专利名称：具有抗肿瘤作用的扁藻多糖蛋白的制作方法
技术领域：
本发明属于生物化工领域，涉及多糖蛋白，特别是从新鲜的海洋亚心型扁藻中提取出的一种多糖蛋白。
背景技术：
微藻光合利用效率高、个体小、营养丰富、生长繁殖迅速、对环境的适应能力强、容易培养，许多国家先后进行了微藻培养、营养价值分析及开发利用研究，取得了许多成就和进展。目前，已被广泛研究和开发的微藻包括小球藻(Chlorela sp.)、螺旋藻(Spirulin sp.)、杜氏藻(Dunaliella sp.)、红球藻(Haematococcus sp.)等，从中生产出了大量用途广泛的产品，如食品添加剂、保健食品、杀虫剂、植物生长调节剂以及抗菌、抗病毒和抗癌物质。然而，还有许多和大量的未被开发和研究的微藻，其中含有大量的未被人们认识和发现的具有独特或高效作用的新物质或者新的利用途径。如用作海珍品幼体培养的优良饵料亚心型扁藻(Platymonas subcordiformis)，就含有一些未被人们认识和发现的具有独特或高效作用的新物质或者新的利用途径。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从新鲜的海洋亚心型扁藻细胞中提取出的扁藻多糖蛋白。
本发明的另一个目的是提供了一种以该扁藻多糖蛋白为活性成分的用于抗肿瘤的药物组合物。
本发明进一步的目的是提供了上述扁藻多糖蛋白和含有上述多糖蛋白的组合物在抗肿瘤药物方面的用途。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是利用新鲜的海洋亚心型扁藻，经过去离子水清洗、渗透、冻融、去杂蛋白、乙醇沉淀、丙酮洗涤和沉淀干燥过程提取而成的淡乳白色的粉末；此扁藻多糖蛋白中多糖含量为40-70％，蛋白质含量为10-30％，在水中的溶解度为110-130mg/100克水，粘度接近于水的粘度，SDS凝胶电泳显示该扁藻多糖蛋白中含有分子量分别在2.8-3.2万和3.8-4.2万的两种糖蛋白。本发明优选的扁藻多糖蛋白是多糖含量为50-55％，蛋白质含量为16-20％，而且该扁藻多糖蛋白中含有平均分子量分别为3万和4万的两种多糖蛋白。这种扁藻多糖蛋白的多糖含量、蛋白质含量、水中的溶解度和分子量变化与海洋亚心型扁藻的产地、生长环境和生长期以及提取过程等因素有关。
将本发明的扁藻多糖蛋白用于对体外肿瘤细胞和小鼠体内肿瘤细胞进行抑制作用实验，发现其对体外培养的QGY-7701肝癌细胞、红白血病K562细胞的抑制率为60-75％，电镜显示被抑制的肿瘤细胞呈现明显的凋亡特征，即细胞膜起泡，核染色质固缩，周边聚集，核碎裂成团状散布于胞浆，形成凋亡小体。此扁藻多糖蛋白与顺铂联合使用时，在不降低抑制率的前提下，可减少顺铂使用量的70-75％。将此扁藻多糖蛋白用于对纯系小鼠BL/C57体内黑色素瘤进行抑制作用研究，发现其对肿瘤的抑制率为36-40％，并可促使小鼠的生长。
本发明的药物组合物含有治疗有效剂量的上述扁藻多糖蛋白为活性成分，以及含有一种或者多种药学上可接受的载体。
本发明的扁藻多糖蛋白和药物组成物可用于制备各种抗肿瘤的药物。
本发明的扁藻多糖蛋白与顺铂的混合物及其含有这种混合物的药物组成物可用于制备各种抗肿瘤的药物。
上述所述的药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，包括稀释剂、赋形剂如水等；填充剂如淀粉、蔗糖等；黏合剂如纤维素及衍生物、明胶；润湿剂如甘油；崩解剂如碳酸氢钠、碳酸钙等；吸收促进剂如季铵盐；表面活性剂如高碳脂肪醇；吸附载体如高岭土、皂黏土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙及聚己二醇等；还可以在组合物中加入其它辅剂如甜味剂、香味剂等。
本发明的扁藻多糖蛋白可以以组合物的形式通过口服、直肠、静脉、肌肉或胃肠外给药方式施用于肿瘤患者的治疗。也可以按照药学领域的常规生产方法，如使其活性成分与一种或多种载体或药物混合，制备各种剂型如片剂、冲剂、胶囊、栓剂、喷雾剂等，优选的形式是片剂、冲剂、胶囊、栓剂、喷雾剂、缓释剂和注射剂；特别优选的是口服胶囊。本发明的药物组合物中含有重量比为1％-99.5％的活性成分是本发明扁藻多糖蛋白，优选含有重量比为45％-99.5％的活性成分是本发明扁藻多糖蛋白，最好含有重量比为90％-99.5％的活性成分是本发明扁藻多糖蛋白。
本发明的施药量可根据用药途径、患者年龄、体重、疾病类型和严重程度等变化。
具体实施例方式
下面的实施例可以帮助本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1.利用新鲜的海洋亚心型扁藻，经去离子水清洗、渗透、冻融、离心去藻泥、上清液盐析去杂蛋白、上清液经一次无水乙醇沉淀、丙酮二次洗涤沉淀和沉淀干燥步骤制得扁藻多糖蛋白淡乳白色粉末，其组成为多糖含量为40％，蛋白质含量为30％。在水中的溶解度为100mg/100克水，粘度接近于水的粘度，而且该扁藻多糖蛋白中含有平均分子量分别为2.8万和4.2万的两种多糖蛋白。
实施例2.利用新鲜的海洋亚心型扁藻，经去离子水清洗、渗透、冻融、离心去藻泥、上清液盐析去杂蛋白、浓缩上清液后经二次无水乙醇沉淀、丙酮二次洗涤沉淀和沉淀干燥步骤制得扁藻多糖蛋白淡乳白色粉末，其组成为多糖含量为70％，蛋白质含量为10％。在水中的溶解度为120mg/100克水，粘度接近于水的粘度，而且该扁藻多糖蛋白中含有平均分子量分别为3.2万和3.8万的两种多糖蛋白。
实施例3.利用新鲜的海洋亚心型扁藻，经去离子水清洗、渗透、冻融、离心去藻泥、浓缩上清液后盐析去杂蛋白、浓缩上清液后经二次无水乙醇沉淀、丙酮三次洗涤沉淀和沉淀干燥步骤制得扁藻多糖蛋白淡乳白色粉末，其组成为多糖含量为55％，蛋白质含量为20％。在水中的溶解度为130mg/100克水，粘度接近于水的粘度，而且该扁藻多糖蛋白中含有平均分子量分别为2.8万和3.8万的两种多糖蛋白。
实验例4.抗肿瘤片剂的制备取实施例1制备的扁藻多糖蛋白10g，加入赋形剂药用环糊精30g，混合均匀，造粒压片，制得片剂。
实施例5.抗肿瘤胶囊的制备取实施例1制备的扁藻多糖蛋白10g，加入赋形剂药用环糊精10g，混合均匀，造粒，装入胶囊。
实施例6.抗肿瘤注射剂的制备取实施例3制备的扁藻多糖蛋白1.1g，加入注射用水1000ml，溶解，膜过滤；分装，每瓶2ml。所有操作均应在无菌条件下进行。
实施例7.抗肿瘤胶囊的制备取实施例2制备的扁藻多糖蛋白6g，顺铂2克，加入赋形剂药用环糊精10g，混合均匀，造粒，装入胶囊。
权利要求
1.一种具有抗肿瘤作用的多糖蛋白，其特征是利用新鲜的海洋亚心型扁藻，经过去离子水清洗、渗透、冻融、去杂蛋白、乙醇沉淀、丙酮洗涤和沉淀干燥过程提取而成的淡乳白色的粉末；该扁藻多糖蛋白中多糖含量为40-70％，蛋白质含量为10-30％，在水中的溶解度为110-130mg/100克水，粘度接近于水的粘度，SDS凝胶电泳显示该扁藻多糖蛋白中含有分子量分别在2.8-3.2万和3.8-4.2万的两种糖蛋白。
2.根据权利要求1所述的扁藻多糖蛋白，其特征是多糖含量为50-55％，蛋白质含量为16-20％，而且该扁藻多糖蛋白中含有平均分子量分别为3万和4万的两种多糖蛋白。
3.权利要求1或者2中扁藻多糖蛋白在制备抗肿瘤药物中应用。
4.用于抗肿瘤的药物组合物，其特征是其中含有治疗有效量的权利要求1或者2的扁藻多糖蛋白和药学上可接受的载体。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征是其中含有治疗有效量的权利要求1或者2的扁藻多糖蛋白和顺铂。
全文摘要
本发明属于生物化工领域，涉及多糖蛋白，是通过水洗、冻融、去杂蛋白、乙醇沉淀、丙酮洗涤、水浴干燥等过程从新鲜的海洋亚心型扁藻细胞中提取出的一种多糖蛋白，呈淡乳白色的粉末，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。其中多糖含量为40－70％，蛋白质含量为10－30％，在水中的溶解度为110－130mg/100克水，粘度接近于水的粘度。此扁藻多糖蛋白对体外培养的QGY－7701肝癌细胞和红白血病K
文档编号A61K38/02GK1843384SQ20061004650
公开日2006年10月11日 申请日期2006年4月29日 优先权日2006年4月29日
发明者杨海波, 赵莲华, 刘艳, 于媛, 张欣华, 李英敏 申请人:大连大学