专利名称：虫草头孢多糖的药物用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及虫草头孢多糖，尤其涉及虫草头孢多糖在制药领域中的应用，属于生物制药技术领域。
背景技术：
冬虫夏草(Crodyceps sinensis(Berk)Sacc)为麦角菌科真菌寄生在蝙蝠蛾科昆虫虫草蝙蝠蛾幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体，是我国一传统名贵中药。其性平，味甘，入肺、肾经，具补肺益肾、止血化痰之功效，用于临床治疗多种疾病。由于其严格的寄生性和特殊的生长地理环境，天然虫草资源越来越少，价格十分昂贵。近来已有研究报道，人工培养的虫草真菌活性成分与天然虫草非常相似，具有广泛的生物活性作用，目前已有5、6种人工培养的虫草菌丝体开发成药品，用于治疗各种疾病。因此，人工培养的虫草菌丝体在临床应用中逐渐替代天然虫草已成趋势。
虫草头孢(Cordyceps Cephalosporium)多糖是从一种虫草头孢菌(Cephalosporium Sinensis Chen.Sp.nov)发酵的菌丝体提取的胞内多糖，是虫草所含生理活性物质中最重要、最丰富的类群之一，其特点为生理活性强，适应面广，可用于治疗高血脂症、动脉硬化、糖尿病、慢性疲劳综合症、慢性肝炎、肝硬化、恶性肿瘤以及减轻肿瘤放化疗后的毒副作用。大量的文献报道表明，虫草头孢多糖具有保肝和肿瘤药理作用，但是对于虫草头孢多糖在肾功能疾病治疗及保护作用等方面没有相关的研究报道。
发明内容
本发明的目的是提供虫草头孢多糖的新用途，即在制药中的应用。
本发明的技术方案是虫草头孢多糖的药物用途，其特征在于将虫草头孢多糖用于制备治疗或预防急慢性肾功能衰竭的药物，或者用于制备治疗或预防药物肾毒性的药物。
实现本发明目的的进一步的技术方案是前述的虫草头孢多糖的药物用途，其中，应用虫草头孢多糖制备而成的药物，是一种具有治疗、预防急慢性肾功能衰竭或者药物肾毒性这种专门药效的药物，也可以是将虫草头孢多糖与其它成分混合起来制备而成的具有多种药效的复合药物，所述其它成分与虫草头孢多糖在混合共存状态下药效互不影响。
更进一步地，前述的虫草头孢多糖的药物用途，其中，应用虫草头孢多糖制备而成的药物，是一种具有治疗、预防急慢性肾功能衰竭或者药物肾毒性的口服剂。
更进一步地，前述的虫草头孢多糖的药物用途，其中，所述虫草头孢多糖中单糖包含葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖以及半乳糖醛酸这六种糖(图1)，多糖含量大于60Wt％，半乳糖醛酸含量大于8Wt％，多糖的重均分子量为5～50KD，其中大于3000D的多糖组分的不少于70Wt％(图2)。该多糖经紫外200-400nm扫描，无蛋白和核酸特征吸收峰(图3)，在电泳色谱中与对照药材在相应位置有相同的斑点(图4)。
再进一步地，前述的虫草头孢多糖的药物用途，其中，所述虫草头孢多糖经以下步骤制备而成，先用2～50倍量热乙醇回流虫草头孢菌发酵的菌丝体，抽滤后，留残渣并挥发掉乙醇，加入2～50倍水煮沸1～6小时，离心后，取上清液去蛋白，再浓缩后加入乙醇，沉淀后真空干燥即得虫草头孢多糖。
本发明的突出的实质性特点和显著进步体现在以下几方面
(1)本发明对已知虫草头孢多糖发掘了新的医疗用途，开拓了虫草头孢多糖的一个新的应用领域；(2)动物试验研究表明虫草头孢多糖的中、高剂量组对肾毒性或缺血性肾功能衰竭具有防治作用，从而证明虫草头孢多糖具有治疗急慢性肾功能衰竭和对肾毒性有明显保护作用；(3)本发明的产品原料来源丰富、价廉，制备工艺简单，可制成口服剂型，使用方便。并可以保护天然虫草资源，从根本上解决野生冬虫夏草资源缺少的问题。
图1是虫草头孢多糖的分子量及分子量分布测定结果；图2是虫草头孢多糖的单糖组成测定结果；图3是虫草头孢多糖的凝胶电泳图谱；图4是虫草头孢多糖的200-400nm紫外扫描结果图；图5是虫草头孢多糖的红外光谱图。
具体实施例方式
本发明揭示了虫草头孢多糖在制备治疗或预防急慢性肾功能衰竭的药物，及其在制备治疗或预防药物肾毒性的药物中的应用。为更好地理解本发明的实质，下面详述虫草头孢多糖的制备、表征，以及申请人对于虫草头孢多糖在上述两方面的药理、药效研究结果。
一、虫草头孢多糖的提取制备采用水提醇沉法从头孢虫草粉中提取的虫草头孢多糖。即先用2～50倍量热乙醇回流虫草头孢菌(Cephalosporium Sinensis Chen.Sp.nov)发酵的菌丝体，抽滤后，留残渣并挥发掉乙醇，加入2～50倍水煮沸1～6小时，离心后，取上清液去蛋白，再浓缩后加入乙醇，沉淀后真空干燥即得虫草头孢多糖。
二、虫草头孢多糖的表征采用上述方法提取制得的虫草头孢多糖，GPC法测得其重均分子量为5-40KD，大于3000D的多糖组分不少于70％(见图1)；多糖的主要单糖包含葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和半乳糖醛酸这六种糖(见图2)，经由硫酸苯酚法测定，多糖含量大于60％(除特殊说明外，本申请的“含量”均指“质量含量”)，半乳糖醛酸含量大于8％；在电泳色谱中，该多糖与对照药材在相应位置有相同的斑点(见图3)，图中左侧单点为对照药材，右侧三点是三批虫草头孢多糖试样)；200-400nm紫外扫描结果显示，该多糖无蛋白和核酸特征吸收峰(见图4)；红外光谱测定，810cm-1有甘露聚糖特征吸收峰(见图5)。
三、虫草头孢多糖的药效研究1、虫草头孢多糖治疗肾毒性和肾缺血引起的肾功能衰竭1.1虫草头孢多糖对大鼠肌肉注射甘油诱发的肾衰的治疗作用。
方法将实验动物分为正常组、模型组、虫草头孢多糖高、中、低三个剂量组(表中简称CP高剂量、CP中剂量、CP低剂量，下同)和阳性组，观察治疗后大鼠的肾功能、血液生化指标、肾病理及肾脏指数的变化。结果见表1，从表1结果可以看出虫草头孢多糖组肾功能受损程度明显轻于模型组(P＜0.01)，肾脏病理损伤明显减轻，虫草头孢多糖组与模型组比较肾脏指数有极显著差异(P＜0.01)。结果说明虫草头孢多糖能够治疗甘油诱发的急性肾功能衰竭，其机理可能与改善肾功能、纠正代谢紊乱、促进肾小管的修复与再生等作用有关。
表1虫草头孢多糖对大鼠肌肉注射甘油诱发的急性肾衰的影响
(注#P＜0.05，##P＜0.01，vs control；*P＜0.05，**P＜0.01，vs Model)1.2虫草头孢多糖对大鼠静脉注射变性血蛋白诱发的肾衰的治疗作用。
方法将实验动物分为正常组、模型组、虫草头孢多糖高、中、低三个剂量组和阳性组，观察治疗后大鼠的肾功能、血液生化指标、肾病理及肾脏指数的变化。结果见表2，从表2可以看出虫草头孢多糖组肾功能受损程度明显轻于模型组(P＜0.01)，肾脏病理损伤明显减轻，虫草头孢多糖组与模型组比较肾脏指数有极显著差异(P＜0.01)。结果说明虫草头孢多糖能够治疗变性血蛋白诱发的急性肾功能衰竭，其机理可能与改善肾功能、纠正代谢紊乱、促进肾小管的修复与再生等作用有关。
表2虫草头孢多糖对尾静脉注射变性血红蛋白诱发的急性肾衰大鼠的影响(x±s，n＝8)
(注#P＜0.05，##P＜0.01，vs control；*P＜0.05，**P＜0.01，vs Model)
1.3虫草头孢多糖对家犬夹闭肾动脉造成的肾衰的治疗作用。
方法将实验动物分为对照组、阳性组、虫草头孢多糖高、中、低三个剂量组，观察治疗后犬的肾功能、血液生化指标、尿常规、肾病理及肾脏指数的变化，结果见表3～表8。从表3～表8可以看出虫草头孢多糖组肾功能受损程度明显轻于阴性对照组(P＜0.01)，肾脏病理损伤明显减轻，虫草头孢多糖组与阴性对照组比较肾脏指数有极显著差异(P＜0.01)。结果说明虫草头孢多糖能够治疗肾缺血诱发的急性肾功能衰竭，其机理可能与改善肾功能、增加肾血流量、纠正代谢紊乱、促进肾小管的修复与再生等作用有关。
表3虫草多头孢多糖对急性肾衰犬TP(g/L)的影响(x±s，n＝6)
(注#P＜0.05，##P＜0.01，与肾衰前相比；*P＜0.05，**P＜0.01，与对照组相比)表4虫草头孢多糖对急性肾衰犬ALB(g/L)的影响(x±s，n＝6)
(注#P＜0.05，##P＜0.01，与肾衰前相比；*P＜0.05，**P＜0.01，与对照组相比)表5虫草头孢多糖对急性肾衰犬SCr(umol/L)的影响(x±s，n＝6)
(注#P＜0.05，##P＜0.01，与肾衰前相比；*P＜0.05，**P＜0.01，与对照组相比)表6虫草头孢多糖对急性肾衰犬BUN(mmol/L)的影响(x±s，n＝6)
(注#P＜0.05，##P＜0.01，与肾衰前相比；*P＜0.05，**P＜0.01，与对照组相比)表7虫草头孢多糖对急性肾衰犬血清Na+(mmol/L)的影响(x±s，n＝6)
(注#P＜0.05，##P＜0.01，与肾衰前相比；*P＜0.05，**P＜0.01，与对照组相比)表8虫草头孢多糖对急性肾衰犬血清K+(mmol/L)的影响(x±s，n＝6)
(注#P＜0.05，##P＜0.01，与肾衰前相比；*P＜0.05，**P＜0.01，与对照组相比)2、虫草头孢多糖对药物肾毒性的防护作用2.1虫草头孢多糖对大鼠腹腔注射庆大霉素诱发的肾衰的防治作用。
方法将实验动物分为正常组、模型组、虫草头孢多糖高、中、低三个剂量组和阳性组，观察治疗后大鼠的肾功能、血液生化指标、肾病理及肾脏指数的变化。结果见表9，从表9可以看出虫草头孢多糖组肾功能受损程度明显轻于模型组(P＜0.01)，肾脏病理损伤明显减轻，虫草头孢多糖组与模型组比较肾脏指数有极显著差异(P＜0.01)。结果说明虫草头孢多糖能够预防庆大霉素诱发的急性肾功能衰竭，其机理可能与改善肾功能、纠正代谢紊乱、促进肾小管的修复与再生等作用有关。
表9虫草头孢多糖对大鼠腹腔注射庆大霉素诱发的急性肾衰的影响(x±s，n＝8)
(注#P＜0.05，##P＜0.01，VS control；*P＜0.05，**P＜0.01，VS model)2.2虫草头孢多糖对大鼠腹腔注射顺铂诱发的肾衰的预防作用。
方法将实验动物分为正常组、模型组、虫草头孢多糖高、中、低三个剂量组和阳性组，观察治疗后大鼠的肾功能、血液生化指标、肾病理及肾脏指数的变化。结果见表10，从表10可以看出虫草头孢多糖组肾功能受损程度明显轻于模型组(P＜0.01)，肾脏病理损伤明显减轻，虫草头孢多糖组与模型组比较肾脏指数有极显著差异(P＜0.01)。结果说明虫草头孢多糖能够预防顺铂诱发的急性肾功能衰竭，其机理可能与改善肾功能、纠正代谢紊乱、促进肾小管的修复与再生等作用有关。
表10虫草头孢多糖对大鼠腹腔注射顺铂诱发的急性肾衰(x±s，n＝8)
(注#P＜0.05，##P＜0.01，VS control；*P＜0.05，**P＜0.01，VS model)总之，动物试验研究表明虫草头孢多糖的中、高剂量组对肾毒性或缺血性肾功能衰竭具有防治作用。具体作用机理是，虫草头孢多糖能促进肾小管上皮细胞增殖，减轻肾中毒大鼠的肾小管损害，尿NAG酶、血肌酐水平低于对照组，肾小球滤过和保钠功能优于对照组；防止尿量增加，能减少肾小管上皮细胞空泡变性和细胞坏死，减少间质炎细胞浸润及间质纤维化，降低小血管的透明样变性的发生率；同时也抑制转化生长因子B在小血管的表达，减少纤维连接蛋白在球囊壁和血管的沉积，肾脏病理损伤减轻。
根据本明研究结果，临床上可以将虫草头孢多糖用于制备治疗或预防急慢性肾功能衰竭或者药物肾毒性这种专门药效的药物，也可以将虫草头孢多糖与其它成分混合起来制备而成的具有多种药效的复合药物，所述其它成分与虫草头孢多糖在混合共存状态下药效互不影响。为了方便患者服用，一般将其制成口服剂型。
权利要求
1.虫草头孢多糖的药物用途，其特征在于将虫草头孢多糖用于制备治疗或预防急慢性肾功能衰竭的药物，或者用于制备治疗或预防药物肾毒性的药物。
2.根据权利要求1所述的虫草头孢多糖的药物用途，其特征在于应用虫草头孢多糖制备而成的药物，是一种具有治疗、预防急慢性肾功能衰竭或者药物肾毒性这种专门药效的药物，也可以是将虫草头孢多糖与其它成分混合起来制备而成的具有多种药效的复合药物，所述其它成分与虫草头孢多糖在混合共存状态下药效互不影响。
3.根据权利要求2所述的虫草头孢多糖的药物用途，其特征在于应用虫草头孢多糖制备而成的药物，是一种具有治疗、预防急慢性肾功能衰竭或者药物肾毒性的口服剂。
4.根据权利要求1所述的虫草头孢多糖的药物用途，其特征在于所述虫草头孢多糖中单糖包含葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖以及半乳糖醛酸这六种糖，多糖含量大于60Wt％，半乳糖醛酸含量大于8Wt％，多糖的重均分子量为5～40KD，其中大于3000D的多糖组分的含量不少于70Wt％；该多糖经紫外200-400nm扫描，无蛋白和核酸特征吸收峰，在电泳色谱中与对照药材在相应位置有相同的斑点。
5.根据权利要求4所述的虫草头孢多糖的药物用途，其特征在于所述虫草头孢多糖经以下步骤制备而成，先用2～50倍量热乙醇回流虫草头孢菌发酵的菌丝体，抽滤后，留残渣并挥发掉乙醇，加入2～50倍水煮沸1～6小时，离心后，取上清液去蛋白，再浓缩后加入乙醇，沉淀后真空干燥即得虫草头孢多糖。
全文摘要
本发明涉及草头孢多糖的药物用途，揭示了草头孢多糖在治疗或预防急慢性肾功能衰竭，以及治疗或预防药物肾毒性等方面药效。该多糖采用水提醇沉法从头孢虫草粉中提取，其单糖包含葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和半乳糖醛酸，多糖含量大于60Wt％，半乳糖醛酸含量大于8Wt％，多糖的重均分子量为5～40KD，其中大于3000D的多糖组分不少于70Wt％，临床上可以将其制成专用药，也可以制成复合药物，一般采用口服剂型，以便患者服用。本发明发掘了虫草头孢多糖的医疗用途，开拓了虫草头孢多糖的新的应用领域；其加工原料来源丰富、价廉，制备工艺简单，能够从根本上解决野生冬虫夏草资源缺少的问题，有利于保护天然虫草资源。
文档编号A61K36/068GK101088510SQ20061009658
公开日2007年12月19日 申请日期2006年9月30日 优先权日2006年9月30日
发明者赵利民, 谈伟平 申请人:赵利民, 谈伟平