使用氨基嘧啶类激酶调节剂的flt3激酶协同调制的制作方法

专利名称：使用氨基嘧啶类激酶调节剂的flt3激酶协同调制的制作方法
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本申请要求2005年6月10日提交的美国临时专利申请60/689,750的优先权，所述申请被全文并入本文。
发明领域 本发明涉及使用与FLT3酪氨酸激酶抑制剂组合的法尼基转移酶抑制剂治疗细胞增殖性病症或FLT3相关病症。

背景技术：
Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)配体(FLT3L)是影响多种造血谱系发育的细胞因子之一。这些作用通过FLT3L对FLT3受体(也称为胎儿肝激酶-2(flk-2))和STK-1(在造血干细胞和祖细胞上表达的受体酪氨酸激酶(RTK))的结合而发生。在正常的造血作用过程中，FLT3基因编码在细胞的增殖、分化和细胞程序死亡中起重要作用的跨膜III类RTK。FLT3基因主要由早脊髓祖细胞和淋巴祖细胞表达。参见McKenna，Hilary J.等人.Mice lacking flt3 ligand have deficient hematopoiesis affectinghematopoietic progenitor cells，dendritic cells，and natural killer cells.Blood.Jun 2000；953489-3497；Drexler，H.G.和H.Quentmeier(2004)″FLT3receptor and ligand.″Growth Factors 22(2)71-3。
FLT3的配体由骨髓基质细胞和其它细胞表达并且与其它生长因子协同作用以刺激干细胞、祖细胞、树状细胞、和天然杀伤细胞的增殖。
造血功能障碍是这些系统的恶化前病症，包括例如骨髓增生异常，例如血小板增多、原发性血小板增多(ET)、特发性骨髓外化生、骨髓纤维化(MF)、伴骨髓外化生的骨髓纤维化(MMM)、慢性特发性骨髓纤维化(IMF)、真性红细胞增多症(PV)、血细胞减少症、和恶化前脊髓发育不良综合征。参见Stirewalt，D.L.和J.P.Radich(2003).″The role of FLT3 inhaematopoietic malignancies.″Nat Rev Cancer 3(9)650-65；Scheijen，B.和J.D.Griffin(2002).″Tyrosine kinase oncogenes in normal hematopoiesisand hematological disease.″Oncogene 21(21)3314-33。
血液学恶性肿瘤是身体的血液形成和免疫系统、骨髓和淋巴组织的癌症。尽管在正常的骨髓中，FLT3表达只限于早祖细胞，而在血液学恶性肿瘤中，FLT3以高水平表达或者FLT3突变引起不受控制的FLT3受体和下游分子通道诱导，可能的Ras活化。血液学恶性肿瘤包括白血病、淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、霍奇金病(也称为霍奇金淋巴瘤)和骨髓瘤——例如，急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性粒细胞白血病(AML)、急性旱幼粒细胞白血病(APL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞白血病(CML)、慢性嗜中性粒细胞白血病(CNL)、急性未分化细胞白血病(AUL)、退行发育性大细胞性淋巴瘤(ALCL)、幼淋巴细胞白血病(PML)、幼年型粒-单核细胞白血病(JMML)、成人T细胞ALL、伴有三谱系(trilineage)脊髓发育不良的AML(AML/TMDS)、混合型谱系白血病(MLL)、脊髓发育不良综合征(MDSs)、骨髓增生异常(MPD)、多发性骨髓瘤(MM)和脊髓肉瘤。参见Kottaridis，P.D.，R.E.Gale等人(2003).″Flt3 mutations and leukaemia.″Br J Haematol 122(4)523-38。脊髓肉瘤也与FLT3突变有关。参见Ansari-Lari，Ali等人，FLT3 mutations in myeloidsarcoma.British Journal of Haematology.2004年9月126(6)785-91。
急性粒细胞白血病(AML)是成人白血病的最普遍形式，并且占儿重期白血病的15-20％。在2002年，在美国，诊断了大约11,000AML新病例，并且估计有8,000名患者死于AML。参见National Cancer InstituteSEER database-http://seer.cancer.gov/。尽管AML的诊断传统上基于组织学技术和血液白细胞计数，但是细胞遗传和遗传分析的最新进展显示，AML是在遗传学异常、临床特征和对治疗的响应方面有差异的不同疾病的混合。最近的努力开始针对AML的不同亚型(亚型是基于对疾病相关蛋白质表达的细胞遗传学分析和免疫组织化学分析)定制化学治疗并获得一定的成功。AML的治疗一般地分两个阶段进行诱导和诱导后治疗。诱导治疗一般地由三个剂量的蒽环类药(例如柔红霉素)和随后用细胞毒药物阿糖胞苷的i.v.浓集输注7-10天组成。这种方案在70-80％的年龄小于60岁的患者和～50％的年龄大于60岁的患者中有效诱导症状缓解。参见Burnett，A.K.(2002).″Acute myeloid leukemiatreatment of adultsunder 60years.″Rev Clin Exp Hematol 6(1)26-45；Buchner T.，W.Hiddemann等人(2002).″Acute myeloid leukemiatreatment over 60.″Rev Clin Exp Hematol.6(1)46-59。在症状缓解诱导治疗之后，有几个诱导后治疗的选择，包括化学治疗或骨髓移植的另外循环。诱导后治疗的选择和成功取决于患者的年龄和AML亚型。尽管在过去十年中在AML的诊断和治疗方面取得了进步，但是小于65岁的患者的5年无病存活率只有40％，大于65岁的患者的5年无病存活率小于10％。因此，对于AML(特别是大于65岁的患者)仍有重大的未满足的临床需要。随着对AML不同亚型的机制的认识增加，对该疾病的新的定制治疗开始呈现某些前景。
在复发性和顽固性AML治疗方面的一个最近的成功例是用于诱导后治疗的法尼基转移酶抑制剂(FTI)的开发和应用。法尼基转移酶抑制剂是胞内法尼基蛋白质转移酶(FPT)的有效的和选择性的抑制剂类别。FPT催化许多胞内蛋白质的脂质修饰，包括Ras和Rho家族的小GTP酶和核纤层蛋白，引导它们对细胞内的质膜或膜区室的定位。
最初开发FTI用于预防Ras癌基因蛋白质翻译后法尼基化和活化(Prendergast G.C.和Rane，N.(2001)“Farnesyl Transferase InhibtorsMechanism and Applications”Expert Opin Investig Drugs.10(12)2105-16)。最近的研究还证明，FTI诱导的Nf-κB活化的抑制通过抑制Ras-依赖性的Nf-κB活化，而引起对诱导细胞程序死亡和炎性基因表达的向下调节的敏感性增加。参见Takada，Y.等人(2004).“Proteinfarnesyltransferase inhibitor(SCH66336)abolishes NF-kappaB activationinduced by various carcinogens and inflammatory stimuli leading tosuppression of NF-kappaB-regulated gene expression and up-regulation ofapoptosis.”J Biol Chem 279，26287-99。
对于肿瘤学而言特别重要的是，Ras和Rho家族致癌基因的FTI抑制在体外和体内引起肿瘤细胞的生长抑制和细胞程序死亡。参见Haluska P.，G.K.Dy，A.A.Adjei.(2002)″Farnesyl transferase inhibitors asanticancer agents.″Eur J Cancer.38(13)1685-700。从临床观点看，脊髓恶性肿瘤，特别是AML，代表了FTI治疗的重要机遇。
如前所述，AML是具有极低长期存活率和高比例的化疗诱导的毒性和抗性(特别是在年龄大于60岁的患者中)的疾病。另外，AML细胞增殖的机制依赖Ras和Rho家族的小GTP酶类。在众多支持FTI在AML治疗中的功效的临床前资料中，有几个临床试验是用包括替比法尼(Tipifarnib)(ZarnestraTM，Johnson&Johnson)、BMS-214662、CP-60974(Pfizer)和Sch-6636(lonafarnib，Schering-Plough)的FTI启动的。
ZARNESTRA(又名R115777或替比法尼)是FTI类化合物中最先进和最有前途的。在对复发性和顽固性AML的患者进行的临床研究中，替比法尼治疗产生～30％的反应率，有2名患者实现完全缓解。参见Lancet J.E.，J.D.Rosenblatt，J.E.Karp.(2003)“Farnesyltransferaseinhibitors and myeloid malignanciesphase I evidence of Zarnestra activityin high-risk leukemias.”Semin Hematol.39(3 Suppl 2)31-5。这些反应独立于患者的Ras突变状况出现，因为试验中没有一名患者具有时常在AML患者中发现的Ras突变。然而，在治疗开始时，在患者反应与他们的MAP激酶活化水平(Ras和Rho蛋白活性的下游靶)之间有直接相关，表明由其它机制活化的Ras/MAP激酶通道的活动性可能是患者反应的可靠预报者。参见Lancet J.E.，J.D.Rosenblatt，J.E.Karp.(2003)“Farnesyltransferase inhibitors and myeloid malignanciesphase I evidenceof Zarnestra activity in high-risk leukemias.”Semin Hematol.39(3 Suppl 2)31-5。另外，新近在患有复发性AML的患者中的多中心II期试验证明，在50名患者中的17名中有完全反应(骨髓损害＜5％)和在50名患者中的31名中有骨髓损害＞50％的减少。在Gotlib，J(2005)“Farnesyltransferaseinhibitor therapy in acute myelogenous leukemia.”Curr.Hematol.Rep.；4(1)77-84中综述。对在该试验中的反应者中通过FTI治疗调节的基因的初步分析也证明在MAP激酶通道中对蛋白质的作用。这个有前途的结果蕴含着在期待不久的将来在临床上应用替比法尼的方面的专门知识。
最近，出现了另一个靶，用于治疗AML、和患有MDS和ALL的患者的子集。受体酪氨酸激酶、FLT3和FLT3的突变已经被确定为AML进展中的关键角色。关于将FLT3活性与疾病相关的许多研究的概述由Gilliland，D.G.和J.D.Griffin(2002)，″The roles of FLT3 in hematopoiesisand leukemia.″Blood 100(5)1532-42；和Stirewalt，D.L.和J.P.Radich(2003).″The role of FLT3 in haematopoietic malignancies.″Nat RevCancer 3(9)650-65进行了深入的综述。超过90％的AML患者在胚细胞中有FLT3表达。现在认识到大约30-40％的AML患者具有FLT3的活化突变，使得FLT3突变成为AML患者中最常见的突变。FLT3的活化突变有两个已知的类型。一个是受体的近膜区域的4-40氨基酸的重复(ITD突变)(25-30％的患者)，另一个是在激酶结构域中的点突变(5-7％的患者)。这些受体突变引起多种信号转导途径的结构性活化，包括Ras/MAP激酶、PI3激酶/AKT和STAT通道。另外，FLT3ITD突变也已经表现出减少早期骨髓细胞的分化。更重要的是，患有ITD突变的患者具有症状缓解诱导比例降低、症状缓解时间缩短、和更差的总体预后。在具有MLL基因重排的ALL和在MDS患者的子群中也发现FLT3ITD突变。在MDS和ALL中，FLT3ITD突变的存在也与这些患者中加速的疾病进展和更差的预后有关。参见Shih L.Y.等人(2004)“Internal tandemduplication of fms-like tyrosine kinase 3 is associated with poor outcome inpatients with myelodysplastic syndrome.”Cancer，101；989-98；和Armstrong，S.A.等人(2004)“FLT3 mutations in childhood acutelymphoblastic leukemia.”Blood.1033544-6。迄今为止，仍没有强有力的证据表明激酶结构域点突变或过度表达的野生型受体是疾病的成因，然而，FLT3表达可有助于疾病的进展。这种建立的临床前和临床证据引起了开发许多FLT3抑制剂，其目前正在临床前和临床环境中进行评价。
新兴的治疗AML的策略是在诱导和/或诱导后治疗过程中将靶向治疗剂一起或将其与传统的细胞毒药物组合。已经公布了概念数据的最新试验，证明细胞毒药物(例如阿糖胞苷或柔红霉素)与FLT3抑制剂的组合抑制表达FLT3ITD的AML细胞的生长。参见Levis，M.，R.Pham等人(2004).″In vitro studies of a FLT3 inhibitor combined with chemotherapysequence of administration is important to achieve synergistic cytotoxiceffects.″Blood 104(4)1145-50；和Yee KW，Schittenhelm M，O′Farrell AM，Town AR，McGreevey L，Bainbridge T，Cherrington JM，HeinrichMC.(2004)“Synergistic effect of SU11248 with cytarabine or daunorubicinon FLT3ITD-positive leukemic cell.”Blood.104(13)4202-9。
因此，本发明提供了一种协同的治疗方法，包括将本文中所述的新型的FLT3激酶抑制剂与法尼基转移酶抑制剂共同给予(同时或顺序)，用于治疗FLT3表达细胞的增殖性病症。
当前已知有多种FT酶抑制剂。适用于本发明的FTI如下WO-97/21701和美国专利6,037,350描述了某些抑制法尼基转移酶的式(I)、(II)和(III)的(咪唑-5-基)甲基-2-喹啉酮衍生物的制备、制剂和药学性质，以及在体内代谢为式(I)化合物的式(II)和(III)的中间体，所述文献被全文并入本文。式(I)、(II)和(III)的化合物由下式表示
及其可药用酸或碱加成盐和立体化学异构形式，其中 虚线表示任选的键； X为氧或硫； R1为氢、C1-12烷基、Ar1、Ar2C1-6烷基、喹啉基C1-6烷基、吡啶基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、氨基C1-6烷基， 或下式的基团-Alk1-C(＝O)-R9、-Alk1-S(O)-R9或-Alk1-S(O)2-R9、其中Alk1为C1-6烷二基， R9为羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、C1-8烷基氨基或被C1-6烷氧基羰基取代的C1-8烷基氨基； R2、R3和R16各自独立地为氢、羟基、卤代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、氨基C1-6烷氧基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基、Ar1、Ar2C1-6烷基、Ar2氧基、Ar2C1-6烷氧基、羟基羰基、C1-6烷氧基羰基、三卤代甲基、三卤代甲氧基、C2-6烯基、4，4-二甲基唑基；或 当在相邻的位置上时，R2和R3可以一起形成下式的二价基团 -O-CH2-O-(a-1)， -O-CH2-CH2-O-(a-2)， -O-CH＝CH-(a-3)， -O-CH2-CH2-(a-4)， -O-CH2-CH2-CH2-(a-5)，或 -CH＝CH-CH＝CH-(a-6)； R4和R5各自独立地为氢、卤代、Ar1、C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、羟基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基或C1-6烷基S(O)2C1-6烷基； R6和R7各自独立地为氢、卤代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、Ar2氧基、三卤代甲基、C1-6烷硫基、二(C1-6烷基)氨基，或 当在相邻的位置上时，R6和R7可以一起形成下式的二价基团 -O-CH2-O-(c-1)，或 -CH＝CH-CH＝CH-(c-2)； R8为氢、C1-6烷基、氰基、羟基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、羧基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、咪唑基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、氨基羰基C1-6烷基、或下式的基团 -O-R10(b-1)， -S-R10(b-2)， -N-R11R12(b-3)， 其中R10为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar1、Ar2C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、或下式的基团-Alk2-OR13或-Alk2-NR14R15； R11为氢、C1-12烷基、Ar1或Ar2C1-6烷基； R12为氢、C1-6烷基、C1-16烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基氨基羰基、Ar1、Ar2C1-6烷基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、天然氨基酸、Ar1羰基、Ar2C1-6烷基羰基、氨基羰基羰基、C1-6烷氧基C1-6烷基羰基、羟基、C1-6烷氧基、氨基羰基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基羰基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基羰基氨基、或下式的基团-Alk2-OR13或-Alk2-NR14R15； 其中 Alk2为C1-6烷二基； R13为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、羟基C1-6烷基、Ar1或Ar2C1-6烷基； R14为氢、C1-6烷基、Ar1或Ar2C1-6烷基； R15为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar1或Ar2C1-6烷基； R17为氢、卤代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、Ar1； R18为氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤代； R19为氢或C1-6烷基； Ar1为苯基或被C1-6烷基、羟基、氨基、C1-6烷氧基或卤代取代的苯基；和 Ar2为苯基或被C1-6烷基、羟基、氨基、C1-6烷氧基或卤代取代的苯基。
WO-97/16443和美国专利5,968,952描述了式(IV)的法尼基转移酶抑制化合物的制备、制剂、和药学性质，以及在体内代谢为式(IV)化合物的式(V)和(VI)的中间体，所述文献被全文并入本文。式(IV)、(V)和(VI)的化合物由下式表示
及其可药用酸或碱加成盐和立体化学异构形式，其中 虚线表示任选的键； X为氧或硫； R1为氢、C1-12烷基、Ar1、Ar2C1-6烷基、喹啉基C1-6烷基、吡啶基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、 或下式的基团-Alk1-C(＝O)-R9、-Alk1-S(O)-R9或-Alk1-S(O)2-R9， 其中Alk1为C1-6烷二基， R9为羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、C1-8烷基氨基或被C1-6烷氧基羰基取代的C1-8烷基氨基； R2和R3各自独立地为氢、羟基、卤代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、氨基C1-6烷氧基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基、Ar1、Ar2C1-6烷基、Ar2氧基、Ar2C1-6烷氧基、羟基羰基、C1-6烷氧基羰基、三卤代甲基、三卤代甲氧基、C2-6烯基；或 当在相邻的位置上时，R2和R3可以一起形成下式的二价基团 -O-CH2-O-(a-1)， -O-CH2-CH2-O-(a-2)， -O-CH＝CH-(a-3)， -O-CH2-CH2-(a-4)， -O-CH2-CH2-CH2-(a-5)，或 -CH＝CH-CH＝CH-(a-6)； R4和R5各自独立地为氢、Ar1、C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、羟基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基或C1-6烷基S(O)2C1-6烷基； R6和R7各自独立地为氢、卤代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或Ar2氧基； R8为氢、C1-6烷基、氰基、羟基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、羟基羰基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、氨基羰基C1-6烷基、Ar1、Ar2C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷硫基C1-6烷基； R10为氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤代； R11为氢或C1-6烷基； Ar1为苯基或被C1-6烷基、羟基、氨基、C1-6烷氧基或卤代取代的苯基； Ar2为苯基或被C1-6烷基、羟基、氨基、C1-6烷氧基或卤代取代的苯基。
WO-98/40383和美国专利6,187,786披露了式(VII)的法尼基转移酶抑制化合物及其可药用酸加成盐和立体化学异构形式的制备、制剂和药学性质，所述文献被全文并入本文。

其中 虚线表示任选的键； X为氧或硫； -A-为下式的二价基团 -CH＝CH- (a-1)，-CH2-S- (a-6)， -CH2-CH2- (a-2)，-CH2-CH2-S- (a-7)， -CH2-CH2-CH2- (a-3)，-CH＝N- (a-8)， -CH2-O- (a-4)，-N＝N- (a-9)，或 -CH2-CH2-O- (a-5)，-CO-NH- (a-10)； 其中任选地，一个氢原子可被C1-4烷基或Ar1代替； R1和R2各自独立地为氢、羟基、卤代、氰基、C1-6烷基、三卤代甲基、三卤代甲氧基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、羟基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基羰基、氨基C1-6烷氧基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基、Ar2、Ar2-C1-6烷基、Ar2-氧基、Ar2-C1-6烷氧基；或当在相邻的位置上时，R1和R2可以一起形成下式的二价基团 -O-CH2-O-(b-1)， -O-CH2-CH2-O-(b-2)， -O-CH＝CH-(b-3)， -O-CH2-CH2-(b-4)， -O-CH2-CH2-CH2-(b-5)，或 -CH＝CH-CH＝CH-(b-6)； R3和R4各自独立地为氢、卤代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、Ar3-氧基、C1-6烷硫基、二(C1-6烷基)氨基、三卤代甲基、三卤代甲氧基，或当在相邻的位置上时，R3和R4可以一起形成下式的二价基团 -O-CH2-O-(c-1)， -O-CH2-CH2-O-(c-2)，或 -CH＝CH-CH＝CH-(c-3)； R5为下式的基团
其中R13为氢、卤代、Ar4、C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基或C1-6烷基S(O)2C1-6烷基； R14为氢、C1-6烷基或二(C1-4烷基)氨基磺酰基； R6为氢、羟基、卤代、C1-6烷基、氰基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷硫基C1-6烷基、氨基羰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、C1-6烷基羰基-C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、Ar5、Ar5-C1-6烷氧基C1-6烷基；或下式的基团 -O-R7(e-1)， -S-R7(e-2)， -N-R8R9(e-3)， 其中R7为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar6、Ar6-C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、或下式的基团-Alk-OR10或-Alk-NR11R12； R8为氢、C1-6烷基、Ar7或Ar7-C1-6烷基； R9为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基氨基羰基、Ar8、Ar8-C1-6烷基、C1-6烷基羰基-C1-6烷基、Ar8-羰基、Ar8-C1-6烷基羰基、氨基羰基羰基、C1-6烷氧基C1-6烷基羰基、羟基、C1-6烷氧基、氨基羰基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基羰基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基羰基氨基、或下式的基团-Alk-OR10或-Alk-NR11R12； 其中Alk为C1-6烷二基； R10为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、羟基C1-6烷基、Ar9或Ar9-C1-6烷基； R11为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar10或Ar10-C1-6烷基； R12为氢、C1-6烷基、Ar11或Ar11-C1-6烷基；和 Ar1到Ar11各自独立地选自苯基；或被卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基取代的苯基。
WO-98/49157和美国专利6,117,432涉及式(VIII)的法尼基转移酶抑制化合物及其可药用酸加成盐和立体化学异构形式的制备、制剂和药学性质，所述文献被全文并入本文。

其中 虚线表示任选的键； X为氧或硫； R1和R2各自独立地为氢、羟基、卤代、氰基、C1-6烷基、三卤代甲基、三卤代甲氧基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、羟基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基羰基、氨基C1-6烷氧基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基、Ar1、Ar1C1-6烷基、Ar1氧基或Ar1C1-6烷氧基； R3和R4各自独立地为氢、卤代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、Ar1氧基、C1-6烷硫基、二(C1-6烷基)氨基、三卤代甲基或三卤代甲氧基； R5为氢、卤代、C1-6烷基、氰基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷硫基C1-6烷基、氨基羰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、C1-6烷基羰基-C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、Ar1、Ar1C1-6烷氧基C1-6烷基；或下式的基团 -O-R10(a-1)， -S-R10(a-2)， -N-R11R12(a-3)， 其中R10为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar1、Ar1C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、或下式的基团-Alk-OR13或-Alk-NR14R15； R11为氢、C1-6烷基、Ar1或Ar1C1-6烷基； R12为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基氨基羰基、Ar1、Ar1C1-6烷基、C1-6烷基羰基-C1-6烷基、Ar1羰基、Ar1C1-6烷基羰基、氨基羰基羰基、C1-6烷氧基C1-6烷基羰基、羟基、C1-6烷氧基、氨基羰基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基羰基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基羰基氨基、或下式的基团-Alk-OR13或-Alk-NR14R15； 其中Alk为C1-6烷二基； R13为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、羟基C1-6烷基、Ar1或Ar1C1-6烷基； R14为氢、C1-6烷基、Ar1或Ar1C1-6烷基； R15为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar1或Ar1C1-6烷基； R6为下式的基团
其中R16为氢、卤代、Ar1、C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷硫基C1-6烷基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基或C1-6烷基S(O)2C1-6烷基； R17为氢、C1-6烷基或二(C1-4烷基)氨基磺酰基； R7为氢或C1-6烷基，条件是虚线不表示键； R8为氢、C1-6烷基或Ar2CH2或Het1CH2； R9为氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤代；或 R8和R9一起形成下式的二价基团 -CH＝CH-(c-1)， -CH2-CH2-(c-2)， -CH2-CH2-CH2-(c-3)， -CH2-O-(c-4)，或 -CH2-CH2-O-(c-5)； Ar1为苯基；或被各自独立地选自以下的1或2个取代基取代的苯基卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基； Ar2为苯基；或被各自独立地选自以下的1或2个取代基取代的苯基卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基；和 Het1为吡啶基；被各自独立地选自以下的1或2个取代基取代的吡啶基卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基。
WO-00/39082和美国专利6,458,800描述式(IX)的法尼基转移酶抑制化合物或其可药用酸加成盐和立体化学异构形式的制备、制剂和药学性质，所述文献被全文并入本文。

其中 ＝X1-X2-X3-为下式的三价基团 ＝N-CR6＝CR7- (x-1)， ＝CR6-CR7＝CR8- (x-6)， ＝N-N＝CR6-(x-2)， ＝CR6-N＝CR7-(x-7)， ＝N-NH-C(＝O)- (x-3)， ＝CR6-NH-C(＝O)- (x-8)，或 ＝N-N＝N- (x-4)， ＝CR6-N＝N- (x-9)； ＝N-CR6＝N-(x-5)， 其中每个R6、R7和R8独立地为氢、C1-4烷基、羟基、C1-4烷氧基、芳基氧基、C1-4烷氧基羰基、羟基C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、单(C1-4烷基)氨基C1-4烷基或二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、氰基、氨基、硫代(thio)、C1-4烷硫基、芳硫基或芳基； ＞Y1-Y2-为下式的三价基团 ＞CH-CHR9-(y-1)， ＞C＝N-(y-2)， ＞CH-NR9-(y-3)，或 ＞C＝CR9-(y-4)； 其中每个R9独立地为氢、卤代、卤代羰基、氨基羰基、羟基C1-4烷基、氰基、羧基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4烷氧基羰基、单(C1-4烷基)氨基或二(C1-4烷基)氨基、单(C1-4烷基)氨基C1-4烷基或二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、芳基； r和s各自独立地为0、1、2、3、4或5； t为0、1、2或3； 每个R1和R2独立地为羟基、卤代、氰基、C1-6烷基、三卤代甲基、三卤代甲氧基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、羟基C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基羰基、氨基C1-6烷氧基、单-或二(C1-6烷基)氨基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基、芳基、芳基C1-6烷基、芳基氧基或芳基C1-6烷氧基、羟基羰基、C1-6烷氧基羰基、氨基羰基、氨基C1-6烷基、单(C1-6烷基)氨基羰基或二(C1-6烷基)氨基羰基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；或 苯基环上彼此相邻的两个R1或R2取代基可独立地形成下式的二价基团 -O-CH2-O-(a-1)， -O-CH2-CH2-O-(a-2)， -O＝CH＝CH-(a-3)， -O-CH2-CH2-(a-4)， -O-CH2-CH2-CH2-(a-5)，或 -CH＝CH-CH＝CH-(a-6)； R3为氢、卤代、C1-6烷基、氰基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷硫基C1-6烷基、氨基羰基C1-6烷基、羟基羰基、羟基羰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、芳基、芳基C1-6烷氧基C1-6烷基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基； 或下式的基团 -O-R10(b-1)， -S-R10(b-2)， -NR11R12(b-3)， 其中R10为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、芳基、芳基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、或下式的基团-Alk-OR13或-Alk-NR14R15； R11为氢、C1-6烷基、芳基或芳基C1-6烷基； R12为氢、C1-6烷基、芳基、羟基、氨基、C1-6烷氧基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、芳基C1-6烷基、C1-6烷基羰基氨基、单(C1-6烷基)氨基或二(C1-6烷基)氨基、C1-6烷基羰基、氨基羰基、芳基羰基、卤代C1-6烷基羰基、芳基C1-6烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷氧基C1-6烷基羰基、单(C1-6烷基)氨基羰基或二(C1-6烷基)氨基羰基，其中烷基部分可任选地被一个或多个独立选自以下的取代基取代芳基或C1-3烷氧基羰基、氨基羰基羰基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷基羰基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基羰基、或下式的基团-A1k-OR13或-Alk-NR14R15； 其中Alk为C1-6烷二基； R13为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、羟基C1-6烷基、芳基或芳基C1-6烷基； R14为氢、C1-6烷基、芳基或芳基C1-6烷基； R15为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、芳基或芳基C1-6烷基； R4为下式的基团
其中R16为氢、卤代、芳基、C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、单(C1-4烷基)氨基或二(C1-4烷基)氨基、羟基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷硫基C1-6烷基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基或C1-6烷基S(O)2C1-6烷基； R16也可结合于式(c-1)或(c-2)的咪唑环中的一个氮原子，在上述情况下，当结合于氮时，R16限于氢、芳基、C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基或C1-6烷基S(O)2C1-6烷基； R17为氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、芳基C1-6烷基、三氟甲基或二(C1-4烷基)氨基磺酰基； R5为C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤代； 芳基为苯基、萘基或被1或多个各自独立地选自卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基的取代基取代的苯基。
除了上述式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的法尼基转移酶抑制剂之外，本领域中已知的其它法尼基转移酶抑制剂包括阿拉宾(Arglabin)(即，在WO-98/28303(NuOncology Labs)中描述的1(R)-10-环氧基-5(S)，7(S)-愈创木-3(4)，11(13)-二烯-6，12-内酯；在WO-99/45912(Wisconsin Genetics)中描述的perrilyl醇；SCH-66336，即在美国专利5874442(Schering)中描述的(+)-(R)-4-[2-[4-(3，10-二溴-8-氯-5，6-二氢-11H-苯并[5，6]环庚烷并[1，2-b]吡啶-11-基)哌啶-1-基]-2-氧代乙基]哌啶-1-甲酰胺；L778123，即，在WO-00/01691(Merck)中描述的1-(3-氯苯基)-4-[1-(4-氰基苄基)-5-咪唑基甲基]-2-哌嗪酮；在WO-94/10138(Merck)中描述的化合物2(S)-[2(S)-[2(R)-氨基-3-巯基]丙基氨基-3(S)-甲基]-戊基氧基-3-苯基丙酰基-甲硫氨酸砜；和BMS214662，即，在WO97/30992(Bristol Myers Squibb)中描述的(R)-2，3，4，5-四氢-1-(IH-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-甲腈；和在WO-00/12498和WO-00/12499中描述的Pfizer化合物(A)和(B)
本领域中已知的FLT3激酶抑制剂包括AG1295和AG1296；来他替尼(Lestaurtinib)(又名CEP701，原名KT-5555，Kyowa Hakko，许可给Cephalon)；CEP-5214和CEP-7055(Cephalon)；CHIR-258(ChironCorp.)；EB-10和IMC-EB10(ImClone Systems Inc.)；GTP14564(MerkBiosciences UK)；米哚妥林(Midostaurin)(又名PKC 412 Novartis AG)；MLN608(Millennium USA)；MLN-518(原名CT53518，COR TherapeuticsInc.，许可给Millennium Pharmaceuticals Inc.)；MLN-608(MillenniumPharmaceuticals Inc.)；SU-11248(Pfizer USA)；SU-11657(Pfizer USA)；SU-5416和SU5614；THRX-165724(Theravance Inc.)；AMI-10706(Theravance Inc.)；VX-528和VX-680(Vertex PharmaceuticalsUSA，许可给Novartis(Switzerland)，Merck&Co USA)；和XL999(Exelixis USA)。
还参见Levis，M.，K.F.Tse等人(2001)″A FLT3 tyrosine kinaseinhibitor is selectively cytotoxic to acute myeloid leukemia blasts harboringFLT3 internal tandem duplication mutations.″Blood 98(3)885-7；Tse KF等人(2001)Inhibition of FLT3-mediated transformation by use of a tyrosinekinase inhibitor.Leukemia.Jul；15(7)1001-10；Smith，B.Douglas等人，Single-agent CEP-701，a novel FLT3inhibitor，shows biologic andclinical activity in patients with relapsed or refractory acute myeloidleukemia Blood，May 2004；1033669-3676；Griswold，Ian J.等人，Effects of MLN518，A Dual FLT3 and KIT Inhibitor，on Normal andMalignant Hematopoiesis.Blood，Jul 2004；[Epub ahead of print]；Yee，Kevin W.H.等人，SU5416和SU5614 inhibit kinase activity of wild-typeand mutant FLT3 receptor tyrosine kinase.Blood，2002年9月；1002941-294；O′Farrell，Anne-Marie等人，SU11248 is a novel FLT3tyrosinekinase inhibitor with potent activity in vitro and in vivo.Blood，May 2003；1013597-3605；Stone，R.M.等人，PKC 412FLT3 inhibitortherapy in AMLresults of a phase II trial.Ann Hematol.2004；83 Suppl 1S89-90；和Murata，K.等人，Selective cytotoxic mechanism ofGTP-14564，a novel tyrosine kinase inhibitor in leukemia cell expressing aconstitutively active Fms-like tyrosine kinase 3(FLT3).J Biol Chem.2003 Aug 29；278(35)32892-8；Levis，Mark等人，Novel FLT3 tyrosinekinase inhibitors.Expert Opin.Investing.Drugs(2003)12(12)1951-1962；Levis，Mark等人，Small Molecule FLT3 Tyrosine kinase inhibitors.Current Pharmaceutical Design，2004，10，1183-1193。


发明内容
本发明包括一种抑制细胞或受试者中FLT3酪氨酸激酶活性或表达、或降低FLT3激酶活性或表达的方法，包括给予FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂。本发明包括预防学和治疗学方法，用于治疗处于形成细胞增殖性病症或FLT3相关病症危险下(或对形成所述病症敏感)的受试者，该方法一般地包括对该受试者给予预防有效量的FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂。FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂可以作为包括FLT3激酶抑制剂、法尼基转移酶抑制剂和可药用载体的单一的药物组合物给予，或者作为单独的药物组合物给予(1)第一药物组合物，包括FLT3激酶抑制剂和可药用载体，和(2)第二药物组合物，包括法尼基转移酶抑制剂和可药用载体。本发明另外包括用于治疗或抑制受试者中细胞增殖性病症或FLT3相关病症的发病的多组份治疗，包括对受试者给予治疗或预防有效量的FLT3激酶抑制剂、法尼基转移酶抑制剂、和一种或多种其它抗细胞增殖性治疗，包括化学治疗、放射治疗、基因治疗和免疫治疗。
可以参考附图从随后的详细说明显而易见本发明其它的实施方式、特点、优点和方面。



图1.口服给予本发明的化合物对裸鼠中的MV4-11肿瘤异种移植物生长的影响。
图2.口服给予本发明的化合物对裸鼠中的MV4-11肿瘤异种移植物的最终重量的影响。
图3.在从用本发明化合物处理的小鼠获得的MV4-11肿瘤中的FLT3磷酸化。
图4图4被刻意省略了。
图5.用于抑制FLT3-依赖性增殖的试验化合物。
图6.1-6.8.单个药物对FLT3依赖性AML细胞增殖的剂量应答。
图7a-c.在FLT3依赖性细胞中低剂量的FLT3抑制剂显著改变替比法尼的效力。
图8a-d.FLT3抑制剂化合物(A)和替比法尼或阿糖胞苷的单剂量组合协同抑制FLT3-依赖性细胞系生长。
图9a-b.FLT3抑制剂化合物B和D与替比法尼或阿糖胞苷的单剂量组合协同抑制MV4-11细胞生长。
图10.1.通过Chou-Talalay法测量的，FLT3抑制剂化合物A和替比法尼协同抑制FLT3依赖性细胞的增殖。
图10.2.通过Chou-Talalay法测量的，FLT3抑制剂化合物B和替比法尼协同抑制FLT3依赖性细胞的增殖。
图10.3.通过Chou-Talalay法测量的，FLT3抑制剂化合物C和替比法尼协同抑制FLT3依赖性细胞的增殖。
图10.4.通过Chou-Talalay法测量的，FLT3抑制剂化合物D和替比法尼协同抑制FLT3依赖性细胞的增殖。
图10.5.通过Chou-Talalay法测量的，FLT3抑制剂化合物H和替比法尼协同抑制MV4-11细胞的增殖。
图10.6.通过Chou-Talalay法测量的，FLT3抑制剂化合物E和Zarnestra协同抑制MV4-11细胞的增殖。
图10.7.通过Chou-Talalay法测量的，FLT3抑制剂化合物F和替比法尼协同抑制FLT3依赖性MV4-11细胞的增殖。
图10.8.通过Chou-Talalay法测量的，FLT3抑制剂化合物G和替比法尼协同地抑制FLT3依赖性MV4-11细胞的增殖。
图11a-c.FLT3抑制剂与FTI的组合协同诱导MV4-11细胞的细胞程序死亡。
图12a-d.单一药物诱导半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3/7活化和FLT3依赖性MV4-11细胞的细胞程序死亡的剂量应答。
图13.1.通过Chou-Talalay法测量的，FLT3抑制剂化合物B和替比法尼在FLT3依赖性MV4-11细胞中协同诱导半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7的活化。
图13.2.通过Chou-Talalay法测量的，FLT3抑制剂化合物C和替比法尼在FLT3依赖性MV4-11细胞中协同诱导半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7的活化。
图13.3.通过Chou-Talalay法测量的，FLT3抑制剂化合物D和替比法尼在FLT3依赖性MV4-11细胞中协同诱导半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7的活化。
图14.在MV4-11细胞中，替比法尼增加FLT3抑制剂化合物A抑制FLT3和Map激酶磷酸化的效力。
图15.单独或组合口服给予FLT3抑制剂化合物B和替比法尼在裸鼠中的MV-4-11肿瘤异种移植物生长中随时间对肿瘤体积的影响。
图16.单独或组合口服给予FLT3抑制剂化合物B和替比法尼在裸鼠中的MV-4-11肿瘤异种移植物的生长中对肿瘤体积的影响(研究的最后一天)。
图17.单独或组合口服给予FLT3抑制剂化合物B和替比法尼在裸鼠中的MV-4-11肿瘤异种移植物的生长中对肿瘤重量的影响(研究的最后一天)。
图18.口服给予本发明的FLT3抑制剂化合物D对裸鼠中的MV4-11肿瘤异种移植物的生长的影响。
图19.口服给予本发明的FLT3抑制剂化合物D对裸鼠中的MV4-11肿瘤异种移植物的最终重量的影响。
图20.口服给予本发明的FLT3抑制剂化合物D对小鼠体重的影响。
图21.在从用本发明的FLT3抑制剂化合物D处理的小鼠获得的MV4-11肿瘤中的FLT3磷酸化。
图22.单独和组合口服给予FLT3抑制剂化合物D和替比法尼在裸鼠中的MV-4-11肿瘤异种移植物生长中随时间对肿瘤体积的影响。
图23.单独或组合口服给予FLT3抑制剂化合物D和替比法尼在裸鼠中的MV-4-11肿瘤异种移植物生长中对肿瘤体积的影响。
图24.单独或组合口服给予FLT3抑制剂化合物D和替比法尼对裸鼠中的MV-4-11肿瘤异种移植物的最终重量的影响。
发明的详细说明和优选实施方案 术语“包括”、“包含”、和“含有”用在本文中表示其开放的、非限制性的意义。
本发明包括一种抑制细胞或受试者中FLT3酪氨酸激酶活性或表达、或降低细胞或受试者中FLT3激酶活性或表达的方法，包括给予FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂。
本发明的实施方案包括一种降低或抑制受试者中FLT3酪氨酸激酶活性的方法，包括对该受试者给予FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂。
本发明的实施方案包括一种治疗受试者中与FLT3酪氨酸激酶活性或表达相关的病症的方法，包括对该受试者给予FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂。
本发明的实施方案包括一种降低或抑制细胞中FLT3酪氨酸激酶活性的方法，包括使该细胞与FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂接触的步骤。
本发明还提供降低一种或抑制受试者中FLT3酪氨酸激酶表达的方法，包括对该受试者给予FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂的步骤。
本发明另外提供一种抑制细胞中细胞增殖的方法，包括使该细胞与FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂接触的步骤。
细胞或受试者中的FLT3激酶活性可以通过本领域中公知的方法测定，例如本文中所述的FLT3激酶试验。
如本文中使用的，术语“受试者”是指已经成为治疗、观察或实验对象的动物，优选哺乳动物，最优选人。
如本文中使用的，术语“接触”是指向细胞加入化合物，使得化合物被细胞吸收。
在这个方面的其它实施方案中，本发明提供预防和治疗学方法，用于治疗处于形成细胞增殖性病症或FLT3相关病症危险下(或对形成所述病症敏感)的受试者。
在一个实施例中，本发明提供预防受试者中细胞增殖性病症或FLT3相关病症的方法，包括对受试者给予预防有效量的(1)第一药物组合物，包括FLT3激酶抑制剂和可药用载体，和(2)第二药物组合物，包括法尼基转移酶抑制剂和可药用载体。
在一个实施例中，本发明提供预防受试者中细胞增殖性病症或FLT3相关病症的方法，包括对该受试者给予预防有效量的药物组合物，该药物组合物包括FLT3激酶抑制剂、法尼基转移酶抑制剂和可药用载体。
所述预防剂的给予可以在表现出细胞增殖性病症或FLT3相关病症的症状特征之前进行，使得疾病或病症得到预防，或者做为选择，延迟疾病或病症的进展。
在另一个实施例中，本发明涉及治疗受试者中细胞增殖性病症或FLT3相关病症的方法，包括对受试者给予治疗有效量的(1)第一药物组合物，包括FLT3激酶抑制剂和可药用载体，和(2)第二药物组合物，包括法尼基转移酶抑制剂和可药用载体。
在另一个实施例中，本发明涉及治疗受试者中细胞增殖性病症或FLT3相关病症的方法，包括对该受试者给予预防有效量的药物组合物，该药物组合物包括FLT3激酶抑制剂、法尼基转移酶抑制剂和可药用载体。
所述治疗剂的给予可以与表现出该病症的症状特征同时进行，使得所述治疗剂起到用于校正细胞增殖性病症或FLT3相关病症的治疗的作用。
FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂可以作为包括FLT3激酶抑制剂、法尼基转移酶抑制剂和可药用载体的单一药物组合物给予，或者作为单独的药物组合物给予(1)第一药物组合物，包括FLT3激酶抑制剂和可药用载体，和(2)第二药物组合物，包括法尼基转移酶抑制剂和可药用载体。在后一种情况中，两种药物组合物可以同时给予(尽管以单独的组合物的形式)、顺序地给予(在大约相同的时间给予，或根据单独的给药程序给予)。根据单独的给药程序，两种组合物在足够保证实现有利或协同的效应的时间段内并且以足够保证实现有利或协同效应的量和方式给予。
应该理解，优选的给予方法和顺序以及组合的每种组份的各自剂量和方案根据要给予的药物、它们的给药途径、要治疗的特定的肿瘤和要治疗的特定的受体而定。
如本领域普通技术人员所理解的，最佳给予方法和顺序、以及FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂的剂量和方案可以由本领域技术人员使用常规方法并且考虑本文中提供的信息容易地确定。
一般地，FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂的剂量和方案将与已用于其中将这些药物单独、或与其它化疗疗法组合给予的临床治疗的那些相似或更小。
术语“预防有效量”是指由研究人员、兽医、内科医生、或其它临床医师所探求的在受试者中抑制或延迟病症发作的活性化合物或药物的量。
术语“治疗有效量”是指由研究人员、兽医、内科医生或其它临床医师所探求的在受试者中引起生物学或医学反应的活性化合物或药物的量，所述反应包括减轻所治疗的疾病或病症的症状。
测定本发明的药物组合物的治疗和预防有效剂量的方法是本领域中已知的。
如本文中使用的，术语“组合物”意在包括包含特定量的特定组分的产物，以及由特定量的特定组分的组合直接或间接得到的任何产物。
如本文中使用的，术语“FLT3相关病症”、或“与FLT3受体有关的病症”、或“与FLT3受体酪氨酸激酶相关的病症”包括与FLT3活性相关或涉及FLT3活性(例如FLT3的过分活动)的疾病、和伴随有这些疾病的状况。术语“FLT3的过分活动”是指下述之一，1)在通常不表达FLT3的细胞中的FLT3表达；2)由通常不表达FLT3的细胞进行的FLT3表达；3)引起不需要的细胞增殖的增加的FLT3表达；或4)引起FLT3结构性活化的突变。“FLT3相关病症”的例子包括由于FLT3的量异常高或FLT3突变引起FLT3过度刺激而产生的病症、或由于FLT3的量异常高或FLT3突变引起FLT3活性异常高而产生的病症。已知FLT3的过分活动在许多疾病的发病机理，包括下列的细胞增殖性病症、肿瘤病症和癌症中被牵涉。
术语“细胞增殖性病症”是指对多细胞机体产生损害(即，不适或缩短预期寿命)的在多细胞机体中一种或多种细胞亚型的有害的细胞增殖。细胞增殖性病症可以在不同类型的动物和人中出现。例如，如本文中使用的，“细胞增殖性病症”包括肿瘤病症和其它细胞增殖性病症。
如本文中使用的，“肿瘤病症”是指由异常或不受控制的细胞生长产生的肿瘤。肿瘤病症的例子包括但不限于造血功能障碍，诸如例如，骨髓增生异常，例如血小板增多、原发性血小板增多(ET)、特发性骨髓外化生、骨髓纤维化(MF)、伴骨髓外化生的骨髓纤维化(MMM)、慢性特发性骨髓纤维化(IMF)、真性红细胞增多(PV)、血细胞减少症和恶化前脊髓发育不良综合征；癌症，例如神经胶质瘤癌、肺癌、乳癌、结肠直肠癌、前列腺癌、胃癌、食道癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌，和血液学恶性肿瘤，包括脊髓发育不良、多发性骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。血液学恶性肿瘤的例子包括，例如白血病、淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、霍奇金病(也称为霍奇金淋巴瘤)、和骨髓瘤——例如，急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性粒细胞白血病(AML)、急性早幼粒细胞白血病(APL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞白血病(CML)、慢性嗜中性粒细胞白血病(CNL)、急性未分化细胞白血病(AUL)、退行发育性大细胞性淋巴瘤(ALCL)、幼淋巴细胞白血病(PML)、幼年型粒-单核细胞白血病(JMML)、成人T细胞ALL、伴有三谱系脊髓发育不良AML(AML/TMDS)、混合型谱系白血病(MLL)、脊髓发育不良综合征(MDS)、骨髓增生异常(MPD)、和多发性骨髓瘤(MM)。
在这个方面的另一个实施方案中，本发明包括用于治疗或抑制受试者中细胞增殖性病症或FLT3相关病症的发病的多组份治疗，包括对受试者给予治疗或预防有效量的FLT3激酶抑制剂、法尼基转移酶抑制剂、和一种或多种其它抗细胞增殖性治疗，包括化学治疗、放射治疗、基因治疗和免疫治疗。
如本文中使用的，“化学治疗”是指涉及化疗剂的治疗。各种化疗剂可用于本文中公开的多组份治疗方法。被考虑作为示例性的化疗剂包括但不限于铂化合物(如顺铂，卡铂，奥沙利铂)；紫杉烷化合物(如，紫杉醇、多西他赛)；喜树碱化合物(伊立替康、拓扑替康)；长春花生物碱(如，长春新碱、长春碱、长春瑞滨)；抗肿瘤核苷衍生物(如，5-氟尿嘧啶、亚叶酸、吉西他滨、卡培他滨)；烷化剂(如，环磷酰胺、卡莫司汀、洛莫司汀、塞替派)；表鬼臼毒素/鬼臼毒素(如依托泊苷、替尼泊苷)；芳香化酶抑制剂(如，阿那曲唑、来曲唑、依西美坦)；抗雌激素化合物(如，他莫昔芬、氟维司群)、抗叶酸剂(如，培美曲塞(pemetrexed)二钠)；低甲基化药物(如，阿扎胞苷)；生物制剂(如，吉姆单抗、西妥昔单抗、利妥西单抗、帕妥珠单抗(pertuzumab)、曲妥珠单抗、贝伐单抗、埃罗替尼)；抗生素/蒽环类(如伊达比星、放线菌素D、博来霉素、柔红霉素、多柔比星、丝裂霉素C、放线菌素D、洋红霉素、道诺霉素)；抗代谢物(如，氨基碟呤、氯法拉宾、阿糖胞苷、甲氨蝶呤)；微管蛋白粘合剂(如考布他汀、秋水仙碱、诺考达唑)；拓扑异构酶抑制剂(如，喜树碱)。另外有用的药物包括维拉帕米，一种钙拮抗剂，被认为可用于与抗肿瘤剂组合以在对所接受的化疗剂耐受的肿瘤细胞中建立化学敏感性和加强这种化合物在药物敏感性恶性肿瘤中的效力。参见SimpsonWG，The calcium channel blocker verapamil and cancer chemotherapy.Cell Calcium.1985Dec；6(6)449-67。另外，仍有化疗剂被考虑可用于与本发明的化合物组合。
在本发明的另一个实施方案中，FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂可与放射治疗组合给予。如本文中使用的，“放射治疗”是指包括使有需要的受试者暴露于辐射下的治疗。这种治疗是本领域技术人员已知的。放射治疗的适当模式与已用于其中单独使用放射治疗或将放射治疗与其它化疗药物组合的临床治疗的那些模式相似。
在本发明的另一个实施方案中，FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂可与基因治疗组合给予。如本文中使用的，“基因治疗”是指靶向肿瘤发展所涉及的特定基因的治疗。可能的基因治疗策略包括恢复缺陷型癌症抑制基因、用与编码生长因子及其受体的基因对应的反义DNA进行细胞转导或转染、基于RNA的策略例如核酶、RNA诱饵、反义信使RNA和小干扰性RNA(siRNA)分子和所谓的“自杀基因”。
在本发明的其它实施方案中，FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂可与免疫治疗组合给予。如本文中使用的，“免疫治疗”是指通过对肿瘤发展所涉及的特定蛋白质为特异性的抗体而靶向这种蛋白质的治疗。例如，针对血管内皮细胞生长因子的单克隆抗体已经被用于治疗癌症。
在将一种或多种另外的化疗剂与FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂结合应用时，另外的化疗剂、FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂可同时给予(如以单独的或单一的组合物形式)、以任何顺序、在大约相同的时间、或根据单独的给药方案连续给予。在后一种情况中，药物在足够保证实现有利和协同效应的时间段内并且以足够保证实现有利和协同效应的量和方式给予。应该理解，优选的给予方法和给予顺序及另外的化疗剂各自的剂量和方案根据要与FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂结合给予的特定的化疗剂、它们的给药途径、所要治疗的特定的肿瘤、和所要治疗的特定的受体而定。如本领域普通技术人员理解的，另外的化疗剂的适当剂量一般类似于或小于已经用于其中将化疗药物单独给予或与其它化疗药物组合给予的临床治疗的那些剂量。
最佳的给药方法和顺序及剂量和给药方案可由本领域技术人员使用常规方法并且考虑本文中所述的信息容易地确定。
只作为示例，铂化合物有利地以每平方米体表面积1到500mg(mg/m2)的剂量给予，例如50到400mg/m2，具体地，顺铂为约75mg/m2剂量，卡铂为约300mg/m2剂量每疗程。顺铂口服不能吸收，因此必须通过静脉内、皮下、肿瘤内或腹膜内注射递送。
只作为示例，紫杉烷化合物有利地以每平方米体表面积50到400mg(mg/m2)的剂量给予，例如75到250mg/m2，具体地，紫杉醇为约175到250mg/m2剂量，多西他赛为约75到150mg/m2每疗程。
只作为示例，喜树碱化合物有利地以每平方米体表面积0.1到400mg(mg/m2)的剂量给予，例如1到300mg/m2，具体地，伊立替康为约100到350mg/m2剂量，拓扑替康为约1到2mg/m2每疗程。
只作为示例，长春花生物碱可有利地以每平方米体表面积2到30mg(mg/m2)的剂量给予，具体地，长春碱为约3到12mg/m2，长春新碱为约1到2mg/m2剂量，长春瑞滨为约10到30mg/m2剂量每疗程。
只作为示例，抗肿瘤核苷衍生物可有利地以每平方米体表面积200到2500mg(mg/m2)的剂量给予，例如，700到1500mg/m2。5-氟尿嘧啶(5-FU)通常以200到500mg/m2(优选3到15mg/kg/天)的剂量通过静脉内给予。吉西他滨有利地以约800到1200mg/m2的剂量给予，卡培他滨有利地以约1000到2500mg/m2每疗程给予。
只作为示例，烷化剂可有利地以每平方米体表面积100到500mg(mg/m2)的剂量给予，例如，120到200mg/m2，具体地，环磷酰胺的剂量为约100到500mg/m2，苯丁酸氮芥的剂量为约0.1到0.2mg/kg体重，卡莫司汀的剂量为约150到200mg/m2，和洛莫司汀的剂量为约100到150mg/m2每疗程。
只作为示例，鬼臼毒素衍生物可有利地以每平方米体表面积30到300mg(mg/m2)的剂量给予，例如50到250mg/m2，具体地，依托泊苷的剂量为约35到100mg/m2，替尼泊苷为约50到250mg/m2每疗程。
只作为示例，蒽环类衍生物可有利地以每平方米体表面积10到75mg(mg/m2)的剂量给予，例如15到60mg/m2，具体地，多柔比星的剂量为约40到75mg/m2，柔红霉素的剂量为约25到45mg/m2，伊达比星的剂量为约10到15mg/m2每疗程。
只作为示例，抗雌激素化合物可有利地以每日约1到100mg的剂量给予，根据特定的药物和要治疗的状况而定。他莫昔芬有利地以5到50mg的剂量口服给予，优选10到20mg每天两次，持续治疗到充分的时间以实现和维持治疗效果。托瑞米芬有利地以一天一次约60mg的剂量口服给予，持续治疗到充分的时间以实现和维持治疗效果。阿那曲唑有利地以一天一次约1mg的剂量口服给予。屈洛昔芬有利地以约20-100mg一天一次口服给予。雷洛昔芬有利地以一天一次约60mg的剂量口服给予。依西美坦有利地以一天一次约25mg的剂量口服给予。
只作为示例，生物制剂可有利地以约每平方米体表面积约1到5mg(mg/m2)的剂量给予，或者如果不同，如本领域中已知的。例如，曲妥珠单抗有利地以1到5mg/m2的剂量给予，具体地，为2到4mg/m2每疗程。
剂量可每疗程给予例如一次、两次或多次，其可按例如每7、14、21或28天重复。
FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂可以系统地对受试者给予，例如静脉内、口服、皮下、肌内、皮内、或非胃肠给予。FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂也可局部给予受试者。局部递送系统的非限制性例子包括使用腔内医疗装置，包括血管内给药导管、金属丝、药理学支架和腔内铺面(endoluminal paving)。FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂还可与靶向剂组合给予受试者，以实现FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂在目标区域的高局部浓度。另外，FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂可配制用于快速释放或缓慢释放，以维持药物或药剂与靶组织接触几小时到几周的时间。
包括与可药用载体结合的FLT3激酶抑制剂、和与可药用载体结合的法尼基转移酶抑制剂的单独的药物组合物可包含约0.1mg到1000mg，优选约100到500mg的单独药物化合物，并且可构成为适合于所选给药方式的任何形式。
包括与可药用载体结合的FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂的单一药物组合物可包含约0.1mg到1000mg，优选约100到500mg的化合物，并且可构成为适合于所选给药方式的任何形式。
短语“可药用”是指在对动物、或对人适当地给予时，不会产生不利的、过敏的或其它不良反应的分子实体和组合物。兽医学用途同样地包括在本发明之内，并且“可药用”制剂包括用于临床和/或兽医用途的制剂。
载体包括必要的和惰性的药物赋形剂，包括但不限于粘合剂、助悬剂、润滑剂、调味剂、甜味剂、防腐剂、染料、和包衣。适合于口服给予的组合物包括固体形式，例如丸剂、片剂、扁囊剂、胶囊(分别包括立即释放、定时释放和持续释放制剂)、颗粒剂、和粉末剂，和液体形式，例如溶液剂、糖浆剂、酏剂、乳剂、和悬浮剂。用于非胃肠给予的形式包括无菌溶液剂、乳剂和悬浮剂。
本发明的药物组合物，无论是单一的还是单独的，可配制用于FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂的缓慢释放。这种组合物，无论是单一组合物还是单独组合物，包括缓释载体(通常为聚合物载体)和FLT3激酶抑制剂及法尼基转移酶抑制剂中的一种，或在单一组合物的情况中包括缓释载体(通常为聚合物载体)和FLT3激酶抑制剂及法尼基转移酶抑制剂两者。
缓释的生物可降解载体为本领域中公知的。这些是可以形成在其中俘获活性化合物的粒子并且在适当的环境(如，水性、酸性、碱性环境等)中缓慢降解/溶解并且从而在体液中降解/溶解和释放活性化合物的那些材料。粒子优选是纳米粒子(即，直径为约1到500nm，优选直径为约50-200nm，最优选直径为约100nm)。
法尼基转移酶抑制剂 可用于本发明的方法或治疗中的法尼基转移酶抑制剂的例子包括上述式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的法尼基转移酶抑制剂(“FTI”)。
优选的FTI包括式(I)、(II)或(III)的化合物

及其可药用酸或碱加成盐和立体化学异构形式，其中 虚线表示任选的键； X为氧或硫； R1为氢、C1-12烷基、Ar1、Ar2C1-6烷基、喹啉基C1-6烷基、吡啶基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、 或下式的基团-Alk1-C(＝O)-R9、-Alk1-S(O)-R9或-Alk1-S(O)2-R9， 其中Alk1为C1-6烷二基， R9为羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、C1-8烷基氨基或被C1-6烷氧基羰基取代的C1-8烷基氨基； R2、R3和R16各自独立地为氢、羟基、卤代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、氨基C1-6烷氧基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基、Ar1、Ar2C1-6烷基、Ar2氧基、Ar2C1-6烷氧基、羟基羰基、C1-6烷氧基羰基、三卤代甲基、三卤代甲氧基、C2-6烯基、4，4-二甲基唑基；或 当在相邻的位置上时，R2和R3可以一起形成下式的二价基团 -O-CH2-O-(a-1)， -O-CH2-CH2-O-(a-2)， -O-CH＝CH-(a-3)， -O-CH2-CH2-(a-4)， -O-CH2-CH2-CH2-(a-5)，或 -CH＝CH-CH＝CH-(a-6)； R4和R5各自独立地为氢、卤代、Ar1、C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、羟基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基或C1-6烷基S(O)2C1-6烷基； R6和R7各自独立地为氢、卤代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、Ar2氧基、三卤代甲基、C1-6烷硫基、二(C1-6烷基)氨基，或 当在相邻的位置上时，R6和R7可以一起形成下式的二价基团 -O-CH2-O-(c-1)，或 -CH＝CH-CH＝CH-(c-2)； R8为氢、C1-6烷基、氰基、羟基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、羧基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、咪唑基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、氨基羰基C1-6烷基、或下式的基团 -O-R10(b-1)， -S-R10(b-2)， -N-R11R12(b-3)， 其中R10为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar1、Ar2C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、或下式的基团-Alk2-OR13或-Alk2-NR14R15； R11为氢、C1-12烷基、Ar1或Ar2C1-6烷基； R12为氢、C1-6烷基、C1-16烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基氨基羰基、Ar1、Ar2C1-6烷基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、天然氨基酸、Ar1羰基、Ar2C1-6烷基羰基、氨基羰基羰基、C1-6烷氧基C1-6烷基羰基、羟基、C1-6烷氧基、氨基羰基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基羰基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基羰基氨基、或下式的基团-Alk2-OR13或-Alk2-NR14R15； 其中Alk2为C1-6烷二基； R13为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、羟基C1-6烷基、Ar1或Ar2C1-6烷基； R14为氢、C1-6烷基、Ar1或Ar2C1-6烷基； R15为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar1或Ar2C1-6烷基； R17为氢、卤代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、Ar1； R18为氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤代； R19为氢或C1-6烷基； Ar1为苯基或被C1-6烷基、羟基、氨基、C1-6烷氧基或卤代取代的苯基；和 Ar2为苯基或被C1-6烷基、羟基、氨基、C1-6烷氧基或卤代取代的苯基。
在式(I)、(II)和(III)中，R4或R5也可结合于咪唑环中的一个氮原子。在这种情况下氮上的氢被R4或R5代替，并且当结合于氮时，R4和R5的含义限于氢、Ar1、C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基、C1-6烷基S(O)2C1-6烷基。
优选地，式(I)、(II)和(III)中的取代基R18位于喹啉酮部分的5或7位，并且当R18在7-位上时，取代基R19位于8位。
FTI的优选例子为其中X为氧的那些式(I)的化合物。
另外，优选的FTI的例子为其中虚线表示键以形成双键的那些式(I)的化合物。
优选的FTI的另一个组为如下那些式(I)的化合物其中R1为氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、或下式的基团-Alk1-C(＝O)-R9，其中Alk1为亚甲基和R9为被C1-6烷氧基羰基取代的C1-8烷基氨基。
优选的FTI的又一个组为如下那些式(I)的化合物其中R3为氢或卤代；和R2为卤代、C1-6烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、三卤代甲氧基或羟基C1-6烷氧基。
优选的FTI的另一个组为如下那些式(I)的化合物其中R2和R3处于相邻的位置并且一起形成式(a-1)、(a-2)或(a-3)的二价基团。
优选的FTI的又一个组为如下那些式(I)的化合物其中R5为氢和R4为氢或C1-6烷基。
优选的FTI的又一个组为如下那些式(I)的化合物其中R7为氢；和R6为C1-6烷基或卤代，优选为氯，特别是4-氯。
优选的FTI的另一个示例性组为如下那些式(I)的化合物其中R8为氢、羟基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、咪唑基、或下式的基团-NR11R12，其中R11为氢或C1-12烷基和R12为氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基、C1-6烷氧基C1-6烷基羰基、或下式的基团-Alk2-OR13，其中R13为氢或C1-6烷基。
优选的化合物还包括如下那些式(I)的化合物其中R1为氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、或下式的基团-Alk1-C(＝O)-R9，其中Alk1为亚甲基和R9为被C1-6烷氧基羰基取代的C1-8烷基氨基；R2为卤代、C1-6烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、三卤代甲氧基、羟基C1-6烷氧基或Ar1；R3为氢；R4为结合于咪唑3位氮的甲基；R5为氢；R6为氯；R7为氢；R8为氢、羟基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、咪唑基、或下式的基团-NR11R12，其中R11为氢或C1-12烷基和R12为氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷基羰基、或下式的基团-Alk2-OR13，其中R13为C1-6烷基；R17为氢和R18为氢。
特别优选的FTI为 4-(3-氯苯基)-6-[(4-氯苯基)羟基(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-1-甲基-2(1H)-喹啉酮； 6-[氨基(4-氯苯基)-1-甲基-1H-咪唑-5-基甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮； 6-[(4-氯苯基)羟基(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-乙氧基苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮； 6-[(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-乙氧基苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮一盐酸盐一水合物； 6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-乙氧基苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮； 6-氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-1-甲基-4-(3-丙基苯基)-2(1H)-喹啉酮；其立体异构形式或可药用酸或碱加成盐；和 (+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮(替比法尼；WO97/21701的表1中的化合物75)；及其可药用酸加成盐和立体化学异构形式。
替比法尼或ZARNESTRA为特别优选的FTI。
另外优选的FTI包括适用以下一条或多条的式(IX)的化合物 ·＝X1-X2-X3为下式的三价基团(x-1)、(x-2)、(x-3)、(x-4)或(x-9)，其中每个R6独立地为氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基羰基、氨基或芳基和R7为氢； ·＞Y1-Y2-为下式的三价基团(y-1)、(y-2)、(y-3)、或(y-4)，其中每个R9独立地为氢、卤代、羧基、C1-4烷基或C1-4烷氧基羰基； ·r为0、1或2； ·s为0或1； ·t为0； ·R1为卤代、C1-6烷基或苯环上彼此邻位的两个R1取代基可独立地一起形成式(a-1)的二价基团； ·R2为卤代； ·R3为卤代或式(b-1)或(b-3)的基团，其中 R10为氢或下式的基团-Alk-OR13； R11为氢； R12为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、羟基、C1-6烷氧基或单(C1-6烷基)氨基C1-6烷基羰基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基羰基； Alk为C1-6烷二基和R13为氢； ·R4为下式的基团(c-1)或(c-2)，其中 R16为氢、卤代或单(C1-4烷基)氨基或二(C1-4烷基)氨基； R17为氢或C1-6烷基； ·芳基为苯基。
另一个优选的FTI组为如下的式(IX)的化合物其中＝X1-X2-X3为式(x-1)、(x-2)、(x-3)、(x-4)或(x-9)的三价基团，＞Y1-Y2为式(y-2)、(y-3)或(y-4)的三价基团，r为0或1，s为1，t为0，R1为卤代、C(1-4)烷基或形成式(a-1)的二价基团，R2为卤代或C1-4烷基，R3为氢或式(b-1)或(b-3)的基团，R4为式(c-1)或(c-2)的基团，R6为氢、C1-4烷基或苯基，R7为氢，R9为氢或C1-4烷基，R10为氢或-Alk-OR13，R11为氢和R12为氢或C1-6烷基羰基和R13为氢； 优选的FTI为如下那些式(Ix)的化合物其中＝X1-X2-X3为下式的三价基团(x-1)或(x-4)，＞Y1-Y2为下式的三价基团(y-4)，r为0或1，s为1，t为0，R1为卤代、优选为氯和最优选为3-氯，R2为卤代、优选为4-氯或4-氟，R3为氢或式(b-1)或(b-3)的基团，R4为式(c-1)或(c-2)的基团，R6为氢，R7为氢，R9为氢，R10为氢，R11为氢和R12为氢。
其它优选的FTI为如下那些式(IX)的化合物其中＝X1-X2-X3为式(x-2)、(x-3)或(x-4)的三价基团，＞Y1-Y2为式(y-2)、(y-3)或(y-4)的三价基团，r和s为1，t为0，R1为卤代、优选为氯、和最优选3-氯或R1为C1-4烷基、优选为3-甲基，R2为卤代、优选为氯、和最优选4-氯，R3为式(b-1)或(b-3)的基团，R4为式(c-2)的基团，R6为C1-4烷基，R9为氢，R10和R11为氢和R12为氢或羟基。
特别优选的式(IX)的FTI化合物为 7-[(4-氟苯基)(1H-咪唑-1-基)甲基]-5-苯基咪唑并[1，2-a]喹啉； α-(4-氯苯基)-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)-5-苯基咪唑并[1，2-a]喹啉-7-甲醇； 5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)-咪唑并[1，2-a]喹啉-7-甲醇； 5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)咪唑并[1，2-a]喹啉-7-甲胺； 5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)四唑并[1，5-a]喹啉-7-甲胺； 5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-1-甲基-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)-1，2，4-三唑并[4，3-a]喹啉-7-甲醇； 5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)四唑并[1，5-a]喹啉-7-甲胺； 5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)四唑并[1，5-a]喹唑啉-7-甲醇； 5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-4，5-二氢-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)四唑并[1，5-a]喹唑啉-7-甲醇； 5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)四唑并[1，5-a]喹唑啉-7-甲胺； 5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-N-羟基-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)四氢[1，5-a]喹啉-7-甲胺；和 α-(4-氯苯基)-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)-5-(3-甲基苯基)四唑并[1，5-a]喹啉-7-甲胺；及其可药用酸加成盐和立体化学异构形式。
5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)四唑并[1，5-a]喹唑啉-7-甲胺，特别是(-)对映体，及其可药用酸加成盐是特别优选的FTI。
本文中前述的可药用酸或碱加成盐意在包括式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的FTI化合物能够形成的治疗活性的无毒的酸加成盐和无毒的碱加成盐形式。具有碱性性质的式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的FTI化合物可以通过用适当的酸处理其碱的形式转化为其可药用酸加成盐。适当的酸包括例如无机酸，例如氢卤酸，如盐酸或氢溴酸；硫酸；硝酸；磷酸等；或有机酸，例如乙酸、丙酸、羟基乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环己烷氨基磺酸、水杨酸、对氨基水杨酸、双羟萘酸等。
具有酸性性质的式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的FTI化合物可以通过用适当的有机或无机碱处理其酸的形式而转化为它们的可药用碱加成盐。适当的碱盐形式包括例如铵盐、碱金属和碱土金属盐，例如锂、钠、钾、镁、钙盐等，与有机碱的盐，例如N，N’-二苄基乙二胺(benzathine)、N-甲基-D-葡糖胺、哈胺(hydrabamine)盐，和与氨基酸的盐，例如精氨酸、赖氨酸等。
酸和碱加成盐也包括优选的式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的FTI化合物能够形成的水合物和溶剂加成形式。这种形式的例子为例如水合物、醇化物等。
如本文中前述使用的，式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的FTI化合物包括所述结构式的所有立体化学异构形式(由通过相同键顺序结合的相同原子组成但是具有不同的不可互换的三维结构的所有可能的化合物)。除非另外提及或指出，FTI化合物的化学命名应该理解为包括该化合物可能拥有的所有可能的立体化学异构形式的混合物。这种混合物可包含该化合物的基本分子结构的全部非对映体和/或对映体。式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的FTI化合物的全部立体化学异构形式，既包括纯形式，又包括彼此的混合形式，都被包括在所述结构式的范围内。
某些式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的FTI化合物也可以其互变异构形式存在。这种形式，虽然没有明确地表示在上述式中，但是也意在被包括在其范围内。
因此，除非在下文中另外指出，术语“式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的化合物”和“式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的法尼基转移酶抑制剂”也意在包括可药用酸或碱加成盐和全部的立体异构和互变异构形式。
可用于本发明的其它法尼基转移酶抑制剂包括如上所述的阿拉宾、perrilyl醇、SCH-66336、2(S)-[2(S)-[2(R)-氨基-3-巯基]丙基氨基-3(S)-甲基]-戊基氧基-3-苯基丙酰基-甲硫氨酸砜(Merck)；L778123、BMS214662、Pfizer化合物A和B。对于化合物阿拉宾(WO98/28303)、perrilyl醇(WO99/45712)、SCH-66336(US5,874,442)、L778123(WO00/01691)、2(S)-[2(S)-[2(R)-氨基-3-巯基]丙基氨基-3(S)-甲基]-戊基氧基-3-苯基丙酰基-甲硫氨酸砜(WO94/10138)、BMS214662(WO97/30992)、Pfizer化合物A和B(WO00/12499和WO00/12498)的适当剂量或治疗有效量在公布的专利说明书中给出或者是本领域技术人员已知或可以容易地确定的。
FLT3激酶抑制剂 本发明的FLT3激酶抑制剂包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可药用盐、溶剂化物、几何异构体和立体化学异构体， 其中 q为0、1或2； p为0或1； Q为NH、N(烷基)、O、或直接键 Z为NH、N(烷基)、或CH2； B为苯基、杂芳基(其中所述杂芳基优选为吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡喃基、噻喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吡啶基-N-氧化物、或吡咯基-N氧化物，并且最优选吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡啶基、嘧啶基、或吡嗪基)、或9-10元的苯并稠合杂芳基(其中所述9-10元的苯并稠合杂芳基优选为苯并噻唑基、苯并唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、或苯并[b]噻吩基)； R1为
其中n为1、2、3或4； Ra为氢、烷氧基、苯氧基、苯基、任选地被R5取代的杂芳基(其中所述杂芳基优选为吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡喃基、噻喃基、吡啶基、嘧啶基、三唑基、吡嗪基、吡啶基-N-氧化物、或吡咯基-N-氧化物，并且最优选吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡啶基、嘧啶基、三唑基、或吡嗪基)、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选地被R5取代的唑烷酮基、任选地被R5取代的吡咯烷酮基、任选地被R5取代的哌啶酮基、任选地被R5取代的环状杂二酮基、任选地被R5取代的杂环基(其中所述杂环基优选为吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、咪唑烷基、噻唑烷基、唑烷基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、硫代吗啉基、硫代吗啉基-1，1-二氧化物、哌啶基、吗啉基、或哌嗪基)、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)COR)y、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx； R5为一个、两个或三个独立地选自以下的取代基卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基； Rw和Rx独立地选自氢、烷基、烯基、芳烷基(其中所述芳烷基的芳基部分优选为苯基)、或杂芳烷基(其中所述杂芳烷基的杂芳基部分优选为吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡喃基、噻喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吡啶基-N-氧化物、或吡咯基-N-氧化物，并且最优选吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡啶基、嘧啶基、或吡嗪基)，或Rw和Rx可任选地结合在一起形成5-7元环，所述环任选地包含选自以下的杂部分(heteromoiety)O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S，优选选自
Ry选自氢、烷基、烯基、环烷基(其中所述环烷基优选为环戊基或环己基)、苯基、芳烷基(其中所述芳烷基的芳基部分优选为苯基)、杂芳烷基(其中所述杂芳烷基的杂芳基部分优选为吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡喃基、噻喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吡啶基-N-氧化物、或吡咯基-N-氧化物，并且最优选吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡啶基、嘧啶基、或吡嗪基)、或杂芳基(其中所述杂芳基优选为吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡喃基、噻喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吡啶基-N-氧化物、或吡咯基-N-氧化物，并且最优选吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡啶基、嘧啶基、或吡嗪基)；和 R3为一个或多个独立选自以下的取代基氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、硫代(thio)、硝基、任选地被R4取代的环烷基(其中所述环烷基优选为环戊基或环己基)、任选地被R4取代的杂芳基(其中所述杂芳基优选为吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡喃基、噻喃基、吡啶基、嘧啶基、三唑基、吡嗪基、吡啶基-N-氧化物、或吡咯基-N-氧化物；并且最优选吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡啶基、嘧啶基、三唑基、或吡嗪基)、烷基氨基、任选地被R4取代的杂环基(其中所述杂环基优选为四氢吡啶基四氢吡嗪基、二氢呋喃基、二氢嗪基、二氢吡咯基、二氢咪唑基、氮杂环庚烯基(azepenyl)、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、咪唑烷基、噻唑烷基、唑烷基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、吗啉基、或哌嗪基)、-O(环烷基)、任选地被R4取代的吡咯烷酮基、任选地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、卤代烷基、任选地被R4取代的杂芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基(thioalkyl)、或-SO2烷基；其中R4独立地选自卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
如本文中随后使用的，术语“式I′的化合物”还意在包括其N-氧化物、可药用盐、溶剂化物、和立体化学异构体。
式I′的FLT3抑制剂-缩写和定义 如涉及式I′的FLT3抑制剂所用的，以下术语意在具有以下含义 ATP 三磷酸腺苷 Boc 叔-丁氧基羰基 DCM 二氯甲烷 DMF 二甲基甲酰胺 DMSO 二甲基亚砜 DIEA 二异丙基乙基胺 DTT 二硫苏糖醇 EDC 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐 EDTA 乙二胺四乙酸 EtOAc 乙酸乙酯 FBS 胎牛血清 FP荧光偏振 GM-CSF粒细胞和巨噬细胞集落刺激因子 HBTU O-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐 Hex 己烷 HOBT 1-羟基苯并三唑水合物 HPβCD羟基丙基β-环糊精 HRP 辣根过氧化物酶 i-PrOH异丙醇 LC/MS(ESI)液相色谱/质谱(电喷射离子化) MeOH 甲醇 NMM N-甲基吗啉 NMR 核磁共振 PS聚苯乙烯 PBS 磷酸盐缓冲盐水 RPMI Rosewell Park MemorialInstitute RT室温 RTK 受体酪氨酸激酶 NaHMDS六甲基二硅氮烷钠 SDS-PAGE 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 TEA 三乙胺 TFA 三氟乙酸 THF四氢呋喃 TLC薄层色谱法 (另外的缩写在说明书中在需要时提供。) 定义 如涉及式I’的FLT3抑制剂时使用的，以下术语意在具有以下含义(另外的定义在说明书中在需要时提供) 术语“烯基”，无论是单独使用还是作为取代基团的一部分，例如“C1-4烯基(芳基)”，是指具有至少一个碳碳双键的部分不饱和的支链或直链一价烃基，其中双键衍生自从母体烷基分子的两个相邻碳原子的每一个除去一个氢原子并且该基团衍生自从一个碳原子除去一个氢原子。各个原子相对于双键可定位为顺式(Z)或反式(E)构型。典型的烯基基团包括但不限于乙烯基、丙烯基、烯丙基(2-丙烯基)、丁烯基等。实例包括C2-8烯基或C2-4烯基。
术语“Ca-b”(其中a和b为表示碳原子的指定数目的整数)是指烷基、烯基、炔基、烷氧基或环烷基基团，或是指基团的烷基部分，在基团中烷基为含有包含端值的a到b个碳原子的前缀词根。例如，C1-4表示包含1、2、3或4个碳原子的基团。
术语“烷基”，无论是单独使用还是作为取代基的一部分，是指饱和的支链或直链一价烃基，其中该基团衍生自从一个碳原子去除一个氢原子。除非明确地指出(例如通过利用限制性术语例如“末端碳原子”)，取代基变量可位于任何碳链原子上。典型的烷基基团包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基等。实例包括C1-8烷基、C1-6烷基和C1-4烷基。
术语“烷基氨基”是指通过从烷基胺(例如丁胺)的氮上去除一个氢原子形成的基团，并且术语“二烷基氨基”是指通过从仲胺(例如二丁胺)的氮上去除一个氢原子形成的基团。在两种情况中，要求与分子的其余部分的连结点为氮原子。
术语“炔基”，无论是单独使用还是作为取代基的一部分，是指具有至少一个碳碳三键的部分不饱和的支链或直链一价烃基，其中三键衍生自从母体烷基分子的两个相邻碳原子中的每一个去除两个氢原子，并且该基团衍生自从一个碳原子去除一个氢原子。典型的炔基基团包括乙炔基、丙炔基、丁炔基等。实例包括C2-8炔基或C2-4炔基。
术语“烷氧基”是指通过从母体烷、烯或炔上的羟基氧(hydroxideoxygen)取代基去除氢原子衍生的饱和或部分不饱和的支链或直链一价烃基醇基团。在表示饱和的具体水平时，术语“烷氧基”、“烯基氧基”、和“炔基氧基”的使用和烷基、烯基和炔基的定义相一致。实例包括C1-8烷氧基或C1-4烷氧基。
术语“烷氧基醚”是指通过从羟基醚的羟基氧取代基上去除氢原子衍生的饱和的支链或直链单价烃基醇基团。实例包括1-羟基-2-甲氧基-乙烷和1-(2-羟基-乙氧基)-2-甲氧基-乙烷基团。
术语“芳烷基”是指包含芳基取代基的C1-6烷基。实例包括苄基、苯基乙基或2-萘基甲基。指定与分子其余部分的连结点为烷基。
术语“芳香的”是指具有不饱和的、共轭π电子系统的环烃环状系统。
术语“芳基”是指通过从环系统的一个碳原子去除一个氢原子衍生的芳香环烃环状基团。典型的芳基基团包括苯基、萘基、芴基、茚基、奥基、蒽基等。
术语“芳基氨基”是指被芳基(例如苯基)取代的氨基基团(例如氨)。要求与分子的其余部分的连结点为氮原子。
术语“芳基氧基”是指被芳基如苯基取代的氧原子基团。要求与分子的其余部分的连结点为氧原子。
术语“苯并稠合的环烷基”是指其中一个环为苯基和另一个为环烷基或环烯基环的二环稠环系统基团。典型的苯并稠合环烷基基团包括2，3-二氢化茚基、1，2，3，4-四氢-萘基、6，7，8，9，-四氢-5H-苯并环庚烯基、5，6，7，8，9，10-六氢-苯并环辛烯基等。苯并稠合的环烷基环状系统为芳基的子集。
术语“苯并稠合的杂芳基”是指其中一个环为苯基和另一个环为杂芳基环的二环稠环系统基团。典型的苯并稠合杂芳基基团包括吲哚基、二氢吲哚基、异氮茚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、吲唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、1，2-二氮杂萘基、2，3-二氮杂萘基、喹唑啉基等。苯并稠合的杂芳基环为杂芳基的子集。
术语“苯并稠合的杂环基”是指其中一个环为苯基和另一个环为杂环基的二环稠环系统基团。典型的苯并稠合的杂环基团包括1，3-苯并二氧杂环戊烯基(又名1，3-亚甲二氧基苯基)、2，3-二氢-1，4-苯并二氧杂环己烯基(又名1，4-亚乙基二氧基苯基)、苯并二氢呋喃基、苯并四氢吡喃基、苯并二氢-噻吩基等。
术语“羧基烷基”是指烷基化的羧基，例如叔丁氧基羰基，其中与分子的其余部分的连结点为羰基。
术语“环状杂二酮基(cyclic heterodionyl)”是指带有两个氧代取代基的杂环化合物。实例包括噻唑烷二酮基、唑烷二酮基、和吡咯烷二酮基。
术语“环烯基”是指通过从包含至少一个碳-碳双键的烃类环状系统去除一个氢原子衍生的部分不饱和的环烷基。实例包括环己烯基、环戊烯基和1，2，5，6-环辛二烯基。
术语“环烷基”是指通过从一个环碳原子去除一个氢原子衍生的饱和或部分不饱和的单环或二环烃环基。典型的环烷基基团包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基和环辛基。另外的实例包括C3-8环烷基、C5-8环烷基、C3-12环烷基、C3-20环烷基、十氢萘基、和2，3，4，5，6，7-六氢-1H-茚基。
术语“稠合的环状系统”是指其中有两个相邻的原子存在于两个环状部分的每一个中的双环分子。可任选地存在有杂原子。实例包括苯并噻唑、1，3-苯并二氧杂环戊烯和十氢化萘。
用作环状系统前缀的术语“杂”是指用一个或多个独立地选自N、S、O或P的原子代替至少一个环碳原子。实例包括其中1、2、3或4个环成员是氮原子的环，或者，0、1、2或3个环成员是氮原子和1个成员为氧或硫原子的环。
术语“杂芳烷基”是指包含杂芳基取代基的C1-6烷基。实例包括呋喃基甲基和吡啶基丙基。指定与分子其余部分的连结点为烷基。
术语“杂芳基”是指通过从杂芳环状系统的环碳原子去除一个氢原子衍生的基团。典型的杂芳基基团包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异唑基、异噻唑基、二唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、中氮茚基、吲哚基、异吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基，嘌呤基、4H-喹嗪基、喹啉基、异喹啉基、1，2-二氮杂萘基、酞嗪基(phthalzinyl)、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-二氮杂萘基、蝶啶基等。
术语“杂芳基稠合的环烷基”是指其中一个环为环烷基和另一个环为杂芳基的二环稠环系统基团。典型的杂芳基稠合环烷基基团包括5，6，7，8-四氢-4H-环庚烷并(b)噻吩基、5，6，7-三氢-4H-环己烷并(b)噻吩基、5，6-二氢-4H-环戊烷并(b)噻吩基等。
术语“杂环基”是指通过从单个碳或氮环原子去除一个氢原子衍生的饱和或部分不饱和的单环基团。典型的杂环基基团包括2H-吡咯、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吡咯烷基、1，3-二氧杂环戊烷基、2-咪唑啉基(也称为4，5-二氢-1H-咪唑基)、咪唑烷基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、四唑基、哌啶基、1，4-二氧杂环己烷基、吗啉基、1，4-二硫杂环己烷基、硫代吗啉基、硫代吗啉基-1，1-二氧化物、哌嗪基、氮杂环庚烷基、六氢-1，4-二氮杂基等。
术语“氧代”是指氧原子基团；所述氧原子具有两个与同一原子最优选碳原子结合的开放化学价。氧代基团是烷基的适当取代基。例如，具有氧代取代基的丙烷为丙酮或丙醛。杂环也可被氧代基团取代。例如，具有氧代取代基的唑烷为唑烷酮。
术语“取代的”是指核心分子的一个或多个氢原子已经被一个或多个官能基团部分代替。取代作用不限于核心分子，而是也可以在取代基上进行，从而该取代基变成连接基团。
术语“独立地选自”是指一个或多个取代基选自一组取代基，其中各个取代基可相同或不同。
用于披露式I’的FLT3抑制剂的取代基命名法是首先指出具有连结点的原子，随后是从左至右朝向末端链原子的连接基团原子，实质上如同以下 (C1-6)烷基C(O)NH(C1-6)烷基(Ph) 或者通过首先指出末端链原子，随后是朝向具有连结点的原子的连接基团原子，实质上如同以下 Ph(C1-6)烷基酰胺基(C1-6)烷基 两种情况都是指下式基团
另外，从取代基引入环状系统的线表示该键可连接于任一个适当的环原子。
当任何变量(例如R4)在式I’的FLT3抑制剂的任何实施方案中出现超过一次时，各自的定义是独立的。
式I’的FLT3抑制剂的实施方案 在式I’的FLT3抑制剂的实施方案中，在一个或多个N-1或N-3上任选地存在有N-氧化物(环编号参见以下图1a)。
图1a
图1a说明环原子编号1到6，作为在本说明书中使用。
式I’的FLT3抑制剂的优选实施方案是其中存在有一个或多个以下限制的式I’的化合物 q为0、1或2； p为0或1； Q为NH、N(烷基)、O、或直接键； Z为NH、N(烷基)、或CH2； B为苯基或杂芳基； R1为
其中n为1、2、3或4； Ra为氢、烷氧基、苯氧基、苯基、任选地被R5取代的杂芳基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选地被R5取代的唑烷酮基、任选地被R5取代的吡咯烷酮基、任选地被R5取代的哌啶酮基、任选地被R5取代的环状杂二酮基、任选地被R5取代的杂环基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx； R5为一个、两个或三个独立地选自以下的取代基卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基； Rw和Rx独立地选自氢、烷基、烯基、芳烷基、或杂芳烷基，或Rw和Rx可任选地结合在一起形成5-7元环，所述环任选地包含选自以下的杂部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S； Ry选自氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基、或杂芳基；和 R3为一个或多个独立选自以下的取代基氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、硫代(thio)、硝基、任选地被R4取代的环烷基、任选地被R4取代的杂芳基、烷基氨基、任选地被R4取代的杂环基、-O(环烷基)、任选地被R4取代的吡咯烷酮基、任选地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、卤代烷基、任选地被R4取代的杂芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基(thioalkyl)、或-SO2烷基；其中R4独立地选自卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
式I’的FLT3抑制剂的其它优选实施方案是其中存在有一个或多个以下限制的式I’的化合物 q为1或2； p为0或1； Q为NH、N(烷基)、O、或直接键； Z为NH、N(烷基)、或CH2； B为苯基或杂芳基； R1为
其中n为1、2、3或4； Ra为氢、烷氧基、苯氧基、苯基、任选地被R5取代的杂芳基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选地被R5取代的唑烷酮基、任选地被R5取代的吡咯烷酮基、任选地被R5取代的哌啶酮基、任选地被R5取代的环状杂二酮基、任选地被R5取代的杂环基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx； R5为一个、两个或三个独立地选自以下的取代基卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基； Rw和Rx独立地选自氢、烷基、烯基、芳烷基、或杂芳烷基，或Rw和Rx可任选地结合在一起形成5-7元环，所述环任选地包含选自以下的杂部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S； Ry选自氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基、或杂芳基；和 R3为一个或多个选自以下的取代基氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、任选地被R4取代的环烷基、任选地被R4取代的杂芳基、任选地被R4取代的杂环基、-O(环烷基)、任选地被R4取代的苯氧基、任选地被R4取代的杂芳基氧基、二烷基氨基、或-SO2烷基；其中R4独立地选自卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
式I’的FLT3抑制剂的其它优选实施方案是其中存在有一个或多个以下限制的式I’的化合物 q为1或2； p为0或1； Q为NH、N(烷基)、O、或直接键； Z为NH或CH2； B为苯基或杂芳基； R1为
其中n为1、2、3或4； Ra为氢、烷氧基、任选地被R5取代的杂芳基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选地被R5取代的唑烷酮基、任选地被R5取代的吡咯烷酮基、任选地被R5取代的杂环基、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、或-SO2NRwRx； R5为一个、两个或三个独立地选自以下取代基卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基； Rw和Rx独立地选自氢、烷基、烯基、芳烷基、或杂芳烷基，或Rw和Rx可任选地结合在一起形成5-7元环，所述环任选地包含选自以下的杂部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S； Ry选自氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基、或杂芳基；和 R3为一个或多个选自以下的取代基氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、任选地被R4取代的环烷基、任选地被R4取代的杂芳基、任选地被R4取代的杂环基、-O(环烷基)、任选地被R4取代的苯氧基、任选地被R4取代的杂芳基氧基、二烷基氨基、或-SO2烷基；其中R4独立地选自卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
式I’的FLT3抑制剂的特别优选的实施方案是其中存在有一个或多个以下限制的式I’的化合物 q为1或2； p为0或1； Q为NH、O、或直接键； Z为NH或CH2； B为苯基或杂芳基； R1为
其中n为1、2、3或4； Ra为氢、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、杂芳基、任选地被R5取代的杂环基、-CONRwRx、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、或-N(Ry)CON(Rw)(Rx)； R5为一个选自以下的取代基-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或-C(1-4)烷基-OH； Rw和Rx独立地选自氢、烷基、烯基、芳烷基、或杂芳烷基，或Rw和Rx可任选地结合在一起形成5-7元环，所述环任选地包含选自以下的杂部分O、NH、N(烷基)、SO、SO2、或S； Ry选自氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基、或杂芳基；和 R3为一个或两个独立地选自以下的取代基烷基、烷氧基、卤素、环烷基、杂环基、-O(环烷基)、苯氧基、或二烷基氨基。
式I’的FLT3抑制剂的最特别优选的实施方案是其中存在有一个或多个以下限制的式I’的化合物 q为1或2； p为0或1； Q为NH、O、或直接键； Z为NH或CH2； B为苯基或吡啶基； R1为
其中n为1、2、3或4； Ra为氢、羟基、氨基、二烷基氨基、任选地被R5取代的杂环基、-CONRwRx、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、或-NRwSO2Ry； R5为一个选自以下的取代基-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或-C(1-4)烷基-OH； Rw和Rx独立地选自氢、烷基、烯基、芳烷基、或杂芳烷基，或Rw和Rx可任选地结合在一起形成5-7元环，所述环任选地包含选自以下的杂部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S； Ry选自氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基、或杂芳基；和 R3为一个独立地选自以下的取代基烷基、烷氧基、-O(环烷基)、或苯氧基。
式I’的FLT3抑制剂也可作为可药用盐的形式存在。
为了用于药物，式I’的FLT3抑制剂化合物的盐是指无毒的“可药用盐”。FDA批准的可药用盐形式(参考International J.Pharm.1986，33，201-217；J.Pharm.Sci.，1977，Jan，66(1)，p1)包括可药用酸式/阴离子型或碱式/阳离子型的盐。
可药用酸式/阴离子型盐包括但不限于乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、酒石酸氢盐、溴化物、乙二胺四乙酸钙、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、柠檬酸盐、二盐酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、依托酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、glyceptate、葡糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酰基对氨苯基砷酸盐、己基间苯二酚盐、哈胺、氢溴化物、氢氯化物、羟基萘甲酸盐、碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、杏仁酸盐、甲磺酸盐、甲基溴化物、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、丹宁酸盐、酒石酸盐、异丙嗪荼氯酸盐(teoclate)、甲苯磺酸盐、和三乙基碘。有机或无机酸还包括但不限于氢碘酸、高氯酸、硫酸、磷酸、丙酸、乙醇酸、甲磺酸、羟基乙磺酸、草酸、2-萘磺酸、对甲苯磺酸、环己烷氨基磺酸、己糖酸或三氟乙酸。
可药用碱式/阳离子型盐包括但不限于铝、2-氨基-2-羟基甲基-丙烷-1，3-二醇(又名三(羟基甲基)氨基甲烷、氨基丁三醇(tromethane)或“TRIS”)、氨、N，N’-二苄基乙二胺(benzathine)、叔丁胺、钙、葡萄糖酸钙、氢氧化钙、氯普鲁卡因、胆碱、胆碱碳酸氢盐、氯化胆碱、环己胺、二乙醇胺、乙二胺、锂、LiOMe、L-赖氨酸、镁、葡甲胺、NH3、NH4OH、N-甲基-D-葡糖胺、哌啶、钾、叔丁醇钾、氢氧化钾(含水的)、普鲁卡因、奎宁、钠、碳酸钠、2-乙基己酸钠(SEH)、氢氧化钠、三乙醇胺(TEA)或锌。
本发明的FLT3抑制剂在其范围内包括式I’的化合物的前体药物。通常，这种前体药物为该化合物的功能衍生物，其可在体内容易地转化为活性物质。因此，在本发明的治疗方法中，术语“给予”包括用明确披露的式I’的FLT3抑制剂或其复合物或前体药物治疗、改善或预防本文中所述综合症、病症或疾病的含义，其明显地包括在本发明范围内，虽然某些本发明的复合物没有明确地披露。选择和制备适当的前体药物衍生物的常规方法在例如“Design of Prodrugs”，ed.H.Bundgaard，Elsevier，1985中描述。
本领域技术人员知道，式I’的FLT3抑制剂可在其结构中具有一个或多个不对称碳原子。本发明在其范围内意在包括式I’的FLT3抑制剂的单个对映体形式、外消旋混合物、和其中存在对映体过量的对映体混合物。
如本文中使用的术语“单个对映体”定义了式I化合物及其N-氧化物、加成盐、季铵类或生理学功能性衍生物可能具有的所有可能的纯手性形式。
立体化学纯的异构形式可通过应用已知技术原理得到。非对映异构体可通过物理分离方法分离，例如分步结晶和色谱技术，并且对映体可通过与光学活性的酸或碱形成的非对映体盐的选择结晶彼此分离，或者通过手性色谱法彼此分离。也可从适当的立体化学纯的原料、或通过使用立体选择性反应合成制备纯的立体异构体。
术语“异构体”是指具有相同组成和分子量但是物理和/或化学性质不同的化合物。这种物质具有相同的原子数和原子种类，但是在结构上不同。结构差异可以是构成方式(几何异构体)或者在使偏振光平面旋转的能力方面(对映体)不同。
术语“立体异构体”是指具有相同构造但是它们的原子空间排列不同的异构体。对映体和非对映体是立体异构体的实例。
术语“手性”是指分子的不能将其与其镜象重叠的结构特性。
术语“对映体”是指彼此为镜像但是不能重叠的一对分子之一。
术语“非对映体”是指彼此不是镜像的立体异构体。
符号“R”和“S”表示手性碳原子上取代基的构型。
术语“外消旋物”或“外消旋混合物”是指由等摩尔量的两种对映体组成的组合物，其中该组合物没有旋光性。
术语“纯手性的”是指对映体纯状态。
术语“旋光性”是指纯手性分子或手性分子的非外消旋混合物旋转偏振光平面的程度。
术语“几何异构体”是指取代基原子就与碳-碳双键、环烷基环或桥二环系统的关系而论定值不同的异构体。碳-碳双键的每个侧面上的取代基原子(非H)可为E或Z构型状态。在“E”(相对侧)构型中，取代基相对于碳-碳双键在相对侧；在“Z”(相同侧)构型中，取代基相对于碳-碳双键以相同侧定位。连接于碳环的取代基原子(非氢)可为顺式或反式构型。在“顺式”构型中，取代基相对于环的平面在相同侧；在“反式”构型中，取代基相对于环的平面在相对侧。具有“顺式”和“反式”物类混合物的化合物称为“顺/反”。
应该理解，用于制备本发明化合物的各种取代基立体异构体、几何异构体及其混合物或者是市售的、可以从市售原料合成制备的，或者可以制备为异构混合物、然后使用本领域技术人员公知的技术拆分异构体得到。
异构描述符“R”、“S”、“E”、“Z”、“顺式”、和“反式”在本文中用于描述相对于核心分子的原子构型，并且意在以在文献中的定义使用(IUPAC Recommendations for FundamentalStereochemistry(Section E)，Pure Appl.Chem.，1976，4513-30)。
式I’的FLT3抑制剂可通过异构体特异性合成或从异构混合物拆分制备为单独的异构体。常规的拆分技术包括使用光学活性的盐形成异构体对的每种异构体的游离碱(随后分步结晶和回收游离碱)、形成异构体对的每种异构体的酯或酰胺(随后色谱分离和去除手性辅助剂)或使用制备型TLC(薄层色谱法)或手性HPLC柱拆分原始材料或最终产物的异构混合物。
此外，式I’的FLT3抑制剂可具有一种或多种多晶形物或无定形的结晶形式，因此意在被包括在本发明范围内。另外，式I’的某些FLT3抑制剂可形成溶剂化物，例如与水(即，水合物)或常见的有机溶剂形成的溶剂化物。如本文中使用的，术语“溶剂化物”是指本发明的化合物与一种或多种溶剂分子的物理缔合。这种物理缔合包括不同程度的离子键合和共价键合，包括氢键。在某些情况中，溶剂化物能够分离，例如当一个或多个溶剂分子结合到结晶固体的晶格中时。术语“溶剂化物”意在包括溶液相和可分离的溶剂化物。适当的溶剂化物的非限制性实例包括乙醇化物、甲醇化物等。
本发明在其范围内意在包括本发明的式I’的FLT3抑制剂的溶剂化物。因此，在本发明的治疗方法中，术语“给予”包括用明确地披露的式I’的FLT3抑制剂或其复合物或溶剂化物治疗、改善或预防本文中所述综合症、病症或疾病的含义，其明显的包括在本发明范围内，虽然某些本发明的复合物没有明确地披露。
式I’的FLT3抑制剂可根据技术上已知的用于将三价氮转化为其N-氧化物形式的方法被转化为相应的N-氧化物形式。所述N-氧化反应通常可通过使式I’的原始材料与适当的有机或无机过氧化物反应而进行。适当的无机过氧化物包括例如过氧化氢、碱金属或碱土金属过氧化物，例如过氧化钠、过氧化钾；适当的有机过氧化物可包括过氧酸，诸如例如，过氧苯甲酸或卤素取代的过氧苯甲酸(例如3-氯过氧苯甲酸)、过氧链烷酸(例如过氧乙酸)、烷基过氧化氢(例如叔丁基过氧化氢)。适当的溶剂是例如水、低级醇(例如乙醇等)、烃类(例如甲苯)、酮类(例如2-丁酮)、卤代烃类(例如二氯甲烷)、以及这些溶剂的混合物。
某些式I’的FLT3抑制剂也可以它们的互变异构形式存在。这种形式虽然没有在本申请中明确地指出，但是意在被包括在本发明的范围内。
式I’的FLT3抑制剂的制备 在制备式I’的FLT3抑制剂的任何方法中，有必要和/或期望保护所涉及的任何分子上的敏感或活性基团。这可以通过常规的保护基实现，例如在Protecting Groups，P.Kocienski，Thieme Medical Publishers，2000；和T.W.Greene&P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，3rd ed.Wiley Interscience，1999中所述的那些。保护基可以使用本领域中已知的方法在随后的适当阶段被除去。
式I’的FLT3抑制剂可通过本领域技术人员已知的方法制备。以下反应图解只是意在表示本发明的实施例，而不意在以任何方式限制本发明。
一般反应图解
式I’的FLT3抑制剂化合物可通过本领域技术人员已知的方法制备。以下反应图解仅用于表示本发明的实施例，而不以任何方式限制本发明。
其中B、Z、Q、q、p、R1和R3的定义同式I’的式I’的FLT3抑制剂化合物可根据图解1中所述的一般合成路线制备。在Vilsmeier反应条件(DMF/POCl3)下处理嘧啶-4，6二酚II′可得到4，6-二氯-嘧啶-5-甲醛III′，用氨处理III′时可以得到关键中间体4-氨基-6-氯-嘧啶-5-甲醛IV’。用适当的环胺V’在溶剂例如DMSO中在25℃到150℃的温度下在碱如二异丙基乙胺的存在下处理氯代嘧啶IV’可得到嘧啶VI’。用适当的R1ONH2在溶剂如甲醇中处理VI’可以得到最终产物I’。尽管只用图表示出反式的式I’，但是可以预料在最终反应中既可以形成反式几何异构体也可以形成顺式几何异构体。异构体可通过柱色谱法分离并且通过相应的肟的次甲基氢Ha的1H NMR化学位移进行清楚的图谱解析(图1b)。观察到的主要的反式异构体的1H NMR图谱显示出，与顺式异构体的Ha次
“反式”异构体 “顺式”异构体 图1b 甲基氢的化学位移相比，反式异构体的Ha次甲基氢特征性的进一步低磁场化学位移。观察到的反式和顺式肟异构体的Ha氢的1H化学位移之间的差别与本领域已知的文献对应(Biorg.Med.Chem.Lett.2004，14，5827-5830)。
图解1
其中Q为O、NH或N(烷基)，Z为NH或N(烷基)以及B、q、p和R3的定义同式I’的环胺试剂V’可以根据图解2a中所述的反应顺序制备。被保护的胺VII’(其中PG是适当的胺保护基，如N-Boc)与适当的酰化试剂VIII’(其中LG可为对硝基苯氧基、氯基或咪唑)进行酰化可得到酰化的中间体IX’。在适当的脱保护基条件下除去氨基保护基(PG)可得到所需的胺V’。被保护的环胺VII’可为市售的或者得自已知方法(JOC，1961，26，1519；EP314362；US4822895；EP401623)。酰化试剂VIII’为市售的或者可如图解2a所示制备。用适当的酰化试剂如羰基二咪唑或氯甲酸对硝基苯基酯在碱如三乙胺的存在下处理适当的R3BZH(其中Z为NH或N(烷基))可得到VIII’。许多R3BZH试剂为市售的并且可根据许多已知方法制备(例如Tet Lett 1995，36，2411-2414)。可供选择的获得V’(其中Q为O、NH或N(烷基)，Z为CH2以及B、p、q和R3的定义同式I’)的方法如图解2b所示。使用标准的偶合试剂如1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)或1-羟基苯并三唑(HOBT)，使被保护的环胺VII’与适当的R3BCH2CO2H进行偶合，可以得到酰化的中间体IX’。在酸性条件下除去N-Boc保护基可以得到所需的胺V’。
图2a
R1ONH2试剂(其中R1的定义同式I’)为市售的或者可根据图解3a所示的反应顺序制备。苄叉X’与适当的亲电子试剂R1LG(其中LG可以是离去基团，如溴基和碘基)和碱如KOH在溶剂如DMSO中进行烷基化，可以得到苄叉中间体XI’，其在酸性条件如4N HCl下经过处理可以得到所需的R1ONH2试剂。制备R1ONH2试剂(其中n、R1和Ra的定义同式I)的有关方法如图解3b所示。苄叉X’与适当的亲电子试剂PGO(CH2)nLG(其中PG为已知的醇保护基，LG为离去基团如溴基或碘基)和碱如KOH在溶剂如DMSO中进行烷基化可得到O-烷基化的苄叉。在标准条件下除去本领域技术人员已知的醇保护基，将醇转化为本领域技术人员已知的适当的离去基团如甲磺酸酯，随后与适当的亲核性杂环、杂芳基、胺、醇、氨磺酰或硫醇进行SN2置换反应，然后通过酸介导的苄叉除去，可以得到R1ONH2试剂。如果Ra亲核试剂为硫醇，则硫醇的进一步氧化可以得到相应的亚砜和砜。如果Ra亲核试剂为氨基，则氮与适当的酰化试剂或磺化试剂的酰化可以得到相应的酰胺、氨基甲酸酯、脲和氨磺酰。如果所需的Ra为COORy或CONRwRx，则这些可得自相应的羟基。在本领域已知的条件下将羟基氧化成酸、然后形成酯或酰胺，可以得到其中Ra为COORy或CONRwRx的实施例。
图解3a
图解3b
其中 PG为保护基 LG为离去基团 Nuc为亲核试剂 或者，其中Q为O、NH、或N(烷基)且B、Z、q、p、R1和R3的定义同式I’的式I’的FLT3抑制剂化合物可根据图解4中所述的一般合成路线制备。用适当的环胺XII’在溶剂如乙腈中在碱如二异丙基乙胺的存在下处理4-氯嘧啶IV’可以得到嘧啶XIII’。用适当的R1ONH2在溶剂如MeOH中处理5-甲醛嘧啶XIII’可以得到中间体XIV’，当通过本领域已知的标准脱保护条件将该中间体XIV’随后脱去取代基Q上的保护基(PG)时可以得到嘧啶XV’。在碱如二异丙基乙胺存在下，XV’与适当的试剂VIII’(其中Z为NH或N(烷基)，LG可为氯基、咪唑或对硝基苯氧基)的酰化，或者，当Z为CH2时，使用标准偶合试剂如1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)或1-羟基苯并三唑(HOBT)通过与适当的R3BCH2CO2H进行偶合，可以得到最终产物I’。尽管只用图表示出反式的式I′，但是可以预料在反应顺序中既可以形成反式几何异构体又可以形成顺式几何异构体。所述异构体可以通过柱色谱法分离并且进行清楚的图谱解析。
图解4
或者，其中Z为NH，Q为O、NH或N(烷基)且B、q、p、R1和R3的定义同式I’的式I’的FLT3抑制剂化合物可根据图解5中所述的一般合成路线制备。用适当的环胺XII’在溶剂如乙腈中在碱如二异丙基乙胺的存在下处理4-氯嘧啶IV’可以得到嘧啶XIII’。用适当的R1ONH2在溶剂如MeOH中处理5-甲醛嘧啶XIII’可以得到中间体XIV’，当通过本领域已知的标准脱保护条件将该中间体XIV’随后脱去取代基Q上的保护基(PG)时可以得到嘧啶XV’。用适当的R3BNCO处理XV’可以得到最终产物I’。尽管只用图表示出反式的式I′，但是可以预料在反应顺序中既可以形成反式几何异构体又可以形成顺式几何异构体。所述异构体可以通过柱色谱法分离并且进行清楚的图谱解析。
图解5
其中Q为直接键，Z为NH或N(烷基)且B、q、p、R1和R3的定义同式I’的式I’的FLT3抑制剂化合物可根据图解6中所述的一般合成路线制备。用适当的环状氨基酯XVI’(其中PG为本领域已知的酯保护基)在溶剂如乙腈中在碱如二异丙基乙胺的存在下处理4-氯嘧啶IV’可以得到嘧啶XVII’。用适当的R1ONH2在溶剂如MeOH中处理5-醛嘧啶XVII’可以得到中间体XVIII’，当通过本领域已知的标准脱保护条件随后脱去保护基(PG)时可以得到嘧啶XIX’。使用本领域已知的标准偶合试剂如1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二咪唑盐酸盐使适当的试剂R3BZH与XIX’进行偶合可以得到最终产物I’。尽管只用图表示出反式的式I′，但是可以预料在反应顺序中既可以形成反式几何异构体又可以形成顺式几何异构体。所述异构体可以通过柱色谱法分离并且进行清楚的图谱解析。
图解6
典型的式I′的FLT3抑制剂 以下提供通过前述方法合成的典型的式I’的FLT3抑制剂。其后提供合成具体化合物的实例。优选化合物的编号为2、5、6、7、8、11、12、15、19、21、23，特别优选编号2、5、6、8和11者。







实施例1 (4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基酯
a.(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸哌啶-4-基酯
在0℃向在CH2Cl2(5mL)中的1，1’-羰基二咪唑(CDI，1.64g，10mmol)中添加在CH2Cl2(10mL)中的4-异丙氧基-苯基胺(1.52g，10mmol)。在室温搅拌1小时后，添加在CH2Cl2(5mL)中的4-羟基-哌啶-1-羧酸叔丁基酯(2.05g，10mmol)，混合物在室温保持搅拌过夜，其用水猝灭，用CH2Cl2提取，有机提取物用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并蒸发，将一部分用BOC-保护的产物(0.35g，0.93mmol)再次溶于CH2Cl2(5mL)。向该溶液中添加1mL的三氟乙酸，得到的混合物在室温搅拌1小时，真空除去有机溶剂，粗物质用2M在MeOH的NH3中和。在蒸发溶剂后，粗残余物通过硅胶急骤柱色谱法纯化(5％MeOH/CH2Cl2)，得到产物，为浅褐色固体(250mg，97％)。1H NMR(CDCl3)δ7.26(m，2H)，6.84(d，J＝8.70Hz，2H)，6.49(br，1H)，4.88(m，1H)，4.48(sep，J＝6.0Hz，1H)，3.12(m，2H)，2.83(m，2H)，2.04(m，2H)，1.71(m，2H)，1.31(d，J＝6.0Hz，6H)；LC/MS(ESI)C15H23N2O3(MH)+计算值279.2，实测值279.3。
b.4，6-二氯-嘧啶-5-甲醛
DMF(3.2mL)和POCl3(10mL)的混合物在0℃搅拌1小时，用4，6-二羟基嘧啶(2.5g，22.3mmol)处理，在环境温度搅拌0.5小时，非均相混合物加热回流3小时，减压除去挥发性物质。残余物被倾入到冰水中并用乙醚提取6次。有机相用NaHCO3水溶液洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩，得到黄色固体(3.7g，95％)。1H NMR(CDCl3)δ10.46(s，1H)，8.90(s，1H)。
c.4-氨基-6-氯-嘧啶-5-甲醛
将氨气鼓泡通过4，6-二氯-嘧啶-5-甲醛(1g，5.68mmol)的甲苯(100mL)溶液10分钟，该溶液在室温搅拌过夜。过滤除去黄色沉淀物，用EOAc洗涤，真空干燥，得到纯产物(880mg，99％)。1H NMR(DMSO-d6)δ10.23(s，1H)，8.72(br，1H)，8.54(br，1H)，8.38(s，1H)。
d.(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸1-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌啶-4-基酯
向4-氨基-6-氯-嘧啶-5-甲醛(60.6mg，0.39mmol)和(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸哌啶-4-基酯(102.3mg，0.37mmol)的DMSO(1mL)溶液中添加DIEA(118.9mg，0.92mmol)。混合物在100℃搅拌4小时，冷却到室温，用水稀释，其用EtOAc提取，有机提取物用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发，得到的黄色固体用EtOAc洗涤，得到产物，为白色固体(93.7mg，63.5％)。1H NMR(CDCl3)δ9.77(s，1H)，9.16(br，1H)，9.07(br，1H)，8.08(s，1H)，7.26(m，2H)，6.86(d，J＝8.82Hz，2H)，6.51(br，1H)，5.13(m，1H)，4.50(sep，J＝6.01Hz，1H)，4.10(m，2H)，3.96(m，2H)，2.08-2.15(m，2H)，1.93-1.99(m，2H)，1.32(d，J＝6.06Hz，6H)；LC/MS(ESI)C20H26N5O4(MH)+计算值400.2，实测值400.3。
e.(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基酯
向(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸1-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌啶-4-基酯(14mg，0.035mmol)的MeOH(1mL)溶液中添加MeONH2.HCl(8.8mg，0.11mmol)。混合物在100℃搅拌1小时，减压除去溶剂。粗物质的急骤色谱法(EtOAc作为洗脱液)提供标题化合物，为白色固体(13mg，86.7％)。1H NMR(CDCl3)δ8.16(s，1H)，8.05(s，1H)，7.25(m，2H)，7.24(br，2H)，6.84(d，J＝8.97Hz，2H)，6.48(br，1H)，5.01(m，1H)，4.49(sep，J＝6.05Hz，1H)，3.96(s，3H)，3.69(m，2H)，3.37(m，2H)，2.01-2.11(m，2H)，1.77-1.89(m，2H)，1.31(d，J＝6.06Hz，6H)；LC/MS(ESI)C21H29N6O4(MH)+，计算值429.2，实测值429.3。
实施例2 (4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸1-[6-氨基-5-(乙氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基酯
基本如实施例1e所述制备，不同之处在于使用乙氧基胺盐酸盐(9.2mg，95％)。1H NMR(CDCl3)δ8.18(br，1H)，8.07(s，1H)，721-7.29(m，4H)，6.85(d，J＝8.97Hz，2H)，6.49(br，1H)，5.01(m，1H)，4.49(sep，J＝6.04Hz，1H)，4.20(q，J＝7.06Hz，2H)，3.70(m，2H)，3.39(m，2H)，2.01-2.11(m，2H)，1.77-1.89(m，2H)，1.32(t，J＝6.98Hz，3H)，1.31(d，J＝5.82Hz，6H)；LC/MS(ESI)C22H31N6O4(MH)+计算值443.2，实测值443.3。
实施例3 (4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸1-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-乙氧基亚胺基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌啶-4-基酯
a.二苯基-甲酮O-(2-吗啉-4-基-乙基)-肟
在室温将N-(2-氯乙基)吗啉盐酸盐(2.10g，11mmol)分份添加到KOH粉末(1.24g，22mmol)和二苯甲酮肟(1.97g，10mmol)在DMSO(23mL)中的悬浮液中。反应混合物在室温保持搅拌3天，用水稀释，用乙醚提取。有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发，得到几乎是纯的产物。1H NMR(CDCl3)δ7.32-7.50(m，10H)，4.35(t，J＝5.59Hz，2H)，3.69(t，J＝4.52Hz，4H)，2.74(m，2H)，249(m，4H)；LC/MS(ESI)C19H23N2O2(MH)+计算值311.2，实测值311.2。
b.O-(2-吗啉-4-基-乙基)-羟基胺二盐酸盐
二苯基-甲酮O-(2-吗啉-4-基-乙基)-肟(2.5g，8.06mmol)在6N HCl(13.5mL)中的悬浮液在搅拌的同时加热回流，2小时后，混合物被冷却到室温，用EtOAc提取几次。水相真空蒸发至干，得到标题化合物(740mg，63％)。1H NMR(DMSO-d6)δ445(t，J＝4.49Hz，2H)，3.89(t，J＝4.48Hz，4H)，3.47(t，J＝4.64Hz，2H)，3.29(m，4H)；LC/MS(ESI)C6H15N2O2(MH)+计算值147.1，实测值147.1。
c.(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸1-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-乙氧基亚胺基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌啶-4-基酯
基本如实施例1e所述制备，不同之处在于使用O-(2-吗啉-4-基-乙基)-羟基胺盐酸盐(10.9mg，62.6％)。1H NMR(CD3OD)δ8.19(s，1H)，8.06(s，1H)，7.29(d，J＝8.36Hz，2H)，6.83(d，J＝9.02Hz，2H)，4.91(m，1H)，4.51(sep，J＝6.04Hz，1H)，4.40(t，J＝5.09Hz，2H)，3.77(t，J＝4.64Hz，4H)，3.70(t，J＝4.52Hz，2H)，3.63(m，2H)，3.35(m，2H)，2.99(m，2H)，2.81(m，4H)，2.05(m，2H)，1.81(m，2H)，1.27(d，J＝6.04Hz，6H)；LC/MS(ESI)C26H38N7O5(MH)+计算值528.3，实测值528.4。
实施例4 (4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸1-{6-氨基-5-[(3-二甲基氨基-丙氧基亚胺基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌啶-4-基酯
a.二苯基-甲酮O-(3-二甲基氨基-丙基)-肟
基本如实施例3a所述制备，不同之处在于使用(3-氯-丙基)-二甲基-胺代替N-(2-氯乙基)吗啉盐酸盐。1H NMR(CDCl3)δ7.31-7.50(m，10H)，4.22(t，J＝6.46Hz，2H)，2.33(t，J＝7.23Hz，2H)，2.21(s，6H)，1.88(m，2H)；LC/MS(ESI)C18H23N2O(MH)+计算值283.2，实测值283.2。
b.O-(3-二甲基氨基-丙基)-羟基胺二盐酸盐
基本如实施例3b所述制备，不同之处在于使用二苯基-甲酮O-(3-二甲基氨基-丙基)-肟代替二苯基-甲酮O-(2-吗啉-4-基-乙基)-肟。1HNMR(CD3OD)δ4.21(t，J＝5.90Hz，2H)，3.30(t，J＝7.11Hz，2H)，2.92(s，6H)，2.18(m，2H)；LC/MS(ESI)C5H15N2O(MH)+计算值119.1，实测值119.2。
c.(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸1-{6-氨基-5-[(3-二甲基氨基-丙氧基亚胺基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌啶-4-基酯
基本如实施例1e所述制备，不同之处在于使用O-(3-二甲基氨基-丙基)-羟基胺盐酸盐(2.0mg，14.4％)。1H NMR(CD3OD)δ8.19(s，1H)，8.07(s，1H)，7.29(d，J＝8.79Hz，2H)，6.82(d，J＝9.05Hz，2H)，4.94(m，1H)，4.51(sep，J＝6.02Hz，1H)，4.28(t，J＝5.84Hz，2H)，3.66(m，2H)，3.36(m，2H)，3.28(m，2H)，2.91(s，6H)，2.11-2.22(m，2H)，2.01-2.10(m，2H)，1.76-1.86(m，2H)，1.28(d，J＝6.04Hz，6H)；LC/MS(ESI)C25H38N7O4(MH)+计算值500.3，实测值500.4。
实施例5 (4-异丙基-苯基)-氨基甲酸1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基酯
a.(4-异丙基-苯基)-氨基甲酸哌啶-4-基酯
向1，1’-羰基二咪唑(304mg，1.88mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液中添加4-羟基-哌啶-1-羧酸叔丁基酯(350mg，1.74mmol)，在0℃搅拌30分钟后，添加4-异丙基苯胺(251mg，1.86mmol)，混合物在室温搅拌过夜。真空除去溶剂，得到粗固体，其用TFA(20mL)和CH2Cl2(20mL)处理并搅拌30分钟。减压除去溶剂，得到标题化合物，为固体(113mg，25％)。1H NMR(CDCl3)δ7.31(m，2H)，7.14(m，3H)，4.82(m，1H)，3.07(m，3H)，2.89-2.74(m，3H)，1.92(m，2H)，1.61(m，2H)，1.22(s，3H)，1.19(s，3H)；LC/MS(ESI)C15H22N2O2计算值262.35，实测值[M+1]+263.2。
b.(4-异丙基-苯基)-氨基甲酸1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基酯
向(4-异丙基-苯基)-氨基甲酸哌啶-4-基酯(67mg，0.26mmol)和4-氨基-6-氯-嘧啶-5-甲醛(40.1mg，0.26mmol)在DMSO(1mL)的混合物中添加DIEA(165mg，1.28mmol)。溶液在100℃搅拌。2小时后，添加甲氧基胺盐酸盐(65.1mg，0.78mmol)，混合物在100℃保持搅拌1小时。其被冷却到室温，在CH2Cl2和水之间分配。有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发。粗物质通过硅胶急骤柱色谱法纯化(EtOAc作为洗脱液)，得到所需产物，为白色固体(23mg，21.9％)。1H NMR(CDCl3)δ8.83(br，1H)，8.40(br，1H)，8.05(s，1H)，7.92(s，1H)，7.24-7.31(m，2H)，7.18(d，J＝8.62Hz，2H)，6.56(br，1H)，5.08(m，1H)，3.97(s，3H)，3.88-3.96(m，2H)，3.64-3.74(m，2H)，2.88(m，1H)，2.03-2.13(m，2H)，1.81-1.92(m，2H)，1.23(d，J＝6.92Hz，6H)；LC/MS(ESI)C21H29N6O3(MH)+计算值413.2，实测值413.3。
实施例6 2-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-N-(4-异丙基-苯基)-乙酰胺
a.3-[(4-异丙基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-吡啶烷-1-羧酸叔丁基酯
向3-羧甲基-吡啶烷-1-羧酸叔丁基酯(665.7mg，2.9mmol)和4-异丙基-苯基胺(435mg，3.19mmol)在无水THF(30mL)的混合物中添加HOBT(577.6mg，3.78mmol)，然后添加HBTU(1.43g，3.78mmol)和DIEA(1.13g，8.71mmol)。混合物在室温搅拌过夜，减压除去溶剂。残余物在EtOAc和水之间分配，有机提取物用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发。粗产物通过硅胶急骤柱色谱法纯化(EtOAc/己烷，1∶1 v/v)，得到所需产物(558mg，56％)。1H NMR(CDCl3)δ7.56(br，1H)，7.42(m，2H)，7.16(m，2H)，3.60(dd，J＝10.72和7.25Hz，H)，3.44(m，1H)，3.29(m，1H)，2.99(m，1H)，2.86(m，1H)，2.69(m，1H)，2.30-2.49(m，2H)，2.09(m，1H)，1.59(m，1H)，1.44(s，9H)，1.21(d，J＝6.92Hz，6H)；LC/MS(ESI)C20H31N2O3(MH)+计算值347.2，实测值347.4。
b.N-(4-异丙基-苯基)-2-吡咯烷-3-基-乙酰胺三氟乙酸盐
将3-[(4-异丙基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-吡啶烷-1-羧酸叔丁基酯(558mg，1.61mmol)溶于50％TFA/CH2Cl2(10mL)，溶液在室温搅拌4小时。减压除去溶剂，得到标题化合物，为固体，其无需进一步纯化用于后面步骤中。1H NMR(CDCl3)δ9.34(br，1H)，8.68(br，1H)，8.20(br，1H)，7.42(d，J＝8.77Hz，2H)，7.19(d，J＝8.50Hz，2H)，3.53(m，1H)，3.36(m，2H)，3.00(m，1H)，2.88(m，1H)，2.65(d，J＝6.75Hz，2H)，2.33(m，1H)，1.90(m，1H)，1.22(d，J＝6.91Hz，6H)；LC/MS(ESI)C15H23N2O(MH)+计算值247.2，实测值247.3。
c.2-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-N-(4-异丙基-苯基)-乙酰胺
向N-(4-异丙基-苯基)-2-吡咯烷-3-基-乙酰胺三氟乙酸盐(如前述步骤所述)和4-氨基-6-氯-嘧啶-5-甲醛(252mg，1.61mmol)在DMSO(8mL)的混合物中添加DIEA(457mg，3.54mmol)。溶液在100℃搅拌。2小时后，添加甲氧基胺盐酸盐(538mg，6.44mmol)，混合物在100℃搅拌1小时。其被冷却到室温，在CH2Cl2和水之间分配。有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发。粗物质通过硅胶急骤柱色谱法纯化(EtOAc作为洗脱液)，得到所需产物，为白色固体(200mg，31％)。1H NMR(CD3OD)δ8.41(s，1H)，7.88(s，1H)，7.43(d，J＝8.60Hz，2H)，7.17(d，J＝8.40Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.78(dd，J＝10.49和8.69Hz，1H)，3.69(m，2H)，3.42(dd，J＝10.61和9.30Hz，1H)，2.86(sep，J＝6.87Hz，1H)，2.65(m，1H)，2.48(d，J＝7.83Hz，2H)，2.15(m，1H)，1.70(m，1H)，1.22(d，J＝6.93Hz，6H)；LC/MS(ESI)C21H29N6O2(MH)+计算值397.2，实测值397.4；元素分析C21H28N6O2计算值C，63.61；H，7.12；N，21.20.实测值C，63.32；H，6.95；N，21.04。
实施例7 2-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-N-(4-异丙基-苯基)-乙酰胺
a.N-(4-异丙基-苯基)-2-哌啶-4-基-乙酰胺
向4-羧甲基-哌啶-1-羧酸叔丁基酯(73mg，0.3mmol)的无水CH2Cl2溶液中添加PS-碳二亚胺(0.4mmol)，混合物在室温振摇15分钟。然后向混合物中添加4-异丙基苯胺(27mg，0.2mmol)，将其在室温振摇过夜。然后过滤，树脂用CH2Cl2洗涤两次，合并的滤液和洗液经真空浓缩，得到粗物质4-[(4-异丙基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-哌啶-1-羧酸叔丁基酯，其用3M HCl/MeOH溶液(2mL)处理1小时。得到的混合物真空浓缩，得到粗物质N-(4-异丙基-苯基)-2-哌啶-4-基-乙酰胺，为其HCl盐的形式。LC/MS(ESI)C16H25N2O(MH)+计算值261.2，实测值261.3。该物质无需进一步纯化用于后面的步骤中。
b.2-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-N-(4-异丙基-苯基)-乙酰胺
如实施例6c所述制备，不同之处在于使用N-(4-异丙基-苯基)-2-哌啶-4-基-乙酰胺代替N-(4-异丙基-苯基)-2-吡咯烷-3-基-乙酰胺三氟乙酸盐。1H NMR(CDCl3)δ8.13(s，1H)，8.03(s，1H)，7.42(d，J＝8.51Hz，2H)，7.18(d，J＝8.58Hz，2H)，3.94(s，3H)，3.90(m，2H)，3.05(m，2H)，2.88(sep，J＝6.77Hz，1H)，2.30(d，J＝6.85Hz，2H)，2.19(m，1H)，1.90(m，2H)，1.39(m，2H)，1.22(d，J＝6.92Hz，6H)；LC/MS(ESI)C22H31N6O3(MH)+计算值411.2，实测值411.4。
实施例8 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-异丙氧基-苯基)-脲
a.[1-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-吡咯烷-3-基]-氨基甲酸叔丁基酯
向4-氨基-6-氯-嘧啶-5-甲醛(239mg，1.52mmol)在CH3CN(2mL)中的悬浮液中添加3-(叔丁氧羰基氨基)吡咯烷(312mg，1.67mmol)，随后添加DIEA(392.9mg，3.04mmol)。混合物在90℃搅拌1小时。其被冷却到室温，过滤出沉淀物，用CH3CN洗涤并真空干燥，得到产物，为白色固体(290.6mg，62.2％)。1H NMR(DMSO-d6)δ9.92(s，1H)，8.58(br，1H)，7.95(s，1H)，7.68(br，1H)，7.22(d，J＝6.16Hz，1H)，4.02(m，1H)，3.80(m，2H)，3.66(m，1H)，3.45(m，1H)，2.03(m，1H)，1.82(m，1H)，1.38(s，9H)；LC/MS(ESI)C14H22N5O3(MH)+计算值308.2，实测值308.3。
b.4-氨基-6-(3-氨基-吡咯烷-1-基)-嘧啶-5-甲醛O-甲基-肟三氟乙酸
向[1-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-吡咯烷-3-基]-氨基甲酸叔丁基酯(290.6mg，0.945mmol)的MeOH(1.5mL)溶液中添加MeONH2.HCl(197.2mg，2.36mmol)，混合物在95℃搅拌0.5小时。其经过减压浓缩，残余物在CH2Cl2和水之间分配。提取物经过干燥(Na2SO4)和蒸发得到白色泡沫，其用50％TFA/CH2Cl2(10mL)处理4小时。真空除去溶剂得到标题化合物，其无需纯化即可用于后面步骤反应。LC/MS(ESI)C10H16N6O(MH)+计算值237.1，实测值237.1。
c.(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯
在搅拌下在约1分钟内向4-异丙氧基苯胺(9.06g，60.0mmol)的CH2Cl2(120mL)和吡啶(30mL)溶液中分份添加氯甲酸4-硝基苯基酯(10.9g，54.0mmol)并进行短暂的冰浴冷却。在室温搅拌1小时后，均相溶液用CH2Cl2(300mL)稀释，用0.6M HCl(1×750mL)和0.025MHCl(1×1L)洗涤。有机层经过干燥(Na2SO4)和浓缩，得到标题化合物，为淡紫色-白色固体(16.64g，98％)。1H NMR(CDCl3)δ8.31-8.25(m，2H)，7.42-7.32(m，4H)，7.25-7.20(m，2H)，6.93(br s，1H)，2.90(sep，J＝6.9Hz，1H)，1.24(d，J＝6.9Hz，6H).LC/MS(ESI)C16H17N2O5(MH)+计算值317.1，实测值633.2(2MH)+。
d.1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-异丙氧基-苯基)-脲
向4-氨基-6-(3-氨基-吡咯烷-1-基)-嘧啶-5-甲醛O-甲基-肟三氟乙酸(69.2mg，0.20mmol)在CH3CN(1.5mL)中的悬浮液中添加(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯(62.4mg，0.20mmol)，随后添加DIEA(102.4mg，0.79mmol)。混合物在95℃搅拌1小时并冷却到室温。沉淀物经过滤，用CH3CN洗涤并真空干燥，得到产物，为白色固体(54mg，66％)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.37(s，1H)，8.11(s，1H)，7.93(s，1H)，7.35(br，2H)，7.23(d，J＝8.99Hz，2H)，6.77(d，J＝9.06Hz，2H)，6.36(d，J＝6.32Hz，1H)，4.47(m，1H)，4.15(m，1H)，3.86(s，3H)，3.75(m，1H)，3.51-3.69(m，2H)，3.33(m，1H)，2.06(m，1H)，1.81(m，1H)，1.21(d，J＝6.01Hz，6H)；LC/MS(ESI)C20H28N7O3(MH)+计算值414.2，实测值414.3。
实施例9 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-哌啶-1-基-苯基)-脲
a.(4-哌啶-1-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯
基本如实施例8c所述制备，不同之处在于使用4-哌啶子基苯胺和甲苯溶剂。硅胶急骤色谱法(5∶2 hex/EtOAc→EtOAc→9∶1 DCM/MeOH)得到目标化合物，为灰色粉末(1.416g，73％)。1H NMR(CDCl3)δ8.31-8.25(m，2H)，7.42-7.36(m，2H)，7.34-7.28(m，2H)，6.97-6.90(m，2H)，6.82(br s，1H)，3.17-3.09(m，4H)，1.77-1.66(m，4H)，1.63-1.54(m，2H).LC/MS(ESI)C18H19N3O4(MH+)计算值342.1，实测值342.2。
b.1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-哌啶-1-基-苯基)-脲
如实施例8d所述制备，不同之处在于使用(4-哌啶-1-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯，标题化合物为灰色固体。1H NMR(DMSO-d6)δ8.37(s，1H)，8.03(s，1H)，7.93(s，1H)，7.36(s，2H)，7.18(d，J＝8.98Hz，2H)，6.80(d，J＝9.08Hz，2H)，6.32(d，J＝6.93Hz，1H)，4.14(m，1H)，3.86(s，3H)，3.76(m，1H)，3.62(m，2H)，3.38(m，1H)，2.98(t，J＝4.49Hz，4H)，2.07(m，1H)，1.81(m，1H)，1.60(m，4H)，1.48(m，2H)；LC/MS(ESI)C22H31N8O2(MH)+计算值439.3，实测值439.3。
实施例10 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-吗啉-4-基-苯基)-脲
a.(4-吗啉-4-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯
在空气中在冰浴上将4-吗啉代苯胺(1.01g，5.68mmol)和CaCO3(743mg，7.42mmol)(10微米粉末)的混合物用氯甲酸4-硝基苯基酯(1.49g，7.39mmol)的CH2Cl2(7.5mL)溶液处理。在冰浴上对稠厚易搅拌的反应浆料搅拌1-2分钟，然后在室温搅拌1小时。然后浆料用9∶1CH2Cl2/MeOH(7.5mL)稀释，直接施用于急骤硅胶柱(95∶5CH2Cl2/MeOH)，得到0.7g物质。其进一步通过与热甲苯(25mL)一起研磨进行纯化得到标题化合物，为浅橄榄绿色粉末(444mg，23％)。1H NMR(CDCl3)δ8.31-8.25(m，2H)，7.42-7.31(m，4H)，6.95-6.85(m，3H)，3.89-3.84(m，4H)，3.16-3.11(m，4H)。
b.1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-吗啉-4-基-苯基)-脲
如实施例8d所述制备，不同之处在于使用(4-吗啉-4-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯，标题化合物为浅褐色固体。1H NMR(DMSO-d6)δ8.37(s，1H)，8.07(s，1H)，7.93(s，1H)，7.35(s，2H)，7.21(d，J＝9.06Hz，2H)，6.82(d，J＝9.10Hz，2H)，6.33(d，J＝6.58Hz，1H)，4.15(m，1H)，3.86(s，3H)，3.75(m，1H)，3.71(t，J＝4.52Hz，4H)，3.52-3.69(m，2H)，3.33(m，1H)，2.98(t，J＝4.79Hz，4H)，2.06(m，1H)，1.81(m，1H)；LC/MS(ESI)C21H29N8O3(MH)+计算值441.2，实测值441.2。
实施例11 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-脲
a.2-环丁氧基-5-硝基-吡啶
2-氯-5-硝基吡啶(7.12g，45.0mmol)和环丁醇(3.40g，47.2mmol)在THF(30mL)中的混合物在0℃剧烈搅拌，同时在空气中在约10-20秒内分三份添加NaH(1.18g，46.7mmol)(警告气体大范围放出)。反应残余物用另外的THF(5mL)漂洗，随后在正氩气气压下在冰浴中再搅拌1-2分钟。然后除去冰浴，褐色的均相溶液搅拌1小时.反应混合物在80℃减压浓缩，承载在0.75M EDTA(四钠盐)(150mL)中，用CH2Cl2(1×100mL，1×50mL)提取。合并的有机层经过干燥(Na2SO4)，浓缩，承载在MeOH(2×100mL)中，在60℃减压浓缩，得到标题化合物，为浓稠的暗琥珀色油状物，其在放置时结晶(7.01g，80％)。1H NMR(CDCl3)δ9.04(dd，J＝2.84和0.40Hz，1H)，8.33(dd，J＝9.11和2.85Hz，1H)，6.77(dd，J＝9.11和0.50Hz，1H)，5.28(m，1H)，2.48(m，2H)，2.17(m，2H)，1.87(m，1H)，1.72(m，1H)。
b.6-环丁氧基-吡啶-3-基胺
将含有10％ w/w Pd/C(485mg)的烧瓶用氩气平缓地吹扫，同时沿着烧瓶壁慢慢添加MeOH(50mL)，随后多批添加约～5mL的2-环丁氧基-5-硝基-吡啶(4.85g，25mmol)(如前述步骤制备)的MeOH(30mL)溶液(警告在空气存在时，向Pd/C中大规模添加挥发性有机物可引起着火)。然后将烧瓶排空1次，并在室温下在H2气球压力下搅拌2小时。然后将反应过滤，将透明的琥珀色滤液浓缩，承载在甲苯(2×50mL)中以除去残余的MeOH，并减压浓缩，得到粗的标题化合物，为半透明暗褐色油状物，有轻微的甲苯气味(4.41g)。1H NMR(CDCl3)δ7.65(d，J＝3.0Hz，1H)，7.04(dd，J＝8.71和2.96Hz，1H)，6.55(d，J＝8.74Hz，1H)，5.04(m，1H)，2.42(m，2H)，2.10(m，2H)，1.80(m，1H)，1.66(m，1H).LC-MS(ESI)C9H13N2O(MH+)计算值165.1，实测值165.2。
c.(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯
在室温下，6-环丁氧基-吡啶-3-基胺(4.41g，25mmol)(如前述步骤制备)和CaCO3(3.25g，32.5mmol)(10微米粉末)的混合物用氯甲酸4-硝基苯基酯(5.54g，27.5mmol)的甲苯(28mL)均相溶液一次性处理，并搅拌2小时。然后将反应混合物直接加载到急骤硅胶柱(95∶5DCM/MeOH→9∶1 DCM/MeOH)上，得到5.65g物质，其进一步通过与热甲苯一起研磨进行纯化(1×200mL)，得到标题化合物(4.45g，54％)。1H NMR(CDCl3)δ8.32-8.25(m，2H)，8.12(d，1H)，7.81(m，1H)，7.42-7.36(m，2H)，6.85(brs，1H)，6.72(d，1H)，5.19-5.10(m，1H)，2.50-2.40(m，2H)，2.19-2.07(m，2H)，1.89-1.79(m，1H)，1.75-1.61(m，1H).LC-MS(ESI)C16H15N3O5(MH+)计算值330.1，实测值330.1。
d.1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-脲
如实施例8d所述制备，不同之处在于使用(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯，标题化合物为白色固体。1H NMR(DMSO-d6)δ8.37(s，1H)，8.22(s，1H)，8.05(d，J＝2.75Hz，1H)，7.93(s，1H)，7.72(dd，J＝8.92和2.74Hz，1H)，7.35(br，2H)，6.67(d，J＝8.80Hz，1H)，6.51(d，J＝6.79Hz，1H)，5.02(m，1H)，4.16(m，1H)，3.86(s，3H)，3.75(m，1H)，3.51-3.69(m，2H)，3.33(m，1H)，2.35(m，2H)，1.92-2.12(m，3H)，1.71-1.86(m，2H)，1.60(m，1H)；LC/MS(ESI)C20H27N8O3(MH)+计算值427.2，实测值427.2。
实施例12 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(4-异丙氧基-苯基)-脲
a.[1-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌啶-4-基]-氨基甲酸叔丁基酯
向4-氨基-6-氯-嘧啶-5-甲醛(226mg，1.44mmol)和4-(N-BOC氨基)-哌啶(318mg，1.59mmol)在CH3CN(2mL)中的混合物中添加DIEA(372mg，2.88mmol)。混合物在搅拌的同时在90℃加热1小时，冷却到室温。过滤出沉淀物，用CH3CN(3×5mL)洗涤并真空干燥，得到白色固体(400mg，86％)。1H NMR(DMSO-d6)δ9.66(s，1H)，8.22(br，1H)，8.03(s，1H)，7.77(br，1H)，6.91(d，J＝790Hz，1H)，3.99(m，2H)，3.54(m，1H)，3.18-3.29(m，2H)，1.79(m，2H)，1.40(m，2H)，1.38(s，9H)；LC/MS(ESI)C15H24N5O3(MH)+计算值322.2，实测值322.2。
b.{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-氨基甲酸叔丁基酯
向[1-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌啶-4-基]-氨基甲酸叔丁基酯(231.2mg，0.72mmol)在MeOH(1.5mL)中的混合物中添加甲氧基胺盐酸盐(150.2mg，1.80mmol)。溶液在95℃搅拌0.5小时。其经过减压浓缩，粗残余物通过硅胶急骤柱色谱法纯化(EtOAc作为洗脱液)，得到所需产物，为白色固体(180mg，72％)。1H NMR(CDCl3)δ8.10(br，2H)，8.09(s，1H)，8.06(s，1H)，6.95(br，1H)，4.07(m，2H)，3.96(s，3H)，3.74(m，1H)，3.23(td，J＝12.72和2.61Hz，2H)，2.08(m，2H)，1.49(m，2H)；LC/MS(ESI)C16H27N6O3(MH)+计算值351.2，实测值351.3。
c.4-氨基-6-(4-氨基-哌啶-1-基)-嘧啶-5-甲醛O-甲基-肟三氟乙酸盐
将1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-氨基甲酸叔丁基酯(180mg，0.51mmol)溶于15mL的50％TFA/CH2Cl2。将其在室温保持搅拌4小时，减压蒸发有机溶剂。产物无需进一步纯化用于后面的步骤。1H NMR(CD3OD)δ8.22(s，1H)，8.06(s，1H)，4.32(m，2H)，3.99(s，3H)，3.47(m，1H)，3.36(m，2H)，2.12(m，2H)，1.69(m，2H)；LC/MS(ESI)C11H19N6O(MH)+计算值251.2，实测值251.2。
d.1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(4-异丙氧基-苯基)-脲
向4-氨基-6-(4-氨基-哌啶-1-基)-嘧啶-5-甲醛O-甲基-肟三氟乙酸盐(51.7mg，0.14mmol)在CH3CN(2mL)中的悬浮液中添加(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯(44.9mg，0.14mmol)，随后添加DIEA(73.4mg，0.57mmol)。混合物在95℃搅拌1小时并冷却到室温。过滤出沉淀物，用CH3CN(3×1.5mL)洗涤并真空干燥，得到产物，为白色固体(36mg，59％)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.12(s，1H)，8.07(s，1H)，8.06(s，1H)，7.42(br，2H)，7.24(d，J＝9.05Hz，2H)，6.78(d，J＝8.98Hz，2H)，6.09(d，J＝7.54Hz，1H)，4.47(sep，J＝5.96Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.69(m，1H)，3.60(m，2H)，3.06(t，J＝11.98Hz，2H)，1.86(m，2H)，1.43(m，2H)，1.21(d，J＝6.02Hz，6H)；LC/MS(ESI)C21H30N7O3(MH)+计算值428.2， 实测值428.3。
实施例13 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(4-哌啶-1-基-苯基)-脲
向4-氨基-6-(4-氨基-哌啶-1-基)-嘧啶-5-甲醛O-甲基-肟三氟乙酸盐(41.4mg，0.12mmol)在CH3CN(2mL)中的悬浮液中添加(4-哌啶-1-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯(40.4mg，0.12mmol)，随后添加DIEA(61mg，0.47mmol)。混合物在95℃搅拌1小时并冷却到室温。过滤出沉淀物，用CH3CN(3×1.5mL)洗涤并真空干燥，得到产物，为浅灰色固体(26.8mg，52％)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.07(s，1H)，8.06(s，1H)，8.04(s，1H)，7.41(br，2H)，7.19(d，J＝9.04Hz，2H)，6.81(d，J＝9.11Hz，2H)，6.06(d，J＝7.14Hz，1H)，3.90(s，3H)，3.68(m，1H)，3.61(m，2H)，3.06(t，J＝11.03Hz，2H)，2.98(t，J＝5.05Hz，4H)，1.87(m，2H)，1.60(m，4H)，1.48(m，2H)；LC/MS(ESI)C23H33N8O2(MH)+计算值453.3，实测值453.3。
实施例14 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(4-吗啉-4-基-苯基)-脲
向4-氨基-6-(4-氨基-哌啶-1-基)-嘧啶-5-甲醛O-甲基-肟三氟乙酸盐(44.5mg，0.13mmol)在CH3CN(2mL)中的悬浮液中添加(4-吗啉-4-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯(43.6mg，0.13mmol)，随后添加DIEA(65.7mg，0.51mmol)。混合物在95℃搅拌1小时，减压除去溶剂。粗残余物通过制备TLC板纯化(5％MeOH/EtOAc)，得到所需产物，为白色固体(7.5mg，13.4％)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.08(s，1H)，8.07(s，1H)，8.06(s，1H)，7.42(br，2H)，7.23(d，J＝9.00Hz，2H)，6.83(d，J＝9.12Hz，2H)，6.07(d，J＝7.59Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.71(t，J＝4.22Hz，4H)，3.67(m，1H)，3.61(m，2H)，3.06(t，J＝1.31Hz，2H)，2.98(t，J＝4.70Hz，4H)，1.86(m，2H)，1.44(m，2H)；LC/MS(ESI)C22H31N8O3(MH)+计算值455.2，实测值455.3。
实施例15 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-脲
向4-氨基-6-(4-氨基-哌啶-1-基)-嘧啶-5-甲醛O-甲基-肟三氟乙酸盐(50mg，0.14mmol)在CH3CN(2mL)中的悬浮液中添加(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯(45.2mg，0.14mmol)，随后添加DIEA(70.8mg，0.55mmol)。混合物在95℃搅拌1小时并冷却到室温。过滤出沉淀物，用EtOAc(3×3mL)洗涤并真空干燥，得到产物，为白色固体(31.5mg，52.3％)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.24(s，1H)，8.07(s，1H)，8.06(d，J＝2.44Hz，1H)，8.05(s，1H)，7.73(dd，J＝8.90和2.78Hz，1H)，7.42(br，2H)，6.67(d，J＝8.76Hz，1H)，6.25(d，J＝7.88Hz，1H)，5.03(m，1H)，3.89(s，3H)，3.70(m，1H)，3.61(m，2H)，3.05(m，2H)，2.35(m，2H)，1.99(m，2H)，1.86(m，2H)，1.75(m，1H)，1.60(m，1H)，1.46(m，2H)；LC/MS(ESI)C21H29N8O3(MH)+计算值441.2，实测值441.3。
实施例16 N-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-2-(4-异丙基-苯基)-乙酰胺
向4-氨基-6-(4-氨基-哌啶-1-基)-嘧啶-5-甲醛O-甲基-肟三氟乙酸盐(57.8mg，0.16mmol)在无水THF(2mL)中的悬浮液中添加(4-异丙基-苯基)-乙酸(0.21mmol)、HOBT(31.6mg，0.21mmol)，随后添加HBTU(78.5mg，0.21mmol)和DIEA(102.8mg，0.80mmol)。混合物在室温搅拌过夜，减压除去有机溶剂。粗残余物通过制备性TLC板(EtOAc作为洗脱液)纯化，得到所需产物，为白色固体(21.3mg，32.6％)。1H NMR(CDCl3)δ8.14(s，1H)，8.01(s，1H)，7.22(d，J＝8.29Hz，2H)，7.15(d，J＝8.14Hz，2H)，4.00(m，1H)，3.94(s，3H)，3.71(m，2H)，3.54(s，2H)，3.06(td，J＝12.36和2.32Hz，2H)，2.91(sep，J＝7.07Hz，1H)，1.94(m，2H)，1.38(m，2H)，1.25(d，J＝6.92Hz，6H)；LC/MS(ESI)C22H31N6O2(MH)+计算值411.2，实测值411.3。
实施例17 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-环己基-苯基)-脲
a.(4-环己基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯
基本上如实施例8c所述制备，不同之处在于使用4-环己基苯胺代替4-异丙氧基苯胺。1H NMR(DMSO-d6)δ10.37(br，1H)，8.30(d，J＝9.30Hz，2H)，7.52(d，J＝9.00Hz，2H)，7.41(d，J＝8.10Hz，2H)，7.18(d，J＝8.70Hz，2H)，1.18-1.82(11H)。
b.1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-环己基-苯基)-脲
基本上如实施例8d所述制备，不同之处在于使用(4-环己基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(DMSO-d6)δ8.35(s，1H)，8.18(s，1H)，7.91(s，1H)，7.33(br，2H)，7.22(d，J＝8.58Hz，2H)，7.03(d，J＝8.56Hz，2H)，6.38(d，J＝6.58Hz，1H)，4.14(m，1H)，3.84(s，3H)，3.75(m，1H)，3.65(m，1H)，3.55(m，1H)，3.41(m，1H)，2.36(m，1H)，2.05(m，1H)，1.62-1.82(6H)，1.31(4H)，1.18(m，1H)；LC/MS(ESI)C23H32N7O2(MH)+计算值438.3，实测值438.3。
实施例18 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-氯-苯基)-脲
基本上如实施例8d所述制备，不同之处在于使用4-氯苯基异氰酸酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(DMSO-d6)δ8.45(s，1H)，8.35(s，1H)，7.91(s，1H)，7.37(d，J＝8.93Hz，2H)，7.33(br，2H)，7.23(d，J＝8.92Hz，2H)，6.49(d，J＝6.52Hz，1H)，4.15(m，1H)，3.84(s，3H)，3.75(m，1H)，3.65(m，1H)，3.55(m，1H)，3.41(m，1H)，2.04(m，1H)，1.80(m，1H)；LC/MS(ESI)C17H21ClN7O2(MH)+计算值390.1，实测值390.2。
实施例19 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-苯氧基-苯基)-脲
基本上如实施例8d所述制备，不同之处在于使用4-苯氧基苯基异氰酸酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(DMSO-d6)δ8.36(s，1H)，8.32(s，1H)，7.91(s，1H)，7.29-7.38(6H)，7.04(m，1H)，6.90(m，4H)，6.43(d，J＝6.57Hz，1H)，4.15(m，1H)，3.84(s，3H)，3.75(m，1H)，3.65(m，1H)，3.55(m，1H)，3.41(m，1H)，2.06(m，1H)，1.82(m，1H)；LC/MS(ESI)C23H26N7O3(MH)+计算值448.2，实测值448.3。
实施例20 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-脲
a.(4-吡咯烷-1-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯盐酸盐
在室温下，向4.9g(30.4mmol)4-吡咯烷-1-基-苯基胺在70mL无水THF中的搅拌的溶液中滴加6.4g(32mmol)氯甲酸4-硝基苯基酯在16mL无水THF中的溶液。添加完成后，将混合物搅拌1小时然后过滤。沉淀物首先用无水THF(2×10mL)洗涤，然后用无水DCM(3×10mL)洗涤并真空干燥，得到10g的灰白色固体。1H-NMR(300MHz，CD3OD)10.39(s，1H)，8.32(d，2H)，7.73(d，2H)，7.60(d，2H)，7.48(d，2H)，3.86-3.68(bs，4H)，2.35-2.24(bs，4H).LC/MS(ESI)328(MH)+。
b.1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-脲
基本上如实施例8d所述制备，不同之处在于使用(4-吡咯烷-1-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(DMSO-d6)δ8.35(s，1H)，7.91(s，1H)，7.85(s，1H)，7.33(br，2H)，7.11(d，J＝8.96Hz，2H)，6.41(d，J＝9.02Hz，2H)，6.22(d，J＝6.62Hz，1H)，4.12(m，1H)，3.84(s，3H)，3.72(m，1H)，3.64(m，1H)，3.55(m，1H)，3.32(m，1H)，3.12(t，J＝6.54Hz，4H)，2.03(m，1H)，1.89(m，4H)，1.77(m，1H)；LC/MS(ESI)C21H29N8O2(MH)+计算值425.2，实测值425.3。
实施例21 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(6-环戊氧基-吡啶-3-基)-脲
a.2-环戊氧基-5-硝基-吡啶
在冰浴冷却下，在0℃，在搅拌的同时，在～30秒内向2-氯-5-硝基吡啶(7.01g，44.4mmol)在THF(30mL)和环戊醇(3.9g，45.3mmol)中的溶液中分份添加氢化钠(1.3g，54.2mmol)，在0℃搅拌5分钟后，除去冰浴，将反应在室温搅拌3小时。然后将其真空浓缩，将残余物溶于DCM，用1M NaHCO3深入洗涤，然后用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。粗产物通过急骤柱色谱法纯化(硅胶，9∶1 己烷∶乙酸乙酯)，得到纯2-环戊氧基-5-硝基-吡啶(0.4g，4％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ9.07(s，1H)，8.32(m，1H)，6.74(d，1H)，5.53(m，1H)，2.00(m，2H)，1.81(m，4H)，1.66(m，2H)。
b.6-环戊氧基-吡啶-3-基胺
向2-环戊氧基-5-硝基-吡啶(0.3099g，1.49mmol)的MeOH(2mL)溶液中添加10％ Pd/C(90mg)。溶液经过脱气，并在氢气氛下保持搅拌过夜。其通过硅藻土垫过滤并蒸发滤液，得到所需产物，为褐色油状物(248mg，94％收率)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.69(d，1H)，7.04(m，1H)，6.56(d，1H)，5.25(m，1H)，1.93(m，2H)，1.78(m，4H)，1.60(m，2H).LC/MS(ESI)C10H14N2O计算值178.23，实测值[M+41+1]+220.0。
c.(6-环戊氧基-吡啶-3-基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯
向6-环戊氧基-吡啶-3-基胺(0.248g，1.39mmol)的THF(2mL)溶液中分份添加氯甲酸4-硝基苯基酯(0.280g，1.39mmol)。在室温搅拌1小时后，在有机层中形成重质沉淀物。过滤有机层，得到标题化合物，为浅粉色固体(0.368g，77％)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.1(s，1H)，9.11(s，1H)，9.04(d，1H)，8.26(d，2H)，7.40(d，2H)，7.14(d，1H)，5.36(m，1H)，2.11(m，2H)，1.97(m，2H)，1.84(m，2H)，1.71(m，2H)。
d.1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(6-环戊氧基-吡啶-3-基)-脲
基本上如实施例8d所述制备，不同之处在于使用(6-环戊氧基-吡啶-3-基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(CD3OD)δ8.40(s，1H)，8.05(d，J＝2.76Hz，1H)，7.91(s，1H)，7.68(dd，J＝8.88和2.80Hz，1H)，6.68(d，J＝8.89Hz，1H)，5.22(m，1H)，4.31(m，1H)，3.92(s，3H)，3.88(m，1H)，3.78(m，1H)，3.68(m，1H)，3.50(dd，J＝11.12和4.45Hz，1H)，2.19(m，1H)，1.88-1.99(3H)，1.76(m，4H)，1.63(m，2H)；LC/MS(ESI)C21H29N8O3(MH)+计算值441.2，实测值441.3。
实施例22 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(4-环己基-苯基)-脲
基本上如实施例12d所述制备，不同之处在于使用(4-环己基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(CDCl3)δ8.16(s，1H)，8.05(s，1H)，7.16(m，4H)，3.94(s，3H)，3.74(m，1H)，3.09(m，2H)，3.05(m，2H)，2.05(m，2H)，1.84(m，4H)，1.74(m，1H)，1.22-1.52(8H)；LC/MS(ESI)C24H34N7O2(MH)+计算值452.3，实测值452.3。
实施例23 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(6-环戊氧基-吡啶-3-基)-脲
基本上如实施例12d所述制备，不同之处在于使用(6-环戊氧基-吡啶-3-基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(DMSO-d6)δ8.21(br，1H)，8.07(m，1H)，8.05(s，1H)，8.04(s，1H)，7.69(m，1H)，7.40(br，1H)，6.63(d，J＝8.84Hz，1H)，6.22(d，J＝7.58Hz，1H)，6.23(m，1H)，3.87(s，3H)，2.98-3.70(6H)，1.81-1.89(4H)，1.38-1.68(8H)；LC/MS(ESI)C22H31N8O3(MH)+计算值455.2，实测值455.4。
实施例24 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-脲
基本上如实施例12d所述制备，不同之处在于使用(4-吡咯烷-1-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(DMSO-d6)δ8.05(s，1H)，8.04(s，1H)，7.87(br，1H)，7.40(br，2H)，7.12(d，J＝9.10Hz，2H)，6.42(d，J＝9.19Hz，2H)，5.96(m，1H)，3.87(s，3H)，2.80-3.68(9H)，1.90(m，4H)，1.84(m，2H)，1.41(m，2H)；LC/MS(ESI)C22H31N8O2(MH)+计算值439.3，实测值439.3。
实施例25 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(4-氯-苯基)-脲
基本上如实施例12d所述制备，不同之处在于使用4-氯苯基异氰酸酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(DMSO-d6)δ8.48(br，2H)，8.05(s，1H)，8.04(s，1H)，7.38(d，J＝9.00Hz，2H)，7.23(d，J＝9.00Hz，2H)，6.25(m，1H)，6.23(m，1H)，3.87(s，3H)，3.22-3.60(3H)，3.05(m，2H)，1.85(m，2H)，1.44(m，2H)；LC/MS(ESI)C18H23ClN7O2(MH)+计算值404.2，实测值404.3。
实施例26 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(4-苯氧基-苯基)-脲
基本上如实施例12d所述制备，不同之处在于使用4-苯氧基苯基异氰酸酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(DMSO-d6)δ8.35(br，2H)，8.05(s，1H)，8.04(s，1H)，7.45(m，1H)，7.38(d，J＝8.94Hz，2H)，7.32(m，2H)，7.05(m，2H)，6.90(m，2H)，6.17(m，2H)，3.88(s，3H)，3.25-3.62(3H)，3.05(m，2H)，1.86(m，2H)，1.44(m，2H)；LC/MS(ESI)C24H28N7O3(MH)+计算值462.2，实测值462.3。
实施例27 1-(1-{6-氨基-5-[(2-氨基-乙氧基亚胺基)-甲基]-嘧啶-4-基}-吡咯烷-3-基)-3-(4-异丙基-苯基)-脲
(a).1-[1-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-吡咯烷-3-基]-3-(4-异丙基-苯基)-脲
将[1-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-吡咯烷-3-基]-氨基甲酸叔丁基酯(200mg，0.65mmol)溶于3mL的50％TFA/CH2Cl2，将反应混合物搅拌1小时。除去溶剂，将残余物再次溶于CH3CN。向上述溶液中添加4-异丙基苯基异氰酸酯(125.7mg，0.78mmol)和DIEA(336mg，2.6mmol)。1小时后，过滤出沉淀物，用EtOAc洗涤并真空干燥，得到白色固体，为所需产物。1H NMR(DMSO-d6)δ9.94(s，1H)，8.57(br，1H)，8.21(s，1H)，7.97(s，1H)，7.70(br，1H)，7.24(d，J＝8.56Hz，2H)，7.06(d，J＝8.54Hz，2H)，6.42(d，J＝6.39Hz，1H)，4.19(m，1H)，3.88(m，1H)，3.66-3.80(m，2H)，3.48(m，1H)，2.77(m，1H)，2.10(m，1H)，1.86(m，1H)，1.13(d，J＝6.91Hz，6H)；LC/MS(ESI)C19H25N6O2(MH)+计算值369.2，实测值369.3。
(b).1-(1-{6-氨基-5-[(2-氨基-乙氧基亚胺基)-甲基]-嘧啶-4-基}-吡咯烷-3-基)-3-(4-异丙基-苯基)-脲
基本如实施例1e所述制备，使用1-[1-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-吡咯烷-3-基]-3-(4-异丙基-苯基)-脲和2-(铵氧基(ammoniooxy))-1-乙铵二氯化物。1H NMR(CD3OD)δ8.48(s，1H)，7.91(s，1H)，7.23(d，J＝8.55Hz，2H)，7.11(d，J＝8.68Hz，2H)，4.31(m，1H)，4.17(m，2H)，3.90(m，1H)，3.80(m，1H)，3.70(m，1H)，3.51(m，1H)，3.30(m，2H)，2.83(m，1H)，2.20(m，1H)，1.95(m，1H)，1.20(d，J＝6.93Hz，6H)；LC/MS(ESI)C21H31N8O2(MH)+计算值427.3，实测值427.3。
实施例28 1-[1-(6-氨基-5-{[2-(3-乙基-脲基)-乙氧基亚胺基]-甲基}-嘧啶-4-基)-吡咯烷-3-基]-3-(4-异丙基-苯基)-脲
向1-(1-{6-氨基-5-[(2-氨基-乙氧基亚胺基)-甲基]-嘧啶-4-基}-吡咯烷-3-基)-3-(4-异丙基-苯基)-脲(14.5mg，0.034mmol)的CH2Cl2(1.5mL)溶液中添加乙基异氰酸酯(4.8mg，0.068mmol)。过滤出沉淀物，用水、CH2Cl2洗涤，真空干燥，得到所需产物。1H NMR(DMSO-d6)δ8.38(s，1H)，8.20(s，1H)，7.92(s，1H)，7.33(br，1H)，7.24(d，J＝8.58Hz，2H)，7.06(d，J＝8.52Hz，2H)，6.40(d，J＝6.66Hz，1H)，5.90(t，J＝5.58Hz，1H)，5.85(t，J＝5.45Hz，1H)，4.16(m，1H)，4.02(m，2H)，3.75(m，1H)，3.66(m，1H)，3.57(m，1H)，3.24-3.37(3H)，3.12(m，1H)，2.96(m，2H)，2.76(m，1H)，2.04(m，1H)，1.80(m，1H)，1.13(d，J＝6.91Hz，6H)，0.94(t，J＝7.15Hz，3H)；LC/MS(ESI)C24H36N9O3(MH)+计算值498.3，实测值498.4。
实施例29 1-(1-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-2-氧代-乙氧基亚胺基)-甲基]-嘧啶-4-基}-吡咯烷-3-基)-3-(4-异丙基-苯基)-脲
基本上如实施例27b所述制备，不同之处在于使用4-[2-(铵氧基)乙酰基]吗啉氯化物代替2-(铵氧基)-1-乙铵二氯化物。1H NMR(CD3OD)δ8.51(s，1H)，7.92(br，1H)，7.23(d，J＝8.65Hz，2H)，7.11(d，J＝8.45Hz，2H)，4.87(s，2H)，4.31(m，1H)，3.89(m，1H)，3.78(m，1H)，3.48-3.75(10H)，2.83(m，1H)，2.19(m，1H)，1.95(m，1H)，1.20(d，J＝6.92Hz，6H)；LC/MS(ESI)C25H35N8O4(MH)+计算值511.3，实测值511.3。
实施例30 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亚胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-异丙基-苯基)-脲
基本上如实施例8d所述制备，不同之处在于使用4-异丙基苯基异氰酸酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(DMSO-d6)δ8.35(s，1H)，8.19(br，1H)，7.91(s，1H)，7.33(br，2H)，7.23(d，J＝8.59Hz，2H)，7.06(d，J＝8.49Hz，2H)，6.38(d，J＝6.54Hz，1H)，4.14(m，1H)，3.84(s，3H)，3.74(m，1H)，3.64(m，1H)，3.28-3.58(2H)，2.77(m，1H)，2.04(m，1H)，1.80(m，1H)，1.13(d，J＝6.91Hz，6H)；LC/MS(ESI)C20H28N7O2(MH)+计算值398.2，实测值398.3。
式I’的FLT3抑制剂的生物活性 进行以下典型试验以测定式I’的FLT3抑制剂的生物学活性。以非限制性方式给出它们用于说明本发明。
体外试验 进行以下典型的体外试验，测定本发明范围内的式I’作为FLT3抑制剂的生物学活性。以非限制性方式给出它们用于说明本发明。
FLT3酶活性、MV4-11增殖和Baf3-FLT3磷酸化的抑制示例了FLT3酶和依赖于FLT3活性的细胞过程的特异性抑制。使用Baf3细胞增殖的抑制试验检验本发明范围内化合物的FLT3、c-Kit和TrkB非依赖性细胞毒性。本文中所有实施例表现出对FLT3激酶和FLT3依赖性细胞反应的显著的和特异性的抑制。本文中的实施例还在酶活性试验中表现出对TrkB和c-kit激酶的特异性抑制。FLT3抑制剂化合物还可透过细胞。
FLT3荧光偏振激酶试验 为了在体外激酶试验中测定式I’作为FLT3抑制剂的活性，使用以下荧光偏振(FP)规程进行对分离的人FLT3受体激酶结构域(a.a.571-993)的抑制。FLT3FP试验利用了在由Invitrogen提供的PanveraPhospho-Tyrosine Kinase Kit(Green)中包含的荧光素标记的磷酸肽和抗磷酸酪氨酸抗体。当FLT3使多聚Glu4Tyr磷酸化时，在抗磷酸酪氨酸抗体中，荧光素标记的磷酸肽被磷酸化的多聚Glu4Tyr取代，从而降低FP值。将FLT3激酶反应在以下条件下在室温下培养30分钟10nM FLT3571-993、20ug/mL poly Glu4Tyr、150uM ATP、5mM MgCl2、1％化合物含在DMSO中。通过加入EDTA使激酶反应终止。加入荧光素标记的磷酸肽和抗磷酸酪氨酸抗体并且在室温下培养30分钟。
所有的数据点是一式三份样品的平均值。使用GraphPad Prism进行抑制和IC50数据分析，使用非线性回归，与多参数、S形剂量-应答(可变斜率)方程拟合。激酶抑制的IC50表示与DMSO媒介物对照相比，产生激酶活性50％抑制的化合物剂量。
MV4-11和Baf3细胞增殖的抑制 为了评价式I’作为FLT3抑制剂的细胞效力，在白血病细胞系MV4-11(ATCC保藏号CRL-9591)中测量FLT3特异性生长抑制。MV4-11细胞得自患有幼年型急性粒-单核细胞白血病的患者，所述患者具有引起MLL基因重排的11q23易位并且包含FLT3-ITD突变(AML亚型M4)(参见Drexler HG.The Leukemia-Lymphoma Cell Line Factsbook.Academic PresSan Diego，CA，2000和Quentmeier H、Reinhardt J、Zaborski M、Drexler HG.FLT3 mutations in acute myeloid leukemia celllines.Leukemia. 2003 Jan；17120-124.)。MV4-11细胞在没有活性FLT3ITD的情况下不能生长和存活。
使用IL-3依赖性的鼠B细胞淋巴瘤细胞系Baf3作为对照，通过测量由FLT3抑制剂化合物引起的非特异性生长抑制证实FLT3抑制剂的选择性。
为了测量由试验化合物引起的增殖抑制，使用基于荧光素酶的CellTiterGlo试剂(Promega)，其基于总的细胞ATP浓度测量总细胞数。将细胞以每孔10,000个细胞铺板在100ul的RPMI培养基中，该培养基包含penn/strep、10％FBS和对于MV4-11和Baf3细胞分别为1ng/ml的GM-CSF或1ng/ml的IL-3。
将化合物稀释物或0.1％DMSO(媒介物对照)加入到细胞中并且允许细胞在标准细胞生长条件(37℃、5％CO2)下生长72小时。对于在50％血浆中生长的MV4-11细胞的活性测量，将细胞以每孔10,000个细胞铺板在生长培养基和人血浆为1∶1的混合物中(最终容积100μL)。为了测量总的细胞生长，根据生产商的说明书，将等体积的CellTiterGlo试剂加入到每个孔中，并且测定发光量。总的细胞生长被量化为，与第3天的总细胞数(72小时生长和/或化合物处理)相比的第0天细胞数的发光计数(相对光单位，RLU)的差。百分之百的生长抑制率被定义为等于第0天读数的RLU。零抑制百分率被定义为生长第三天DMSO媒介物对照的RLU信号。所有的数据点是一式三份样品的平均值。生长抑制的IC50表示在第三天引起DMSO媒介物对照的总细胞生长发生50％抑制的化合物的剂量。使用GraphPad Prism进行抑制和IC50数据分析，使用非线性回归，与多参数、S形剂量-应答(可变斜率)方程拟合。
MV4-11细胞表达FLT3内部串联重复突变，因此其生长完全依赖于FLT3活性。期望针对MV4-11细胞的强活性是本发明所期望的性质。相比之下，Baf3细胞增殖由细胞因子IL-3驱动，因此将Baf3细胞增殖用作试验化合物的非特异性毒性对照。本发明所有的化合物实施例在3uM的剂量下表现出＜50％抑制(未包括数据)，表明该化合物不具有细胞毒性，并且具有良好的FLT3选择性。
基于细胞的FLT3受体酶联免疫吸附测定(Elisa) FLT配体诱导的野生型FLT3磷酸化的特异性细胞抑制根据以下方式测量过度表达FLT3受体的Baf3 FLT3细胞得自Dr.MichaelHeinrich(Oregon Health and Sciences University)。通过用野生型FLT3对亲代Baf3细胞(生长依赖于细胞因子IL-3的鼠B细胞淋巴瘤细胞系)稳定转染产生Baf3FLT3细胞系。根据细胞在不存在IL-3和存在FLT3配体的条件下的生长能力选择细胞。
在37℃、5％CO2条件下，将Baf3细胞保存在具有10％FBS、penn/strep和10ng/ml FLT配体的RPMI1640中。为了测量对野生型FLT3受体活性和磷酸化的直接抑制，开发了三明治ELISA方法，其类似于用于其它RTK而开发的那些(参见Sadick，MD，Sliwkowski，MX，Nuijens，A，Bald，L，Chiang，N，Lofgren，JA，Wong WLT.Analysis ofHeregulin-Induced ErbB2 Phosphorylation with a High-Throughput KinaseReceptor Activation Enzyme-Linked Immunsorbent Assay，AnalyticalBiochemistry.1996；235207-214和Baumann CA，Zeng L，Donatelli RR，Maroney AC.Development of a quantitative，high-throughput cell-basedenzyme-linked immunosorbent assay for detection of colony-stimulatingfactor-1 receptor tyrosine kinease inhibitors.J Biochem Biophys Methods.2004；6069-79.)。将200μL的Baf3FLT3细胞(1×106/mL)铺板在96孔皿中，在含0.5％血清和0.01ng/mL IL-3的RPMI1640中培养16小时，随后与化合物或DMSO媒介物培养1小时。在37℃将细胞用100ng/mLFlt配体(R&D Systems Cat# 308-FK)处理10分钟。将细胞制成团粒(pelleted)，洗涤并在补充有磷酸酶(Sigma Cat# P2850)和蛋白酶抑制剂(Sigma Cat #P8340)的100ul细胞裂解缓冲液(50mM Hepes、150mMNaCl、10％甘油、1％Triton-X-100、10mM NaF、1mM EDTA、1.5mMMgCl2、10mM焦磷酸钠)中裂解。然后通过在4℃下以1000xg离心5分钟使裂解产物澄清。将细胞裂解产物转移到涂有50ng/孔的抗FLT3抗体(Santa Cruz Cat#sc-480)的白色壁96孔微量滴定板(Costar#9018)中并且用SeaBlock试剂(Pierce Cat#37527)封闭。将裂解产物在4℃培养2小时。将板用200ul/孔的PBS/0.1％Triton-X-100洗涤3次。然后在室温下将板与HRP-结合型抗磷酸酪氨酸抗体(Clone 4G10、UpstateBiotechnology Cat#16-105)的1∶8000稀释物培养1小时。将板用200ul/孔的PBS/0.1％ Triton-X-100洗涤3次。根据生产商的说明书用Berthold微板光度计进行信号检测，使用Super Signal Pico试剂((PierceCat#37070)。所有的数据点是一式三份样品的平均值。在存在0.1％DMSO对照条件下的Flt配体刺激的FLT3磷酸化的总的相对光单位(RLU)被定义为0％抑制百分率，100％抑制百分率是在基础状态下的裂解产物中的总的RLU。使用GraphPad Prism进行抑制和IC50数据分析，使用非线性回归，与多参数、S形剂量-应答(可变斜率)方程拟合。
生物学数据 FLT3的生物学数据 代表性的FLT3抑制剂化合物的活性在下表中表示。所有的活性以μM为单位，并且具有以下不确定性FLT3激酶±10％；MV4-11和Baf3-FLT3±20％。
*除非另外指出，化合物名称来自本领域技术人员公知的命名规则，或者得自标准IUPAC命名法参考文献，例如Nomenclature ofOrganic Chemistry，Sections A，B，C，D，E，F和H，(Pergamon Press，Oxford，1979，Copyright 1979 IUPAC)和A Guide to IUPACNomenclature of Organic Compounds(Recommendations 1993)，(BlackwellScientific Publications，1993，Copyright 1993 IUPAC)；或者得自市售的软件包例如Autonom(由CambridgeSoft.com销售的ChemDraw Ultra办公程序组中提供的命名软件品牌)；和ACD/Index NameTM(由AdvancedChemistry Development，Inc.，Toronto，Ontario销售的商业命名软件品牌)。
其它FLT3抑制剂 可用于本发明的其它FLT3激酶抑制剂包括AG1295和AG1296；来他替尼(又名CEP701，原名KT-5555，Kyowa Hakko，授权给Cephalon)；CEP-5214和CEP-7055(Cephalon)；CHIR-258(ChironCorp.)；EB-10和IMC-EB10(ImClone Systems Inc.)；GTP14564(MerkBiosciences UK)；米哚妥林(又名PKC412 Novartis AG)；MLN608(Millennium USA)；MLN-518(原名CT53518，COR TherapeuticsInc.，授权给Millennium Pharmaceuticals Inc.)；MLN-608(MillenniumPharmaceuticals Inc.)；SU-11248(Pfizer USA)；SU-11657(Pfizer USA)；SU-5416和SU5614；THRX-165724(Theravance Inc.)；AMI-10706(Theravance Inc.)；VX-528和VX-680(Vertex PharmaceuticalsUSA，授权给Novartis(Switzerland)，Merck&Co USA)；和XL999(Exelixis USA)。
制剂 本发明的FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂可以通过本领域中已知的和如本文中所述的方法制备和配制制剂。除了本文中所述的制备方法和制剂之外，本发明的法尼基转移酶抑制剂可以通过本领域描述的方法(例如本文中引用的出版物)制备和配制为药物组合物。例如，对于式(I)、(II)和(III)的法尼基转移酶抑制剂，适当的实例可以在WO-97/21701中找到。分别地，式(IV)、(V)和(VI)的法尼基转移酶抑制剂可以使用WO97/16443中所述的方法制备和配制制剂，式(VII)和(VIII)的法尼基转移酶抑制剂根据WO98/40383和WO98/49157中所述的方法，以及式(IX)的法尼基转移酶抑制剂根据WO00/39082中所述的方法。替比法尼(ZarnestraTM，又名R115777)及其活性较低的对映体可以通过WO97/21701中所述的方法合成。替比法尼被期待在不久的将来作为ZARNESTRATM上市，目前可根据要求(通过合同)得自Johnson&Johnson Pharmaceutical Research&Development，L.L.C.(Titusville，NJ)。
当使用单独的药物组合物时，根据常规的药物配制技术，将作为活性成分的FLT3激酶抑制剂或法尼基转移酶抑制剂与药物载体紧密地混合，载体可为各种形式，根据期望用于给药的制剂形式而定，例如，口服或胃肠外给予如肌内途径。同时具有FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂作为活性成分的单一药物组合物可以类似地进行制备。
在制备口服剂型的单独的组合物或者单一组合物时，可以利用任何通常的药物介质。因此，对于液体口服制剂，诸如例如，悬浮剂、酏剂和溶液剂，适当的载体和添加剂包括水、二醇类、油类、醇类、调味剂、防腐剂、着色剂等；对于固体口服制剂，诸如例如，粉末剂、胶囊、胶囊形片剂、软胶囊和片剂，适当的载体和添加剂包括淀粉、糖、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。由于易于给予，片剂和胶囊代表了最有利的口服剂量单元形式，在这些情况中，显然要利用固体药物载体。如果期望，片剂可通过标准技术进行包糖衣或包肠溶衣。对于胃肠外给予，载体通常包括无菌水，但是可包括其它成分，例如用于诸如有助于溶解度或便于保存的目的。也可制备可注射的悬浮剂，在该种情况下，可采用适当的液体载体、助悬剂等。在用于缓慢释放的制剂中，首先将缓释载体(典型地为聚合物载体)和本发明的化合物溶解或分散在有机溶剂中。然后将得到的有机溶液加入到水溶液中，得到水包油型乳液。优选地，水溶液包括表面活性剂。随后，将有机溶剂从水包油型乳液中蒸发掉，得到包含缓释载体和本发明化合物的粒子的胶态悬浮剂。
本文中的药物组合物，每剂量单位例如片剂、胶囊、粉末剂、注射剂、茶匙剂等将包含递送如上所述有效剂量所需量的活性成分。本文中的药物组合物每单位剂量(例如片剂、胶囊、粉末剂、注射剂、栓剂、荼匙剂等)包含每天约0.01mg到200mg/kg体重的范围。优选地，该范围为每天约0.03到约100mg/kg体重，最优选地，为每天约0.05到约10mg/kg体重。化合物可以按照每天1-5次的方案给予。然而，剂量可根据患者的需要、所治疗状况的严重程度和所采用的化合物而定。可以采用每天给药或一定时间间隔后给予(post-periodic dosing)。
优选地，这些组合物为单位剂量形式，例如片剂、丸剂、胶囊、粉末剂、颗粒剂、无菌的胃肠外溶液剂或悬浮剂、计量式气雾剂或液体喷雾剂、滴剂、安瓿剂、自喷射装置或栓剂；用于口服肠胃外、鼻内、舌下或直肠方式给予，或用于通过吸入或吹入方式给予。或者，组合物可为每周一次或每月一次给予的形式；例如活性化合物的不溶性盐(例如癸酸盐)可配置为提供用于肌肉内注射的储库型制剂。对于制备固体组合物例如片剂，将主要活性成分与药物载体(例如常规的压片剂成分，例如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸氢钙、或树胶)和其它药物稀释剂(例如水)混合，形成包含本发明化合物及其可药用盐的均匀混合物的固体预制剂组合物。当提及这些预制剂组合物为均匀的时候，意指活性成分均匀地分散在组合物中，使得组合物可以容易地被再分成相等的有效剂量形式，例如片剂、丸剂和胶囊。然后将这种固体预制剂组合物再分成上述类型的单位剂量形式，包含0.1到约500mg的本发明的活性成分。新型的组合物的片剂或丸剂可以包衣，或者以另外方式配制，以提供具有延长作用优点的剂型。例如，片剂或丸剂可包括内部剂量组份和外部剂量组份，后者为前者的包膜的形式。两种组分可以由足以抵抗在胃中崩解并且允许内部组份完整进入十二指肠或延迟释放的肠溶层隔开。有多种材料可用于这种肠溶层或包衣，这种材料包括多种聚合物酸类以及虫胶、乙酰基醇(acetyl alcohol)和醋酸纤维素等物质。
其中可单独混合FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂用于口服或注射给予的液体形式包括水溶液、适当调味的糖浆、水或油悬浮剂、和用食用油(例如棉子油、芝麻油、椰子油或花生油)调味的乳剂，以及酏剂和类似的药物媒介物。用于水悬浮剂的适当的分散剂或助悬剂包括合成的和天然的树胶，例如黄蓍胶、阿拉伯胶、藻酸盐、右旋糖酐、羧基甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或明胶。适当调味的助悬剂或分散剂的液体形式也可包括合成和天然的树胶，例如黄蓍胶、阿拉伯胶、甲基纤维素等。对于胃肠外给药，期望无菌的悬浮剂和溶液。在期望静脉内给予时，采用通常包含适当防腐剂的等渗制剂。
有利地，FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂可以单次日剂量(分别地或在单一的组合物中)给予，或者可将总的日剂量分成每天二、三或四次给予。此外，本发明的化合物(分别地或在单一的组合物中)可通过局部使用的适当的鼻内介质以鼻内形式给予，或者通过本领域技术人员公知的透皮的皮肤用贴片形式给予。为了以透皮递送系统的形式给予，在整个给药方案中剂量给药当然总是持续的而不是间断的。
例如，对于以片剂或胶囊形式口服给予，可以将活性药物组份(FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂分别地，或者在单一组合物的情况中一起)与口服的无毒可药用惰性载体例如乙醇、甘油、水等合并。此外，当期望或必要时，也可将适当的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂混合在混合物中。适当的粘合剂包括但不限于淀粉、明胶、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然和合成树胶(例如阿拉伯胶、黄蓍胶)或油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。
本发明的产物的日剂量可以在每名成年人每天1到5000mg的宽范围内变化。对于口服给予，优选组合物以片剂形式提供，包含0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0、100、150、200、250和500毫克活性成分，对所治疗患者进行对症剂量调整。药物的有效量通常以每天约0.01mg/kg到约200mg/kg体重的剂量提供。具体地，该范围为每天约0.03到约15mg/kg体重，更优选地，为每天约0.05到约10mg/kg体重。FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂(单独的，或者在单一组合物的情况中一起)可根据每天最多四次或更多次的方案给予，优选每天1到2次。
给予的最佳剂量可以容易地由本领域技术人员确定，并且随使用的具体化合物、给予方式、制剂的浓度、给予方式、和疾病状况的进展而变化。另外，与治疗的具体患者有关的因素，包括患者年龄、重量、膳食和给予时间，将导致需要调整剂量。
本发明的FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂也可以脂质体递送系统(例如小单层脂质体、大单层脂质体、和多层脂质体)的形式给予(分别地或在单一组合物中)。脂质体可以由各种脂质形成，包括但不限于两亲性脂质，例如卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、心磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸类、磷脂酰肌醇、二酰基三甲铵丙烷、二酰基二甲铵丙烷和硬脂酰胺，中性类脂(例如甘油三酯)，及其组合。它们可包含胆固醇，或者不含胆固醇。
本发明的FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂也可局部给予(分别地、或在单一组合物中)。可以利用任何递送装置，例如血管内给药的导管、金属丝、药理学支架和腔内铺面。用于这种装置的递送系统可包括以投药者控制的速度递送化合物的局部用输注导管。
本发明提供包括腔内医疗装置(优选支架)、治疗剂量的本发明的FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂的给药装置。或者，本发明提供通过包括腔内医疗装置(优选支架)的给药装置单独给予本发明的FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂中的一种或其两者的治疗剂量。
术语“支架”是指能够通过导管递送的任何装置。支架通常用于预防由于物理反常事件(例如由于外科创伤引起的不希望的血管组织向内生长)起的血管栓塞。其通常为适合于留置于管腔内以减轻阻塞的管状张开的网格型结构。支架具有与腔壁接触的表面和暴露于腔的表面。与腔壁接触的表面为管的外表面，暴露于腔的表面为管的内表面。支架由聚合物、金属或聚合物和金属制成，并且可任选为生物可降解的。
本发明的FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂(分别地、或在单一组合物中)可以多种方式和利用任何的许多生物相容材料结合在支架中或者固定于支架上。在一个示例性实施方案中，将化合物直接结合到聚合物基质(例如聚合物聚吡咯)中，并且随后涂覆在支架的外表面上。凭借化合物通过聚合物的扩散从基质被洗脱。支架和在支架涂覆药物的方法在本领域中有详细描述。在另一个示例性实施方案中，将支架首先用乙烯-共聚-乙酸乙烯酯和聚甲基丙烯酸丁酯涂覆，作为包括化合物溶液的基础层。然后，将支架另外涂覆只包括聚甲基丙烯酸丁酯的外层。外层作为阻止化合物太快洗脱和进入周围组织的扩散障碍。外层或顶层的厚度决定化合物从基质被洗脱的速率。支架和涂覆方法在WIPO出版物WO9632907、美国公开号2002/0016625及其中披露的参考文献中详细论述。
为了更好地理解和说明本发明及其示例性实施方案和优点，参考以下实验部分。
实验 试验了FTI和FLT3抑制剂的组合对AML细胞生长的抑制。使用两种FTI(替比法尼和FTI化合物176(FTI-176))和八种新型的FLT3抑制剂(化合物A、B、C、D、E、F、G和H)在体外抑制FLT3依赖性细胞类型的生长(参见描述试验化合物的图5)。
试验的细胞系包括生长依赖于FLT3ITD突变活性的那些(MV4-11和Baf3-FLT3ITD)、生长依赖于FLT3wt活性的那些(Baf3FLT3)，以及生长独立于FLT3活性的那些(THP-1)。MV4-11(ATCC保藏号CRL-9591)细胞得自患有幼年型急性粒-单核细胞白血病的患者，所述患者具有引起MLL基因重排的11q23易位并且包含FLT3-ITD突变(AML亚型M4)(参见Drexler HG.The Leukemia-Lymphoma Cell Line Factsbook.AcademicPresSan Diego，CA，2000和Quentmeier H，Reinhardt J，Zaborski M，Drexler HG.FLT3 mutations in acute myeloid leukemia cell lines.Leukemia.2003 Jan；17120-124.)。Baf3-FLT3和Baf3-FLT3ITD细胞系得自Dr.Michael Henrich和the Oregon Health Sciences University。Baf3FLT3细胞系通过用野生型FLT3或在受体的近膜结构域包含引起结构活化的ITD插入物的FLT3对亲代Baf3细胞(生长依赖于细胞因子IL-3的鼠B细胞淋巴瘤细胞系)进行稳定转染而产生。根据细胞在IL-3不存在和FLT3配体(Baf3-FLT3)存在或独立于任何生长因子(Baf3-ITD)的条件下的生长能力选择细胞。THP-1(ATCC保藏号TIB-202)细胞分离得自具有N-Ras突变并且没有FLT3异常的幼年AML患者。虽然该细胞表达功能性FLT3受体，但是THP-1细胞的生存能力和生长不依赖于FLT3活性(数据未显示)。
使用标准的72小时细胞增殖试验测定单个化合物单独对于每个细胞系的剂量应答(参见图6.1-6.8)。在所有的试验中使用标准化疗剂-阿糖胞苷-作为对照细胞毒药物。FTI替比法尼根据细胞类型而定具有较高纳摩尔到较高皮摩尔的效力范围。FLT3抑制剂化合物(A、B、C、D、E、F、G和H)在生长依靠于FLT3的细胞中对抑制FLT3驱动的增殖(与第一线细胞毒药物阿糖胞苷和替比法尼相比)分别具有好的效力(亚微摩尔)。这些化学上不同的化合物中的每一个单独具有治疗FLT3相关病症(例如FLT3阳性的AML)的可能性。阿糖胞苷抑制的增殖与先前报道的其在MV4-11细胞中的体外活性不相上下(1-2μM)(Levis、M.、et al.(2004)“In vitro studies of a FLT3 inhibitor combined with chemotherapysequence of administration is important to achieve synergistic cytotoxiceffects.”Blood.104(4)1145-50)。试验的FLT3抑制剂对THP-1增殖没有影响。将每种化合物在每种细胞系中的IC50计算值用于随后的组合实验，以计算化合物组合对细胞增殖的协同效应。(参见以下的图10.1-10.8和表1-3) 然后检查FLT3抑制剂化合物A的单(亚IC50)剂量对替比法尼效力的影响。每个细胞系同时用一个剂量的FLT3抑制剂化合物A和改变剂量的替比法尼处理，根据标准72小时细胞增殖规程评价细胞的增殖。然后根据后文的生物活性部分中所述的方法计算替比法尼的IC50(参见描述FLT3抑制剂化合物A和替比法尼组合的结果的图7a-c)。试验的细胞系包括生长依赖于FLT3ITD突变活性的细胞系(MV4-11和Baf3-FLT3ITD)、生长依赖于FLT3M活性的细胞系(Baf3FLT3)，以及生长独立于FLT3活性的细胞系(THP-1)。
FLT3抑制剂化合物A显著增加FTI替比法尼抑制AML(MV4-11)和FLT3依赖性(Baf3-ITD和Baf3-FLT3)细胞增殖的效力。在(a)MV4-11(50nM)；(b)Baf3-ITD(50nM)和(c)Baf3-FLT3(100nM)中使用单一亚IC50剂量的FLT3抑制剂化合物A，在试验的每种细胞系中，替比法尼效力增加超过3倍。这表明有显著的协同作用。
然后，在MV4-11、Baf3-ITD和Baf3-FLT3细胞系中评价FTI替比法尼和FLT3抑制剂化合物A的单剂量给药组合。这种单剂量给药组合方案更接近地代表了临床中使用的化学治疗组合的剂量给药策略。使用这种方法，将细胞同时用单一亚IC50剂量的每种化合物、或化合物的组合处理，并且监测增殖抑制。使用这种方法，观察到亚IC50剂量的FTI替比法尼和FLT3抑制剂化合物A的组合在抑制AML细胞系MV4-11和其它FLT3依赖性细胞的生长方面超过了其相加的效力(参见图8a-d)。在增殖不依赖FLT3的细胞(THP-1)中没有观察到这种与替比法尼的协同效应。在FLT3抑制剂化合物A和阿糖胞苷的组合中也发现这种协同效应。
另外，考察FLT3抑制剂和FTI的单剂量给药组合，以测定这些活性是否是化合物特异性的或基于机理的。试验了单一亚IC50剂量的FLT3抑制剂化合物B或D与替比法尼对MV4-11增殖的抑制。观察到，与替比法尼和FLT3抑制剂化合物A的组合相似，FLT3抑制剂化合物B或D与替比法尼的组合以大于相加的效力抑制FLT3依赖性MV4-11细胞的增殖。这样我们就可以假定，任何FLT3抑制剂和FTI的组合都可以协同地抑制FLT3依赖性AML细胞的增殖。这种观察结果是新颖的并且是本领域技术人员非显而易见的。使用FLT3抑制剂化合物B或D与阿糖胞苷的组合也观察到协同作用。
为了统计学评价FLT3抑制剂与FTI在FLT3依赖性细胞系中的协同作用，通过Chou-Talalay法评价剂量给药组合。参见Chou TC、TalalayP.(1984)“Quantitative analysis of dose-effect relationshipsthe combinedeffects of multiple drugs or enzyme inhibitors.”Adv Enzyme Regul.2227-55。使用这种方法，将抑制剂以各自化合物单独时的IC50剂量的比率同时加入到细胞中。收集数据并且如Chou-Talalay法所述对固定比率剂量组合进行等效剂量(isobolar)分析。这种分析用于产生组合指数即CI。CI值＝1相当于化合物的相加作用，CI值＜0.9认为是协同作用，CI值＞1.1认为是拮抗作用。使用这种方法，评价了多种FTI和FLT3组合。对于每种实验组合，在每种FLT3依赖性细胞系中计算每种单独化合物的IC50(参见图6.1-6.8)，然后在标准细胞增殖试验中进行固定比率剂量给药(在包括9、3、1、1/3、1/9×单独化合物IC50的剂量范围下)。图10.1-10.8总结了使用Calcusyn软件(Biosoft)得到的，自根据Chou-Talalay法进行等效剂量分析固定比率剂量给药的原始数据。使用等效剂量分析方法(isobologram)，可以用图示方式表示协同作用。相加作用的组合的数据点沿着所给剂量作用的等效剂量线(isobolarline)(CI＝1)布置。协同作用的组合的数据点落在所给剂量作用的等效剂量线的左侧，或者下方(CI＜0.9)。拮抗作用的组合的数据点落在所给剂量作用的等效剂量线的右侧，或者上方(CI＞1.1)。图10.1a-c总结了对FLT3抑制剂化合物A与替比法尼在MV4-11、Baf3-ITD和Baf3-wtFLT3细胞系中的组合进行的等效剂量分析。从等效剂量分析可见，在所有用实验方法确定的数据点都观察到协同作用，包括引起细胞增殖50％抑制的组合剂量(ED50)、细胞增殖75％抑制的组合剂量(ED75)和细胞增殖90％抑制的组合剂量(ED90)。这些点中的每一个都显著地落在等效剂量(或相加)线的左侧，显示出显著的协同作用。FLT3抑制剂化合物A和替比法尼的组合在试验的每种FLT3依赖性细胞系中都产生显著的增殖抑制协同作用。在图10.1a-c中描述的等效剂量分析方法的组合指数在以下的表1-3中表示。
另外，图10.2a-b总结了使用化学上不同的FLT3抑制剂、FLT3抑制剂化合物B和替比法尼的组合进行的等效剂量分析。与FLT3抑制剂化合物A和替比法尼的组合相似，FLT3抑制剂化合物H和替比法尼的组合在所有试验剂量下和在试验的所有FLT3依赖性细胞系中对细胞增殖的抑制具有协同作用。在图5.2a-c中描述的等效剂量分析方法的组合指数在以下的表1-3中表示。此外，图5.3a-c总结了使用替比法尼和另一种化学上不同的FLT3抑制剂(FLT3抑制剂化合物E)的组合进行的等效剂量分析。与其它组合试验的情况一样，FLT3抑制剂化合物E和替比法尼的组合在试验的所有剂量下在三种不同的细胞系中都协同抑制FLT3依赖性增殖。在图5.3a-c中描述的等效剂量分析方法的组合指数在以下的表1-3中表示。
为了进一步扩展组合研究，还试验了与替比法尼表现出协同作用的每种FLT3抑制剂与另一种法尼基转移酶抑制剂FTI-176的组合。表1-3总结了在上述三种FLT3依赖性细胞系中试验的所有组合中得到的结果。每种组合的组合指数包含在表1-3中。
表1 表1FLT3抑制剂和FTI的组合(试验的所有组合)协同抑制MV4-11AML细胞的增殖，这通过组合指数(CI)测量。如随后在生物活性测量部分中所总结的，在单独化合物的增殖IC50的固定比率下进行组合。通过Chou-Talalay法并且使用Calcusyn软件(Biosoft)计算IC50和CI值。CI和IC50值是每个数据点重复三次的三次独立实验的平均值。
表2 表2FLT3抑制剂和FTI的组合(试验的所有组合)协同抑制用100ng/ml FLT配体刺激的Baf3-FLT3细胞的增殖，这通过组合指数(CI)测量。如随后在生物活性测量部分中所总结的，在单独化合物的增殖IC50的固定比率下进行组合。通过Chou-Talalay法并且使用Calcusyn软件(Biosoft)计算IC50和CI值。CI和IC50值是每个数据点重复三次的三次独立实验的平均值。
表3 表3FLT3抑制剂和FTI的组合(试验的所有组合)协同抑制Baf3-ITD细胞的增殖，这通过组合指数(CI)测量。如随后在生物活性测量部分中所总结的，在单独化合物的增殖IC50的固定比率下进行组合。通过Chou-Talalay法并且使用Calcusyn软件(Biosoft)计算IC50和CI值。CI和IC50值是每个数据点重复三次的三次独立实验的平均值。
在使用的所有FLT3依赖性细胞系中观察到，试验的所有FTI和FLT3的组合都具有组合给药的协同作用。FTI和FLT3抑制剂的组合简化单独化合物抗增殖作用平均3-4倍。可以推断所观察到的FLT3抑制剂和FTI的组合的协同作用是基于机理的现象，而与单独的FTI或FLT3抑制剂的具体化学结构无关。因此，对于FLT3抑制剂和替比法尼或任何其它FTI的任何组合，都会观察到协同生长抑制作用。
治疗FLT3相关病症的最终目标是杀死致病性细胞和引起疾病消退。为了考查FTI/FLT3抑制剂的组合对FLT3依赖性的致病性细胞(特别是AML、ALL和MDS细胞)的细胞死亡是否具有协同作用，试验了替比法尼和FLT3抑制剂化合物A的组合诱导MV4-11细胞中荧光标记的膜联蛋白V染色增加的能力。膜联蛋白V结合于已从质膜内部小叶移位到质膜外部小叶的磷脂酰丝氨酸并且是测量细胞的细胞程序死亡沿用已久的方法。参见van Engeland M.，L.J.Nieland等人(1998)“Annexin V-affinity assaya review on an apoptosis detection system basedon phosphatidylserine exposure.”Cytometry.31(1)1-9。
在标准细胞培养条件下将替比法尼和FLT3抑制剂化合物A单独、或以固定比率(4∶1，基于每种药物单独计算的EC50)对MV4-11细胞进行培养48小时。在化合物培养之后，收获处理的细胞并且根据随后的生物活性测量部分中的规程使用Guava Nexin细胞程序死亡试剂盒用膜联蛋白V-PE和7-AAD染色。膜联蛋白V染色在60％达峰，因为细胞在细胞程序死亡末期开始瓦解并且认为是碎片。然而，由于这种数据的稳定S形动力学，可以从这种数据计算EC50。从图11a中总结的数据，推断替比法尼和FLT3抑制剂化合物A的组合比任一种药物单独诱导MV4-11细胞程序死亡更显著有效。对于FLT3抑制剂(FLT3抑制剂)化合物A，诱导膜联蛋白V染色的EC50改变超过4倍。对于FTI(替比法尼)，诱导膜联蛋白V染色的EC50改变超过八倍。还进行了使用上述Chou-Talalay法进行的统计分析以测定组合的协同作用。图11b描述替比法尼和FLT3抑制剂化合物A的组合在诱导膜联蛋白V染色中的等效剂量分析。所有的数据点显著地落在等效剂量线的左侧。组合的CI值列在图11c中的表中。在膜联蛋白V染色(和诱导细胞程序死亡)时观察到的协同作用比观察到的FLT3抑制剂和FTI的组合对于增殖的协同作用更显著。由FTI和FLT3抑制剂的组合协同诱导的MV4-11细胞程序死亡的程度不能由本领域技术人员预见。因此，基于得自增殖的数据，FLT3抑制剂和FTI的任何组合对于诱导FLT3依赖性细胞(即，FLT3病症的致病性细胞，特别是AML、ALL和MDS细胞)的细胞程序死亡也都具有协同作用。
为了证实FLT3抑制剂和FTI的组合协同活化FLT3依赖性细胞的细胞程序死亡，试验了几种FLT3抑制剂和FTI替比法尼的组合在MV4-11细胞中诱导半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7活性的能力。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活化(细胞程序死亡细胞死亡过程的最终完成中的关键步骤)可以由各种多种细胞刺激物诱导，细胞刺激物包括生长因子撤回(withdrawal)或生长因子受体抑制，参见Hengartner，MO.(2000)“Thebiochemistry of apoptosis.”Nature 407770-76和Nunez G，Benedict MA，Hu Y，Inohara N.(1998)“Caspasesthe proteases of the apoptoticpathway.”Oncogene 173237-45。细胞的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活化可以使用合成的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7底物(所述底物裂解释放荧光素酶的底物)进行监测，其可将底物转化为发光产物。参见Lovborg H，Gullbo J，Larsson R.(2005)“Screening for apoptosis-classical andemerging techniques.”Anticancer Drugs 16593-9。根据随后的生物活性测量部分中的规程使用得自Promega(Madison，WI)的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶Glo技术监测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活化。
进行单独的EC50测定以建立用于协同作用组合分析的剂量比率。图12a-d总结了每种单独药物的EC50测定。对于组合实验，在标准细胞培养条件下，将替比法尼和FLT3抑制剂化合物B、C和D以固定比率(基于单独每种药物计算的EC50)在不同剂量下(范围包括9、3、1、1/3、1/9×单独化合物EC50)与MV4-11细胞一起培养24小时。在24小时之后，根据生产商的说明书和在随后生物活性测量部分中的详述测量半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7活性。图13.1-13.3总结了在MV4-11细胞中使用替比法尼和FLT3抑制剂化合物B、C和D的组合观察到的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活化的协同作用(通过前述的Chou-Talalay法)。在试验的所有剂量下和试验的所有组合中都观察到协同作用。在MV4-11细胞中所观察到的FLT3抑制剂和FTI的组合对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活化(和诱导细胞程序死亡)的协同作用比对增殖的协同作用更显著。由FTI和FLT3抑制剂的组合协同诱导的MV4-11细胞程序死亡的程度不能由本领域技术人员预见。因此，基于得自增殖的数据，FLT3抑制剂和FTI的任何组合对于诱导FLT3依赖性细胞(即，FLT3病症的致病性细胞，特别是AML、ALL和MDS细胞)的细胞程序死亡也都具有协同作用。
已经确定FLT3受体和下游激酶例如MAP激酶的磷酸化是FLT3受体增殖作用所需的。参见Scheijen，B.和J.D.Griffin(2002)″Tyrosinekinase oncogenes in normal hematopoiesis and hematological disease.″Oncogene 21(21)3314-33。我们假定使用FLT3抑制剂和FTI观察到的协同作用的分子机制与化合物诱导的FLT3受体信号(其为AML细胞增殖和存活所需的)降低相关。为了对其进行试验，我们根据在随后生物活性测量部分中详述的规程使用市售试剂在MV4-11细胞中考察FLT3-ITD受体和FLT3受体活性的下游靶的磷酸化状态、MAP激酶(erk1/2)磷酸化。在标准细胞生长条件下，将MV4-11细胞用所示浓度的FLT3抑制剂化合物A(单独的、或与替比法尼的组合)处理48小时。对于FLT3磷酸化的分析，收获细胞并将FLT3免疫沉淀并且通过SDS-PAGE分离。对于MAP激酶(erk1/2)磷酸化的分析，收获细胞，进行裂解，通过SDS-Page分离并且转移到硝化纤维进行免疫印迹分析。为了定量分析FLT3磷酸化，使用磷酸酪氨酸抗体对免疫印迹进行探测并且使用Molecular Dynamics Typhoon Image Analysis对phophoFLT3信号定量。然后将免疫印迹剥离并且再次探测以对总的FLT3蛋白质信号定量。使用磷酸化与总蛋白信号的这一比率计算化合物剂量应答的近似IC50。为了定量分析MAP激酶(ERK1/2)磷酸化，使用磷酸特异性ERK1/2抗体探测免疫印迹并且使用Molecular Dynamics Typhoon Image Analysis对phophoERK1/2信号定量。然后将免疫印迹剥离并且再次探测以对总的ERK1/2蛋白质信号定量。使用磷酸化与总蛋白信号的这一比率计算化合物剂量应答的近似IC50。使用GraphPad Prism软件计算IC50值。这项工作的结果总结在图14中。
观察到替比法尼和FLT3抑制剂化合物A的组合使得FLT3抑制剂化合物A的抑制FLT3磷酸化和MAP激酶磷酸化的效力增加一到二倍。这与化合物抗增殖作用效力的增加相符。使用FTI/FLT3抑制剂的组合所观察到的FLT3磷酸化作用在以前没有报导。这种影响FLT3磷酸化的机理是未知的，但是从基于上述对增殖抑制所收集的试验数据来看，可以预言对于任何FTI/FLT3抑制剂的组合都会如此。
体外生物活性测量 试剂和抗体细胞Titerglo增殖试剂得自Promega Corporation。蛋白酶抑制剂鸡尾酒(cocktails)和磷酸酶抑制剂鸡尾酒II购自Sigma(St.Louis，MO)。GuavaNexin细胞程序死亡试剂购自Guava technologies(Hayward，CA)。Superblock缓冲液和SuperSignal Pico试剂购自PierceBiotechnology(Rockford，IL)。荧光偏振酪氨酸激酶试剂盒(Green)得自Invitrogen。小鼠抗磷酸酪氨酸(4G10)抗体购自Upstate Biotechnology，Inc(Charlottesville，VA)。抗人FLT3(兔IgG)购自Santa Cruzbiotechnology(Santa Cruz，CA)。抗磷酸Map激酶和总p42/44 Map激酶抗体购自Cell Signaling Technologies(Beverly，MA)。碱性磷酸酶结合型山羊抗兔IgG、和山羊抗小鼠IgG抗体购自Novagen(San Diego，CA)。DDAO磷酸盐购自Molecular Probes(Eugene，OR)。所有的组织培养试剂购自BioWhitaker(Walkersville，MD)。
细胞系THP-1(Ras突变型，FLT3野生型)和人MV4-11(结构性表达FLT3-内部串联重复或从具有t15；17易位AML患者分离的ITD突变型)AML细胞(参见Drexler HG.The Leukemia-Lymphoma Cell LineFactsbook.Academic PresSan Diego，CA，2000and Quentmeier H，Reinhardt J，Zaborski M，Drexler HG.FLT3 mutations in acute myeloidleukemia cell lines.Leukemia.2003年1月；17120-124.)得自ATCC(Rockville，MD)。表达人野生型FLT3(Baf3-FLT3)和ITD-突变的FLT3(Baf3-ITD)的IL-3依赖性鼠B细胞祖细胞系Baf3得自Dr.MichaelHeinrich(Oregon Health Sciences University)。将细胞保持在包含penn/strep、10％FBS(单独)(THP-1、Baf3-ITD)、以及2ng/ml GM-CSF(MV4-11)或10ng/ml FLT配体(Baf3-FLT3)的RPMI培养基中。MV4-11、Baf3-ITD和Baf3-FLT3细胞的生长都完全依赖于FLT3活性。GM-CSF在MV4-11细胞中增强FLT3-ITD受体的活性。
对MV4-11、Baf3-ITD、Baf3-FLT3和THP-1细胞进行的细胞增殖试验为了测量试验化合物的增殖抑制，使用基于荧光素酶的CellTiterGlo试剂(Promega)。将细胞以每孔10,000个细胞铺板在包含penn/strep、10％FBS(单独)(THP-1、Baf3-ITD)、以及0.2ng/ml GM-CSF(MV4-11)或10ng/ml FLT配体(Baf3-FLT3)的100ul的RPMI培养基中。将化合物稀释物或0.1％DMSO(介质对照)加入到细胞中并且允许细胞在标准细胞生长条件(37℃，5％CO2)下生长72小时。在组合实验中，将试验药物同时加入到细胞中。将总的细胞生长量化为与第3天总细胞数(72小时生长和/或化合物处理)相比的第0天细胞数的发光计数(相对光单位，RLU)的差。百分之百的生长抑制率被定义为等于第0天读数的RLU。零抑制百分率被定义为在生长第三天DMSO媒介物对照的RLU信号。所有的数据点是一式三份样品的平均值。生长抑制的IC50表示在第三天引起DMSO媒介物对照的总细胞生长50％抑制的化合物的剂量。使用GraphPad Prism进行IC50数据分析，使用非线性回归，与多参数、S形剂量-应答(可变斜率)方程拟合。
免疫沉淀反应和定量免疫印迹分析使MV4-11细胞在补充有10％胎牛血清、2ng/ml GM-CSF的DMEM中生长并且保持为1×105和1×106个细胞/毫升之间。对于Map激酶磷酸化的蛋白质印迹分析，在每种条件下使用1×106个MV4-11细胞。对于考查FLT3-ITD磷酸化的免疫沉淀实验，在每种实验条件下使用1×107个细胞。在化合物处理之后，将MV4-11细胞用冷的1xPBS洗涤一次并且用HNTG裂解缓冲液(50mMHepes，150mM NaCl，10％甘油，1％ Triton-X-100，10mM NaF，1mMEDTA，1.5mM MgCl2，10mM焦磷酸钠)+4ul/ml蛋白酶抑制剂鸡尾酒(Sigma cat.#P8340)+4ul/ml磷酸酶抑制剂鸡尾酒(Sigma Cat#P2850)裂解。通过离心(5000rpm，5分钟，4℃)从细胞裂解产物除去细胞核和碎片。将用于免疫沉淀的细胞裂解产物在4℃下用琼脂糖-蛋白A/G澄清30分钟，并且在4℃下使用3ug的FLT3抗体进行免疫沉淀1小时。然后将免疫复合物在4℃下与琼脂糖-蛋白A/G一起培养1小时。将蛋白A/G免疫沉淀物在1.0ml HNTG裂解缓冲液中洗涤三次。将免疫沉淀物和细胞裂解产物(40ug总蛋白)在10％SDS-PAGE凝胶上解析，并且将蛋白质转移到硝化纤维膜上。对于抗磷酸酪氨酸免疫印迹分析，将膜用SuperBlock(Pierce)封闭并且用抗磷酸酪氨酸(克隆4G10，UpstateBiotechnologies)、随后用碱性磷酸酶结合型山羊抗小鼠抗体印迹2小时。对于抗磷酸MAP激酶蛋白质印迹分析，将膜用Super block封闭1小时并且在初次抗体中印迹过夜，随后与AP结合型山羊抗兔二次抗体一起培养。通过使用Molecular Dynamics Typhoon Imaging system(MolecularDynamics，Sunyvale，CA)测量碱性磷酸酶与底物9H-(1，3-二氯-9，9-二甲基吖啶-2-酮-7-基)磷酸二铵盐(DDAO磷酸盐)(Molecular Probes)的反应的荧光产物进行蛋白质的检测。将印迹剥离并且用抗FLT3抗体再次探测，用于磷酸化信号的归一化。使用Molecular Dynamics ImageQuant和GraphPad Prism软件进行DDAO磷酸盐信号的定量和IC50测定。
膜联蛋白V染色为了考查白血病MV4-11细胞系的细胞程序死亡，将细胞用替比法尼和/或FLT3抑制剂化合物A处理，并且使用GuavaNexin检测试剂和Guava personal流式细胞计系统(GuavaTechnologies；Hayward，CA)监测细胞程序死亡细胞质膜外部小叶上的与磷脂酰丝氨酸结合的膜联蛋白V。将MV4-11细胞以每毫升200,000个细胞铺板在包含不同浓度的替比法尼和/或FLT3抑制剂化合物A的组织培养基中，并且在37℃、5％CO2中培养48小时。通过在4℃下在400×g离心10分钟收获细胞。然后将细胞用1xPBS洗涤并且以1×106细胞/ml再悬浮在1×Nexin缓冲液中。将5μl膜联蛋白V-PE和5μl 7-AAD加入到40μl的细胞悬浮液中并且在冰上避光培养20分钟。将450ml的冷的1×Nexin缓冲液加入到每个样品中，然后在Guava细胞计上根据生产商的说明书对细胞计数。认为所有的膜联蛋白阳性细胞的细胞程序死亡，并计算膜联蛋白阳性细胞的百分比。
半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7活化试验使MV4-11细胞在包含pen/strep、10％FBS和1ng/mL GM-CSF的RPMI培养基中生长。通过每2-3天进行给料/分裂使细胞维持在2×105个/mL到8×105个细胞/mL之间。细胞离心并且以2×105个细胞/mL再悬浮在包含Penn/Strep、10％FBS和0.1ng/mL GM-CSF的RPMI培养基中。在不同浓度的试验化合物或DMSO存在条件下，将MV4-11细胞以每孔20,000个细胞在100μL包含penn/strep、10％FBS(单独)，和0.1ng/mL GM-CSF(Corning CostarCat#3610)的RPMI培养基中铺板。在组合实验中，将试验药物同时加入到细胞中。将细胞在37℃、5％CO2下培养24小时。在24小时培养之后，根据生产商的说明书使用Promega半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶Glo试剂(Cat#G8090)测量半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活性。简而言之，将半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶Glo底物用10mL半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶Glo缓冲液稀释。将一体积的稀释半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶Glo试剂加入到一体积组织培养基中并且在旋转定轨振荡器上混合2分钟。在室温下培养60分钟之后，在Berthold光度计使用1秒程序测量光发射。基线半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活性被定义为等于用DMSO媒介物(0.1％DMSO)处理的细胞的RLU。使用GraphPad Prism完成EC50数据分析，使用非线性回归，与多参数、S形剂量-应答(可变斜率)方程拟合。
组合指数分析为了根据Chou-Talalay法(Chou and Talalay.参见Chou TC，Talalay P.(1984)“Quantitative analysis of dose-effectrelationshipsthe combined effects of multiple drugs or enzyme inhibitors.”Adv Enzyme Regul.2227-55.)测定FTI和FLT3抑制剂组合的生长抑制协同作用，使用等效剂量统计分析进行固定比率组合给予。将试验药物在每种细胞系的单个增殖IC50的固定比率下合并并且在包括9、3、1、1/3、1/9倍于所测定的IC50剂量的不同浓度下给予。为了测量试验组合的增殖抑制，使用基于荧光素酶的CellTiterGlo试剂(Promega)。将细胞以每孔10,000个细胞铺板在包含penn/strep、10％FBS(单独)(THP-1，Baf3-ITD)、以及0.1ng/ml GM-CSF(MV4-11)或100ng/ml FLT配体(Baf3-FLT3)的100ul的RPMI培养基中。总的细胞生长被量化为与第3天总细胞数(72小时生长和/或化合物处理)相比的第0天细胞数的发光计数(相对光单位，RLU)的差。所有的数据点是一式三份样品的平均值。百分之百的生长抑制率被定义为等于第0天读数的RLU。零抑制百分率被定义为在生长第三天DMSO媒介物对照的RLU信号。使用Calcsyn(BioSoft，Ferguson，MO)分析抑制数据并且计算组合指数(C.I.)。C.I.值＜0.9认为具有协同作用。
体内组合研究 使用FLT3抑制剂化合物B和D检测FLT3抑制剂(FLT3抑制剂化合物)和替比法尼(ZarnestraTM)的组合治疗对裸鼠中MV-4-11人AML肿瘤异种移植物生长的影响。设计体内试验用于扩展体外观察结果，以评价FLT3抑制剂化合物B和D各自与替比法尼一起口服给予对带有确立MV-4-11肿瘤异种移植物的裸鼠的协同抗肿瘤作用的潜力。
FLT3抑制剂化合物B单独的抗肿瘤作用 雌性无胸腺裸鼠(CD-1，nu/nu，9-10周龄)得自Charles RiverLaboratories(Wilmington，MA)并且根据NIH标准护养。在洁净的室内条件下，所有小鼠分组被安置(5只小鼠/笼)在无菌的微型隔离笼中，以12小时照明/黑暗循环，室内保持21-22℃和40-50％的湿度。给小鼠喂养经辐射的标准啮齿动物饮食并且不限量供应水。将所有的动物安置在完全由the American Association for Assessment and Accreditation ofLaboratory Animal Care(AAALAC)认可的Laboratory Animal Medicine设备中。涉及动物的所有操作依照the NIH Guide for the Care and Use ofLaboratory Animals进行，并且所有的规程由Internal Animal Care andUse Committee(IACUC)审定。
人白血病MV4-11细胞系得自美国典型培养物保藏中心(theAmerican Type Culture Collection)(ATCC保藏号CRL-9591)并且在包含10％FBS(胎牛血清)和5ng/mL GM-CSF(R&D Systems)的RPMI培养基中繁殖。MV4-11细胞得自患有幼年型急性粒-单核细胞白血病的患者，该患者带有引起MLL基因重排的11q23易位并且包含FLT3-ITD突变(AML亚型M4)(1，2)。由于自然发生的FLT3/ITD突变，MV4-11细胞结构性表达活性的磷酸化FLT3受体。期望在裸鼠肿瘤异种移植物模型中针对MV4-11瘤生长的强抗肿瘤活性是本发明合乎需要的性质。
在先导生长研究中，确定以下条件允许在裸鼠中作为皮下实体瘤异种移植物的MV4-11细胞生长在即将注射之前，将细胞在PBS中洗涤并且计数，悬浮在1∶1的PBSMatrigel混合物(BD Biosciences)中，然后加载到预先冷却的装备25号针头的1cc注射器中。通过在0.2mL的递送量中包含5×106个肿瘤细胞在大腿左侧腹股沟区对重量不低于20-21克的雌性无胸腺裸鼠进行皮下接种。对于退化研究，在开始给药之前让肿瘤生长到预定尺寸。在肿瘤细胞接种之后约3周，将带有从106到439mm3大小(有60只小鼠在此范围内)皮下肿瘤的小鼠随机分为处理组，使得所有处理组具有相似的起始平均肿瘤体积(～200mm3)。通过在一周除周末外的日子每天两次(b.i.d.)和在周未每天一次(q.d.)管饲媒介物(对照组)或不同剂量的化合物对小鼠进行口服给药。给药持续11个连续日，根据用媒介物处理的对照小鼠中的瘤生长的动力学和肿瘤大小而定。如果对照小鼠中的肿瘤达到体重的～10％(～2.0克)，研究终止。每天新制备FLT3抑制剂化合物，其为在20％ HPβCD/2％NMP/10mM磷酸钠，pH3-4(NMP＝Pharmasolve，ISP Technologies，Inc.)或者其它适当的媒介物中的透明溶液(1、3和10mg/mL)，并且如上所述口服给药。在研究过程中，使用电子游标卡尺每周三次(M，W，F)测量肿瘤生长。使用式(L×W)2/2计算肿瘤体积(mm3)，其中L＝肿瘤的长度(mm)和W＝肿瘤的宽度(最短距离，mm)。每周测量三次体重，并且将体重减轻超过10％用作缺乏化合物耐受性(tolerability)的指示。不可接受的毒性被定义为在研究过程中体重损失超过20％。每天在每次给药时仔细检查小鼠是否有有害的、与药物相关的副作用的明显临床征兆。
在研究终止的当天，测量每只动物的最终肿瘤体积和最终体重。将小鼠用100％CO2安乐死，并且立即将肿瘤完整切除和称重，最终肿瘤湿重(克)作为初级效力终点。
FLT3抑制剂化合物对MV4-11肿瘤生长的抑制效果随时间的变化在图1中说明。数值表示每个处理组中15只小鼠的平均值(±sem)。在研究的最后一天，相对于用媒介物处理的对照组中的肿瘤生长计算肿瘤生长的抑制百分率(％I)。通过方差分析(ANOVA)随后进行Dunnett’s t-检验确定相对于对照的统计显著性*p＜0.05；**p＜0.01。
在研究终止时观察到相似的最终肿瘤重量降低(参见图2)。数值表示每个处理组15只小鼠的平均值(±sem)，除了高剂量组之外，在高剂量组中在15只小鼠中只有5只在研究终止的当天被处死。相对于用媒介物处理的对照组中的平均肿瘤重量计算抑制百分率。通过ANOVA、随后进行Dunnett’s t-检验确定相对于对照的统计显著性**p＜0.01。
图1通过管饲法b.i.d.口服给予10、30和100mg/kg FLT3抑制剂化合物B连续11天，对裸鼠中皮下生长的MV4-11肿瘤产生统计显著的、剂量依赖性的生长抑制。在处理的最后一天(第11天)，与用媒介物处理的组中的平均肿瘤体积相比，在10、30和100mg/kg剂量下的平均肿瘤体积剂量依赖性地分别减小44％、84％(p＜0.01)和94％(p＜0.01)。相对于第一天的起始平均肿瘤体积，在30mg/kg和100mg/kg剂量下观察到肿瘤退化，分别为42％和77％的统计显著性降低。在10mg/kg的最低试验剂量下，观察到适度的生长延迟(相对于对照为44％I)，然而这个效果没有达到统计显著性。
图2在口服给药11个连续日之后，与用媒介物处理组的平均肿瘤重量相比，FLT3抑制剂化合物B产生最终肿瘤重量的统计显著的、剂量依赖性的降低，在10、30和100mg/kg剂量下分别为48％、85％(p＜0.01)和99％(p＜0.01)降低。在一些小鼠中，在高剂量的FLT3抑制剂化合物B的情况下，最终的肿瘤退化为不可触知的、不能检测的肿瘤。
在研究过程中小鼠每周称重三次(M、W、F)，并且每天在给药时检查任何有害的、与药物相关的副作用的明显临床征兆。对于FLT3抑制剂化合物B，没有观察到明显的毒性，并且在高达200mg/kg/天的剂量下在11天的治疗时期过程中没有观察到对体重的显著不利影响。总地说来，对于FLT3抑制剂化合物B的所有剂量组，平均体重减轻小于最初体重的3％，表明FLT3抑制剂化合物被良好耐受。
为了进一步确立FLT3抑制剂化合物到达肿瘤组织中的期望靶，测量了得自用媒介物处理的小鼠和用化合物处理的小鼠的肿瘤组织中的FLT3磷酸化水平。FLT3抑制剂化合物B的结果表示在图3中。对于这项药效动力学研究，将来自用媒介物处理的对照组的10只小鼠的亚组随机分为两组，每组5只小鼠，然后用另一剂量的媒介物或化合物(100mg/kg，po)处理。在2小时后收获肿瘤，并且快速冻结，用于通过免疫印迹评价FLT3磷酸化。
处理收获的肿瘤用于以如下方式进行FLT3磷酸化的免疫印迹分析100mg肿瘤组织在补充有磷酸酶(Sigma Cat#P2850)和蛋白酶抑制剂(Sigma Cat#P8340)的裂解缓冲液(50mM Hepes，150mM NaCl，10％甘油，1％ Triton-X-100，10mM NaF，1mM EDTA，1.5mM MgCl2，10mM焦磷酸钠)中杜恩斯(dounce)匀浆。通过在4℃下在1000×g离心5分钟除去不溶性碎片。将澄清的裂解液(15mg总蛋白，10mg/ml，在裂解缓冲液中)与10μg的与琼脂糖结合的抗FLT3抗体，克隆C-20(Santa Cruzcat#sc-479ac)在和缓搅拌下在4℃培养2小时。然后将得自肿瘤裂解产物的经免疫沉淀的FLT3用裂解缓冲液洗涤四次，并且通过SDS-PAGE分离。将SDS-PAGE凝胶转移到硝化纤维，并且用抗磷酸酪氨酸抗体(clone-4G10，UBI cat.#05-777)、随后用碱性磷酸酶结合型山羊抗小鼠二次抗体(Novagen cat.#401212)进行免疫印迹。蛋白质的检测通过使用Molecular Dynamics Typhoon Imaging系统(Molecular Dynamics，Sunyvale，CA)测量碱性磷酸酶与底物9H-(1，3-二氯-9，9-二甲基吖啶-2-酮-7-基)磷酸二铵盐(DDAO磷酸盐)(Molecular Probes cat.#D 6487)反应的荧光产物进行。然后将印迹剥离并且用抗FLT3抗体再次探测，用于磷酸化信号的归一化。
如图3中说明的，与得自用媒介物处理的小鼠的肿瘤相比，在100mg/kg下的单剂量FLT3抑制剂化合物B在MV4-11肿瘤中引起FLT3磷酸化水平的生物学显著降低。(总的FLT3表示在下方图中)。这些结果进一步证明，本发明的化合物事实上与肿瘤中期望的FLT3靶相互作用。
如上所述(在前述体内评价FLT3抑制剂化合物B的口服抗肿瘤效力中)准备带有MV-4-11肿瘤的裸鼠。
与替比法尼一起给药的FLT3抑制剂化合物B的抗肿瘤作用 如上所述(在前述体内评价单独的FLT3抑制剂化合物B的口服抗肿瘤效力中)准备带有MV-4-11肿瘤的裸鼠。
将带有MV-4-11肿瘤的裸鼠随机分为五个处理组，每组15只小鼠，在每个处理组中平均肿瘤大小相等。使用式(L×W)2/2计算肿瘤体积(mm3)，其中L＝肿瘤的长度(mm)和W＝肿瘤的宽度(最短距离，mm)。每个处理组的起始平均肿瘤体积为约250mm3。
对小鼠在一周除周末外的日子内每天两次(bid)和在每周末每天一次(qd)口服剂量给予媒介物(20％ HPβCD/2％NMP/10mM磷酸钠，pH3-4(NMP＝Pharmasolve，ISP Technologies，Inc.)、亚有效剂量的FLT3抑制剂化合物B(10mg/kg)、有效剂量的FLT3抑制剂化合物B(20mg/kg)、和单独的或与每个剂量的FLT3抑制剂化合物B组合的替比法尼(50mg/kg)。给药持续9个连续日。在研究过程中使用电子游标卡尺测量肿瘤生长三次。在研究过程中测量体重三次，并且将体重减轻超过10％用作缺乏化合物耐受性(tolerability)的指示。
用FLT3抑制剂化合物B和替比法尼单独和组合治疗对MV-4-11肿瘤生长的影响随时间的变化在图15中说明。如所示，与肿瘤体积达到约800mm3的媒介物处理组相比，以10mg/kg剂量bid给予的FLT3抑制剂化合物B产生轻微显著的肿瘤生长抑制。与媒介物处理组相比，以20mg/kg剂量bid给予的FLT3抑制剂化合物B产生显著的肿瘤生长抑制，与对照相比提供肿瘤生长的完全受控。观察到这个剂量导致肿瘤生长停滞，但是没能诱导肿瘤退化(定义为肿瘤尺寸比研究开始时的肿瘤尺寸更小)。如图15中说明的，在治疗的最后一天(第9天)，当与对照进行比较时，单独的替比法尼(50mg/kg)不显著降低肿瘤体积。数值表示每个处理组中15只小鼠的平均值(±sem)。在研究的最后一天，相对于用媒介物处理的对照组中的肿瘤生长计算肿瘤生长的抑制百分率。通过ANOVA、随后进行Dunnett’s t-检验测定相对于对照的统计显著性*p＜0.01。
再如图15所示，作为单独药物以50mg/kg剂量给药的替比法尼无效。然而，当两种药物组合口服给药时，当FLT3抑制剂化合物B以10或20mg/kg剂量给予时，在第1天就有肿瘤体积与平均起始肿瘤体积相比的统计显著退化。在第9天，该组的平均肿瘤体积与用媒介物处理的对照组相比抑制95％。因此，组合治疗与单独给予的药物相比产生大得多的抑制效果(即，肿瘤退化)。实际上，单独的替比法尼(50mg/kg)和10mg/kg的FLT3抑制剂化合物B基本上是无活性的，而它们的组合显著地提供肿瘤的基本完全退化。
图15说明了单独、或组合口服给予FLT3抑制剂化合物B和替比法尼对裸鼠中MV-4-11肿瘤异种移植物生长的肿瘤体积的影响。
图16说明了单独、或组合口服给予FLT3抑制剂化合物B和替比法尼对裸鼠中MV-4-11肿瘤异种移植物的最终体积的影响(研究的最后一天)。如图16中所示，在研究终止时，当比较每个处理组的最终肿瘤体积时(最终肿瘤重量达到统计显著性的除外)，观察到组合治疗具有协同作用。
图17说明了单独、或组合口服给予FLT3抑制剂化合物B和替比法尼对裸鼠中MV-4-11肿瘤异种移植物的最终肿瘤重量的影响(研究终止的当天)。如图17所示，在研究终止时，与FLT3抑制剂化合物B和替比法尼单独给予的适当的处理组的最终肿瘤重量相比，通过对10mg/kgFLT3抑制剂化合物B/50mg/kg替比法尼组合处理组的肿瘤重量的测量证实协同作用。
单独或组合使用任一药物在9天治疗过程中没有观察到明显的毒性并且对体重没有显著不利的影响。总地来说，与单独给予的FLT3抑制剂化合物B或替比法尼相比，FLT3抑制剂化合物B和替比法尼的组合治疗产生肿瘤生长的显著更大抑制。
单独的FLT3抑制剂化合物D的抗肿瘤作用 使用如上所述(在前述的体内评价FLT3抑制剂化合物B的口服抗肿瘤效力中)方法在无胸腺裸鼠中用裸鼠MV4-11人肿瘤异种移植物退化模型体内评价本发明的FLT3抑制剂化合物D的口服抗肿瘤效力。
如上所述(在前述体内评价单独的FLT3抑制剂化合物B的口服抗肿瘤效力中)准备带有MV-4-11肿瘤的裸鼠。
通过在0.2mL的递送量中包含5×106个肿瘤细胞在大腿左侧腹股沟区对重量不低于20-21克的雌性无胸腺裸鼠进行皮下接种。对于退化研究，在开始给药之前让肿瘤生长到预定尺寸。在肿瘤细胞接种之后约3周，将带有尺寸为100到586mm3(在该范围内有60只小鼠，平均288±133mm3(SD))的皮下肿瘤的小鼠随机分为处理组，使得所有的处理组都具有统计学相似的起始平均肿瘤体积(mm3)。通过管饲法对小鼠在一周除周末外的日子中每天两次(b.i.d.)和在周末每天一次(qd)口服给予媒介物(对照组)或不同剂量的化合物。给药持续11个连续日，根据用媒介物处理的对照小鼠中的瘤生长的动力学和肿瘤大小而定。如果对照小鼠中的肿瘤达到体重的～10％(～2.0克)，研究终止。每天新制备FLT3抑制剂化合物D，其为在20％ HPβCD/D5W(pH3-4)或其它适当的媒介物中的透明溶液(在1、5和10mg/mL)，并且如上所述口服给予。在研究过程中，使用电子游标卡尺每周三次(M，W，F)测量肿瘤生长。使用式(L×W)2/2计算肿瘤体积(mm3)，其中L＝肿瘤的长度(mm)和W＝肿瘤的宽度(最短距离，mm)。每周测量三次体重，并且将体重减轻大于10％用作缺乏化合物耐受性(tolerability)的指示。不可接受的毒性被定义为在研究过程中体重损失＞20％。每天在每次剂量给药时仔细检查小鼠是否有有害的、与药物相关的副作用的明显临床征兆。
在研究终止的当天(第12天)，测量每只动物的最终肿瘤体积和最终体重。将小鼠用100％CO2安乐死，并且立即将肿瘤完整切除和称重，最终肿瘤湿重(克)作为初级效力终点。
本发明的FLT3抑制剂化合物D对MV4-11肿瘤生长的抑制效果随时间的变化在图18中说明。数值表示每个处理组中15只小鼠的平均值(±sem)。在研究的最后一天，相对于用媒介物处理的对照组中的肿瘤生长计算肿瘤生长的抑制百分率(％I)。通过方差分析(ANOVA)随后进行Dunnett’s t-检验测定相对于对照的统计显著性*p＜0.05；**p＜0.01。
如图18中所示，通过管饲法b.i.d.口服给予10、50和100mg/kg的本发明FLT3抑制剂化合物D持续11个连续日对裸鼠中皮下生长的MV4-11肿瘤产生统计显著的、剂量依赖性的生长抑制。在处理的最后一天(第11天1)，与用媒介物处理组的平均肿瘤体积相比，平均肿瘤体积剂量依赖性降低，在50和100mg/kg剂量下为几乎100％抑制(p＜0.001)。本发明的FLT3抑制剂化合物D在50mg/kg和100mg/kg剂量下产生肿瘤消退，相对于第1天的起始平均肿瘤体积分别为98％和93％的统计显著性降低。在10mg/kg的最低试验剂量下，相对于用媒介物处理的对照组，没有观察到显著的生长延迟。当在100mg/kg处理剂量组中在第12天停止给药并且允许肿瘤再生长时，只有6/12只小鼠在第34天表现出可触知的、可测量的肿瘤。
本发明的FLT3抑制剂化合物D产生实质上完全的肿瘤质量消退，如在研究终止时没有可测量的残余肿瘤所示的。(参见图19)。图19中的条形图表示每个处理组中15只小鼠的平均值(±sem)。如所示，在10mg/kg剂量时没有最终肿瘤重量的显著降低，与图18中的肿瘤体积数据一致。在50mg/kg的剂量下，在图上没有表示为条形图，这是因为在终止时在这些小鼠中没有可测量的肿瘤质量可被检测到，这与图18中所示的完全的肿瘤体积退化一致。在这个图中没有表示100mg/kg剂量组，这是因为这些小鼠被停药并且如上所述允许残余的肿瘤继续生长。
在口服给药11个连续日之后，本发明的FLT3抑制剂化合物D与用媒介物处理组的平均肿瘤重量相比产生最终肿瘤重量的剂量依赖性降低，在50mg/kg剂量下观察到肿瘤质量的完全消退。(参见图19)。
在研究过程中小鼠每周称重三次(M、W、F)，并且每天在给药时检查任何有害的、与药物相关的副作用的明显临床征兆。对于本发明的FLT3抑制剂化合物D，没有观察到明显的毒性，并且在高达200mg/kg/天的剂量下在11天的治疗时期过程中没有观察到对体重的显著不利影响(参见图20)。总地说来，在所有的剂量组中，相对于起始体重，没有显著的体重减轻，表明本发明的FLT3抑制剂化合物D被良好耐受。
为了进一步确立本发明的FLT3抑制剂化合物D到达肿瘤组织中的期望靶，测量了得自用媒介物处理小鼠和用化合物处理的小鼠的肿瘤组织中的FLT3磷酸化水平。本发明的FLT3抑制剂化合物D的结果表示在图21中。对于这项药效动力学研究，将来自用媒介物处理的对照组的6只小鼠的亚组随机分为三组，每组2只小鼠，然后用另一剂量的媒介物或化合物(10和100mg/kg，po)处理。在6小时后收获肿瘤，并且快速冻结，用于通过蛋白质印迹评价FLT3磷酸化。
将收获的肿瘤冻结并以如下方式进行处理用于进行FLT3磷酸化的免疫印迹分析200mg肿瘤组织在补充有磷酸酶(Sigma Cat#P2850)和蛋白酶抑制剂(Sigma Cat#P8340)的裂解缓冲液(50mM Hepes，150mMNaCl，10％甘油，1％Triton-X-200，10mM NaF，1mM EDTA，1.5mMMgCl2，10mM焦磷酸钠)中杜恩斯匀浆。通过在4℃下在1000×g离心5分钟除去不溶性碎片。将澄清的裂解液(15mg总蛋白，10mg/ml，在裂解缓冲液中)与10μg的与琼脂糖结合的抗FLT3抗体，克隆C-20(SantaCruz cat#sc-479ac)在和缓搅拌下在4℃培养2小时。
然后将得自肿瘤裂解产物的经免疫沉淀的FLT3用裂解缓冲液洗涤四次，并且通过SDS-PAGE进行分离。将SDS-PAGE凝胶转移到硝化纤维，并且用抗磷酸酪氨酸抗体(克隆-4G10，UBI cat.#05-777)、然后用碱性磷酸酶结合型山羊抗小鼠二次抗体(Novagen cat.#401212)进行免疫印迹。蛋白质的检测通过使用Molecular Dynamics Typhoon Imaging系统(Molecular Dynamics，Sunyvale，CA)测量碱性磷酸酶与底物9H-(1，3-二氯-9，9-二甲基吖啶-2-酮-7-基)磷酸二铵盐(DDAO磷酸盐)(MolecularProbes cat.#D 6487)反应的荧光产物进行。然后将印迹剥离并且用抗FLT3抗体再次探测，用于磷酸化信号的归一化。
如图21中说明的，在100mg/kg下的单剂量的本发明的FLT3抑制剂化合物D在MV4-11肿瘤中，与用媒介物处理的小鼠肿瘤(肿瘤1和2)相比，产生FLT3磷酸化水平的生物学显著降低(上图，肿瘤5和6)。(总的FLT3表示在下方图中)。在用10mg/kg化合物处理的动物(肿瘤3-4)中也发生磷酸化的部分降低。这些结果进一步证明，本发明的化合物事实上与期望的肿瘤中FLT3靶相互作用。
与替比法尼一起给药的FLT3抑制剂化合物D的抗肿瘤作用 为了证明FLT3抑制剂化合物D和替比法尼的组合在MV-4-11异种移植物模型中的体内协同作用，如上所述(在前述的体内评价单独的FLT3抑制剂化合物B的口服抗肿瘤效力时)准备带有肿瘤的裸鼠。
将带有MV-4-11肿瘤的裸鼠随机分为四个处理组，每组10只小鼠，每个处理组中的平均肿瘤大小相等。使用式(L×W)2/2计算肿瘤体积(mm3)，其中L＝肿瘤的长度(mm)和W＝肿瘤的宽度(最短距离，mm)。每个处理组的起始平均肿瘤体积为约250mm3。
在一周除周末外的日子内每天两次(bid)和在周末每天一次(qd)对小鼠口服给予媒介物(20％ HPβ-CD，pH3-4)或者单独或组合的亚有效剂量的FLT3抑制剂化合物D(25mg/kg)或替比法尼(50mg/kg)。给药持续十六个连续日。使用电子游标卡尺每周三次(星期一、星期三、星期五)测量肿瘤生长。每周测量三次体重，并且将体重损失＞10％用作缺乏化合物耐受性的指示。
用FLT3抑制剂化合物D和替比法尼单独和组合的治疗对MV-4-11肿瘤生长的影响随时间的变化在图22中说明。如所示，以25mg/kg剂量bid给予的FLT3抑制剂化合物D，与达到约1500mm3的肿瘤体积的媒介物处理组相比，产生肿瘤生长停滞。如图22中说明的，在处理的最后一天(第16天)，与用媒介物处理的对照组相比，肿瘤体积被显著抑制76％。数值表示每个处理组中10只小鼠的平均值(±sem)。在研究的最后一天相对于用媒介物处理的对照组中的肿瘤生长计算肿瘤生长的抑制百分率。通过ANOVA、随后进行Dunnett’s t-检验测定相对于对照的统计显著性*p＜0.01。
如图22所示，作为单独药物以50mg/kg剂量给药的替比法尼无效。然而，当将两种药物口服组合给予时，肿瘤体积与第1天的平均起始肿瘤体积相比有统计显著的退化。在第16天，该组的平均肿瘤体积与用媒介物处理的对照组相比抑制95％。因此，组合治疗产生的抑制效果(即，肿瘤退化)为每种药物单独给予的相加作用的约1.3倍，表现出协同作用(参见图22)。
图23说明了单独、或组合口服给予FLT3抑制剂化合物D和替比法尼对裸鼠中MV-4-11肿瘤异种移植物生长的肿瘤体积的影响。图24说明了单独、或组合口服给予FLT3抑制剂化合物D和替比法尼对裸鼠中MV-4-11肿瘤异种移植物的最终重量的影响。如图24所示，在研究终止时，当比较每个处理组的最终肿瘤重量时，观察到组合治疗有相似的协同作用。
单独或组合使用任何药物在16天治疗过程中没有观察到明显的毒性并且对体重没有显著不利的影响。在最后给药化合物之后二小时收集血浆和肿瘤样品，用于测定药物浓度。总地来说，与给予单独的FLT3抑制剂化合物D或替比法尼相比，FLT3抑制剂化合物D和替比法尼的组合治疗产生肿瘤生长的显著更大抑制。
结论 在这里我们提供了显著的证据，证明FTI和FLT3抑制剂的组合在体外和体内协同抑制FLT3依赖性细胞(例如得自具有FLT3-ITD突变的患者的AML细胞)的生长和诱导其死亡。在体外研究中，在多种FLT3依赖性细胞系中，使用单一亚最佳剂量的每种化合物的组合通过Chou-Talalay法的组合指数方法和中效方法(median effect method)证明FTI/FLT3抑制剂组合对AML细胞增殖的协同抑制。另外，FTI和FLT3抑制剂的组合在FLT3依赖性AML细胞中诱导显著的细胞死亡。这种细胞程序死亡诱导作用显著地大于任何单独的药物。对于多种结构上不同的FLT3抑制剂和两种不同的FTI而言观察到FTI/FLT3抑制剂组合的这种协同效应。因此，作为任何FLT3抑制剂/FTI组合都会发生这种协同的增殖抑制和细胞程序死亡诱导。有趣的是，FTI替比法尼与FLT3抑制剂的组合显著地增加FLT3抑制剂介导的FLT3受体信号降低的效力。此外，用FTI替比法尼和两种化学上不同的FLT3抑制剂(FLT3抑制剂化合物B和D)的组合，使用体外方法观察到的协同作用在使用FLT3依赖性AML细胞(MV4-11)的体内肿瘤模型中得以重现。因此，会在任何FLT3抑制剂/FTI组合中观察到这种作用。据我们所知，这是首次观察到FTI和FLT3抑制剂的组合具有杀死AML细胞的协同作用。另外，基于以前的数据，在组合时观察到的协同作用对于本领域技术人员来说是非显而易见的。观察到的协同作用可能与FTI已知的抑制小GTP酶(Ras和Rho)和NfkB驱动的增殖和存活、以及FLT3抑制剂通过FLT3受体降低增殖和存活信号的能力有关。另外，FTI/FLT3抑制剂组合对FLT3受体本身的活性有明显的影响。尽管作用机制目前未知，但是其似乎在使用FLT3抑制剂/FTI组合所观察到的抑制细胞增殖和活化细胞死亡中都有显著的作用。总而言之，这些研究代表了新的治疗范例，用于FLT3病症，特别是表达野生型或突变型FLT3的血液学恶性肿瘤，并且代表了试验FTI和FLT3抑制剂组合用于治疗FLT3病症(特别是AML、ALL和MDS)的临床试验设计的基础。
尽管前述说明书教导了本发明的原则，提供实施例用于示例性目的，但是应该理解，本发明的实践包括所有通常的变体、改进和/或修改，其都落在权利要求及其等价物的范围内。
权利要求
1.一种降低或抑制受试者中FLT3酪氨酸激酶表达或活性的方法，包括对受试者给予FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂，其中FLT3激酶抑制剂包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可药用盐、溶剂化物、几何异构体和立体化学异构体，其中
q为0、1或2；
p为0或1；
Q为NH、N(烷基)、O、或直接键；
Z为NH、N(烷基)、或CH2；
B为苯基、杂芳基、或9-10元苯并稠合杂芳基；
R1为
其中n为1、2、3或4；
Ra为氢、烷氧基、苯氧基、苯基、任选地被R5取代的杂芳基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选地被R5取代的唑烷酮基、任选地被R5取代的吡咯烷酮基、任选地被R5取代的哌啶酮基、任选地被R5取代的环状杂二酮基、任选地被R5取代的杂环基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5为一个、两个或三个独立地选自以下的取代基卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx独立地选自氢、烷基、烯基、芳烷基、或杂芳烷基，或Rw和Rx可任选地一起形成5-7元环，所述环任选地包含选自以下的杂部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry选自氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基、或杂芳基；和
R3为一个或多个独立地选自以下的取代基氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、硫代、硝基、任选地被R4取代的环烷基、任选地被R4取代的杂芳基、烷基氨基、任选地被R4取代的杂环基、-O(环烷基)、任选地被R4取代的吡咯烷酮基、任选地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、卤代烷基、任选地被R4取代的杂芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4独立地选自卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
2.一种治疗受试者中与FLT3酪氨酸激酶表达或活性相关的病症的方法，包括对受试者给予FLT3激酶抑制剂和法尼基转移酶抑制剂，其中FLT3激酶抑制剂包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可药用盐、溶剂化物、几何异构体和立体化学异构体，其中
q为0、1或2；
p为0或1；
Q为NH、N(烷基)、O、或直接键；
Z为NH、N(烷基)、或CH2；
B为苯基、杂芳基、或9-10元苯并稠合杂芳基；
R1为
其中n为1、2、3或4；
Ra为氢、烷氧基、苯氧基、苯基、任选地被R5取代的杂芳基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选地被R5取代的唑烷酮基、任选地被R5取代的吡咯烷酮基、任选地被R5取代的哌啶酮基、任选地被R5取代的环状杂二酮基、任选地被R5取代的杂环基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5为一个、两个或三个独立地选自以下的取代基卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx独立地选自氢、烷基、烯基、芳烷基、或杂芳烷基，或Rw和Rx可任选地一起形成5-7元环，所述环任选地包含选自以下的杂部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry选自氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基、或杂芳基；和
R3为一个或多个独立地选自以下的取代基氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、硫代、硝基、任选地被R4取代的环烷基、任选地被R4取代的杂芳基、烷基氨基、任选地被R4取代的杂环基、-O(环烷基)、任选地被R4取代的吡咯烷酮基、任选地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、卤代烷基、任选地被R4取代的杂芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4独立地选自卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
3.一种预防受试者中的细胞增殖性病症的方法，包括对受试者给予预防有效量的(1)第一药物组合物，其包括FLT3激酶抑制剂和可药用载体，和(2)第二药物组合物，其包括法尼基转移酶抑制剂和可药用载体，其中所述FLT3-激酶抑制剂包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可药用盐、溶剂化物、几何异构体和立体化学异构体，其中
q为0、1或2；
p为0或1；
Q为NH、N(烷基)、O、或直接键；
Z为NH、N(烷基)、或CH2；
B为苯基、杂芳基、或9-10元苯并稠合杂芳基；
R1为
其中n为1、2、3或4；
Ra为氢、烷氧基、苯氧基、苯基、任选地被R5取代的杂芳基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选地被R5取代的唑烷酮基、任选地被R5取代的吡咯烷酮基、任选地被R5取代的哌啶酮基、任选地被R5取代的环状杂二酮基、任选地被R5取代的杂环基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5为一个、两个或三个独立地选自以下的取代基卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx独立地选自氢、烷基、烯基、芳烷基、或杂芳烷基，或Rw和Rx可任选地一起形成5-7元环，所述环任选地包含选自以下的杂部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry选自氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基、或杂芳基；和
R3为一个或多个独立地选自以下的取代基氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、硫代、硝基、任选地被R4取代的环烷基、任选地被R4取代的杂芳基、烷基氨基、任选地被R4取代的杂环基、-O(环烷基)、任选地被R4取代的吡咯烷酮基、任选地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、卤代烷基、任选地被R4取代的杂芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4独立地选自卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
4.权利要求3的方法，其另外包括对受试者给予预防有效量的化学治疗。
5.权利要求3的方法，其另外包括对受试者给予预防有效量的放射治疗。
6.权利要求3的方法，其另外包括对受试者给予预防有效量的基因治疗。
7.权利要求3的方法，其另外包括对受试者给予预防有效量的免疫治疗。
8.一种预防受试者中的细胞增殖性病症的方法，包括对受试者给予预防有效量的药物组合物，该药物组合物包括FLT3激酶抑制剂、法尼基转移酶抑制剂和可药用载体，其中FLT3激酶抑制剂包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可药用盐、溶剂化物、几何异构体和立体化学异构体，其中
q为0、1或2；
p为0或1；
Q为NH、N(烷基)、O、或直接键；
Z为NH、N(烷基)、或CH2；
B为苯基、杂芳基、或9-10元苯并稠合杂芳基；
R1为
其中n为1、2、3或4；
Ra为氢、烷氧基、苯氧基、苯基、任选地被R5取代的杂芳基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选地被R5取代的唑烷酮基、任选地被R5取代的吡咯烷酮基、任选地被R5取代的哌啶酮基、任选地被R5取代的环状杂二酮基、任选地被R5取代的杂环基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5为一个、两个或三个独立地选自以下的取代基卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx独立地选自氢、烷基、烯基、芳烷基、或杂芳烷基，或Rw和Rx可任选地一起形成5-7元环，所述环任选地包含选自以下的杂部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry选自氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基、或杂芳基；和
R3为一个或多个独立地选自以下的取代基氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、硫代、硝基、任选地被R4取代的环烷基、任选地被R4取代的杂芳基、烷基氨基、任选地被R4取代的杂环基、-O(环烷基)、任选地被R4取代的吡咯烷酮基、任选地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、卤代烷基、任选地被R4取代的杂芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4独立地选自卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
9.权利要求8的方法，其另外包括对受试者给予预防有效量的化学治疗。
10.权利要求8的方法，其另外包括对受试者给予预防有效量的放射治疗。
11.权利要求8的方法，其另外包括对受试者给予预防有效量的基因治疗。
12.权利要求8的方法，其另外包括对受试者给予预防有效量的免疫治疗。
13.一种预防受试者中FLT3相关病症的方法，包括对受试者给予预防有效量的(1)第一药物组合物，其包括FLT3激酶抑制剂和可药用载体，和(2)第二药物组合物，其包括法尼基转移酶抑制剂和可药用载体，其中FLT3激酶抑制剂包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可药用盐、溶剂化物、几何异构体和立体化学异构体，其中
q为0、1或2；
p为0或1；
Q为NH、N(烷基)、O、或直接键；
Z为NH、N(烷基)、或CH2；
B为苯基、杂芳基、或9-10元苯并稠合杂芳基；
R1为
其中n为1、2、3或4；
Ra为氢、烷氧基、苯氧基、苯基、任选地被R5取代的杂芳基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选地被R5取代的唑烷酮基、任选地被R5取代的吡咯烷酮基、任选地被R5取代的哌啶酮基、任选地被R5取代的环状杂二酮基、任选地被R5取代的杂环基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5为一个、两个或三个独立地选自以下的取代基卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx独立地选自氢、烷基、烯基、芳烷基、或杂芳烷基，或Rw和Rx可任选地一起形成5-7元环，所述环任选地包含选自以下的杂部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry选自氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基、或杂芳基；和
R3为一个或多个独立地选自以下的取代基氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、硫代、硝基、任选地被R4取代的环烷基、任选地被R4取代的杂芳基、烷基氨基、任选地被R4取代的杂环基、-O(环烷基)、任选地被R4取代的吡咯烷酮基、任选地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、卤代烷基、任选地被R4取代的杂芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4独立地选自卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
14.权利要求13的方法，其另外包括对受试者给予预防有效量的化学治疗。
15.权利要求13的方法，其另外包括对受试者给予预防有效量的放射治疗。
16.权利要求13的方法，其另外包括对受试者给予预防有效量的基因治疗。
17.权利要求13的方法，其另外包括对受试者给予预防有效量的免疫治疗。
18.一种预防受试者中FLT3相关病症的方法，包括对受试者给予预防有效量的药物组合物，该药物组合物包括FLT3激酶抑制剂、法尼基转移酶抑制剂和可药用载体，其中FLT3激酶抑制剂包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可药用盐、溶剂化物、几何异构体和立体化学异构体，其中
q为0、1或2；
p为0或1；
Q为NH、N(烷基)、O、或直接键；
Z为NH、N(烷基)、或CH2；
B为苯基、杂芳基、或9-10元苯并稠合杂芳基；
R1为
其中n为1、2、3或4；
Ra为氢、烷氧基、苯氧基、苯基、任选地被R5取代的杂芳基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选地被R5取代的唑烷酮基、任选地被R5取代的吡咯烷酮基、任选地被R5取代的哌啶酮基、任选地被R5取代的环状杂二酮基、任选地被R5取代的杂环基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5为一个、两个或三个独立地选自以下的取代基卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(14)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx独立地选自氢、烷基、烯基、芳烷基、或杂芳烷基，或Rw和Rx可任选地一起形成5-7元环，所述环任选地包含选自以下的杂部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry选自氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基、或杂芳基；和
R3为一个或多个独立地选自以下的取代基氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、硫代、硝基、任选地被R4取代的环烷基、任选地被R4取代的杂芳基、烷基氨基、任选地被R4取代的杂环基、-O(环烷基)、任选地被R4取代的吡咯烷酮基、任选地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、卤代烷基、任选地被R4取代的杂芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4独立地选自卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
19.权利要求18的方法，其另外包括对受试者给予预防有效量的化学治疗。
20.权利要求18的方法，其另外包括对受试者给予预防有效量的放射治疗。
21.权利要求18的方法，其另外包括对受试者给予预防有效量的基因治疗。
22.权利要求18的方法，其另外包括对受试者给予预防有效量的免疫治疗。
23.一种治疗受试者中细胞增殖性病症的方法，包括对受试者给予治疗有效量的(1)第一药物组合物，其包括FLT3激酶抑制剂和可药用载体，和(2)第二药物组合物，其包括法尼基转移酶抑制剂和可药用载体，其中所述FLT3激酶抑制剂包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可药用盐、溶剂化物、几何异构体和立体化学异构体，其中
q为0、1或2；
p为0或1；
Q为NH、N(烷基)、O、或直接键；
Z为NH、N(烷基)、或CH2；
B为苯基、杂芳基、或9-10元苯并稠合杂芳基；
R1为
其中n为1、2、3或4；
Ra为氢、烷氧基、苯氧基、苯基、任选地被R5取代的杂芳基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选地被R5取代的唑烷酮基、任选地被R5取代的吡咯烷酮基、任选地被R5取代的哌啶酮基、任选地被R5取代的环状杂二酮基、任选地被R5取代的杂环基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5为一个、两个或三个独立地选自以下的取代基卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx独立地选自氢、烷基、烯基、芳烷基、或杂芳烷基，或Rw和Rx可任选地一起形成5-7元环，所述环任选地包含选自以下的杂部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry选自氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基、或杂芳基；和
R3为一个或多个独立地选自以下的取代基氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、硫代、硝基、任选地被R4取代的环烷基、任选地被R4取代的杂芳基、烷基氨基、任选地被R4取代的杂环基、-O(环烷基)、任选地被R4取代的吡咯烷酮基、任选地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、卤代烷基、任选地被R4取代的杂芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4独立地选自卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
24.权利要求23的方法，其另外包括对受试者给予治疗有效量的化学治疗。
25.权利要求23的方法，其另外包括对受试者给予治疗有效量的放射治疗。
26.权利要求23的方法，其另外包括对受试者给予治疗有效量的基因治疗。
27.权利要求23的方法，其另外包括对受试者给予治疗有效量的免疫治疗。
28.一种治疗受试者中细胞增殖性病症的方法，包括对受试者给予治疗有效量的药物组合物，该药物组合物包括FLT3激酶抑制剂、法尼基转移酶抑制剂和可药用载体，其中所述FLT3激酶抑制剂包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可药用盐、溶剂化物、几何异构体和立体化学异构体，其中
q为0、1或2；
p为0或1；
Q为NH、N(烷基)、O、或直接键；
Z为NH、N(烷基)、或CH2；
B为苯基、杂芳基、或9-10元苯并稠合杂芳基；
R1为
其中n为1、2、3或4；
Ra为氢、烷氧基、苯氧基、苯基、任选地被R5取代的杂芳基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选地被R5取代的唑烷酮基、任选地被R5取代的吡咯烷酮基、任选地被R5取代的哌啶酮基、任选地被R5取代的环状杂二酮基、任选地被R5取代的杂环基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5为一个、两个或三个独立地选自以下的取代基卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx独立地选自氢、烷基、烯基、芳烷基、或杂芳烷基，或Rw和Rx可任选地一起形成5-7元环，所述环任选地包含选自以下的杂部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry选自氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基、或杂芳基；和
R3为一个或多个独立地选自以下的取代基氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、硫代、硝基、任选地被R4取代的环烷基、任选地被R4取代的杂芳基、烷基氨基、任选地被R4取代的杂环基、-O(环烷基)、任选地被R4取代的吡咯烷酮基、任选地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、卤代烷基、任选地被R4取代的杂芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4独立地选自卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
29.权利要求28的方法，其另外包括对受试者给予治疗有效量的化学治疗。
30.权利要求28的方法，其另外包括对受试者给予治疗有效量的放射治疗。
31.权利要求28的方法，其另外包括对受试者给予治疗有效量的基因治疗。
32.权利要求28的方法，其另外包括对受试者给予治疗有效量的免疫治疗。
33.一种治疗受试者中FLT3相关病症的方法，包括对受试者给予治疗有效量的(1)第一药物组合物，其包括FLT3激酶抑制剂和可药用载体，和(2)第二药物组合物，其包括法尼基转移酶抑制剂和可药用载体，其中所述FLT3激酶抑制剂包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可药用盐、溶剂化物、几何异构体和立体化学异构体，其中
q为0、1或2；
p为0或1；
Q为NH、N(烷基)、O、或直接键；
Z为NH、N(烷基)、或CH2；
B为苯基、杂芳基、或9-10元苯并稠合杂芳基；
R1为
其中n为1、2、3或4；
Ra为氢、烷氧基、苯氧基、苯基、任选地被R5取代的杂芳基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选地被R5取代的唑烷酮基、任选地被R5取代的吡咯烷酮基、任选地被R5取代的哌啶酮基、任选地被R5取代的环状杂二酮基、任选地被R5取代的杂环基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5为一个、两个或三个独立地选自以下的取代基卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx独立地选自氢、烷基、烯基、芳烷基、或杂芳烷基，或Rw和Rx可任选地一起形成5-7元环，所述环任选地包含选自以下的杂部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry选自氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基、或杂芳基；和
R3为一个或多个独立地选自以下的取代基氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、硫代、硝基、任选地被R4取代的环烷基、任选地被R4取代的杂芳基、烷基氨基、任选地被R4取代的杂环基、-O(环烷基)、任选地被R4取代的吡咯烷酮基、任选地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、卤代烷基、任选地被R4取代的杂芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4独立地选自卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基.
34.权利要求33的方法，其另外包括对受试者给予治疗有效量的化学治疗。
35.权利要求33的方法，其另外包括对受试者给予治疗有效量的放射治疗。
36.权利要求33的方法，其另外包括对受试者给予治疗有效量的基因治疗。
37.权利要求33的方法，其另外包括对受试者给予治疗有效量的免疫治疗。
38.一种治疗受试者中FLT3相关病症的方法，包括对受试者给予治疗有效量的药物组合物，该药物组合物包括FLT3激酶抑制剂、法尼基转移酶抑制剂和可药用载体，其中所述FLT3激酶抑制剂包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可药用盐、溶剂化物、几何异构体和立体化学异构体，其中
q为0、1或2；
p为0或1；
Q为NH、N(烷基)、O、或直接键；
Z为NH、N(烷基)、或CH2；
B为苯基、杂芳基、或9-10元苯并稠合杂芳基；
R1为
其中n为1、2、3或4；
Ra为氢、烷氧基、苯氧基、苯基、任选地被R5取代的杂芳基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选地被R5取代的唑烷酮基、任选地被R5取代的吡咯烷酮基、任选地被R5取代的哌啶酮基、任选地被R5取代的环状杂二酮基、任选地被R5取代的杂环基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5为一个、两个或三个独立地选自以下的取代基卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx独立地选自氢、烷基、烯基、芳烷基、或杂芳烷基，或Rw和Rx可任选地一起形成5-7元环，所述环任选地包含选自以下的杂部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry选自氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基、或杂芳基；和
R3为一个或多个独立地选自以下的取代基氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、硫代、硝基、任选地被R4取代的环烷基、任选地被R4取代的杂芳基、烷基氨基、任选地被R4取代的杂环基、-O(环烷基)、任选地被R4取代的吡咯烷酮基、任选地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、卤代烷基、任选地被R4取代的杂芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4独立地选自卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
39.权利要求38的方法，其另外包括对受试者给予治疗有效量的化学治疗。
40.权利要求38的方法，其另外包括对受试者给予治疗有效量的放射治疗。
41.权利要求38的方法，其另外包括对受试者给予治疗有效量的基因治疗。
42.权利要求38的方法，其另外包括对受试者给予治疗有效量的免疫治疗。
43.权利要求38的方法，其另外包括对受试者给予治疗有效量的化学治疗。
44.权利要求1-43中任一项的方法，其中所述法尼基转移酶抑制剂包括式(I)的化合物
其立体异构形式、可药用酸或碱加成盐，其中
虚线表示任选的键；
X为氧或硫；
R1为氢、C1-12烷基、Ar1、Ar2C1-6烷基、喹啉基C1-6烷基、吡啶基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、或下式的基团-Alk1-C(＝O)-R9、-Alk1-S(O)-R9或-Alk1-S(O)2-R9，其中Alk1为C1-6烷二基，R9为羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、C1-8烷基氨基或被C1-6烷氧基羰基取代的C1-8烷基氨基；
R2、R3和R16各自独立地为氢、羟基、卤基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、氨基C1-6烷氧基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基、Ar1、Ar2C1-6烷基、Ar2氧基、Ar2C1-6烷氧基、羟基羰基、C1-6烷氧基羰基、三卤代甲基、三卤代甲氧基、C2-6烯基、4，4-二甲基唑基；或
当在相邻的位置上时R2和R3可以一起形成下式的二价基团
-O-CH2-O-(a-1)，
-O-CH2-CH2-O-(a-2)，
-O-CH＝CH-(a-3)，
-O-CH2-CH2-(a-4)，
-O-CH2-CH2-CH2-(a-5)，或
-CH＝CH-CH＝CH-(a-6)；
R4和R5各自独立地为氢、卤基、Ar1、C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、羟基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基或C1-6烷基S(O)2C1-6烷基；
R6和R7各自独立地为氢、卤基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、Ar2氧基、三卤代甲基、C1-6烷硫基、二(C1-6烷基)氨基，或当在相邻的位置上时R6和R7可以一起形成下式的二价基团
-O-CH2-O-(c-1)，或
-CH＝CH-CH＝CH-(c-2)；
R8为氢、C1-6烷基、氰基、羟基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、羧基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、咪唑基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、氨基羰基C1-6烷基、或下式的基团
-O-R10(b-1)，
-S-R10(b-2)，
-N-R11R12(b-3)，
其中R10为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar1、Ar2C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、或下式的基团-Alk2-OR13或-Alk2-NR14R15；
R11为氢、C1-12烷基、Ar1或Ar2C1-6烷基；
R12为氢、C1-6烷基、C1-16烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基氨基羰基、Ar1、Ar2C1-6烷基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、天然氨基酸、Ar1羰基、Ar2C1-6烷基羰基、氨基羰基羰基、C1-6烷氧基C1-6烷基羰基、羟基、C1-6烷氧基、氨基羰基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基羰基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基羰基氨基、或下式的基团-Alk2-OR13或-Alk2-NR14R15；其中Alk2为C1-6烷二基；R13为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、羟基C1-6烷基、Ar1或Ar2C1-6烷基；R14为氢、C1-6烷基、Ar1或Ar2C1-6烷基；R15为氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar1或Ar2C1-6烷基；
R17为氢、卤基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、Ar1；
R18为氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤基；
R19为氢或C1-6烷基；
Ar1为苯基或被C1-6烷基、羟基、氨基、C1-6烷氧基或卤基取代的苯基；和
Ar2为苯基或被C1-6烷基、羟基、氨基、C1-6烷氧基或卤基取代的苯基。
45.权利要求44的方法，其中所述法尼基转移酶抑制剂包括式(I)的化合物，其中X为氧并且虚线表示键。
46.权利要求44的方法，其中所述法尼基转移酶抑制剂包括式(I)的化合物，其中R1为氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、单(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；R2为卤基、C1-6烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、三卤代甲氧基、或羟基C1-6烷氧基；和R3为氢。
47.权利要求44的方法，其中所述法尼基转移酶抑制剂包括式(I)的化合物，其中R8为氢、羟基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、咪唑基、或下式的基团-NR11R12，其中R11为氢或C1-12烷基，和R12为氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷基羰基、羟基、或下式的基团-Alk2-OR13，其中R13为氢或C1-6烷基。
48.权利要求44的方法，其中所述法尼基转移酶抑制剂为(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可药用酸加成盐。
49.权利要求1-43中任一项的方法，其中所述FLT3激酶抑制剂包括式I’的化合物，其中
Rw和Rx独立地选自氢、烷基、烯基、芳烷基、或杂芳烷基，或Rw和Rx可任选地一起形成选自以下组的5-7元环
50.权利要求1-43中任一项的方法，其中所述FLT3激酶抑制剂包括式I’的化合物，其中B为苯基或杂芳基。
51.权利要求1-43中任一项的方法，其中所述FLT3激酶抑制剂包括式I’的化合物，其中
q为1或2；和
R3为一个或多个独立地选自以下的取代基氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、任选地被R4取代的环烷基、任选地被R4取代的杂芳基、任选地被R4取代的杂环基、-O(环烷基)、任选地被R4取代的苯氧基、任选地被R4取代的杂芳基氧基、二烷基氨基、或-SO2烷基。
52.权利要求1-43中任一项的方法，其中所述FLT3激酶抑制剂包括式I’的化合物，其中
Z为NH或CH2；和
Ra为氢、烷氧基、任选地被R5取代的杂芳基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选地被R5取代的唑烷酮基、任选地被R5取代的吡咯烷酮基、任选地被R5取代的杂环基、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、或-SO2NRwRx。
53.权利要求1-43中任一项的方法，其中所述FLT3激酶抑制剂包括式I’的化合物，其中
Q为NH、O、或直接键；
Ra为氢、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、杂芳基、任选地被R5取代的杂环基、-CONRwRx、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、或-N(Ry)CON(Rw)(Rx)；
R5为一个选自以下的取代基-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或-C(1-4)烷基-OH；和
R3为一个或两个独立地选自以下的取代基烷基、烷氧基、卤素、环烷基、杂环基、-O(环烷基)、苯氧基、或二烷基氨基。
54.权利要求1-43中任一项的方法，其中所述FLT3激酶抑制剂包括式I’的化合物，其中
B为苯基或吡啶基；
Ra为氢、羟基、氨基、二烷基氨基、任选地被R5取代的杂环基、-CONRwRx、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、或-NRwSO2Ry；和
R3为一个独立地选自以下的取代基烷基、烷氧基、-O(环烷基)、或苯氧基。
55.权利要求1-43中任一项的方法，其中所述FLT3激酶抑制剂包括式I’的化合物，其中
Rw和Rx可任选地一起形成选自以下的5-7元环
56.权利要求1-43中任一项的方法，其中所述FLT3激酶抑制剂包括选自下列的式I’化合物
57.权利要求1-43中任一项的方法，其中所述FLT3激酶抑制剂包括选自下列的式I’化合物
58.权利要求49的方法，其中所述法尼基转移酶抑制剂为(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可药用酸加成盐。
59.权利要求50的方法，其中所述法尼基转移酶抑制剂为(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可药用酸加成盐。
60.权利要求51的方法，其中所述法尼基转移酶抑制剂为(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可药用酸加成盐。
61.权利要求52的方法，其中所述法尼基转移酶抑制剂为(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可药用酸加成盐。
62.权利要求53的方法，其中所述法尼基转移酶抑制剂为(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可药用酸加成盐。
63.权利要求54的方法，其中所述法尼基转移酶抑制剂为(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可药用酸加成盐。
64.权利要求55的方法，其中所述法尼基转移酶抑制剂为(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可药用酸加成盐。
65.权利要求56的方法，其中所述法尼基转移酶抑制剂为(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可药用酸加成盐。
66.权利要求57的方法，其中所述法尼基转移酶抑制剂为(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可药用酸加成盐。
全文摘要
本发明涉及在细胞或受试者中抑制FLT3酪氨酸激酶活性或表达、或降低FLT3激酶活性或表达的方法，包括给予法尼基转移酶抑制剂和选自式I’的氨基嘧啶类化合物的FLT3激酶抑制剂，其中R3、B、Z、Q、p、q和R1如本文中定义。本发明包括预防和治疗学方法，用于治疗处于形成细胞增殖性病症或FLT3相关病症的危险中(或对形成所述病症敏感)的受试者。
文档编号A61K31/517GK101242847SQ200680029459
公开日2008年8月13日 申请日期2006年6月7日 优先权日2005年6月10日
发明者C·A·鲍曼, M·D·高尔 申请人:詹森药业有限公司