专利名称：温度敏感型水凝胶释药体系及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种药物技术领域的组合物及其制备方法，具体是一种温度敏感型水凝胶释药体系及其制备方法。
背景技术：
温度敏感型水凝胶是一种体积随温度变化而变化的高分子水凝胶。所谓温敏是指水凝胶的吸水(或溶剂)量在某一温度有突发性变化。即溶胀比(所吸水或溶剂的量与干凝胶重量的比例)在某一温度会突然变化，此温度称为敏感温度。在临界温度附近，若随温度增高，它的溶胀率会突然增大的水凝胶被称为“热胀型”水凝胶(具有高临界溶解温度UCST)；反之，随温度增高而溶胀率突然降低的水凝胶则被称为“热缩型”水凝胶(具有低临界溶解温度LCST)。
聚氧化乙烯(PEO)与聚氧化丙烯(PPO)形成的嵌段共聚物已被美国FDA批准为药用辅料的高分子。三嵌段类的商品名为Pluronic(BASF)或Poloxamer(ICI)，结构为PEO-PPO-PEO；或PPO-PEO-PPO；多嵌段共聚物的商品名为Tet tonic，结构为(R1)2NCH2CH2N(R2)2，其中R1、R2可分别为-PEO-PPO、-PPO-PEO。而接枝共聚物PEO-PPO-PEO-g-PAA的商品名为Smart HydrogelTM。因它在1％～5％的聚合物浓度，人体环境(37.5℃，pH＝7.4)下，能形成凝胶，且具有黏弹性和生物黏附性，又对视觉无障碍，无毒副作用，能很好地充当眼药、疏水性药物缓释载体。但由于poloxamer不能降解，虽然释放曲线能通过添加甲基纤维素、羟丙甲基纤维素、聚己酸内酯进行调节适当延长缓释时间，但在安全性允许的浓度范围内，在注射部位不到一周就全部溶解，不能用作长期缓释，如果超过允许的最高使用浓度16％会表现明显的毒性症状。1997年美国盐湖城的MacroMed公司发明了ABA、BAB型可生物降解的三嵌段共聚物，在体温附近发生溶液-胶转化，其中A代表疏水的聚乳酸类高分子，B代表亲水的聚乙二醇，调节A、B链断的比例可以实现4-6周降解，正试图应用于非胃肠道给药系统缓释药物。
温敏水凝胶的这种依赖于温度变化的膨胀-收缩过程是可逆的。利用这种性质控制药物的释放是温敏水凝胶应用于智能给药系统的基础。但是上述提及的温敏水凝胶体系在升温/降温到相转变的时候，借助氢键作用的改变实现凝胶快速脱水固化释放药物，从而发生突释现象。
经对现有技术的文献检索发现，Sibao Chen等在International Journal ofPharmaceutics(《国际药剂学杂志》)2005年第288期第207-218页，发表文章“Triblock copolymerssynthesis，characterization，and delivery of amodel protein”(三嵌段共聚物合成、表征、模型蛋白的输送研究)，采用聚乙二醇、乙交酯、丙交酯无氧无水条件下开环聚合得到ABA型三嵌段共聚物，将三嵌段共聚物在室温下配制成23％水溶液得到温敏水凝胶制剂。选择溶菌酶<Lysozyme>做模型药，体外释放10天，但第一天内尤其是给药后几小时内存在突释现象(＞20％)；目前美国盐湖城MacroMed Inc公司正在应用此ABA三嵌段共聚物(商品名ReGel)进行生长素、白细胞生长因子、胰岛素的临床研究。但单纯依靠ABA三嵌段共聚物缓释技术，由于相转变快速结胶固化微观造成氢键作用减弱，宏观导致大量水分子从水凝胶中流失，部分担载药物尤其是亲水性药物短时间内快速突释，第一天释放大于20％，不能做到安全、有效的平稳缓释。
MacroMed Inc采用锌离子与生长素交联沉淀形成颗粒后再包裹到Regel中，试图以此缓解由于氢键作用减弱导致的突释现象，结果表明对比直接包裹生长素的Regel第一天释放量有所降低，但仍旧高于20％，缓解突释的效果不理想。而且这种方法仅仅局限于生长素，因为体内环境下，锌离子与生长素络合后，可以提高与受体结合能力，从而提高生长素的体内生理活性作用，然而将这种方法应用到其他蛋白，例如促红细胞生成素EPO则造成了蛋白分子的聚集。
发明内容
本发明的目的是针对现有温度敏感水凝胶作为治疗物质载体时，由于溶液-凝胶相转变导致的脱水固化而造成的水分流失引起的药物突释，为了有效克服突释问题，提供一种温度敏感型水凝胶释药体系及其制备方法，使其可以改善释放曲线，同时提高载药量，并在制剂、贮存、释放过程中稳定担载药物；同时亦可以实现疫苗输送的脉冲释药。
本发明是通过以下技术方案实现的，本发明所述的温度敏感型水凝胶智能释药体系包括一个亲水/疏水特性和体积随温度变化的温敏连续相和亲水性分散相。温敏连续相由温敏水凝胶组成，亲水分散相由高分子多糖、担载药物组成；各组分的重量百分比为温敏水凝胶20-90％，高分子多糖5-50％，担载药物0.1-30％。其中亲水分散相中可以添加聚电解质、小分子糖，重量百分比为聚电解质0-4.9％，小分子糖0-10％。
本发明所述的温度敏感型水凝胶智能释药体系的制备方法，采用以下三种方法中的任意一种制备的<1>多糖高分子颗粒-温敏水凝胶复合法a)制备载药多糖高分子颗粒①配制两种高分子水溶液，分别用作连续相和分散相，在-4℃到95℃范围内两相混合得到均相溶液或混悬液；或者在任何一相中添加聚电解质充当乳液稳定剂，在-4℃到95℃范围内乳化得到乳液；担载药物溶解在分散相中。
②将①步骤中得到的均相溶液、悬浊液、乳液冷冻干燥，连续相被溶剂洗涤除去，得到担载了药物的多糖高分子颗粒，粒径范围从10nm-50um；b)物理混合或化学方法制备温敏水凝胶基质，或者直接选择具有温敏特征的天然高分子，即用或冻干保存；c)制备多糖高分子颗粒-温敏水凝胶复合物；将b)步骤制得的温敏水凝胶基质在-4℃到95℃范围内配成溶液，将a)步骤中得到的多糖高分子颗粒加入到水凝胶溶液中在4℃到95℃范围内复合，即用或冻干保存临用前复溶。
<2>多糖-温敏水凝胶亲水乳化法a)物理混合或化学方法制备温敏水凝胶，或者直接选择具有温敏特征的天然高分子，即用或冻干保存；b)配制多糖高分子溶液，担载药物溶解在此高分子溶液中，添加聚电解质充当乳液稳定剂；c)-4℃-95℃范围内，配制温敏水凝胶溶液；d)将b)加入到c)中，乳化得到担载药物的多糖-水凝胶乳液，液滴粒径范围从10nm-50um，即用；e)或冻干保存临用前复溶。
<3>多糖-温敏水凝胶乳化法a)物理混合或化学方法制备温敏水凝胶，或者直接选择具有温敏特征的天然高分子，即用或冻干保存；
b)配制多糖高分子溶液，担载药物溶解在此高分子溶液中；c)-4℃-95℃范围内条件下配制温敏水凝剂溶液；d)将b)加入到c)中，混合均匀得到担载药物的多糖-水凝胶溶液/悬浊液，即用；e)或冻干保存临用前复溶。
本发明所述的温度敏感型水凝胶智能释药体系包括了一个亲水/疏水特性和体积随温度变化的温敏连续相和亲水性分散相。
本发明所述的温敏连续相，由温敏水凝胶组成，可以选用具有温敏特征的天然高分子、N-异丙基丙烯酰胺共聚物<NiPAAM>、聚氧乙烯/聚氧丙烯嵌段共聚物及其衍生物<PEO/PPO>、聚乙二醇/聚乳酸类嵌段共聚物等温敏水凝胶；其中嵌段共聚物可以是AB型两嵌段，ABA、BAB、ABC型三嵌段、星型嵌段、多嵌段、接枝嵌段等嵌段共聚物。温敏水凝胶可以是热胀型或热缩型温敏水凝胶。温敏水凝胶的结构可以是交联型也可以是非交联型；可以通过物理混合或者化学方法制得。温敏水凝胶的相转变(即亲水/疏水特性和体积变化引起的相变化)温度可以是体温、也可以高于或者低于体温；本发明所述的亲水分散相由高分子多糖、担载药物组成。亲水分散相中可以添加聚电解质、小分子糖，聚电介质可以提高乳液的稳定性，小分子糖可以改善冻干过程中的外观和提高担载药物的稳定性。亲水分散相中的高分子多糖，可以选用葡聚糖、可溶性纤维素衍生物、透明质酸中的一种或者几种的混合物；聚电解质可以选用一种或几种海藻酸盐等可解离型高分子的混合物；小分子糖可以是蔗糖、乳糖、甘露糖、葡萄糖、海藻糖等小分子糖中的一种或者几种混合物。亲水分散相通过粘性阻滞作用充当“控释相”，从而调节释放曲线，解决突释问题。
本发明所述的温度敏感型水凝胶智能释药体系适用于水溶性药物以及其他治疗成分(如疫苗、抗体、病毒、脂质体等)尤其是多肽、蛋白、疫苗、抗体、细胞因子、基因物质等治疗物质的缓释或脉冲释放，其中蛋白药物包括生长素、干扰素、促红细胞生成素、BMP等，而抗体则包括血管生成因子的抗体等抗体药物；给药方式可以采用皮下、肌内、静脉、局部病灶内注射方式给药。结合具体的治疗需要可以在温敏水凝胶基质中同时担载一种或几种治疗物质，应用于骨组织工程三维支架、药物洗脱支架、疫苗佐剂等。
对于具有高级空间结构的生物大分子治疗物质，“亲水分散相”作为体系的“控释相”，通过有效隔离担载的治疗物质和水凝胶的直接接触，避免了水凝胶疏水链段对担载药物的结构破坏，可以提高治疗物质的稳定性<例如促红细胞生成素EPO>；对于有些低温不稳定的大分子治疗物质，在冷冻过程中由于温度降低疏水域的溶解度增加而引起的聚集不稳定因素<中性粒细胞集落刺激因子G-CSF>，可以采用多糖-温敏水凝胶直接乳化的方法避免冻干操作有效地稳定治疗物质；“亲水分散相”的“控释相”作用是通过粘性阻滞作用实现的，有效地防止由于脱水造成的随水分子大量流失导致的突释效应从而调节释放曲线；此外还可以提高担载量和降低使用剂量，治疗过程中病人顺应性更佳。
针对亚疫苗输送体系，由于物理、化学因素导致天然构象破坏，“控释相”可以有效地维持其空间结构；根据免疫应答需要，有时需要缓释有时需要定时脉冲释放，本发明既可以延长抗原递呈时间，又可以根据需要确定时间点实现脉冲释放，传统的三次免疫可以被简化到一次免疫。
同时，根据实际的治疗需要，本发明还可以在温敏水凝胶基质中同时担载几种治疗物质，例如骨组织工程支架通常需要骨形态发生蛋白因子<BMPs>、胰岛素样生长因子-1<IGF-1>、转化生长因子<TGF-β>协同作用；亚单位疫苗输送过程中，缓释的细胞因子作免疫佐剂可以构建更加利于抗原呈递的微环境增强T细胞免疫效果；药物洗脱心脏支架需要血管内皮生长因子<VEGF>，碱性成纤维细胞生长因子<bFGF>等协同发挥作用。
本发明提供了三种以温敏水凝胶为基质制备所述的温度敏感型水凝胶智能释药体系的方法；其中一种或几种混合的高分子多糖作为“控释相”，担载药物溶解在“控释相中”，将“控释相”均匀地分散在温敏水凝胶基质中，发生溶液-凝胶相转变时，氢键作用减弱导致的水分子大量流失，动力学上高分子多糖借助阻滞扩散作用克服突释效果从而缓释药物；水溶性治疗物质可以囊包于高分子多糖微粒中、直接加入到多糖溶液中，多糖溶液中可以选择添加聚电解质和小分子糖。
与现有技术比较，本发明可以有效地缓解传统温敏水凝胶的初期突释问题，提高担载量，提高治疗物质在制剂、贮存、释放过程中的稳定性。针对生物大分子蛋白类药物，与所选择的高分子多糖和聚电解质有很好的生物相容性，粘度阻滞作用将蛋白与温敏水凝胶疏水域进行有效隔离，在缓释的同时可以有效地保护大分子的高级空间结构不发生变化，提高蛋白药物在制备、贮存、释放过程中稳定性。
图1是本发明不同方法制备的新型温敏水凝胶释药体系的体外释放图具体实施方式
如图1所示，本发明采用不同方法制备的新型温敏水凝胶释药体系的体外释放图。具体的处方和方法见表1.
表1.新型温敏水凝胶释药体系制备方法和配比因素
以下实施例是为了帮助本领域技术人员更好地理解及实施本发明所揭示的技术，而不代表本发明的适用范围，不可将其作为对本发明适用范围的限定。
实施例1多糖高分子颗粒-温敏水凝胶复合法制备担载BSA的新型温敏水凝胶选择BSA做模型药物，配制葡聚糖、BSA的混合溶液和聚乙二醇和海藻酸钠的混合溶液；二者混合匀浆得到稳定乳液；冷冻12小时，真空干燥24小时，得到的固体样品用二氯甲烷洗涤、离心，倾倒除去上清夜洗掉聚乙二醇，挥干有机溶剂得到葡聚糖-海藻酸钠的多糖高分子颗粒。使用前温敏水凝胶基质配成25％溶液，高分子多糖颗粒加入复合即可。该组合物中BSA(0.1％，w/w)，葡聚糖(5％，w/w)，温敏水凝胶基质(90％，w/w)，海藻酸钠(4.9％，w/w)。组合物在37℃HEPEs缓冲液中体外释放10天，无突释及不完全释放现象，达到理想平稳缓释效果。
实施例2.
多糖-温敏水凝胶乳化法制备担载BSA的新型温敏水凝胶配制葡聚糖、BSA、海藻酸钠、海藻糖混合溶液，温敏水凝胶基质配成25％溶液。二相混合后匀浆得到稳定乳液；冷冻12小时，真空干燥24小时，得到的固体样品使用前复溶即可。该组合物中BSA(30％，w/w)、温敏水凝胶(29.55％，w/w)、葡聚糖(27.5％，w/w)，海藻酸钠(2.95％，w/w)、海藻糖(10％，w/w)。组合物在37℃HEPEs缓冲液中体外释放10天，无突释及不完全释放现象，达到理想平稳缓释效果。
实施例3.
多糖-温敏水凝胶复合法制备担载BSA的新型温敏水凝胶配制葡聚糖、BSA、海藻糖混合溶液，温敏水凝胶基质配成25％溶液。二相混合后匀浆得到混悬液，即用。该组合物中BSA(25％，w/w)、温敏水凝胶(20％，w/w)、葡聚糖(50％，w/w)、海藻糖(5％，w/w)(聚电解质)。组合物在37℃HEPEs缓冲液中体外释放10天，无突释及不完全释放现象，达到理想平稳缓释效果。
实施例4.
多糖-温敏水凝胶复合法制备担载BSA的新型温敏水凝胶配制葡聚糖、BSA、海藻糖混合溶液，温敏水凝胶基质配成25％溶液。二相混合后匀浆得到混悬液，冷冻12小时，真空干燥24小时，得到的固体样品贮存，临用时复溶。该组合物中BSA(25％，w/w)、温敏水凝胶(20％，w/w)、葡聚糖(50％，w/w)、海藻糖(5％，w/w)(聚电解质)。组合物在37℃HEPEs缓冲液中体外释放10天，无突释及不完全释放现象，达到理想平稳缓释效果。
实施例5.
多糖-温敏水凝胶乳化法制备担载BSA的新型温敏水凝胶配制葡聚糖、BSA、海藻酸钠的混合溶液，温敏水凝胶基质配成25％溶液；二者混合匀浆得到稳定乳液；冷冻12小时，真空干燥24小时，得到的固体样品。使用前，复溶。该组合物中BSA(14.95％，w/w)，葡聚糖(27.5％，w/w)，温敏水凝胶基质(55％，w/w)，海藻酸钠(1.05％，w/w)、海藻糖(1.5％，w/w)。组合物在37℃HEPEs缓冲液中体外释放10天，无突释及不完全释放现象，达到理想平稳缓释效果。
实施例6.
多糖-温敏水凝胶乳化法制备担载BSA的新型温敏水凝胶配制葡聚糖、BSA、海藻酸钠的混合溶液；温敏水凝胶基质配成25％溶液。两相混合匀浆机乳化得到稳定乳液，即用。该组合物中BSA(14.95％，w/w)，葡聚糖(27.5％，w/w)，温敏水凝胶基质(55％，w/w)，海藻酸钠(1.05％，w/w)、海藻糖(1.5％，w/w)。组合物在37℃HEPEs缓冲液中体外释放10天，无突释及不完全释放现象，达到理想平稳缓释效果。
权利要求
1.一种温度敏感型水凝胶释药体系，其特征在于包括了一个亲水/疏水特性和体积随温度变化的温敏连续相和亲水性分散相，温敏连续相由温敏水凝胶组成，亲水分散相由高分子多糖、担载的水溶性药物组成，各组分的重量百分比范围分别是担载药物0.1-30％，温敏水凝胶20-90％，高分子多糖5-50％。
2.根据权利要求1所述的温度敏感型水凝胶释药体系，其特征是，所述的高分子多糖为葡聚糖、可溶性纤维素衍生物、透明质酸、淀粉及改性衍生物中的一种或者几种混合物。
3.根据权利要求1所述的温度敏感型水凝胶释药体系，其特征是，所述的温敏水凝胶，包括天然高分子、N-聚异丙基丙烯酰胺聚合物、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物及其衍生物、聚乙二醇/聚乳酸嵌段共聚物中的一种或者几种的混合物。
4.根据权利要3所述的温度敏感型水凝胶智能释药体系，其特征是，所述的嵌段共聚物包括AB型两嵌段，ABA、BAB、ABC型三嵌段、星型嵌段、多嵌段、接枝嵌段中的一种或者几种的混合物。
5.根据权利要求1或者3所述的温度敏感型水凝胶智能释药体系，其特征是，所述的温敏水凝胶，是热胀型或热缩型；温敏水凝胶结构是交联型或非交联型；温敏水凝胶的相转变温度从10℃-80℃。
6.根据权利要求1所述的温度敏感型水凝胶释药体系，其特征是，所述的亲水分散相中添加聚电解质、小分子糖，重量百分比分别为聚电解质0-4.9％，小分子糖0-10％。
7.根据权利要求6所述的温度敏感型水凝胶释药体系，其特征是，所述的聚电介质包括一种或几种海藻酸盐可解离型高分子的混合物，小分子糖包括海藻糖、甘露糖、蔗糖、乳糖、葡萄糖中的一种或几种的混合物。
8.一种如权利1所述的温度敏感型水凝胶智能释药体系的制备方法，其特征在于采用多糖高分子颗粒-温敏水凝胶复合法，其步骤为a)制备载药多糖高分子颗粒①配制两种高分子水溶液，分别用作连续相和分散相，在-4℃到95℃范围内两相混合得到均相溶液或混悬液；或者在任何一相中添加聚电解质充当乳液稳定剂，在-4℃到95℃范围内乳化得到乳液；担载药物溶解在分散相中。②将①步骤中得到的均相溶液、悬浊液、乳液冷冻干燥，连续相被溶剂洗涤除去，得到担载了药物的多糖高分子颗粒，粒径范围从10nm-50um；b)物理混合或化学方法制备温敏水凝胶基质，或者直接选择具有温敏特征的天然高分子，即用或冻干保存；c)制备多糖高分子颗粒-温敏水凝胶复合物；将b)步骤制得的温敏水凝胶基质在-4℃到95℃范围内配成溶液，将a)步骤中得到的多糖高分子颗粒加入到水凝胶溶液中在4℃到95℃范围内复合，即用或冻干保存临用前复溶。
9.一种如权利1所述的温度敏感型水凝胶智能释药体系的制备方法，其特征在于采用多糖-温敏水凝胶亲水乳化法，其步骤为a)物理混合或化学方法制备温敏水凝胶，或者直接选择具有温敏特征的天然高分子，即用或冻干保存；b)配制多糖高分子溶液，担载药物溶解在此高分子溶液中，添加聚电解质充当乳液稳定剂；c)-4℃-95℃范围内，配制温敏水凝胶溶液；d)将b)加入到c)中，乳化得到担载药物的多糖-水凝胶乳液，液滴粒径范围从10nm-50um，即用；e)或冻干保存临用前复溶。
10.一种如权利1所述的温度敏感型水凝胶智能释药体系的制备方法，其特征在于采用多糖温敏水凝胶乳化法，其步骤为a)物理混合或化学方法制备温敏水凝胶，或者直接选择具有温敏特征的天然高分子，即用或冻干保存；b)配制多糖高分子溶液，担载药物溶解在此高分子溶液中；c)-4℃-95℃范围内条件下配制温敏水凝剂溶液；d)将b)加入到c)中，混合均匀得到担载药物的多糖-水凝胶溶液/悬浊液，即用；e)或冻干保存临用前复溶。
全文摘要
一种温度敏感型水凝胶释药体系及其制备方法，属于药物技术领域。本发明体系各组分的重量百分比范围为担载药物0.1－30％，温敏水凝胶20－90％，高分子多糖5－50％。本发明体系通过多糖高分子颗粒－温敏水凝胶复合法、多糖－温敏水凝胶亲水乳化法、或者多糖－温敏水凝胶乳化三种方法进行制备。在发生溶液－凝胶相转变时，动力学上“控释相”借助阻滞扩散作用克服传统温敏水凝胶的突释现象，同时提高载药量，改善药物在制剂、贮存、释放过程中稳定性。这一体系对于生物大分子药物或其他治疗成分(如疫苗、抗体、病毒、脂质体等)的可控输送，改善担载物的释放动力学，提供了简便易行的技术方案。
文档编号A61K47/38GK1899264SQ20061002912
公开日2007年1月24日 申请日期2006年7月20日 优先权日2006年7月20日
发明者金拓, 吴飞 申请人:上海交通大学