专利名称：一种三醇组人参皂苷和二醇组人参皂苷的制备方法
技术领域：
本发明涉及从人参(或红参)中提取分离三醇组人参皂苷和二醇组人参皂苷的方法，属于天然药物化学研究领域。
背景技术：
人参是五加科人参属植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根，秋季采挖，晒干或烘干，味微苦、甘；具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津、安神之功能；用于体虚欲脱，肢冷脉微。
到目前为止人们从人参(或红参)中分得多种人参皂苷，包括人参皂苷R0、人参皂苷Ra1、人参皂苷Ra2、人参皂苷Ra3、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd等二醇组人参皂苷和人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rg2等三醇组人参皂苷。因为二醇组人参皂苷和三醇组人参皂苷具有不同的生物活性，比如说二醇组人参皂苷具有中枢抑制作用、抗溶血作用；三醇组人参皂苷则具有中枢兴奋作用及溶血作用。因此，把人参(或红参)中的人参皂苷分成二醇组人参皂苷和三醇组人参皂苷的话，就有可能获得具有不同生物活性的有效部位，也便于从中分得人参皂苷单体。分离二醇组人参皂苷和三醇人参皂苷的方法除了有机溶剂萃取或柱层析分离等传统方法外中国专利《人参分组皂甙的制备方法、其药物组合物及应用》(公开号CN1190098)和《一种二醇组人参皂苷和三醇人参皂苷的分离方法》(公开号CN1594352)公开了二醇组人参皂苷及三醇组人参皂苷的分离方法。
发明内容
本发明提供一种将人参(或红参)中的二醇组人参皂苷和三醇组人参皂苷分离的新方法，即一种从人参或红参中制备三醇组人参皂苷和二醇组人参皂苷的方法。具体是将人参或红参提取物(总皂苷)用大孔吸附树脂吸附后用低浓度有机溶剂的水溶液洗脱，洗脱液回收溶剂，获得主要含有人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的三醇组人参皂苷；然后用高浓度有机溶剂的水溶液洗脱，洗脱液回收溶剂，获得主要含有人参皂苷R0、人参皂苷Ra1、人参皂苷Ra2、人参皂苷Ra3、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd和人参皂苷Rb3的二醇组人参皂苷。得到的三醇组人参皂苷和二醇组人参皂苷可用来制备药物组合物、保健食品及人参皂苷单体。具体如下。
人参(或红参)加水煎煮提取，提取液过大孔吸附树脂吸附，先用较低浓度的有机溶剂的水溶液洗脱，此时洗脱下来的是人参皂苷Re和人参皂苷Rg1，其他成分仍然被吸附在树脂上，洗脱液回收溶剂，从而得到三醇组人参皂苷；将人参皂苷Re和人参皂苷Rg1洗脱完全后用较高浓度的有机溶剂的水溶液洗脱，洗脱下其他人参皂苷，洗脱液回收溶剂，得到二醇组人参皂苷。
三醇组人参皂苷中只含有人参皂苷Re和人参皂苷Rg1，其组成与人参(或红参)本身组成相同。
二醇组人参皂苷中含有人参皂苷R0、人参皂苷Ra1、人参皂苷Ra2、人参皂苷Ra3、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd，其中主要成分是人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd，不含或含有少量残留的人参皂苷Re和人参皂苷Rg1。是否残留有人参皂苷Re和人参皂苷Rg1，与用较低浓度的有机溶剂的水溶液洗脱程度有关，如果洗脱彻底，二醇组人参皂苷中基本不含人参皂苷Re和人参皂苷Rg1。
上述洗脱过程中可以使用的有机溶剂是乙醇、甲醇、丙酮、正丙醇、异丙醇的水溶液或者是它们的混合物的水溶液。为了只洗脱下人参皂苷Re和人参皂苷Rg1，所用的乙醇、甲醇、丙酮、正丙醇、异丙醇的水溶液或它们的混合物的水溶液的浓度不能过高。如果使用的乙醇、甲醇、丙酮、正丙醇、异丙醇的水溶液或它们的混合物的水溶液的浓度过高则会洗脱下人参皂苷Rd、Rc等二醇组人参皂苷；但也不能过低，如果所用的乙醇、甲醇、丙酮、正丙醇、异丙醇的水溶液或它们的混合物的水溶液的浓度过低会洗脱不下人参皂苷Re和人参皂苷Rg1。它们的浓度一般在15％-40％之间为好，最好是15％-25％。另外因为乙醇或甲醇或丙酮或正丙醇或异丙醇或它们的混合物的水溶液的最佳浓度与使用的大孔吸附树脂的极性有关，因此应根据大孔吸附树脂的极性高低，选择适当的浓度。
完成第一步洗脱后，三醇组人参皂苷溶解在低浓度的有机溶剂的水溶液中。这种溶液难于浓缩，为了解决这个问题，本发明采用了如下方法。即将含有三醇组人参皂苷的低浓度有机溶剂的水溶液直接或用水稀释后过大孔吸附树脂，这时溶解在溶液中的人参皂苷Re和人参皂苷Rg1将会重新被吸附在大孔吸附树脂上，然后再用高浓度乙醇洗脱后回收溶剂即可。
将上述方法获得的三醇组人参皂苷用水或乙醇等有机溶剂的水溶液加热溶解后重结晶，人参皂苷Re将会结晶析出，滤过后分别得到人参皂苷Re结晶和母液。母液经活性炭或脱色树脂脱色，重新过大孔吸附树脂吸附，乙醇洗脱，回收乙醇，得到人参皂苷Rg1的含量大于人参皂苷Re的混合皂苷(简称人参分组皂苷A)。
本发明中所述的大孔吸附树脂可以用AB-8、D4020、860021、D101、D102、D103、HP-20等常用大孔吸附树脂或具有相同或相似性能的其他牌号的吸附树脂。
具体实施例方式
实施例1人参1公斤，加水煎煮提取三次，每次加水量分别是人参重量的12、10、8倍，煎煮时间分别是2、1.5、1小时，合并煎煮液，过D4020大孔吸附树脂吸附，用水冲净，18％乙醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Re和人参皂苷Rg1后改用85％乙醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Rd和人参皂苷Rb1为止(硅胶薄层层析检测，正丁醇∶乙酸乙酯∶水＝4∶1∶5，上层，10％硫酸喷雾，105℃加热显色，以下相同)，分别收集洗脱液。18％乙醇洗脱液重新过AB-8大孔吸附树脂吸附，然后用85％乙醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Re和人参皂苷Rg1，回收乙醇，得三醇组人参皂苷29克，经HPLC检测，含人参皂苷Rg110.8％、人参皂苷Re18.4％，不含其它人参皂苷。85％乙醇洗脱液直接回收乙醇，获得二醇组人参皂苷40克，经HPLC检测，含人参皂苷Rb115.4％、人参皂苷Rb210.9％、人参皂苷Rb33.0％、人参皂苷Rc15.6％、人参皂苷Rd7.2％。
取三醇组人参皂苷10克，加20毫升水加热溶解，放置，沉淀，滤过，水洗沉淀，干燥，得人参皂苷Re 2.2克。母液过D941脱色树脂脱色，用水稀释后过AB-8大孔吸附树脂吸附，乙醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Re和人参皂苷Rg1，回收乙醇，得人参分组皂苷A 6.3克。经HPLC检测，含人参皂苷Rg113.7％、人参皂苷Re9.8％，不含其它人参皂苷。
人参皂苷的HPLC测定条件如下。人参皂苷Rg1、人参皂苷Re测定条件色谱柱ZORBAX 250×4.6mm ODS柱；流动相乙腈∶水＝20∶80；流速1.5ml/min；柱温25℃；检测波长203nm，以下相同；人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd测定条件色谱柱ZORBAX 250×4.6mmODS柱；流动相乙腈∶水＝31∶69；流速1.5ml/min；柱温25℃；检测波长203nm，以下相同。
实施例2红参1公斤，加水煎煮提取三次，每次加水量分别是红参重量的12、10、8倍，煎煮时间分别是2、1.5、1小时，合并煎煮液，过D4020大孔吸附树脂吸附，用水冲净，19％甲醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Re和人参皂苷Rg1后改用75％甲醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Rd和人参皂苷Rb1为止，分别收集洗脱液。19％甲醇洗脱液重新过AB-8大孔吸附树脂吸附，然后用75％甲醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Re和人参皂苷Rg1，洗脱液回收甲醇，得三醇组人参皂苷23克，经HPLC检测，含人参皂苷Rg111.2％、人参皂苷Re20.6％，不含其它人参皂苷。75％甲醇洗脱液直接回收甲醇，获得二醇组人参皂苷48.2克，经HPLC检测，含人参皂苷Rb117.4％、人参皂苷Rb211.9％、人参皂苷Rb33.3％、人参皂苷Rc14.6％、人参皂苷Rd7.6％。
取三醇组人参皂苷10克，加20毫升水加热溶解，放置沉淀，滤过，水洗沉淀，干燥，得人参皂苷Re2.8克，经HPLC检测，含人参皂苷Rg12.2％、人参皂苷Re96.5％。母液过D941脱色树脂脱色，用水稀释后过AB-8大孔吸附树脂吸附，乙醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Re和人参皂苷Rg1，回收乙醇，得人参分组皂苷A6.0克。经HPLC检测，含人参皂苷Rg116.7％、人参皂苷Re8.8％，不含其它人参皂苷。
实施例3红参1公斤，加水煎煮提取三次，每次加水量分别是红参重量的16、12、8倍，煎煮时间分别是2、1.5、1小时，合并煎煮液，过D4020大孔吸附树脂吸附，用水冲净，18％乙醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Re和人参皂苷Rg1后改用70％乙醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Rd和人参皂苷Rb1为止，分别收集洗脱液。18％乙醇洗脱液用水稀释后重新过AB-8大孔吸附树脂吸附，然后用65％乙醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Re和人参皂苷Rg1，洗脱液回收乙醇，得三醇组人参皂苷25克，经HPLC检测，含人参皂苷Rg111.2％、人参皂苷Re19.4％，不含其它人参皂苷。70％乙醇洗脱液直接回收乙醇，获得二醇组人参皂苷41克，经HPLC检测，含人参皂苷Rb118.5％、人参皂苷Rb28.7％、人参皂苷Rb33.9％、人参皂苷Rc18.3％、人参皂苷Rd8.4％。
取三醇组人参皂苷10克，加20毫升15％的乙醇水溶液加热溶解，放置，沉淀，滤过，水洗沉淀，干燥，再次重结晶，得人参皂苷Re2.9克，经HPLC检测，含人参皂苷Rg10.6％、人参皂苷Re98.5％。母液过D941脱色树脂脱色，用水稀释后过AB-8大孔吸附树脂吸附，乙醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Re和人参皂苷Rg1，回收乙醇，得人参分组皂苷A5.8克。经HPLC检测，含人参皂苷Rg116.2％、人参皂苷Re7.9％，不含其它人参皂苷。
实施例4红参1公斤，加水煎煮提取三次，每次加水量分别是人参重量的16、12、8倍，煎煮时间分别是2、1.5、1小时，合并煎煮液，过D4020大孔吸附树脂吸附，用水冲净，20％丙酮洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Re和人参皂苷Rg1后改用65％丙酮洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Rd和人参皂苷Rb1为止，分别收集洗脱液。20％丙酮洗脱液用水稀释后重新过AB-8大孔吸附树脂吸附，然后用65％乙醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Re和人参皂苷Rg1，洗脱液回收乙醇，得三醇组人参皂苷23克，经HPLC检测，含人参皂苷Rg111.2％、人参皂苷Re19.4％，不含其它人参皂苷。65％丙酮洗脱液直接回收丙酮，获得二醇组人参皂苷39克，经HPLC检测，含人参皂苷Rb117.2％、人参皂苷Rb28.1％、人参皂苷Rb33.2％、人参皂苷Rc15.5％、人参皂苷Rd7.2％。
取三醇组人参皂苷10克，加20毫升15％的甲醇水溶液加热溶解，放置，沉淀，滤过，水洗沉淀，干燥，再次重结晶，得人参皂苷Re2.0克，经HPLC检测，含人参皂苷Rg10.6％、人参皂苷Re98.5％。母液过D941脱色树脂脱色，用水稀释后过AB-8大孔吸附树脂吸附，乙醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Re和人参皂苷Rg1，回收乙醇，得人参分组皂苷A6.8克。经HPLC检测，含人参皂苷Rg118.4％、人参皂苷Re9.9％，不含其它人参皂苷。
实施例4人参1公斤，加水煎煮提取三次，每次加水量分别是人参重量的14、12、8倍，煎煮时间分别是2、1.5、1小时，合并煎煮液，过D4020大孔吸附树脂吸附，用水冲净，17％异丙醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Re和人参皂苷Rg1后改用85％乙醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Rd和人参皂苷Rb1为止，分别收集洗脱液。17％异丙醇洗脱液重新过AB-8大孔吸附树脂吸附，然后用85％乙醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Re和人参皂苷Rg1，洗脱液回收乙醇，得三醇组人参皂苷27克。85％乙醇洗脱液直接回收乙醇，获得二醇组人参皂苷47克。
实施例5人参1公斤，加水煎煮提取三次，每次加水量分别是人参重量的14、12、8倍，煎煮时间分别是2、1.5、1小时，合并煎煮液，过D4020大孔吸附树脂吸附，用水冲净，16％正丙醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Re和人参皂苷Rg1后改用85％乙醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Rd和人参皂苷Rb1为止，分别收集洗脱液。16％正丙醇洗脱液重新过AB-8大孔吸附树脂吸附，然后用85％乙醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Re和人参皂苷Rg1，洗脱液回收乙醇，得三醇组人参皂苷24克。85％乙醇洗脱液直接回收乙醇，获得二醇组人参皂苷48克实施例6
取从人参中获得的二醇组人参皂苷10克，以乙酸乙酯∶甲醇＝9∶1至1∶1为流动相进行硅胶柱层析梯度洗脱，得人参皂苷Rb11.2克、人参皂苷Rb20.9克、人参皂苷Rb30.21克、人参皂苷Rc1.0克、人参皂苷Rd0.5克。
实施例7取人参分组皂苷A10克，以氯仿∶甲醇＝8∶1为流动相进行硅胶柱层析分离，得人参皂苷Rg11.5克和人参皂苷Re0.6克。
本发明的方法与已有技术相比具有操作简单、成本低、无环境污染、二醇组和三醇组交叉少的优点。本发明为利用人参或红参研制开发更多的新药及保健食品创造了条件，也为从人参或红参中提取分离各种人参皂苷单体提供了一条捷径。
权利要求
1.一种从人参或红参中制备三醇组人参皂苷的方法，其特征在于将人参或红参提取物用大孔吸附树脂吸附后用低浓度有机溶剂的水溶液洗脱。
2.一种从人参或红参中制备二醇组人参皂苷的方法，其特征在于将人参或红参提取物用大孔吸附树脂吸附，用低浓度有机溶剂的水溶液将人参皂苷Rg1和人参皂苷Re洗脱完全后用高浓度有机溶剂的水溶液洗脱。
3.权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的三醇组人参皂苷其主要成分是人参皂苷Rg1和人参皂苷Re。
4.权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的二醇组人参皂苷其主要成分是人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd和人参皂苷Rb3。
5.权利要求1和2所述的制备方法，其特征在于所述的有机溶剂选自乙醇、甲醇、丙酮、正丙醇、异丙醇或它们的两种或两种以上的混合物。
6.权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的低浓度是体积百分比浓度小于40％。
7.权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的高浓度是体积百分比浓度大于45％。
8.权利要求1和2所述的制备方法获得的三醇组人参皂苷和二醇组人参皂苷在制备药物组合物、保健食品及人参皂苷单体中的应用。
全文摘要
本发明公开了从人参或红参中制备二醇组人参皂苷和三醇组人参皂苷的方法，即将人参或红参中的人参皂苷Ra
文档编号A61P7/02GK1869051SQ20061009360
公开日2006年11月29日 申请日期2006年6月21日 优先权日2006年6月21日
发明者李绪文, 桂明玉, 金永日 申请人:海南亚洲制药有限公司