低血糖症状抑制用组合物的制作方法

专利名称：低血糖症状抑制用组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种低血糖症状抑制用组合物或者脑细胞摄取糖类的促进 剂，所述组合物或促进剂含有支链氨基酸、其可药用的盐或者它们的衍生物 作为有效成分。
背景技术：
低血糖症状是指随着血中的葡萄糖水平的减少，脑内的葡萄糖水平降 低，由此引起的疲劳感、全身不适、不安感、倦怠感、神经过敏、发抖、头 痛、无力感、冷汗和心悸症状，进一步地引起意识障碍和昏迷，严重时也可 能导致死亡。
51起低血糖症的原因主要包括下述情况
(1) 向糖尿病患者给予过量的降血糖药(胰岛素等)；
(2) 某种药物产生副作用的情况；
(3) 长期持续摄取大量糖类的饮食习惯；
(4) 摄取过量的醇；以及
(5) 在饮食不足的状态下长时间持续过激的运动。
特别是情况(1)或(2)中，由于血糖被药物强制性地降低，症状变得 严重的可能性高，因此非常危险。
以往，为了简单地预防或治疗低血糖症状，通常摄取葡萄糖、砂糖或碳 水化合物。但是，摄取糖类不仅对糖尿病患者的治疗带来不良影响，而且对 于健康者来说，甚至可能引起卡路里摄入过量。
作为含有本发明的有效成分支链氨基酸的药物，已知通过口服摄取支链 氨基酸緩解肌肉痛、肌肉劳损和肌强直的药物(参照专利文献1: JP-A2000-26289 )和通过口服摄取支链氨基酸在运动时维持瞬间或持久的肌肉力 量的药物(参照专利文献2: JP-A 2000-26290)。着眼于例如亮氨酸、异亮 氨酸和缬氨酸等支链氨基酸具有器官特异性的事实，即主要用于肌肉和诸 如肾组织的肝组织以外的组织中，发现所述支《连氨基酸用于改善对月几肉痛和 肌强直、或者运动时维持瞬间或持久的肌肉力量。此外，已知以含有支链氨 基酸为特征的中枢神经系统的疲劳緩解剂(参照专利文献3 : WO2002/034257 )等。其阐明了中枢神经系统的疲劳的机理的同时证明了血 脑屏障上的L-系统转运体的特异性抑制剂2-氨基二环[2,2,l]庚烷-2-羧酸可 以抑制中枢神经系统的疲劳，特别是在与例如亮氨酸、异亮氨酸或者缬氨酸 等支链氨基酸并用下可以几乎完全抑制。已知改善脑细胞代谢的组合物(参 照专利文献7: JP-A 2-172915 )和抗痴呆药(参照专利文献8: JP陽A 3-275631 ) 都含有支链氨基酸。但是，这些文献中未提及支链氨基酸在低血糖症状中促 进诸如脑细胞等的细胞摄取葡萄糖。
已知含有支链氨基酸的药物制剂包括服药量较少、风味和吞咽方面优 异的仅将支链氨基酸作为有效成分的药用果冻剂(参照专利文献4: JP-A 2003-221330 );改善了风味和饮用感觉，悬浮时可以保持优异的悬浮性的 含有支链氨基酸、悬浮剂和表面活性剂的药用干糖浆剂(参照专利文献5: JP-A 2003-221329);和将保存时不着色、保存稳定性优异的支链氨基酸作 为有效成分的咀嚼片剂(参照专利文献6: JP-A 2003-221327)。但是，这 些文献中都未记载对脑细胞摄取糖类的促进或者对低血糖症状的抑制。
专利文献1:特开JP-A 2000-26289
专利文献2:特开JP-A 2000-26290
专利文献3: WO2002/034257
专利文献4:特开JP-A 2003-221330
专利文献5:特开JP-A 2003-221329
专利文献6:特开JP-A 2003-221327
专利文献7:特开JP-A 2-172915专利文献8:特开平JP-A 3-27563
发明内容
本发明要解决的问题
本发明的目的在于提供一种能够通过促进脑细胞摄取糖类而抑制低血 糖症状的组合物。
解决上述问题的手段
本发明人为了解决上述课题进行了深入研究。结果发现，支链氨基酸、 其可药用的盐或者它们的衍生物具有促进脑细胞摄取糖类的作用，因此可以 抑制低血糖症状，从而完成了本发明。
即，本发明涉及
(1 ) 一种低血糖症状抑制用组合物，其特征在于，含有选自支链氨基 酸、其可药用的盐和它们的衍生物中的至少 一种化合物作为有效成分；
(2) 上述(1 )所述的组合物，其特征在于，所述支链氨基酸为选自 L-缬氨酸、L-亮氨酸和L-异亮氨酸中的至少一种化合物；
(3) 上述(2)所述的组合物，其特征在于，至少含有L-异亮氨酸；
(4) 上述(3)所述的组合物，其特征在于，L-异亮氨酸、L-亮氨酸和 L-缬氨酸的含有比例按照摩尔比换算为1: (0~3) : (0~2);
(5) 上述(1) ~ (4)中任一项所述的组合物，其特征在于，进一步 含有糖类；
(6) 上述(5)所述的组合物，其特征在于，所述糖类为葡萄糖；
(7) 上述(1) ~ (6)中任一项所述的组合物，其特征在于，所述低 血糖症状为交感神经刺激症状和/或脑症状；
(8) —种脑细胞摄取糖类的促进剂，其特征在于，含有选自支链氨基 酸、其可药用的盐和它们的衍生物中的至少 一种化合物作为有效成分；
(9) 上述(8)所述的脑细胞摄取糖类的促进剂，其特征在于，所述支 链氨基酸为选自L-缬氨酸、L-亮氨酸和L-异亮氨酸中的至少一种化合物；(10) 上述(9)所述的脑细胞摄取糖类的促进剂，其特征在于，至少 含有L-异亮氨酸；
(11) 上述(8)所述的脑细胞摄取糖类的促进剂，其特征在于，L-异 亮氨酸、L-亮氨酸和L-缬氨酸的含有比例按照摩尔比换算为1: ( 0 ~ 3 ):( 0 ~ 2);
(12) 上述(8) ~ (11)中任一项所述的脑细胞摄取糖类的促进剂， 其特征在于，进一步含有糖类；
(13) 上述(12)所述的脑细胞摄取糖类的促进剂，其特征在于，所述 糖类为葡萄糖；
(14) 上述(1) ~ (7)中任一项所述的组合物，其特征在于，其为注 射剂或颗粒的形态；
(15) 上述(8) ~ (13)中任一项所述的脑细胞摄取糖类的促进剂， 其特征在于，其为注射剂或颗粒的形态；
(16) —种食品，其特征在于，含有选自支链氨基酸、其可药用的盐和 它们的衍生物中的至少 一种化合物，抑制低血糖症状或者促进脑细胞摄取糖 类；
(17) 上述(16)所述的食品，其特征在于，所述食品为果冻；
(18) —种低血糖症状的抑制方法，其特征在于，包括向哺乳动物给予 选自支链氨基酸、其可药用的盐和它们的衍生物中的至少 一 种化合物；
(19) 一种促进脑细胞摄取糖类的方法，其特征在于，包括向哺乳动物 给予选自支链氨基酸、其可药用的盐和它们的衍生物中的至少 一种化合物；
(20 )选自支链氨基酸、其可药用的盐和它们的衍生物中的至少一种化 合物在制备抑制低血糖症状的组合物中的应用；以及
(21 )选自支链氨基酸、其可药用的盐和它们的衍生物中的至少一种化 合物在制备脑细胞摄取糖类的促进剂中的应用。 发明效果
根据本发明，由于可以促进脑细胞摄取糖类，所以可以防止脑细胞内的糖类水平的降低，从而可以抑制伴随着低血糖的症状。
本发明的低血糖症状抑制用组合物或者脑细胞摄取糖类的促进剂由于 几乎不改变血中的血糖水平，特别是对糖尿病患者的治疗没有影响，因此可 以有效地用于易于因胰岛素注射或抗糖尿病药而引起低血糖症状的患者。
本发明的低血糖症状抑制用组合物或者脑细胞摄取糖类的促进剂促进 脑细胞的能量源葡萄糖的摄取，所以不仅可以抑制上述低血糖引起的症状， 而且可以抑制即使血糖水平正常、由于脑内的糖水平降低引起的低血糖症状 才羊症状。


图1为表示以对照组作为对比例，口服给予L-亮氨酸或L-异亮氨酸1 小时后大鼠脑细胞摄取糖类的量的图。图中，纵坐标表示2DG-6P量，*表 示与对照组相比有显著性差异(p<0.05)。各柱的值表示平均值(n=6) ±标
准误差。
图2为表示以对照组作为对比例，静脉给予混合氨基酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸或L-缬氨酸24小时后大鼠脑细胞摄取糖类的量的图。图中，纵坐 标表示2DG-6P量。各柱的值表示平均值(n=4) 土标准误差。
具体实施例方式
下文对本发明中的以含有选自支链氨基酸、支链氨基酸的可药用的盐以 及支链氨基酸或其可药用的盐的衍生物中的至少一种化合物作为有效成分 为特征的低血糖症状抑制用组合物或者脑细胞摄取糖类的促进剂进行具体 的说明。
本发明中使用的支链氨基酸只要满足日本药典的标准就不特别限定，该 支链氨基酸的例子包括例如L-氨基酸、D-氨基酸、a-氨基酸、(3-氨基酸、y-氨基酸、天然氨基酸、合成氨基酸等任意支链氨基酸，优选为天然的L-氨基 酸或a-氨基酸。本发明中使用的支链氨基酸的特别优选的例子包括L-缬氨酸、L-亮氨酸和L-异亮氨酸。此外，上述支链氨基酸可以通过利用蛋白酶水 解来源于植物或者动物的蛋白质，或通过微生物发酵法来制备，或者为通过 向有机酸中引入氨基基团得到的合成氨基酸等。
本发明中的支链氨基酸的可药用的盐，为酸或碱的盐，对其不特别限定， 其例子包括例如钠盐和钾盐等碱金属盐，钩盐等碱土金属盐，盐酸盐等无机
酸盐和醋酸盐等有机酸盐，其中优选为盐酸盐。具体的例子包括L-缬氨酸盐 酸盐、L-亮氨酸盐酸盐和L-异亮氨酸盐酸盐。
对本发明中使用的支链氨基酸或其可药用的盐的衍生物不特别限定，其 例子包括例如酯类和肽类。所述酯类只要为例如曱酯、乙酯、丙酯或异丙酯 等低级烷基酯就不特别限定。此情况下的低级烷基优选为含有1~6个碳原 子的烷基基团。所述酯类的优选例子包括L-缬氨酸乙酯、L-亮氨酸乙酯和 L-异亮氨酸乙酯。所述肽类只要为例如二肽和三肽的寡肽就不特别限定，所 述肽类的优选例子包括L-异亮氨酰基-L-亮氨酸、L-丙氨酰基-L-亮氨酸、L-亮氨酰基-L-丙氨酸、甘氨酰基-L-亮氨酸和L-丙氨酰基-L-谷氨酰胺。因此， 构成寡肽的支链氨基酸以外的氨基酸可以为包括L-氨基酸、D-氨基酸、a-氨基酸、卩-氨基酸、i氨基酸、天然氨基酸、合成氨基酸等的任意氨基酸。
这些支链氨基酸、其可药用的盐或者它们的衍生物可以单独使用，或以 两种或更多种的混合物使用，但是优选至少含有L-异亮氨酸、其盐或者其衍 生物，特别优选至少含有L-异亮氨酸。
本发明的组合物中的支链氨基酸、其可药用的盐或者它们的衍生物可以 单独使用，或以两种或更多种的混合物使用。当使用其中的两种或更多种的 混合物时，并不特别限定其混合比例。具体地说，当使用支链氨基酸、其可 药用的盐或者它们的衍生物，例如L-异亮氨酸、L-亮氨酸或L-缬氨酸时， 这些化合物可以单独^使用或以两种或更多种的混合物使用，这些化合物的混 合比例按照摩尔比换算为L-异亮氨酸丄-亮氨酸:L-缬氨酸二约1:(0~3):(0~ 2),更优选为约1: (0-2.5) : (0~ 1.5)。例如使用L-异亮氨酸、L-亮氨 酸或L-缬氨酸的盐或其衍生物时，优选以L-异亮氨酸、L-亮氨酸或L-纈氨酸分别换算为上述摩尔比的比例使用。
本发明中的低血糖症状指的是由于血中的葡萄糖水平降低而产生的症 状。葡萄糖对于所有细胞来说都是最重要的能量源，特别是脑的能量仅依赖 于葡萄糖。肌肉和其它组织的机能也离不开葡萄糖。因此，血中的葡萄糖水 平降低时，在脑、肌肉和其它组织的机能中产生不希望产生的症状。所述症 状包括但不限于交感神经刺激症状和脑症状。所述交感神经刺激症状包括例 如，不安感、饥饿、蹒跚、眩晕、贫血、无力、虚弱、倦怠、轻微困倦、易 怒、发抖、心悸、颜面苍白、心动过速、发汗和震颤，所述脑症状包括例如
头痛、视觉障碍、复视、眼翳、集中力和计算能力减退、健忘、嗜睡、意识 障碍、痉挛、神经异常、身体异常行为和昏迷。
其中，低血糖包括血糖水平为约60mg/dL以下的状态，但是不限定为 该血糖水平。例如，由于糖尿病等造成的血糖高的人通过胰岛素注射或者服 用抗糖尿病药降低血糖水平时、或者健康人由于空腹或快速激烈的运动迅速 降低血糖水平时，即使在约100mg/dL也显示出与低血糖相同的症状，这种 与低血糖相同的症状也包含在本发明中。
本发明中的低血糖症状抑制用组合物指的是用于抑制或改善由于血糖 水平降低所引起的症状的组合物。
根据本发明的低血糖症状抑制用组合物不仅可以在低血糖症状中使用、 而且即使在非低血糖症的状态下也可以预防性地使用。
根据本发明的脑细胞摄取糖类的促进剂促进脑细胞摄取糖类，特别是脑 内唯 一 的能量源葡萄糖，因此可以抑制脑内的葡萄糖的摄取被抑制的症状， 例如上述低血糖症状，或者由于某种除了低血糖以外的理由.引起与低血糖相 同的症^1犬的症状。
而且，预期脑细胞摄取糖类的促进剂可以促进脑以外的细胞摄取糖类， 例如肌肉细胞、神经细胞和其它的细胞中，因此可以期待其激活上述肌肉细 胞、神经细胞和其它的细胞。
优选，根据本发明的低血糖症状抑制用组合物或者脑细胞摄取糖类的促进剂中进一步含有糖类。所述糖类包括但不限于，例如核糖、脱氧核糖、葡
萄糖、果糖和半乳糖等的单糖；例如麦芽糖、蔗糖和乳糖等的二糖；以及例 如直链淀粉、支链淀粉和糖原等的多糖。在所述糖类中，更优选为单糖，特 别优选为可以用于活体内作为即时能量源的葡萄糖。
此时，糖类的含量比例不特别限定，但是优选为例如相对于每摩尔支链 氨基酸、计算出葡萄糖含量为约0.1 ~50摩尔。
根据本发明的低血糖症状抑制用组合物或者脑细胞摄取糖类的促进剂 可以含有可药用的添加剂的药物的方式或含有食品卫生法上认可的添加剂 的食品的方式提供。
根据本发明的低血糖症状抑制用组合物或者脑细胞摄取糖类的促进剂 当以药物制剂的方式形成时，可用作例如口服给药用固体制剂、口服给药用 液体制剂或者肠胃外给药用注射剂(皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内注射等)。 口服给药用固体制剂包括例如片剂、丸剂、胶嚢剂、散剂和颗粒剂。
可以在上述口服给药用固体制剂中使用的添加剂包括例如赋形剂、粘合
剂、崩解剂、润滑剂、稳定剂和润湿剂。所述赋形剂包括但不限于蔗糖、乳
糖、葡萄糖、淀粉和甘露醇。所述粘合剂包括但不限于阿拉伯胶、羧曱基纤
维素、明胶、微晶纤维素、羟丙基纤维素、曱基纤维素和聚维酮。崩解剂包
括但不限于羧曱基纤维素、淀粉、微晶纤维素和低取代羟丙基纤维素。润滑
剂包括但不限于滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙和二氧化硅。稳定剂和润湿剂包
括但不限于柠檬酸酐、月桂酸钠和甘油。这些添加剂可以单独使用或者两种
以上混合并用。口服给药用固体制剂可以根据常规方法，例如第14次修改
的曰本药典制剂总则中记载的方法等制备，例如将支链氨基酸、其盐或者它
们的衍生物与添加剂混合，并将该混合物制成药物制剂来得到。具体地说，
颗粒剂可以如下制备向支链氨基酸、其盐或者它们的衍生物中加入上述赋
形剂、粘合剂、崩解剂等并均勻地混炼所述混合物后，优选通过压缩造粒、
转鼓造粒、喷雾干燥造粒、挤出造粒、研磨造粒、流动层造粒或搅拌造粒制
成粒状。片剂可以如下制备例如，向支链氨基酸、其盐或者它们的衍生物中加入上述赋形剂、粘合剂、崩解剂等并均匀地混炼所述混合物后，将混合
物直接压缩成型制成片剂；或者预先用支链氨基酸、其盐或者它们的衍生物 与赋形剂、粘合剂、崩解剂等制成颗粒，将该颗粒直接制成片剂，或者将活 性成分与添加剂均匀地混合后、将混合物压缩成型制成片剂。颗粒剂或片剂 按照需要可以通过适当的包衣剂(明胶、蔗糖、阿拉伯胶、巴西棕榈蜡等) 或者肠溶包衣剂(例如，醋酸邻苯二曱酸纤维素、曱基丙烯酸共聚物、羟丙 基纤维素邻苯二曱酸酯、羧甲基乙基纤维素等)进行包衣。胶嚢剂可以如下 制备例如，向支链氨基酸、其盐或者它们的衍生物中加入上述赋形剂、粘 合剂、崩解剂等并将混合物均勻地混炼后随意地制成颗粒，或者对制成的颗 粒用包衣剂包衣，然后填充到胶嚢中。
口服给药用固体制剂中的支链氨基酸、其盐或者它们的衍生物的含量比 例不特别限定，但是优选支链氨基酸的总量以质量计为基于固体制剂整体的 约1 ~ 90%。
口服给药用液体制剂包括例如，水剂、悬浮剂、乳剂、糖浆剂和酏剂。 可以在该液体制剂中使用的添加剂包括例如，纯化水、乙醇和例如它们的混 合液的溶剂。该口服给药用液体制剂还可以含有助悬剂(例如，阿拉伯胶、 琼脂、羧曱基纤维素、羟丙基纤维素等)、乳化剂(例如，聚山梨酯80、 阿拉伯胶等)，调味剂(例如，单糖浆、蜂蜜、蔗糖、酒石酸等)，芳香剂 (例如，水杨酸曱酯、小茴香油、橙油、薄荷醇等)，防腐剂(例如，芳香 酸、苯曱酸钠等)和緩冲剂(例如，柠檬酸、碳酸氢盐等)。这些添加剂可 以单独使用或者两种以上并用。
可以用于肠胃外给药用注射剂的添加剂包括例如，溶剂、稳定剂、增溶 剂、助悬剂、表面活性剂、乳化剂、无痛剂、緩冲剂和防腐剂。所述溶剂包 括但不限于注射用蒸馏水、生理盐水、例如芝麻油的植物油、乙醇、异丙醇、 丙二醇、1，3-丁二醇和聚乙二醇。所述稳定剂和增溶剂包括但不限于谷氨酸、 天冬氨酸和聚山梨酯80。所述助悬剂包括但不限于例如羧曱基纤维素钠和 曱基纤维素的纤维素衍生物，和例如西黄蓍胶和阿拉伯胶的天然胶类。所述表面活性剂包括但不限于脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂 肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、氢化蓖麻油的聚氧乙烯醚和卵磷脂。所述乳化 剂包括但不限于硬脂酸聚烃氧基酯、聚桂醇、聚山梨酯80和阿拉伯胶。所 述无痛剂包括但不限于氨基苯甲酸乙酯、肌醇、盐酸美普卡因、盐酸利多卡 因、三氯叔丁醇、丙二醇和苯曱醇。所述緩冲剂包括但不限于种檬酸或其盐、 葡萄糖、磷酸或其盐和乙酸或其盐。所述防腐剂包括但不限于对羟基苯曱酸 酯、苯扎氯铵和脱水山梨糖醇酸盐。这些添加剂可以单独使用或者两种以上 并用。
所述注射剂可以根据常规方法，例如通过无菌操作法适当溶解支链氨基 酸、其盐或者它们的衍生物与添加剂等来进行制备。制备的注射剂被填充到 安瓿、西林瓶、或者玻璃或聚乙烯制输液容器(包括袋)中，然后进行灭菌。 聚乙烯制输液容器(包括袋)可以，例如，与脱氧剂一起包装于阻气性包装 材料中。所述注射剂可以制成无菌的固体制剂、例如冻千制品，在其使用前 溶解于已灭菌或无菌的注射用蒸馏水或其它的溶剂中来使用。
支链氨基酸、其盐或者它们的衍生物的含量比例不特别限定，但是在输 液制剂的情况下，支链氨基酸的总量优选为基于注射剂整体的约0.1 ~
10w/v%。
根据本发明的低血糖症状抑制用组合物或者脑细胞摄取糖类的促进剂 中可以进一步含有例如维生素(例如，维生素A,维生素B!、 B2、 B6、 B12, 维生素C,维生素D,维生素E,烟酸，泛酸，叶酸，生物素，维生素F, 维生素P，维生素Q,维生素U,胆碱，肌醇，对氨基苯甲酸等)和支链氨 基酸以外的氨基酸(例如，赖氨酸，苯丙氨酸，蛋氨酸，苏氨酸，缬氨酸， 组氨酸，色氨酸，丙氨酸，脯氨酸，精氨酸，谷氨酸，丝氨酸等)的营养素。
含有本发明的低血糖症状抑制用组合物或者脑细胞摄取糖类的促进剂 的上述药物的给药量不特别限定、可以根据剂型、给药途径、患者的年龄和 体重、疾病的严重程度任意地决定。通常给药量为约1 ~ 1000mg/日/kg成人 体重、优选为约1 500mg的范围的量，按照需要可以适当增减。该药物也可以每天分数次给药。
当本发明的低血糖症状抑制用组合物或者脑细胞摄取糖类的促进剂为 食品形式时，将支链氨基酸、其盐或者它们的衍生物中的至少一种，优选至 少L-异亮氨酸与食品卫生法上认可的添加物和其它食品中使用的各种成分 混合制备食品或饮品。所制备的食品的形式不特别限定，可以为例如片剂、 胶嚢剂、散剂、颗粒剂、口服给药用液体药物、固体食品、膏状或果酱状的 半流体食品、凝胶状食品和饮料的任何可能的食品形式。食品的具体例子包 括例如，软饮料、例如果汁或乳酸菌饮料的饮料、果冻、糖果、饼干和曲奇。 该食品的制备方法不特别限定，可以使用公知的任何方法。
可除了使用食品卫生法中认可的添加物(例如，羟丙曱基纤维素、微晶 纤维素、酒石酸、甘露醇、糖精钠、甜菊、二甲基聚硅氧烷、对羟基苯曱酸 酯等)来替代上述药物中的片剂、胶嚢剂、散剂、颗粒剂或口服给药用液体 制剂中的添加物之外，用与上述药物的制备方法同样的方式制备所述片剂、 胶囊剂、散剂、颗粒剂或口服给药用液体制剂。
制备饮料时，按照需要可以含有例如，诸如香料、着色料、天然果汁、 果肉、千酪和巧克力的风味物质和合成甜味剂的添加剂。该添加剂可以单独 使用或者两种以上组合使用。
制备的膏状或果酱状的半流体食品、或者例如果冻的凝胶状食品，除了 上述饮料中的成分之外，优选进一步含有一种或更多种选自琼脂、明胶、角 叉菜胶、结冷胶、黄原胶、刺槐豆胶、果胶、藻酸钠、藻酸钾和其它通常使
用的多糖增稠剂中的凝胶化剂。凝胶化剂的混合量为每100质量份果冻中含 有约2质量份以下，优选为约0.2~2质量份。
食品中的支链氨基酸、其盐或它们的衍生物的含量比例不特别限定，但 是优选支链氨基酸的总量以质量计约为1~60%。
如此制备的食品可以用作抑制低血糖症状或者促进脑细胞^t聂取糖类的 机能性食品。优选在所述食品的包装上带有说明其抑制低血糖症状或者促进 脑细胞摄取糖类的功能的表示。上述食品的优选日摄取量为每成人(约60kg)约0.1 20g的支链氨 基酸、其盐或者它们的衍生物。 实施例
下文参考制剂实施例和试验例对本发明进行更具体的说明，但是本发明 不被这些实施例所限定。 <制备实施例1〉
将300g L-异亮氨酸溶解于注射用蒸馏水中，然后用氢氧化钠调节至pH 6.50,进一步加入注射用蒸馏水调至总体积为IOL。将得到的溶液通过滤膜 过滤，以500mL/袋向聚乙烯制输液袋中填充，密封并在105。C下进行40分 钟高压蒸气灭菌。将该袋与脱氧剂(商品名Ageless,三菱气体化学有限公 司Mitsubishi Gas Chemical Co., Inc.生产) 一起用聚乙烯醇多层膜制成的阻 气包装材料包装，得到注射剂。
<制备实施例2>
将150g的L-异亮氨酸和150g的L-缬氨酸溶解于注射用蒸馏水中，然 后用氩氧化钠调节至pH6.50，进一步加入注射用蒸馏水调至总体积为IOL。 将得到的溶液通过滤膜过滤，以500mL/袋向聚乙烯制输液袋中填充，密封， 并在105。C下进行40分钟高压蒸气灭菌。将该袋与脱氧剂(商品名Ageless, 三菱气体化学有限公司(Mitsubishi Gas Chemical Co., Inc.)生产) 一起用聚 乙烯醇多层膜制的阻气包装材料包装，得到注射剂。
<制备实施例3>
将300g L-异亮氨酸溶解于注射用蒸馏水中，然后用氢氧化钠调节至pH 6.50,进一步加入注射用蒸馏水调至总体积为IOL并通过滤膜过滤。
另一方面，将lOOOg葡萄糖溶解于注射用蒸馏水中，然后加入注射用蒸 馏水调至总体积为10L并通过滤膜过滤。
将这些溶液各自取500mL分别填充于聚乙烯制两室输液袋的室中，每 室中一种溶液，密封，并在105。C下进行40分钟高压蒸气灭菌。将该袋与 脱氧剂(商品名Ageless,三菱气体化学有限公司生产) 一起用聚乙烯醇多层膜制的阻气包装材料包装，得到注射剂。
使用该注射剂时，必须挤压其中一室或者挤压两室，从而将两室相连制 成混合溶液，用作注射液。
<制备实施例4>
将L-丙氨酰基-L-亮氨酸1000g、 L-异亮氨酸300g和L-缬氨酸240g溶 解于注射用蒸馏水中，然后用氢氧化钠调节至pH 6.50,进一步加入注射用 蒸馏水调至总体积为lOL。将得到的溶液通过滤膜过滤，以100mL/袋向聚 乙烯制输液袋中填充，密封，并在105。C下进行40分钟高压蒸气灭菌。将 该袋与脱氧剂(商品名Ageless,三菱气体化学有限公司生产) 一起用聚乙 烯醇多层膜制的阻气包装材料包装，得到注射剂。
<制备实施例5>
向IOL纯化水中加入并分散羟丙曱基纤维素120g和微晶纤维素羧曱基 纤维素钠10g。然后，向该分散液中加入并溶解酒石酸100g、甘露醇1000g、 糖精钠10g、甜菊5g、 二曱基聚硅氧烷40g、对羟基苯曱酸丙酯2g和对羟 基苯曱酸曱酯5g。接着，向其中加入L-异亮氨酸950g、 L-亮氨酸1900g和 L-缬氨酸1150g,用均化器悬浮，用氢氧化钠调节至pH6.50,用均化器均匀 地悬浮，制备悬浮液。
另一方面，向2L纯化水中加入琼脂粉末40g、在约80。C下加温溶解， 并向得到的溶液中加入上述悬浮液6000g和菠萝香料40g并与之混合。以 1 OOg/容器的量向容器中填充得到的混合液，密封并冷却以制备果冻。
<制备实施例6>
将L-异亮氨酸500g、 L-亮氨酸1000g、缬氨酸600g、拧檬酸酐100g和 羟丙基纤维素50g均匀地混合，然后向混合物中添加蒸馏水300g进行造粒。
在60。C下干燥造粒产物2小时，并通过24目的筛得到颗粒。将得到的 颗粒以4.5g/袋的量向铝层压粘性袋中填充，密封得到最终产品。
<试验例1>口服给予支链氨基酸(下文也称为BCAA)在脑摄取糖类中 的促进作用(1) 检测溶液的制备
亮氨酸组将L-亮氨酸3g加入到100mL生理盐水中并用均化器悬浮得 到的L -亮氨酸悬浮液用作亮氨酸组的检测溶液。
异亮氨酸组将L-异亮氨酸3g加入到100mL生理盐水中并用均化器悬 浮得到的L -异亮氨酸悬浮液用作异亮氨酸组的检测溶液。
(2) 检测方法
对雄性6周龄Wistar大鼠(Charles River Japan, Inc.)在自由摄食(精 制饲料AIN-93G, Nippon Nosan Kogyo Co., Ltd.制)和自由饮水下祠养14 天。8周龄时，按照体重将该大鼠分为三组(对照组、亮氨酸组、异亮氨酸 组)。分组后，在乙醚麻醉下切开各大鼠的颈部，将导管插入到颈静脉内。 导管的另一端从皮下穿过，暴露于背部并通过固定装置连接并固定到旋转装 置上。然后将各个大鼠收容在单独的代谢笼中。通过导管以lmL/hr/机体的 速度向大鼠持续给以生理盐水。第二天，对对照组大鼠以15mL/kgBW (体 重)的用量口服给予生理盐水，而对亮氨酸组和异亮氨酸组大鼠以 0.45g/15mL/kg BW的用量口服给予其相应的检测溶液、即L-亮氨酸悬浮液 和L-异亮氨酸悬浮液。给予检测溶液20分钟后，用约3秒钟通过导管静脉 内给予30(iCi/kg的2-[1,2-3印-脱氧葡萄糖(2DG)。静脉内给药后2、 10、 20、 30和40分钟时通过导管各采取300(iL的血，用肝素处理血液后分离血 浆。分离的血浆用于测定2DG水平和血糖水平。将20pL血浆加入液体闪烁 计数器测定用的西林瓶中，然后，向其中加入5mL闪烁体并进行混合后， 用液体闪烁计数器测定血浆中的氚水平(计数)以确定2DG的量。血糖水 平通过葡糖氧化酶染料法测定。
给予检测溶液1小时后，用约3秒钟对大鼠以50mg/kg的给药量静脉内 给予戊巴比妥钠，麻醉下通过从腹主动脉进行肝素采血来除血。除血后取出 脑组织，向该脑组织中混合其重量四倍量的1N NaOH，然后在水浴中于60 。C下加热1小时#_脑组织裂解。向脑组织的裂解液中加入与上述1N NaOH 等量的1NHC1,从而中和该溶液，得到脑组织的中和匀浆。中和匀浆中的2DG量向400jiL的0.15N ZnS04中加入400pL的中和 匀浆，然后加入400nL的0.15N Ba(OH)2并进行混合。离心(6000rpm, 20 分钟)后，分离上清液。将900pL分离的上清液加入液体闪烁计数器测定用 的西林瓶中，然后，向其中加入5mL闪烁体并与之进行混合后，用液体闪 烁计数器测定氚水平(计数)来确定2DG量。
中和匀浆中的2DG和2DG-6P( 2-[l,2」H]-脱氧葡萄糖-6-磷酸盐)的量 向400pL的中和匀浆中加入800pL的6wt%PCA (高氯酸)并进行混合。离 心(6000rpm, 20分钟)后，分离上清液。将900pL分离的上清液加入液体 闪烁计数器测定用的西林瓶中，然后，向其中加入10mL闪烁体并与之进行 混合后，用液体闪烁计数器测定氚水平(计数)来测定2DG和2DG-6P的 量。
中和匀浆中的2DG-6P量从2DG和2DG-6P的量中减去2DG量，从 而算出2DG-6P量。该2DG-6P量用血中2DG量和血糖水平进行校正，来确 定脑摄取的糖类的量。
统计处理时，在方差分析后，进行以对照组为对照的Dunnett，s多重比 较，并且将pO.05视为有显著性差异。 (3)试验结果
结果如图1所示。
由结果可知，通过口服给予检测溶液，即L-亮氨酸悬浮液或L-异亮氨 酸悬浮液1小时后的脑细胞摄取的糖类量高于对照组的该摄取量。特别是， 异亮氨酸组与对照组相比显著地促进了脑细胞摄取糖类。
<试验例2>静脉给予BCAA在脑摄取糖类中的促进作用
(1) 4企测溶液的制备
对照组将葡萄糖以质量计5%的浓度溶解于纯化水中得到的溶液用作 对照组的检测溶液。
混合氨基酸组在含有以质量计5%的葡萄糖的纯化水中，以质量计 1.5%的浓度溶解Amiparen (注册商标，Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.制)制得的溶液用作混合氨基酸组的检测溶液。
亮氨酸组在含有以质量计5%的葡萄糖的纯化水中，以质量计1.5%的 浓度溶解L-亮氨酸制得的溶液用作亮氨酸组的检测溶液。
异亮氨酸组在含有以质量计5%的葡萄糖的纯化水中，以质量计1.5% 的浓度溶解L-异亮氨酸制得的溶液用作异亮氨酸组的检测溶液。
缬氨酸组在含有以质量计5%的葡萄糖的纯化水中，以质量计1.5%的 浓度溶解L-缬氨酸制得的溶液用作缬氨酸组的检测溶液。 (2) 试验方法
对雄性7周龄SD大鼠(Nippon Clare )在自由摄食(精制饲料AIN-WG， Nippon Nosan Kogyo Co., Ltd.制)和自由饮水下飼养14天。8周龄时，按照 体重将该大鼠分为五组(对照组、混合氨基酸组、亮氨酸组、异亮氨酸组、 缬氨酸组)。分组后，在乙醚麻醉下切开各大鼠的颈部，将导管插入到颈静 脉内。导管的另一端从皮下穿过，暴露于背部并通过固定装置连接并固定到 旋转装置上。然后将各个大鼠收容在单独的代谢笼中。通过导管以 10mL/kg/hr的速度向对照组大鼠给予以质量计为5%的葡萄糖溶液，以 10mL/kg/hr的速度向混合氨基酸组、亮氨酸组、异亮氨酸组和缬氨酸组给予 其相应的试液。给予检测溶液23小时后，用约3秒钟通过导管静脉给予 30pCi/kg的2-[1,2-3司-脱氧葡萄糖(2DG)。静脉内给药后2、 10、 20、 30、 40和60分钟，通过导管各采取300fiL的血，用肝素处理血液后分离血浆。 用与试验例1同样的试验方法，测量分离的血浆的2DG水平和血糖水平。
给予2-[l，2」H]-脱氧葡萄糖1小时后，在约3秒钟内对大鼠以50mg/kg 的给药量静脉给予戊巴比妥钠，麻醉下通过从腹主动脉进行肝素采血来除 血。除血后取出脑组织，向该脑组织中混合其重量四倍量的1N NaOH,然 后在水浴中于60。C下加热1小时使脑组织裂解。向脑组织的裂解液中加入 与上述lNNaOH等量的1NHC1,对溶液进行中和得到脑组织的中和匀浆。 使用与试验例1的检测方法同样的方法对中和匀浆中的2DG-6P量进行测 定，确定脑细胞摄取的糖类量。统计处理时，在方差分析后，进行以对照组为对照的Dunnett，s多重比 较来检验显著性差异。 (3) 试验结果
结果如图2所示。由结果可知，给予L-亮氨酸、L-异亮氨酸或L-缬氨 酸24小时后的脑细胞摄取的糖类量高于对照组和混合氨基酸组的该摄取 量。特别是异亮氨酸组和缬氨酸组中发现与对照组相比促进脑细胞摄取糖类 的趋势。
工业实用性
根据本发明，由于可以促进脑细胞摄取糖类，所以可以防止脑细胞内的 糖类水平的降低，从而可以抑制低血糖症状，因此本发明作为药物或机能性 食品是有用的。此外，本发明的低血糖症状抑制用组合物或者将糖类摄取到 脑细胞内的促进剂能够几乎不改变血中的血糖水平，而可以增加脑细胞内的 糖量，可以有效地用于易于由于胰岛素注射或给予抗糖尿病药而陷入低血糖 的糖尿病患者中。
权利要求
1. 一种低血糖症状抑制用组合物，其特征在于，含有选自支链氨基酸、其可药用的盐和它们的衍生物中的至少一种化合物作为有效成分。
2、 根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述支链氨基酸为选自 L-缬氨酸、L-亮氨酸和L-异亮氨酸中的至少 一种化合物。
3、 根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，至少含有L-异亮氨酸。
4、 根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，L-异亮氨酸、L-亮氨酸和 L-缬氨酸的含量比例按照摩尔比换算为1: (0~3) : (0-2)。
5、 根据权利要求1~4中任一项所述的组合物，其特征在于，进一步含有 糖类。
6、 根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述糖类为葡萄糖。
7、 根据权利要求1 ~6中任一项所述的组合物，其特征在于，所述低血糖 症状为交感神经刺激症状和/或脑症状。
8、 一种脑细胞摄取糖类的促进剂，其特征在于，含有选自支链氨基酸、其 可药用的盐和它们的衍生物中的至少 一种化合物作为有效成分。
9、 根据权利要求8所述的脑细胞摄取糖类的促进剂，其特征在于，所述支 链氨基酸为选自L-缬氨酸、L-亮氨酸和L-异亮氨酸中的至少一种化合物。
10、 根据权利要求9所述的脑细胞摄取糖类的促进剂，其特征在于，至少 含有L-异亮氨酸。
11、 根据权利要求10所述的脑细胞摄取糖类的促进剂，其特征在于，L-异亮氨酸、L-亮氨酸和L-缬氨酸的含量比例按照摩尔比换算为1:(0~3):(0~2)。
12、 根据权利要求8 11中任一项所述的脑细胞摄取糖类的促进剂，其特 征在于，进一步含有糖类。
13、 根据权利要求12所述的脑细胞摄取糖类的促进剂，其特征在于，所述 糖类为葡萄糖。
14、 根据权利要求1~7中任一项所述的组合物，其特征在于，其为注射剂或颗粒的形态。
15、 根据权利要求8~ 13中任一项所述的脑细胞摄取糖类的促进剂，其特 征在于，其为注射剂或颗粒的形态。
16、 一种食品，其特征在于，含有选自支链氨基酸、其可药用的盐和它们 的衍生物中的至少一种化合物，其抑制低血糖症状或者促进脑细胞摄取糖类。
17、 根据权利要求16所述的食品，其特征在于，所述食品为果冻。
18、 一种抑制低血糖症状的方法，其特征在于，包括向哺乳动物给予选自 支链氨基酸、其可药用的盐和它们的衍生物中的至少 一种化合物。
19、 一种促进脑细胞摄取糖类的方法，其特征在于，包括向哺乳动物给予 选自支链氨基酸、其可药用的盐和它们的衍生物中的至少一种化合物。
20、 选自支链氨基酸、其可药用的盐和它们的衍生物中的至少一种化合物 在制备抑制低血糖症状的组合物中的应用。
21、 选自支链氨基酸、其可药用的盐和它们的衍生物中的至少一种化合物 在制备脑细胞摄取糖类的促进剂中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种低血糖症状抑制用组合物，其特征在于，含有选自支链氨基酸、其可药用的盐和它们的衍生物中的至少一种化合物作为有效成分。该组合物能够促进脑细胞摄取糖类，从而预防低血糖症状。
文档编号A61P25/02GK101287458SQ20068003790
公开日2008年10月15日 申请日期2006年9月29日 优先权日2005年10月12日
发明者土居雅子, 山冈一平 申请人:株式会社大塚制药工场