专利名称：治疗h的制作方法
技术领域：
本发明关于一种治疗H22肝癌药物。具体地说是以中草药为原料制备治疗H22肝癌药物胶囊、水丸、蜜丸，本发明还关于该药物的制备方法。
背景技术：
中药斑蝥早在十三世纪的《仁斋直指方》中就有记载，可用治于乳癌及腹部癌。古人还常用“斑蝥煮鸡蛋，弃斑蝥食蛋”的偏方治疗肝癌及其它消化系统癌症，至今仍在民间沿用。中医学认为斑蝥性寒味辛，有大毒。据《神农本草经》记载，斑蝥可以治疗痈疽、溃疡、癣疮等病症，具有攻毒蚀疽、破血散结的作用。临床发现其还有多种新用途，治疗一些疑难杂症具有独特的疗效，如治疗风湿痛、神经痛、梅核气、斑秃、乳腺增生、鼻炎、传染疣、肝炎、癌肿等，尤其对原发性肝癌有肯定的治疗效果。
原发性肝癌(PHC，以下简称肝癌)为常见的消化道恶性肿瘤，东亚地区是世界肝癌高发区，其发病率在恶性肿瘤中居第三位，男性肝癌发病率约是女性的3倍，新病例中73％是男性。肝癌病死率高(死亡率/发病率＝0.95)，2000年死亡病例39.6万，在恶性肿瘤死因中排列第二。如何有效地防治本病是医药界面临的一个重要课题。目前，特别对H22肝癌治疗还没有特效的药物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗H22肝癌，且安全有效，适于长期服用的药物及其胶囊、水丸、蜜丸的剂型。
本发明的另一目的在于提供治疗H22肝癌药物的制备方法。
本发明的目的是通过以下技术方法来实现的本发明发明了由斑蝥为主要成分的药物及其胶囊、水丸、蜜丸的剂型，然后选择移植性H22肝癌小鼠为模型，观察该药物的抑瘤作用，检测T淋巴细胞增殖功能、NK细胞杀伤功能、T淋巴细胞表型变化及IL-12、IL-4含量。
本发明药物是由下列组分制成的(用量为重量份)斑蝥10-20份、陈皮5-10份、谷芽5-10份、淀粉60-90份。
本发明药物的配方优选重量(份)配比范围是斑蝥12-18份、陈皮6-8份、谷芽6-8份、淀粉70-80份。
本发明药物的最佳重量(份)配比是斑蝥15份、陈皮7份、谷芽7份、淀粉75份。
本发明药剂是胶囊、水丸、蜜丸。
本发明药物的制备方法(一)1、分别干燥、粉碎斑蝥、陈皮、谷芽、淀粉；2、收集分别过120目筛的斑蝥、陈皮、谷芽和淀粉混合；3、将上步骤的混合物过80目筛，再反复混合至均匀，装入胶囊。
本发明药物的制备方法(二)1、分别干燥、粉碎斑蝥、陈皮、谷芽、淀粉；
2、收集分别过120目筛的斑蝥、陈皮、谷芽和淀粉混合；3、将上步骤的混合物过80目筛，再反复混合至均匀，用水泛丸，干燥即得。
本发明药物的制备方法(三)1、分别干燥、粉碎斑蝥、陈皮、谷芽、淀粉；2、收集分别过120目筛的斑蝥、陈皮、谷芽和淀粉混合；3、将上步骤的混合物过80目筛，再反复混合至均匀，加炼蜜制成蜜丸，干燥即得。
药效学研究1材料和方法1.1实验材料1.1.1治疗H22肝癌药物的制备取中药斑蝥置煎煮容器内，加相当于药材量5-7倍的冷水浸泡1-2h，煮沸30min，过滤。药渣加3-5倍量水继续煎煮，煮沸20min，过滤。合并两次滤液，于水浴上浓缩成相当于原生药材0.01g/ml的药液，冷却装入灭菌药瓶，置4℃冰箱备用。
1.1.2动物C57BL/6小鼠，雄性，10周龄，购自上海中科院动物中心。
1.1.3瘤株肝癌H22瘤株，由上海市免疫学研究所提供。
1.1.4试剂ConA(Sigma公司)，CD3、CD4、CD8单抗(eBioScience公司)，NK细胞杀伤试剂(上海市免疫研究所自配)，3H-TdR(上海原子能研究所)，IFN-γ和IL-4检测试剂盒(晶美公司)。
1.2实验方法1.2.1造模方法无菌条件下取生长7-9d传代接种的H22细胞株，将细胞5×106接种于每只小鼠右侧腋窝皮下。
1.2.3动物分组及给药方法小鼠30只，10只作为正常组，其余均按上法造模。小鼠接种肿瘤5天后，随机分成生理盐水组和实验组，每组10只，生理盐水组予以生理盐水处理，实验组给予治疗H22肝癌药物0.01g/ml，均灌胃0.2ml/只，连续给药15天。
1.2.4标本采集停药次日，断颈处死小鼠，剥离肿瘤组织并无菌取脾。
1.3检测指标1.3.1小鼠体重、瘤重及抑瘤率胃饲15天后，称取两组小鼠体重；处死小鼠后完整剥离肿瘤，用电子天平称取瘤重，计算抑瘤率。
1.3.2T淋巴细胞增殖功能采用3H-TdR掺入法。在96孔平底培养板中，每孔加入小鼠脾细胞悬液100μl，浓度为5×106/ml，三复孔培养。同时，分别加入ConA 10μl。于37℃、5％CO2条件下培养72h。终止培养前16h，每孔加入3H-TdR 1μCi。用细胞收集仪将细胞收集于玻璃纤维滤纸上，β-液闪仪测定cpm值，并计算刺激指数。
1.3.3NK杀伤功能用1640培养液分别调整小鼠脾细胞(效应细胞)和体外培养的K562细胞(靶细胞)浓度为5×106/ml和1×105/ml。按效∶靶＝50∶1比例，各取100μl加入96孔平底培养板，37℃、5％CO2条件下共同培养4h。并设自然释放和最大释放组作为实验阴阳性对照。然后1000rpm，离心5min。吸取上清100μl，加入底物液100μl，静置3min显色。再加入1N HCL终止反应，490nm波长读取OD值。计算NK细胞的杀伤百分率。
1.3.4 T淋巴细胞表型采用直接免疫荧光及流式细胞仪分析。取小鼠脾细胞1×106，加入适量PE-Cy5-CD3、FITC-CD4和PE-CD8混合单抗，室温避光孵育20min。1000rpm，离心5min，洗涤2次后，加入300μl固定液，上机检测。
1.3.5细胞因子采用ELISA法。收集小鼠脾细胞经ConA刺激24h后的培养上清，按照细胞因子检测试剂盒操作说明分别测定IFN-γ和IL-4的含量。
1.4统计学处理采用Statpal团体T检验统计分析各组别数据的差异显著性。
2结果2.1治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠体重、瘤重及抑瘤率的影响结果如图1所示。与正常组比较，两组发生肿瘤的小鼠体重均减轻，而实验组小鼠体重下降明显(P＝0.001)，但实验组小鼠肿瘤重量显著小于生理盐水组小鼠瘤重(P＝0.0015)，抑瘤率达65.76％。表明治疗H22肝癌药物能有效抑制小鼠肝癌细胞的生长。
2.2治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠T淋巴细胞增殖的影响两组T淋巴细胞转化功能均较正常小鼠有显著降低。实验组小鼠T淋巴细胞转化刺激指数增加显著(SI＝4.34＞3，P＝0.00129)，具有较强的增殖能力，结果见图2。说明治疗H22肝癌药物能显著上调小鼠的T淋巴细胞增殖功能。
2.3治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠NK细胞杀伤功能的影响与正常组比较，单纯胃饲生理盐水组NK细胞杀伤活性无显著性差异，说明罹患肝癌后，并不能有效地刺激小鼠NK细胞产生针对肿瘤的免疫应答。实验组小鼠NK细胞杀伤活性显著增高，为生理盐水组的5倍(P＜0.005)，结果见图3。说明治疗H22肝癌药物能增强患瘤小鼠NK细胞的杀伤功能。
2.4治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠T细胞亚群变化的影响如图4所示，与正常组比较，两肿瘤小鼠组T细胞数量均有明显下降(P＜0.05)，说明其免疫功能低下。同时，两组小鼠外周T细胞亚群比例发生明显变化CD4+/CD8+比例倒置，这可能是因为发生肿瘤后，小鼠体内肿瘤特异性CD8+T细胞克隆增殖的结果。而生理盐水组与实验组相比，后者更能改变T淋巴细胞亚群比例。
2.5治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠分泌细胞因子能力的影响IFN-γ测定显示见图5，实验组小鼠T细胞分泌IFN-γ能力有显著升高(P＜0.05)，说明治疗H22肝癌药物能显著上调CD4+Th1细胞的分泌能力，并进而上调小鼠细胞免疫功能，促进CD8+细胞毒性T细胞的抗肿瘤作用。IL-4检测结果显示见图6，实验组小鼠T细胞分泌IL-4的能力有显著升高(P＜0.001)，说明治疗H22肝癌药物能显著上调CD4+Th2细胞的分泌能力，并进而上调小鼠体液免疫功能。综合以上两种情况，实验组既能上调小鼠细胞免疫功能，又能有效刺激小鼠的体液免疫功能，因此能有效抑制小鼠肿瘤的生长。
本发明所公开治疗H22肝癌药物胶囊、水丸、蜜丸及其制备方法，其优点表现在该药物属于中药复方制剂，其配伍符合中药“君臣佐使”原则，具有中药复方药学最大化，毒性最小化，作用部位多靶点的优点。经实验初步验证，本药具有抑制肿瘤生长和调节机体免疫功能的双重效应，为临床治疗H22肝癌提供了依据。同时，本药毒副作用较小，适于长期服用，是一种安全有效的药物。
图1显示治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠体重及瘤重的影响。
图2显示治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠T淋巴细胞增殖的影响注1.正常组T淋巴细胞转化刺激指数为42.01；注2.与生理盐水组比较，*P＜0.01。
图3显示治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠NK细胞杀伤功能的影响注与生理盐水组比较，*P＜0.01。
图4显示治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠T细胞亚群变化的影响。
图5显示治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠分泌IFN-γ能力的影响注与生理盐水组比较，*P＜0.01。
图6显示治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠分泌IL-4能力的影响注与生理盐水组比较，*P＜0.01。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述。
实施例1治疗H22肝癌药物胶囊制备(一)1、分别干燥、粉碎斑蝥、陈皮、谷芽、淀粉；2、收集分别过120目筛的斑蝥10g、陈皮5g、谷芽10g和淀粉90g混合；3、将上步骤的混合物过80目筛，再反复混合至均匀，装2号胶囊，制得治疗H22肝癌药物胶囊。
实施例2
治疗H22肝癌药物胶囊制备(二)1、分别干燥、粉碎陈皮、谷芽、斑蝥、淀粉；2、收集分别过120目筛的斑蝥15g、陈皮7g、谷芽7g和淀粉75g混合；3、将上步骤的混合物过80目筛，再反复混合至均匀，装2号胶囊，制得治疗H22肝癌药物胶囊。
实施例3治疗H22肝癌药物胶囊制备(三)1、分别干燥、粉碎陈皮、谷芽、斑蝥、淀粉；2、收集分别过120目筛的斑蝥20g、陈皮10g、谷芽5g和淀粉60g混合；3、将上步骤的混合物过80目筛，再反复混合至均匀，装2号胶囊，制得治疗H22肝癌药物胶囊。
实施例4治疗H22肝癌药物水丸制备(一)1、分别干燥、粉碎陈皮、谷芽、斑蝥、淀粉；2、收集分别过120目筛的斑蝥10g、陈皮10g、谷芽5g和淀粉90g混合；3、将上步骤的混合物过80目筛，再反复混合至均匀，用水泛丸，干燥即得。
实施例5治疗H22肝癌药物水丸制备(二)
1、分别干燥、粉碎陈皮、谷芽、斑蝥、淀粉；2、收集分别过120目筛的斑蝥20g、陈皮10g、谷芽5g和淀粉60g混合；3、将上步骤的混合物过80目筛，再反复混合至均匀，用水泛丸，干燥即得。
实施例6治疗H22肝癌药物水丸制备(三)1、分别干燥、粉碎陈皮、谷芽、斑蝥、淀粉；2、收集分别过120目筛的斑蝥15g、陈皮7g、谷芽7g和淀粉75g混合；3、将上步骤的混合物过80目筛，再反复混合至均匀，用水泛丸，干燥即得。
实施例7治疗H22肝癌药物蜜丸制备(一)1、分别干燥、粉碎陈皮、谷芽、斑蝥、淀粉；2、收集分别过120目筛的斑蝥15g、陈皮7g、谷芽5g和淀粉60g混合；3、将上步骤的混合物过80目筛，再反复混合至均匀，加炼蜜90g制成蜜丸，干燥即得。
实施例8治疗H22肝癌药物蜜丸制备(二)1、分别干燥、粉碎陈皮、谷芽、斑蝥、淀粉；
2、收集分别过120目筛的斑蝥15g、陈皮10g、谷芽10g和淀粉80g混合；3、将上步骤的混合物过80目筛，再反复混合至均匀，加炼蜜95g制成蜜丸，干燥即得。
实施例9治疗H22肝癌药物蜜丸制备(三)1、分别干燥、粉碎陈皮、谷芽、斑蝥、淀粉；2、收集分别过120目筛的斑蝥10g、陈皮7g、谷芽7g和淀粉75g混合；3、将上步骤的混合物过80目筛，再反复混合至均匀，加炼蜜100g制成蜜丸，干燥即得。
权利要求
1.一种治疗H22肝癌药物，其特征在于它主要是由下列重量份的原料药制成斑蝥10-20份、陈皮5-10份、谷芽5-10份。
2.根据权利要求1所述的药物，其特征在于它还包括淀粉60-90份。
3.根据权利要求2所述的药物，其特征在于它是由下列重量份的原料药制成斑蝥12-18份、陈皮6-8份、谷芽6-8份、淀粉70-80份。
4.根据权利要求3所述的药物，其特征在于它是由下列重量份的原料药制成斑蝥15份、陈皮7份、谷芽7份、淀粉75份。
5.根据权利要求1-4任一所述药物，其特征在于所说的药剂是胶囊、水丸、蜜丸。
6.根据权利要求1所述的药物的制备方法，其特征在于称取已分别过120目筛的斑蝥、陈皮、谷芽和淀粉混合，过80目筛，再反复混合至均匀。
7.根据权利要求6所述的药物的制备方法，其特征在于将所得的混合均匀物装入胶囊。
8.根据权利要求6所述的药物的制备方法，其特征在于将所得的混合均匀物用水泛丸，干燥，得水丸。
9.根据权利要求6所述的药物的制备方法，其特征在于将所得的混合均匀物加炼蜜，干燥得蜜丸。
全文摘要
本发明公开一种治疗H
文档编号A61K35/56GK1879819SQ20061002628
公开日2006年12月20日 申请日期2006年4月29日 优先权日2006年4月29日
发明者周阿高, 张勇, 孔德云, 葛海良, 任秋华 申请人:上海交通大学医学院附属第九人民医院