专利名称：具有抗肿瘤活性的吲哚衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有抗肿瘤活性的化合物以及其药物组合物。更具体地说，本发明涉及能通过抑制转录因子HIF-1α和其共激活因子p300之间的相互作用从而阻止血管内皮细胞生长因子(VEGF)的产生来对抗肿瘤生长和血管生成的3H-苯并[e]吲哚-4，5-二酮衍生物。
背景技术：
血管内皮生长因子在生理和病理生理性血管生成过程中起着关键作用。在VEGF基因的调节中涉及许多机理，其中，如体内和体外缺氧情况下VEGF mRNA水平可逆性增加所证明的那样，组织氧压起着基础性作用。VEGF mRNA表达的增加主要是由转录因子HIF-1(缺氧诱导因子-1)介导的，其与VEGF基因启动子区中的识别位点结合。
大量实验数据表明HIF-1是氧内稳态的总调节剂并且HIF-1的活性受损促进了肿瘤细胞的存活、增生、侵入和转移(1)。因此，有人提出着眼于抑制HIF-1活性的治疗策略可以增加癌症患者的存活(2)。
HIF-1是由HIF-1α和HIF-1β亚基组成的杂二聚体，其通过bHLH-PAS结构域二聚化并与DNA结合(3)。HIF-1α亚基的表达通过遍在蛋白化和蛋白酶体降解过程(其是由VHL蛋白与HIF-1α的结合介导的)严格受组织氧浓度的调节(4)。仅当HIF-1α在402和564脯氨酸残基上被羟基化时才发生该类相互作用。氧是修饰HIF-1α的脯氨酰基-羟化酶的限制底物(5)。HIF-1α的表达随着O2浓度的降低呈指数增加并且决定了HIF-1的总体活性水平。
HIF-1α的反式激活(transactivation)结构域的功能也受氧分压负调控。N-末端反式激活结构域通过组蛋白脱酰基酶的募集由VHL和抑制HIF-1的因子(FIH-1)负调节，该因子既与VHL结合，又与HIF-1α结合(6)。
HIF-1活化通过存在的p300/CBP共激活因子(其物理性地与HIF1结构域的活化相互作用从而促进了基因如VEGF的转录)而发生(7)。p300和CBP也是其它转录因子，如Stat-3、NF-κB、p53的共激活因子。
p300/CBP与HIF-1的相互作用对于转录而言是很重要的，并且最近的出版物已经证明了HIF-1/p300相互作用对肿瘤生长的重要性(8)。HIF-1αC-末端反式激活结构域(C-TAD)与被称为CH1的p300和CBP结构域结合。CBP和p300与HIF-1α的结合受到FIH-1对C-末端激活结构域中的天冬酰胺803的氧依赖性羟基化的负向调节。因此，缺氧既稳定了蛋白酶体的降解，又稳定了HIF-1的转录活性。
已经对HIF-1α TAD-C和p300或CBP的CH1结构域之间的相互作用的结构细节进行了阐述(9，10)。也已经公开了p300/CBP和CITED2蛋白(也被称为p35srj)之间相互作用的细节，p35srj被认为是Hif-1α活性的负调节剂(11)。
HIF-1活化诱导了血管生成因子、葡萄糖载体、糖酵解酶、存活、迁移和侵袭因子的产生中所涉及的许多基因的转录，这些因子对于肿瘤进程而言是特别重要的。
在70％以上的人类肿瘤以及其转移瘤中观察到了Hif-1α蛋白的异常表达并且其与血管化的增加和肿瘤的发展有关(12-14)。在临床实践中，Hif-1α的异常表达与许多肿瘤病理学如非小细胞肺癌(15)、口咽鳞状上皮细胞癌(16)、早期宫颈癌(17)、头颈癌(18)、变异的p53卵巢癌(19)、少突神经胶质细胞瘤(20)和BCL-2阳性食管癌(21)中的治疗失败和死亡率增加有关。
在文献中已经对抑制HIF-1活性的各种方法进行了描述。这些方法中的一些建议使用Hif-1α的反义寡核苷酸或Hif-1α的负显性形式。
在所述药理学方法中，已经描述了一些通过间接机理起作用的Hif-1α活性抑制剂，如作用于控制Hif-1α活性的信号转导的PI3K-mTOR抑制剂(22-23)和MEKK抑制剂(24)；HSP90伴侣蛋白的抑制剂(25)；通过改变细胞氧化还原状态来起作用的硫氧还蛋白还原酶抑制剂(26)；将微管去稳定的分子，如2-甲氧基雌二醇(27)和埃坡霉素类(28)。
最近，报道了PX-478(美法仑N-氧化物)在移植了人肿瘤的裸鼠体内对Hif-1α水平具有组成型和缺氧诱导的抑制作用。所述化合物表现出显著的抗肿瘤活性。但是，还没有完全阐明这种化合物的作用机理(29)。
最后，最新报道了毛壳菌素——Chaetomium sp fungi的二硫代二氧代哌嗪代谢物干扰了Hif-1α与p300的结合。该化合物通过改变p300的CH1结构域的结构从而阻止其与Hif-1α的相互作用来起作用。将毛壳菌素给药于荷瘤小鼠抑制了肿瘤中缺氧诱导的转录和肿瘤生长(30)。
现有技术Khimiya Geterotsiklicheskikh Soedinenii(1989)，611-14和(1983)，(10)，1364-6对3H-苯并[e]吲哚o-醌以及其化学修饰进行了描述。没有有关所述化合物生物学活性的报道。
在Zhurnal Organikeskoi Khimii(1985)，21(6)，1315-20中对通过将萘醌与环状β-二羰基化合物进行反应获得的3H-苯并[e]吲哚o-醌进行了描述。没有有关所述化合物生物学活性的报道。
在Chem.& Pharm.Bull(1983)，31(12)，4391-4400中对抗病毒的化合物——1-苯基-2-乙氧基羰基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚进行了描述。
在Heteocycles(1982)，19(11)，2019-2025中报道了其中苯醌环被稠合到苯并吲哚核的1，2位上的3H-苯并[e]吲哚o-醌。
在Chemical & Pharm.Bull.(1983)，31(12)，4401-8中制备了一些3H-苯并[e]吲哚衍生物。
Biochemistry and Biophysics 429(2004)30-41公开了如下化合物1-乙酰基-8-溴-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸酯、8-溴-2-(溴甲基-3-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯和8-溴-3-甲基-2-(1-哌啶基)甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯。据报道，这些化合物可在体外抑制蛋白酪氨酸磷酸酶α(PTPα)和纤连蛋白底物上成纤维细胞的细胞扩展。据称这些化合物可在对还原剂或还原酶产生响应的细胞中以不受控和遍布整个细胞的方式产生过氧化氢。其作者得出的结论是，这些特征使得所述化合物可能具有细胞毒性而不太可能用于临床。
本发明的公开现在已经发现3H-苯并[e]吲哚-4，5-二酮的某些衍生物能抑制Hif-1α和p300之间的相互作用并阻止缺氧情况下在肿瘤细胞中产生VEGF。在第一方面，本发明涉及一种通过给需要其的个体施用式(I)的化合物、其盐、异构体、对映异构体或非对映异构体来阻止、抑制或阻断动物(优选人)的血管生成的方法 其中 是单键或双键；X和X’独立地是O；OH；NH；NH2；NH2OH；或者X和X’是氮并且和与其相连的碳原子一起形成一种6-或10-元杂环或杂芳族环；R1和R2和与其相连的原子(式(I)中的6-和7-位)一起形成一种6-元芳族或5-或6-元杂芳族环，优选为任选地被(C1-C4)酰基、(C1-C4)烷基磺酰基氨基或(卤素)C1-C4烷基、卤素、胺、单或二(C1-C4)烷基胺、羟基、(C1-C4)烷氧基、巯基、(C1-C4)烷硫基、氨基甲酰基、腈、氨基磺酰基、苯基取代的苯环；R3是氢；酰基(C1-C4)、(C1-C4)烷基磺酰基、(C1-C4)烷基氨基磺酰基、任选地夹杂有-O-、-S-、-N＝、-NH-、-NHCONH-、-NHCOO-、-NHSO2NH-、-NHC(＝NH)NH-、-NHC(＝NH)-、-NHCSNH-、-CO-、-COO-、-CONH-、-SO2-、-SO2NH-、-CH＝CH-、-C≡C-基或者被卤素、-NH2、-OH、-SH、-OCONH2、-COOH、-SO2NH2、-CONH2、-NHCONH2、-CN、苯基、5-或6-元杂环所取代的直链或支链(C1-C4)烷基；R4是-NR6R7，其中R6和R7独立地是氢、(C1-C4)酰基、(C1-C4)烷基磺酰基、(C1-C4)烷基氨基磺酰基、任选地被卤素、胺、羟基、巯基、氨基甲酰基、腈、苯基或5-或6-元杂环，特别是吗啉取代的直链或支链(C1-C4)烷基；-OR6；氨基甲酰基；任选地夹杂有-O-、-S-、-N＝、-NH-、-CO-、-COO-、-CONH-、-SO2-、-SO2NH-基或者被卤素、胺、羟基、巯基、氨基甲酰基、腈、苯基或5-或6-元杂环取代的直链或支链(C1-C4)烷基；最多10-元的芳族或杂芳族环；5-或10-元杂环；R5是NH2；NR6R7；OR6；任选地夹杂有-O-、-S-、-N＝、-NH-、-CO-、-COO-、-CONH-、-SO2-、-SO2NH-或者被卤素、胺、羟基、巯基、氨基甲酰基、腈、苯基或5-或6-元杂环所取代的直链或支链(C1-C4)烷基；最多10-元的芳族或杂芳族环；5或6-元杂环；脲基。
特别优选其中X＝X’＝O(羰基)的化合物(I)。最优选如下化合物(I)，其中X＝X’＝O；R3选自H、甲基、苄基、羧基甲基、叔-丁氧基羰基甲基、氨基甲酰基甲基；R4是任选地被羟基或氨基或者伯或仲胺取代的甲基或乙基；R5是乙氧基羰基。
在生物化学和细胞试验中，证实了本发明的化合物分别能抑制HIF-1α和p300之间的相互作用、VEGF启动子的活化以及分泌的VEGF的产生。
流程图(1)和(2)说明了其中X＝X’＝O以及其中X和X’形成二嗪的化合物(I)的合成。
流程
图1 流程图2 在另一实施方案中，本发明提供了具有抗肿瘤活性的3H-苯并[e]吲哚-4，5-二酮衍生物，其选自- 8-溴-3-叔-丁氧基羰基甲基-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[el吲哚-1-甲酸乙酯；- 8-溴-3-羧基甲基-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；- 8-溴-3-氨基甲酰基甲基-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；
- 5-溴-2-甲基-1H-1，8，11-三氮杂环戊二烯并[l]菲-3-甲酸乙酯；- 5-溴-2-甲基-1H-1，8，13-三氮杂苯并[a]环戊二烯并[c]蒽-3-甲酸乙酯；- 8-溴-3-甲基-2-(4′-甲基哌嗪-1′-基)甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；- 8-溴-3-甲基-2-(哌嗪-1′-基)-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；- 8-溴-3-甲基-2-(4′-(2-羟基乙基)-哌嗪-1′-基)-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；- 8-溴-3-甲基-2-(4′-(2-氨基乙基)-哌嗪-1′-基)-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯。
本发明另一方面涉及包含有效量的至少一种式(I)化合物以及可药用赋形剂的药物组合物。所述组合物可以是固体、半固体或液体，优选地为溶液、混悬液、粉末、颗粒、片剂、胶囊、糖浆、栓剂、气雾剂或控释系统的形式。所述组合物可以通过不同的途径被给药，特别是可以通过口服、经皮、皮下、静脉内、肌内、直肠和鼻内途径被给药。优选胃肠外给药。所述活性成分的剂量将由本领域技术人员根据所选择具体化合物的医学-毒理学和药动学特性以及所治疗疾病的类型、严重程度和阶段以及患者的体重、性别和年龄来确定。0.1至100mg/Kg/天的剂量范围通常将是可接受的。
用于单位剂量的活性成分的量将取决于给药形式和给药途径、所用的化合物、所治疗的疾病，但是通常将在0.1至1000mg之间进行变化，优选地为1至600mg。
这些药物组合物的制备原则和方法是本领域技术人员已知的，并且在例如Remington’s Pharmaceutical Science，Mack Publishing Company，Easton(PA)中进行了描述。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种治疗肿瘤和转移瘤的方法，其包括给需要所述治疗的个体(优选人类个体)施用有效量的式(I)的化合物或其药物组合物。优选的根据本发明进行治疗的肿瘤包括肺癌、乳癌、前列腺癌、成神经细胞瘤、多形成胶质细胞瘤、黑素瘤、中枢神经系统肿瘤、口咽鳞状上皮细胞癌、宫颈癌、卵巢、食管、肾、结肠、头颈癌和少突神经胶质细胞瘤。
用下面的实施例对本发明进行进一步说明。
实施例制备例16-溴-1，2-萘醌 方法A在搅拌的情况下向1，6-二溴-2-萘酚(20g，0.0662摩尔)在CH2Cl2(200ml)中的溶液逐滴加入(40分钟)90％HNO3(9.39ml，0.1988摩尔)。在完全加入后，将该溶液搅拌15分钟，然后向其中加入H2O(200ml)。将有机相分离出来，用Na2SO4干燥并将其减压蒸发至干。将固体残余物混悬于甲苯(40ml)中并将该混合物在90℃下搅拌1小时。在冷却后，收集所得的固体，在40-60℃下用石油醚对其进行洗涤并将其在40℃下真空干燥，得到7.99g(收率为51％)产物(红色/橙色固体)。
1H NMR(DMSO-d6)δ7.90(1H，d，J＝1.79Hz)；7.84(1H，d，J＝8.21)；7.77(1H，dd，J＝1.79，8.21)；7.62(1H，d，J＝10.19)；6.46(1H，d，J＝10.19)。
方法B在氮气气氛下，在搅拌的情况下向Fremy’s盐(10g，0.0373摩尔)和KH2PO4(77g，0.5658摩尔)在H2O(1.14l)中的溶液中逐滴加入6-溴-2-萘酚(3.032g，0.0132摩尔)在CH2Cl2(150ml)中的溶液。在将该二相系统在氮气气氛下搅拌21小时后，将有机相分离出来，用H2O(3×40ml)洗涤，用Na2SO4干燥并将其减压蒸发至干。将固体残余物混悬于Et2O(20ml)中并将该混合物搅拌1小时。收集所得的固体并用Et2O和己烷对其进行洗涤，得到1.253g(收率为40％)产物(褐色固体)。
方法C将叔-BuOOH的癸烷溶液(1.1ml，0.006摩尔)、无水CH2Cl2(60ml)和4分子筛(1g)的溶液加入到位于氮气气氛下的圆底烧瓶中。在第二个圆底烧瓶中，在氮气气氛下，制备6-溴-2-萘酚(0.23g，0.001摩尔)和Ti(OPr-i)4(0.31ml，0.001摩尔)在无水CH2Cl2(50ml)中的溶液。然后，在搅拌的情况下，在氮气气氛下向该过氧化物溶液中逐滴(5小时)加入所述萘酚-钛复合体。在完全加入后，将该混合物搅拌一小时，然后用硅胶柱过滤。在减压下蒸发掉溶剂，收集固体残余物并将其在50℃下真空干燥，得到0.043g(收率为18％)产物(褐色固体)。
制备例26-溴-3-硝基-1，2-萘醌 将6-溴-1，2-萘醌(5.2g，0.0219摩尔)在HNO370％(10ml)中的混悬波在50℃下搅拌5分钟。在加入冰后，将该混合物在室温下搅拌1小时。收集所得的固体，重复用H2O洗涤并将其在40℃下真空干燥，得到5.81g(收率为94％)产物(红色/橙色固体)。
1H NMR(DMSO-d6)δ8.61(1H，s)；8.18(1H，d，J＝1.37Hz)；7.95(2H，m)。
制备例32-(7-溴-3，4-二羟基-2-硝基萘-1-基)-3-羟基丁-2-烯酸乙酯
在搅拌的情况下向6-溴-3-硝基-1，2-萘醌(9.62g，0.0341摩尔)在无水THF(60ml)中的溶液中加入乙酰乙酸乙酯(4.78ml，0.0375摩尔)和哌啶(0.33ml，0.003摩尔)。在完全加入后，将所得的溶液在室温下搅拌1小时15分钟。在减压下除去溶剂并向该油状残余物中加入Et2O(150ml)。在除去不溶物后，将滤液用H2O(2×150ml)和10％NaCl(50ml)洗涤，用Na2SO4干燥并将其减压蒸发至干，得到12.98g(收率为92％)产物(深红色油状物)。
LC-MS411,9，[M-H]-1H NMR(DMSO-d6)(烯醇/酮85∶15的混合物；报告了烯醇型的信号)δ13.17(1H，s)；10.24-9.96(2H，s)；8.12(1H，d，J＝9.04Hz)；7.80(1H，d，J＝1.67)；7.69(1H，dd，J＝1.67，9.04)；4.09(2H，q，J＝7.04)；1.66(3H，s)；1.01(3H，t，J＝7.04)。
实施例18-溴-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯 在搅拌的情况下向2-(7-溴-3，4-二羟基-2-硝基萘-1-基)-3-羟基丁-2-烯酸乙酯(562mg，1.363mmol)在冰AcOH(6ml)中的溶液中加入Zn(357mg，5.46mmol)。将所得的混悬液在90℃下在搅拌的情况下加热6小时。在冷却后，收集所得的固体，将其混悬于H2O(12ml)中并将该混合物在室温下搅拌24小时。收集所得的固体，用H2O洗涤，将其在40℃下真空干燥并将其混悬于AcOEt(4ml)中。将该混合物回流5分钟，然后将其冷却，其后收集所得的固体，用AcOEt洗涤并将其在40℃下真空干燥，得到319mg(收率为65％)产物(红色固体)。
1H NMR(DMSO-d6)δ13.05(1H，s)；8.79(1H，d，J＝1.83Hz)；7.78(1H，d，J＝8.26)；7.59(1H，dd，J＝1.83，8.26)；4.34(2H，q，J＝7.11)；2.46(3H，s)；1.36(3H，t，J＝7.11)。
实施例28-溴-2-溴甲基-3-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯 向在室温下进行搅拌的8-溴-2，3-二甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯(100mg，0.266mmol)在CCl4(8ml)中的混悬液中加入N-溴琥珀酰亚胺(50mg，0.2809mmol)和过氧化二苯甲酰(1mg，0.004mmol)。将所得的混悬液在搅拌的情况下在回流下加热6小时。在冷却后，将固体滤出并将滤液减压蒸发至干。向残余物中加入Et2O并收集固体，得到59mg(收率为49％)产物(红色固体)。
1H NMR(DMSO-d6)δ8.40(1H，d，J＝1.79Hz)；7.82(1H，d，J＝8.29)；7.63(1H，dd，J＝1.79，8.29)；4.98(2H，s)；4.42(2H，q，J＝7.08)；3.99(3H，s)；1.40(3H，t，J＝7.08)。
实施例38-溴-2，3-二甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯
将实施例1的8-溴-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯(1.43g，3.948mmol)、K2CO3(2.73g，19.7525mmol)和CH3I(1.23ml，19.7525mmol)在无水DMF(140ml)中的混悬液在搅拌的情况下和在氮气气氛下，在60℃下加热3小时。在冷却后，将无机固体滤出，将滤液用H2O(140ml)稀释并将其在室温下搅拌2小时。收集沉淀出来的固体，用H2O反复洗涤，将其在40℃下真空干燥，用硅胶色谱对其进行处理，用石油醚(bp 40-60℃)/AcOEt 1/1作为洗脱剂。将所得的固体混悬于AcOEt(6ml)中并将该混合物在回流下加热5分钟。在冷却后，收集所得的固体，用AcOEt和石油醚40-60℃洗涤并将其在40℃下真空干燥，得到445mg(收率为30％)产物(红色固体)。
元素分析 计算值 C 54.27％ H 3.75％ N 3.72％ Br 21.24％实测值 C 54.11％ H 3.72％ N 3.78％ Br 21.08％LC-MS378,1，MH+1H NMR(DMSO-d6)δ8.31(1H，d，J＝1.84Hz)；7.78(1H，d，J＝8.23)；7,59(1H，dd，J＝1.84，8.23)；4.37(2H，q，J＝7.12)；3.90(3H，s)；2.43(3H，s)；1.37(3H，t，J＝7.12)。
实施例48-溴-3-甲基-2-(吗啉-4′-基)甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯
将实施例2的8-溴-2-溴甲基-3-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯(86mg，0.183mmol)和吗啉(32μl，0.367mmol)在无水甲苯(4ml)中的溶液在搅拌的情况下和在氮气气氛下，在50℃下加热30分钟。在冷却后，将沉淀出来的固体滤出并将滤液减压蒸发至干。通过用EtOH(0.2ml)和H2O(0.2ml)的混合物进行处理而使该油状残余物固化。收集所得的固体，用EtOH/H2O 1/1洗涤并将其在40℃下真空干燥，得到44mg(收率为50％)产物(黄色固体)。
元素分析 计算值 C 54.68％ H 4.59％ N 6.07％ Br 17.32％实测值 C 55.93％ H 5.11％ N 5.41％ Br 16.36％1H NMR(DMSO-d6)δ8.05(1H，d，J＝1.01Hz)；7.79(1H，d，J＝8.29)；7.60(1H，dd，J＝1.01，8.29)；4.39(2H，q，J＝6.98)；4.00(3H，s)；3.71(2H，s)；3.54(4H，m)；2.41(4H，m)；1.38(3H，t，J＝6.98)。
实施例58-溴-2-二甲基氨基甲基-3-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯 在搅拌的情况下和在氮气气氛下，向实施例2的8-溴-2-溴甲基-3-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯(57mg，0.125mmol)在无水THF(2ml)中的溶液中加入2M二甲基胺的THF溶液(125μl，0.25mmol)。将所得的混悬液在50℃下在搅拌下加热30分钟。将固体滤出并将滤液减压蒸发至干。将该半固态残余物溶解于无水EtOH(0.4ml)中并将该混合物在室温下搅拌过夜。收集沉淀出来的固体，用Et2O洗涤并将其在40℃下真空干燥，得到44mg(收率为84％)产物(红色固体)。
元素分析 计算值 C 54.3％ H 4.57％ N 6.68％ Br 19.05％实测值 C 53.61％ H 4.61％ N 6.27％ Br 17.26％1H NMR(DMSO-d6)δ8.05(1H，d，J＝1.78Hz)；7.80(1H，d，J＝8.29)；7.60(1H，dd，J＝1.78，8.29)；4.39(2H，q，J＝7.10)；3.98(3H，s)；3.62(2H，s)；2.19(6H，s)；1.38(3H，t，J＝7.10)。
实施例68-溴-2-异丙基氨基甲基-3-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯 将实施例2的8-溴-2-溴甲基-3-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯(995mg，1.749mmol)和异丙胺(0.3ml，3.492mmol)在无水甲苯(40ml)中的溶液在50℃下在搅拌和氮气气氛下加热4小时。将溶剂减压蒸发至干并将固体残余物用2％NaHCO3(15ml)和H2O进行洗涤。然后，将该固体在40℃下真空干燥并在硅胶色谱上对其进行处理，用CH2Cl2和AcOEt作为洗脱剂。将所得的固体用AcOEt(2.8ml)结晶，得到617mg(收率为56％)产物(红色/橙色固体)。
元素分析 计算值 C 55.44％ H 4.89％ N 6.47％ Br 18.44％实测值 C 55.69％ H 4.91％ N 6.55％ Br 18.26％LC-MS433.0，MH+1H NMR(DMSO-d6)δ8.22(1H，d，J＝1.82Hz)；7.79(1H，d，J＝8.08)；7.60(1H，dd，J＝1.82，8.08)；4.38(2H，q，J＝7.12)；3.99(3H，s)；3.86(2H，s)；2.75(1H，set，J＝6.23)；1.86-1.76(1H，s)；1.38(3H，t，J＝7.12)；1,02(6H，d，J＝6.23)。
实施例78-溴-3-叔-丁氧基羰基甲基-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯 将实施例1的8-溴-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯(0.3g，0.8mmol)、溴代乙酸叔-丁酯(0.3ml，1.8mmol)和K2CO3(0.257g，1.8mmol)在无水DMF(10ml)中的混悬液在60℃下在搅拌和氮气气氛下加热3小时。在减压下蒸发掉溶剂并将残余物在H2O(30ml)和AcOEt(30ml)之间进行分配。将有机相分离出来，用H2O(2×30ml)洗涤，用Na2SO4干燥并将其减压蒸发至干。将残余物在硅胶上进行过滤，用己烷/AcOEt 1/1作为洗脱剂。将所得的油状物混悬于己烷(200ml)中并将该混合物在室温下搅拌4天。该油状物缓慢固化，收集所得的固体并用己烷对其进行洗涤，得到0.169g(收率为43％)产物(褐色固体)。
m.p.105-108℃(分解)元素分析 计算值 C 55.47％ H 4.66％ N 2.94％ Br 16.78％实测值 C 55.46％ H 4.67％ N 3.02％ Br 16.54％
1H NMR(DMSO-d6)δ8.35(1H，d，J＝1.74Hz)；7.79(1H，d，J＝8.07)；7.63(1H，dd，J＝1.74，8.07)；5.18(2H，s)；4.39(2H，q，J＝7.11)；2.40(3H，s)；1.45(9H，s)；1.38(3H，t，J＝7.11)。
实施例88-溴-3-羧基甲基-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯 将实施例7的8-溴-3-叔-丁氧基羰基甲基-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯(0.14g，0.3mmol)和三氟醋酸(2ml)在无水CH2Cl2(10ml)中的溶液在室温和氮气气氛下搅拌5小时30分钟。在减压下蒸发掉溶剂；将固体残余物混悬于Et2O(5ml)中并将该混合物在室温下搅拌30分钟。收集所得的固体并用己烷对其进行洗涤，得到0.052g(收率为42％)产物(红色固体)。
m.p.197-200℃(分解)元素分析 计算值 C 51.45％ H 3.36％ N 3.33％ Br 19.01％实测值 C 50.38％ H 3.39％ N 3.27％ Br 18.04％1H NMR(DMSO-d6)δ13.60-12.90(1H，s)；8.34(1H，d，J＝1.69Hz)；7.79(1H，d，J＝8.27)；7.63(1H，dd，J＝1.69，8.27)；5.20(2H，s)；4.39(2H，q，J＝7.11)；2.41(3H，s)；1.38(3H，t，J＝7.11)。
实施例98-溴-3-氨基甲酰基甲基-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯
将实施例1的8-溴-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯(0.3g，0.8mmol)、2-溴乙酰胺(0.124g，0.9mmol)、K2CO3(0.229g，1.6mmol)和KI(0.027g，0.16mmol)在无水DMF(10ml)中的混悬液在室温和氮气气氛下搅拌7小时30分钟。将该混合物用H2O(10ml)稀释并收集所得的固体，用H2O洗涤并将其在室温下真空干燥。将该固体在无水EtOH(50ml)中的混悬液在搅拌的情况下回流1小时。将该混悬液热过滤并收集所得的固体，用己烷对其进行洗涤，得到0.081g(收率为23％)产物(褐色固体)。
m.p.＞250℃元素分析 计算值 C 51.57％ H 3.61％ N 6.68％ Br 19.06％实测值 C 51.26％ H 3.53％ N 6.60％ Br 19.07％1H NMR(DMSO-d6)δ8.33(1H，d，J＝1.73Hz)；7.79(1H，d，J＝8.27)；7.71(1H，s)；7.62(1H，dd，J＝1.73，8.27)；7.33(1H，s)；5.11(2H，s)；4.39(2H，q，J＝7.09)；2.36(3H，s)；1.37(3H，t，J＝7.09)。
实施例105-溴-2-甲基-1H-1，8，11-三氮杂环戊二烯并[l]菲-3-甲酸乙酯
将实施例1的8-溴-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯(0.3g，0.8mmol)、乙二胺(0.08ml，1.2mmol)和冰AcOH(3滴)在EtOH(20ml)中的混悬液在搅拌的情况下回流5小时。在冷却后，将所得的溶液减压蒸发至干，将固体残余物在硅胶上进行过滤，用1/1己烷/AcOEt作为洗脱剂。将所得的固体在40℃下真空干燥，得到0.157g(收率为52％)产物(黄色固体)。
m.p.158-160℃(分解)元素分析 计算值 C 56.27％ H 3.67％ N 10.94％ Br 20.80％实测值 C 55.78％ H 3.85％ N 10.28％ Br 18.52％LC-MS384.1，MH+1H NMR(DMSO-d6)δ13.25(1H，s)；9.69(1H，d，J＝1.83Hz)；9.09(1H，d，J＝8.76)；9.01(1H，d，J＝1.98)；8.98(1H，d，J＝1.98)；7.82(1H，dd，J＝1.83，8.76)；4.41(2H，q，J＝7.07)；2.73(3H，s)；1.43(3H，t，J＝7.07)。
实施例115-溴-2-甲基-1H-1，8，13-三氮杂苯并[a]环戊二烯并[c]蒽-3-甲酸乙酯 将实施例1的8-溴-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯(0.3g，0.8mmol)、1，2-苯二胺(0.134g，1.2mmol)和冰AcOH(3滴)在EtOH(20ml)中的混悬液在搅拌的情况下回流7小时。在冷却后，收集所得的固体并用Et2O和己烷对其进行洗涤，得到0.313g(收率为87％)产物(黄色固体)。
m.p.234-235℃(分解)元素分析 计算值 C 60.84％ H 3.71％ N 9.68％ Br 18.40％实测值 C 60.76％ H 3.70％ N 9.52％ Br 17.98％1H NMR(DMSO-d6)δ13.29(1H，s)；9.56(1H，d，J＝1.92Hz)；9.21(1H，d，J＝8.67)；8.33(1H，m)；8.28(1H，m)；7.97(2H，m)；7.84(1H，dd，J＝1.92，8.67)；4.41(2H，q，J＝7.09)；2.73(3H，s)；1.44(3H，t，J＝7.09)。
实施例12按照与上面实施例中所述操作相似的操作，制备下面的化合物a)8-溴-2-羟基甲基-3-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯b)8-溴-2-二乙基氨基甲基-3-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯c)8-溴-2-甲基-3-苄基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯d)8-溴-3-甲基-2-(4′-甲基哌嗪-1′-基)甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯e)8-溴-3-甲基-2-(哌嗪-1′-基)-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯f)8-溴-3-甲基-2-(4′-(2-羟基乙基)-哌嗪-1′-基)-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯g)8-溴-3-甲基-2-(4′-(2-氨基乙基)-哌嗪-1′-基)-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯实施例13抑制Biot-Hif-1α786-826/GST-p300323/423的基本生物化学试验用荧光试验(DELFIATM)对所述化合物抑制Hif-1α和p300之间的相互作用的能力进行评估。对Freedman SJ等人，Nature Structural Biology2003，10(7)，504-512所述的操作进行适当的修改。
所述化合物是用上面实施例中所述的合成操作获得的。
相当于C-末端786-826氨基酸的人生物素化的Hif-1α片段(生物素化的Hif-1α786-826)得自AnaSpec Inc(San Josè，California，USA)并且在不进行进一步纯化的情况下进行应用。
将表达GST-p300323-423片段的构建体转化到大肠杆菌的BL21(DE3)菌株中。所述的构建体是通过在表达载体pGEX-4T-1(Amersham No.27-45-80-01)中克隆编码范围为氨基酸323至423的p300区域的DNA序列来获得的；所述DNA序列是通过PCR(聚合酶链反应)获得的。将该蛋白区域用1mM异丙基-1-tio-β-D-吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导。通过在存在适宜缓冲液(50mM Tris*HCl pH 8.00，100mM NaCl，0.1mM ZnSO4，1mMDTT，0.1mg/ml溶菌酶和一片不含EDTA的完全蛋白酶抑制剂合剂片(Roche，目录号1873580))的情况下进行声处理来使该细菌溶解并在谷胱甘肽-琼脂糖4B树脂(Amersham Biosciences；no.27-4574-01)上对存在于可溶部分中的GST融合蛋白进行纯化。根据Bradford的描述，用Biorad试验来测定所述蛋白的终浓度(Bradford M.，Anal.Biochem.，72，248，(1976))。用SDS-PAGE对所述样品的纯度进行评估。将这些样品在-80℃下存储在50％甘油中。
该试验是如下那样用NUNC Maxisorp 96孔板进行的。
将C96 NUNC Maxisorp板(得自Nunc，产品序号446612)用链霉抗生物素(Sigma；产品序号S 4762)(在PBS缓冲液(磷酸盐缓冲的盐水10mM磷酸钠，150mM氯化钠，pH 7.4)中至1μg/ml的终浓度)培养过夜。随后，用3×300μl TBST缓冲液(50mM Tris*HCl pH 8.0，150mM NaCl，0.05％(v/v)吐温20)对各孔进行洗涤。然后，向各孔中加入100μL 10nM生物素化的Hif-1α786-826在TBSB(50mM Tris-HCl pH 8.0，150mM NaCl，5％(w/v)BSA(Sigma，产品序号A 2153))中的溶液并将其在25℃下培养1小时。在各板的最后两行中，仅加入TBSB缓冲液。随后，用300μl TBST缓冲液将各孔洗涤三次。由此制备的板代表了所述的试验板。
独立地制备在各孔中包含10μl溶解于DMSO中(至10μM的浓度)的各试验化合物的板(子板(daughter plate))。向该板中加入100μl 111pM用培养缓冲液(添加了0.1％(v/v)吐温20，0.5mM DTT，10μM ZnCl2的TBSB)稀释了的GST-p300323-423溶液并将全部内容进行混合。立即将100μl所述子板中所包含的混合物转移到所述的试验板中。
用浓度为10μM的80种不同化合物制备各子板，留出其最后两行孔，向其各孔中加入10μl DMSO。这两行孔表示阳性(第11行，+Hif-1)和阴性(第12行，-Hif-1)对照。
在将其在25℃下培养1小时后，将各孔用3×300μl TBST缓冲液(50mM Tris-HCl pH 8,0.150mM NaCl，0.05％(v/v)吐温20)进行洗涤。然后，向各孔中加入60.8ng溶解于100μl包含10μM ZnCl2的TBST缓冲液中的铕-标记的抗-GST抗体(DELFIA Eu-N1标记的；Perkin Elmer；产品序号A D 0251)。将其在室温下培养1小时后，将各孔用3×300μl TBST缓冲液进行洗涤，然后向其中加入100μl信号放大溶液(EnhancementSolution，Perkin Elmer产品序号1244-105)。
然后，将这些板用FUSIONα-FP-HT读数器(Perkin Elmer)在时间分辨荧光模式下进行读数。
如下那样计算所述化合物的活性。从所有其它孔的荧光值中减去试验板第12行中阴性对照的荧光均值。然后，将所得的单独各孔的荧光值除以第11行中阳性对照的荧光均值(其表示最大信号值，100％)并将其表示为百分比值。将抑制值表示为各孔所计算的信号百分比与100的差异。
使用其中所述化合物在各行中以范围为90μM至0.178μM的10种不同浓度存在的子板，可以计算出剂量-响应曲线，可以由其获得IC50值(将信号抑制50％所需化合物的浓度)。仅包含基质的第11和12行是对照。
在表1中报道了用本发明的一些化合物获得的IC50值。
表1
通过在进行了遗传修饰以稳定表达其中萤火虫萤光素酶的开放阅读框在大鼠VEGF基因启动子的控制下的载体的人肝癌Hep3B细胞(Hep3B-VEGF萤光素酶)上进行的细胞试验来对在上述Hif-1α/p300试验中具有抑制活性的化合物进行评估。
使用去铁胺(其诱导了缺氧)的Hif-1诱导法通过VEGF启动子的活化诱导了萤光素酶转录，其接下来又造成了萤光素酶活性增加，可以用可通过商业途径获得的试剂盒对其进行测量。干扰Hif-1α/p300复合体的化合物抑制了Hif-依赖性萤光素酶活化，从而降低了萤光素酶活性。因此，这种试验使得可以对指向于VEGF启动子(其对于VEGF产生和随后肿瘤血管的生成都是必需的)的化合物的活性进行评估。
Hep-3B-VEGF萤光素酶细胞系是根据下面的操作获得的。
将人肝癌细胞Hep-3B(ATCC参考序号HB-8064)在2ml DMEM/10％FCS中以2.5×105个细胞/孔的浓度接种到6孔板中并在第二天用Fugene 6(Roche Biochemicals)对其进行转染。在各孔中，转染混合物包含6μl转染试剂Fugene 6、1μg pxp2-VEGF-萤光素酶报道质粒(VEGF大鼠启动子，NCBI GenBank登记号为U22373，Levy等人，J.Biol.Chem.270(22)，13333-13340.1995)和10ng pcDNA3.1(+)质粒(INVITROGEN)，其使得这些细胞对新霉素有抗药性。根据制造商的指导来进行转染。
通过以“稀释极限”操作为基础的克隆方法(Sambrook J.，Fritsch E.F.and Maniatis T.(1989)分子克隆，实验室手册(Molecular Cloning，ALaboratory Manual)；Cold Spring Harbor Laboratories)来选择适宜的细胞群(抗新霉素表型)。用所选择的被稳定转染的细胞来进行随后用于萤光素酶表达/活性的试验——“萤光素酶试验”和用于对上清液中所分泌的VEGF进行定量的试验——“分泌的VEGF的ELISA试验”)。
使用下面的实验方案第1天将Hep-3B-VEGF萤光素酶细胞以1×104个细胞/孔/125μl介质的密度接种到96-孔“空白”板(Greiner的产品)中，然后，使之在恒温箱(37℃/5％CO2)中粘附过夜。
第2天将75μl化合物的“3.2x工作溶液”(之前在培养基中制得的，从而使得DMSO浓度为1.6％v/v)加入到所述细胞中(分体积/孔＝200μl，化合物的分浓度＝1.2x，DMSO的分浓度＝0.6％)。在将其在恒温箱中培养1小时后，通过加入40μl/孔6x(600μM)去铁胺的储备溶液(最终体积/孔＝240μl，化合物的终浓度＝1x，DMSO的终浓度＝0.5％，去铁胺的终浓度＝1x≈100μM)来用化学方法诱导缺氧。然后，将这些板再恒温18-20小时。
第3天如下那样进行所述的“萤光素酶试验”和“分泌的VEGF的ELISA试验”。
“分泌的VEGF的ELISA试验”用试剂盒“DuoSet Elisa Development System human VEGF”试剂盒(R&D Systems)对所分泌的VEGF进行定量。将100μl/孔的上清液从所述的具有Hep3B/VEGF萤光素酶克隆的细胞系的“空白”96孔板转移到透明的96-孔板(Maxisorp)中并根据所述试剂盒制造商的指示进行试验。“萤光素酶试验”用Bright Glo试剂(Promega)来对萤光素酶受体的表达进行定量。在除去上清液并用PBS洗涤一次后，向具有Hep3B/VEGF-萤光素酶细胞的空白96-孔板中加入40μl/孔的Bright Glo试剂。通过用光度计对该板进行读数来测定所述报道基因的表达水平。
在表2中报告了本发明一些化合物的IC50值(使得萤光素酶信号被抑制50％或者使得所分泌的VEGF降低50％的化合物浓度)表2
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30)A.l.Kung等人，Cancer Cell，6，33-43(2004)
权利要求
1.通式(I)的化合物或其盐、异构体、对映异构体或非对映异构体用于制备抗肿瘤治疗组合物的应用 其中 是单键或双键；X和X’独立地是O；OH；NH；NH2；NH2OH；或者X和X’是氮并且和与其相连的碳原子一起形成一种6-或10-元杂环或杂芳族环；R1和R2和与其相连的原子(式(I)中的6-和7-位)一起形成一种6-元芳族或5-或6-元杂芳族环，优选为任选地被(C1-C4)酰基、(C1-C4)烷基磺酰基氨基或(卤素)C1-C4烷基、卤素、胺、单或二(C1-C4)烷基胺、羟基、(C1-C4)烷氧基、巯基、(C1-C4)烷硫基、氨基甲酰基、腈、氨基磺酰基、苯基取代的苯环；R3是氢；酰基(C1-C4)、(C1-C4)烷基磺酰基、(C1-C4)烷基氨基磺酰基、任选地夹杂有-O-、-S-、-N＝、-NH-、-NHCONH-、-NHCOO-、-NHSO2NH-、-NHC(＝NH)NH-、-NHC(＝NH)-、-NHCSNH-、-CO-、-COO-、-CONH-、-SO2-、-SO2NH-、-CH＝CH-、-C≡C-基或者被卤素、-NH2、-OH、-SH、-OCONH2、-COOH、-SO2NH2、-CONH2、-NHCONH2、-CN、苯基、5-或6-元杂环所取代的直链或支链(C1-C4)烷基；R4是-NR6R7，其中R6和R7独立地是氢、(C1-C4)酰基、(C1-C4)烷基磺酰基、(C1-C4)烷基氨基磺酰基、任选地被卤素、胺、羟基、巯基、氨基甲酰基、腈、苯基或5-或6-元杂环，特别是吗啉取代的直链或支链(C1-C4)烷基；-OR6；氨基甲酰基；任选地夹杂有-O-、-S-、-N＝、-NH-、-CO-、-COO-、-CONH-、-SO2-、-SO2NH-基或者被卤素、胺、羟基、巯基、氨基甲酰基、腈、苯基或5-或6-元杂环取代的直链或支链(C1-C4)烷基；最多10-元的芳族或杂芳族环；5-或10-元杂环；R5是NH2；NR6R7；OR6；任选地夹杂有-O-、-S-、-N＝、-NH-、-CO-、-COO-、-CONH-、-SO2-、-SO2NH-或者被卤素、胺、羟基、巯基、氨基甲酰基、腈、苯基或5-或6-元杂环所取代的直链或支链(C1-C4)烷基；最多10-元的芳族或杂芳族环；5或6-元杂环；脲基。
2.如权利要求1所述的化合物的应用，其中R1和R2形成任选地被卤素取代的苯环。
3.如权利要求1所述的化合物的应用，其中X和X′是N并且和与其相连的碳原子一起形成二嗪或苯并二嗪。
4.如权利要求1-2所述的化合物(I)的应用，其中X＝X’＝O。
5.如权利要求1-2所述的化合物(I)的应用，其中X＝X’＝O；R3选自H、甲基、苄基、羧基甲基、叔-丁氧基羰基甲基、氨基甲酰基甲基；R4是任选地被羟基或氨基或者被伯胺或仲胺取代的甲基或乙基；R5是乙氧基羰基。
6.如权利要求1-5所述的化合物(I)的应用，所述化合物选自-8-溴-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；-8-溴-2-溴甲基-3-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；-8-溴-2，3-二甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；-8-溴-3-甲基-2-(吗啉-4′-基)甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；-8-溴-2-二甲基氨基甲基-3-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；-8-溴-2-异丙基氨基甲基-3-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；-8-溴-3-叔-丁氧基羰基甲基-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；-8-溴-3-羧基甲基-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；-8-溴-3-氨基甲酰基甲基-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；-5-溴-2-甲基-1H-1，8，11-三氮杂环戊二烯并[l]菲-3-甲酸乙酯；-5-溴-2-甲基-1H-1，8，13-三氮杂苯并[a]环戊二烯并[c]蒽-3-甲酸乙酯；-8-溴-2-羟基甲基-3-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；-8-溴-2-二乙基氨基甲基-3-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；-8-溴-2-甲基-3-苄基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；-8-溴-3-甲基-2-(4′-甲基哌嗪-1′-基)甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；-8-溴-3-甲基-2-(哌嗪-1′-基)-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；-8-溴-3-甲基-2-(4′-(2-羟基乙基)-哌嗪-1′-基)-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；-8-溴-3-甲基-2-(4′-(2-氨基乙基)-哌嗪-1′-基)-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯。
7.如权利要求1-6中所述的化合物(I)用于制备治疗肺癌、乳癌、前列腺癌、成神经细胞瘤、多形成胶质细胞瘤、黑素瘤、中枢神经系统肿瘤、口咽鳞状上皮细胞癌、宫颈癌、卵巢、食管、肾、结肠、头颈癌和少突神经胶质细胞瘤的抗肿瘤治疗组合物的应用。
8.如权利要求1-6中所述的化合物(I)用于制备预防、抑制或阻断肿瘤患者体内的血管生成的治疗组合物的应用。
9.如权利要求1-6中所述的化合物(I)用于制备抑制肿瘤生长和转移的治疗组合物的应用。
10.选自下列的抗肿瘤化合物-8-溴-3-叔-丁氧基羰基甲基-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯；-8-溴-3-羧基甲基-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯-8-溴-3-氨基甲酰基甲基-2-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯-5-溴-2-甲基-1H-1，8，11-三氮杂环戊二烯并[l]菲-3-甲酸乙酯-5-溴-2-甲基-1H-1，8，13-三氮杂苯并[a]环戊二烯并[c]蒽-3-甲酸乙酯-8-溴-3-甲基-2-(4′-甲基哌嗪-1′-基)甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯-8-溴-3-甲基-2-(哌嗪-1′-基)-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯-8-溴-3-甲基-2-(4′-(2-羟基乙基)-哌嗪-1′-基)-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯-8-溴-3-甲基-2-(4′-(2-氨基乙基)-哌嗪-1′-基)-甲基-4，5-二氧代-4，5-二氢-3H-苯并[e]吲哚-1-甲酸乙酯。
11.一种包含如权利要求1-6所定义的式(I)的化合物以及可药用的载体或赋形剂的治疗组合物。
12.用于胃肠外给药的如权利要求11所述的治疗组合物。
全文摘要
具有抗肿瘤活性的3H－苯并[e]吲哚－4，5－二酮衍生物、其制备方法以及包含其的药物组合物。
文档编号A61P35/04GK101083983SQ200580044074
公开日2007年12月5日 申请日期2005年12月22日 优先权日2004年12月23日
发明者M·格鲁尼, M·卡辛, G·科莱拉, S·德穆纳里, G·帕迪, P·帕韦西 申请人:欧洲细胞治疗责任有限公司