或长春瑞滨。
165.增加欲对诊断为癌症的患者给药的抗癌药物方案的有效性的方法，所述方法包括获得抗癌药物方案，所述抗癌药物方案包括5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药和至少一种另外的抗癌药物；以及将5，10亚甲基四氢叶酸加入到所述的欲对诊断为癌症的患者给药的抗癌药物方案中。
166.如权利要求165所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药为5-氟尿嘧啶。
167.如权利要求166所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶能通过注射给药。
168.如权利要求166所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的剂量为约25毫克至约5克每m2。
169.如权利要求168所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的剂量为约50毫克至约2.5克每m2。
170.如权利要求160所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的剂量为约100毫克至约1克每m2。
171.如权利要求165所述的方法，其中5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药为N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)。
173.如权利要求171所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5，-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)能以口服制剂形式每日给药一至六次。
174.如权利要求163所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)的日剂量为约500mg至约7.5g每m2。
175.如权利要求174所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)的日剂量为约1000mg至约5g每m2。
176.如权利要求175所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)的日剂量为约1500mg至约3000mg每m2。
177.如权利要求165所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸能通过注射给药。
178.如权利要求165所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约10毫克至1克每m2。
179.如权利要求168所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约20毫克至500毫克每m2。
180.如权利要求169所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约30毫克至250毫克每m2。
181.如权利要求165所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物包括至少一种烷化剂、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、微管破坏药物、核酸合成抑制剂、激酶抑制剂、激素阻断药物、蛋白体抑制剂、血管生成抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、细胞因子、细胞因子抑制剂、受体-结合药物或5-氟尿嘧啶调节剂。
182.如权利要求165所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物包括至少一种特异性结合成员、或核酸或核酸类似物分子、或小分子。
183.如权利要求165所述的方法，其中所述癌症为结肠直肠癌、乳腺癌、胃癌、非小细胞肺癌、子宫颈癌、卵巢癌、胰腺癌、食管癌或头颈癌。
184.如权利要求183所述的方法，其中所述癌症为结肠直肠癌。
185.如权利要求183所述的方法，其中所述癌症为乳腺癌。
186.如权利要求183所述的方法，其中所述癌症为胰腺癌。
187.如权利要求183所述的方法，其中所述癌症为胃癌。
188.如权利要求182所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物包括特异性结合成员。
189.如权利要求188所述的方法，其中所述特异性结合成员包括结合生长因子的抗体。
190.如权利要求189所述的方法，其中所述结合生长因子的抗体至少为一种结合VEGF的抗体。
191.如权利要求190所述的方法，其中所述结合VEGF的抗体为贝伐单抗。
192.如权利要求188所述的方法，其中所述特异性结合成员包括结合生长因子受体的抗体。
193.如权利要求192所述的方法，其中所述结合生长因子的抗体至少为一种结合EGFR的抗体。
194.如权利要求193所述的方法，其中所述结合EGFR的抗体为西妥昔单抗。
195.如权利要求181所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为拓扑异构酶抑制剂。
196.如权利要求195所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为依立替康。
197.如权利要求181所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为抗代谢物。
198.如权利要求197所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为二氟脱氧胞嘧啶核苷(吉西他滨)、(E)-2’-脱氧-2’-(氟亚甲基)胞苷(tezacitabine)、多柔比星或表柔比星。
199.如权利要求181所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为烷化剂。
200.如权利要求199所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为丝裂霉素C、环磷酰胺、顺铂或奥沙利铂。
201.如权利要求200所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为奥沙利铂。
202.如权利要求181所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为激酶抑制剂。
203.如权利要求202所述的方法，所述激酶抑制剂为酪氨酸激酶抑制剂。
204.如权利要求203所述的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制剂为EGFR酪氨酸激酶抑制剂或VEGFR酪氨酸激酶抑制剂。
205.如权利要求181所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为微管破坏剂。
206.如权利要求205所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、长春新碱、长春碱或长春瑞滨。
207.增加对癌症患者给药的抗癌药物方案的有效性的方法，所述方法包括获得抗癌药物方案，所述抗癌药物方案包括5-氟尿嘧啶的类似物或前药和亚叶酸；以及用5，10亚甲基四氢叶酸代替所述的欲对诊断为癌症的患者给药的抗癌药物方案中的亚叶酸。
208.如权利要求207所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的类似物或前药为N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)。
209.如权利要求208所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)能以口服制剂的形式每日给药一至六次。
210.如权利要求208所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)的日剂量为约500mg至约7.5g每m2。
211.如权利要求200所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)的日剂量为约1000mg至约5g每m2。
212.如权利要求201所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)的日剂量为约1500mg至约3000mg每m2。
213.如权利要求197所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸能通过注射给药。
214.如权利要求197所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约10毫克至1克每m2。
215.如权利要求214所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约20毫克至500毫克每m2。
216.如权利要求215所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约30毫克至250毫克每m2。
217.增加欲对诊断为癌症的患者给药的抗癌药物方案的有效性的方法，所述方法包括获得抗癌药物方案，所述抗癌药物方案包括5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药；亚叶酸；和和至少一种另外的抗癌药物；用5，10亚甲基四氢叶酸代替在所述抗癌药物方案中的亚叶酸；以及增加在所述抗癌药物方案中的至少一种另外的抗癌药物的剂量以获得具有增加的有效性的抗癌药物方案。
218.如权利要求133所述的方法，其中5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药为5-氟尿嘧啶。
219.如权利要求218所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶通过注射给药。
220.如权利要求208所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的剂量为约25毫克至约5克每m2。
221.如权利要求220所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的剂量为约50毫克至约2.5克每m2。
222.如权利要求221所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的剂量为约100毫克至约1克每m2。
223.如权利要求217所述的方法，其中5-氟尿嘧啶或其类似物或其前药为N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)。
224.如权利要求223所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)以口服制剂形式每日给药一至六次。
225.如权利要求223所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)的日剂量为约500mg至约7.5g每m2。
226.如权利要求225所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)的日剂量为约1000mg至约5g每m2。
227.如权利要求226所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞嘧啶(卡培他滨)的日剂量为约1500mg至约3000mg每m2。
228.如权利要求227所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸通过注射给药。
229.如权利要求217所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约10毫克至1克每m2。
230.如权利要求229所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约20毫克至500毫克每m2。
231.如权利要求220所述的方法，其中所述5，10亚甲基四氢叶酸的剂量为约50毫克至250毫克每m2。
232.如权利要求217所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物包括至少一种烷化剂、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、微管破坏药物、核酸合成抑制剂、激酶抑制剂、激素阻断药物、蛋白体抑制剂、血管生成抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、细胞因子、细胞因子抑制剂、受体-结合药物或5-氟尿嘧啶调节剂。
233.如权利要求217所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物包括至少一种特异性结合成员、或核酸或核酸类似物分子、或小分子。
234.如权利要求217所述的方法，其中所述癌症为结肠直肠癌、乳腺癌、胃癌、非小细胞肺癌、子宫颈癌、卵巢癌、胰腺癌、食管癌或头颈癌。
235.如权利要求234所述的方法，其中所述癌症为结肠直肠癌。
236.如权利要求234所述的方法，其中所述癌症为乳腺癌。
237.如权利要求234所述的方法，其中所述癌症为胰腺癌。
238.如权利要求234所述的方法，其中所述癌症为胃癌。
239.如权利要求233所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物包括特异性结合成员。
240.如权利要求239所述的方法，其中所述特异性结合成员包括结合生长因子的抗体。
241.如权利要求240所述的方法，其中所述结合生长因子的抗体至少为一种结合VEGF的抗体。
242.如权利要求241所述的方法，其中所述结合VEGF的抗体为贝伐单抗。
243.如权利要求239所述的方法，其中所述特异性结合成员包括结合生长因子受体的抗体。
244.如权利要求243所述的方法，其中所述结合生长因子的抗体至少为一种结合EGFR的抗体。
245.如权利要求234所述的方法，其中所述结合EGFR的抗体为西妥昔单抗。
246.如权利要求232所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为拓扑异构酶抑制剂。
247.如权利要求246所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为依立替康。
248.如权利要求232所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为抗代谢物。
249.如权利要求248所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为二氟脱氧胞嘧啶核苷(吉西他滨)、(E)-2’-脱氧-2’-(氟亚甲基)胞苷(tezacitabine)、多柔比星或表柔比星。
250.如权利要求232所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为烷化剂。
251.如权利要求250所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为丝裂霉素C、环磷酰胺、顺铂或奥沙利铂。
252.如权利要求241所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为奥沙利铂。
253.如权利要求232所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为激酶抑制剂。
254.如权利要求253所述的方法，所述激酶抑制剂为酪氨酸激酶抑制剂。
255.如权利要求254所述的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制剂为EGFR酪氨酸激酶抑制剂或VEGFR酪氨酸激酶抑制剂。
256.如权利要求232所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为微管破坏剂。
257.如权利要求256所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药物中至少一种抗癌药物为太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、长春新碱、长春碱或长春瑞滨。
全文摘要
本发明提供了5，10－亚甲基四氢叶酸(“5，10－CH
文档编号A61P35/00GK1942189SQ200580012067
公开日2007年4月4日 申请日期2005年4月1日 优先权日2004年4月2日
发明者琼·M·罗宾斯, 马克·J·坎特韦尔 申请人:阿德文特克斯药物有限公司