专利名称：芳基四氢萘类木脂素化合物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属于药物化学和药理学技术领域。具体而言，本发明步及芳基四氢萘类木脂素化合物和其制备方法以及针对这些衍生物对七种肿瘤细胞株如人前列腺癌细胞(PC-3)，鼻咽癌细胞(CNE)，口腔上皮癌细胞(KB)，人肺癌细胞(A549)，人肝癌细胞(BEL-7404)，人子宫颈癌细胞(Hela)以及人早幼粒白血病细胞(HL-60)所进行的肿瘤细胞生长抑制活性筛选。这些衍生物被发现具有一定的抑制肿瘤细胞生长活性，可预期作为抗肿瘤药物用途。
背景技术：
目前，由于工业发展带来的环境污染等问题，人类的生存环境质量不断下降，肿瘤疾病的发病率和致死率也不断上升。然而目前临床所用的细胞毒性抗肿瘤药物的选择性不高，导致对正常细胞的恶性杀伤，限制了该类药物的普遍使用性。因此，寻找和发现新的选择性高的细胞毒性抗肿瘤药物是世界范围内的研究热点。我们也致力于这类药物的研究。
芳基四氢萘类木脂素是木脂素家族中非常重要的一类化合物。从盾叶鬼臼Podophyllum peltatum和西藏鬼臼P.emodi等植物中提取分离到的具有抗肿瘤作用的鬼臼毒素(podophyllotoxion)就是此类化合物的代表。60年代，瑞士山道士公司先后半合成了鬼臼毒素的主体异构体4′-去甲表鬼臼毒素的β-D-葡萄糖衍生物，即依托泊苷(Etoposide，VP16)和特尼泊苷(Teniposide，VM26)。它们现已广泛应用于临床，主要用于治疗肺癌，睾丸癌，卡波西肉瘤等。但尽管上述的两个化合物已经用于临床，但仍存在骨髓抑制，水溶性差，易引起耐药性等问题而限制了其应用。因此为了克服上述缺点，寻找更为高效低毒的鬼臼毒素类抗肿瘤化合物，我们在本发明中提供了一些仍然保留有酯羰基同时又有一个亲水性的醇羟基的内酯环开环的芳基四氢萘类木脂素化合物。根据全世界尤其是中国的常发肿瘤疾病谱及肿瘤细胞的敏感性，我们选择了人前列腺癌细胞(PC-3)，鼻咽癌细胞(CNE)，口腔上皮癌细胞(KB)，人肺癌细胞(A549)，人肝癌细胞(BEL-7404)，人子宫颈癌细胞(Hela)以及人原髓细胞白血病细胞(HL-60)七株肿瘤细胞作为体外细胞毒活性药理评价的指标，对合成出的所有化合物及中间体进行了细胞毒性筛选。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有抑制肿瘤细胞生长活性的芳基四氢萘类木脂素化合物。具体而言，本发明提供了一种具有式(1)所示结构的化合物 其中结构式(1)中，R1，R2，R3可以相同或不同，可分别为氢，羟基，卤素，硝基，甲氧基，苯环上取代或未取代的苄氧基，甲氧基甲氧基或含3-20个碳的饱和/不饱和的直链/支链的烷氧基团；其中R1和R2之间以及R2和R3之间可以连接成二氧环；R4，R5相互独立，可分别为羟基，甲氧基，苯环上取代或未取代的苄氧基，甲氧基甲氧基或含3-20个碳的饱和/不饱和的直链/支链的烷氧基团，但R4，R5不能同为甲氧基；R6，R7相互独立，可分别为氢，羟基，不同取代的烷氧基，且R6，R7可同时为氢或氧原子；同时也包括结构式所代表的各种立体构型。
本发明的另一目的是提供了式(1)化合物的制备方法；本发明的另一目的是提供了式(1)化合物用于制备防治肿瘤疾病药物的用途。
本发明提供了一种式(1)所示的芳基四氢萘类木脂素化合物
其中结构式(1)中，R1，R2，R3可以相同或不同，可分别为氢，羟基，卤素，硝基，甲氧基，苯环上取代或未取代的苄氧基，甲氧基甲氧基或含3-20个碳的饱和/不饱和的直链/支链的烷氧基团；其中R1和R2之间以及R2和R3之间可以连接成二氧环；R4，R5相互独立，可分别为羟基，甲氧基，苯环上取代或未取代的苄氧基，甲氧基甲氧基或含3-20个碳的饱和/不饱和的直链/支链的烷氧基团，但R4，R5不能同为甲氧基；R6，R7相互独立，可分别为氢，羟基，不同取代的烷氧基，且R6，R7可同时为氢或氧原子；同时也包括结构式所代表的各种立体构型。
其中R6，R7可同时为氢，R4或R5中一个为甲氧基，另一个为氢原子，取代或未取代的苄氧基或含3-20个碳的饱和/不饱和的直链/支链的烷氧基团，且构型为1，2-反式-2，3-反式时，为下面式(I)所示的化合物 其中，R1，R2，R3的定义与权利要求1中的相同。
本发明优选的式(I)化合物负括化合物I-1(±)-(1S，2R，3R)-3-羟甲基-6，7-二甲氧基-1(3-羟基-4-甲氧基苯基)-1，2，3，4-四氢萘-2-羧酸甲酯；化合物I-2(±)-(1S，2R，3R)-3-羟甲基-6，7-二甲氧基-1-(3-甲氧基-4-羟基苯基)-1，2，3，4-四氢萘-2-羟酸甲酯；化合物I-3(±)-(1S，2R，3R)-3-羟甲基-6，7，8-三甲氧基-1-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-1，2，3，4-四氢萘-2-羟酸甲酯；化合物I-4(±)-(1S，2R，3R)-3-羟甲基-6，7，8-三甲氧基-1-(3-甲氧基-4-羟基苯基)-1，2，3，4-四氢萘-2-羟酸甲酯；(化合物I-5(±)-(1S，2R，3R)-3-羟甲基-6，7，8-三甲氧基-1-(3-甲氧基-4-香叶氧基苯基)-1，2，3，4-四氢萘-2-羟酸甲酯；化合物I-6(±)-(1S，2R，3R)-3-羟甲基-6，7，8-三甲氧基-1-(3-甲氧基-4-法尼氧基苯基)-1，2，3，4-四氢萘-2-羟酸甲酯。
本发明的另一目的是提供了式(1)中芳基四氢萘类木脂素化合物的制备方法，该合成路线的物征是由相应取代的1，2，3，4-四氢萘[2，3-c]呋喃-1-酮化合物在甲醇和稀硫酸条件下发生酯交换反应而得到。
具体制备过程如下所示 其中，R1，R2，R3，R4，R5的定义与权利要求2相同，且在反应过程中，1，2，3位的立体化学构型未发生改变。
下面通过实施例来进一步说明本发明。实施例给出了代表性新化合物的合成及相关结构鉴定数据以及部分活性数据。必须说明，下述实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
实施例实施例1化合物I-1(±)-(1S，2R，3R)-3-羟甲基-6，7-二甲氧基-1-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-1，2，3，4-四氢萘-2-羟酸甲酯 将化合物(±)-(3aR，9S，9aR)-6，7-二甲氧基-9-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-3a，4，9，9a-四氢萘[2，3-c]呋喃-1-酮(74mg，0.2mmol)溶解于5ml甲醇中，在室温下加入1摩尔/升的硫酸溶液(1ml)。反应2小时后，减压蒸除溶剂，加入乙酸乙酯(10ml)溶解残余物。有机相依次用水，饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤并减压蒸除溶剂后，以正己烷/乙酸乙酯(1∶1)为流动相，用硅胶柱层析纯化得胶状物62mg，产率77.1％。
I-1化合物Rf(乙酸乙酯/正己烷1∶1)0.21；1H NMR(400MHz，氘代氯仿)6.84(1H，d，J＝8.0Hz，H-5′)，6.65(1H，d，J＝8.0Hz，H-6′)，4.24(1H，d，J＝10.8Hz，H-1)，3.86(3H，s，OCH3)，6.61(1H，s，H-2′)，6.56(1H，s，H-5)，6.22(1H，s，H-8)，5.57(1H，s，OH-3′)3.80(3H，s，OCH3)，3.66(2H，d，J＝4.0Hz，H-9)，3.59(3H，s，OCH3)，3.54(3H，s，OCH3)，2.92-2.88(2H，m，H-4)，2.74(1H，dd，J＝12.4，11.2Hz，H-2)，2.34-2.26(1H，m，H-3)；13H NMR(100MHz，氘代氯仿)δ31.9(CH2，C-4)，40.0(CH，C-3)，48.8(CH，C-1)，53.0(CH，C-2)，53.1(CH3，OCH3-10)，55.8(CH3，OCH3-6，OCH34′)，55.9(CH3，OCH3-7)，65.4(CH2，C-9)，110.3(CH，C-5′)，110.7(CH，C-5)，112.1(CH，C-8)，114.0(CH，C-2′)，122.5(CH，C-6′)，127.4(C，C-4a)，130.2(C，C-8a)，135.4(C，C-1′)，144.6(C，C-3′)，145.5(C，C-4′)，147.3(C，C-7)，1475(C，C-6)，175.1(C，C-10).
质谱MS(ESI)m/e(相对丰度)401[M-H]+(100)；高分辨质谱HRFABMS m/e 402.1668(计算值C22H26O7，402.1679).
根据与以上实高分子例1的方法制备以下表一所示实施例2-6化合物
表一
下面列出的是表一中各化合物的理化数据I-2化合物Rf(乙酸乙酯/正己烷1∶1)0.20；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ6.84(1H，d，J＝8.0Hz，H-5′)，6.65(1H，dd，J＝8.0，2.0Hz，H-6′)，6.61(1H，s，H-5)，6.55(1H，d，J＝2.0Hz，H-2′)，6.22(1H，s，H-8)，5.58(1H，brs，OH-4′)，4.24(1H，d，J＝11.2Hz，H-1)，3.86(3H，s，OCH3)，3.80(3Hs，OCH3)，3.66(2H，d，J＝4.4HzH-9)，3.59(3H，s，OCH3)3.54(3Hs，OCH3)，2.90-2.88(2H，m，H-4)，2.73(1H，dd，J＝11.6，10.8Hz，H-2)，2.34-2.28(1H，m，H-3)；13HNMR(100MHz，氘代氯仿)δ32.0(CH2，C-4)，40.0(CH，C-3)，48.8(CH，C-1)，53.0(CH，C-2)，53.1(CH3，OCH3-10)，55.8(CH3，OCH3-6，OCH3-3′)55.9(CH3，OCH3-7)，65.4(CH2，C-9)，110.9(CH，C-5)，111.0(CH，C-5′)，112.0(CH，C-8)，114.1(CH，C-2′)，122.2(CH，C-6′)，127.4(C，C-4a)，130.2(C，C-8a)，135.5(C，C-1′)，144.4(C，C-4′)，146.6(C，C-3′)，147.2(C，C-7)，147.5(C，C-6)，175.1(C，C-10).
I-3化合物Rf(乙酸乙酯/正己烷1∶1)0.22；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ6.71(1H，d，J＝8.4Hz，H-5′)，6.59(1H，s，H-2′)，6.56(1H，dd，J＝8.4，1.2Hz，H-6′)，6.46(1H，s，H-5)，5.53(1H，s，OH-3′)，4.46(1H，d，J＝9.2Hz，H-1)，3.86(3H，(3H，s，OCH3)，3.84(3H，s，OCH3)，3.75(3H，s，OCH3)，3.66(3H，s，OCH3)，3.61(2H，d，J＝3.6Hz，H-9)，3.28(3H，3H，s，OCH3)，2.80-2.75(2H，m，H-4)，2.66(1H，dd，J＝112，9.6Hz，H-2)，2.14-2.05(1H，m，H-3)；13HNMR(100MHz，氘代氯仿)δ33.0(CH2，C-4)，40.0(CH，C-3)，44.0(CH，C-1)，54.2(CH，C-2)，51.8(CH3，OCH3-10)，55.8(CH3，OCH3-6，OCH3-4′)，59.4(CH3，OCH3-7)，60.5(CH3，OCH3-8)，65.4(CH2，C-9)，106.6(CH，C-5)，110.3(CH，C-5′)，113.4(CH，C-2′)，124.0(CH，C-6′)，124.1(C，C-4a)，132.1(C，C-8a)，140.3(C，C-1′)，140.8(C，C-7)，144.7(C，C-3′)，145.3(C，C-4′)，151.9(C，C-6)，152.0(C，C-8)，175.6(C，C-10).
I-4化合物Rf(乙酸乙酯/正己烷1∶1)0.22；1HNMR(400MHz氘代氯仿)δ6.76(1H，d，J＝8.0Hz，H-5′)，6.55(1H，d，J＝2.0Hz，H-2′)，6.51(1H，dd，J＝8.0，2.0Hz，H-6′)，6.46(1H，s，H-5)，5.53(1H，s，OH-4′)，4.45(1H，d，J＝9.2Hz，H-1)，3.84(3H，s，OCH3)，3.78(3H，s，OCH3)，3.73(3H，s，OCH3)，3.63(3H，s，OCH3)，3.60(2H，d，J＝4.8Hz，H-9)，3.15(3H，s，OCH3)，2.78(2H，dd，J＝14.0，10.0Hz，H-4)，2.65(1H，dd，J＝11.2，9.6Hz，H-2)，2.14-2.06(1H，m，H-3)；13HNMR(100MHz，氘代氯仿)δ33.0(CH2，C-4)，40.0(CH，C-3)，44.0(CH，C-1)，54.1(CH，C-2)，51.8(CH3，OCH3-10)，55.7(CH3，OCH3-6，OCH3-3′)，59.4(CH3，OCH3-7)，60.5(CH3，OCH3-8)，65.4(CH2，C-9)，106.5(CH，C-5)，1104(CH，C-5′)，113.6(CH，C-2′)，124.0(CH，C-6′)，124.1(C，C-4a)，132.1(C，C-8a)，140.2(C，C-1′)，141.0(C，C-7)，144.5(C，C-4′)，146.0(C，C-3′)，151.9(C，C-6)，152.0(C，C-8)，175.5(C，C-10).
I-5化合物Rf(乙酸乙酯/正己烷1∶1)0.34；1HNMR(400MHz氘代氯仿)δ6.73(1H，d，J＝8.4Hz，H-5′)，6.59(1H，s，H-2′)，6.52(1H，d，J＝8.4Hz，H-6′)，6.46(1H，s，H-5)，5.49(1H，J＝6.4Hz，H-8′)，5.07(1H，t，J＝6.8Hz，H-12′)，4.55(2H，d，J＝6.4Hz，H-7′)，4.47(1H，d，J＝9.6Hz，H-1)，3.85(3H，s，OCH3)，78(3H，s，OCH3)，3.73(3H，s，OCH3)，3.63(3H，s，OCH3)，3.61(2H，d，J＝7.2Hz，H-9)，3.12(3H，s，OCH3)，2.83(1H，dd，J＝16.0，11.6Hz，H-4β)，2.76(1H，dd，J＝16.0，4.0Hz，H-4α)，2.67(1H，dd，J＝16.0，72Hz，H-2)，2.14-2.06(5H，m，H-，10′，11′)159，1.66，1.68(CH3×3)；
13H NMR(100MHz，氘代氯仿)δ16.4(CH3，C-15′)17.6(CH3，C-16′)，25.7(CH3，C-14′)26.4(CH2，C-11′)，33.0(CH2，C-4)，39.6(CH2，C-10′)，40.0(CH，C-3)，44.0(CH，C-1)，54.2(CH，C-2)，51.8(CH3，OCH3-10)，55.8(CH3，OCH3-6，OCH3-3′)，59.4(CH3，OCH3-7)，60.5(CH3，OCH3-8)，65.4(CH2，C-9)，69.6(CH2，C-7′)，106.5(CH，C-5)，110.8(CH，C-5′)，113.5(CH，C-2′)，120.1(CH，C-8′)124.0(CH，C-12′)，124.1(C，C-4a)，124.3(CH，C-6′)，129.7(C，C-13′)，131.6(C，C-9′)，132.1(C，C-8a)，140.1(C，C-1′)，140.9(C，C-7)，146.5(C，C-4′)，147.3(C，C-3′)151.9(C，C-6)，152.1(C，C-8)，175.5(C，C-10).
I-6化合物Rf(乙酸乙酯/己烷1∶1)0.33；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ6.73(1H，d，J＝8.0Hz，H-5′)，6.59(1H，d，J＝2.0Hz，H-2′)，6.51(1H，dd，J＝8.0，2.0Hz，H-6′)，6.46(1H，s，H-5)，5.49(1H，t，J＝6.4Hz，H-8′)，5.10-5.08(2H，m，H-12′，H-16′)，4.54(2H，d，J＝6.8 Hz，H-7′)，4.47(1H，d，J＝9.6Hz，H-9)，3.85(3H，s，OCH3)，3.78(3H，s，OCH3)，3.74(3H，s，OCH3)，3.63(3H，s，OCH3)，3.61(2H，d，J＝4.2Hz，H-9)，3.12(3H，s，OCH3)，2.83(1H，dd，J＝15.6，11.2Hz，H-4β)，2.77(1H，dd，J＝16.0，4.4Hz，H-4α)，2.66(1H，dd，J＝14.0，12.8Hz，H-2)，2.19-2.14(9H，m，H-3，10′，11′，14′，15′)1.60，1.66，1.68，1.70(CH3×4)；13H NMR(100MHz，氘代氯仿)δ15.9(CH3，C-19′)，16.4(CH3，C-20′)，17.5(CH3，C-21′)，25.5(CH3，C-18′)26.3(CH2，C-11′)，26.6(CH2，C-15′)，33.0(CH2，C-4)，40.0(CH，C-3)，39.5(CH2，C-10′，C-14′)，44.0(CH，C-1)，54.2(CH，C-2)，51.8(CH3，OCH3-10)，55.8，(CH3，OCH3-6，OCH3-3′)，59.4(CH3，OCH3-7)，60.5(CH3，OCH3-8)，65.4(CH2，C-9)，69.9(CH2，C-7′)，106.5(CH，C-5)，110.7(CH，C-5′)，113.5(CH，C-2′)，120.2(CH，C-8′)，123.7(CH，C-12′)，124.3(CH，C-6′)，124.0(C，C-4a)，124.5(CH，C-16′)，131.5(C，C-17′)，132.1(C，C-8a，C-13′)135.5(C，C-9′)，140.2(C，C-1′)，141.0(C，C-7)，146.6(C，C-4′)，147.1(C，C-3′)，151.9(C，C-6)，152.0(C，C-8)，175.6(C，C-10).
式(1)化合物具有重要的生物活性，体外对人前列腺癌细胞(PC-3)，鼻咽癌细胞(CNE)，(口腔上皮癌细胞株(KB)，人肺癌细胞(A549)，人肝癌细胞(BEL-7404)，人子宫颈癌细胞(Hela)以及人原髓细胞白血病细胞(HL-60)共七株肿瘤细胞的细胞毒活性试验表明此类式(1)所示结构的芳基四氢萘类木脂素化合物对肿瘤细胞生长具有抑制作用，有可能发展成为新的防治肿瘤药物。
本发明的式(1)化合物或其盐及其溶剂化物可以与药学上常用的辐料或载体结合，制备得到具有肿瘤细胞生长抑制活性从而可以用于防治肿瘤的药物组合物。上述各类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物，还可以采用现代制药界所公知的控释或缓释剂型或纳米制剂。
本发明的式(1)化合物或其可药用盐及其溶剂化物可以与现已上市的抗肿瘤药物如铂类药物顺铂的(DDP)、喜树碱类药物伊立替康(Irinatecan、CPT-11)、长春花碱类药物失碳长春花(Vinorebine，NVB诺维本)、脱氧胞昔类药物吉西他滨(Gemcitabine，Gemzar，健择)、足叶乙甙(Etoposide)、紫杉醇(Paclitaxel)等联合使用，制备得到具有肿瘤生长抑制活性的细胞毒性组合物，可用于治疗肿瘤疾病。该类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物，还可以采用现代制药界所公知的控释或缓释剂型或纳米制剂。
为了更好地理解本发明的实质，下面分别用该类式(1)所示结构的芳基四氢萘类木脂素化合物对七种肿瘤细胞株生长的抑制作用的药理实验结果，说明其在抗肿瘤药物研究领域中的新用途。药理实施例给出了代表性化合物的部分活性数据。必须说明，本发明的药理实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。
根据本发明的实质对本发明进行简单改进都属于本发明要求保护的范围。
药理实施例1化合物I-5对KB细胞的细胞毒活性KB(口腔上皮癌)细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL的链霉素。细胞以每孔5×103的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO2潮湿空气的培养箱中培养24小时。
细胞存活率的测定用改良MTT法。细胞经过24小时的孵育后，分别将新配的化合物I-5的二甲亚砜溶液以浓度梯度加入到各孔中，使孔中化合物最终浓度分别为100ug/mL，33.3ug/mL，11.1ug/mL和3.7ug/mL。72小时后，加入10μL MIT(5mg/mL)的磷酸盐缓冲液，再继续在37℃培养4小时后，离心5分钟除去未转化的MTT，每孔中加入200μL二甲亚砜，以溶解还原的MTT晶体甲臜(formazan)，所形成的formazan用酶标仪在57nm波长下比色，细胞存活率由样品相对于对照品的比值计算。其中化合物I-5对KB细胞半抑制浓度IC50由剂量效应曲线得到。化合物I-5的IC50为3.53×10-5M；而阳性对照顺铂对KB细胞的IC50为2.78×10-5M；阳性对照足叶乙甙对KB细胞的IC50为1.0×106M。
实验结论KB细胞是测试化合物对瘤细胞的细胞毒性的有效工具和评价指标。本实验表明此类式(1)所示结构的芳基四氢萘类木脂素化合物对KB细胞具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有抗肿瘤作用的药物。
药理实施例2化合物I-1对PC-3细胞的细胞毒活性
PC-3(前列腺癌)细胞用F-12培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL的链霉素。细胞以每孔5×103的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO2潮湿空气的培养箱中培养24小时。
细胞存活率的测定用改良MTT法，具体方法如药理实施例1。
化合物I-1的IC50为1.43×10-4M；而阳性对照顺铂对PC-3细胞的IC50为5.66×10-5M；阳性对照足叶乙甙对PC-3细胞的IC50为9.28×10-5M。
实验结论本实验表明此类式(1)所示结构的芳基四氢萘类木脂素化合物对PC-3细胞具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有抗肿瘤作用的药物。
药理实施例3化合物I-5对CNE细胞的细胞毒活性CNE(鼻咽癌)细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL的链霉素。以每孔5×103细胞的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO2潮湿空气的培养箱中培养24小时。
细胞存活率的测定用改良MTT法，具体方法如药理实施例1。
化合物I-5的IC50为6.37×10-5M；而阳性对照顺铂对CNE细胞的IC50为5.66×10-5M；阳性对照足叶乙甙对CNE细胞的IC50为8.10×10-6M。
实验结论本实验表明此类式(1)所示结构的芳基四氢萘类木脂素化合物对CNE细胞具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有抗肿瘤作用的药物。
药理实施例4化合物I-4对A549细胞的细胞毒活性A549(人肺癌)细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL的链霉素。细胞以每孔5×103的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO2潮湿空气的培养箱中培养24小时。
细胞存活率的测定用改良MTT法，具体方法如药理实施例1。
化合物I-4的IC50为1.45×10-5M；而阳性对照顺铂对A549细胞的IC50为2.53×10-5M；阳性对照足叶乙甙对A549细胞的IC50为5.71×10-5M。
实验结论本实验表明此类式(1)所示结构的芳基四氢萘类木脂素化合物对A549细胞具有较强的细胞毒性，且其活性强于顺铂以及足叶乙甙，有可能发展成为新的具有抗肿瘤作用的药物。
药理实施例5::化合物I-6对BEL-7404细胞的细胞毒活性BEL-7404(人肝癌)细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL的链霉素。细胞以每孔5×103的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO2潮湿空气的培养箱中培养24小时。
细胞存活率的测定用改良MTT法，具体方法如药理实施例1。
化合物I-6的IC50为7.89×10-5M；；而阳性对照顺铂对BEL-7404细胞的IC50为1.07×10-5M；阳性对照足叶乙甙对BEL-7404细胞的IC50为8.20×10-6M。
实验结论本实验表明此类式(1)所示结构的芳基四氢萘类木脂素化合物对BEL-7404细胞具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有抗肿瘤作用的药物。
药理实施例6化合物I-1对Hela细胞的细胞毒活性Hela(人子宫颈癌)细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL的链霉素。细胞以每孔5×103的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO2潮湿空气的培养中培养24小时。
细胞存活率的测定用改良MTT法，具体方法如药理实施例1。
化合物I-1的IC50为5.15×10-5M；而阳性对照顺铂对Hela细胞的IC50为527×10-5M；阳性对照足叶乙甙对Hela细胞的IC50为6.99×10-6M。
实验结论本实验表明此类式(1)所示结构的芳基四氢萘类木脂素化合物对Hela细胞具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有抗肿瘤作用的药物。
药理实施例7化合物I-5对HL-60细胞的细胞毒活性HL-60(人原髓细胞白血病细胞)细胞用RPMI1640培养基培养，培养基中含10％小牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL链霉素。细胞以每孔1×104个密度接种到96孔板中，在37℃，5％CO2潮湿空气的培养箱中培养24小时。
细胞存活率的测定方法用改良MTT法。具体方法如药理实施例1。
化合物I-5的IC50为4.54×10-6M；而阳性对照顺铂对HL-60细胞的IC50为7.55×10-5M；阳性对照足叶乙甙对HL-60细胞的IC50为6.36×10-6M。
实验结论本实验表明此类式(1)所示结构的芳基四氢萘类木脂素化合物对HL-60细胞具有较强的细胞毒性，且其活性强于顺铂以及足叶乙甙，有可能发展成为新的具有抗肿瘤作用的药物。
从以上药理实施例中我们可以看出这些化合物对这七株肿瘤细胞都显示有一定的细胞毒活性，其中化合物I-5对HL-60细胞株的IC50达到了4.54μM；细胞毒活性超过顺铂和足叶乙甙(依托泊苷)。化合物I-1和化合物I-4对A459细胞株的IC50值都比顺铂以及足叶乙甙(依托泊苷)的IC50值低，分别为41.6μM和14.5μM。可见这类化合物具有开发成为抗肿瘤药物的潜力，值得继续深入研究下去。
权利要求
1.一种具有式(1)所示的具有抑制肿瘤细胞生长活性的芳基四氢萘类木脂素化合物 式(1)其中结构式(1)中，R1，R2，R3可以相同或不同，可分别为氢，羟基，卤素，硝基，甲氧基，苯环上取代或未取代的苄氧基，甲氧基甲氧基或含3-20个碳的饱和/不饱和的直链/支链的烷氧基团；其中R1和R2之间以及R2和R3之间可以连接成二氧环；R4，R5相互独立，可分别为羟基，甲氧基，苯环上取代或未取代的苄氧基，甲氧基甲氧基或含3-20个碳的饱和/不饱和的直链/支链的烷氧基团，但R4，R5不能同为甲氧基；R6，R7相互独立，可分别为氢，羟基，不同取代的烷氧基，且R6，R7可同时为氢或氧原子；同时也包括结构式所代表的各种立体构型。
2.根据权利要求1的化合物，其中R6，R7可同时为氢，R4或R5中一个为甲氧基，另一个为氢原子，取代或未取代的苄氧基或含3-20个碳的饱和/不饱和的直链/支链的烷氧基团，且构型为1，2-反式-2，3-反式时，为下面式(I)所示的化合物 式(I)其中，R1，R2，R3的定义与权利要求1中的相同。
3.根据权利要求2的式(I)化合物，它们是化合物I-1(±)-(1S，2R，3R)-3-羟甲基-6，7-二甲氧基-1-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-1，2，3，4-四氢萘-2-羧酸甲酯；化合物I-2(±)-(1S，2R，3R)-3-羟甲基-6，7-二甲氧基-1-(3-甲氧基-4-羟基苯基)-1，2，3，4-四氢萘-2-羧酸甲酯；化合物I-3(±)-(1S，2R，3R)-3-羟甲基-6，7，8-三甲氧基-1-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-1，2，3，4-四氢萘-2-羧酸甲酯；化合物I-4(±)-(1S，2R，3R)-3-羟甲基-6，7，8-三甲氧基-1-(3-甲氧基-4-羟基苯基)-1，2，3，4-四氢萘-2-羧酸甲酯；化合物I-5(±)-(1S，2R，3R)-3-羟甲基-6，7，8-三甲氧基-1-(3-甲氧基-4-香叶氧基苯基)-1，2，3，4-四氢萘-2-羧酸甲酯；化合物I-6(±)-(1S，2R，3R)-3-羟甲基-6，7，8-三甲氧基-1-(3-甲氧基-4-法尼氧基苯基)-1，2，3，4-四氢萘-2-羧酸甲酯。
4.根据权利要求2，结构式(I)的化合物的制备方法，是由相应取代的1，2，3，4-四氢萘[2，3-c]呋喃-1-酮化合物在甲醇，稀硫酸条件下发生酯交换反应而得到。 其中，R1，R2，R3，R4，R5的定义与权利要求2相同，且在反应过程中，1，2，3位的立体化学构型未发生改变。
5.根据权利要求1-3之一的化合物或者药物组合物及其它们的可药用盐或它们的溶剂化物用于制备防治口腔上皮癌、前列腺癌、鼻咽癌、肺癌、肝癌、子宫颈癌、白血病及其相关肿瘤疾病的药物用途及药物组合物；或者与其他抗肿瘤药物以一定比例组成的混合物和可药用辐料的用途及药物组合物；其含有作为活性成分的治疗有效量的权利要求1-3之一所述之式(1)化合物或其可药用盐或溶剂化物或者它们的混合物和可药用辅料。
6.根据权利要求5的化合物或者药物组合物，其可以是片剂、胶囊剂、注射剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、贴片剂、皮下植埋剂、外用搽剂、口服液或软膏剂，还可以采用现代制药界所公知的控释或缓释剂型或纳米制剂。
全文摘要
本发明涉及具有式(1)的芳基四氢萘类木脂素化合物和其制备方法和用途。本发明针对这些衍生物对七种肿瘤细胞株如人前列腺癌细胞(PC－3)，鼻咽癌细胞(CNE)，口腔上皮癌细胞(KB)，人肺癌细胞(A549)，人肝癌细胞(BEL－7404)，人子宫颈癌细胞(Hela)以及人早幼粒白血病细胞(HL－60)所进行的肿瘤细胞生长抑制活性筛选。这些衍生物被发现具有一定的抑制肿瘤细胞生长活性，可预期作为抗肿瘤药物用途。
文档编号A61K9/00GK101092363SQ20061009001
公开日2007年12月26日 申请日期2006年6月23日 优先权日2006年6月23日
发明者赵昱, 丁红霞, 巫秀美, 白骅, 约阿施·史托克希特, 安德鲁·格尔特 申请人:浙江海正天华新药研发有限公司