用于治疗上皮疾病的神经节阻断药的制作方法

专利名称：：用于治疗上皮疾病的神经节阻断药的制作方法
技术领域：
：本发明涉及用于治疗上皮疾病的局部疗法领域，例如皮肤的疾病和粘膜表面如口腔或阴道粘膜的疾病。本发明特别涉及局部施用神经节阻断药治疗如下疾病的领域，例如由病毒引起的疾病如热病性疱疹、皮肤疣、和生殖器疣。
背景技术：
：在人体中，疣是由人乳头状瘤病毒(HPV)引起的皮肤病，其中已经确定了至少100种不同的类型。疣是良性上皮生长，其特征是大大增厚和通常角化过度的表皮。疣通常表现为皮肤表面上离散的、皮肤色的、凸起和粗糙的损伤。疣还可以是扁平的，例如当疣位于脚底上时通常如此，此时它们被称为跖疣。估计疣的患病率在人口总数的0.78%至22%之间变化。因此，在美国，约250万至6600万人患有疣。尤其是在儿童和青少年中，许多疣是自限制的(self-limiting)，无需治疗就将在几个月内消失。然而，在成人中，疣通常不会消失。大多数疣均未经治疗，除非疣难看或者疼痛。肥厚、增生和角化过度的组织使得疣的治疗复杂化，这些组织对活性药物的渗透造成了难以克服的障碍。目前的治疗形式包括通过手术、低温手术(冷冻)或激光除疣，施用化合物如斑蝥素，其会引起疣下面的皮肤产生水泡，从而利于除去疣，以及向疣表面施用腐蚀性化学品如水杨酸。所述腐蚀性化学品通过致角质层分离活性缓慢破坏被病毒感染的表皮来发挥它们的有益作用。水杨酸可作为非处方药来治疗疣。施用水杨酸会引起轻微的刺激，并可以激发免疫响应来帮助去除疣。已经显示水杨酸可对67%的手疣患者产生清除效果(Sterling等，BritishJournalofDermatology,144:4-11(2001))。目前没有可用的具有极高的成功率的疣疗法。尽管水杨酸只能有效清除约三分之二的患者的疣，但已经确定它是治疗疣的最有效方法；甚至比外科技术如低温手术更有效(Gibbs等，BritishMedicalJournal(BMJ),325:461-464(2002))。存在对如下治疗药显著的临床需求其能够作为疗法施用至由病毒引起的损伤如疣的表面，该疗法是有效的，具有较少的刺激或者优选没有刺激，并能在一定时间内清除所述损伤，该时间少于目前推荐的水杨酸的12周治疗期。Baldone的美国专利5,686,448、4,902,720和5,158,980公开了神经节阻断药(GBA)，例如特定的季铵化合物，可有效地治疗病毒感染。GBA是可阻断自主神经节的传输，而不会对神经节细胞的膜电位产生任何预先或伴随变化的药物。GBA通过占据神经节细胞上的受体位点并稳定突触后膜对抗由突触前神经末稍释放的乙酰胆碱作用产生神经节阻断作用。Baldone公开了季铵神经节阻断药如四乙基氯化銜TEAC)可以用于治疗由各科病毒、包括乳多空病毒引起的感染。Baldone公开了TEAC的抗病毒活性是所有神经节阻断药共有的，且神经节阻断药的抗病毒活性可有效对抗所有病毒而并非只能对抗单纯疱疹病毒(HSV)，该病毒在Baldone的专利中作为示例。在实施例中，Baldone公开了用于患有HSV损伤的患者的有效的全身疗法。此外，Baldone描述了当用在亲水软膏基质中包含1%TEAC的软膏治疗五天时，用于皮肤唇HSV损伤(cutaneouslabialisHSVlesion)的有效的局部疗法。本文引用的每个Baldone专利均被纳入本说明书作为参考。尽管已经显示TEAC和其它神经节阻断药是相对无毒的，并可有效地治疗病毒性疾病，但这些药物并未被接受用于治疗疣或其它病毒性皮肤病。在基础临床实验的证据中，发现亲水软膏基质内包含5%TEAC的软膏在治疗疣方面是安全并有效的。然而，尽管阳性结果是统计学显著的，但总体临床结果显示了对疣的低清除水平。存在对包含一种或多种神经节阻断药的制剂的显著需求，与这些目前己知的制剂相比，其可更有效地对抗上皮疾病如疣。
发明内容出人意料地，发现在组合物中将神经节阻断药与己知可提高治疗药通过皮肤或粘膜表面的渗透的赋形剂如丙二醇、十二烷基硫酸钠、乙醇酸、油酸、油醇、或尿素组合不会显著提高所述神经节阻断药通过皮肤的渗透。相反，出人意料地，发现在组合物中将神经节阻断药与水组合会使得所述神经节阻断药通过皮肤的渗透增加。因此，发现在组合物中将水与神经节阻断药组合为所述神经节阻断药提供了意外的更好的上皮渗透，因此提高了治疗影响上皮或位于上皮下面的组织的疾病的有效性。例如，在治疗病毒诱导的皮肤和粘膜疾病时，本发明的组合物提高了抗病毒功效并提高了有效性。此外，通过在组合物中包括胶凝剂，能够进一步改进所述包含神经节阻断药的水性组合物的效用。此外，对于本发明的某些应用，通过在所述组合物中包括醇，能够改进所述水性组合物的效用。本发明的水性组合物可以是各种剂型之一，包括但不限于液体，包括溶液和混悬剂、泡沫、和各种半固体，包括洗剂、乳膏和凝胶，包括水凝胶和水醇凝胶。本发明的水性组合物可以体现为用于局部或透皮施用的贴片，例如水凝胶贴片。本领域技术人员应理解如何制备和使用所述水性剂型的本发明组合物。在一个实施方案中，本发明是用于局部给药的水性药物制剂，该制剂包含水和神经节阻断药，所述药物以可有效减少病毒诱导损伤如疣或热病性疱疹在患有所述损伤的对象的皮肤或粘膜表面上的数目和/或尺寸的浓度存在。优选地，所述药物组合物包含胶凝剂或增稠剂。如果需要，所述药物组合物可以包含醇。与基本上不含水的类似组合物相比，所述组合物中水的浓度至少应提供促进上皮渗透的作用，例如皮肤或粘膜表面渗透。如果需要，所述组合物可以任选地包括已知的促渗剂如丙二醇、十二烷基硫酸钠、乙醇酸、油酸、油醇或尿素。在优选的实施方案中，所述制剂是粘度大于水的流体，例如稠化的液体或半固体。本发明液体制剂的粘度可以为例如水的粘度至约10厘泊(CP)。如果需要，所述液体制剂的粘度可以更高。优选粘度为1000cP或更高，对于本发明的稠液体制剂，更优选高至10,000cP的粘度。本发明半固体制剂的粘度通常为10，000cP至300,000cP或更高。优选地，本发明半固体制剂的粘度为20,000cP至200,000cP之间，最优选25,000cP至150,000cP之间。粘度测量可以在25"C下，使用任何合适的粘度计或流变仪如Brookfield旋转粘度计(BrookfieWEngineering,Middleboro，MA)，并使用通过、源于美国标准和技术协会的方法验证的粘度标准液，例如可获自BrookfiddEngineering的粘度标准液作为参照粘度匹配来进行。在另一个实施方案中，本发明是用于制备局部给药的药物组合物的方法，该方法包括组合水和神经节阻断药，其中存在于所述组合物中神经节阻断药的浓度处于可有效降低病毒诱导损伤如疣或热病性疱疹在患有所述损伤的对象的皮肤或粘膜表面上的数目或尺寸的水平，其中与基本上不含水的类似组合物相比，所述组合物中水的浓度足以提供促进皮肤或粘膜渗透的作用。优选地，进一步将胶凝剂与水和所述神经节阻断药组合，以形成作为凝胶的本发明优选的半固体实施方案。能够使用或不使用所述胶凝剂制备本发明的乳膏或洗剂实施方案。如果需要，进一步将醇与水和所述神经节阻断药、以及所述胶凝剂(如果存在)组合。如果需要，可以任选地组合已知的促渗剂如丙二醇、十二垸基硫酸钠、乙醇酸、油酸、油醇或尿素以制备所述组合物。在另一个实施方案中，本发明是治疗病毒损伤的方法，例如皮肤疣或生殖器疣、生殖器疱疹、或热病性疱疹。根据该实施方案，将有效量包含水和神经节阻断药的药物组合物施用到患有所述损伤的个体的损伤表面，其用量和应用时间可有效地减少损伤在个体上的尺寸和/或数目。所述组合物中神经节阻断药的浓度可有效地减少所述损伤在患有损伤的个体的皮肤或粘膜表面上的数目和/或尺寸。优选地，所述组合物是半固体水性组合物。优选地，所述药物组合物包含胶凝剂。如果需要，所述药物组合物包含醇。如果需要，所述组合物可以任选地包含已知的促渗剂如丙二醇、十二烷基硫酸钠、乙醇酸、油酸、油醇或尿素。与基本上不含水的类似组合物相比，所述组合物中水的浓度至少应提供促进皮肤渗透的作用。具有抗病毒活性的任何一种或多种神经节阻断药均适合本发明。神经节阻断药在本领域中是公知的，所述药物的抗病毒活性可以通过任何本领域中己知的用于检验抗病毒活性的方法或者通过下面实施例中所述的方法测定。因此，所述神经节阻断药可以是季铵化合物，例如Baldone的美国专利5,686,448中公开的那些。并非所有的季铵化合物都是神经节阻断药。例如，苯扎氯铵和二甲基二硬脂酰氯化铵是用于各种上皮表面的公知的局部杀菌剂或皮肤和毛发调理剂。本发明涉及神经节阻断药并包括具有神经节阻断活性的少量季铵化合物子类。所述季铵神经节阻断药可以是单季铵化合物。这些化合物的例子包括四乙基卤化铵，例如四乙基氯化铵("TEAC")、三乙基-((3-4-芪(stilbene)氧乙基)-碘化铵、2，6-二甲基-l,l-二乙基哌啶(diethylpeperidinium)溴化物、2(对丁氧基苯基)-2-(亚甲基-N-吗啉)-二氧戊环-(l,3)-甲基溴、N-苯甲酰甲基-O-kl-扁桃基(mandelyl)-托品氯化物、禾nd-3，4(1，3，-二苄基-2，-酮基咪唑垸代(ketoimidazolidino))-l,2-三亚甲基托品d-樟脑磺酸盐。所述季铵神经节阻断药可以是双季铵化合物。这些化合物的例子包括己烷-l,6-双-(三甲基卣化铵)，例如己烷-1,6-双-(三甲基溴化铵)("六甲溴铵")、己烷-l,6-双-(乙基二甲基溴化铵)、戊垸-l，5-双-(三甲基卤化铵)、N,N,Nl,N,3-五甲基-N，N，-二乙基-3-氮杂戊烷-l,5-二铵卤化物、双-[3-二乙基氨基乙基乙基二碘甲垸、双-(卩-二甲基氨基乙基)-硫醚二碘乙烷、和五亚甲基-l,5-双-(N-甲基吡咯烷酒石酸盐)。所述季铵神经节阻断药可以是不对称的。这些化合物的例子包括苯乙烷-p-6-双-(三甲基碘化铵)、N,N-二乙基-N，,N，-二甲基-双-氨基乙基醚双乙基酒石酸酯、l-[(3-(P，-二乙基氨基乙氧基)-乙基]-吡咯烷双甲碘化物、1，6-二甲基皮考啉酸双甲碘化物的二乙基氨基乙酯、1-氮杂双环-[2,2,3]-辛烷-2-羧酸双甲碘化物的二乙基氨基乙酯、4,5，6,7-四氯-2-甲基-2{双-三甲基铵乙基)-二氯异吲哚、N-(Y-三甲基铵丙基)-N-甲基莰非啶(methylcamphidinium)双甲基硫酸盐、禾卩N，N，N，-三甲基-N-(5-氰基-5,5-二苯基戊基)-亚乙基-l-铵-2-吗啉二氯化物或甲基硫酸盐。本发明的神经节阻断药可以是季铵化合物以外的化合物。这些非季铵化合物的合适化合物的例子包括叔胺，例如2，3,3-三甲基-2-二甲基氨基丁烷氢溴酸盐、1,2,2,6,6-五甲基哌啶(p印eridinium)酒石酸盐、N，N，l,2,2-五甲基环己胺氢溴酸盐或盐酸盐、3-二甲基氨基异莰垸氢溴酸盐或盐酸盐、三-((3-二乙基氨基乙基)-胺三盐酸盐、禾卩d-司巴丁氢碘酸盐，和仲胺如3-甲基氨基异莰烷盐酸盐和2,6-二甲基哌啶盐酸盐。其它神经节阻断药包括六甲铵、四乙铵、美卡拉明、依美铵、喷托铵、曲美替定、松达铵(chlorisondamine)、曲美芬、和潘必啶。用于本发明的优选神经节阻断药是季铵化合物六甲铵，例如为卤化物的形式，优选六甲溴铵，在下文中称为HMB，或者六甲氯铵，在下文中称为HMC。用于本发明的更优选神经节阻断药是四乙基卤化铵，优选四乙基氯化铵，在下文中称为TEAC。使用这两种神经节阻断药作为代表性例子描述本发明，尤其是关于TEAC。然而应理解的是，这些描述并非限于这两种药物，而是适用于任何具有抗病毒活性的神经节阻断药。多于两种神经节阻断药的组合或一种或多种神经节阻断药与来自不同药理学类型的药物的组合表示了本发明的另一种实施方案。本发明组合物中神经节阻断药的浓度可有效地导致皮肤损伤，如病毒诱导的损伤如疣在患有所述损伤的对象中的数目和/或尺寸减少。所述有效浓度可以根据几个参数改变，这些参数包括所述神经节阻断药所用于的适应症和组合物中所含的神经节阻断药的特性。对于TEAC，神经节阻断药的浓度通常为约1重量％或更高，优选为5重量％或更高。更优选的浓度为7%或更高，例如至少为约10%。甚至更优选的浓度为10°/。至40%之间，其中约10%至20%的浓度是最优选的。如果需要，可以在组合物中使用高于40%的浓度。除非另有说明，本文中所述的所有浓度均为重量百分比(重量％)。本发明的组合物是水性的，优选为半固体，例如凝胶、乳膏、或洗剂。乳膏或洗剂可以是水包油或油包水型乳剂。所述乳膏或洗剂优选包含增稠剂，其可以为例如胶凝剂或蜡状增稠剂，例如十六醇、十八醇、白蜡、或单硬脂酸甘油酯。本发明组合物中水的浓度可以有效地增加所述神经节阻断药的皮肤渗透。因此，本发明组合物中水的浓度考虑为1.5%至99.5重量％之间。优选地，组合物中水的浓度为约5%至95%，最优选为10重量％或更高。因此，所述浓度可以为如1.5%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55°/。、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99.5%，或者1.5%至99.5%之间的任何浓度。如本领域技术人员将理解的，水的浓度可以根据组合物中神经节阻断药的特性和浓度以及额外的赋形剂的存在和浓度而变化。在优选实施方案中，本发明的组合物是半固体，最优选的实施方案是凝胶，其包含胶凝剂，优选为聚合物胶凝剂。任何可水分散的、适用于上皮组织、与组合物中特定的神经节阻断药相容、并形成基本上均匀稠度水凝胶的胶凝剂均适用于本发明的组合物。一种优选的胶凝剂是羟丙基纤维素，例如以商品名KLUCEL(HerculesIncorporated,Wilmington,DE,USA)出售的羟丙基纤维素。另一种优选的胶凝剂是羟乙基纤维素，例如以商品名NATROSOL(HerculesIncorporated)出售的羟乙基纤维素。其它合适的胶凝剂包括羧乙烯基聚合物，例如CARBOPOL934、940和941(B.F.GoodrichCo"Akron，OH，USA)、ETD2020、禾BULTREZ(Noveon，Inc.,Cleveland,OH,USA)。其它合适的胶凝剂是聚乙烯醇、聚氧乙》希、丙二醇藻酸酯、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素和天然聚合树胶如黄原胶和角叉菜聚糖(carrageenan)。组合物中胶凝剂的浓度可以根据几种因素变化，这些因素包括凝胶组合物的所需粘度。预期本发明的半固体具有各种粘度，其范围为水状粘度至糊状粘度。在优选实施方案中，本发明的水凝胶包含浓度为约0.2%至10重量％的羟丙基纤维素。任选在本发明的凝胶组合物中包含醇提供了更少的干燥时间、更小的粘度、和潜在增强的化妆美感(elegance)。优选地，所述醇是烷基醇。优选的烷基醇包括乙基醇(也称为EtOH、乙醇和USP醇)和异丙醇。由于具有潜在的刺激性，所以通常不优选将烷基醇用于治疗具有裂纹和裂口的皮肤疾病或牵涉到粘膜的疾病。本发明凝胶组合物中醇的浓度可根据例如组合物所含醇的特性而变化。对于凝胶以外的本发明组合物，例如乳膏和洗剂，醇的浓度通常为10%或更少。优选地，醇的浓度处于或高于提供所需皮肤感觉性质的水平。在包含醇的凝胶中，组合物中醇的浓度优选为约5重量％或更多，更优选为约10重量%或更多。如果需要，醇的浓度可以高至35%、50%、或甚至75%或更多。如果需要，本发明的组合物可以除上述成分以外还包含赋形剂。这些赋形剂包括例如芳香剂、染料和色素、防腐剂、湿润剂、稳定剂如抗氧化剂、致角质层分离剂、润肤剂、增稠剂、螯合剂、和额外的溶剂如丙二醇或聚乙二醇400。如果存在，所述赋形剂的浓度优选处于不会过度地减少神经节阻断药的皮肤渗透的水平。本发明的组合物可以通过制剂领域公知的合并各成分以获得药物组合物的方法制备。因此，本发明的组合物可以通过合并(例如混合)水和一种或多种神经节阻断药以及任何赋形剂，加入醇或不加醇来制备。例如，可以这样制备本发明的凝胶组合物获得水，根据将使用的胶凝剂的性质，将水加热或冷却到适当的温度，向水中添加胶凝剂，在添加胶凝剂之前或之后添加神经节阻断药如TEAC，及按需添加其它赋形剂，优选每次添加和混合一种成分。所述胶凝剂和神经节阻断药应该在混合物中完全混合均匀。优选完全混合所有成分。为了制备水醇凝胶，可以在添加胶凝剂之前或之后添加醇。本发明的组合物可以用于皮肤和粘膜损伤的局部治疗，例如由病毒引起的损伤。设想本发明的组合物可用于治疗由各种病毒引起的损伤和疾病。因此，本发明的组合物可以用于治疗由下列病毒引起的损伤和疾病(1)dsDNA病毒，例如腺病毒、疱疹病毒如单纯疱疹病毒和水痘病毒、乳多空病毒如多瘤病毒和乳头状瘤病毒、和痘病毒；(2)ssDNA病毒，例如圆环病毒和细小病毒；(3)dsRNA病毒，例如双RNA病毒和呼肠孤病毒；(4)ssRNA病毒，例如星状病毒、杯状病毒、冠状病毒、黄病毒、小RNA病毒、和披膜病毒；(5)反义RNA病毒，例如丝状病毒、副粘液病毒、肺病毒、弹状病毒、沙粒病毒、布尼安病毒、和正粘液病毒；(6)RNA逆转录病毒，例如逆转录病毒；和CODNA逆转录病毒，例如嗜肝DNA病毒。本发明组合物的一个适应症是皮肤疣。其它适应症包括生殖器疣、生殖器疱疹和热病性疱疹。本发明组合物的另一个适应症是向宫颈粘膜施用神经节阻断药以治疗HPV(人乳头状瘤病毒)感染，它是宫颈发育异常的原因，这是妇女中普遍的癌前症状。对于待治疗的损伤位于或接近粘膜表面的所述适应症，由于可能刺激粘膜表面，所以所述组合物优选具有高水含量并包含极少量醇或不含醇。对于这些区域，优选半固体制剂如粘性凝胶或乳膏。在凝胶的情况下，所述制剂优选不含醇，在乳膏的情况下，所述制剂优选具有高水含量，例如高于40%。对于阴道施用，所述制剂的pH可以有益地调节至处于或接近生理阴道酸度的pH。根据本发明的治疗方法，通常将包含神经节阻断药的本发明水性组合物局部施用至需要治疗的对象的疣表面或皮肤或粘膜表面的其它损伤的表面上。所述组合物的用量和施用频率可有效地减少患有所述损伤的对象上损伤的尺寸和/或数目，并且可以根据特定对象的疾病严重性以及组合物中神经节阻断药的特性和浓度而变化。所述对象以是患有皮肤或粘膜疾病的任何哺乳动物，所述疾病可由神经节阻断药治疗，例如病毒性疾病如疣。因此，所述对象可以是人或较低等哺乳动物，例如驯养动物如狗、猫或马。在本发明的另一个实施方案中，提供了用于局部治疗病毒诱导的上皮疾病如皮肤或粘膜疾病的药盒。所述药盒包含广口瓶、管子、压挤瓶、或容纳含有水和神经节阻断药的组合物的其它容器。所述组合物优选为凝胶，例如本文所述的醇凝胶。优选地，所述药盒还包含用于将组合物局部施用至皮肤或粘膜表面的受感染区域以使疾病症状好转的说明。优选地，所述神经节阻断药是TEAC，优选地，所述水性组合物是凝胶，例如水醇凝胶。所述广口瓶、管子、压挤瓶、或其它容器优选包装在盒子内，在盒子上可以书写额外的信息，例如说明。在下面的非限制性实施例中进一步描述了本发明。在所述实施例中，参考疣的治疗说明了本发明。然而应理解的是，本发明可用于治疗由病毒引起或恶化的其它皮肤或粘膜疾病。实施例实施例1-测试制剂的制备通过合并表1所示的成分，制备了包含5%TEAC的下列6种制剂。<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>制剂1至6是包含5%TEAC的组合物。制剂1是现有技术的闭合(occlusive)无水亲水软膏(Aquaphor基)。制剂2是包含丙二醇和尿素的闭合无水亲水软膏。制剂3至6是本发明的水性组合物。制剂3、5和6是水醇凝胶组合物，制剂4是乳膏组合物。实施例2-现有技术组合物的功效在双盲安慰剂-对照研究中，测验实施例1制剂1的5%TEAC组合物在治疗疣方面的功效。在研究中评价了四十五(45)名患有疣的患者。三十名患者为用制剂1治疗的活性组，15名患者为用不含TEAC的相同软膏运载体治疗的载体组。在第1天存在的疣被称为基线疣。这些疣是初步功效确定的基础。疣清除定义为消除疣并且治疗位置完全愈合。完全响应定义为消除所有基线疣。部分响应是消除一些但不是全部的基线疣。没有响应定义为所有基线疣仍然存在。活性组有212只疣，载体组有90只疣，基线处总共有302只疣。从第4周开始到整个研究结束，与用安慰剂治疗的载体组相比，在用制剂1治疗的活性组中功效(清除疣。/。)是统计学更高的(p<0.02，Fisher精确检验)。在第12周，在最后一次给药后，活性组中清除了29%疣(212只疣中剩下151只)，对比载体组中清除了9%疣(90只疣中剩下82只)。在第12周，与基线相比，活性组30名患者中的12名和载体组15名患者中的5名响应了治疗，疣的总数有一些减少。在第12周，活性组的百分之十三(13°/。)患者(4名)所有的疣被完全清除，对比载体组的7%患者(1名)。与其基线水平相比，在此研究中没有患者的疣数量增加。此研究的结果总结于表2。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>如表2所示和上面所述，与不含TEAC的载体相比，包含5%TEAC的软膏可有效地治疗疣。用5%TEAC软膏治疗的疣中百分之二十九(29)被清除，13%患有疣的患者清除了疣。发现与单独使用载体获得的结果相比，该结果是统计学显著的(p0.02)，在后者中只有9%的疣被清除，只有7%患者清除了疣。尽管现有技术的5%TEAC软膏在统计学上显示出在治疗疣方面是有效的，但该软膏在活性组中无法清除71%疣，这表明现有技术的软膏在临床上具有低的疣清除水平。实施例3-皮肤渗透研究用示踪剂水平(1^Ci/剂量)的"C-标记TEAC制备实施例1中的所有6种包含TEAC的组合物(制剂1至6)。将单一的临床相关的剂量(4mg制剂/cm勺施用至从选择性手术(electivesurgery)中获得的切片人皮肤。每个研究均使用来自单个人供体的腹部皮肤。每种制剂测定五个样品。使用置于扩散池上的皮肤评价经皮吸收，以评价递送至表皮的TEAC量。接受液由包含0.1%叠氮化钠和1.5%Oleth20的磷酸盐缓冲盐水组成。在24小时的暴露后，通过用两个干棉签擦拭除去残留在皮肤表面上的残余制剂。用单面玻璃纸胶带从表皮上除去角质层的上层。然后从真皮上物理分离剩下的表皮。使用液体闪烁计数技术确定胶带、表皮和总表皮(单面胶带加表皮)样品中的放射性的数据示于表3中。对于每个制剂，该数据是不同的扩散池上的五个皮肤样品的平均值。表3的值是所施用剂量的百分比。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表3的数据显示，制剂3、4和6的每种水性组合物中TEAC渗透入表皮的体外人皮肤渗透高至现有技术组合物制剂1的4至6.5倍。制剂5的皮肤渗透高至现有技术组合物制剂1的1.75倍，所述制剂5包含已证实可减少渗透的高水平尿素(参见实施例4)。制剂3、4和6的组合物的皮肤渗透高至制剂2的2.75至4.5倍，所述制剂2是包含尿素和丙二醇的亲水软膏。水性组合物制剂5显示出比制剂2高约1.25倍的表皮渗透，尽管这两种制剂都包含髙浓度的尿素。表3的数据还显示出，制剂3至6的各水性组合物的TEAC表皮水平高于制剂1或2的任一种不含水的组合物。实施例4-额外的赋形剂的作用按实施例3中所述开展研究，以确定实施例1中制剂3至6的组合物所含的公认的促渗剂丙二醇、十二烷基硫酸钠、乙醇酸和尿素对皮肤渗透的可能的促进作用。为了确定这些赋形剂对皮肤渗透的单独和组合的作用，根据统计学设计，制备了九种不同的TEAC水醇凝胶制剂，称为制剂A至J，其中包含不同水平的这些赋形剂，并测定了每种制剂的皮肤渗透。所测定的制剂示于表4。表4中的所有值均为重量百分比(重量％)。表4包含各种浓度的赋形剂的TEAC制剂<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>来自本研究的数据建立了关于本发明水醇凝胶组合物的下列结果。尿素减少了表皮、真皮或接受液(皮肤渗透)的水平(p0.05，非成对t-检验)。在高(20%)丙二醇浓度下，十二烷基硫酸钠可以提高表皮药物水平(p0.05)。提高丙二醇浓度会降低表皮、真皮和接受液(皮肤渗透)的水平(p0.05)。乙醇酸降低了真皮和接受液(皮肤渗透)的水平(p0.05)。从本研究中可得出添加尿素或乙醇酸不会提高TEAC从凝胶组合物中的皮肤沉积或渗透的结论。此外，与包含低浓度的丙二醇、不含十二烷基硫酸钠并且不含乙醇酸的制剂相比，提高丙二醇浓度并添加十二垸基硫酸钠没有显著改进TEAC递送。实施例5-提高醇和神经节阻断药的水平对渗透的作用使用如实施例3所述的离体人皮肤，在24-小时暴露后，评价本发明原型水醇凝胶制剂中乙醇和TEAC浓度变化对"C标记TEAC体外经皮吸收的影响。结果总结于表5中。如表5所示，改变乙醇浓度产生了相当的TEAC沉积和渗透。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>实施例6-本发明制剂和现有技术制剂的总GBA皮肤渗透的对比开展了经皮渗透的研究，其中比较了包含5。/。活性成分(TEAC)的两种制剂和包含1%TEAC的一种制剂。5%制剂之一是现有技术的制剂，其在不含添加水的基于Aquaphor的亲水软膏中包含TEAC(如Baldone所述)。本发明的制剂是水醇凝胶，其包含羟丙基纤维素1.8%、丙二醇5%、十二垸基硫酸钠0.25°/。、乙醇50%、四乙基氯化铵5%、和净化水37.95%至41.95%。表5A中的总结的结果是6个样品的平均值，所述量表示为每平方厘米皮肤在32°。下24小时内吸收的总药量。皮肤渗透如实施例3所述确定。数据示于表5A中。表5A<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>表5A的数据显示活性成分(TEAC)由本发明水醇凝胶的渗透比由相同浓度的现有技术软膏高27倍。即使处于五分之一的活性成分浓度下，本发明的凝胶制剂也能将超过现有技术制剂4倍的药量送入皮肤内。因此，与现有技术形成对照，本发明的制剂能够在二十四小时内提供每平米厘米10微克或更多的活性成分的总人皮肤输送(表皮、真皮和接受液)。实施例7-体外释放研究通过合并表6所示的成分，制备了七种(7)制剂，称为6A至6G，每种制剂包含约1。/。神经节阻断药(GBA)。表6的成分是重量百分比(重量％)。制剂6A至6C包含TEAC。制剂6D和6E包含六甲氯铵。制剂6F和6G包含非季铵GBA潘必啶。制剂6C、6E和6G不是本发明的水性组合物。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>研究了表6所示的制剂，以说明GBA从本发明含水制剂中的体外释放与不含水的制剂的对比。将Fmnz静态扩散池(15mm孔径，O-环接合，CrownBioScientific,Clinton,NJ,USA)安装在9池支架上，通过使用循环水浴保持在32X:的恒定温度。这些池具有标称面积为1.767cm2的开口和体积范围为12至13ml的接受室。通过放置支撑膜(TUFFRYN⑧薄膜滤器，HT-450，25mm直径，0.45拜孑L径，GelmanSciencesInc.,AnnArbor,MI，USA),然后放置TEFLON(E丄duPontdeNemoursandCo.,Wilmington,DE，USA)O-环，组装每个扩散池，O-环放置在扩散池接收侧(下半部分)的槽内。然后将扩散池的供应侧(上半部分)放在支撑膜的顶部，并通过使用收縮夹使其保持在原位。用PARAFILM(AmericanCanCo.,Greenwich,CT，USA)裹住每个池的供应侧和接收侧之间的接合处，以防止池内接受液的蒸发。然后用包含50%乙醇的去离子水脱气溶液的接受液填充每个池，注意从膜下面排出所有气泡。使用TEFLON⑧磁力搅拌棒和接种环连续地搅拌接受液，从环顶部将接种环切成6.0cm。在施用测定制剂6A至6G之一之前，用接受液将膜浸泡l小时。使用注射器将极大剂量(约1.5ml)的每种制剂施用到膜上。以交替模式将每种制剂施用至4个扩散池。用PARAFILM⑧密封所述扩散池供应室和取样孔，以防止蒸发。在施用后2、4和6小时，使用针上安有TEFLON⑧管的注射器，通过取样孔收集所有接受液。然后用保持在32'C的新鲜接受液再填充该接收室。然后在适当时，通过离子对色谱法分析所收集的接受液样品中TEAC、六甲氯铵、或潘必啶的存在和浓度。表7显示了从每个制剂的四个样品中释放到接受液内的TEAC、六甲氯铵和潘必啶的平均累积量。在所述七个样品中，在使用六甲氯铵的水基凝胶制剂6D中观察到了最高的GBA释放速率，为3595pg/hr1/2。TEAC在水基凝胶中的制剂6A的释放速率仅是略低。TEAC从水基凝胶制剂6A的释放速率为3472jig/hr1/2，TEAC从醇凝胶制剂6B的释放速率为2921pg/hr1/2。TEAC和六甲氯铵两者从非水软膏制剂6C和6E中的释放均低于检测限。潘必啶从醇凝胶制剂6F和非水软膏制剂6G的释放速率分别为2532pg/hr^和304(_ig/hr1/2。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>该研究的结果证明，GBA从含水制剂中的释放显著(pO.05)大于从无水软膏制剂中的释放。使用水基无醇凝胶获得了最高的释放速率，其次是水基醇凝胶。每种受试GBA从每种水基凝胶中的释放速率均比从任何受试无水制剂中观察到的最高释放速率高至少15倍。使用季铵化合物神经节阻断药如TEAC和六甲氯铵以及不带电的非季铵神经节阻断药潘必啶获得了这些出人意料的有益结果。实施例8-体内抗病毒功效开展了研究以证明与现有技术的不含水的组合物相比，包含神经节阻断药的本发明水性组合物的抗病毒活性的提高。还将所述组合物与安慰剂治疗和未治疗作了比较。此外，通过比较不同浓度的本发明水性组合物的抗病毒活性，生成了本发明水性组合物的剂量响应曲线。所研究的各制剂的成分列于表8中。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>从CovanceResearchProducts,Inc.(Denver,PA，USA)购买了三十只两种性别的新西兰白兔。购买时兔的体重为2.0至2.5kg，在研究结束时长到了4至5kg。在所述研究的治疗部分中，兔的体重为2.5和3.5kg之间。将兔分成6组，每组5只。每只兔的背上有四个(4)1cn^的治疗位置，其中两个位置在背的右侧，2个位置在背的左侧，用已知足以诱导形成乳头状瘤的的剂量的棉尾兔乳头状瘤病毒(CRPV)原种(stock)接种这些位置。最先在Shope和Hurst，J.Exp.Med.,58:607-624(1933)中描述的该CRPV模型已经被广泛用于检验化合物的抗病毒功效，并且已经被认可作为人乳头状瘤病毒(HPV)相关疾病的动物模型。在CRPV感染后第5天开始治疗，治疗由在每周的5天中，每天一次向每个位置局部施用100^d测试制剂，进行8周组成。治疗组的剂量如表9所示。每只兔在其背部同侧两个位置上的每一个位置接受相同的治疗。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>从乳头状瘤病毒接种后第12天开始，在7周内视觉评价了每种GBA测试制剂抑制感染后乳头状瘤发展的能力。表IO总结了与每种GBA制剂和治疗组相关的抗病毒活性。结果显示每个位置存在或不存在乳头状瘤。表10<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>表10的数据显示下列结果。相对于未治疗的接种位置，安慰剂凝胶没有表现明显的抗病毒活性。5%TEAC软膏(非水)表现无抗病毒活性。在施用该软膏后的乳头状瘤生长与安慰剂凝胶和未治疗的接种位置相当。相比之下，5。/。TEAC水凝胶表现了显著的、几乎是完全的抗病毒活性，并且在每个观察点处均显著(pO.05)优于安慰剂凝胶和5。/。TEAC软膏。即使在1%时，TEAC水凝胶仍表现了抗病毒活性。15%和30%TEAC水凝胶的显著抗病毒活性与凝胶中醇的浓度无关。相对于安慰剂凝胶和TEAC软膏，15%六甲铵水凝胶表现了显著的抗病毒活性。此结果证实了包含神经节阻断药的水凝胶制剂具有显著优于类似非水制剂的体内抗病毒活性，对于TEAC，存在典型的剂量响应曲线，其中使用15%TEAC浓度获得了最大的有效性。本研究使用的对侧位置给药方案排除了因GBA的全身吸收所观察到的抗病毒活性。在组A中，给兔左侧两个治疗位置施用安慰剂凝胶，给右侧治疗位置施用最高浓度的TEAC凝胶，即30%。组A的兔接受了最高的TEAC身体负荷，即21.6mgTEAC/kg/天。然而，组A的安慰剂凝胶治疗位置与组E禾BF的未治疗位置具有相当的乳头状瘤生长水平。组E的兔没有给药TEAC制剂，组F接受了最低的TEAC身体负荷，即3.6mgTEAC/kg/天。然而，处于安慰剂凝胶和未治疗位置对侧的给药TEAC凝胶的治疗位置表^见出惊人的且统计学显著的抗病毒活性。尤其值得一提的是，处于5%TEAC软膏对侧的给药15%TEAC凝胶的治疗位置表现出惊人的且统计学显著的抗病毒活性，而5%TEAC软膏在该动物模型中没有表现出抗病毒活性。实施例9本发明的组合物包括优选的半固体剂型如乳膏和洗剂。本发明的乳膏和洗剂可以是水相分散在油相中的组合物。或者，它们可以是油相分散在水相中。所述一相在另一相中的分散可以借助乳剂领域中公知的任何乳化剂。所述油相可以是众多水不混溶成分的任意成分，例如矿物油、肉豆蔻酸异丙酯、己二酸二异丙酯、硅酮、乳化蜡、十六醇、十八醇的共混物。可以通过分别将水相成分和油相成分混合到一起，然后通过在高温下混合来乳化两种混合物来制备所述乳剂。本发明洗剂和乳膏的非限制性实例示于表11和12中。表11<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>表12优选的乳膏制剂的实例<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>实施例10本发明溶液制剂的非限制性实例示于表13。表13优选的溶液制剂的实例<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>如果需要，可以将低水平的增稠剂如0.1至0.3。/c^3乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素或聚乙烯醇添加到表13的制剂中。实施例11本发明凝胶制剂的非限制性实例示于表14中。<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>按如下方法制备该凝胶在合适的容器中使用螺旋桨混合共混乙醇、己二醇和水以制备水溶液，将苯甲醇添加到所述水溶液中并通过连续的螺旋桨混合使其溶解，在混合下缓慢添加盐酸美卡拉明直到其溶解，然后将胶凝剂羟丙基纤维素添加(例如通过喷洒)到所述水溶液中，同时用螺旋桨混合器混合。调节羟丙基纤维素的添加速率和混合速度以使所述胶凝剂平滑地分散。继续混合直到形成平滑且无气泡的凝胶，这可能需要多至2小时或更长时间，取决于投料量。实施例13本发明美卡拉明(游离碱)的非限制性乳膏制剂示于表16中。表16<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>通过将包含棕榈酸异丙酯、轻矿物油、十六醇和单硬脂酸甘油酯的油相加热到约70。C来制备该乳膏的油相。通过将水加热到约7(TC并用螺旋桨混合溶解羟苯甲酯和羟苯丙酯来制备水相。然后在螺旋桨混合下将丙烯酸酯/丙烯酸C10-C30垸基酯交联聚合物缓慢添加到热水中，直到均匀分散。通过添加steareth21并在混合下缓慢分散，完成水相的制备。通过将热油相与热水相合并，同时用螺旋桨或转子-定子式混合器剧烈混合，形成乳剂。在充分混合以形成充分分散的乳剂后，将该乳剂冷却到约4(TC，此时在快速的混合下添加美卡拉明，以使该神经节阻断药均匀分散。然后分批添加优选溶于为其重量20倍的净化水中的氨丁三醇，以获得7至8的所需pH。在逆流和侧扫混合下继续冷却，直到乳膏达到接近室温。现有技术已经显示出神经节阻断药如TEAC在人体中治疗病毒性疾病和损伤方面是有活性的，所述的病毒性疾病和损伤如由于人乳头状瘤病毒所致的疣和由于单纯疱疹病毒所致的疾病。如本文所示，通过在含水的组合物中合并GBA，提高了GBA渗入皮肤的能力。如本文所示，当所述组合物包含水时，提高了GBA从药物组合物中的释放速率。此外，如本文所示，与非水组合物中的GBA相比，水性组合物中GBA的抗病毒功效明显提高。这些相对现有技术显著的改进并非依赖于组合物中存在除水以外的成分，如醇。本发明代表了在开发用于局部治疗由病毒感染所致的损伤或疾病的治疗制剂方面的重大的进步。本文所述发明的其它修改、使用和应用对本领域技术人员是显而易见的。这些修改应由下列权利要求所涵盖。权利要求1.药物制剂，其包括神经节阻断药和水。2.权利要求1的药物制剂，其中与类似的不含水的组合物相比，所述制剂中水的浓度足以提高皮肤或粘膜渗透。3.权利要求1的药物制剂，其在二十四小时内提供每平方厘米IO微克或更多活性成分的总人体皮肤输送。4.权利要求1的药物制剂，其中所述制剂中水的浓度为5重量％或更咼。5.权利要求1的药物制剂，其为半固体。6.权利要求1的药物制剂，其包括胶凝剂。7.权利要求6的药物制剂，其还包括醇。8.权利要求1的药物制剂，其中所述神经节阻断药为季铵化合物。9.权利要求8的药物制剂，其中所述季铵化合物选自单季铵化合物、双季铵化合物、和不对称的季铵化合物。10.权利要求9的药物制剂，其中所述季铵化合物为六甲铵或四乙铵化合物。11.权利要求1的药物制剂，其中所述神经节阻断药为除季铵化合物以外的化合物。12.权利要求11的药物制剂，其中所述神经节阻断药选自叔胺、仲胺、六甲铵、四乙胺、美卡拉明、依美铵、喷托铵、曲美替定、松达铵、曲美芬、和潘必啶。13.权利要求1的药物制剂，其中所述祌经节阻断药是浓度为5重量％或更高的四乙基氯化铵。14.制备药物制剂的方法，该方法包括合并神经节阻断药和水。15.权利要求14的方法，其中与类似的不含水的组合物相比，所述制剂中水的浓度足以提高皮肤或粘膜渗透。16.权利要求14的方法，其中在二十四小时内，所述制剂提供每平方厘米10微克或更多活性成分的总人体皮肤输送。17.权利要求14的方法，其还包括将胶凝剂与所述神经节阻断药和水合并。18.权利要求17的方法，其还包括将醇与所述神经节阻断药和水合并。19.一种治疗哺乳动物对象中的疾病的方法，该方法包括向上皮表面局部施用包括神经节阻断药和水的组合物。20.权利要求19的方法，其中与类似的不含水的组合物相比，所述组合物中水的浓度足以提高皮肤或粘膜渗透。21.权利要求19的方法，其中在二十四小时内，所述制剂提供每平方厘米10微克或更多活性成分的总人体皮肤输送。22.权利要求19的方法，其中所述疾病是病毒性疾病或损伤。23.权利要求22的方法，其中所述病毒性疾病或损伤由乳头状瘤病毒感染引起。24.权利要求23的方法，其中所述病毒性疾病或损伤是皮肤疣。25.权利要求19的方法，其中所述组合物还包含胶凝剂。26.权利要求25的方法，其中所述组合物还包含醇。27.权利要求19的方法，其中所述组合物中水的浓度为5重量％或更高.28.权利要求19的方法，其中所述神经节阻断药为季铵化合物。29.权利要求28的方法，其中所述季铵化合物为四乙铵或六甲铵化合物.30.—种用于局部治疗病毒诱导的上皮疾病的药盒，该药盒包含含有组合物的容器，所述组合物包含水和神经节阻断药。31.权利要求30的药盒，其中与类似的不含水的组合物相比，所述组合物中水的浓度足以提高皮肤或粘膜渗透。32.权利要求30的药盒，其中在二十四小时内，所述组合物提供每平方厘米IO微克或更多活性成分的总人体皮肤输送。33.权利要求30的药盒，其中所述组合物还包含胶凝剂。34.权利要求33的药盒，其中所述组合物还包含醇。35.权利要求30的药盒，其中所述神经节阻断药为季铵化合物。36.权利要求35的药盒，其中所述季铵化合物为四乙铵或六甲铵化合全文摘要本发明公开了包含神经节阻断药和水的组合物以及制备和使用所述组合物的方法，与包含神经节阻断药而不含水的组合物相比，该组合物可提高神经节阻断药进入和通过上皮表面如皮肤和粘膜表面的渗透，提高从包含所述神经节阻断药的制剂中的释放，并提高抗病毒有效性。文档编号A61K31/14GK101203215SQ200680018235公开日2008年6月18日申请日期2006年3月14日优先权日2005年3月24日发明者D·A·巴克斯,G·J·道,N·德赛申请人:陶氏制药科学公司