五环三萜类化合物作为糖原磷酸化酶抑制剂的用途的制作方法

专利名称：五环三萜类化合物作为糖原磷酸化酶抑制剂的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物领域，具体涉及一系列五环三萜类化合物作为糖原磷酸化酶抑制剂的用途，特别是在制备抗糖尿病药物、抗缺血性心脑血管疾病药物和抗肿瘤药物等方面的应用。
背景技术：
五环三萜类化合物在植物界中的分布极为广泛，是许多中草药的主要有效成分(孙宏斌，《药物化学进展》，2005，第4卷253-279)。五环三萜类化合物按烷烃结构骨架的不同主要可分为齐墩果烷型、熊果烷型和羽扇豆烷型等。
五环三萜化合物的制备方法包括植物化学提取方法和半合成制备方法等。国际专利申请WO 02/12159和WO 98/04331报道了从油橄榄中提取山楂酸(Maslinic Acid)的方法。美国专利中请US 2003/0165581报道了从夏枯草中提取制备科罗索酸(Corosolic Acid)的方法。发明人在先期的中国专利申请CN200410064929.7中公开了山楂酸、科罗索酸及其相关衍生物的制备方法。白桦脂醇(Betulin)可参照专利方法(WO 0110885)从白桦树的外皮中提取。白桦脂酸(Betulinic Acid)的制备可参照文献方法(Kim等，Synthetic Communication，1997，271607-1612)。11-脱氧甘草次酸(11-Deoxyglycyrrhetic Acid)的制备参照文献方法(张新迎，等，化学世界，2001，10533-541)。23-羟基白桦脂酸(23-Hydroxybetulinic Acid)可参照专利中请CN03152904.6所描述的方法制备。2-异构山楂酸(2-Epi-maslinic Acid)的提取分离和结构确证在文献(Kohda，H.等，Chem.Pharm.Bull.1991，39(10)2609)中已有报道。3-异构齐墩果酸(3-Epi-oleanolic Acid)和3异构熊果酸(3-Epi-ursolic Acid)的结构在文献(Deepak，M.等，Phytotherapy Research，2000，14463)中已有报道。3-异构山楂酸(3-Epi-maslinic Acid)的提取分离和结构确证在文献(Kumar，N.S.等，Phytochemistry，1985，242454)中已有报道。3-异构科罗索酸(3-Epi-corosolic Acid)的提取分离和结构确证在文献(Wang，Z.J.等，Acta Pharm.Sinica，1999，34679；Marwani，E.等，Nat.Prod.Sic.1997，375)中已有报道。齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷可参照专利申请CN00123317.3所描述的方法制备。五环三萜-28-β-D-吡喃葡萄糖酯的制备方法已有报道(Baglin，I.等，Journal of Enzyme Inhibition and MedicinalChemistry，2003，18，111)。齐墩果酸(Oleanolic Acid)、熊果酸(Ursolic Acid)、甘草酸(Glycyrrhizic Acid)、甘草次酸(Glycyrrhetic Acid)、积雪草酸(Asiatic acid)、积雪草苷(Asiaticoside)、羟基积雪草酸(Madecassic Acid)和羟基积雪草苷(Madecassoside)等都有商品化供应。
五环三萜类化合物(如齐墩果酸和甘草酸)目前在临床上主要用作抗肝炎药物。发明人在先期的中国专利申请CN200510038094.2中公开了这类化合物具有抑制糖原磷酸化酶的作用，可用于治疗糖尿病。
糖原代谢是糖代谢的一个重要方面，尤其是在某些疾病状态下(如禁食高血糖症和缺血性组织损伤等)，糖原代谢异常可能成为关键的病理因素(孙宏斌，中国药科大学学报，2006，37，1)。糖原磷酸化酶(glycogen phosphorylase)是催化糖原降解(glycogenolysis)的关键酶，该酶催化糖原的磷酸解。由于糖原磷酸化酶是糖原代谢中的一个关键因子，因此，糖原磷酸化酶抑制剂可望用于治疗与糖原代谢异常相关的疾病，如糖尿病、缺血性心脑血管疾病和肿瘤等。
糖尿病患者的肝脏葡萄糖生成的显著增加是导致高血糖的一个重要原因，因此，抑制肝脏葡萄糖生成已成为研制新型抗糖尿病药物的重要靶标之一(Kurukulasuriya，R.et.al.Current Medicinal Chemistry，2003，10，99)。目前，在临床上使用的能够抑制肝脏葡萄糖生成的药物非常有限。对糖尿病实验动物模型的研究表明，通过抑制肝脏糖原磷酸化酶，可降低肝脏葡萄糖生成以达到降低血糖功效。糖原磷酸化酶抑制剂用于治疗2型糖尿病已受到了广泛关注(Somsak，L.et.al.Current Pharmaceutical Design，2003，9，1177)。辉瑞和默克等制药公司已展开了对此类药物的研发工作，其中辉瑞公司的糖原磷酸化酶抑制剂CP-368296曾进入II期临床用以治疗2型糖尿病，但该药的缺点如副作用大和生物利用度低等，限制了其在临床上的应用。
缺血性心肌损伤是导致心绞痛和心肌梗死的重要病理因素之一。在正常情况下，心脏主要依赖脂肪酸的氧化来供应能量。但是，在心肌缺血所导致的心肌细胞缺氧情况下，脂肪酸的氧化供能受到限制，心肌细胞的能量供应因而转向无氧糖酵解(glycolysis)。在严重心肌缺血情况下，经心脏糖酵解会产生大量的代谢产物乳酸，导致心肌细胞乳酸中毒，进而引发心绞痛、心律失常和心肌梗死。研究表明，在心肌缺血情况下，通过抑制糖原磷酸化酶可抑制心肌细胞的过度糖酵解，阻止心脏乳酸中毒，进而对缺血心脏起到保护作用。(Tracey等，AmJ Phy Heart Circ Physiol 2004，286H1177)。专利申请EP1558245、US2005054618、US2004082646、US2004082641、US2001046958和US5952322均报道了糖原磷酸化酶抑制剂在抗缺血性心肌损伤方面的应用。
恶性肿瘤区别于正常组织的一个重要特点是对能量需求的不同。大多数正常组织在有氧时通过糖的有氧分解获取能量，只有在缺氧时才进行无氧糖酵解，而肿瘤组织则即使在有氧条件下也主要是以无氧糖酵解来获取能量，使得肿瘤细胞的糖酵解非常旺盛。肿瘤细胞的糖酵解途径与糖原代谢密切相关，因此，抑制糖原磷酸化酶可阻断糖酵解代谢途径，切断恶性肿瘤细胞的能量供应，进而“饿死”肿瘤细胞。辉瑞公司报道了各种糖原磷酸化酶抑制剂用于抑制肿瘤生长(专利申请US 20020123513)。Schnier等报道了糖原磷酸化酶抑制剂CP-91149对多种表达脑糖原磷酸化酶的肿瘤细胞有生长抑制作用(Schnier等，Biochemical andBiophysical Research communications，2003，309126-134)。专利申请EP1177791也报道了糖原磷酸化酶抑制剂具有肿瘤生长抑制作用。
本专利申请利用中国专利申请CN1682740(申请号CN 200510038094.2)的优先权。

发明内容
本发明公开了一系列五环三萜类化合物作为糖原磷酸化酶抑制剂的用途，可以用于治疗与糖原代谢异常相关的疾病，这些疾病包括糖尿病(特别是2型糖尿病)及其并发症、缺血性心脑血管疾病(特别是心肌梗死、心绞痛、心律失常、冠心病、中风、脑梗死或缺血性神经退行性疾病等)、高胰高血糖素症、胰岛素抵抗、代谢综合征、肥胖、高血压及其并发症、禁食高血糖症和肿瘤等。特别是其可以用于制备抗糖尿病、抗缺血性心脑血管疾病和抗肿瘤等疾病的药物。
本发明提供的糖原磷酸化酶抑制剂包括通式I、通式II和通式III所示的五环三萜类化合物或其药学上可接受的盐或酯 其中R1代表氢或OR16，R16代表氢或R17CO，R17代表1～10个碳的直链或支链烷基、苯基或取代的苯基，此外，R17CO还代表肉桂酰基、4-氯取代肉桂酰基、4-甲氧基取代肉桂酰基或琥珀酰基；R2代表氢、R18CO、D-吡喃葡萄糖基、D-吡喃葡萄糖醛酸基、D-吡喃葡萄糖醛酸基-D-吡喃葡萄糖醛酸基；R18代表1～10个碳的直链或支链烷基、苯基或取代的苯基，R18CO还代表肉桂酰基、4-氯取代肉桂酰基、4-甲氧基取代肉桂酰基或琥珀酰基；R3代表氢或甲基，R4代表氢、甲基或羧基，并且，当R3代表氢时，R4仅代表甲基或羧基；当R3代表甲基时，R4仅代表氢；R5代表氢或OR19，R19代表氢或R20CO，R20代表1～10个碳的直链或支链烷基、苯基或取代的苯基，此外，R20CO还代表肉桂酰基、4-氯取代肉桂酰基、4-甲氧基取代肉桂酰基或琥珀酰基；R6代表CH3、CH2OR21或COOR22，R21代表氢或R23CO，R23代表1～10个碳的直链或支链烷基；R22代表氢、1～10个碳的直链或支链烷基、(CH2)nCOOCH2CH3、(CH2)nCOOH、苄基、取代的芳烃烷基、D-吡喃葡萄糖基、乙酰基D-吡喃葡萄糖基或D-吡喃葡萄糖基-D-吡喃葡萄糖基-吡喃鼠李糖基，n＝1，2，3；R7、R8代表氢，或者，R7和R8一起代表一个羰基；R9代表氢或羟基；Ar环代表与五环三萜的A环稠合的吡唑环、1～10个碳的直链或支链烷基取代的吡唑环、苯基或取代苯基取代的吡唑环、二唑环或异唑环；
R10、R11代表氢或甲基，并且，当R10代表氢时，R11仅代表甲基；当R10代表甲基时，R11仅代表氢；R12代表氢、1～10个碳的直链或支链烷基、苄基或取代的芳烃烷基；R13代表CH3、CH2OR24或COOR25，R24代表氢或R26CO，R26代表1～10个碳的直链或支链烷基；R25代表氢、1～10个碳的直链或支链烷基、(CH2)nCOOCH2CH3、(CH2)nCOOH、苄基、取代的芳烃烷基、D-吡喃葡萄糖基或乙酰基D-吡喃葡萄糖基，n＝1，2，3；R14代表氢、R27CO、D-吡喃葡萄糖基、D-吡喃葡萄糖醛酸基、D-吡喃葡萄糖醛酸基-D-吡喃葡萄糖醛酸基，R27代表1～10个碳的直链或支链烷基、苯基或取代的苯基，R27CO还代表肉桂酰基、4-氯取代肉桂酰基、4-甲氧基取代肉桂酰基或琥珀酰基；R15代表氢或羟基。
优选的通式I、II或III的化合物为山楂酸、科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸、积雪草酸、甘草酸、甘草次酸、11-脱氧甘草次酸、积雪草苷、羟基积雪草酸、羟基积雪草苷、阿江榄仁酸、常春藤皂甙元、齐墩果酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、熊果酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、山楂酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、科罗索酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、熊果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、熊果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山楂酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、山楂酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、科罗索酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、科罗索酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山楂酸-28甲酯、科罗索酸-28-甲酯、(反式)-3-O-对氯肉桂酰基齐墩果酸、3-O-乙酰基齐墩果酸、2-O-乙酰基山楂酸、2，3-O-二乙酰基山楂酸、2，3-O-二乙酰基科罗索酸、3-O-琥珀酰基齐墩果酸、2，3，23-O-三乙酰基积雪草酸、23-羟基熊果酸、3-异构齐墩果酸、3-异构熊果酸、3-异构山楂酸、2-异构山楂酸、3-异构科罗索酸、2-异构科罗索酸、白桦脂醇、白桦脂酸、23-羟基白桦脂酸、白桦脂酸-28-β-D-葡萄糖酯、白桦脂酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、羽扇豆醇，或如下所示的五环三萜A环稠杂环化合物
更为优选的化合物是山楂酸、科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸、积雪草酸、甘草酸、甘草次酸、积雪草苷、羟基积雪草酸、羟基积雪草苷、齐墩果酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、熊果酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、山楂酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、科罗索酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、熊果酸-3-O-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷、熊果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山楂酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、山楂酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、科罗索酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、科罗索酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山楂酸-28甲酯、科罗索酸-28-甲酯、白桦脂醇、白桦脂酸、23-羟基白桦脂酸、白桦脂酸-28-β-D-葡萄糖酯或白桦脂酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
进一步优选的化合物是山楂酸、科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸、积雪草酸、甘草酸、甘草次酸、积雪草苷、羟基积雪草酸、羟基积雪草苷、山楂酸-28甲酯、科罗索酸-28-甲酯、白桦脂醇、白桦脂酸或23-羟基白桦脂酸。
上述五环三萜类化合物、这些化合物的盐或酯具有糖原磷酸化酶抑制活性，或者，其在体内可经过代谢转化为具有糖原磷酸化酶抑制作用的活性化合物。
部分优选的式I和式III的化合物结构如下

本发明中的部分五环三萜类化合物是已知化合物，其余部分五环三萜衍生物是新化合物，这些新化合物可以用常规的方法制备，如3-O-酰基-五环三萜类化合物的制备 上式中，R1、R3-9、R13、R15、R18和R27的定义如前所述。
五环三萜-28-酯类化合物的制备 上式中，R1-5、R7-9、R14、R15、R22和R25的定义如前所述。
吡唑类化合物的制备
上式中R代表1～10个碳的直链或支链烷基。R10、R11定义如前所述。
二唑类化合物的制备 R10、R11定义如前所述。
异唑类化合物的制备 R10、R11定义如前所述。
下面是部分药理学试验及结果一、五环三萜类化合物对糖原磷酸化酶抑制活性的实验试剂的配制1)显色液的配制称量钼酸铵5g，溶解于500ml 1M HCl中，用搅拌器搅拌，至全部溶解后在加入孔雀绿190mg，继续搅拌至全部溶解，并用锡箔纸避光；2)缓冲液的配制①精密称量Hepes 0.5958g，溶于5ml H2O中，用10M NaOH调PH至7.2，配制成终浓度为0.5M的Hepes；②精密称量KCl 0.3728g，溶于5ml H2O中，配制成终浓度为1M的KCl；③精密称量MgCl20.0255g，溶于1ml H2O中，配制成终浓度为125mM的MgCl2；④精密称量EGTA 0.0476g，溶于5ml H2O中，用10M NaOH调PH至7.0，配制成终浓度为25mM的EGTA；⑤精密称量G-1-P 0.0152g，溶于10ml H2O中，配制成终浓度为5mM的G-1-P；⑥精密称量glycogen 10mg，溶于1ml H2O中，配制成终浓度为10mg/ml的glycogen；3)阳性药caffeine溶液的配制将caffeine溶于10ml H2O配制0.5、5、50和500μM的溶液；4)配制GPa溶液取1μl的GPa加入到100μl反应体系中，终浓度为250ng/100μl；5)待测试化合物溶液的配制将待测试化合物溶于DMSO配制成浓度为10mM溶液，取适量化合物溶液加入到反应体系中至不同终浓度。
测定rabbit肌糖原磷酸化酶活性的量效曲线通过读取不同浓度的GPa加入显色液后的在655nm下的OD值，来测定其量效曲线。由量效曲线可选择GPa的量为250ng。
实验步骤1)设计PC(阳性对照)、Blank(空白对照)、阳性药(咖啡因)；2)加反应buffer52μl；3)加测试化合物至终浓度；4)加酶1μl，终浓度为250ng/100μl；5)加显色液150μl；6)20～25摄氏度条件下反应20分钟；7)在波长655nm条件下比色；8)数据的读取及抑制率的计算抑制率＝[阳性对照-待测样品]/[阳性对照-空白对照]。
测试结果表1列出了部分五环三萜化合物对rabbit肌糖原磷酸化酶的抑制活性数据，结果显示，多数五环三萜化合物对糖原磷酸化酶具有显著的抑制活性。
表1、五环三萜化合物对rabbit肌糖原磷酸化酶的抑制活性


*在浓度为20μM时的抑制率**在浓度为20μM时无活性；***在浓度为2000μM时无活性。
根据文献报道(Rush，W.R.等，Eur.J.Drug Metabol.Pharm.1993，18，323；Ploeger B.等，Drug Metabolism Review，2001，33125-147)和一般性的规律，五环三萜糖苷类化合物在体内可经过水解酶等的作用，转化为其相应的皂苷元化合物。因此，尽管多数五环三萜糖苷类化合物在体外酶活性筛选实验中并未显示出显著的糖原磷酸化酶的抑制活性，但由于其相应的五环三萜皂苷元化合物大都显示出显著的糖原磷酸化酶的抑制活性，因此，五环三萜糖苷类化合物可视为相应的皂苷元化合物的前药。例如，积雪草苷(Asiaticoside)在体外酶活性筛选实验中并未显示出糖原磷酸化酶的抑制活性，然而，积雪草苷在体内可转化有活性的积雪草酸(其IC50＝17μM)，因此，积雪草苷可视为积雪草酸的天然前药，同样具有潜在的糖原磷酸化酶的抑制活性。再如，甘草酸在体外酶活性筛选实验中显示出很弱的糖原磷酸化酶的抑制活性(其IC50＝822μM)，然而，其在体内可转化为活性相对较强的甘草次酸(其IC50＝66μM)。基于同样的道理，齐墩果酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、熊果酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、山楂酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、科罗索酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、熊果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、熊果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山楂酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、山楂酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、科罗索酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷和科罗索酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷等可视为相应的皂苷元化合物的前药。
由以上试验可见，本发明所述的五环三萜类化合物具有糖原磷酸化酶的抑制活性，可以用于治疗与糖原代谢异常相关的疾病，如糖尿病、缺血性心脑血管疾病、高胰高血糖素症、胰岛素抵抗、代谢综合征、肥胖或肿瘤等。特别是可用于治疗糖尿病、缺血性心脑血管疾病及肿瘤等疾病。为了确证这些药理疗效，发明人在此基础上又对五环三萜类化合物进行了深入的药理学研究。
二、五环三萜类化合物对肾上腺素诱发的高血糖小鼠抑制血糖升高活性实验动物和试剂昆明种小白鼠，体重20-23g，雌雄各半。受试前在实验室适应三天。
方法取健康昆明种小白鼠，10只/组，随机均分以下各试验组溶媒对照组(0.5％CMC)，格列美脲组(10mg·kg-1)、二甲双胍组(200mg·kg-1)和待测化合物组(剂量分别为40和100mg·kg-1)。按实验分组连续给药7天，末次给药前禁食过夜，在试验当日给药同时皮下注射肾上腺素150μg·kg-1，分别在各组小鼠给药前和给药后不同时间经小鼠眼眶静脉丛取血，葡萄糖氧化酶法测定血糖值。
表2、表3和表4列出了科罗索酸、熊果酸、山楂酸、齐墩果酸和积雪草酸对肾上腺素诱导的小鼠高血糖模型的抑制血糖升高活性数据，结果显示科罗索酸、熊果酸、山楂酸、齐墩果酸和积雪草酸对肾上腺素诱导的小鼠血糖升高均有显著的抑制活性，提示此类化合物具有潜在的抗糖尿病作用。
表2、实验化合物对肾上腺素诱导的小鼠高血糖的抑制活性mean±SD，n＝10.*P＜0.05，**P＜0.01(与模型对照组相比)

表3、实验化合物对肾上腺素诱导的小鼠高血糖的抑制活性mean±SD，n＝9.*P＜O.05，**P＜0.01(与模型对照组相比)

表4、实验化合物对肾上腺素诱导的小鼠高血糖的抑制活性mean±SD，n＝9.*P＜0.05，**P＜0.01(与模型对照组相比)

三、五环三萜类化合物麻醉犬心肌缺血试验溶剂0.9％氯化钠注射液配制方法将待测药物临用前用0.5％CMC-Na研磨配置成所需浓度的均匀混悬液。
实验方法与结果取家犬12只，雌雄兼用，体重7.0～10.0kg。随机均分为三组。伪手术组生理盐水；模型组生理盐水；山楂酸中剂量组13mg/kg。由前肢静脉用3％戊巴比妥钠1ml/kg麻醉后，仰卧位固定于手术台上。剪去颈部、胸部、腹部和右后肢内侧的毛，75％酒精消毒剪毛区。分离右侧股动脉、股静脉，股动脉插入动脉插管，并以肝素钠25u/ml生理盐水液导与压力换能器(TP-400T)相连，由RM-6000型多导生理记录仪记录动脉收缩压(SBP)、动脉舒张压(DBP)，心率(HR)，定标灵敏度为13.33kPa(100mmHg)/cm。颈部正中线切口，分离气管，接人工呼吸机。将犬侧位，于左侧第四、五肋间开胸，暴露心脏，剪开心包膜，缝于胸壁，做成心包摇篮。在左冠状动脉前降支中上1/3处游离一小段，并穿0号丝线，以备结扎。伪手术组只穿线不结扎。选择梗塞区附近位置12个标测点，并在远离梗塞区选一对照点，均以龙胆紫标记，用手持绝缘金属点状电极按标测点顺序进行标测，经传感器(JB-642G)、放大器(AB-621G)，用多导生理记录仪记录胸导联心外膜电图(EECG)。结扎冠状动脉前十二指肠给药，阳性药丹参注射液(剂量0.7ml/kg)。股静脉给药。记录缺血前、给药20min，30min，60min，90min，120min，150min，180min的EECG、SBP、DBP、HR。统计各标测点EECG的ST段于结扎前抬高的差值Δ∑-ST，以及ST段比结扎前抬高≥2mv以上的ΔN-ST。各组分别在给药前及给药后120min，180min由股动脉取血，血液标本以3000rpm的速度离心20min分离出血浆，置于-20℃冷冻保存待测。测定血清LDH值。实验结束后，立即取出心脏，用生理盐水洗去血液，称取心室重量，并把心室横切成4片，置于37℃水浴，0.25％NBT溶液中染色15min，剪去各心肌片被染色的非梗塞区，把未染色的梗塞区心肌称重，除以心室重得到梗塞范围占心室重的百分比。各组均与缺血模型组及伪手术组进行组间t检验，部分指标还进行了给药前后自身配对t检验统计学分析。实验结果(见表5、表6和表7)表明，山楂酸能明显降低结扎犬梗塞区/心室百分率(P＜0.05)，对缺血性心肌损伤具有保护作用，提示其可用于防治缺血性心血管疾病。
表5、山楂酸对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞梗死范围的影响(x±S)(n＝4)

(与伪手术组相比，△P＜0.05；各剂量组与模型组相比，*P＜0.05)。
表6、山楂酸对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞Δ∑-ST的影响(x±S)(单位mv)(n＝4)(各剂量组与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01；各剂量组与伪手术组相比，#P＜0.05，##P＜0.01)。

表7、山楂酸对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞ΔN-ST的影响(x±S)(单位个)(n＝4)(各剂量组与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01；各剂量组与伪手术组相比，#P＜0.05，##P＜0.01)。

四、山楂酸对犬冠脉血流量(CF)和心输出量(CO)的影响取家犬，体重为8.0-11.0Kg，雌雄兼用。随机均分为两组。空白组生理盐水；山楂酸剂量13mg/Kg。阳性药丹参注射液，剂量0.7ml/kg。
用3％戊巴比妥钠1ml/kg前肢静脉注射麻醉，仰卧位固定于手术台上，剪去颈部、胸部、腹部和右后肢内侧的毛。75％酒精消毒剪毛区。分离气管并插入气管插管，以备人工呼吸用；分离一侧股动、股静脉，股动脉插入充满肝素钠60u/ml生理盐水的动脉导管，股静脉置留输液导管，备用。于左侧第四、五肋间开胸，气管插管接人工呼吸机人工呼吸；切除第四肋骨，撑开，暴露心脏，剪开心包膜，缝于胸壁，做成心包摇篮。分离冠状动脉左旋枝和升主动脉，经左心室心尖部插入充满肝素生理盐水的心导管至左心室内。动物四肢插入将针状电极备用。经股静脉导管滴注生理盐水以维持动物正常稳定的生理状态。十二指肠给药。阳性药丹参注射液股静脉给药。主动脉和冠脉左旋枝分别放置适宜内径的电磁血流量计探头，分别连接于2台电磁血流量计(MFV-3200型，日本光电)测量心输出量(CO)和冠脉血流量(CF)，结果见表8和表9。
表8、山楂酸对家犬心输出量(COl/min)的影响(x±S)(n＝4)


(与对照组比较，*P＜0.05)表9、山楂酸对家犬冠脉流量(CF ml/min)的影响(x±S)(n＝4)

(与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01)五、五环三萜类化合物对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血的影响取体重220-280gSD大鼠64只，雌雄各半，按体重随机分为8组阳性对照组给予口服丹参片324mg/kg；模型组给予生理盐水；甘草酸，甘草次酸组给予200mg/kg，齐墩果酸，山楂酸，积雪草苷，熊果酸给予100mg/kg。各组给药容积均为0.5ml/100g。对各组大鼠实行灌胃给药，给药7天，每天一次。手术当天给药20分钟后，进行垂体后叶素注射。手术时，先将大鼠用20％乌拉坦以1.0g/kg的剂量腹腔注射麻醉后，仰卧位固定，分离一侧股静脉，记录一段正常II导心电图，观察J点的高度。静脉推注脑垂体后叶素量为0.7u/kg，10秒内推完，于注射前(0sec)及注射后5sec、10sec、30sec、1min、2min、5min、10min、20min记录心电图。观察J点参数，将每组大鼠注射垂体后叶素后各时间点心电图各项指标减去注射前(0sec)的指标，得相应差值，各药物组对应时间点的差值(给垂体后叶素后各时间点的值-未给垂体后叶素前的值)均与模型对照组的相应时间点的差值进行组间t检验比较，结果见表10。由表10可见，给垂体后叶素前后受试药组J点差值与模型组的组间比较可知，阳性药除20min之外，5min，10min两时间点对抑制J点升高有显著差异(P＜0.05)，其他各时间点均有极显著差异(P＜0.01)。甘草酸在5sec，10sec，1min时间点对抑制J点升高有极显著差异(P＜0.01)，30sec，5min有显著差异(P＜0.05)。甘草次酸5sec，30sec，1min时间点对抑制J点升高有显著差异(P＜0.05)，10sec有极显著差异(P＜0.01)。齐墩果酸5sec，10sec，5min时间点对抑制J点升高有极显著差异(P＜0.01)，30sec有显著差异(P＜0.05)。熊果酸在5sec，10sec，1min，5min时间点对抑制J点升高有极显著差异(P＜0.01)，30sec，10sec有显著差异(P＜0.05)。山楂酸5sec，5min时间点对抑制J点升高有显著差异(P＜0.05)，30sec有极显著差异(P＜0.01)。积雪草苷10sec，30sec，1min时间点对抑制J点升高有显著差异(P＜0.05)。说明上述药物对大鼠心肌缺血有较好的保护作用。
表10、对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血J(mv)的影响(x±s)(n＝10)
六、科罗索酸对局灶性脑缺血再灌注后组织损伤的影响健康雄性SD大鼠60只，随机分为6组，即假手术组，模型组，尼莫地平组(0.4mg/kg)，科罗索酸高剂量(17mg/kg)、中剂量(8.5mg/kg)和低剂量(4.3mg/kg)组；每组10只，均采用口服给药途径。各组动物均灌胃给药，假手术组给予CMC，每天一次连续4天，于第四天给药后半小时造模。动物经水合氯醛氯腹腔注射麻醉后，采用改进的Zea Longa’s腔内栓线阻断法制备左侧大脑中动脉阻塞(MCAO)模型，1小时后拔线实现再灌注。
肝组织及脑组织匀浆制备大鼠再灌注24小时后断头处死，立即于冰浴上取出肝脏及损伤侧的大脑皮层，称取0.5g前脑组织，置于4.5ml匀浆介质中充分研磨使组织匀浆化，4摄式度3000转离心10分钟上清即为10％脑组织匀浆。所有指标测定均按试剂盒说明书进行。结果见表11和表12。
表11、科罗索酸对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠肝糖原含量的影响，(x±s，n＝10)

(与模型对照组比*P＜0.05，**P＜0.01)结果表明，与假手术组相比，模型组大鼠肝糖原含量显著减少，而科罗索酸高中剂量可以显著性降低手术造成的肝糖原减少。
表12、对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织匀浆乳酸(LA)和乳酸脱氢酶(LDH)的影响(x±s，n＝10)

(与模型对照组比*P＜0.05，**P＜0.01；与假手术组比@P＜0.05，@@P＜0.01)结果表明，与假手术组相比，模型组脑组织匀浆LA含量和LDH活力显著升高，而科罗索酸高中剂量可以显著性降低局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织LA含量和LDH活力，预示其具有潜在的抗脑缺血损伤作用。
七、科罗索酸对PC12细胞三种拟脑缺血模型的保护作用模型一Na2S2O4致PC12细胞缺氧/复氧损伤模型将PC12细胞以2×105个/ml密度接种于96孔培养板中，置37℃，5％CO2培养箱中孵育。设空白对照组(PBS)、模型对照组(PBS)、阳性对照组(尼莫地平10-6mol/L)和药物组(10-5mol/L)。细胞铺满单层后，弃原液，加入100μl无血清低糖DMEM，然后分别加入药物组及10-6mol/L尼莫地平，作用1hr后，加入终浓度为5mmol/L的Na2S2O4，同时用医用胶布将板四周封住，作用1hr后，弃培养液，孵育1小时后换去缺氧培养液，加入正常的DMEM培养液(含10％小牛血清)继续培养1小时。
模型二NaCN加缺糖致PC12细胞拟缺血损伤模型取PC12细胞铺满单层的96孔培养板，弃原液，准确加入100μl无糖Earle’s液(g/LNaCl6.68，KCl 0.04，CaCl20.2，MgSO4.7H2O 0.2，NaH2PO4.2H2O 0.4，NaHCO32.2，甘露醇1.0，Hepes 4.8，酚红0.02，pH7.2～7.4)，作用30min后，加入终浓度为10-5mol/L的药物及10-6mol/L尼莫地平，作用30min后，加入20mmol/L NaCN作用20min，弃培养液，换成100μl无血清低糖DMEM，置37℃、5％CO2培养箱内继续培养。
模型三谷氨酸致PC12细胞损伤模型取PC12细胞铺满单层的96孔培养板，弃原液，换成100μl无血清低糖DMEM，然后加入终浓度为10-5mol/L的药物及10-6mol/L尼莫地平，作用30min，然后在相应各孔中加入终浓度为500μmol/L的L-谷氨酸，置37℃、5％CO2培养箱内作用24hr。
测定指标形态学观察细胞形态学观察倒置显微镜下观察细胞的生长及细胞病变情况。
MTT法测定活细胞数各孔加入终浓度为5mg/ml的MTT10μl，继续培养4小时后加入100μl裂解液，温孵12小时后在570nm处测量吸光度(OD570nm)以间接反映细胞活力。按下式计算给药组对PC12细胞损伤的抑制率。抑制率＝(OD给药组-OD模型组)/(OD对照组-OD模型组)表13、MTT法测定科罗索酸作用于Na2S2O4致PC12细胞缺氧损伤模型后的细胞成活率(x±s，n＝8)

(与正常对照组比#P＜0.05，##P＜0.01；与模型对照组比*P＜0.05，**P＜0.01)PC12细胞培养液中加入Na2S2O4(5mmol/L)1小时后，镜下就可见大部分细胞轴突消失，细胞固缩。由表13可见，模型组OD值下降，与对照组相比有极显著区别(p＜0.01)。说明模型组细胞受到较严重的损伤，模型是成功的。科罗索酸在浓度为10-5mol/L时OD值与模型组相比有显著差异(p＜0.05)说明其对该浓度下的Na2S2O4损伤有一定保护作用。
表14、MTT法测定科罗索酸作用于谷氨酸致PC12细胞缺氧损伤模型后的细胞成活率(x±s，n＝8)

(与正常对照组比#P＜0.05，##P＜0.01；与模型对照组比*P＜0.05，**P＜0.01)PC12细胞培养液中加入L-谷氨酸(500μmol/L)24小时后，镜下就可见大部分细胞轴突消失，细胞固缩。由表14可见，模型组OD值下降，与对照组相比有极显著区别(p＜0.01)。说明模型组细胞受到较严重的损伤，造模成功。科罗索酸在浓度为10-5mol/L时OD值与模型组相比有极显著差异(p＜0.01)说明其对该浓度下的谷氨酸损伤有一定保护作用。
表15、各药对NaCN加缺糖致PC12细胞拟缺血损伤模型的保护作用(x±s，n＝8)

(与正常对照组比#P＜0.05，##P＜0.01；与模型对照组比*P＜0.05，**P＜0.01)PC12细胞培养液中加入NaCN(20mmol/L)20min后，镜下就可见大部分细胞轴突消失，细胞固缩。由表15可见，模型组OD值下降，与对照组相比有极显著区别(p＜0.01)。模型组细胞受到较严重的损伤，模型成功。科罗索酸OD值与模型组相比有极显著差异(p＜0.01)，说明其对该浓度下的NaCN损伤有一定保护作用。
上述实验结果表明科罗索酸对缺血性脑损伤具有潜在的防治作用。
八、五环三萜类化合物对小鼠耐缺氧能力的影响取昆明种小鼠80只，体重18～22g，雌雄各半，按性别体重随机分为10组，每组8只。于实验前三天，分别每天灌胃给药一次，给药容积为0.4ml/20g。空白对照组给予等容积0.5％CMC-Na溶液，第四天最后一次给药后30分钟，将小鼠置于装有12.5g钠石灰的60ml密闭广口瓶中，记录小鼠的死亡时间。
结果(见表16)表明，与空白对照组比较，所测试化合物都显示了不同程度的抗缺氧作用，其中，甘草酸显著延长小鼠在缺氧状态下的存活时间(P＜0.05)；甘草次酸和积雪草酸极显著延长小鼠在缺氧状态下的存活时间(P＜0.01)。
表16、各药对小鼠耐缺氧能力的影响(x±s，n＝8)

(*p＜0.05，**p＜0.01 vs.control)九、五环三萜类化合物的抗肿瘤作用试验细胞株人肺癌细胞A549、人低分化胃腺癌细胞BGC-823、人肝癌细胞SMMC-7721、人早幼粒细胞白血病细胞HL-60。
方法取处于指数生长期状态良好的细胞一瓶，加入0.25％胰蛋白酶消化液，消化使贴壁细胞脱落，计数2～4×104个/ml，制成细胞悬液。取细胞悬液接种于96孔板上，180μl/孔，置恒温CO2培养箱中培养24小时。换液，加入受试药物，20μl/孔，培养48小时。将MTT加入96孔板中，20μl/孔，培养箱中反应4小时。吸去上清液，加入DMSO，150μl/孔，平板摇床上振摇5分钟。用酶联免疫检测仪在波长为570nm处测定每孔的吸光值，并计算细胞抑制率。

结果(见表17)表明，所测试的五环三萜化合物对肿瘤细胞有不同程度的生长抑制作用，表明该类化合物具有抗肿瘤活性。
表17、五环三萜化合物对肿瘤细胞的生长抑制作用


具体实施方式
实施例13-异构齐墩果酸的制备3-羰基齐墩果酸-28-苄酯(9a)0.54g溶解于14mL无水异丙醇中，加入异丙醇铝(24.7％，2.5g，商品)及催化量的AlCl3，油浴95℃左右回流，六天后原料仍未完全消失，停止回流，冷却后向反应液中缓慢滴加1N盐酸100mL，用乙酸乙酯40mL×4提取，加入饱和碳酸氢钠溶液洗涤，最后加饱和食盐水洗涤，得乙酸乙酯层，无水Na2SO4干燥，蒸干，快速柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝20∶1)，得3α-羟基齐墩果酸-28-苄酯0.18g(33.2％)。
向3α-羟基齐墩果酸-28-苄酯(0.12g)中加入8mL四氢呋喃，加10％Pd/C(0.02g)，室温常压氢化过夜，原料反应完全后，以四氢呋喃稀释反应物，过滤除去Pd/C，滤液蒸去溶剂后得粉状固体，加入适量正己烷将少量附着的颜色除去，过滤后得白色粉末状3-异构齐墩果酸0.09g(89.8％)。
实施例23-异构熊果酸的制备以3-羰基熊果酸-28-苄酯(9b)为原料，参照实施例1的方法制得3α-羟基熊果酸。
实施例3齐墩果酸-28-甲酯的制备齐墩果酸(5.0g)溶解于50mL无水DMF中，加入K2CO3(3.0g)和MeI(0.82mL)，室温搅拌2.5小时。加水稀释后，以乙酸乙酯提取，合并的乙酸乙酯层依次以1mol/L盐酸水溶液、饱和氯化钠水溶液洗涤后，以无水硫酸钠干燥。蒸除溶剂后得齐墩果酸甲酯的淡黄色粗品5.36g。取0.25g粗品经硅胶柱层析(洗脱剂，石油醚∶乙酸乙酯＝6∶1)得纯品齐墩果酸甲酯0.23g.
实施例4熊果酸-28-甲酯、科罗索酸-28-甲酯和山楂酸-28-甲酯等的制备均参照实施例3的方法进行。
实施例5熊果酸-28-乙酯的制备于反应瓶中加入熊果酸0.5克，碳酸钾0.3克，DMF10mL，缓慢滴加溴乙烷0.3mL，室温反应8h。加入饱和食盐水用乙酸乙酯提取，干燥，过滤。减压蒸干，经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯30/1)得白色固体0.46克，收率87％。1H NMR(CDCl3，300M)0.77(3H，s)，0.78(3H，s)，0.85(3H，d，J＝6.5Hz)，0.92(3H，s)，0.95(3H，s)，0.99(3H，s)，1.08(3H，s)，1.22(3H，t，J＝7.2Hz)，2.23(1H，d，J＝11.1Hz)，3.17-3.25(1H，m)，4.03(1H，d，J＝7.1Hz)，4.08(1H，d，J＝7.1Hz)，5.24(1H，t，J＝3.7Hz)；ESIMSm/z507[M+Na]+.
实施例6积雪草酸-28-乙酯的制备以积雪草酸为原料，参照实施例5的方法制得积雪草酸-28-乙酯。1HNMR(CDCl3，300M)0.76(3H，s，CH3)，0.85(3H，d，J＝6.4Hz)，0.90(3H，s，CH3)，0.94(3H，d，J＝5.6Hz)，1.04(3H，s，CH3)，1.08(3H，s，CH3)，1.21(3H，t，J＝7.1Hz)，2.23(1H，d，J＝11.2Hz)，3.42(2H，m)，3.68(1H，d，J＝10.4Hz)，3.76(1H，m)，4.05(2H，q，J＝7.1Hz)；ESIMSm/z539[M+Na]+.
实施例73-O-乙酰基齐墩果酸的制备于反应瓶中加入齐墩果酸0.5克，10mL乙酸酐和10mL吡啶，80℃反应10小时。上旋转蒸发仪浓缩至干，加入1M盐酸，用乙酸乙酯提取，有机层用饱和食盐水洗至中性后用饱和碳酸钠溶液洗，饱和食盐水洗至中性，有机层加入无水MgSO4干燥，过滤，减压蒸干，经快速柱层析(石油醚∶乙酸乙酯30∶1)得白色固体0.47克，收率86％。
实施例83-O-乙酰基熊果酸的制备以熊果酸为原料，参照实施例7的方法制得3-O-乙酰基熊果酸。
实施例92，3，23-O-三乙酰基积雪草酸的制备以积雪草酸为原料，参照实施例7的方法制得2，3，23-O-三乙酰基积雪草酸。
实施例102，3，23-O-三丁酰基积雪草酸的制备以积雪草酸和丁酸酐为原料，参照实施例7的方法制得2，3，23-O-三丁酰基积雪草酸。1HNMR(CDCl3，300M)0.78(3H，s，CH3)，0.85(3H，d，J＝6.4Hz)，0.88(3H，s，CH3)，0.94(3H，d，J＝4.8Hz)，1.07(3H，s，CH3)，1.11(3H，s，CH3)，2.19-2.36(7H，m)，3.50(1H，d，J＝11.8Hz)，3.89(1H，d，J＝11.8Hz)，5.12(1H，d，J＝10.3Hz)，5.19(1H，m)，5.22(1H，br s)；ESIMSm/z 721[M+Na]+.
实施例112，3，23-O-三乙酰基积雪草酸-28-乙酯的制备以积雪草酸-28-乙酯为原料，参照实施例7的方法制得2，3，23-O-三乙酰基积雪草酸-28-乙酯。1H NMR(CDCl3，300M)0.77(3H，s，CH3)，0.85(3H，d，J＝6.4Hz)，0.89(3H，s，CH3)，0.94(3H，d，J＝5.8Hz)，1.08(3H，s，CH3)，1.10(3H，s，CH3)，1.22(3H，t，J＝7.1Hz)，1.98(3H，s，COCH3)，，2.02(3H，s，COCH3)，2.08(3H，s，COCH3)，2.24(1H，d，J＝11.3Hz)，3.57(1H，d，J＝11.8Hz)3.85(1H，d，J＝11.8Hz)，4.06(2H，q，J＝7.1Hz)，5.08(1H，d，J＝10.3Hz)5.17(1H，m，)5.25(1H，t，J＝3.5Hz)；ESIMSm/z 665[M+Na]+.
实施例123-O-琥珀酰基齐墩果酸的制备于反应瓶中加入齐墩果酸0.5克，丁二酸酐1克，DMAP0.1克，10mL吡啶。80℃反应10小时。蒸干，加入1M盐酸，用乙酸乙酯提取，有机层用饱和食盐水洗至中性后，再用饱和碳酸钠溶液萃取，水层用1M盐酸酸化后，加入50ml乙酸乙酯和和10ml四氢呋喃进行萃取，有机层再用饱和食盐水洗至中性，干燥，过滤，减压蒸干后，用乙醇重结晶得白色固体0.48克，收率79％。
实施例133-O-对氯肉桂酰基齐墩果酸的制备于反应瓶中加入齐墩果酸0.5克，对氯肉桂酸0.22克，DCC 0.22克，DMAP 0.13克，四氢呋喃30mL，室温反应8h。加入50mL乙酸乙酯，过滤，滤液蒸干，用乙酸乙酯提取后，有机层再用饱和食盐水洗至中性，干燥，过滤，减压蒸干后经快速柱层析(石油醚∶乙酸乙酯10∶1)得白色固体0.58克，收率85％。mp305-307℃。1H NMR(CDCl3，300M)0.78(3H，s，CH3)，0.91(6H，s，2×CH3)，0.93(6H，s，2×CH3)，0.97(3H，s，CH3)，1.15(3H，s，CH3)，2.81-2.85(1H，m，18-H)，4.64(1H，t，J＝8.0Hz，3-H)，5.29(1H，br s，12-H)，6.41(1H，d，J＝16.0Hz，＝CH-)，7.35(2H，d，J＝8.5Hz，Ar-H)，7.46(2H，d，J＝8.6Hz，Ar-H)，7.61(1H，d，J＝16.0Hz，-CH＝)。ESI-MS(m/z)619.3(10)[M-H]+.
实施例143-O-对甲氧基肉桂酰基齐墩果酸的制备以齐墩果酸和对甲氧基肉桂酸为原料，参照实施例13的方法制得3-O-对甲氧基肉桂酰基齐墩果酸。1H NMR(DMSO-d6，300M)0.74(3H，s)，0.85(3H，s)，0.88(6H，s)，0.91(3H，s)，0.93(3H，s)，1.12(3H，s)，2.73-2.78(1H，m)，3.80(3H，s)，4.52(1H，dd，J＝4.9，11.7Hz)，5.17(1H，br s)，6.44(1H，d，J＝16.0Hz)，6.97(2H，d，J＝8.8Hz)，7.57(1H，d，J＝16.0Hz)，7.66(2H，d，J＝8.8Hz)；ESI-MS(m/z)639[M+Na]+。
实施例152，3-O-二乙酰基科罗索酸的制备以科罗索酸酸和大过量醋酐为原料，参照实施例7的方法制得2，3-O-二乙酰基科罗索酸。1HNMR(CDCl3，500MHz)δ0.76，0.89，0.90，0.95(each，3H，s)，0.84(3H，d，J＝3.7Hz)，1.07(6H，s)，1.97(3H，s，3β-OAc)，2.05(3H，s，2α-OAc)，2.17(1H，d，J＝11.0Hz，H-18)，4.47(1H，d，J＝10.3Hz，H-3α)，5.10(1H，m，H-2β)，5.23(1H，t，J＝3.6Hz，H-12).
实施例162-O-乙酰基科罗索酸的制备将0.06g(0.127mmol)科罗索酸酸溶于10mL吡啶中，冰水浴冷却下滴加0.03g醋酐(0.294mol，约2.3eq.)与5mL吡啶组成的稀溶液，30分钟滴完，冰水浴冷却下搅拌1小时后，自然升温至室温搅拌过夜。减压蒸出吡啶，残留物以乙酸乙酯溶解后依次以1N盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、水洗涤，无水硫酸钠干燥。硅胶柱层析分离得2-O-乙酰基科罗索酸(0.03g，46％).1HNMR(CDCl3，300MHz)δ0.80，0.98，1.07，1.08，1.10(each，3H，s)，0.88(6H，s)，2.09(3H，s，2α-OAc)，2.19(1H，d，J＝11.1Hz，H-18)，3.21(1H，d，J＝10.0Hz，H-3α)，4.97(1H，m，H-2β)，5.26(1H，t，J＝3.4Hz，H-12).
实施例17齐墩果酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯的制备 将齐墩果酸2g和1-溴-2，3，4，6-四乙酰基葡萄糖3.51g溶于40mLDMF中，加入2.42g碳酸钾，室温搅拌过夜。过滤除去碳酸钾，将母液倾入200mL水中，析出白色沉淀。过滤收集沉淀，干燥后得粗品3.56g。此粗品无需纯化可直接用于下一步水解。少量的分析样品可由硅胶柱层析得。齐墩果酸-28-O-[2，3，4，6-四乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖]酯1HNMR(300MHz，CDCl3)δ0.74，0.78，0.98，1.13(each，3H，s)，0.91(12H，s)，2.01 and 2.02(total9H)，2.07(3H，s)，2.80(1H，dd，J＝4.5，13.9Hz，H-18)，3.22(1H，dd，J＝4.3，11.0Hz，H-3α)，3.80(1H，m，H-5’)，4.03(1H，dd，J＝2.1，12.4Hz，H-6’-2)，4.26(1H，dd，J＝4.4，12.5Hz，H-6’-1)，5.13(1H，t，J＝9.4Hz，H-4’)，5.18(1H，dd，J＝7.3，13.3Hz，H-2’)，5.25(1H，t，J＝9.1Hz，H-3’)，5.28(1H，brs，H-12)，5.57(1H，d，J＝7.8Hz，H-1’).[M+Na]+809.4.
将上述粗品0.75g溶于14mL四氢呋喃和8.7ml甲醇组成的溶液中，室温搅拌下滴加4N氢氧化钠水溶液2.6mL.滴毕，继续于室温搅拌3小时，TLC检测水解完全。向反应液中加入50mL水，过滤收集析出的白色沉淀，干燥后得粗品0.37g。硅胶柱层析得纯品齐墩果酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯0.18g.1HNMR(300MHz，Pyridine-d5，)δ0.88，0.90，0.92，1.02，1.03，1.22，1.24(each，3H，s)，3.22(1H，dd，J＝4.5，13.9Hz，H-18)，3.42(1H，dd，J＝5.6，10.0Hz，H-3α)，4.02(1H，m，H-5’)，4.16-4.48(5H，m)，5.45(1H，brs，H-12)，6.31(1H，d，J＝7.9Hz，H-1’).[M+Na]+641.4.
实施例18熊果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯的制备 以熊果酸和1-溴-2，3，4，6-四乙酰基葡萄糖为原料，参照实施例17的方法制得熊果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯。1HNMR(300MHz，Pyridine-d5，)δ0.82，0.85，0.96，1.06，1.10(each，3H，s)，0.88(3H，d，J＝6.5Hz)，0.94(3H，d，J＝5.5Hz)，2.22(1H，d，J＝11.5Hz，H-18)，3.17(1H，dd，J＝4.6，11.9Hz，H-3α)，4.04(1H，m，H-5’)，4.13-4.45(5H，m)，5.23(1H，brs，H-12)，6.27(1H，d，J＝8.1Hz，H-1’).[M+Na]+641.4.
实施例19科罗索酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯的制备 以科罗索酸和1-溴-2，3，4，6-四乙酰基葡萄糖为原料，参照实施例17的方法制得科罗索酸-28-O-β-D吡喃葡萄糖酯。1HNMR(300MHz，MeOH-d，)δ0.72，0.85，0.94，1.04，1.09(each，3H，s)，0.89(3H，d，J＝6.0Hz)，1.02(3H，d，J＝6.0Hz)，2.22(1H，d，J＝10.1Hz，H-18)，2.99(1H，d，J＝9.8Hz，H-3α)，3.80(1H，ddd，J＝4.5，9.8，11.0Hz，H-2β)，3.75(1H，m，H-5’)，4.04(1H，dd，J＝2.5，12.5Hz，H-6’-2)，4.24(1H，dd，J＝4.5，12.5Hz，H-6’-1)，5.12(1H，t，J＝9.7Hz，H-4’)，5.14(1H，dd，J＝8.5，9.5Hz，H-2’)，5.24(1H，t，J＝9.5Hz，H-3’)；5.27(1H，t，J＝3.5Hz，H-12)，5.30(1H，d，J＝7.6Hz，H-1′)；[M+Na]+657.4实施例20齐墩果酸吡唑化合物1的制备于反应瓶中加入齐墩果酸苄酯酮(9a)1克，干燥CH2Cl220mL，甲醇钠1克，甲酸乙酯5mL，室温反应10小时。减压蒸干，加入饱和食盐水后用乙酸乙酯提取，有机层干燥，过滤，蒸干，经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯60/1)得白色固体(10a)0.91克，收率87％。1H NMR(CDCl3，300M)0.66(3H，s)，0.88(3H，s)，0.90(3H，s)，0.93(3H，s)，1.11(3H，s)，1.14(3H，s)，1.18(3H，s)，2.27(1H，d，J＝14.3Hz)，2.93(1H，dd，J＝3.6，13.4Hz)，5.05(1H，d，J＝12.5Hz)，5.10(1H，d，J＝12.5Hz)，5.34(1H，br s)，7.26-7.34(5H，m)，8.56(1H，br s)，14.89(1H，br s)；ESIMSm/z571[M-H]-于反应瓶中加入化合物(10a)0.85克，水合肼1mL，乙醇20mL，回流反应4小时。加入饱和食盐水后用乙酸乙酯提取，有机层干燥，过滤，减压蒸干后得吡唑齐墩果酸-28-苄酯(11a)0.75克。1HNMR(CDCl3，300M)0.68(3H，s)，0.84(3H，s)，0.91(3H，s)，0.93(3H，s)，1.16(3H，s)，1.20(3H，s)，1.29(3H，s)，2.02(1H，d，J＝14.4Hz)，2.57(1H，d，J＝14.8Hz)，2.94(1H，dd，J＝4.1，13.2Hz)，5.05(1H，d，J＝12.5Hz)，5.11(1H，d，J＝12.5Hz)，5.36(1H，t，J＝3.5Hz)，7.23(1H，s)，7.29-7.36(5H，m)；ESIMSm/z 569[M+H]+.
于反应瓶中加入化合物(11a)0.5克，0.1克10％Pd/C，THF/HAc/1N HCl 10mL(1∶0.1∶0.2)，常温常压氢解24小时。过滤，加入饱和食盐水后用乙酸乙酯提取，有机层用饱和食盐水洗至中性后干燥，过滤，减压蒸干后得齐墩果酸吡唑化合物1(白色固体)0.41克，收率98％。1HNMR(CDCl3，300M)0.81(3H，s)，0.85(3H，s)，0.91(3H，s)，0.95(3H，s)，1.17(3H，s)，1.18(3H，s)，1.28(3H，s)，2.57(1H，d，J＝14.9Hz)，2.85-2.90(1H，m)，5.36(1H，br s)，7.20(1H，s)；ESIMSm/z 479[M+H]+.
实施例21齐墩果酸吡唑化合物2的制备将吡唑齐墩果酸-28-苄酯(11a，0.5克)加入到反应瓶中，再加入DMF 10mL，K2CO30.3克，0.2mL碘甲烷，室温反应8小时。加入饱和食盐水后用乙酸乙酯提取，有机层干燥，过滤，蒸干后经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯30/1)得齐墩果酸吡唑化合物2(白色固体)0.48克，收率94％。1H NMR(CDCl3，300M)0.70(3H，s)，0.87(3H，s)，0.92(3H，s)，0.95(3H，s)，1.18(3H，s)，1.25(3H，s)，1.34(3H，s)，2.55(1H，d，J＝14.9Hz)，2.95(1H，dd，J＝4.0，14.5Hz)，3.89(3H，s)，5.07(1H，d，J＝12.5Hz)，5.12(1H，d，J＝12.6Hz)，5.37(1H，t，J＝3.3Hz)，6.99(1H，s)，7.31-7.38(5H，m)；ESIMSm/z583[M+H]+.
实施例22齐墩果酸二唑化合物5的制备于反应瓶中加入齐墩果酸苄酯酮(9a)1克，亚硝酸钠0.5克，10mL四氢呋喃/甲醇/水(1∶1∶1)，于0℃下边搅拌边滴加硫酸5mL，滴毕自然升温至室温继续反应10小时。加50mL乙酸乙酯和10mL四氢呋喃后用饱和食盐水洗至中性，有机层干燥，过滤，浓缩后经快速柱层析(石油醚∶乙酸乙酯10∶1)得2-肟基-3-羰基-齐墩果酸-28-苄酯(14a)0.61克，收率58％。mp208-210℃。IR(cm-1)3207，2947，2867，1726，1704，1460，1161，972，746，696.1HNMR(CDCl3，300M)0.65(3H，s，CH3)，0.89(3H，s，CH3)，0.91(3H，s，CH3)，0.93(3H，s，CH3)，1.13(3H，s，CH3)，1.15(3H，s，CH3)，1.19(3H，s，CH3)，2.14(1H，d，J＝18.5Hz)，2.96(1H，d，J＝18.5Hz)，5.07(1H，d，J＝12.5Hz)，5.13(1H，d，J＝12.5Hz)，5.36(1H，t，J＝3.6Hz，12-H)，7.29-7.38(5H，m，Ar-H)；ESI-MS(m/z)596.4(100)[M+Na]+。
于反应瓶中加入化合物(14a)0.5克，盐酸羟胺0.5克，吡啶20mL，80℃反应10小时。干蒸，加入50mL乙酸乙酯和10mL四氢呋喃，用饱和食盐水洗至中性，有机层干燥，过滤，浓缩后经快速柱层析(石油醚∶乙酸乙酯7∶1)得2，3-二肟基-齐墩果酸-28-苄酯(15a)0.4克，收率78％。mp158-160℃。IR(cm-1)3261，3224，2945，2864，1724，1706，1456，1161，975，746，698。1H NMR(CDCl3，500M)0.67(3H，s，CH3)，0.93(s，6H，2×CH3)，0.96(3H，s，CH3)，1.16(3H，s，CH3)，1.25(3H，s，CH3)，1.30(3H，s，CH3)，1.87(1H，d，J＝18.0Hz)，3.13(1H，d，J＝18.0Hz)，2.95(1H，dd，J＝3.8，13.7Hz，18-H)，5.08(1H，d，J＝12.5Hz)，5.12(1H，d，J＝12.5Hz)，5.36(1H，t，J＝3.4Hz，12-H)，7.29-7.38(5H，m，Ar-H)。ESI-MS(m/z)589.5(100)[M+H]+。
于反应瓶中加入化合物(15a)0.3克，氢氧化钠0.1克，乙二醇20mL，200℃反应半小时后自然冷却至室温，加入50mL乙酸乙酯，用饱和食盐水洗至中性，有机层干燥，过滤，浓缩后经快速柱层析(石油醚∶乙酸乙酯60∶1)得齐墩果酸二唑苄酯(16a)0.22克，收率76％。mp210-212℃。IR(cm-1)2977，2948，2910，2869，1718，1458，1176，1000，757。1H NMR(CDCl3，300M)0.66(3H，s，CH3)，0.81(3H，s，CH3)，0.91(3H，s，CH3)，0.94(3H，s，CH3)，1.16(3H，s，CH3)，1.33(3H，s，CH3)，1.41(3H，s，CH3)，2.15(1H，d，J＝16.1Hz)，3.08(1H，d，J＝16.2Hz)，2.92-2.97(1H，m，18-H)，5.05(1H，d，J＝12.5Hz)，5.11(1H，d，J＝12.5Hz)，5.36(1H，br s，12-H)，7.27-7.40(5H，m，Ar-H)。ESI-MS(m/z)571.2(100)[M+H]+。元素分析C37H50O3N2，各元素的质量分数理论值(％)C 77.85，H 8.83，N 4.91；实验值(％)C 77.82，H 8.76，N 4.86。
于反应瓶中加入上述二唑苄酯(16a)0.15克，10％钯碳0.015克，20mL甲醇/四氢呋喃，通入氢气，室温常压氢解，TLC跟踪约8小时后原料消失，快速柱层析(石油醚∶乙酸乙酯20∶1)得齐墩果酸二唑化合物5(白色固体)0.12克，收率95％。mp252-254℃，IR(cm-1)2947，2869，1693，1460，1386，1002，881。1HNMR(CDCl3，300M)0.83(3H，s，CH3)，0.84(3H，s，CH3)，0.92(3H，s，CH3)，0.94(3H，s，CH3)，1.18(3H，s，CH3)，1.31(3H，s，CH3)，1.41(3H，s，CH3)，2.17(1H，d，J＝16.3Hz)，3.10(1H d，J＝16.2Hz)，2.87(dd，1H，J＝3.9，13.6Hz，18-H)，5.36(t，1H，J＝3.5Hz，12-H)。13C NMR(CDCl3，300M)15.4，16.6，19.1，22.9，23.3，23.5，24.7，25.7，27.7，30.7，31.3，31.8，32.4，33.0，33.2，33.8，35.3，38.5，39.4，41.1，41.9，45.8，45.9，46.6，53.1，122.1，143.7，150.5，159.7，183.3。ESI-MS(m/z)503.2(100)[M+Na]+。元素分析C30H44O3N2，各元素的质量分数理论值(％)C 74.96，H 9.23，N 5.83；实验值(％)C 75.40，H 9.59，N 5.31。
实施例23齐墩果酸异唑化合物7的制备于反应瓶中加入化合物(10a)0.5克，盐酸羟胺0.25克，95％乙醇10mL，回流反应3小时。减压蒸干，加入饱和食盐水后用乙酸乙酯提取，有机层干燥，过滤，蒸干后，经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯50/1)得齐墩果酸异唑苄酯(17a)0.47克，收率95％。1HNMR(CDCl3，300M)0.67(3H，s)，0.86(3H，s)，0.91(3H，s)，0.93(3H，s)，1.15(3H，s)，1.21(3H，s)，1.30(3H，s)，2.42(1H，d，J＝15.1Hz)，2.94(1H，dd，J＝3.6，13.7Hz)，5.05(1H，d，J＝12.5Hz)，5.11(1H，d，J＝12.5Hz)，5.34(1H，t，J＝3.5Hz)，7.29-7.36(5H，m)，7.97(1H，s)；ESIMSm/z 570[M+H]+，592[M+Na]+.
于反应瓶中加入化合物(17a)0.5克，0.05克10％Pd/C，乙酸乙酯10mL，常温常压氢解2小时。过滤，减压蒸干后经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯30/1)得齐墩果酸异唑化合物7(白色固体)0.05克，收率12％。1H NMR(DMSO-d6，300M)0.79(3H，s)，0.83(3H，s)，0.89(6H，s)，1.13(3H，s)，1.15(3H，s)，1.25(3H，s)，2.00(1H，d，J＝15.6Hz)，2.39(1H，d，J＝15.3Hz)，2.73-2.81(1H，m)，5.23(1H，br s)，8.28(1H，s)；ESIMSm/z 480[M+H]+，502[M+Na]+.
实施例24化合物18的制备 于反应瓶中加入齐墩果酸1克，碳酸钾0.6克，DMF20mL，缓慢滴加溴乙酸乙酯0.28mL，室温反应8h。加20mL乙酸乙酯于反应瓶中，过滤，滤液蒸干，加入饱和食盐水用乙酸乙酯提取，干燥，过滤。减压蒸干后经快速柱层析(石油醚∶乙酸乙酯30∶1)得白色固体0.91克，收率77％。mp124-126℃。1H NMR(CDCl3，500M)0.73(3H，s，CH3)，0.78(3H，s，CH3)，0.90(6H，s，2×CH3)，0.93(3H，s，CH3)，0.99(3H，s，CH3)，1.14(3H，s，CH3)，1.27(3H，t，J＝7.2Hz，CH3)，2.87(1H，dd，J＝4.5，13.9Hz，18-H)，3.21(1H，dd，J＝4.3，11.1Hz，3-H)，4.16-4.25(2H，m，COOCH2)，4.49(1H，d，COOCHaCOO，J＝15.7Hz)，4.60(1H，d，COOCHbCOO，J＝15.7Hz)，5.29(1H，t，J＝3.6Hz，12-H).
于反应瓶中加入上述白色固体0.5克，20mL甲醇/四氢呋喃(1∶1)，1MNaOH 5mL，室温反应8h。蒸除溶剂，加入1M盐酸酸化后用乙酸乙酯提取，有机层再用饱和食盐水洗至中性，干燥，过滤，减压蒸干后用乙醇重结晶得化合物18(白色固体)0.4克，收率84％。mp213-215℃.1H NMR(DMSO-d6，300M)0.66(3H，s，CH3)，0.67(3H，s，CH3)，0.85(3H，s，CH3)，0.87(3H，s，CH3)，0.88(3H，s，CH3)，0.89(3H，s，CH3)，1.10(3H，s，CH3)，2.77(1H，dd，J＝4.4，13.8Hz，18-H)，2.90-3.05(1H，m，3-H)，4.27(1H，d，J＝3.9Hz，3-OH)，4.43(1H，d，J＝15.8Hz，COOCHa)，4.53(1H，d，J＝15.8Hz，COOCHb)，5.18(1H，br s，3-H)，12.89(1H，s，COOH)。ESI-MS(m/z)513.3(100)[M-H]+.
实施例25化合物19的制备 于反应瓶中加入化合物(10a)1克，对甲基苯肼盐酸盐0.28克，乙醇10ml，5滴醋酸，于80℃下回流反应8小时。加入饱和食盐水后用乙酸乙酯提取，有机层干燥，过滤，蒸干后经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯30/1)得白色固体1.00克，收率87％。1H NMR(DMSO-d6，300M)0.60(3H，s)，0.84(3H，s)，0.89(6H，s)，0.93(3H，s)，0.98(3H，s)，1.12(3H，s)，2.05(1H，d，J＝15.2Hz)，2.38(3H，s)，2.83-2.88(1H，m)，5.04(2H，m)，5.27(1H，br s)，7.17-7.42(10H，m)；ESIMSm/z 659[M+H]+.
权利要求
1.通式I、II或III所示的五环三萜类化合物或其药学上可接受的盐或酯用于制备糖原磷酸化酶抑制剂的用途 其中R1代表氢或OR16，R16代表氢或R17CO，R17代表1～10个碳的直链或支链烷基、苯基或取代的苯基，此外，R17CO还代表肉桂酰基、4-氯取代肉桂酰基、4-甲氧基取代肉桂酰基或琥珀酰基；R2代表氢、R18CO、D-吡喃葡萄糖基、D-吡喃葡萄糖醛酸基、D-吡喃葡萄糖醛酸基-D-吡喃葡萄糖醛酸基；R18代表1～10个碳的直链或支链烷基、苯基或取代的苯基，R18CO还代表肉桂酰基、4-氯取代肉桂酰基、4-甲氧基取代肉桂酰基或琥珀酰基；R3代表氢或甲基，R4代表氢、甲基或羧基，并且，当R3代表氢时，R4仅代表甲基或羧基；当R3代表甲基时，R4仅代表氢；R5代表氢或OR19，R19代表氢或R20CO，R20代表1-10个碳的直链或支链烷基、苯基或取代的苯基，此外，R20CO还代表肉桂酰基、4-氯取代肉桂酰基、4-甲氧基取代肉桂酰基或琥珀酰基；R6代表CH3、CH2OR21或COOR22，R21代表氢或R23CO，R23代表1～10个碳的直链或支链烷基；R22代表氢、1～10个碳的直链或支链烷基、(CH2)nCOOCH2CH3、(CH2)nCOOH、苄基、取代的芳烃烷基、D-吡喃葡萄糖基、乙酰基D-吡喃葡萄糖基或D-吡喃葡萄糖基-D-吡喃葡萄糖基-吡喃鼠李糖基，n＝1，2，3；R7、R8代表氢，或者，R7和R8一起代表一个羰基；R9代表氢或羟基；Ar环代表与五环三萜的A环稠合的吡唑环、1～10个碳的直链或支链烷基取代的吡唑环、苯基或取代苯基取代的吡唑环、二唑环或异唑环；R10、R11代表氢或甲基，并且，当R10代表氢时，R11仅代表甲基；当R10代表甲基时，R11仅代表氢；R12代表氢、1～10个碳的直链或支链烷基、苄基或取代的芳烃烷基；R13代表CH3、CH2OR24或COOR25，R24代表氢或R26CO，R26代表1～10个碳的直链或支链烷基；R25代表氢、1～10个碳的直链或支链烷基、(CH2)nCOOCH2CH3、(CH2)nCOOH、苄基、取代的芳烃烷基、D-吡喃葡萄糖基或乙酰基D-吡喃葡萄糖基，n＝1，2，3；R14代表氢、R27CO、D-吡喃葡萄糖基、D-吡喃葡萄糖醛酸基、D-吡喃葡萄糖醛酸基-D-吡喃葡萄糖醛酸基，R27代表1～10个碳的直链或支链烷基、苯基或取代的苯基，R27CO还代表肉桂酰基、4-氯取代肉桂酰基、4-甲氧基取代肉桂酰基或琥珀酰基；R15代表氢或羟基。
2.权利要求1的用途，其中，通式I、II或III的化合物是山楂酸、科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸、积雪草酸、甘草酸、甘草次酸、11-脱氧甘草次酸、积雪草苷、羟基积雪草酸、羟基积雪草苷、阿江榄仁酸、常春藤皂甙元、齐墩果酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、熊果酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、山楂酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、科罗索酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、熊果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、熊果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山楂酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、山楂酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、科罗索酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、科罗索酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山楂酸-28甲酯、科罗索酸-28-甲酯、(反式)-3-O-对氯肉桂酰基齐墩果酸、3-O-乙酰基齐墩果酸、2-O-乙酰基山楂酸、2，3-O-二乙酰基山楂酸、2，3-O-二乙酰基科罗索酸、3-O-琥珀酰基齐墩果酸、2，3，23-O-三乙酰基积雪草酸、23-羟基熊果酸、3-异构齐墩果酸、3-异构熊果酸、3-异构山楂酸、2-异构山楂酸、3-异构科罗索酸、2-异构科罗索酸、白桦脂醇、白桦脂酸、23-羟基白桦脂酸、白桦脂酸-28-β-D-葡萄糖酯、白桦脂酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、羽扇豆醇，或如下所示的五环三萜A环稠杂环化合物
3.权利要求2的用途，其中，通式I或III的化合物是山楂酸、科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸、积雪草酸、甘草酸、甘草次酸、积雪草苷、羟基积雪草酸、羟基积雪草苷、齐墩果酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、熊果酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、山楂酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、科罗索酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、熊果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、熊果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山楂酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、山楂酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、科罗索酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、科罗索酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山楂酸-28甲酯、科罗索酸-28-甲酯、白桦脂醇、白桦脂酸、23-羟基白桦脂酸、白桦脂酸-28-β-D-葡萄糖酯或白桦脂酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
4.权利要求3的用途，其中，通式I或III的化合物是山楂酸、科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸、积雪草酸、甘草酸、甘草次酸、积雪草苷、羟基积雪草酸、羟基积雪草苷、山楂酸-28甲酯、科罗索酸-28-甲酯、白桦脂醇、白桦脂酸或23-羟基白桦脂酸。
5.权利要求1的用途，其中糖原磷酸化酶抑制剂是治疗或预防糖尿病及其并发症、缺血性心脑血管疾病、高胰高血糖素症、胰岛素抵抗、代谢综合征、肥胖、高血压及其并发症、禁食高血糖症或肿瘤的药物。
6.权利要求5的用途，其中糖原磷酸化酶抑制剂是抗糖尿病药物、抗缺血性心脑血管疾病药物或抗肿瘤药物。
7.权利要求5或6的用途，其中糖尿病是2型糖尿病。
8.权利要求5或6的用途，其中的缺血性心脑血管疾病是心肌梗死、心绞痛、心律失常、冠心病、中风、脑梗死或缺血性神经退行性疾病。
全文摘要
本发明涉及药物领域，具体涉及一系列通式I、II、或III的五环三萜类化合物作为糖原磷酸化酶抑制剂的用途，特别是在制备抗糖尿病药物、抗缺血性心脑血管疾病药物和抗肿瘤药物等方面的应用，R
文档编号A61P3/00GK1853637SQ200610067268
公开日2006年11月1日 申请日期2006年3月9日 优先权日2005年3月11日
发明者孙宏斌, 张陆勇, 李运曼, 温小安, 陈军, 柳军, 程克光, 方伟蓉, 胡苗苗, 关腾, 孙世学, 刘竞天, 倪沛洲, 华维一, 王善治 申请人:中国药科大学