植物或草药及其挥发油提取物在制备治疗糖尿病药物中的新用途的制作方法

专利名称：植物或草药及其挥发油提取物在制备治疗糖尿病药物中的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有化合物d-柠檬烯的芸香科柑桔属植物包括柠檬、桔、甜橙、酸橙、马蜂橙、油橙等植物的果实、果皮、叶和种子及其挥发油提取物；芸香科植物花椒、禾本科植物芸香草、杜鹃花科植物黄花杜鹃、莎草科植物莎草、缬草、豆科植物紫苜蓿、芸香科植物山油柑、唇形科植物石荠苎、唇形科植物柠檬罗勒的挥发油提取物；中药陈皮、青皮、佛手、枳实、羌活、姜、紫苏叶、辛夷、柴胡、薄荷、鱼腥草、野菊花、海风藤、连钱草、小茴香、枳壳、藏茴香、荆芥、艾叶、白松塔、灯盏细辛、青蒿、臭草、荜澄茄、八角茴香、鹤虱、广藿香、没药和砂仁等及其挥发油提取物的医学用途，尤其涉及在制药领域的新用途，具体涉及在制备治疗糖尿病的药物方面的新用途。
背景技术：
现有技术和知识已经公开了芸香科植物柠檬Citrus limon(L.)Burm.f.的新鲜成熟果皮含有挥发油，挥发油中的主要成份是柠檬烯，大约达到90％以上。下述植物的挥发油中也都含有柠檬烯芸香科植物柠檬Citrus limon(L.)Burm.f.及其栽培变种的新鲜成熟果实和果皮(Pericarp)，或者芸香科植物桔Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的新鲜成熟果皮或干燥成熟果皮(中药陈皮pericarpium Citri Reticulatae)，或干燥幼果或未成熟果实的果皮(中药青皮pericarpium Citri Reticulatae Viride)，或甜橙C.aurantium的新鲜成熟果实、果皮和种子(seed)，或者酸橙Citrus aurantium的新鲜成熟果皮，或者酸橙Citrus aurantium及其栽培变种或甜橙C.aurantium(中药枳实Fructus Aurantii Immaturus)的干燥幼果的果皮，或者马蜂橙C.hystrix的新鲜成熟果实和果皮，或者油橙C.bergamia的新鲜成熟果实和果皮，或者芸香科植物佛手Citrus medica L.Var Sarcodactylis Swingle的新鲜成熟果皮或干燥果皮，或者伞形科植物羌活Notopterygium incisum Ting ex H.T.chang或宽叶羌活N.forbesii Boiss的根茎及根，或者姜科植物姜Zingiber officinale(Willd)Rosc.的新鲜根茎，或者紫苏叶Perilla frutescens(L.)Britt.的根，或者木兰科植物玉兰M.denudate Desr.[M.heptapeta(Buch.)Dandy；M.conspicua Salisb；M.yulan Desr.]或武当玉兰M.sprengeri Pamp.(中药辛夷Flos Magnoliae)的干燥花蕾，或者荆芥Schizonepeta tenuifolia Briq的干燥地上部分，或者伞形科植物北柴胡Bupleurum ChinenseDC.或狭叶柴胡B.scorzonerifolium Willd(B.falcatum L.var.scorzonerifolium Ledeb.)(中药柴胡Radix Bupleuri)，或日本三岛柴胡B.falcatum L.(B.scorzonerifolium willd var.stenphyllum Nakai)的干燥根，或者唇形科植物薄荷Mentha haplocylyx Briq.(M.arvensis L.var haplocalyx Briq.)和家薄荷Mentha haplocalyx Briq.Var piperasoens(Malinvand)C.Y.Wu et H.W.Li(M.arvensisL.var.piperascens Malinvaud.)的全草，或者三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.(中药鱼腥草Herba Houttuyniae)的全草，或者菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L.的头状花序，或者胡椒科植物风藤Piper kadsura(choisy)Ohwi及石楠藤Piper walli chii(Miq)Hand-Mass(中药海风藤Caulis Piper Kadsurae)的干燥藤茎，或者唇形科植物活血丹Glechoma longituba(Nakai)Kupr.(中药连钱草Herba Glechomae)的干燥地上部分，或者芸香科植物青椒Zanthoxylum schinifolium Sieb.Et Zucc.或花椒Zanthoxylum bungeanum Maxim或野花椒Z.simulans Hance的干燥成熟果皮，或者伞形科植物茴香Foeniculum vulgare Mill.(中药小茴香Fructus Foeniculi)的干燥成熟果实，或者芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.(中药枳壳FructusAurantii)及其栽培变种的未成熟果实，或者伞形科植物页蒿Carum carri L.(中药藏茴香Fructus cari carvi)的果实，或者藜科藜属植物土荆芥Chenopodium ambrosioides L.的全草，或者菊科植物艾Artemisia argyi Le vl.et Vant.的干燥叶，或者禾本科植物芸香草CymbopogonDistans (Nees)A.Camus的全草，或者松科植物白皮松Pinus bungeana Zucc.(中药白松塔Strobilus Pini Bungeanae)的球果(cones)，或者杜鹃花科植物黄花杜鹃Rhododendronanthopogonoides Maxim.，或者菊科飞蓬属植物短葶飞蓬Erigeronbreviscapus(Vant.)Hand.-Mazz(中药灯盏细辛Herba Erigeronis Breviscapi)的干燥全草，或者菊科植物黄花蒿Artemisia annua L.(中药青蒿Herba Artemisiae Annuae)的全草，或芸香科芸香属植物芸香Ruta graveolens L.(中药臭草Herba Rutae)的全草，或樟科植物山鸡椒Litseacubeba(Lour.)Pers.(中药荜澄茄Fructus Litseae)的干燥成熟果实，或者木兰科植物八角茴香Illicium verum Hook.f.的干燥成熟果实，或者菊科植物天名精Carpesium abranoides L.(中药鹤虱Fructus Carpesii)的干燥成熟果实，或者唇形科植物广藿香Pogostemon cablin(Blanco)Benth.或藿香Agastache rugosus(Fisch.et Mey.)O.Ktze的全草，或者莎草科植物莎草Cyperusrotundus L.的根茎，或者橄榄科植物没药树Commiphora myrrha Engl.树干皮部渗出的油胶树脂，或者姜科植物阳春砂Amomum villosum Lour.，缩砂A villosum Lour.Var.xanthioides T.L.Wuet Senjen，海南砂A.longiligulare T.L.Wu(中药砂仁Fructus Amomi)的干燥成熟果实，或者唇形科植物紫苏叶Perilla frutescens(L.)Britt.的干燥叶子，或者败酱科植物缬草Valerianaofficnalis L.或宽叶缬草V.officinalis L.var.latifolia Miq的根和根茎，或者豆科植物紫苜蓿Medicago Sadiva L.或南苜蓿Medicago hispida Guertn的全草，或者芸香科植物山油柑Acronychia pedunculata(L)Miq或鲍尔氏山油柑A.baueri的叶子，或者唇形科植物石荠苎M.scabra(Thunb.)C.Y.Wu et H.W.Li的全草，或者唇形科植物柠檬罗勒Ocimum basilicum var.citriodorum的叶。(王王祥，现代中药药理学，天津科学技术出版社，中文版，1997)其中中药陈皮的挥发油中的主要含有d-柠檬烯，含量在80％以上；中药青皮的挥发油中的主要含有d-柠檬烯，含量在80％以上。
甜橙的挥发油中的主要含有d-柠檬烯，含量大约90％；酸橙的挥发油中的主要含有d-柠檬烯，含量大约90％；中药枳实的挥发油中的主要含有d-柠檬烯，含量大约90％；中药枳壳的挥发油中的主要含有d-柠檬烯，含量90％以上；芸香科植物葡萄柚的挥发油中的主要含有d-柠檬烯，含量86％左右；马蜂橙c.hystrix的挥发油中的主要含有d-柠檬烯，含量80-90％以上；油橙C.bergamia的挥发油中的主要含有d-柠檬烯，含量80-90％以上；中药佛手挥发油中含有d-柠檬烯，含量大约50％左右；中药羌活挥发油中含有d-柠檬烯，含量大约11-34％左右；中药紫苏叶挥发油中含有d-柠檬烯，含量10-30％；中药辛夷挥发油中含有d-柠檬烯，含量10％；中药花椒挥发油中含有d-柠檬烯，含量大约25％；中药艾叶挥发油中含有d-柠檬烯，含量15％；中药小茴香挥发油中含有d-柠檬烯，含量13.1％；中药荜澄茄挥发油中含有d-柠檬烯，含量11.6％；现有技术和知识公开了化合物柠檬烯(Cyclohexene，1-methyl 4-(1-methylethenyl)-，(+)-(R))，即1-甲基4-(1-甲基乙烯基)环己烯。该化合物的分子式为C10H16，分子量为136.32，液体，不溶于水，易溶于乙醇。柠檬烯有d-柠檬烯，1-柠檬烯，dl-柠檬烯或双戊烯三种光学异构体。
d-柠檬烯的化学名称为(4R)-(+)-4-异丙烯基-1-甲基环己烯。它存在于橙皮油、柠檬油、香柠檬油、莳萝油和桔油等中。沸点178℃，61℃(1.60kPa)。相对密度为0.8411。
l-柠檬烯在柑桔精油中存在较少，但可以从其他芳香化合物转化而来。它存在于俄罗斯松节油、白干层油等中。沸点177.6-177.8℃(100.7kPa)，64.4℃(2.0kPa)。相对密度为0.8422。
dl-柠檬烯存在于西伯利亚松针油、柠檬草油、香草油等中，沸点178℃，64.4℃(2.0kPa)，相对密度为0.8402。
三者都是具有柠檬香的油状液体。在常压下蒸馏不起变化，但在空气中容易氧化生成含氧化合物和聚合物等复杂混合物，闪点48℃。
柠檬烯主要用作磁漆、假漆和各种含油树脂、树脂蜡、金属催干剂的溶剂，用于制造合成树脂和合成橡胶。用于食品、洗涤剂等日用香精，尚可配制食用人造柑桔油，如桔味香精的配方。美国专利US4,083,994公开了d-柠檬烯可以用作利胆药的活性组分。
糖尿病是一种复杂的疾病，其特征为高血糖症。这个疾病可以分成两个主要的子集胰岛素依赖型(IDDM)，也被称为1型糖尿病，和非胰岛素依赖型(NIDDM)，也被称为2型糖尿病。(世界卫生组织糖尿病研究组，WHO技术系列报告844，1994)。
1型糖尿病在机体的免疫系统摧毁了胰岛β细胞时形成，这细胞是在机体中唯一的制造调节血糖的激素胰岛素的细胞。1型糖尿病可能占全部已诊断的糖尿病的5-10％2型糖尿病可能占全部已诊断的糖尿病的90-95％。它通常开始时有胰岛素抵抗，一种以细胞不能完全地利用胰岛素的紊乱。当需要胰岛素增加分泌时，胰腺逐渐丧失它生产胰岛素的能力(美国国家卫生部疾病预防中心，国家糖尿病情况说明书，2003)。
1型和2型糖尿病都能够导致并发症微血管、大血管和神经病变。糖尿病能够影响机体的许多部分，并能够导致系列并发症例如象失明、肾脏损伤、和截肢。
1998年，世界卫生组织的报告指出，当时全球糖尿病患者为1.48亿。
1995年，在中国11个省市的4万多位城市和农村居民中进行的调查发现，糖尿病患病率已从1980年的0.69％增加到3.21％。估计患者总人数达近3600万。(向红丁，吴伟，刘灿群，等，1996年全国糖尿病流行病学特点基线调查报告，中国糖尿病杂志，1998，6131-133.)在美国，有1820万人有糖尿病，占人口的6.3％。2002年，在美国，糖尿病的总费用是1320亿美元(包括直接费和间接费)，直接的医疗费用是920亿美元，间接费用是400亿美元(包括伤残，丧失工作能力和过早死亡)。(美国国家卫生部疾病预防中心，国家糖尿病情况说明书，2003)。
目前，治疗的2型糖尿病的药物主要有下面几类1.双胍类药物。疗效低，副作用较大，久用常产生乳酸酸中毒。
2.磺尿类药物。副作用较大，久用常产生低血糖症。并且，可使胰小岛发生疲劳，甚至衰竭，内源性的胰岛素分泌功能进一步减少，发生药物继发性失效。
3.阿卡波糖类药物。仅仅延迟葡萄糖在小肠的吸收，降低餐后血糖水平。它不能刺激胰岛素的分泌，也不能改变空腹胰岛素和C肽水平。
4.上述这些药物配合胰岛素或者单独使用胰岛素治疗2型糖尿病，最终内源性的胰岛素分泌功能将完全丧失，胰岛素的依赖性终究要来到(世界卫生组织糖尿病研究组。WHO技术系列报告844，1994)。
上述所有的药物都有比较强而持久的降低血糖的作用，但不能稳定地降低血糖水平。同时，病人将需要逐年加大这些药物的治疗剂量。英国糖尿病前瞻性研究指出，所有药物都不能制止空腹血浆葡萄糖水平持续性上升，表明胰岛细胞功能进行性衰竭。(英国糖尿病前瞻性研究组，英国糖尿病前瞻性研究，1977-1992)糖尿病因此在世界上被称为尚无一例治疗痊愈的疾病，目前，所有的药物都不能停止用药。
现有技术和知识公开了中药人参Radix Ginseng(五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的根)、玉竹Rhizoma Polygonati Odorati(百合科植物玉竹Polygonatum odoratum(Mill.)Druce的根茎)、甘草Radix Glycyrrhizae(豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.或胀果甘草G.inflate Bat.或光果甘草G.glabra L.的根及根茎)、地骨皮Cortex Lycii(茄科植物枸杞Lyciumchinense Mill.或宁夏枸杞Lycium barbarum L.的根皮)、苍术Rhizoma Atractylodis(菊科植物茅苍术Atracylodes lancea(Thunb.)D.C.或北苍术A.chinensis(D.C.)Koidz.的根茎)、白术Rhizoma Atractylodis Macrocephalae(菊科植物白术Atractylodes macrocephala Koidz.的根茎)、知母Rhizoma Anemarrhenae(百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bunge的根茎)、荔枝核Semen Litchi(无患子科植物荔枝Litchi chinensis Sonn.的种子)、桑叶Folium Mori(桑科植物桑Morus alba L.的叶)、黄连Rhizoma Coptidis(毛莨科植物黄连Coptis chinensis Franch.或三角叶黄连C.deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云连C.teeta wall.的根茎)、黄精RhizomaPolygonati(百合科植物滇黄精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.或黄精P.sibiricum Red.或多花黄精P.cyrtonema Hua的根茎)、淫羊藿Herba Epimedii(小檗科植物淫羊藿Epimediumbrevicornum Maxim.或箭叶淫羊藿E.sagittatum(Sieb.Et Zucc.)Maxim.或朝鲜淫羊藿E.Koreanum Nakai的地上部分)、葛根Radix Puerariae(豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi或甘葛P.thomsonii Benth.的根)和紫草Radix Arnebiae(紫草科植物新疆紫草Arnebiaeuchroma(Royle)JAohnst.或紫草Lithospermum erythrorhizon Sieb.et Zucc.的根)及其提取物等有降低血糖的作用，且副作用较小。但是，在它们中没有任何一种中药具有足够强大的降低血糖的作用。

发明内容
本发明的目的在于提供含有化合物d-柠檬烯的上述植物，或者植物草药、或者中药的医学新用途。即它们在制药领域、在制备治疗糖尿病的药物方面的应用。本发明通过动物实验和临床观察发现，含有d-柠檬烯的上述植物，或者植物草药、或者中药均单独具有明显而强大的降低血糖的作用。
本发明首先在临床观察中发现中药羌活、陈皮等有明显的降低2型糖尿病人餐后血糖的作用，进一步的研究观察到柠檬油和陈皮油有更加强大的降低血糖作用。最终发现其中的药理活性成份是化合物柠檬烯的主要光学异构体d-柠檬烯。通过动物实验，发现化合物d-柠檬烯有降低药物STZ-诱导的1型和和2型糖尿病模型大鼠血糖的明显作用，治疗效果非常显著。而含有柠檬烯的植物，草药或者中药有许多种，本发明通过下述实验，确定含有化合物d-柠檬烯的植物、草药或者中药及其挥发油提取物，与d-柠檬烯一样，也有比较强大的降低血糖的作用。
从芸香科柑桔属植物的果实、果皮和叶中提取挥发油和d-柠檬烯的方法采用芸香科植物柠檬Citrus limon(L.)Burm.f.的新鲜成熟果皮，或者采用芸香科植物桔Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的新鲜成熟果皮，或采用甜橙C.aurantium的新鲜成熟果实、果皮和种子(seed)，或者采用酸橙Citrus aurantium的新鲜成熟果皮，或者马蜂橙C.hystrix的新鲜成熟果实和果皮，或者采用油橙C.bergamia的新鲜成熟果实和果皮，或者采用芸香科植物佛手Citrus medica L.Var Sarcodactylis Swingle的新鲜成熟果皮等，撕碎后直接冷榨，再经过离心或者过滤，得到挥发油。
或采用芸香科植物桔Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥成熟果皮陈皮pericarpium Citri Reticulatae或干燥幼果或未成熟果实的果皮青皮pericarpium Citri ReticulataeViride，或者采用酸橙Citrus aurantium及其栽培变种或甜橙C.aurantium(中药枳实FructusAurantii Immaturus)的干燥幼果的果皮，使用干果皮，应以每份果皮加8份水泡软，一般泡3-4h。
或者，直接采用果实取油。选用清洁的柑桔类，橙类和柠檬类果实送入不同的磨油机内取油。主要有FMC工艺和布朗工艺(BOE)，在一些地区和国家还有特殊的磨油机。
精油除萜工艺，在沸点178℃，61℃(1.60kPa)分馏时，可以分离得到d-柠檬烯。
或者，以其他常规方法分离精制后，可以用在本发明中。
这种冷榨的方法获得的冷榨油和精油，可以获得纯度在90％以上的d-柠檬烯。进一步在稀的NaOH或者碳基加成剂(如盐酸胲)中蒸馏以除去醛，则纯度可达到99.5％。
从羌活、佛手、枳实、姜、紫苏叶、辛夷、柴胡、薄荷、鱼腥草、野菊花、海风藤、连钱草、小茴香、枳壳、藏茴香、荆芥、艾叶、白松塔、灯盏细辛、青蒿、臭草、荜澄茄、八角茴香、鹤虱、广藿香、没药和砂仁(其特征为含油物质是植物干燥的全草、根茎、叶、种子和小果实)等中药中提取挥发油的方法，主要是以水蒸汽蒸馏所得到的与水不相混合的挥发性油状成份。
在本发明的动物实验中，本品对药物诱导的糖尿病大鼠表现出明显的降血糖作用。经口服给予实验动物陈皮及其挥发油提取物(7-8g/kg/天)后0.5-2小时内，动物血浆葡萄糖最大降低幅度可达50％～100％，药物作用在用药2小时后逐渐消失。
本发明能降低药物(链脲佐菌素，streptozotocin)诱导所致的重度2型糖尿病模型大鼠的空腹血糖和糖尿病并发症症状。将7-8g/kg的陈皮及其挥发油提取物灌胃给予糖尿病大鼠，0.5-2小时后，实验大鼠的血糖呈剂量依赖性下降。
在临床实验中，2型糖尿病病人在每日3餐后服用陈皮及其挥发油提取物，为期12周。结果表明，该药能明显降低用药者餐后的血糖水平。降低血糖的速度快速、稳定。
在临床实验中，2型糖尿病病人在每日3餐后服用羌活及其挥发油提取物，为期12周。结果表明，该药能明显降低用药者餐后的血糖水平。降低血糖的速度快速、稳定，但是，效果不如陈皮。
动物实验和临床实验结果显示，本发明涉及含有化合物d-柠檬烯的上述的一系列植物、植物草药或中药的新的医学用途，发现上述药物具有较强的降低血糖的作用，而这些植物、植物草药或者中药有降低血糖的作用是从来没有报道过的。
本发明可以含有一种或者多种药学上可接受的载体，即药学领域常规的药物载体，如水、淀粉、纤维素、明胶、琼脂、β-糊精、豆磷脂或卵磷脂等，本发明的药物可通过口服和注射的方式给药。口服给药时，优选的形式是片剂、包衣片剂、颗粒剂、粉末、软胶囊和栓剂。本发明的化合物d-柠檬烯的常用剂量可以根据用药途径、患者病情的严重程度，糖尿病的类型等变化，日剂量可以是陈皮浓缩粉末3-6g(相当于生药18-36g)，优选每日剂量4-5g。每日进餐三次，分三次服用。或者服药的次数与进餐次数相同。在第一口食物入口后的1-10分钟内服用。
单独使用化合物d-柠檬烯，或者柠檬油，或者陈皮油时，部分患者用药后有轻度口干现象；少数患者可出现头昏、乏力、心悸、便秘或者腹泻、唇疱疹等，在减量或停药后反应可消失。但使用含有足量挥发油的中药陈皮，或者羌活等，均无任何明显的副作用。健康人单独服用含有化合物d-柠檬烯的上述任何一种药物，并不降低餐后或者空腹血糖水平。
具体实施例方式
下面将描述本发明的几个实施例，但本发明的内容完全不局限于此。
发明的详细说明实施例1从上述新鲜果皮或者干燥果皮中提取挥发油，并从中提取d-柠檬烯采用芸香科植物柠檬Citrus limon(L.)Burm.f.的新鲜成熟果皮，撕碎后直接送进压榨机内冷榨，或者采用芸香科植物桔Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥成熟果皮陈皮pericarpium Citri Reticulatae，以每份果皮加8份水泡软，一般泡3-4h。
1.浸泡将果皮浸泡在1.5～3.0％的石灰水中，保持PH值10～14，浸泡6-10h，果皮与石灰水比例为1∶4～6之间。硬化果皮，使之适合压榨。除石灰之外，浸泡还可使用硫酸氢钠、碳酸钠、硫酸钠等。
2.清洗将果皮放入清水中洗去石灰和杂质。
3.压榨通过压榨机将果皮中的精油压出。
4.过滤或分离从冷榨机或者压榨机出来的油水混合物，带有较多的果皮渣，具有不定的黏稠度，需要进行过滤和多次沉淀，以减轻离心分离机的压力。滤渣可经蒸馏器回收精油。
5.离心分离油水的分离采用高速油水分离机，进行油水分离。分离完毕后，应让分离机空转2-3min，大量冲入清水，将残存的油冲出。为了促使精油从油乳液中分离，可以加入大约2％的氢氧化钠和少量硫酸钠于榨油用的水中。
6.精制和脱蜡轻微混浊的粗精油，用无水硫酸钠脱水，然后静置澄清透明后滤去残渣，再离心分离。混浊的粗精油，先经静置沉淀，再用无水硫酸钠过滤。沉淀残渣，再离心分离。将粗精油置于低温下静置，蜡质析出后，再用离心分离法除去。8℃条件下，6d左右即可析出。在-25℃下，2d可析出。采用柠檬果皮可以获得纯度达到90％以上的d-柠檬烯，采用桔皮可以获得纯度达80-90％的d-柠檬烯。
7.提纯冷榨获得的d-柠檬烯，可以以减压蒸馏的方法，从蒸馏器中在沸点178℃，61℃(1.60kPa)分馏得到纯度达到大约99％的d-柠檬烯。进一步在稀的NaOH或者碳基加成剂(如盐酸胲)中蒸馏以除去醛，则纯度可达到99.5％。但是，纯化以后的d-柠檬烯，如果不加以保护，则会很快与空气中的氧反应，转化为纯度为95-96％的粗d-柠檬烯。
8.将挥发油d-柠檬烯制成可服用的药片将挥发油与一定量的β-糊精以喷雾的方式混和，加入一定量的水，保持在一定的温度下，搅拌1h，冷藏放置24h，滤过、抽干，加少量乙醚洗涤2次，在50℃以下干燥为粉末，再加入足量的水。挥发油与β-CD的投料比为1∶9(ml∶g)，搅拌速度100r/min，包含温度为40℃，β-糊精与加入水的比例为1∶7。
实施例22型糖尿病模型大鼠实验2型糖尿病大鼠实验模型的建立。采用速发型类似NIDDM的模型。一次足量给予动物Wistar大鼠链尿佐菌素(STZ)，造成B细胞大量损伤，胰岛素的合成和分泌减少，引起糖代谢紊乱，导致糖尿病。将STZ用0.1mol/L无菌枸掾酸钠缓冲液新鲜配制成2％的溶液，调节PH值至4.5，滤菌器过滤除菌。大鼠禁食18小时按50-65mg/kg尾静脉一次注射溶液，24小时血糖大于等于13.0mmol/L(或者16.7mml/L)，即可作为成功模型。
该速发型模型通常单剂量达到50mg/kg体重不出现自然缓解现象，第6-27天，胰岛有一定程度再生，功能部分恢复，但未达到正常，仍然处于高血糖状态，适合于NIDDM的相关研究。链尿佐菌素注射后10小时内给予大鼠喂饲10％葡萄糖，以防止低血糖。在相关的实验中，STZ溶解入0.1M柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(PH4.2)以组成60-65mg/kg重量溶液，溶液立即注射入尾静脉。10天后，在确定检验血糖水平充分高后，实验材料被给予。治疗7天，使用正规方法从动物获得血，一个血糖监测系统强生公司的SureStep血糖机被利用于测量血糖水平。
在相关的饲养方法中，使用7周大的雄性Wistar大鼠(重量210，+-.10g)每组12个。老鼠在房间温度摄氏22度下饲养，湿度50％和光照-黑暗各12小时(7:00大约19:00)。自由进食和饮水。每天在禁食4小时后，以灌胃的方式加入陈皮及其挥发油提取物以5g/kg(相当于生药30g/kg)身体重量进入老鼠体内。灌胃后2小时，从大鼠尾静脉抽血，检验其血糖水平。
实验结果如表2显示，t＞0.001，P＜0.01，有非常显著的差异，疗效非常显著。说明药物陈皮及其挥发油能够明显降低2型糖尿病模型大鼠的空腹血糖。
表12型糖尿病模型大鼠治疗前后比较(x±S)

实施例31型糖尿病大鼠实验1型糖尿病大鼠实验模型的建立。最近几年，更多的人们已经明确表达观察到了STZ-诱导的实验糖尿病模型，虽然，原则上它是1型模型，可能用于如同一个2型模型。无论如何，因为STZ-诱导的实验糖尿病模型老鼠在发病后的第1-6天，类似依赖于胰岛素的1型糖尿病，进一步的研究是必须小心地去检测血糖水平。
STZ-诱导的糖尿病大鼠，在注射STZ后的第3-6天中，每天在禁食4小时后，以灌胃的方式加入陈皮及其挥发油提取物以7.2g/kg(相当于生药43g/kg)身体重量进入老鼠体内。灌胃后2小时，从大鼠尾静脉抽血，检验其血糖水平。
实验结果表明，含有柠檬烯的陈皮油对1型糖尿病模型大鼠有明显治疗效果。(见下面的表2)表2 IDDM组和陈皮及其挥发油提取物治疗组血糖水平的比较(x±S)

实施例4一男性患者，56岁，2型糖尿病。空腹血糖在正常范围内，餐后血糖在15.6mmol/L(281mg/dl)范围内。餐后4-6小时后，无进食，常发生低血糖。治疗前15天内不使用任何药物，通过7天的治疗，每天三餐，在第一口饭后5-10分钟内，口服给予柠檬油1ml，早餐后血糖最高峰值11.8mmol/L(212mg/dl)在1.25h。继续治疗12周，早餐后血糖最高峰值10.4mmol/L(212mg/dl)前移到0.75h。晚餐后，不服任何药物，餐后血糖在正常范围内。午餐后，不服药，餐后血糖或者在正常范围内，或者血糖水平稍高。但早餐仍然不能停药。餐后6-8小时后，无进食，无低血糖反应。病人在此期间保持适度的中等饮食。(注中国药典所载d-柠檬烯含量为90％，因此，可以把柠檬油(d-柠檬烯含量为90％)视为d-柠檬烯)该患者在此实验前3个月，每餐采用羌活2g(生药12g)进行治疗达1个月，比较稳定地降低餐后血糖。随后的一个半月中，换陈皮2g(生药12g)/每餐，午餐和晚餐餐后血糖在正常范围内，仅早餐血糖仍然在11.1mmol/L(200mg/dl)以上。
实施例5一妇女，58岁，
糖尿病历史15年，空腹血糖在8.6-13mmol/L(155-234mg/dl)之间，餐后血糖最高为23mmol/L(414mg/dl)。通过7天的治疗，每天三餐，在第一口饭后5-10分钟内，口服给予柠檬油1ml，早餐后血糖最高峰值18.7mmol/L(337mg/dl)在1.25h。治疗前后对比，血糖平均降低6.99mmol/L(126mg/dl)病人在此期间保持适度的中等饮食。
实施例6健康志愿者的实验一男性，24岁，健康无任何疾病。空腹血糖在4.4-5.3mmol/L(79-96mg/dl)波动，餐后血糖在6-7mmol/L(108-126mg/dl)之间。通过7天的治疗，每天三餐，在第一口饭后5-10分钟内，口服给予陈皮油1.2ml，早餐后血糖最高峰值5.6-8.0mmol/L(101-144mg/dl)在0.5h。治疗前后对比，血糖基本无变化。受试者在此期间保持适度的中等饮食。
实施例7健康志愿者的实验一妇女，46岁，健康无任何疾病。空腹血糖在5.0-5.4mmol/L(79-96mg/dl)波动，餐后血糖在8-12.2mmol/L(144-202mg/dl)之间。糖耐量实验异常。通过7天的治疗，每天三餐，在第一口饭后5-10分钟内，口服给予柠檬油1ml，早餐后血糖最高峰值10.3-11.7mmol/L(185-211mg/dl)在0.5h。治疗前后对比，血糖基本无变化。受试者在此期间保持适度的中等饮食。(注中国药典所载d-柠檬烯含量为90％，因此，可以把柠檬油(d-柠檬烯含量为90％)视为d-柠檬烯)工业应用性单萜类化合物柠檬烯的原料主要来自芸香科植物柠檬Citrus limon(L.)Burm.f.及其栽培变种的新鲜成熟果实和果皮(Pericarp)，或者芸香科植物桔Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的新鲜成熟果皮或干燥成熟果皮(中药陈皮pericarpium Citri Reticulatae)，或干燥幼果或未成熟果实的果皮(中药青皮pericarpium Citri Reticulatae Viride)，或甜橙C.aurantium的新鲜成熟果实、果皮和种子(seed)，或者酸橙Citrus aurantium的新鲜成熟果皮，或者酸橙Citrus aurantium及其栽培变种或甜橙C.aurantium(中药枳实Fructus Aurantii Immaturus)的干燥幼果的果皮，或者马蜂橙C.hystrix的新鲜成熟果实和果皮，或者油橙C.bergamia的新鲜成熟果实和果皮，或者芸香科植物佛手Citrus medica L.Var Sarcodactylis Swingle的新鲜成熟果皮或干燥果皮。原料来源丰富而广泛，产量非常高。其次，也可从其他的多达约80种植物药的挥发油中提取(含油率在0.1-6％之间)。
产地包括欧洲、亚洲、非洲、澳洲、北美和南美洲。其中产量最高的是南美洲的巴西和美国的佛罗里达州，其次是澳大利亚和南非。原料产地遍及全世界，价格低廉。
其次，柠檬烯的加工方法简单，最简单的加工方法是通过压榨的方式获得d-柠檬烯含量高达80-90％以上的桔油和柠檬油。
上述精油可以方便地通过高剪切乳化机进行油水混合，制成注射针剂；或者以喷雾方式加入β-糊精中制成片剂，也可以直接制成油剂软胶囊。因此，适合于工业化生产。
权利要求
1.芸香科柑桔属植物Citrus的新鲜成熟果实、果皮和叶的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
2.芸香科植物柠檬Citrus limon(L.)Burm.f.及其栽培变种的新鲜成熟果实、果皮和叶的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
3.芸香科植物桔Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的新鲜成熟果皮的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
4.芸香科植物桔Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的新鲜幼果或未成熟果皮，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
5.甜橙C.aurantium的新鲜成熟果实、果皮和种子的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
6.酸橙Citrus aurantium的新鲜成熟果皮的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
7.芸香科植物葡萄柚Citrus paradise Macfayden的新鲜果实、果皮和种子的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
8.马蜂橙C.hystrix的新鲜成熟果实和果皮的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
9.油橙C.bergamia的新鲜成熟果实和果皮的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
10.中药陈皮pericarpium Citri Reticulatae(芸香科植物桔Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥成熟果皮)及其挥发油提取物，在制备治疗糖尿病的药物方面的用途。
11.中药枳实Fructus Aurantii Immaturus(酸橙Citrus aurantium及其栽培变种或甜橙C.aurantium的干燥幼果的果皮)及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
12.中药枳壳Fructus Aurantii(芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.的干燥未成熟果实)及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
13.中药佛手Fructus Citri Sarcodactylis(芸香科植物佛手Citrus medica L.Var SarcodactylisSwingle的新鲜成熟果皮或干燥果皮)及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
14.中药羌活Rhizoma seu Padix Notopterygii(伞形科植物羌活Notopterygium incisum Ting exH.T.chang或宽叶羌活N.forbesii Boiss的根茎及根)及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
15.中药紫苏叶Folium Perillae(唇形科植物紫苏叶Perilla frutescens(L.)Britt.的干燥叶)及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
16.中药辛夷Flos Magnoliae(木兰科植物玉兰M denudate Desr.[M.heptapeta(Buch.)Dandy；M.conspicua Salisb；M.yulan Desr.]的干燥花蕾)及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
17.中药花椒Pericarpium Zanthoxyli(芸香科植物青椒Zanthoxylum schinifolium Sieb.Et Zucc.或花椒Zanthoxylum bungeanum Maxim或野花椒Z.simulans Hance的干燥成熟果皮)及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
18.中药艾叶Folium Artemisiae Argyi(菊科植物艾Artemisia argyi Le vl.et Vant.的干燥叶)及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
19.中药小茴香Fructus Foeniculi(伞形科植物茴香Foeniculum vulgare Mill.的干燥成熟果实)及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
20.中药荜澄茄Fructus Litseae(樟科植物山鸡椒Litsea cubeba(Lour.)Pers.的干燥成熟果实)及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
21.杜鹃花科植物黄花杜鹃Rhododendron anthopogonoides Maxim.的花的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
22.伞形科植物莳萝Anethum graveolens L.的种子的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
23.中药荆芥Herba Schizonepetae(荆芥Schizonepeta tenuifolia Briq的干燥地上部分)及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。
全文摘要
本发明涉及含有化合物d－柠檬烯的芸香科柑桔属植物包括柠檬、桔、甜橙、酸橙、马蜂橙、油橙等植物的果实、果皮、叶和种子及其挥发油提取物；芸香科植物花椒、禾本科植物芸香草、杜鹃花科植物黄花杜鹃、莎草科植物莎草、缬草、豆科植物紫苜蓿、芸香科植物山油柑、唇形科植物石荠苎、唇形科植物柠檬罗勒的挥发油提取物；中药陈皮、青皮、佛手、枳实、羌活、姜、紫苏叶、辛夷、柴胡、薄荷、鱼腥草、野菊花、海风藤、连钱草、小茴香、枳壳、藏茴香、荆芥、艾叶、白松塔、灯盏细辛、青蒿、臭草、荜澄茄、八角茴香、鹤虱、广藿香、没药和砂仁等及其挥发油提取物的医学用途，尤其涉及在制药领域的新用途，具体涉及在制备治疗糖尿病的药物方面的新用途。本发明通过实验观察到柠檬油和陈皮油有强大的降低血糖作用。最终发现其中的药理活性成份是化合物柠檬烯的主要光学异构体d－柠檬烯。
文档编号A61K131/00GK101028363SQ200610045919
公开日2007年9月5日 申请日期2006年2月28日 优先权日2006年2月28日
发明者舒刚, 姚凤玲 申请人:舒刚, 姚凤玲