嵌合的结合角蛋白的效应蛋白的制作方法

专利名称：嵌合的结合角蛋白的效应蛋白的制作方法
专利说明嵌合的结合角蛋白的效应蛋白 本发明涉及嵌合的结合角蛋白的效应蛋白及其在皮肤化妆品中的用途。
脊椎动物细胞包含细丝(filament)，其中的一类由角蛋白构成。特定的蛋白质如桥粒斑蛋白或亲斑蛋白1通过称作角蛋白结合结构域的特殊序列基序(Fontao L，Favre B，Riou S，Geerts D，Jaunin F，Saurat JH，GreenKJ，Sonnenberg A，Borradori L.，大疱性类天疱疮抗原1(BP230)及桥粒斑蛋白与中间丝的相互作用由在其羧基端内明显不同的序列介导，Mol BiolCell.2003年5月；14(5)1978-92.电子形式公开，2003年1月26日；HopkinsonSB，Jones JC.，跨膜蛋白BP180的氨基端与BP230的氨基端结构域相互作用，因而介导在半桥粒部位的对细胞表面的角蛋白细胞骨架锚定作用，MolBiol Cell.2000 Jan；11(1)277-86；Smith E.A.，Fuchs E.，限定中间丝与桥粒间的相互作用，The Journal of Cell Biology，第141卷，1998)与在毛发、皮肤和指甲和趾甲中同样存在的这些角蛋白结合。
人皮肤经历某些老化过程，其中一些归咎于内在过程(时间所致老化)而一些则归咎于外源因素(环境性因素，例如光老化)。此外，皮肤外观上的临时和永久改变可以出现，如粉刺、油腻或干燥皮肤、角化病、酒渣鼻、光敏感性、炎性、红斑性、过敏性或自身免疫反应，如皮肤病和光照性皮肤病。
外源因素尤其包括阳光或具有可比光谱的人工辐射源以及可以因辐射而产生的自由基或离子性化合物。这些因素也包括香烟烟雾和存在于其中的活性化合物，如臭氧、自由基、单线态氧(singlet oxygen)和破坏皮肤的天然生理或形态的其它活性氧或氮化合物。
为避免并治疗以上提及的损伤、病症，以及护理装饰性处理及美化皮肤、毛发、指甲和趾甲，种类众多的化妆性和药用制品已经由化妆品工业和制药工业产生。蛋白质作为这些制品中组分的用途已经长久已知的。因为它们的特殊特性，蛋白质和酶不仅在这类组合物的产生中具有广泛应用领域，而且因酶活性或赋予结构的特性，它们在皮肤和毛发中产生积极的生理学变化。
然而，蛋白质通常不能够与动物生物的表面结构形成稳定键，即仅确定了对于几种蛋白质例如皮肤、毛发的结合。因此，尽管施用具有某些生理学或装饰特性的蛋白质，然而不能确保该蛋白质抵达其作用部位并且在那里停留对想要的生理学或装饰作用所需要的足够长时间。
具有申请号DE 102005011988.3的德国专利申请描述了角蛋白结合结构域在化妆制品中的用途。具有申请号PCT/EP/05/005599的国际专利申请揭示角蛋白结合结构域也可以与效应分子偶联。
本发明的目标因此是提供可以皮肤化妆性地用于对皮肤、毛发、指甲和趾甲应用的新型蛋白质。有利地，将鉴定具有角蛋白结合特性、显示皮肤化妆性作用并且还适用于产生化妆性和/或皮肤化妆性制剂或制品的蛋白质或多肽。
发明概述 本发明首先提供包含(a)至少一种结合角蛋白的多肽(i)和(b)至少一种进一步的效应多肽(ii)的嵌合的结合角蛋白的效应蛋白。
在特别优选的实施方案中，这些是具有对人皮肤角蛋白、毛发角蛋白或甲角蛋白的结合亲和性的结合角蛋白的多肽(i)。优选地，根据本发明使用的结合角蛋白的多肽(i)包含 (a)至少一个根据SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215的序列，或 b)与至少一个根据SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215的序列至少40％同一并且能够结合角蛋白的多肽。
结合角蛋白的多肽(i)优选地能够由这样的核酸分子编码，所述核酸分子包含选自以下的至少一个核酸分子 c)核酸分子，编码包含SEQ ID NO2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215中所示序列的多肽； d)核酸分子，包含SEQ ID NO1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、145、149、152、159、161、163、165、212或214中所示序列的至少一个多核苷酸； e)核酸分子，编码根据序列SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215的多肽； f)具有与至少一个根据SEQ ID No1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、145、149、152、159、161、163、165、212或214的序列相对应的核酸序列的核酸分子，或因替换、缺失或插入而自其衍生的编码多肽的核酸分子，其中所述多肽与至少一个根据SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215的序列至少40％同一并且能够结合至角蛋白； g)编码码由单克隆抗体识别的多肽的核酸分子，其中所述的单克隆抗体针对根据(c)至(e)的核酸分子所编码的多肽； h)编码结合角蛋白的蛋白质的核酸分子，其在严格条件下与根据(c)至(e)的核酸分子杂交； i)编码结合角蛋白的蛋白质的核酸分子，所述核酸分子能够通过使用根据(c)至(e)的核酸分子或其包含至少15个核苷酸、优选20个核苷酸、30个核苷酸、50个核苷酸、100个核苷酸、200个核苷酸或500个核苷酸的部分片段作为探针在严格杂交条件下分离自DNA库，和 j)核酸分子，其能够通过反向翻译序列SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、166、213或215中所示的氨基酸序列之一而产生。
本发明优选地提供结合角蛋白的效应蛋白，其中效应多肽(ii)选自酶、抗体、效应物结合蛋白、荧光蛋白、抗微生物肽和自动装配蛋白。
本发明特别优选地提供了结合角蛋白的效应蛋白，其包含选自氧化酶、过氧化物酶、蛋白酶、酪氨酸酶、乳过氧化物酶、溶菌酶、淀粉葡糖苷酶、葡萄糖氧化酶、超氧化物歧化酶、光裂合酶和过氧化氢酶的酶作为效应多肽(ii)。
另外，优选包含丝蛋白作为效应多肽(ii)的结合角蛋白的效应蛋白，其中所述的丝蛋白特别优选地是这样的丝蛋白，其包含至少一个根据SEQ IDNo151、201、202、203、204、205、206、207、208、209或210的序列或对应于与至少一个根据SEQ ID No151、201、202、203、204、205、206、207、208、209或210的序列至少40％同一的多肽。
此外，本发明涉及包含由如此核酸分子编码的丝蛋白的那些结合角蛋白的效应蛋白，其中所述的核酸分子包含选自如下的至少一个核酸分子 k)核酸分子，编码包含SEQ ID NO151、201、202、203、204、205、206、207、208、209或210中所示序列的多肽； l)核酸分子，包含至少一个SEQ ID NO150中所示序列的多核苷酸； m)核酸分子，编码根据序列SEQ ID No151、201、202、203、204、205、206、207、208、209或210的多肽； n)具有根据SEQ ID No150的核酸序列的核酸分子，或因替换、缺失或插入而自其衍生的编码多肽的核酸分子，其中所述多肽与根据SEQ ID No151的序列至少40％同一； o)编码由单克隆抗体识别的多肽的核酸分子，其中所述的单克隆抗体针对根据(k)至(m)的核酸分子所编码的多肽； p)编码结合角蛋白的蛋白质的核酸分子，其在严格条件下与根据(k)至(m)的核酸分子杂交； q)编码结合角蛋白的蛋白质的核酸分子，所述核酸分子能够通过使用根据(k)至(m)的核酸分子或其包含至少15个核苷酸的部分片段作为探针在严格杂交条件下分离自DNA库；和 r)核酸分子，其能够通过反向翻译序列SEQ ID No151、201、202、203、204、205、206、207、208、209或210中所示的氨基酸序列之一而产生。
在本发明的优选实施方案中，本发明的嵌合的结合角蛋白的效应蛋白是其中上述的多肽(i)和(ii)通过翻译融合而连接起来的蛋白质。
本发明也优选地提供其中上述的多肽(i)和(ii)通过化学偶联反应而连接起来的结合角蛋白的效应蛋白。在本文中优选其中效应多肽(ii)共价地结合至结合角蛋白的多肽(i)的内部氨基酸的侧链、羧基端或氨基端的那些结合角蛋白的效应蛋白。
此外，本发明提供其中效应多肽(ii)和结合角蛋白的多肽(i)通过间隔元件连接起来的上述结合角蛋白的效应蛋白。这些结合角蛋白的效应蛋白优选地是通过其中间隔元件是交联剂的间隔元件而连接起来的结合角蛋白的效应蛋白。
还优选包含间隔元件的结合角蛋白的效应蛋白，其中间隔元件是至少双官能性的接头，所述接头通过结合至结合角蛋白的多肽(i)和效应多肽的内部氨基酸的侧链、羧基端或氨基端而将所述多肽共价地连接起来。除了已经描述的结合角蛋白的效应蛋白之外，还优选其中连接(i)和(ii)多肽的间隔元件是多肽。
本发明还提供上述结合角蛋白的效应蛋白在皮肤化妆品中的用途，其中所述的皮肤化妆品优选地是皮肤保护组合物、皮肤护理组合物、皮肤清洁组合物、毛发保护组合物、毛发护理组合物、毛发清洁组合物、染发剂或装饰性化妆品的产物。
本发明还提供包含上述结合角蛋白的效应分子之一的以上提及的皮肤化妆品。
此外，本发明提供根据SEQ ID No168、176、182、188、194和200中所示氨基酸序列的蛋白质。
本发明同样提供根据SEQ ID No167、175、181、187、193或199中中所示序列的核酸分子。
另外，本发明提供包含核酸分子的DNA表达盒，其包含具有根据SEQID No167、175、181、187、193或199中所示核酸序列的核酸分子。
本发明同样提供包含DNA表达盒的载体，其中所述的DNA表达盒包含具有根据SEQ ID No167、175、181、187、193或199中所示核酸序列的核酸分子。
此外，本发明提供转基因细胞，包含 s)至少一种以上提及的载体，或 t)至少一种以上提及的表达盒，或 u)至少一种以上提及的编码多肽的核酸分子，其中所述的多肽包含由根据SEQ ID No167、175、181、187、193或199中所示序列的核酸分子编码的至少一种多肽。
定义 为本发明的目的，“抗体”是人和有颚脊椎动物产生以针对抗原(感染病原体或不属于身体的生物材料)起到保护作用的蛋白质。抗体是高等真核生物免疫系统的核心组分并且由一类白血细胞即B细胞分泌。它们存在于血液和组织的胞外液中。
为本发明的目的，“反向翻译”意指将蛋白质序列翻译成编码该蛋白质的核酸序列。反向翻译因此是将氨基酸序列解码成与之对应的核酸序列的过程。常用方法以产生用于某生物的密码子使用频率表为基础，其中所述的密码子使用频率表通过计算机辅助序列比较而产生。利用这种密码子使用频率表，有可能对于具体生物确定最频繁用于某种氨基酸的密码子。蛋白质反向翻译可以使用本领域技术人员已知并且为此目的而专门产生的计算机算法(Andrés Moreira和Alejandro Maass.TIP借助遗传算法的蛋白质反向翻译.Bioinformatics，第20卷，第13期，第2148-2149页(2004)；G Pesole，M Attimonelli，和S Liuni.基于密码子使用策略的反向翻译方法.Nucleic Acids Res.1988 March 11；16(5Pt A)1715-1728.)进行。
为本发明的目的，“嵌合的结合角蛋白的效应蛋白”意指包含结合角蛋白的多肽、蛋白质或蛋白质结构域(i)和效应多肽、效应蛋白或效应蛋白结构域(ii)的蛋白质，其中所述的多肽、蛋白质或蛋白质结构域人工地连接在一起。人工连接意指使用生物技术或化学技术方法而产生因而在生命世界(例如其中所述多肽、蛋白质或蛋白质结构域天然存在的生物)中无法实现的连接。为产生嵌合的结合角蛋白的效应蛋白，在生物技术方法的情况下，优选的是翻译融合，并且在化学技术方法的情况下，优选在术语“化学偶联反应”下所采用的方法。
“翻译融合”理解为意指产生这样的嵌合核酸分子，其中编码多肽、蛋白质或蛋白质结构域的至少两种核酸分子的连接以如此方式实现以至于因为这种嵌合核酸分子的翻译事件而能够形成连续的多肽链。
“装饰性化妆品”意指主要不用来护理而用于美化或改善皮肤、毛发和/或指甲和趾甲外观的化妆辅助品。这种类型的辅助品是合适地为本领域技术人员已知的并且包含例如眼圈墨笔、睫毛油、眼影、调色日霜(tinted daycream)、底粉、遮瑕笔、腮红、唇膏、唇线笔、美容品(make-up)、甲油、光亮凝胶(glamour gel)等。还包括适于对皮肤或毛发着色的组合物。
“皮肤化妆品”也称作“加药化妆品(cosmeceutical)”或“皮肤化妆组合物”或“皮肤化妆制品”，是(i)用于防护对皮肤、毛发和/或指甲和趾甲的损伤，(ii)用于治疗皮肤、毛发和/或指甲或趾甲的现有损伤和(iii)用于护理皮肤、毛发和/或指甲或趾甲的组合物或制品，包含皮肤化妆性、甲化妆性、毛发化妆性、皮肤病学用、卫生或药用组合物、制品和制剂并且用于改善皮肤感觉(感官特性)。明确地包括用于装饰性化妆品的组合物。考虑到化妆，还包括用于皮肤护理的组合物，借助这种组合物实现了药用皮肤病学的预期用途。该类型的组合物或制品用于辅助、预防和治疗皮肤病症，并且除了化妆作用之外，还产生生物学作用。为了上文所给出定义的目的，“皮肤化妆品”包含在化妆性相容介质中的本领域技术人员熟知并可以在化妆品手册例如Schrader，Grundlagen和Rezepturen der Kosmetika[化妆品的要素和制剂]，Hüthig Verlag，Heidelberg，1989，ISBN 3-7785-1491-1，或Umbach，KosmetikEntwicklung，Herstellung und Anwendungkosmetischer Mittel[化妆品化妆性组合物的开发、制造和使用]，扩编第二版，1995，Georg Thieme Verlag，ISBN 3 13 712602 9中找得到的合适的助剂和添加剂。
为本发明的目的，“皮肤化妆有效成分”或“皮肤化妆性有效成分”是在根据上文所给出定义的皮肤化妆品中存在的参与实现皮肤化妆品各种作用机制的有效成分。它们因此是(i)导致保护皮肤、毛发和/或指甲或趾甲免受损伤、(ii)可以用于治疗皮肤、毛发和/或指甲和趾甲的现有损伤、(iii)具有皮肤、毛发和/或指甲或趾甲护理特性和(iv)用于装饰性美化或改善皮肤、毛发和/或指甲和趾甲外观的有效成分。考虑到化妆，还包括借助其实现药用皮肤病学的预期用途的皮肤护理组合物。该类型的有效成分用于辅助、预防和治疗皮肤病症，并且除了化妆作用之外，还产生生物学作用。该类型的有效成分例如选自天然或合成聚合物、颜料、保湿剂、油、蜡、蛋白质、酶、矿物质、维生素、防晒剂、染料、香料、抗氧化剂、过氧化物分解剂和防腐剂和这样的药用有效成分，其用于辅助、避免和治疗皮肤病并且具有愈合、预防损伤、再生或改善皮肤总体状况的生物学作用。
为本发明的目的，“表达盒”意指这样的核酸分子，其包含以功能性方式与确保在细胞或生物、优选在原核细胞、酵母或真核细胞的细胞培养中表达的至少一种遗传控制元件(例如启动子)连接的核酸分子。
“功能性连接”意指例如启动子与待表达(例如编码结合角蛋白的效应蛋白)的核酸分子以及根据需要的其它调节元件如终止子以如此方式依次排列，以至于每种调节元件可以在该核酸分子的转基因表达期间充分发挥其功能。为此，实际上不需要在化学意义上的直接连接。遗传控制序列如增强子序列可以还从更远的位置上或甚至从其它DNA分子中对靶序列发挥其作用。优选这样的排列，其中待转基因表达的核酸分子位于起启动子作用的序列之后，因此两种序列共价地结合在一起。优选地，启动子序列与待转基因表达的核酸分子间的距离在本文中小于200碱基对、特别优选地小于100碱基对、非常特别优选地小于50碱基对。
产生功能性连接和还有产生表达盒可以使用例如在Maniatis T，Fritsch EF和Sambrook J(1989)Molecular CloningA LaboratoryManual，Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor(NY)、在Silhavy TJ，Berman ML和Enquist LW(1984)Experiments with GeneFusions，Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor(NY)、在Ausubel FM等(1987)Current Protocols in Molecular Biology，GreenePublishing Assoc.And Wiley Interscience以及在Gelvin等(1990)于PlantMolecular Biology Manual中描述的惯用重组及克隆技术而实现。然而，还有可能在这两种序列之间存在其它序列，其中所述的其它序列具有例如含某些限制性酶切割位点的接头或信号肽的功能。序列的插入也可以导致表达融合蛋白。优选地，由启动子与待表达核酸序列的连接构成的表达盒可以以整合方式在载体中存在并且例如通过转化插入植物基因组。
术语“细胞”指个体细胞。术语“细胞群(cells)”指细胞的群体。该群体可以是以同步化或非同步化方式存在。“细胞”或“细胞群”包括单细胞生物和作为多细胞复合体或生物中组分的细胞。
“转基因”与细胞或生物联系时意指就核酸分子而言，从该核酸分子中编码的多肽、包含所述核酸分子的表达盒或载体或用所述核酸分子、表达盒或载体转化的细胞或生物，通过基因工程方法所实现的全部这样的细胞或生物，其中编码以下对象的核酸分子 a)结合角蛋白的多肽(i)，或 b)效应蛋白，或 c)(a)和(b) 均不位于其天然遗传环境中或均已经通过基因工程方法受到修饰，在此情况下修饰可以例如是一个或多个核苷酸基团的置换、添加、缺置或插入。天然遗传环境意指在起源生物中天然染色体位点或存在于基因组文库中。在基因组文库的情况下，核酸序列的天然遗传环境优选至少部分地保留。该环境侧翼分布在核酸序列的至少一侧并且具有至少50bp、优选至少500bp、特别优选至少1000bp、最特别优选至少5000bp的序列长度。天然存在性表达盒-例如结合角蛋白的多肽启动子与编码结合角蛋白的多肽的相应基因的天然存在组合-在后者通过非天然、合成(人工)方法例如诱变法加以修饰时变成转基因表达盒。适宜的方法已描述(US 5,565,350；WO00/15815)中描述。
为本发明的目的，“效应多肽”意指具有对皮肤、毛发和/或指甲或趾甲的某种可预见性作用，优选生物学或生理学性、保护、预防和/或护理性作用的蛋白质性皮肤化妆有效成分。效应分子优选地是蛋白质性化合物如多肽、蛋白质或酶。特别优选自动装配蛋白并且非常特别优选丝蛋白。
“角蛋白”意指从索状蛋白质复合体构成的中间丝(intermediatefilaments)。中间丝自位置相互平行以产生管样结构的众多相同类型的蛋白质(单体)构成。中间丝结合起来以产生相对大的束(张力原纤维)。中间丝与微管和肌动蛋白细丝一起形成细胞的细胞骨架。在五种中间丝之间作出区分酸性角蛋白及碱性角蛋白、桥粒蛋白、神经丝和核纤层蛋白。为本发明的目的而特别优选的是存在于上皮(覆盖多细胞动物生物的全部外体表的单细胞层或多细胞层)中的酸性角蛋白及碱性角蛋白。“角蛋白”或“角蛋白类”(又称角质物质、硬蛋白)意指负责细胞稳定性和形状的蛋白质。该蛋白质是哺乳动物皮肤、毛发和甲的组分。角蛋白的强度因纤维形成而增加各个氨基酸链形成右手α螺旋，并且这些螺旋中的每三个螺旋形成左手超螺旋(＝初原纤维)。十一条初原纤维合并以产生微原纤维-这些组合随后产生束并且形成例如包围毛发细胞的巨原纤维。
“结合角蛋白的多肽”意指具有在上文所给出定义的意思范围内的角蛋白结合特性的多肽或蛋白质。结合角蛋白的多肽因此也是中间丝缔合蛋白。这些结合角蛋白的多肽具有针对角蛋白或由角蛋白构成的宏观结构如初原纤维、微原纤维或巨原纤维的结合亲和性。此外，将结合角蛋白的多肽理解为意指具有对哺乳动物皮肤、毛发和/或指甲或趾甲的结合亲和性的那些多肽。
“结合角蛋白的多肽”还是在哺乳动物生物中具有与角蛋白、角质纤维、皮肤或毛发结合有关的生物学功能的多肽。结合角蛋白的多肽同样意指对实际结合至角蛋白、角质纤维、皮肤或毛发所需要的结合基序或蛋白质结构域。结合角蛋白的多肽(ii)对角蛋白的结合可以在实施例8、9和10中所述的条件下测试。结合角蛋白的多肽是这样的多肽，其在以上提及的定量性角蛋白结合试验中具有桥粒斑蛋白(SEQ ID No2)、优选桥粒斑蛋白的角蛋白结合结构域B(SEQ ID No4)的约10％、20％、30％、40％或50％、优选50％、60％、70％、80％或90％、特别优选100％、125％、150％、非常特别优选200％、300％或400％、最优选500％、600％、700％或1000％或更高的角蛋白结合能力。
“化妆性相容介质”将在广义上理解并且意指适于产生化妆性或皮肤化妆制品的物质及其混合物。它们优选地是蛋白质相容性介质。
当与人和/或动物皮肤组织或毛发接触时，“化妆性相容物质”不造成刺激作用或损伤并且与其它物质兼容。此外，这些物质具有轻微过敏原潜力并且由国家注册权力机关批准用于化妆制品中。这些物质是本领域技术人员熟悉的并且可以例如在化妆品手册例如Schrader，Grundlagen和Rezepturen der Kosmetika[化妆品的要素和制剂]，Hüthig Verlag，Heidelberg，1989，ISBN 3-7785-1491-1中找到。
“核酸”或“核酸分子”意指处于单链或双链形式、处于有义或反义方向的脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸或聚合物或其杂交体。术语核酸或核酸分子可以使来描述基因、DNA、cDNA、mRNA、寡核苷酸或多核苷酸。
“核酸序列”意指根据上文所给出定义的核酸分子的连续和连接在一起的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸序列，其可以使用可获得的DNA/RNA测序技术予以确定并且以一串代表核苷酸的缩写、字母或单词描述或显示。
为本发明的目的，“多肽”意指由氨基酸分子构成的大分子，在所述大分子中氨基酸通过肽键而线性地连接起来。多肽可以由一些(约10至100个)氨基酸组成，但是也包括通常由至少100个氨基酸构成的蛋白质，不过还可以包含几千个氨基酸。优选地，多肽包含至少20、30、40或50个、特别优选至少60、70、80或90个、非常特别优选至少100、125、150、175或200个、最优选至少超过200个氨基酸，上限有可能是几千个氨基酸。
两个核酸序列间的“同源性”或“同一性”理解为意指核酸序列在所讨论全部序列长度范围内的同一性，这借助程序算法(威斯康辛软件包第10.0版，威斯康辛大学，Genetics Computer Group(GCG)，Madison，USA；Altschul等(1997)Nucleic Acids Res.253389ff)用以下参数设置通过比较进行计算 缺口权重50 长度权重3 平均匹配10 平均错配0 通过举例方式，基于核酸具有与序列SEQ ID NO1的至少80％同源性的序列理解为意指当根据以上程序算法用以上参数设置与序列SEQ IDNO1相比时具有至少80％同源性的序列。
两个多肽间的“同源性”或“同一性”理解为意指氨基酸序列在所讨论全部序列长度范围内的的同一性，这借助程序算法(威斯康辛软件包第10.0版，威斯康辛大学，Genetics Computer Group(GCG)，Madison，USA；Altschul等(1997)Nucleic Acids Res.253389ff)用以下参数设置通过比较进行计算 缺口权重8 长度权重2 平均匹配2.912 平均错配-2.003 通过举例方式，基于多肽具有与序列SEQ ID NO2的至少80％同源性的序列理解为意指当根据以上程序算法用以上参数设置与序列SEQ IDNO2相比时具有至少80％同源性的序列。
“杂交条件”将在广义上理解并且取决于应用，意指严格或较低严格的杂交条件。此类杂交条件尤其在Sambrook J，Fritsch EF，Maniatis T等，在Molecular Cloning(A Laboratory Manual)，第二版，Cold Spring HarborLaboratory Press，1989，第9.31-9.57页)或在Current Protocols inMolecular Biology，John Wiley & Sons，N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6中描述.本领域技术人员将选择允许区分特异性杂交与非特异性杂交的杂交条件。例如，在洗涤步骤期间的条件可以选自具有低严格(以大约2×SSC在50℃)的条件和具有高严格(以大约0.2×SSC在50℃、优选在65℃)(20×SSC0.3M柠檬酸钠，3M NaCl，pH 7.0)的条件。此外，在洗涤步骤期间的温度可以从低严格条件在室温大约22℃增加至在大约65℃的较高严格条件。两种参数即盐浓度和温度均可以同时变化或在任何情况下保持另一个参数恒定下，独立地变化。在杂交期间，还有可能使用变性剂如甲酰胺或SDS。在50％甲酰胺存在下，杂交优选地在42℃进行。一些用于杂交和洗涤步骤的示意性条件如下给出 1.杂交条件可以选自例如以下条件 a)4×SSC，在65℃， b)6×SSC，在45℃， c)6×SSC，100μg/ml变性的片段化鱼精DNA，在68℃， d)6×SSC，0.5％SDS，100μg/ml变性的鲑精DNA，在68℃， e)6×SSC，0.5％SDS，100μg/ml变性片段化的鲑精DNA，50％甲酰胺，在42℃， f)50％甲酰胺，4×SSC，在42℃，或 g)50％(体积/体积)甲酰胺，0.1％牛血清白蛋白，0.1％菲可，0.1％聚乙烯吡咯烷酮，50mM磷酸钠缓冲液pH 6.5，750mMNaCI，75mM柠檬酸钠，在42℃，或 h)2×或4×SSC在50℃(低严格条件)， i)30-40％甲酰胺，2×或4×SSC在42℃(低严格条件)。
500mN磷酸钠缓冲液pH 7.2，7％SDS(g/V)，1mM EDTA，10μg/ml单链DNA，0.5％BSA(g/V)(Church和Gilbert，GenomicSEquenceing.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.811991.1984) 2.洗涤步骤可以可以选自例如以下条件 a)0.015M NaCl/0.0015 M柠檬酸钠/0.1％SDS，在50℃。
b)0.1×SSC，在65℃。
c)0.1×SSC，0.5％SDS，在68℃。
d)0.1×SSC，0.5％SDS，50％甲酰胺，在42℃。
e)0.2×SSC，0.1％SDS，在42℃。
f)2×SSC，在65℃(低严格条件)。
在一个实施方案中，严格杂交条件如下选择 选择包含甲酰胺、NaCl和PEG 6000的杂交缓冲液。甲酰胺在杂交缓冲液中的存在使双链核酸分子去稳定，因此杂交温度可以降低至42℃而不降低严格。盐在杂交缓冲液中的用途是增加双链体的复性速率，或增加杂交效率。虽然PEG增加溶液的粘度，但对复性速率产生不利作用，因而在溶液中存在该聚合物时，探针在其余介质中的浓度应当升高，这增加杂交速率。所述缓冲液的组成如下 表1杂交缓冲液 杂交在42℃过夜进行。滤膜在次日早晨用2×SSC+0.1％SDS洗涤3次，每次约10分钟。
涉及描述“携带羟基官能团的效应分子”时，“羟基官能团”意指游离OH基或能够使携带OH基的这些分子与其它分子经酯化反应而共价连接的羟基。为本发明的目的，“羟基官能团”还是可以被化学地转化成OH官能团的那些官能团，如衍生物如甲氧基、乙氧基。因此，本发明的效应分子具有至少一个羟基。然而，还有可能使用带2个、3个或更多个羟基官能团的效应分子。
涉及描述“携带氨基官能团的效应分子”时，“氨基官能团”意指允许携带氨基官能团的分子经酰胺键与其它分子共价连接的氨基。为本发明的目的，“氨基官能团”还是可以化学地转化成氨基官能团的那些官能团。因此，本发明的效应分子具有至少一个氨基官能团。然而，还有可能使用带2个、3个或更多个氨基官能团和/或仲氨基的效应分子。
在涉及接头分子与效应分子结合或与结合角蛋白的蛋白质结合时“偶联”意指所述分子的共价连接。
“偶联官能度”是接头分子中可以与效应分子或结合角蛋白的蛋白质的官能团形成共价键的官能团。可以提及的非限制性实例是羟基、羧基、巯基和氨基。“偶联官能度”和“锚定基团”可交换地使用。
自动装配蛋白 自动装配蛋白是可以在合适条件下自发聚集成高分子量、高阶结构(尤其球、膜、细丝)的蛋白质或肽。它们可以是合成性、生物模拟性或天然来源性蛋白质和肽。非限制性实例是结构蛋白、β折叠丰富的蛋白、以及两亲性和螺旋性肽。
为本发明的目的，“间隔元件”意指物理地将结合角蛋白的多肽(i)与效应多肽(ii)分开的分子或大分子。
间隔元件包含以下所述的接头分子和蛋白质性元件如，寡肽、多肽或蛋白质结构域。
载体是可以稳定地在宿主细胞内建立并复制的DNA分子。载体例如是质粒、粘粒。此外，载体也可以理解为意指这样的DNA分子，它们可以运输来自一种细胞的DNA元件至另一种细胞，其中细胞无需属于同一种生物(例如噬菌体、病毒和农杆菌(agrobacteria))。在有利的实施方案中，插入包含目的基因的表达盒由质粒载体实现。优选可以染色体外地在细胞或生物中建立的那些载体。表达盒/载体稳定整合至宿主基因组中同样是可能的。
术语“表达载体”指包含与调节元件功能性连接的目的DNA分子并且可以因此确保目的DNA分子在靶生物中表达的载体。
发明详述 本发明提供包含(a)至少一种结合角蛋白的多肽(i)和(b)至少一种进一步的效应多肽(ii)的嵌合的结合角蛋白的效应蛋白。
在特别优选的实施方案中，它们是具有对人皮肤角蛋白，毛发角蛋白或甲角蛋白的结合亲和性的结合角蛋白的多肽(i)。
特别优选这样的结合角蛋白的多肽(i)，其 a)包含至少一个根据SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215的序列，或 b)对应于与至少一个根据SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215的序列至少40％、45％或50％、优选至少55％、60％、65％或70％、特别优选至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％或94％、非常特别优选至少95％或96％同一并且能够结合角蛋白的多肽。
在本发明的优选实施方案中，使用的结合角蛋白的多肽(i)由这样的核酸分子编码，所述核酸分子包含选自以下的至少一个核酸分子 c)核酸分子，编码包含SEQ ID NO2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215中所示序列的多肽； d)核酸分子，包含SEQ ID No1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、145、149、152、159、161、163、165、212或214中所示序列的至少一个多核苷酸； e)核酸分子，编码根据序列SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215的多肽； f)具有与至少一个根据SEQ ID No1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、145、149、152、159、161、163、165、212或214的序列相对应的核酸序列的核酸分子，或因替换、缺失或插入而自其衍生的编码多肽的核酸分子，其中所述多肽至少40％、45％或50％、优选至少55％、60％、65％或70％、特别优选至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％或94％、非常特别优选至少95％或96％与至少一个根据SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215的序列同一并且能够结合至角蛋白； g)编码由单克隆抗体识别的多肽的核酸分子，其中所述的单克隆抗体针对根据(c)至(e)的核酸分子所编码的多肽； h)编码结合角蛋白的蛋白质的核酸分子，其在严格条件下与根据(c)至(e)的核酸分子杂交； i)编码结合角蛋白的蛋白质的核酸分子，所述核酸分子能够通过使用根据(c)至(e)的核酸分子或其包含至少15个核苷酸、优选20个核苷酸、30个核苷酸、50个核苷酸、100个核苷酸、200个核苷酸或500个核苷酸的部分片段作为探针在严格杂交条件下分离自DNA库，和 j)核酸分子，其能够通过反向翻译序列SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215中所示的氨基酸序列之一而产生。
根据本发明合适的结合角蛋白的多肽结构域在桥粒斑蛋白、亲斑蛋白、斑珠蛋白、网蛋白、斑周蛋白、外被斑蛋白、毛透明蛋白、表皮斑蛋白或毛囊蛋白质的多肽序列中存在。
在本发明的优选实施方案中，将根据序列SEQ ID NoNo.2、42、44、46、48、146、150、153、156、157、158、160、162、164或166的桥粒斑蛋白或其部分序列，和/或根据序列SEQ ID No18、20、26、28、32、34、36、213、215的亲斑蛋白或其部分序列和/或根据序列SEQ ID No50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70的斑珠蛋白或其部分序列和/或根据序列SEQ ID No86的斑周蛋白和/或根据序列SEQ ID No90、92、94、96、98、102、104、105的外被斑蛋白或其部分序列和/或根据SEQ IDNo138和140的序列用作结合角蛋白的多肽。优选的角蛋白结合结构域是序列SEQ ID NOs4、6、8、10、12、14、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215中所示的桥粒斑蛋白多肽及其功能性等效物。在本发明非常特别优选的实施方案中，于序列156、157、158、160、162、164、166、213和/或215中所示的结合角蛋白的多肽在本发明方法中使用。在最为优选的本发明实施方案中，使用在序列SEQ ID No213中显示的结合角蛋白的蛋白质。在本文中不言自明的是可以在具有或不具有SEQ ID No213中存在的组氨酸锚时使用该蛋白质。因此，组氨酸锚(或将类似地使用的纯化/检测系统)也可以在羧基端存在。在所述结合角蛋白的蛋白质的实际使用中(例如在化妆制品中)，组氨酸锚(或将类似地使用的纯化/检测系统)不是必需的。因此使用没有额外的氨基酸序列的所述蛋白质是优选的。
同样根据本发明包括的是具体公开的结合角蛋白的多肽(i)的“功能性等效物”及它们在本发明方法中的用途。
在本发明范围内，那些具体公开的结合角蛋白的多肽(i)的“功能性等效物”或类似物是也具有所需生物学活性如角蛋白结合作用的与所述结合角蛋白的多肽(i)不同的多肽。因此，例如，结合角蛋白的多肽的“功能性等效物”理解为意指这些多肽，它们在可比较的条件(除非另外说明)下在实施例中描述的定量性角蛋白结合试验中具有约10％、20％、30％、40％或50％、优选地60％、70％、80％或90％、特别优选地100％、125％、150％、非常特别优选地200％、300％或400％、最优选地500％、600％、700％或1000％或更多的在SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215下所示多肽的角蛋白结合能力。
根据本发明，“功能性等效物”尤其理解为还意指突变蛋白质，其在以上所提及氨基酸序列的至少一个序列位置内具有与具体给出的氨基酸不同的氨基酸，但是却具有以上提及的生物学活性之一。“功能性等效物”因此包括通过突变可获得的突变蛋白质，其中所述的改变可以在任何序列位置内产生，只要这些改变产生了具有根据本发明的特性谱的突变蛋白质。
为本发明的目的，“突变”意指在质粒内或生物基因组内的基因变体的核酸序列中的改变。突变可以例如因复制期间的错误而产生，或由诱变剂引起。自发突变率在生物的细胞基因组中是极低的，尽管种类众多的生物性、化学性或物理性诱变剂是本领域有知识的技术人员已知的。
突变包括一个或多个核酸基团的替换、插入、缺失。替换理解为意指替换单个的核酸碱基，本文中在转换(嘌呤碱对嘌呤碱或嘧啶碱对嘧啶碱的替换)和颠换(嘌呤碱对嘧啶碱的替换(或反向置换))间进行区分。
添加或插入理解为意指将额外的核酸基团并入DNA，有可能导致阅读框移位。就这种类型的阅读框移位而言，在“符合读框式”插入/添加与“读框错位式”插入间进行区分。在“符合读框式”插入/添加的情况下，阅读框保留并且多肽因插入的核酸所编码氨基酸的数目而扩大。在“读框错位式”插入/添加的情况下，原有阅读框丧失并且不再可能形成完整及有功能的多肽。
缺失描述了一个或多个碱基对的丢失，这同样导致阅读框的“符合读框式”和“读框错位式”移位以及因此产生与形成完整蛋白质方面有关的后果。
可以用于产生随机突变或定向突变的诱变剂(诱变剂)以及可用的方法和技术是本领域技术人员已知的。此类方法和诱变剂例如在A.M.vanHarten[(1998)，“Mutation breedingtheory and practical applications”，Cambridge University Press，Cambridge，UK]，E Friedberg，G Walker，W Siede[(1995)，“DNA Repair and Mutagenesis”，Blackwell Publishing]或K.Sankaranarayanan，J.M.Gentile，L.R.Ferguson[(2000)“Protocolsin Mutagenesis”，Elsevier Health Sciences]中描述。
为导入定向突变，可以使用惯用的分子生物学方法和手段，如体外诱变试剂盒、LA PCR体外诱变试剂盒(Takara Shuzo，Kyoto)或来自Stratagene的QuikChange

试剂盒或使用合适引物的PCR诱变法。
已经如上所讨论，存在为数众多的化学性、物理性和生物性诱变剂。
下文所列的诱变剂通过举例方式给出，不过是非限制性的. 化学诱变剂可以根据其作用机理分组。因此，存在碱基类似物(例如5-溴尿嘧啶、2-氨基嘌呤)、单官能性和双官能性烷基化剂(例如单官能性烷基化剂如甲基磺酸乙酯、硫酸二甲酯，或双官能性烷基化剂如亚硫酸二氯乙酯、丝裂霉素、亚硝基胍-二烷基亚硝胺、N-亚硝基胍衍生物)或嵌入物质(例如吖啶、溴乙锭)。
因此，对于本发明方法，例如还有可能使用作为对根据本发明例如根据SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213和/或215的多肽突变的结果而获得的那些多肽。
合适氨基酸替换的实例在下表给出 原有基团替换的实例 Ala Ser Arg Lys Asn Gln；His Asp Glu Cys Ser或Ala Gln Asn Glu Asp Gly Pro His Asn；Gln Ile Leu；Val Leu Ile；Val Lys Arg；Gln；Glu Met Leu；Ile Phe Met；Leu；Tyr Ser Thr Thr Ser Trp Tyr Tyr Trp；Phe Val Ile；Leu 表2合适的氨基酸替换 已知在SEQ ID NO2中，天然存在于位置2849处的丝氨酸例如可以由甘氨酸替换以避免在该位置上磷酸化(Fontao L，Favre B，Riou S，GeertsD，Jaunin F，Saurat JH，Green KJ，Sonnenberg A，Borradori L.，大疱性类天疱疮抗原1(BP230)及桥粒斑蛋白与中间丝的相互作用由在其羧基端内明显不同的序列介导，Mol Biol Cell.2003年5月；14(5)1978-92.电子形式公开，2003年1月26日)。
在以上情况下，“功能性等效物”也是所述多肽的“前体”和该多肽的“功能性衍生物”及“盐”。
这里，“前体”是具有或没有所需生物学活性的多肽天然前体或合成前体。
表述语“盐”理解为意指本发明蛋白质分子羧基的盐或氨基的酸加成盐。羧基盐可以按照本身已知的方式制备并且包括无机盐，如钠、钙、铵、铁和锌盐，并且本发明同样提供与有机碱如胺例如三乙胺、精氨酸、赖氨酸、哌啶等的盐，酸加成盐如与无机酸如氢氯酸或硫酸的盐，和与有机酸如乙酸和草酸的盐。
“功能性等效物”当然也包括从其它生物可得到的多肽和天然存在的变体(等位基因变体)。例如，通过序列比较，可以确定同源序列区或保守区域的位置。使用这些序列，可以对DNA数据库(例如基因组或cDNA数据库)使用生物信息学比较程序检索等效酶。公众可用的合适计算机程序和数据库是本领域技术人员完全已知的。
这些对已知蛋白质序列的比对可以例如使用来自InforMax Inc的计算机程序如Vector NTI 8(从2002年9月25日以来的版本)进行。
另外，“功能性等效物”是这样的融合蛋白，其具有以上提及的多肽序列或从其中衍生的功能性等效物之一并且具有与所述多肽序列功能不同的处于功能性氨基端或羧基端连接(即不存在融合蛋白部分的相互严重功能性破坏)的至少一个其它异源序列。此类异源序列的非限制性实例例如是信号肽或酶。
根据本发明包括的“功能性等效物”是对具体公开的蛋白质的同源物(homologs)。使用在定义中公开的计算机程序和计算机算法计算，这些同源物与具体公开的氨基酸序列之一具有至少40％、45％或50％，优选至少55％、60％、65％或70％，特别优选至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％或94％，非常特别优选至少95％或96％的同源性。
在可能的蛋白质糖基化的情况下，本发明的“功能性等效物”包括上文提及的处于去糖基化或糖基化形式的以及通过改变糖基化模式而可获得的修饰形式的蛋白质类型。
在可能的蛋白质磷酸化的情况下，本发明的“功能性等效物”包括上文提及的处于去磷酸化或磷酸化形式以及通过改变磷酸化模式的而可获得的修饰形式的蛋白质类型。
本发明多肽的同源物可以通过筛选突变体(如缩短突变体)文库加以鉴定。例如，蛋白质变体的库可以通过在核酸水平的组合诱变，如通过酶连接合成性寡核苷酸的混合物而产生。存在种类众多的可以用于从简并性寡核苷酸序列中产生潜在同源物库的方法。简并性基因序列的化学合成可以在自动DNA合成仪中进行，并且合成基因随后可以连接至合适的表达载体内。简并性成套基因的利用致使在一种混合物中提供编码所需成套的潜在蛋白质序列的全部序列成为可能。用于合成简并性寡核苷酸的方法是本领域技术人员已知的(例如Narang，S.A.(1983)Tetrahedron 393；Itakura等(1984)Annu.Rev.Biochem.53323；Itakura等，(1984)Science 1981056；Ike等(1983)Nucleic Acids Res.11477)。
在现有技术中，用于筛选已经通过点突变或截短而产生的组合文库基因产物和用于对cDNA文库筛选具有所选特性的基因产物的众多技术是已知的。用于筛选受到高通量分析的大型基因文库的最经常使用的技术包括将基因文库克隆至可复制的表达载体、用产生的载体文库转化合适细胞并且在检测所需活性有助于分离如此载体的条件下表达组合性基因，其中所述的载体编码了已经检测到其产物的基因。递归总体诱变(REM)是一种提高文库内功能性突变体的频率的技术，可以与筛选试验组合地使用以鉴定同源物(Arkin和Yourvan(1992)PNAS 897811-7815；Delgrave等(1993)Protein Engineering 6(3)327-331)。
使用在SEQ ID NO1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、145、149、152、159、161、163、165、212和/或214、特别优选165、212和214、最优选214下描述的核酸序列或其部分作为探针对其它生物的物理可用性cDNA或基因组DNA文库的检查是本领域技术人员已知用于以其它方式鉴定同源物的方法。本文中，从根据SEQ ID NO1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、145、149、152、159、161、163、165、212和/或214、特别优选165、212和214、最优选214的核酸序列中衍生的探针具有长度至少20bp、优选至少50bp、特别优选至少100bp、非常特别优选至少200bp、最优选至少400bp。该探针也可以是1千碱基或数千碱基长，例如1Kb、1.5Kb或3Kb。为了检查文库，也可以可能使用在SEQ ID NO1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、145、149、152、159、161、163、165、212和/或214、特别优选165、212和214、最优选214下描述的互补DNA链或其长度在20bp与数千碱基间的片段的序列。待使用的杂交条件如上文描述。
在本发明的方法中，还有可能使用这样的DNA分子，其在标准条件下与在SEQ ID No1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、145、149、152、159、161、163、165、212和/或214、特别优选165、212和214、最优选214下描述并编码结合角蛋白的多肽的核酸分子杂交、与互补于以上提及的核酸分子或其部分互补的核酸分子杂交，并且作为完整序列而编码具有如在SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215下所述多肽那样的相同特性的多肽。
本发明特别有利的实施方案是包含至少一种如在SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215中所示多肽序列的结合角蛋白的多肽(i)，条件是在根据实施例9或10的试验中测量时，所述多肽的角蛋白结合作用是如在SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215中所示对应多肽序列的值的至少10％、20％、30％、40％或50％、优选60％、70％、80％或90％、特别优选100％。
优选使用对所需生物具有高度特异的亲和性的结合角蛋白的多肽(i)。因此，为了用于皮肤化妆品中，优选使用对人皮肤角蛋白具有特别高的亲和性的结合角蛋白的多肽(i)。为了用于毛发化妆品中，优选使用对人毛发角蛋白具有特别高的亲和性的那些多肽序列。
为在宠物领域中的应用，除了所述的多肽序列(SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215、优选在SEQ ID NO2、4、6、8、10、12、14、40、42、44、46、48、146、150、153、156、157、158、160、164、166、213或215、特别优选166和213、最优选213)之外，对相应角蛋白例如犬角蛋白或猫角蛋白具有特别高的亲和性的那些结合角蛋白的多肽(i)因此是优选的。
然而，还有可能使用多于一种与本发明效应分子(i)偶联的结合角蛋白的多肽(i)，例如对人皮肤角蛋白具有高结合亲和性的结合角蛋白的多肽(i)可以与效应分子组合，其中所述的效应分子与对人毛发角蛋白具有高亲和力的另一种结合角蛋白的多肽(i)组合。还有可能使用包含2个或更多个拷贝的相同(和不同)结合角蛋白的多肽(i)或其角蛋白结合结构域的嵌合多肽。例如，因此有可能实现特别有效的角蛋白结合作用。
合适的结合角蛋白的多肽(i)是已知的。例如，桥粒斑蛋白和网蛋白包含角蛋白结合结构域(Fontao L，Favre B，Riou S，Geerts D，Jaunin F，Saurat JH，Green KJ，Sonnenberg A，Borradori L.，大疱性类天疱疮抗原1(BP230)及桥粒斑蛋白与中间丝的相互作用由在其羧基端内明显不同的序列介导，Mol Biol Cell.2003年5月；14(5)1978-92电子形式公开，2003年1月26日；Hopkinson SB、Jones JC.、跨膜蛋白BP180的氨基端与BP230的氨基端结构域相互作用、因而介导在半桥粒部位的对细胞表面的角蛋白细胞骨架锚定作用，Mol Biol Cell.2000 Jan；11(1)277-86)。
本发明的结合角蛋白的多肽(i)也可以-根据需要-再次轻易地与角蛋白分开。为此，例如可以使用含有角蛋白的漂洗液(rinse)，因此结合角蛋白的多肽(i)从其与角蛋白的现有结合中被替代下来并且与来自漂洗液的角蛋白饱和。或者，具有高含量去垢剂(例如SDS)的漂洗液可能用于这种洗去。
本发明还优选地提供其中从酶、抗体、效应物结合蛋白、荧光蛋白、抗微生物肽和自动装配蛋白中选择效应多肽(ii)的上述结合角蛋白的效应蛋白。
酶 将提及的酶优选地是选自氧化酶、过氧化物酶、蛋白酶、酪氨酸酶、乳过氧化物酶、溶菌酶、淀粉葡糖苷酶、葡萄糖氧化酶、超氧化物歧化酶、光裂合酶和过氧化氢酶的那些酶。
抗体 将提及的抗体优选地是可以用它们带来积极的化妆性益处的那些抗体，如针对皮肤病原体的抗体。
将提及的效应分子结合蛋白优选地是类胡萝卜素结合性蛋白(下文又称作CBP)、维生素结合性，生色团-结合性，增味剂结合性、糖结合性和金属结合性蛋白。在类胡萝卜素结合性蛋白中，特别优选来自家蚕(Bombyxmori)的类胡萝卜素结合性蛋白(登录号SWISS-PROTQ8MYA9)。对该蛋白质的分离以及该蛋白质的类胡萝卜素结合特性的表征在Tabunoki等(2002；来自家蚕幼虫丝腺的类胡萝卜素结合性蛋白的分离、表征和cDNA序列；J Biol Chem 27732133-32140)中描述。在金属结合性蛋白中，特别优选来自大肠杆菌的“铅、镉、锌和汞运输ATP酶”ZntA(SWISS-PROTP37617)。ZntA蛋白质的分离和表征，尤其Sofia等(1994；大肠杆菌(Escherichia coli)基因组分析.V.来自76.0至81.5分钟区域的DNA序列；Nucleic Acids Res 222576-2586)，Rensing等(1997；大肠杆菌zntA基因编码Zn(II)转位型P型ATP酶；Proc Natl Acad Sci 9414326-14331)和Sharma等(2000；一种纯化的来自大肠杆菌的Pb(II)/Cd(II)/Zn(II)转位ATP酶ZntA的ATP水解活性；J Biol Chem 2753873-3878)在中描述。
荧光蛋白 将提及的荧光蛋白优选地来自选自绿色荧光蛋白(GFP)、增强的绿色荧光蛋白(eGFP)、红色荧光蛋白(RFP)、单体的红色荧光蛋白(mRFP)、dsRED、蓝色荧光蛋白(BFP)、黄色荧光蛋白(YFP)和青色荧光蛋白(CFP)。特别优选增强的绿色荧光蛋白(eGFP)。
GFP蛋白是由动物产生的在用蓝色光照射时发出荧光绿的蛋白质。一个GFP蛋白携带者的实例是维多利亚多管水母(Aequorea victoria)。大多数具有特征性绿色发射的这种水母在夏季各月份在美国和加拿大的北太平洋海岸存在。前缀字母“e”描述野生型GFP的改良“增强”形式。eGFP的特征在于荧光强度高35倍。
此类荧光蛋白例如由HHMI(Howard Hughes Medical Institute)实验室描述并出售。
使用包含荧光蛋白的结合角蛋白的效应蛋白旨在应用至皮肤后实现更健康及透明外观的皮肤色调及用于光学地亮化皮肤(“皮肤白化”)。
此外，这些包含荧光蛋白的结合角蛋白的效应蛋白也可以用于亮化毛发或用于在毛发上产生特殊反射或闪光。此外，包含荧光蛋白的结合角蛋白的效应蛋白可以在装饰性化妆品中使用以便例如用紫外光照射时产生纹身效果。
AMP 将提及的抗微生物肽优选地是选自抑制微生物(如细菌、真菌或原虫)生长的那些多肽。特别优选根据SEQ ID No211的多肽。
自动装配蛋白 将提及的自动装配蛋白优选地是来自多个物种的丝蛋白，如蜘蛛(例如十字园蛛(Araneus diadematus))，蚕(例如家蚕)，贻贝(例如紫贻贝(Mytilusedulis))。在丝蛋白中，特别优选C16蜘蛛丝蛋白，它是来自十字园蛛的蛋白质ADF4的C结构体(module)的16次重复。C16蜘蛛丝蛋白的构造和表征在Huemmerich等(2004；蜘蛛牵引丝的主要结构元件及其对蛋白质溶解度的贡献；Biochemistry 4313604-13612)中描述。特别优先以下丝蛋白来自络新妇蛛(Nephila clavipes)登录号AY855102和U37520、猫脸蛛(Araneus gemmoides)登录号AY855101和登录号AY855100、金蛛(Argiope aurantia)登录号AY855099和AY855098的丝蛋白、合成蜘蛛丝蛋白(登录号DQ001900和登录号DQ186903)。
其它非常合适的效应蛋白(ii)是微生物中尤其大肠杆菌或枯草芽孢杆菌中天然存在的多肽。此类融合伴侣的实例是序列YaaD(登录号BG10075)(SEQ ID NO197和198)和硫氧还蛋白(登录号EG11031)(SEQ IDNO185和186)。
以上提及蛋白质和多肽的片段和功能性等效物(根据上文所给出定义)原则上也合适作为效应蛋白(ii)。
本发明特别优选的主题涉及这样的结合角蛋白的效应蛋白，其包含作为效应多肽(ii)的丝蛋白、特别优选地是包含至少一个根据SEQ ID No151、201、202、203、204、205、206、207、208、209或210的序列或对应于如此多肽的丝蛋白，其中所述的多肽至少40％、45％或50％，优选至少55％、60％、65％或70％，特别优选至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％或94％，非常特别优选至少95％或96％与至少一个根据SEQ ID No151、201、202、203、204、205、206、207、208、209或210的序列同一。
此外，本发明提供包含由核酸分子编码的丝蛋白的那些结合角蛋白的效应蛋白，其中所述的核酸分子包含选自如下的至少一个核酸分子 k)核酸分子，编码包含SEQ ID NO151、201、202、203、204、205、206、207、208、209或210中所示序列的多肽； l)核酸分子，包含至少一个SEQ ID NO150中所示序列的多核苷酸； m)核酸分子，编码根据序列SEQ ID No151、201、202、203、204、205、206、207、208、209或210的多肽； n)具有根据SEQ ID No150的核酸序列的核酸分子，或因替换、缺失或插入而自其衍生的编码多肽的核酸分子，其中所述多肽与根据SEQ ID No151的序列至少40％同一； o)编码由单克隆抗体识别的多肽的核酸分子，其中所述的单克隆抗体针对根据(k)至(m)的核酸分子所编码的多肽； p)编码结合角蛋白的蛋白质的核酸分子，其在严格条件下与根据(k)至(m)的核酸分子杂交； q)编码结合角蛋白的蛋白质的核酸分子，所述核酸分子能够通过使用根据(k)至(m)的核酸分子或其包含至少15个核苷酸的部分片段作为探针在严格杂交条件下分离自DNA库，和 r)核酸分子，其能够通过反向翻译序列SEQ ID No151、201、202、203、204、205、206、207、208、209或210中所示的氨基酸序列之一而产生。
在本发明的优选实施方案中，本发明的嵌合的结合角蛋白的效应蛋白是其中上述的多肽(i)和(ii)通过翻译融合而连接起来的蛋白质。
除了以上提及的效应蛋白(ii)之外，在本发明的一个形式中还有可能使用自至少3-10、优选至少11-50、特别优选至少51-100并且尤其优选至少多于100个氨基酸(下文又称作融合伴侣(fusion partner))构建并且不与如上所述的结合角蛋白的多肽(i)天然连接的那些多肽。
效应蛋白(ii)可以选自为数众多的蛋白质或多肽。还有可能的是多个效应蛋白(ii)与一个结合角蛋白的多肽(i)例如在该结合角蛋白的多肽部分的氨基端或在其羧基端连接。
本发明所述的结合角蛋白的效应蛋白和在其中存在的结合角蛋白的多肽(i)及效应蛋白(ii)可以通过已知的肽合成方法例如通过根据Merrifield(2005，Kimmerlin T，SEebach D.，′肽合成法的100年′通过应用β-肽装配的肽及蛋白质合成的连接方法，J Pept Res.2005年2月；65(2)229-260)的固相合成发而化学地进行。
然而特别适合的是基因工程方法，其中编码结合角蛋白的多肽(i)的核酸分子和编码效应蛋白(ii)的核酸分子彼此功能性地连接，以至于因为所用核酸分子的翻译而形成单个常见的翻译产物(翻译融合)。
适于产生上述结合角蛋白的多肽(i)、效应蛋白(ii)或(包含多肽(i)和(ii)的氨基酸序列的)融合蛋白的宿主生物(生产生物)是原核生物(包括古细菌(Archaea))和真核生物，优选地是包括嗜盐菌(halobacteria)和甲烷球菌纲(methanococci)的细菌、真菌、昆虫细胞、植物细胞和哺乳动物细胞、特别优选地是大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌(Bacillus.megaterium)、米曲霉(Aspergillus oryzea)、构巢曲霉(Aspergillusnidulans)、黑曲霉(Aspergillus niger)、毕赤巴斯德酵母(Pichia pastoris)、假单孢菌(Pseudomonas spec.)、乳酸杆菌(Lactobacillae)、多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、里氏木霉(Trichoderma reesei)和SF9(或相关细胞)。
化学偶联 本发明也优选地提供其中上述多肽(i)和(ii)通过化学偶联反应而连接起来的结合角蛋白的效应蛋白。在这些偶联反应期间，可以闭合从由硫酯键、酯键、硫醚键、醚键、酰胺键、磺酸酯键和氨磺酰键(sulfonamide bond)构成的共价键中选择的键。本文中所述的键可以在结合角蛋白的多肽(i)的内部氨基酸的侧链、氨基端或羧基端与效应蛋白的内部氨基酸的侧链、氨基端或羧基端之间闭合。
或者，可以例如通过碳二亚胺、戊二醛或本领域技术人员已知的其它交联剂实施效应分子(ii)与角蛋白结合结构域间的直接偶联。对此类偶联反应的选择在2005，Kimmerlin T，SEebach D.，′肽合成法的100年′通过应用β-肽装配的肽及蛋白质合成的连接方法，J Pept Res.，65(2)229-260，和2004，David R等，表达的蛋白质连接作用，Eur.J.Biochem.271，663-677中给出。
本发明还提供其中效应多肽(ii)与结合角蛋白的多肽(i)通过间隔元件连接起来的结合角蛋白的效应蛋白。间隔元件可以是稳定的、可热切割的、可光切割的或可酶切割的(尤其通过脂酶、酯酶、蛋白酶、磷酸酶、水解酶等)。相应的化学结构是本领域技术人员已知的并且整合在分子部分(i)和(ii)之间。可以在本发明分子中使用的可酶切割接头的实例例如在WO98/01406中给出，该文献的全部内容文中引用特别地加以参考。
间隔元件可以是本领域技术人员原则上已知的交联剂，优选地是碳二亚胺或戊二醛。对于该连接而言，确保了结合角蛋白的多肽与效应蛋白之间的实际直接连接。将提及的碳二亚胺优选地是二环己基碳二亚胺(DCC)，二异丙基碳二亚胺(DIC)，N’-(3-二甲基氨丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，以使用二异丙基碳二亚胺或EDC为特别优选。
本发明又一个优选的主题是其中连接多肽(i)和(ii)的间隔元件是多肽的结合角蛋白的效应蛋白。
例如，编码结合角蛋白的效应蛋白的核酸分子可以通过合适的生物技术克隆方法以如此方式进行修饰，以至于翻译融合物还包含发挥间隔元件作用的多肽序列。这些多肽间隔元件可以具有用于蛋白酶(例如皮肤蛋白酶-组织蛋白酶D)、脂肪酶、酯酶、磷酸酶或水解酶的切割位点或允许简化融合蛋白纯化的多肽序列，例如所谓的His标签，即寡聚组氨酸基团。
此外，还有可能在多肽(i)和(ii)间的连接部位处通过合适的基因工程方法插入额外的氨基酸。这例如也可以因新产生的或在核酸水平上被失活的限制性核酸内切酶识别位点而产生。此外，额外的氨基酸可以在两个融合伴侣的连接部位处插入以便产生接头序列，以至于这两个融合伴侣可以相互独立地折叠产生功能性多肽部分。本发明的蛋白质也可以进行翻译后修饰，即在翻译后例如通过糖基化、磷酸化或酰化作用修饰。这种修饰也可以通过化学途径例如用戊二醛交联而发生。
在特别优选的实施方案中，本发明提供通过间隔元件而间接连接起来的结合角蛋白的效应蛋白，其中间隔元件是至少双官能性的接头，所述接头通过结合至结合角蛋白的多肽(i)和效应多肽的内部氨基酸的侧链、羧基端或氨基端而将所述多肽共价地连接起来。
本发明的结合角蛋白的效应蛋白可以通过使用具有至少二个偶联官能度的接头分子(iii)将效应蛋白(ii)偶联至结合角蛋白的多肽(i)上而产生，其中所述的至少二个偶联官能度能够进入选自硫酯键、酯键、硫醚键、醚键、酰胺键、磺酸酯键和氨磺酰键的键，并且 (a)在第一个偶联步骤中，首先将效应多肽(ii)经所述的键之一结合至接头分子(iii)，和 (b)在另一个偶联步骤中，来自(a)的反应产物经接头分子(iii)中仍游离的偶联官能度偶联至结合角蛋白的多肽(i)。
在优选的实施方案中，偶联官能度是至少两个不同的官能团。
接头分子对效应多肽(ii)的结合经化学偶联反应进行。这可以例如通过效应多肽的羧基端或氨基端的官能度或侧链、尤其氨基官能团、羟基官能团、羧基官能团或巯基官能团进行。优选经过一个或多个赖氨酸基团的氨基官能团、半胱氨酸基团的一个或多个巯基、丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸基团的一个或多个羟基、天冬氨酸或谷氨酸基团的一个或多个羧基或通过效应多肽(ii)的氨基端或羧基端官能团的连接。
此类化学偶联反应是本领域技术人员已知的并且例如在Becker，H.G.O.，Organikum[Organics]，第二十版，1996，Johann Ambrosius BarthVerlag Heidelberg或Hermanson，G.T.Bioconjugate Techniques，1996，Academic Press，San Diego中描述。
除了效应多肽(ii)的一级序列中存在的氨基酸官能团之外，具有合适官能团的氨基酸(例如半胱氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸)也可以与该序列连接，或该多肽序列的氨基酸可以由此类氨基酸官能团替代。用于诱变或操作核酸分子的方法是本领域技术人员充分已知的。几种所选出方法在下文描述。
因上述步骤(a)而产生的反应产物与结合角蛋白的多肽(i)的结合经接头分子中仍游离的第二锚定基团进行。除了上述偶联反应之外，此类型的合适锚定基团特别是硫氢基反应基(例如马来酰亚胺、二硫代吡啶基(pydridyldisulfide)、α-卤代乙酰基(haloacetyl)、乙烯砜、硫酸根合烷基砜(优选硫酸根合乙基砜和硫醇类)，其中接头可以通过所述的锚定基团与结合角蛋白的多肽(i)的半胱氨酸基团形成共价键。
优选接头分子(iii)与结合角蛋白的多肽(i)共价连接。这可以例如通过结合角蛋白的多肽(i)的侧链、尤其氨基官能团、羟基官能团、羧基官能团或巯基官能团进行。优选经过一个或多个赖氨酸基团的氨基官能团、半胱氨酸基团的一个或多个巯基、丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸基团的一个或多个羟基、天冬氨酸或谷氨酸基团的一个或多个羧基或通过结合角蛋白的多肽(ii)的氨基端或羧基端官能团的连接。除了结合角蛋白的多肽(ii)，一级序列中存在的氨基酸官能团之外，具有合适官能团的氨基酸(例如半胱氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸)也可以添加至该序列中，或该多肽序列的氨基酸可以由此类氨基酸官能团替代。用于诱变或操作核酸分子的方法是本领域技术人员充分已知的。几种所选出方法在下文描述。
效应分子偶联的成功可以通过三种不同的试验进行监测 (i)埃尔曼(Ellmann)试验，其中蛋白质中的游离Cys-SH基数目可以在效应分子偶联之前或之后测定。游离SH基在偶联后的明显减少表示良好的反应进程(见实施例17)。
(ii)活性试验，其中可以测定具有和没有偶联的接头效应分子的结合角蛋白的多肽对毛发的结合(见实施例16)。
(iii)测定偶联的蛋白质的摩尔质量。
本发明的结合角蛋白的多肽(i)具有在人化妆品，尤其皮肤护理、甲护理和毛发护理，在动物护理，皮革护理和皮革加工中的广泛使用领域。
优选地，本发明的结合角蛋白的多肽(i)用于皮肤化妆品和毛发化妆品。它们允许护理性或保护性效应分子的高浓度和长久作用时间。
在本发明特别优选的实施方案中，使用对人皮肤、毛发或甲角蛋白具有结合亲和性的结合角蛋白的多肽。
本发明特别优选地提供结合角蛋白的效应蛋白，其中 s)使用的结合角蛋白的多肽包含在SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215、优选在SEQ IDNO2、4、6、8、10、12、14、40、42、44、46、48、146、150、153、156、157、158、160、164、166、213或215、特别优选166和213、最优选213中所示序列之一，并且 t)效应多肽(ii)选自丝蛋白、优选C16蜘蛛丝蛋白，其中所述的C16蜘蛛丝蛋白是来自十字园蛛的蛋白质ADF4的C结构体(module)的16次重复，任选地 u)在s)和t)下所述的蛋白质也可以通过接头分子偶联起来。本发明还提供根据本发明产生的结合角蛋白的效应分子在皮肤化妆制品中的用途。优选地，本发明的结合角蛋白的效应分子在皮肤及毛发化妆品中使用。它们允许皮肤护理或皮肤-保护性效应物质的高浓度和长久作用时间。
在本发明的优选实施方案中，本发明的结合角蛋白的效应蛋白在皮肤保护组合物、皮肤护理组合物、皮肤清洁组合物、毛发保护组合物、毛发护理组合物、毛发清洁组合物或在用于装饰性化妆品的产物中使用。
在本发明的优选实施方案中，基于组合物的总重量，本发明的结合角蛋白的效应蛋白以0.001-1重量％，优选0.01-0.9重量％、特别优选0.01-0.8重量％或0.01-0.7重量％、非常特别优选0.01-0.6重量％或0.01-0.5重量％、最优选0.01-0.4重量％或0.01-0.3重量％的浓度添加至皮肤化妆品中。在又一个实施方案，基于组合物的总重量，该组合物以1-10重量％、优选2-8重量％、3-7重量％、4-6重量％的浓度包含本发明的结合角蛋白的效应蛋白。在同样优选的实施方案中，基于组合物的总重量，该组合物以10-20重量％、优选11-19重量％、12-18重量％、13-17重量％、14-16重量％的浓度本发明的结合角蛋白的效应蛋白。在更优选的实施方案中，基于组合物的总重量，该组合物以20-30重量％、优选21-29重量％、22-28重量％、23-27重量％、24-26重量％的浓度包含本发明的结合角蛋白的效应蛋白。
在另一个优选实施方案中，以上提及的本发明结合角蛋白的效应分子在皮肤化妆品中与(i)来自装饰性化妆品领域的化妆辅助品、(ii)皮肤化妆有效成分和(iii)合适助剂及添加剂组合使用。优选地，它们是用来保护皮肤、毛发和/或指甲或趾甲免受损伤、用于治疗皮肤、毛发和/或指甲或趾甲的现有损伤和用于护理皮肤、毛发和/或指甲或趾甲的有效成分和助剂及添加剂。这些有效成分优选地选自天然或合成聚合物、颜料、保湿剂、油、蜡、酶、矿物质、维生素、防晒剂、染料、芳香剂、抗氧化剂、防腐剂和/或药用有效成分。
用于产生毛发化妆性或皮肤化妆制品的合适助剂和添加剂是本领域技术人员熟悉的并且可以在化妆品手册例如Schrader，Grundlagen和Rezepturen der Kosmetika[化妆品的要素和制剂]，Hüthig Verlag，Heidelberg，1989，ISBN 3-7785-1491-1或Umbach，KosmetikEntwicklung，Herstellung und Anwendung kosmetischer Mittel[化妆品化妆性组合物的开发、制造和使用]，扩编的第二版，1995，Georg ThiemeVerlag，ISBN 3 13 712602 9中找到。
优选地，本发明的结合角蛋白的效应分子在皮肤化妆品或组合物中与不同于所述结合角蛋白的效应分子的至少一种组分组合使用，其中所述组分选自化妆性有效成分、乳化剂、表面活性剂、防腐剂、芳香油、增稠剂、毛发聚合物(hair polymer)、毛发和皮肤调理剂、接枝聚合物、水溶性或可分散的含有硅氧烷的聚合物、光防护剂、漂白剂、胶凝剂、护理剂、着色剂、调色剂、鞣剂、染料、颜料、稠度调节物、保湿剂、加脂剂、胶原、蛋白水解物、脂类、抗氧化剂、消泡剂、抗静电剂、润滑药和软化剂。有效成分也可以在化妆制品中以胶囊化形式存在，如在专利/专利申请EP 00974775 B1，DE 2311 712，EP 0278 878，DE 1999 47147，EP 0706822B1和WO 98/16621中所述，其中所述地文献因而特别加以参考。
有利地，抗氧化剂选自氨基酸(例如甘氨酸、组氨酸、酪氨酸、色氨酸)及其衍生物、咪唑(例如尿刊酸)及其衍生物、肽如D，L-肌肽、D-肌肽、L-肌肽及其衍生物(例如丝氨酸)、类胡萝卜素、胡萝卜素(例如β-胡萝卜素、番茄红素)及其衍生物、绿原酸及其衍生物、硫辛酸及其衍生物(例如二氢硫辛酸)、金硫葡糖、丙硫尿嘧啶和其它硫醇(例如硫氧还蛋白、谷胱苷肽、半胱氨酸、胱氨酸、胱胺及其糖基、N-乙酰基、甲基、乙基、丙基、戊基、丁基和月桂基、棕榈酰、油基、γ-亚油基、胆固醇基及甘油基酯)及其盐、硫代二丙酸二月桂醇酯、硫代二丙酸二硬脂醇酯、硫代二丙酸及其衍生物(酯、醚、肽、脂类、核苷酸、核苷和盐)，和在极低耐受剂量(例如pmol至μmol/kg)上的亚砜亚胺化合物(例如丁硫氨酸亚砜亚胺、高半胱氨酸亚砜亚胺、丁硫氨酸砜、五-、六-、七硫堇亚砜亚胺)、还有(金属)螯合剂(例如α-羟基脂肪酸、棕榈酸、植酸、乳铁蛋白)、α-羟基酸(例如柠檬酸、乳酸、苹果酸)、腐殖酸、胆汁酸、胆汁提取物、胆红素、胆绿素、EDTA及其衍生物、不饱和脂肪酸及其衍生物(例如γ-亚麻酸、亚油酸、油酸)、叶酸及其衍生物、泛醌和泛醌醇及其衍生物、维生素C及其衍生物(例如抗坏血酸钠、棕榈酸抗坏血酸酯、磷酸抗坏血酸酯Mg、乙酸抗坏血酸酯)、生育酚和衍生物(例如维生素E醋酸酯、生育三烯酚)、维生素A和衍生物(维生素A棕榈酸酯)，以及苯甲酸树脂、芸香亭酸及其衍生物的苯甲酸松柏酯、α-糖基芦丁、阿魏酸、亚糠基葡糖醇、肌肽、丁基羟基甲苯、丁基羟基茴香醚、去甲二氢愈创酸(nordihydroguaiacic acid)、去甲二氢愈创木酸、三羟基苯丁酮、尿酸及其衍生物、甘露糖及其衍生物、锌及其衍生物(例如ZnO、ZnSO4)、硒及其衍生物(例如硒代甲硫氨酸)、1，2-二苯乙烯及其衍生物(例如氧化吡烯、反-氧化吡烯)。
维生素B族或其衍生物的维生素、维生素原或维生素前体，和根据本发明待优选使用的2-呋喃酮的衍生物尤其包括 维生素B1，通用名硫胺素，化学名3-[(4’-氨基-2’-甲基-5’-嘧啶基)甲基]-5-(2-羟乙基)-4-甲基噻唑鎓氯化物。
维生素B2，通用名核黄素，化学名7，8-二甲基-10-(1-D-核糖基)-苯并[g]蝶啶-2，4(3H，10H)-二酮。在游离形式下，核黄素存在于例如乳清中，其它核黄素衍生物可以从细菌和酵母分离。根据本发明同样合适的核黄素的立体异构体是来苏黄素，其可以从鱼肉或肝脏分离并且携带D-阿糖醇基基团而非D-核糖基基团。
维生素B3。化合物烟酸和烟酰胺(尼克酰胺)往往具有该名称。根据本发明，优选烟酰胺。
维生素B5(泛酸和泛醇)。优选使用泛醇。可以根据本发明使用的泛醇衍生物特别是泛醇的酯和醚以及阳离子衍生化泛醇。在本发明又一个优选的实施方案中，除泛酸或泛醇之外，也可以使用2-呋喃酮的衍生物。特别优选的衍生物是还可商业获得的物质，即具有通用名泛酰内酯(pantholactone)(Merck)的二氢-3-羟基-4，4-二甲基-2(3H)-呋喃酮、4-羟甲基-γ-丁内酯(Merck)、3，3-二甲基-2-羟基-γ-丁内酯(Aldrich)和2，5-二氢-5-甲氧基-2-呋喃酮(Merck)，特别包括全部立体异构体。
这些化合物有利地赋予本发明的皮肤化妆品保湿特性及皮肤安定特性。
维生素B6，其在本文中不理解为意指均一的物质，而意指在通用名吡哆素、吡哆胺和吡哆醛下已知的5-羟甲基-2-甲基吡啶-3-醇的衍生物。
维生素B7(生物素)，也称作维生素H或”皮肤维生素”。生物素是(3aS，4S，6aR)-2-氧代六氢噻吩并[3，4-d]咪唑-4-戊酸 根据本发明是非常特别优选泛醇、泛酰内酯(pantholactone)、烟酰胺和生物素。
染料 可以使用的染料是经批准并适于化妆目的的物质，如例如在1984年由Verlag Chemie，Weinheim出版的来自Farbstoffkommission der DeutschenForschungsgemeinschaft[德国研究协会染料委员会]的出版物＂Kosmetische

”[化妆品着色剂]中所列。这些染料通常基于总混合物以0.001-0.1重量％的浓度使用。
颜料 在一个优选实施方案中，本发明的组合物包含至少一种颜料。颜料以不溶解形式存在于产物物质中并且可以以0.01-25重量％，特别优选5-15重量％的量存在。优选的粒径是1-200μm，尤其是3-150μm，特别优选是10-100μm。颜料是实际上不溶于应用介质中的着色剂并且可以是无机的或有机的。无机-有机混合颜料也是可能的。优选无机颜料。无机颜料的优势在于它们优异的光稳定性、天气稳定性和热稳定性。无机颜料可以是天然来源的，例如从白垩、赭石、棕土、绿土、富铁煅黄土或石墨中制备。颜料可以白色颜料如二氧化钛或氧化锌、黑色颜料如氧化铁黑、彩色颜料如群青或氧化铁红、珠光颜料、金属效果颜料、珠光颜料和荧光或磷光颜料，其中优选至少一种颜料是有色的非白色颜料。金属氧化物、氢氧化物和水合氧化物、混合相颜料、含硫硅酸盐、金属硫化物、络合金属氰化物、金属硫酸盐、铬酸盐和钼酸盐和金属本身(青铜颜料)是合适的。特备适合的是二氧化钛(CI 77891)、黑色氧化铁(CI 77499)、黄色氧化铁(CI 77492)、红色和棕色氧化铁(CI 77491)、锰紫(CI 77742)、群青(硫代硅酸盐铝钠，CI77007，颜料蓝29)、水合铬氧化物(CI 77289)、铁蓝(亚铁氰化铁、CI 77510)、胭脂红(cochineal)。特别优选基于云母的珠光颜料和彩色颜料，其中所述的颜料用金属氧化物或金属氯氧化物如二氧化钛或氯氧化铋以及根据需要用其它赋予颜色的物质如氧化铁、铁蓝、群青、胭脂红等包膜，并且其中颜色可以由变动层厚度而决定。该类型的颜料例如在商标名


和

(Merck)下出售。有机颜料例如是天然颜料、乌贼染料、藤黄、天然棕土、靛蓝、叶绿素和其它植物颜料。合成有机颜料例如是偶氮颜料、蒽醌类、靛蓝类、二噁嗪、喹吖啶酮、酞箐、异吲哚啉酮、芘和紫环酮、金属络合物、碱性蓝和二酮吡咯并吡咯颜料。
在一个实施方案中，符合本发明和/或根据本发明方法所产生的结合角蛋白的效应分子与至少一种颗粒状物质一起使用，其中所述颗粒状物质以0.01-10、优选0.05-5重量％的量在组合物中存在。合适的物质例如是在室温(25℃)下为固体并且处于粒子形式的物质。例如，二氧化硅、硅酸盐、铝酸盐、粘土、云母、盐，尤其无机金属盐、金属氧化物例如二氧化钛、矿物和聚合物粒子是合适的。该粒子以不溶解的、优选以稳定分散的形式在组合物中存在，并且在施加至应用表面及溶剂蒸发后，能够以固体形式沉积。优选的颗粒状物质是硅石(硅胶、二氧化硅)和金属盐，尤其无机金属盐，其中特别优选二氧化硅。金属盐例如是碱金属或碱土金属氯化物，如氯化钠或氯化钾；碱金属或碱土金属硫酸盐如硫酸钠或硫酸镁。
珠光剂 合适的珠光剂是例如烷撑二醇酯，特别是二硬脂酸乙二醇酯；脂肪酸链烷醇酰胺，特别是椰油脂肪酸二乙醇酰胺；偏甘油酯，特别是硬脂酸单酸甘油酯；多碱的酯，任选地是羟基取代的羧酸与具有6-22个碳原子的脂肪醇的酯，特别是酒石酸的长链酯；脂质物质，如具有总计至少24个碳原子的脂肪醇、脂肪酮、脂肪醛、脂肪醚和脂肪碳酸酯，特别是月桂酮和二硬脂基醚；脂肪酸，如硬脂酸、羟硬脂酸或山萮酸、具有12-22个碳原子的环氧化烯烃与具有12-22个碳原子的脂肪醇的开环产物和/或具有2-15个碳原子和2-10个羟基的多羟基化合物，及其混合物。
在此类制剂中的惯用增稠剂是交联型聚丙烯酸及其衍生物、多糖及其衍生物如黄原酸胶、琼脂、藻酸盐或纤基乙酸钠、纤维素衍生物例如羧甲基纤维素或羟基羧甲基纤维素、脂肪醇、单酸甘油酯和脂肪酸、聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮。优选使用非离子增稠剂。
合适的化妆性和/或皮肤化妆有效成分例如是着色有效成分、皮肤和毛发颜料形成剂、调色剂、鞣剂、漂白剂、角蛋白硬化物质、抗微生物有效成分、滤光有效成分、驱除剂有效成分、充血物质、角质分解和角质形成作用物质、去头屑有效成分、消炎药、角化物质、抗氧化有效成分和/或起到自由基清除剂、皮肤保湿性或保湿物质作用的有效成分、加脂有效成分、抗红斑或抗过敏有效成分、支链脂肪酸如18-甲基二十烷酸，及其混合物。
适合于不用紫外线的天然或人工辐射而晒黑皮肤的皮肤人工晒黑有效成分例如是二羟基丙酮、四氧嘧啶和胡桃壳提取物。合适的角蛋白硬化物质通常是如还用于止汗剂中的有效成分，如硫酸铝钾、羟基氯化铝、乳酸铝等。
使用抗微生物有效成分来毁灭微生物或抑制它们的生长并且因此起到防腐剂及减少体臭形成或强度的脱臭物质的作用。它们包括例如本领域技术人员已知的惯用防腐剂，如对羟基苯甲酸酯、咪唑烷基脲、甲醛、山梨酸、苯甲酸、水杨酸等。此类脱臭物质例如是蓖麻油酸锌、三氯生、十一碳烯酸烷基醇酰胺、柠檬酸三乙酯、氯己定等。
根据本发明待有利使用的合适防腐剂是 表3合适的防腐剂。上表中所列的E编号是指南95/2/EEC中使用的命名. 根据本发明还合适的是在化妆品中惯用的防腐剂或防腐助剂二溴二氰基丁烷(2-溴-2-溴甲基戊二腈)，3-碘-2-丙炔基-丁基氨基甲酸酯，2-溴-2-硝基丙烷-1，3-二醇，咪唑烷基脲，5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮，2-氯乙酰胺，苯扎氯胺和苄醇。也合适作为防腐剂的是苯基羟烷基醚，尤其因其对众多微生物的杀细菌和杀真菌作用而以名称苯氧乙醇已知的化合物。
其它抗微生物剂同样适于并入本发明的制品中。有利的物质例如是2，4，4’-三氯-2’-羟基二苯醚(irgasan)、1，6-二(4-氯苯基双胍基)己烷(氯己定)、3，4，4’-三氯对称二苯脲、季铵化合物、丁香油、薄荷油、麝香草油、柠檬酸三乙酯、法呢醇(3，7，11-三甲基-2，6，10-十二烷三烯-1-醇)和在专利公开说明书DE-37 40 186、DE-39 38 140、DE-42 04 321、DE-42 29 707、DE-43 09372、DE-44 11 664、DE-195 41 967、DE-195 43 695、DE-195 43 696、DE-19547 160、DE-196 02 108、DE-196 02 110、DE-196 02 111、DE-196 31 003、DE-196 31 004和DE-196 34 019和专利说明书DE-42 29 737、DE-42 37 081、DE-43 24 219、DE-44 29 467、DE-44 23 410和DE-195 16 705中描述的有效成分或有效成分组合。碳酸氢钠也将有利地使用。也可以同样使用微生物多肽。
芳香油 根据需要，化妆性组合物可以包含芳香油。可以提及的芳香油例如是天然芳香剂与合成芳香剂的混合物。天然芳香剂是从花(百合、薰衣草、玫瑰、茉莉、橙花、伊兰)、茎和叶(天竺葵、广藿香、苦橙叶)、果实(大茴香籽、芫荽、藏茴香、杜松实)、果皮(佛手柑、柠檬、橙)、根(肉豆蔻、白芷、芹菜、豆蔻、闭鞘姜、鸢尾、菖蒲)、木材(松木、檀香木、愈创木、柏木、蔷薇木)、草药和草(龙蒿、柠檬草、鼠尾草、麝香草)、针叶和枝(云杉、冷杉、松、中欧山松)、树脂和香脂(波斯树脂、榄香脂、苯甲酸、没药、乳香、红没药)中提取的提取物。也合适的是动物原料，如灵猫香和海狸香。常见的合成芳香化合物是是酯型、醚型、醛型、酮型、醇型和烃型产物。酯型的芳香化合物例如是乙酸苄酯、异丁酸苯氧乙酯、乙酸4-叔丁基环己酯、乙酸里那酯、乙酸二甲基苄基原酯、乙酸苯基乙酯、苯甲酸芳樟酯、甲酸苄酯、甲基苯基氨基乙酸乙酯、环己丙酸烯丙酯、丙酸苏合香酯和水杨酸苄酯。醚包括例如苄基乙基醚，醛包括例如具有8-18个碳原子的链烷醛、柠檬醛、香茅醛、香茅基含氧乙醛、仙客来醛、羟基香茅醛、铃兰醛和对叔丁基苯丙醛(bourgeonal)，酮包括例如紫罗酮、α-异甲基紫罗兰酮和柏木甲醚，醇包括茴香脑、香茅醇、丁子香酚、异丁子香酚、牻牛儿醇、里哪醇、苯乙醇和萜烯醇，烃主要包括萜和香脂。不过，优选使用共同产生愉快香型(scene note)的不同芳香剂的混合物。最常用作香料组分的挥发性相对低的精油也适合作为芳香油，例如鼠尾草油、春黄菊油、丁香油、蜂花油、薄荷油、肉桂叶油、椴树花油、刺柏子油、岩兰油、乳香油、格蓬油、岩蔷薇油和杂薰衣草油。优选地，单独或混合使用香柠檬油、二氢月桂烯醇、铃兰醛、新铃兰醛、香茅醇、苯乙醇、α-己基肉桂醛、牻牛儿醇、苄基丙酮、仙客来醛、里哪醇、

Forte、龙涎呋喃、吲哚、二氢茉莉酮酸甲酯、Sandelice、柠檬油、橘子油、橙油、戊基甘醇酸烯丙酯、Cyclovertal、杂薰衣草油、鼠尾草油、β-二氢大马酮、波旁香叶油、水杨酸环己酯、

Coeur、

NP、合成橡苔、γ甲基紫罗兰酮、苯乙酸、乙酸香叶酯、乙酸苄酯、玫瑰醚、Romillate、Irotyl和Floramate。
油、脂肪和蜡 优选地，本发明的组合物包含油、脂肪和/或蜡。本发明组合物的油相和/或脂相的组分有利地选自卵磷脂和甘油三脂肪酸酯，即链长度8-24、尤其12-18个碳原子的饱和和/或不饱和、支链和/或直链烷羧酸的三甘油酯。甘油三脂肪酸酯可以例如有利地选自合成、半合成和天然的油，如橄榄油、葵花油、大豆油、花生油、菜籽油、杏仁油、棕榈油、椰子油、蓖麻油、小麦胚油、葡萄籽油、蓟油、月见草油、澳洲坚果(macadamia nut)油等。其它极性的油组分可以选自链长度3-30个碳原子的饱和和/或不饱和、支链和/或直链烷羧酸与链长度3-30个碳原子的饱和和/或不饱和、支链和/或直链醇的酯，并且选自芳族羧酸与链长度3-30个碳原子的饱和和/或不饱和、支链和/或直链醇的酯。此类酯油可以随后有利地选自肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、油酸异丙酯、硬脂酸正丁酯月桂酸正已酯、油酸正癸酯、硬脂酸异辛酯、硬脂酸异壬酯、异壬酸异壬酯、棕榈酸-2-乙基己酯、月桂酸-2-乙基己酯、硬脂酸-2-己基癸酯、棕榈酸-2-辛基十二烷酯、油酸油醇酯、芥酸油醇酯、瓢心菜基油酸酯、瓢心菜基芥酸酯、碳酸二辛酯(cetiol CC)和椰油酸甘油酯类(myritol 331)、丁二醇二辛酸/二癸酸酯和己二酸二丁酯，以及此类酯的合成、半合成和天然混合物，如霍霍巴油。
此外，一种或多种油组分可以有利地选自支链和直链的烃和烃蜡、硅油、二烷基醚，选自饱和或不饱和、支链或直链的醇。此类油和蜡组分的任意混合物也将为本发明目的而有利地使用。根据需要，也可能有利的是使用蜡，例如十六烷基棕榈酸酯，作为油相的单脂类组分。根据本发明，油组分有利地选自异硬脂酸-2-乙基己酯、辛基十二烷醇、异壬酸异十三烷基酯、异二十烷、椰油酸2-乙基己基酯、苯甲酸C12-15烷基酯、甘油三(辛酸/癸酸)酯、二辛基醚。根据本发明，苯甲酸C12-15烷基酯与异硬脂酸-2-乙基己酯的混合物、苯甲酸C12-15烷基酯与异壬酸异十三烷基酯的混合物以及苯甲酸C12-15烷基酯、异硬脂酸-2-乙基己酯和异壬酸异十三烷基酯的混合物是有利的。根据本发明，特别优选使用的具有5-50mN/m极性的油是甘油三脂肪酸酯，尤其大豆油和/或杏仁油。就烃而言，石蜡油、角鲨烷和角鲨烯将为本发明目的而有利地使用。
此外，油相可以有利地选自格尔伯特醇类。格尔伯特醇类以首次描述其制备的马瑟尔·格尔伯特(Marcel Guerbert)命名。格尔伯特醇类根据以下反应式
通过使醇氧化以产生醛、通过醛的羟醛缩合、从羟醛中消去水并使丙烯醛氢化而形成。格尔伯特醇类即便在低温下仍是液体并且实际上不造成皮肤刺激。它们可以有利地用作化妆性组合物中的加脂、富脂和再加脂组分。
格尔伯特醇类在化妆品中的用途是本身已知的。然而此类物质种类的最明显特征在于以下结构
其中，R1和R2通常是直链的烷基基团。
根据本发明，格尔伯特醇或醇类有利地选自这样的组，其中 R1＝丙基、丁基、戊基、己基、庚基或辛基并且 R2＝己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基或十四烷基。
根据本发明优选的格尔伯特醇类是2-丁基辛醇(例如作为Isofol

12(Condea)可商业获得)和2-己基癸醇(例如作为lsofol

16(Condea)可商业获得)。根据本发明还将有利地使用本发明的格尔伯特醇类混合物，例如2-丁基辛醇和2-己基癸醇的混合物(例如作为lsofol

14(Condea)可商业获得)。
此类油和蜡组分的任意混合物也将为本发明目的而有利地使用。在聚烯烃当中，聚癸烯是优选的物质。
油组分也可以有利地具有环状或线形硅油的成分或完全由此类油构成，不过优选的是使用除硅氧烷油或硅油之外的额外含量的其它油相组分。低分子量硅氧烷或硅油通常由以下通式定义
高分子量硅氧烷或硅油通常由以下通式定义
其中硅原子可以由相同或不同的烷基基团和/或芳基基团取代，其中所述的基团在本文一般由基团R1-R4显示。然而，不同基团的数目实际上不必限于至多到4。m在本文中可以采用2-200000的值。
根据本发明待有利使用的环状硅氧烷通常由以下通式定义
其中硅原子可以由相同或不同的烷基基团和/或芳基基团取代，其中所述的基团在本文一般由基团R1-R4显示。然而，不同基团的数目实际上不必限于至多到4。“n”在本文中可以采用3/2至20的值。n的分数值考虑了奇数个甲硅烷氧基可以在该环中存在。
有利地，选择苯基三甲基硅氧烷作为硅氧烷油。其它硅油，例如聚二甲基硅氧烷、六甲基环三硅氧烷、聚二甲基苯基硅氧烷、环状聚二甲基硅氧烷(八甲基环状四聚硅氧烷)、六甲基环三硅氧烷、聚聚二甲基硅氧烷、聚(甲基苯基硅氧烷)、鲸蜡基聚二甲基硅氧烷、二十二烷基氧基聚二甲基硅氧烷也将为本发明目的而有利地使用。也有利的是环状聚二甲基硅氧烷与异壬酸异十三烷基酯的混合物，以及环状聚二甲基硅氧烷与异硬脂酸-2-乙基己酯的那些混合物。然而，还有利的是选择与以上提及的化合物具有相似构成的其有机侧链发生衍生化例如聚乙氧基化和/或聚丙氧基化的硅油。这些硅油包括例如聚硅氧烷-聚烷基-聚醚共聚物，如鲸蜡基聚二甲基硅氧烷共聚醇。有利地使用环状聚二甲基硅氧烷(八甲基环状四聚硅氧烷)作为将根据本发明加以利用的硅氧烷油。根据本发明待有利使用的脂肪和/或蜡组分可以选自植物蜡、动物蜡、矿蜡和石油化学蜡。例如，小烛树蜡、巴西棕榈蜡、野漆树蜡、西班牙草蜡、软木蜡、瓜鲁马蜡(guaruma wax)、稻胚油蜡、甘蔗蜡、浆果蜡、小冠巴西棕蜡、褐煤蜡、霍霍巴木蜡、牛油树脂、蜂蜡、紫胶蜡、鲸蜡、羊毛脂(羊毛蜡)、尾脂、纯地蜡、地蜡(ozlkerite)(地蜡(earth wax))、石蜡和微晶蜡是有利的。
其它有利的脂肪和/或蜡组分是化学改性蜡和合成蜡，如

HRC(甘油三山嵛酸酯)，和

AW 1 C(C18-36脂肪酸)和褐煤酸酯蜡、沙索蜡、氢化霍霍巴木蜡、合成或改性蜂蜡(例如聚二甲基硅氧烷共聚醇蜂蜡和/或C30-50-烷基蜂蜡)、十六烷基蓖麻醇酸酯如

CR、聚亚烷基蜡、聚乙二醇蜡，还有化学改性脂肪，如氢化植物油(例如氢化蓖麻油和/或氢化椰油脂肪酸甘油酯)、甘油三酯如氢化大豆甘油酯、三羟基硬脂精、脂肪酸、脂肪酸酯和乙二醇酯如硬脂酸C20-40烷基酯、C20-40烷基羟基硬脂酰硬脂酸酯和/或乙二醇褐煤酸酯。另外，与所述脂肪和/或蜡组分具有相似物理特性的某些有机硅化合物如硬脂氧基三甲基硅烷也是有利的。
根据本发明，脂肪和/或蜡组分可以单独地或作为混合物在组合物中使用。此类油和蜡组分的任意混合物也将为本发明目的而有利地使用。有利地，油相选自异硬脂酸-2-乙基己酯、辛基十二烷醇、异壬酸异十三烷基酯、丁二醇二辛酸/二癸酸酯、椰油酸-2-乙基己酯、苯甲酸C12-15烷基酯、甘油三(辛酸/癸酸)酯、二辛基醚。辛基十二烷醇、甘油三(辛酸/癸酸)酯、二辛基醚、碳酸二辛酯、椰油基甘油酯(椰油基甘油酯)的混合物或苯甲酸C12-15烷基酯与异硬脂酸-2-乙基己酯的混合物、苯甲酸C12-15烷基酯与丁二醇二辛酸/二癸酸酯的混合物以及苯甲酸C12-15烷基酯、异硬脂酸-2-乙基己酯和异壬酸异十三烷基酯的混合物是特别有利的。就烃而言，石蜡油、环烃、角鲨烷、角鲨烯、氢化聚异丁烯和聚癸烯将为本发明目的而有利地使用。
组分也有利地选自磷脂。磷脂是酰化甘油的磷酸酯。在磷脂酰胆碱中最重要的是例如卵磷脂，其特征在于以下通式结构
其中R′和R＂通常具有15或17个碳原子并且至多到4个顺式双键的直链脂族基团。
根据本发明，来自Merkur Vaseline的Merkur Weissoel Pharma 40、来自Shell & DEA Oil的Shell

917、Shell

927、ShellOil 4222、Shell

93、

6301、

2071(Hansen &Rosenthal)可以根据本发明有利地用作石蜡油。合适的化妆品可相容性油和脂肪组分在Karl-Heinz Schrader，Grundlagen和Rezepturen derKosmetika[化妆品的要素和制剂]，第二版，Verlag Hüthig，Heidelberg，第319-355页中描述，该文献的全部内容文中引用作为参考。
溶剂 若符合本发明和/或根据本发明方法所产生的结合角蛋白的效应分子在作为溶液剂或乳剂或分散体的化妆性或皮肤病学用制品中使用，则可以使用的溶剂是 水或水溶液；油，如癸酸或辛酸的甘油三酯，但是优选蓖麻油；脂肪、蜡和其它天然和合成的脂质物质，优选地是脂肪酸与低碳数的醇例如与异丙醇、丙二醇或丙三醇的酯，或脂肪醇与低碳数的链烷酸或与脂肪酸的酯；低碳数的醇、二醇或多羟基化合物及其醚，优选地是乙醇、异丙醇、丙二醇、丙三醇、乙二醇、乙二醇单乙基或单丁基醚、丙二醇单甲基、单乙基或单丁基醚、二甘醇单甲基醚或单乙基醚和类似产物。尤其，使用以上提及溶剂的混合物。在醇溶剂的情况下，水可以是进一步的组分。
表面活性剂 根据本发明，除了符合本发明和/或根据本发明方法所产生的结合角蛋白的效应分子之外，组合物还可以包含表面活性剂。此类表面活性剂例如是 -磷酸酯和盐，如油醇聚醚-10磷酸酯DEA盐(DEA-oleth-10phosphate)和二月桂基聚氧乙烯(4)醚磷酸酯(dilaureth-4 phosphate)， -烷基磺酸盐，例如硫酸椰油单酸甘油酯钠、C12-14烯烃磺酸钠、月桂基磺基乙酸钠和PEG-3椰油酰胺硫酸镁， -羧酸和衍生物，如月桂酸、硬脂酸铝、链烷醇化镁和十一烯酸锌、酯羧酸，例如硬脂酰乳酰乳酸钙、月桂基聚氧乙烯(6)醚柠檬酸酯和PEG-4月桂酰胺羧酸钠， -通过羧酸与环氧乙烷、丙三醇、脱水山梨糖醇或其它醇的酯化而形成的酯， -醚，例如乙氧基化醇、乙氧基化羊毛脂、乙氧基化聚硅氧烷、丙氧基化POE醚和烷基聚糖苷，如月桂基葡糖苷、癸基糖苷和椰油基糖苷。
聚山梨酸酯 根据本发明，除了符合本发明和/或根据本发明方法所产生的结合角蛋白的效应分子之外，组合物也可以包含聚山梨酸酯。
对本发明目的有利的聚山梨酸酯是 -失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚单月桂酸酯(吐温20，CAS编号9005-64-5) -失水山梨醇聚氧乙烯(4)醚单月桂酸酯(吐温21，CAS编号9005-64-5) -失水山梨醇聚氧乙烯(4)醚单硬脂酸酯(吐温61，CAS编号9005-67-8) -失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚三硬脂酸酯(吐温65，CAS编号9005-71-4) -失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚单油酸酯(吐温80，CAS编号9005-65-6) -失水山梨醇聚氧乙烯(5)醚单油酸酯(吐温81，CAS编号9005-65-5) -失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚三油酸酯(吐温85，CAS编号9005-70-3). 特别有利的尤其是 -失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚单棕榈酸酯(吐温40，CAS编号9005-66-7) -失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚单硬脂酸酯(吐温60，CAS编号9005-67-8)。
根据本发明，这些聚山梨酸酯基于组合物总重量有利地以0.1-5重量％的浓度并且尤其以1.5-2.5重量％的浓度单独地或作为两种或多种聚山梨酸酯的混合物加以使用。
调理剂 在本发明的优选实施方案中，组合物还包含调理剂。根据本发明优选的调理剂例如是在国际化妆品成分词典和手册(第4卷，编者R.C.Pepe，J.A.Wenninger，G.N.McEwen、The Cosmetic，Toiletry and FragranceAssociation，第9版，2002)中在第4部分在关键词毛发调理剂、保湿剂、皮肤-调理剂、皮肤-调理剂-润滑药、皮肤-调理剂-保湿剂、皮肤-调理剂-杂项(Miscellaneous)、皮肤-调理剂-紧肤封闭(Occlusive)和皮肤防护剂下列出的全部化合物，和在EP-A 934 956(第11-13)中在“水溶性调理剂”和“油溶性调理剂”下列出的全部化合物。其它有利的调理剂例如是根据INCI称作聚季铵盐(尤其聚季铵盐-1至聚季铵盐-56)的化合物。
合适的调理剂还包括例如聚合性季铵化合物、阳离子纤维素衍生物和多糖。
根据本发明有利的调理剂在本文可以选自下表中所示的化合物。



表4有利使用的调理剂 根据本发明有利的其它调理剂是纤维素衍生物和季铵化瓜耳胶衍生物，尤其瓜耳羟丙基氯化铵(例如Jaguar

、Jaguar C

(Rhodia)、CAS 65497-29-2、CAS 39421-75-5)。
另外，非离子聚-N-乙烯基吡咯烷酮/聚乙酸乙烯酯共聚物(例如

VA 64(BASF Aktiengesellschaft))、阴离子丙烯酸酯共聚物(例如

Soft(BASF Aktiengesellschaft))和/或两性酰胺/丙烯酸酯/甲基丙烯酸酯共聚物(例如

(National Starch))可以根据本发明有利地作为调理剂使用。
粉状原料 添加粉状原料通常可以是有利的。特别优选使用滑石。
乙氧基化甘油脂肪酸酯 根据本发明，除了符合本发明和/或根据本发明方法所产生的结合角蛋白的效应分子之外，组合物可以根据需要还包含乙氧基化油，其中所述的乙氧基化油选自乙氧基化甘油脂肪酸酯，特别优选是PEG-10橄榄油甘油酯、PEG-11鳄梨油甘油酯、PEG-11可可脂甘油酯、PEG-13葵花油甘油酯、PEG-15异硬脂酸甘油酯、PEG-9椰油脂肪酸甘油酯、PEG-54氢化蓖麻油、聚氧乙烯(7)氢化蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油、霍霍巴油乙氧基化物(PEG-26霍霍巴脂肪酸、PEG-26霍霍巴醇)、甘油聚醚-5椰油酸酯、PEG-9椰油脂肪酸甘油酯、PEG-7椰油酸甘油酯、PEG-45棕榈仁油甘油酯、PEG-35蓖麻油、橄榄油PEG-7酯、PEG-6辛酸/癸酸甘油酯、氢化棕榈仁油甘油酯PEG-6酯、PEG-20玉米油甘油酯、PEG-18油酸椰油酸甘油酯、聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油、PEG-40蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油、PEG-60玉米油甘油酯、PEG-54氢化蓖麻油、PEG-45棕榈仁油甘油酯、PEG-35蓖麻油、PEG-80椰油酸甘油酯、PEG-60杏仁油甘油酯、PEG-60月见草甘油酯、PEG-200氢化棕榈酸甘油酯和PEG-90异硬脂酸甘油酯。
优选的乙氧基化油是PEG-7椰油酸甘油酯、PEG-9椰油酸甘油酯类、聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油、PEG-200氢化棕榈酸甘油酯。为多种目的在水质清洁制剂中使用乙氧基化甘油脂肪酸酯。具有低乙氧基化程度(3-12个环氧乙烷单位)的脂肪酸甘油酯通常起到加脂剂以改善干燥后皮肤感觉的作用，具有约30-50乙氧基化程度的脂肪酸甘油酯起到对非极性物质如芳香油的增溶剂作用。使用具有高乙氧基化程度的脂肪酸甘油酯作为增稠剂。全部这些物质共同具有的一个特征是当在皮肤上用水稀释使用时，它们在皮肤上产生特殊的感觉。
光防护剂 符合本发明和/或根据本发明方法所产生的结合角蛋白的效应分子与光防护剂组合在皮肤化妆制品中的用途同样符合本发明。这些化妆性和/或皮肤病学用光防护组合物为化妆性和/或皮肤病学性光保护作用而使用，并且还用于治疗和护理皮肤和/或毛发并且作为化妆产品在装饰性化妆品中使用。这些化妆产品包括例如防晒霜、防晒液、防晒乳、防晒油、防晒香脂、防晒凝胶、唇护理物和唇膏、遮瑕膏和笔、保湿霜、洗液、乳剂、面霜、体霜和手霜、护发素(hair treatment)和漂洗液(rinse)、发型设定用组合物、定型凝胶、毛发喷雾剂、滚擦式除臭剂或眼部除皱霜、热带用物(tropicals)、防晒隔离物(sunblock)、日光浴后制品。全部制品包含至少一种结合角蛋白的效应分子和所述UV过滤物质的之一。
防晒油主要是含一种或多种光防护滤质的不同油与芳香油的混合物。油组分根据不同化妆品特性选择。充分润滑并向皮肤传递柔软感的油如矿物油(例如石蜡油)和甘油三脂肪酸酯(例如花生油、芝麻油、鳄梨油、中链甘油三酯)与改善防晒油扩展能力和吸收至皮肤中、降低厚度并使油膜对空气及水汽可渗透(perspiration)的油混合。这些包括支链脂肪酸酯(例如棕榈酸异丙酯)和硅油(例如聚二甲基硅氧烷)。当使用基于不饱和脂肪酸的油时，则添加抗氧化剂例如生育酚以防止油变酸败，防晒油作为无水制剂通常不包含防腐剂。防晒乳和防晒霜制备为水包油(油/水)乳剂和油包水(水/油)乳剂。取决于乳剂类型，制品的特性变化非常大油/水乳剂可毫不费力地分布在皮肤上，它们大多被迅速吸收并且几乎总是可以毫不费力地用水洗去。水/油乳剂更难以揉入，它们程度更明显地润滑皮肤并且因此看上去多少更为粘稠，但是另一方面更好地保护皮肤免于干透。水/油乳剂大多防水。在油/水乳剂的情况下，乳剂基质、选择合适光防护物质以及根据需要使用助剂(例如聚合物)决定了防水性的程度。液体和霜样油/水乳剂的基质就组成而言与皮肤护理中惯用的其它乳剂相似。防晒乳应当充分润滑因太阳、水和风而干燥的皮肤。它们不应是粘稠的，因为这在炎热下和与砂子接触时感觉特别不舒服。防晒组合物通常基于包含至少一种油相的载体。然而，完全基于水基质的组合物也是可能的。因此，油剂、水包油和油包水乳剂、乳膏剂和糊剂、护唇棒(lip protectioin stick)组合物或无脂(grease-free)凝胶是合适的。合适的乳剂尤其还是含有以分散形式存在的表面包膜的二氧化钛粒子的油/水粗乳状液、油/水微乳状液或油/水/油乳剂，其中乳剂通过相转化技术可得到，如在DE-A-197 26 121所述。可以视作添加剂的惯用化妆辅助品是例如(辅)乳化剂、脂肪和蜡、稳定剂、增稠剂、生物源有效成分、成膜剂、芳香剂、染料、珠光剂、防腐剂、颜料、电解质(例如硫酸镁)和pH调节剂。可以使用的稳定剂是脂肪酸的金属盐，如硬脂酸镁、硬脂酸铝和/或硬脂酸锌。生物源有效成分理解为意指例如植物提取物、蛋白水解物和复合维生素。惯用的成膜剂例如是水胶体，如脱乙酰壳多糖、微晶脱乙酰壳多糖或季铵化脱乙酰壳多糖、聚乙烯吡咯烷酮、乙烯基吡咯烷酮-乙酸乙烯酯共聚物、丙烯酸系聚合物、季铵型(quaternary)纤维素衍生物和类似化合物。
合适的滤光有效成分是吸收UV-B和UV-A区内紫外线的物质。这些物质理解为意指能够吸收紫外线并以波长较长的辐射形式(例如热)再次释放所吸收能量的有机物。该有机物可以是油溶性或水溶性的。合适的紫外线过滤物是例如其中芳基可以分别携带至少一个取代基的2，4，6-三芳基-1，3，5-三嗪，其中所述的取代基优选地选自羟基、烷氧基、尤其甲氧基、烷氧羰基，尤其甲氧羰基和乙氧羰基。也合适的是对氨基苯甲酸酯、肉桂酸酯、二苯甲酮、樟脑衍生物和阻挡紫外线的颜料，如二氧化钛、滑石和氧化锌。特别优选基于二氧化钛的颜料。
可以使用的油溶性UV-B滤质是例如下列物质 可以使用的油溶性UV-B滤质是例如下列物质 3-亚苄基樟脑及其衍生物，例如3-(4-甲基亚苄基)樟脑； 4-氨基苯甲酸衍生物，优选4-(二甲氨基)苯甲酸2-乙基己酯、2-辛基-4-(二甲氨基)苯甲酸酯和4-(二甲氨基)苯甲酸戊酯； 肉桂酸的酯，优选4-甲氧基肉桂酸2-乙基己酯、4-甲氧基肉桂酸丙酯、4-甲氧基肉桂酸异戊酯、4-甲氧基肉桂酸异戊酯、2-氰基-3-苯基肉桂酸2-乙基己酯(2-氰基-3，3-二苯基丙烯酸-2-乙基己酯)； 水杨酸的酯，优选水杨酸2-乙基己酯、水杨酸4-异丙基苄酯、水杨酸高

酯。
二苯甲酮的衍生物，优选2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基-4′-甲基二苯甲酮、2，2′-二羟基-4-甲氧基二苯甲酮； 亚苄丙二酸的酯，优选2-乙基己基4-甲氧基苄基丙二酸酯； 三嗪衍生物，如2，4，6-三苯胺基-(对-羰-2′-乙基-1′-己氧基)-1，3，5-三嗪(辛基三嗪酮)和二辛基丁酰胺基三嗪酮(

HEB)； 丙烷-1，3-二酮，如1-(4-叔丁苯基)-3-(4′-甲氧苯基)丙烷-1，3-二酮。
合适的水溶性物质是 2-苯基苯并咪唑-5-磺酸及其碱金属，碱土金属，铵，烷基铵，链烷醇铵和葡糖铵其盐； 二苯甲酮的磺酸衍生物，优选2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸及其盐； 3-亚苄基樟脑的磺酸衍生物，如4-(2-氧代-3-亚龙脑基甲基)苯磺酸和2-甲基-5-(2-氧代-3-亚龙脑基)磺酸及其盐. 特别优选使用肉桂酸酯，优选地是4-甲氧基肉桂酸2-乙基己酯、4-甲氧基肉桂酸异戊酯、2-氰基-3-苯基肉桂酸2-乙基己酯(2-氰基-3，3-二苯基丙烯酸-2-乙基己酯)。
另外，优选使用二苯甲酮的衍生物，尤其2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基-4’-甲基二苯甲酮、2，2′-二羟基-4-甲氧基二苯甲酮，和优选使用丙烷-1，3-二酮如1-(4-叔丁苯基)-3-(4′-甲氧苯基)丙烷-1，3-二酮。
合适的常见UV-A滤质是 苯甲酰基甲烷的衍生物，如1-(4′-叔丁苯基)-3-(4′-甲氧苯基)丙烷-1，3-二酮、4-叔丁基-4′-甲氧基二苯甲酰基甲烷或1-苯基-3-(4′-异丙基苯基)丙烷-1，3-二酮； 二苯甲酮的氨基羟基取代衍生物，如N，N-二乙氨基羟基苯甲酰基正己基苯甲酸酯。
UV-A和UV-B滤质当然也可以混合使用。
其它合适的UV过滤物质在下表中给出。


表5合适的光防护剂 除了以上提及的两组主要光防护物质以外，还有可能使用破坏在紫外线辐射穿透皮肤时被触发的光化学反应链的抗氧化型次级光防护剂。其常见实例是超氧化物歧化酶，过氧化氢酶，生育酚(维生素E)和抗坏血酸(维生素C)。
又一类是是对紫外光所致皮肤损伤具有抗炎作用的抗刺激剂，此类物质是例如防风根醇、植醇和植烷三醇。
同样符合本发明的是符合本发明和/或根据本发明所方法产生的结合角蛋白的效应分子与阻挡紫外线的无机颜料组合而在皮肤化妆制品中的用途。优选基于金属氧化物和/或其它金属化合物的颜料，其中所述的颜料在水中不溶解或少量溶解并且选自锌的氧化物(ZnO)、钛的氧化物(TiO2)、铁的氧化物(例如Fe2O3)、锆的氧化物(ZrO2)、硅的氧化物(SiO2)、锰的氧化物(例如MnO)、铝的氧化物(Al2O3)、铈的氧化物(例如Ce2O3)、相应金属的混合氧化物和这类氧化物的混合物。
无机颜料可以以包膜的形式存在，即经过表面处理。这种表面处理可以例如包含如DE-A-33 14 742中所述通过本身已知的方法提供带微薄疏水层的颜料。
合适的驱除剂有效成分是能够迫使或驱除某些生物尤其昆虫远离人的化合物。这些化合物包括例如2-乙基-1，3-己二醇、N，N-二乙基-间甲苯甲酰胺等。刺激血液流经皮肤的合适充血物质例如是精油，如中欧山松提取物、薰衣草提取物、迷迭香提取物、刺柏子提取物、马栗提取物、桦木叶提取物、龙胆提取物、乙酸乙酯、樟脑、薄荷醇、薄荷油、桉树油等。合适的角质分解的和角质形成的物质例如是水杨酸、硫代乙醇酸钙、硫代乙醇酸及其盐、硫等。合适的去头屑有效成分例如是硫、硫聚乙二醇失水山梨糖醇单油酸酯、硫蓖麻醇聚乙氧基化物(sulfur ricinol polyethoxylate)、吡啶硫酮锌、吡啶硫酮铝等。消解皮肤刺激作用的合适消炎药例如是尿囊素、防风根醇、红没药醇、春黄菊提取物、泛醇等。
符合本发明和/或根据本发明方法所产生的结合角蛋白的效应分子与至少一种可化妆品用或可药用聚合物的组合的用途同样符合本发明。
合适聚合物例如是具有INCI名称聚季铵盐的阳离子聚合物，例如乙烯基吡咯烷酮/N-乙烯基咪唑啉鎓盐共聚物(Luviquat FC，Luviquat HM，Luviquat MS，Luviquat Care)、以硫酸二乙酯季铵化的N-乙烯基吡咯烷酮/甲基丙烯酸二甲氨基乙酯共聚物(Luviquat PQ 11)、N-乙烯基己内酰胺/N-乙烯基吡咯烷酮/N-乙烯基咪唑啉鎓盐的共聚物(Luviquat E Hold)、阳离子纤维素衍生物(羟乙基纤维素/二烯丙基二甲基氯化铵共聚物和聚季铵盐-10)、丙烯酰胺共聚物(聚季铵盐-7)和脱乙酰壳多糖。
合适的阳离子(季铵化)聚合物也是Merquat(基于二甲基二烯丙基氯化铵的聚合物)、Gafquat(通过聚乙烯吡咯烷酮与季铵化合物反应而形成的季铵型聚合物)、聚合物JR(带阳离子基团的羟乙基纤维素)和植物基阳离子聚合物，例如瓜耳聚合物，如来自Rhodia的Jaguar级别。
其它合适的聚合物也是中性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮、N-乙烯基吡咯烷酮和乙酸乙烯酯和/或丙酸乙烯酯的共聚物、聚硅氧烷、聚乙烯基己内酰胺和具有N-乙烯基吡咯烷酮的其它共聚物、聚乙烯亚胺及其盐、聚乙烯胺及其盐、纤维素衍生物、聚天冬氨酸盐和衍生物。这些中性聚合物包括例如Luviflex 0 Swing(部分水解的聚乙酸乙烯酯与聚乙二醇的共聚物，BASF Aktiengesellschaft)。
合适的聚合物也是非离子、水溶性或水可分散性聚合物或寡聚物，如聚乙烯基己内酰胺例如Luviskol 0 Plus(BASF)，或聚乙烯吡咯烷酮及其共聚物，尤其与乙烯基酯如乙酸乙烯酯的共聚物，例如Luviskol 0 VA37(BASF)，聚酰胺，例如基于衣康酸和脂族二胺的聚酰胺，例如在DE-A-4333 238中所述。
合适的聚合物也是两性或两性离子聚合物，如在名称Amphomer(National Starch)下可获得的辛基丙烯酰胺/甲基丙烯酸甲酯/甲基丙烯酸叔丁基氨基乙酯-甲基丙烯酸羟丙酯共聚物，以及如公开于例如德国专利申请DE39 29 973、DE 21 50 557、DE 28 17 369和DE 3708 451中的两性离子聚合物。丙烯酰胺丙基三甲基氯化铵/丙烯酸或甲基丙烯酸共聚物及其碱金属盐和铵盐是优选的两性离子聚合物。其它合适的两性离子聚合物是在名称Amersette(AMERCHOL)下可商业获得的甲基丙烯酰氧乙基甜菜碱/甲基丙烯酸酯共聚物，以及甲基丙烯酸羟乙酯、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸N，N-二甲基氨基乙酯和丙烯酸的共聚物(Jordapon(D))。
合适的聚合物也是非离子、含硅氧烷的水溶性或水可分散性聚合物，例如聚醚硅氧烷，如Tegopren(Goldschmidt)或Besi&commat(Wacker)。
同样符合本发明的是符合本发明和/或根据本发明方法所产生的结合角蛋白的效应分子与皮肤化妆有效成分(一种或多种化合物)的组合的用途，其中所述的皮肤化妆有效成分有利地选自乙酰水杨酸、阿托品、甘菊环、氢化可的松及其衍生物例如氢化可的松-17-戊酸酯、B和D族维生素，尤其维生素B1、维生素B12、维生素D、维生素A或其衍生物如棕榈酸视黄酯、维生素E或其衍生物如生育酚醋酸酯、维生素C和其衍生物如抗坏血酸葡糖苷，以及尼克酰胺、泛醇、防风根醇、表面麻醉剂、不饱和脂肪酸如必需脂肪酸(通常称做维生素F)，尤其γ-亚麻酸、油酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸及其衍生物、氯霉素、咖啡因、前列腺素、麝香草酚、樟脑、角鲨烯、植物或动物源的提取物或其它产物，例如月见草油、玻璃苣(borage)油或角豆树豆油、鱼油、鳕鱼肝油或者神经酰胺和类神经酰胺化合物、熏香提取物、绿茶提取物、水仙(water lily)提取物、甘草(licorice)提取物、金缕梅(hamamelis)、去头屑有效成分(例如二硫化硒、吡啶硫酮锌、吡罗克酮乙醇胺、氯咪巴唑、吡啶酮乙醇胺盐(octopirox)、聚多卡醇(polydocanol)和其组合)，复合有效成分，如γ-谷维素与钙盐如泛酸钙，氯化钙、乙酸钙的复合有效成分。还有利的是选择来自再加脂物质类别的有效成分，例如辛酸十六/十八烷酯(purcellin oil)、

和

。有效成分或有效成分类也特别有利地选自NO合成抑制物，尤其当本发明的制品将用于治疗和预防固有性和/或外因性皮肤老化的症状和用于治疗和预防紫外辐射对皮肤及毛发的有害作用时。优选的NO合成抑制物是硝基精氨酸。有效成分或有效成分类还有利地选自儿茶素和儿茶素胆汁酸酯和从具有儿茶素或儿茶素胆汁酸酯成分的植物或植物部分如山茶科(Theaceae)植物、尤其茶(Camellia sinensis)的叶中所提取的水提取物或有机提取物。它们的常见成分(例如多酚或儿茶素、咖啡因、维生素、糖、矿物质、氨基酸、脂类)是特别有利的。儿茶素是将理解为氢化黄酮或花青素的一组化合物并代表“儿茶素”衍生物(儿茶酚、3，3′，4′，5，7-黄烷五醇、2-(3，4-二羟基苯基)苯并二氢吡喃-3，5，7-三醇)。表儿茶素((2R，3R)-3，3′，4′，5，7-黄烷五醇)是有利于本发明目的的有效成分。还有利的是含儿茶素成分的植物提取物，尤其绿茶的提取物，如从以下植物的叶中提取的提取物山茶(Camellia spec.)、极特别地是茶叶型茶(tea type Camellia sinensis)、普洱茶(C.assamica)、大理茶(C.taliensis)和滇缅茶(C.inawadiensis)和这些物种与例如山茶(Camellia japonica)的杂交种。优选的有效成分也是来自(-)-儿茶素、(+)-儿茶素、(-)-儿茶素没食子酸酯、(-)-没食子儿茶素没食子酸酯、(+)-表儿茶素、(-)-表儿茶素、(-)-表儿茶素没食子酸酯、(-)-表没食子儿茶素、(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯的多酚和儿茶素。
黄酮及其衍生物(也经常统称为“黄酮”)是有利于本发明目的的有效成分。它们的特征在于以下基本结构(给出取代位置)
也可以优选地用于本发明制品中的一些更重要的黄酮列于下表6。


表6黄酮 黄酮通常在自然界中以糖基化形式存在. 根据本发明，类黄酮优选地选自具有以下通式的物质
其中Z1至Z7相互独立地选自H、OH、烷氧基和羟基烷氧基，其中烷氧基或羟基烷氧基可以是支链或直链的并且具有1-18个碳原子，并且其中Gly选自单糖苷和寡糖苷基团。
另外，有效成分(一种或多种化合物)也可以非常有利地选自亲水性有效成分，尤其来自以下组 α-羟基酸，如乳酸或水杨酸或其盐，如乳酸钠、乳酸钙、TEA乳酸酯、脲、尿囊素、丝氨酸、山梨糖醇、丙三醇、乳蛋白、泛醇、脱乙酰壳多糖。
此类有效成分(一种或多种化合物)在本发明制品中的量基于该制品的总重量优选地是0.001-30重量％，特别优选地是0.05-20重量％、尤其是1-10重量％。所述的有效成分和可以在本发明制品中使用的其它有效成分在DE 103 18 526 A1中在第12-17页上给出，该文献的全部内容在此加以参考。
此外，本发明涉及以上提及制品用于防止不想要的皮肤外观改变例如粉刺或油腻皮肤、角化病、酒渣鼻、光敏感性、炎性、红斑性、过敏性或自身免疫反应性反应。
就使用而言，本发明的化妆制品以对于化妆品或皮肤化妆品惯用的方式应用至皮肤、毛发、指甲或趾甲。
本发明还提供这样的皮肤化妆品，其包含上述结合角蛋白的效应蛋白之一、特别优选是选自酶、抗体、效应物结合蛋白、荧光蛋白、抗微生物肽和自动装配蛋白的结合角蛋白的效应蛋白。特别优选包含如实施例3中所述结合角蛋白的效应分子的皮肤化妆品。
最优选的是包含如此结合角蛋白的效应蛋白的皮肤化妆品，其中所述结合角蛋白的效应蛋白包含根据SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164或166、优选在SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、40、42、44、46、48、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215中所示序列的至少一种结合角蛋白的多肽(ii)，且效应多肽(ii)是丝蛋白，优选地是在序列SEQ ID No151、201、202、203、204、205、206、207、208、209或210中的丝蛋白质之一，特别优选是C16蜘蛛丝蛋白，其中所述的C16蜘蛛丝蛋白是来自十字园蛛的蛋白质ADF4的C结构体(module)的16次重复。
在本发明的优选实施方案中，基于组合物的总重量，皮肤化妆品、优选肤质护理和发质护理组合物以0.001-1重量％、优选0.01-0.9重量％、特别优选0.01-0.8重量％或0.01-0.7重量％、非常特别优选0.01-0.6重量％或0.01-0.5重量％、最优选0.01-0.4重量％或0.01-0.3重量％的浓度包含本发明的结合角蛋白的效应蛋白。在又一个实施方案中，基于组合物的总重量，该组合物以1-10重量％、优选2-8重量％、3-7重量％、4-6重量％的浓度包含本发明的结合角蛋白的效应蛋白。在同样优选的实施方案中，基于组合物的总重量，该组合物以10-20重量％、优选11-19重量％、12-18重量％、13-17重量％、14-16重量％的浓度包含本发明的结合角蛋白的效应蛋白。在又一个优选的实施方案中，基于组合物的总重量，该组合物以20-30重量％、优选21-29重量％、22-28重量％、23-27重量％、24-26重量％的浓度包含本发明的结合角蛋白的效应蛋白。
本发明的组合物优选地是皮肤保护组合物、皮肤护理组合物、皮肤清洁组合物、毛发保护组合物、毛发护理组合物、毛发清洁组合物、染发剂、漱口剂和口腔清洗剂或用于装饰性化妆品的制品，根据使用领域，其优选地以软膏剂、乳膏剂、乳剂、混悬剂、洗液、乳、糊剂、凝胶、泡沫或喷雾剂形式使用。
除了结合角蛋白的效应蛋白之外，本发明的皮肤化妆品可以包含上文已列出的全部聚合物、颜料、保湿剂、油、蜡、酶、矿物质、维生素、防晒剂、染料、芳香剂、抗氧化剂、防腐剂和/或药用有效成分。
另外，以下适用于本发明的皮肤化妆品 本发明组合物的配制基材优选地包含化妆品或皮肤化妆品可用/可药用的助剂。可药用的助剂是已知用于药学，食品技术领域和相关领域中的助剂，在相关药典(例如DAB Ph.Eur.BP NF)中列出的那些助剂以及其特性不排除生理学应用的其它助剂。
合适的助剂可以是是助流剂、湿润剂、乳化及悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、抗刺激剂、螯合剂、乳化稳定剂、成膜剂、胶凝剂、气味掩蔽剂、树脂、水胶体、溶剂、增溶剂、中和剂、渗透加速剂、颜料、季铵化合物、加脂剂和富脂剂、软膏剂、乳膏剂或油剂基质物、硅氧烷衍生物、稳定剂、消毒剂、推进剂、干燥剂、遮光剂、增稠剂、蜡、软化剂、白油。在此方面的一个实施方案以专家知识为基础，如在例如Fiedler，H.P.Lexikon derHilfsstoffe für Pharmazie，Kosmetik und angrenzende Gebiete[Lexicon ofauxiliariss for pharmacy，cosmetics und related fields]，第四版，AulendorfECV-Editio-Kantor-Verlag，1996中所示。
为产生本发明的皮肤化妆组合物，有效成分可以与合适助剂(赋形剂)混合或用其稀释。赋形剂可以是可起到作为有效成分的媒介、载体或介质作用的固体，半固体或液体材料。根据需要，其它助剂的混入以本领域技术人员已知的方式进行。此外，聚合物和分散体合适作为药学中的助剂，优选地作为或在用于固体药物形式的包衣组合物或粘合剂中的助剂。它们也可以在乳膏剂中并且作为片剂包膜及片剂粘合剂使用。
根据又一个优选的实施方案，本发明的组合物是用于护理和保护皮肤和毛发的化妆性组合物、甲护理组合物或用于装饰性化妆品的制品。
合适的皮肤化妆性组合物例如是爽肤水、面膜、除臭剂和其它化妆性洗液。用于装饰性化妆品的组合物包括例如遮瑕笔、舞台化妆品、睫毛油和眼影、唇膏、眼圈墨笔、眼线膏、腮红、底粉和画眉笔。
另外，符合本发明和/或根据本发明方法所产生的结合角蛋白的效应分子在用于毛孔清洁的鼻贴条中、在抗痘组合物、驱除剂、剃须组合物、剃须后和剃须前护理组合物、日光浴后护理组合物、除毛发组合物、染发剂、外阴护理组合物、足护理组合物及在婴儿护理中使用。
本发明的皮肤护理组合物尤其是水/油或油/水护肤霜、日霜和晚霜、眼霜、面霜、抗皱霜、防晒膏、保湿霜、漂白霜、自动晒黑膏、维生素膏、皮肤洗液、护理洗液和保湿洗液。
除了符合本发明和/或根据本发明方法所产生的结合角蛋白的效应分子之外，本发明的皮肤化妆性和皮肤病学用组合物也可以包含这样的有效成分，其分解自由基作为对抗氧化过程及相关老化过程或皮肤和/或毛发损伤的保护。这些有效成分优选地是在专利申请WO/0207698和WO/03059312中描述的物质，其内容文中引用特别加以参考，优选地是其中所述可以减少过氧化物或过氧化氢以产生相应醇而不随后形成自由基的含硼化合物。此外，根据通式3的空间位阻胺可以用于此目的， 式3
其中基团z具有下列含义H、C1-C22烷基，优选C1-C12烷基如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基；C1-C22-烷氧基，优选C1-C12烷氧基如烷氧甲基、烷氧乙基、烷氧丙基、烷氧异丙基、烷氧丁基、烷氧异丁基、烷氧仲丁基、烷氧叔丁基、烷氧戊基、烷氧异戊基、烷氧新戊基、烷氧叔戊基、烷氧己基、烷氧庚基、烷氧辛基、烷氧壬基、烷氧癸基、烷氧十一烷基、烷氧十二烷基；其中苯基基团可以被C1-C4烷基基团取代的C6-C10芳基如苯基和萘基，可以被C1-C22烷基或C1-C22烷氧基、优选由如上所述C1-C12烷基或C1-C12烷氧基取代的C6-C10-O芳基，并且 基团R1-R6相互独立地具有下列含义H、OH、O、C1-C22烷基，优选C1-C12烷基如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基；C1-C22-烷氧基，优选C1-C12-烷氧基如烷氧甲基、烷氧乙基、烷氧丙基、烷氧异丙基、烷氧丁基、烷氧异丁基、烷氧仲丁基、烷氧叔丁基、烷氧戊基、烷氧异戊基、烷氧新戊基、烷氧叔戊基、烷氧己基、烷氧庚基、烷氧辛基、烷氧壬基、烷氧癸基、烷氧十一烷基、烷氧十二烷基；其中苯基基团可以被C1-C4烷基基团取代的C6-C10芳基如苯基和萘基，可以被C1-C22烷基或C1-C22烷氧基、优选由如上所述C1-C12烷基或C1-C12烷氧基取代的C6-C10-O芳基。
特别优选基于组合物的总重量，以0.001-1重量％、优选0.01-0.1重量％、0.1-1重量％的量使用空间位阻胺3-十二烷基-N-(2，2，6，6-四甲基-4-哌啶基)琥珀酰亚胺、3-十二烷基-N-(1，2，2，6，6-五甲基-4-哌啶基)琥珀酰亚胺、3-辛基-N-(2，2，6，6-四甲基-4-哌啶基)琥珀酰亚胺、3-辛基-N-(1，2，2，6，6-五甲基-4-哌啶基)琥珀酰亚胺、3-辛烯基-N-(2，2，6，6-四甲基-4-哌啶基)琥珀酰亚胺、3-辛烯基-N-(1，2，2，6，6-五甲基-4-哌啶基)琥珀酰亚胺和/或Uvinul

5050H。
除了以上提及的本发明化合物和合适载体之外，皮肤化妆制品也可以如上所述包含皮肤化妆品中常用的其它有效成分和助剂。它们优选地包括乳化剂、防腐剂、芳香油、化妆性有效成分，如植烷三醇、维生素A、E和C、视黄醇、防风根醇、泛醇、光防护剂、漂白剂、着色剂、调色剂、鞣剂、胶原、蛋白水解物、稳定剂、pH调节剂、染料、盐、增稠剂、胶凝剂、稠度调节物、硅氧烷、保湿剂、加脂剂和/或其它常用添加剂。
皮肤化妆性和皮肤化妆性组合物的优选的油和脂肪组分是以上提及的矿物油和合成油，如石蜡、硅油和具有多于8个碳原子的脂族烃、动物油和植物油，如葵花油、椰子油、鳄梨油、橄榄油、羊毛脂、或蜡、脂肪酸、脂肪酸酯，如C6-C30脂肪酸的甘油三酯、蜡酯，如霍霍巴油、脂肪醇、凡士林、氢化羊毛脂和乙酰化羊毛脂，及其混合物。
为建立某些特性，如改善触感、展开性、防水性和/或有效成分与助剂如颜料的结合，皮肤化妆性和皮肤化妆制品可以额外地还包含基于硅氧烷化合物的调理物质。
合适的硅氧烷化合物例如是聚烷基硅氧烷、聚芳基硅氧烷、聚芳烷基硅氧烷、聚醚硅氧烷或硅氧烷树脂。
化妆性或皮肤化妆制品通过本领域技术人员已知的常用方法产生。
优选地，化妆性和皮肤化妆组合物以乳剂形式存在，尤其作为油包水(水/油)或水包油(油/水)乳剂。
然而，还有可能选择其他类型的制剂，例如凝胶剂、油剂、油凝胶剂、多重乳剂，例如处于水/油/水或油/水/油乳剂、无水软膏剂或软膏剂基质等形式。无乳化剂制剂如水分散体、水凝胶或皮克林乳剂也是有利的实施方案。
乳剂通过已知方法产生。除了至少一种结合角蛋白的效应分子之外，乳剂通常在水存在下包含惯用组分，如脂肪醇、脂肪酸酯和尤其甘油三脂肪酸酯、脂肪酸、羊毛脂及其衍生物、天然或合成的油或蜡和乳化剂。选择针对乳剂类型特异的添加剂以及产生合适乳剂例如在Schrader，Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika[化妆品的要素和制剂]，HüthigBuch Verlag，Heidelberg，第二版，1989，第三部分或Umbach，KosmetikEntwicklung，Herstellung und Anwendung kosmetischer Mittel[化妆品化妆性组合物的开发、制造和使用]，扩编的第二版，1995，Georg ThiemeVerlag，ISBN 3 13 712602 9，第122页ff.中描述，所述文献因而特别加以参考。
例如用于护肤霜等的处于水/油乳剂形式的合适乳剂通常包含通过利用合适乳化剂系统而乳化于油相或脂相中的水相。聚电解质复合物可以用于提供这种水相。
可以在乳剂的脂相中存在的优选脂组分是烃油，如石蜡油、辛酸十六/十八烷酯(purcellin oil)、全氢角鲨烯和在这些油中的微晶蜡溶液；动物油或植物油，如甜杏仁油、鳄梨油、红厚壳油、羊毛脂及其衍生物、蓖麻油、芝麻油、橄榄油、霍霍巴油、烛果油、胸棘鲷(hoplostethus)油、其蒸馏起点在大气压下处于约250℃并且其蒸馏终点处于410℃的矿物油，如凡士林油、饱和或不饱和脂肪酸的酯，如肉豆蔻酸烷基酯，例如肉豆蔻酸异丙酯、肉豆蔻酸丁酯或肉豆蔻酸鲸蜡酯、硬脂酸十六烷酯、棕榈酸乙酯或异丙酯、辛酸或癸酸甘油三酯和蓖麻酸十六烷基。
脂相也可以包含可溶于其它油中的硅油如二甲基聚硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷和硅氧烷二醇共聚物、脂肪酸和脂肪醇。
除了本发明的上述化合物之外，皮肤护理组合物也可以包含蜡，如巴西棕榈蜡、小烛树蜡、蜂蜡、微晶蜡、地蜡和油酸、肉豆蔻酸、亚油酸及硬脂酸的Ca、Mg和Al盐。
此外，本发明的乳剂可以处于油/水乳剂的形式。这种乳剂通常包含油相、使油相稳定于水相中的乳化剂和通常以增稠形式存在的水相。合适的乳化剂优选地是油/水乳化剂，如聚甘油酯、聚山梨酸酯或部分酯化的甘油酯。
根据又一个优选的实施方案，本发明的组合物是光防护组合物、淋浴凝胶、洗发剂制剂或洗浴制品，特别优选光防护制品。
此类制剂包含至少一种符合本发明和/或根据本发明方法所产生的结合角蛋白的效应分子和作为碱性表面活性剂的常见阴离子表面活性剂以及作为共表面活性剂的两性和/或非离子性表面活性剂。其它合适的有效成分和/或助剂通常选自脂类、芳香油、染料、有机酸、防腐剂和抗氧化剂以及增稠剂/胶凝剂、皮肤调理剂和保湿剂。
基于制剂总重量，这些制剂有利地包含2-50重量％、优选5-40重量％、特别优选8-30重量％的表面活性剂。
在洗涤、淋浴和洗浴制品中，可以使用在洁体组合物中习惯使用的全部阴离子性、中性、两性或阳离子表面活性剂。
合适的阴离子表面活性剂例如是烷基硫酸盐、烷基醚硫酸盐、烷基磺酸盐、烷芳基磺酸盐、烷基琥珀酸盐、琥珀酸烷基酯磺酸盐、N-烷基肌氨酸盐、酰基牛黄酸盐、酰基羟乙基磺酸盐、烷基磷酸盐、烷基醚磷酸盐、烷基醚碳酸盐、α-烯属磺酸盐，尤其碱金属盐和碱土金属盐，例如钠、钾、镁、钙、铵和三乙醇胺盐。烷基醚硫酸盐、烷基醚磷酸盐和烷基醚碳酸盐可以在分子中具有1-10个环氧乙烷或环氧丙烷单位、优选1-3个环氧乙烷单位。
这些包括例如十二烷基硫酸钠、月桂基硫酸铵、月桂基醚硫酸钠、月桂基醚硫酸铵、月桂基肌氨酸钠、琥珀酸油酯钠、琥珀酸月桂酯磺酸铵、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基苯磺酸三乙醇胺。
合适的两性表面活性剂例如是烷基甜菜碱、烷基酰胺丙基甜菜碱、烷基磺基甜菜碱、氨基乙酸烷基酯、羧基氨基乙酸烷基酯、两性乙酸烷基酯或两性丙酸烷基酯、两性二乙酸烷基酯或两性二丙酸烷基酯。
例如，可以使用椰油酰二甲基磺丙基甜菜碱、月桂基甜菜碱、椰油酰氨基丙基甜菜碱或N-椰油酰胺基乙基-N-羟基乙基氨基丙酸钠(sodiumcocamphopropionate)。
合适的非离子表面活性剂例如是可以为直链或支链的在烷基链中具有6-20个碳原子的脂族醇或烷基苯酚与环氧乙烷和/或环氧丙烷的反应产物。烯化氧的量是每摩尔醇约6-60mol。此外，烷基胺氧化物、单-或双烷基链烷醇酰胺、聚乙二醇的脂肪酸酯、乙氧基化脂肪酸酰胺、烷基多糖苷或失水山梨糖醇醚酯是合适的。
另外，洗涤、沐浴和洗浴制品可以包含惯用的阳离子表面活性剂，如季铵化合物，例如鲸蜡基三甲基氯化铵。
此外，淋浴凝胶/洗发剂制剂可以包含增稠剂，如氯化钠、PEG-55、丙二醇油酸酯、PEG-120甲基葡糖二油酸酯及其它，以及还有防腐剂、其它有效成分和助剂及水。
毛发处理用组合物 根据又一个优选的实施方案，本发明的皮肤化妆品是毛发处理用组合物。
优选地，本发明的毛发处理用组合物的形式是定型泡沫、发用摩丝、发胶、洗发剂、毛发喷雾剂、发用泡沫、端液(end fluid)、用于定型波浪的中和剂、染发剂和漂白剂或热油护发品。根据使用领域，毛发化妆制品可以作为(气溶胶)喷雾剂、(气溶胶)泡沫、凝胶、凝胶喷雾剂、乳膏剂、洗液或发蜡(wax)应用。毛发喷雾剂在本文中包括气溶胶喷雾剂和不带抛射气体的泵式喷雾剂(pump sprays)。发用泡沫包括气溶胶泡沫和不带抛射气体的泵式泡沫(pump foam)。毛发喷雾剂和发用泡沫优选地包括主要或完全水溶性或水可分散的组分。当在本发明的毛发喷雾剂和发用泡沫中使用的化合物可在水中分散时，它们可以在通常具有1-350nm、优选1-250nm粒子直径的水性微分散体形式应用。这些制品的固形物含量在本文中通常是约0.5-20重量％。这些微分散体通常不需要乳化剂或表面活性剂用于稳定化。
其它组分将理解为意指化妆品中惯用的添加剂，例如推进剂、消泡剂、界面活性化合物即表面活性剂、乳化剂、发泡剂和增溶剂。所用的界面活性化合物可以是阴离子、阳离子、两性或中性的。其它惯用的组分也可以例如是防腐剂、芳香油、遮光剂、有效成分、紫外线过滤物、护理物质如泛醇、胶原、维生素、蛋白水解物、α-和β-羟基羧酸、稳定剂、pH调节剂、染料、粘度调节物、胶凝剂、盐、保湿剂、加脂剂、络合剂和其它常用添加剂。
若想建立极特殊的特性的话，这里还包括化妆品中已知的可以与本发明的结合角蛋白的效应分子组合使用的所有造型聚合物和调理聚合物。
合适的常规毛发化妆性聚合物例如是以上提及的在本文中加以参考的阳离子、阴离子、中性、非离子和两性聚合物。
为建立某种特性，制品可以额外地还包含基于硅氧烷化合物的调理物质。合适的硅氧烷化合物例如是聚烷基硅氧烷、聚芳基硅氧烷、聚芳烷基硅氧烷、聚醚硅氧烷、硅氧烷树脂或聚二甲基硅氧烷共聚醇(CTFA)和氨基官能硅氧烷化合物，如氨基封端的聚二甲基硅氧烷(CTFA)。
推进剂是习惯性用于毛发喷雾剂或气溶胶泡沫的推进剂。优选是丙烷/丁烷、戊烷、二甲醚、1，1-二氟乙烷(HFC-152a)、二氧化碳、氮或压缩空气的混合物。
可以使用的乳化剂是在发用泡沫中习惯性使用的全部乳化剂。合适的乳化剂可以是非离子性、阳离子性或阴离子性或两性的。非离子乳化剂(INCI命名)的实例是月桂基聚氧乙烯醚，例如月桂基聚氧乙烯(4)醚；十六烷基聚氧乙烯醚，例如十六烷基聚氧乙烯(1)醚、聚乙二醇十六烷基醚、十六/十八烷基聚氧乙烯醚，例如十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚、聚乙二醇脂肪酸甘油酯、羟化卵磷脂、脂肪酸的乳酰基酯、烷基多糖苷。
阳离子乳化剂的实例是十六烷基二甲基-2-羟乙基磷酸二氢铵、十六烷基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵、椰油基三甲基硫酸二甲铵、季铵盐(Quaternium)-1至x(INCI)。
阴离子乳化剂可以选自例如烷基硫酸盐、烷基醚硫酸盐、烷基磺酸盐、烷芳基磺酸盐、烷基琥珀酸盐、琥珀酸烷基酯磺酸盐、N-烷基肌氨酸盐、酰基牛黄酸盐、酰基羟乙基磺酸盐、烷基磷酸盐、烷基醚磷酸盐、烷基醚碳酸盐、α-烯属磺酸，尤其碱金属盐和碱土金属盐，例如钠、钾、镁、钙、铵和三乙醇胺盐。烷基醚硫酸盐、烷基醚磷酸盐和烷基醚碳酸盐可以在分子中具有1-10个环氧乙烷或环氧丙烷单位、优选1-3个环氧乙烷单位。
可以使用的胶凝剂是化妆品中惯用的全部胶凝剂。这些包括轻度交联的聚丙烯酸例如卡波姆(INCI)、纤维素衍生物例如羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、阳离子改性纤维素、多糖，例如黄原酸胶、甘油三(辛酸/癸酸)酯、丙烯酸钠共聚物、聚季铵盐-32(和)矿脂(INCI)、丙烯酸钠共聚物(和)矿脂(和)PPG-1十三烷基聚氧乙烯(6)醚、丙烯酰胺丙基三甲基氯化铵/丙烯酰胺共聚物、硬脂基聚氧乙烯(10)醚烯丙基醚、丙烯酸酯共聚物、聚季铵盐-37(和)矿脂(和)PPG-1十三烷基聚氧乙烯(6)醚、聚季铵盐37(和)丙二醇二辛酸/二癸酸酯(和)PPG-1十三烷基聚氧乙烯(6)醚、聚季铵盐-7、聚季铵盐-44。
在洗发剂制剂中，可以使用在洗发剂中习惯性使用的全部的阴离子、中性、两性或阳离子表面活性剂。
合适的阴离子表面活性剂例如是烷基硫酸盐、烷基醚硫酸盐、烷基磺酸盐、烷芳基磺酸盐、烷基琥珀酸盐，琥珀酸烷基酯磺酸盐、N-烷基肌氨酸盐、酰基牛黄酸盐、酰基羟乙基磺酸盐、烷基磷酸盐、烷基醚磷酸盐、烷基醚碳酸盐、α-烯属磺酸酯，尤其碱金属盐和碱土金属盐，例如钠、钾、镁、钙、铵和三乙醇胺盐。烷基醚硫酸盐、烷基醚磷酸盐和烷基醚碳酸盐可以在分子中具有1-10个环氧乙烷或环氧丙烷单位、优选1-3个环氧乙烷单位。
适合的是例如十二烷基硫酸钠、月桂基硫酸铵、月桂基醚硫酸钠、月桂基醚硫酸铵、月桂基肌氨酸钠、琥珀酸油酯钠、琥珀酸月桂酯磺酸铵、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基苯磺酸三乙醇胺。
合适的两性表面活性剂例如是烷基甜菜碱、烷基酰胺丙基甜菜碱、烷基磺基甜菜碱、氨基乙酸烷基酯、羧基氨基乙酸烷基酯、两性乙酸烷基酯或两性丙酸烷基酯、两性二乙酸烷基酯或两性二丙酸烷基酯。
例如，可以使用椰油酰二甲基磺丙基甜菜碱、月桂基甜菜碱、椰油酰氨基丙基甜菜碱或N-椰油酰胺基乙基-N-羟基乙基氨基丙酸钠(sodiumcocamphopropionate)。
适的非离子表面活性剂例如是可以为直链或支链的在烷基链中具有6-20个碳原子的脂族醇或烷基苯酚与环氧乙烷和/或环氧丙烷的反应产物。烯化氧的量是每摩尔醇约6-60mol。此外，烷基胺氧化物、单-或双烷基链烷醇酰胺、聚乙二醇的脂肪酸酯、烷基多糖苷或失水山梨糖醇醚酯是合适的。
另外，洗发剂制剂可以包含惯用的阳离子表面活性剂，如季铵化合物，例如鲸蜡基三甲基氯化铵。
在洗发剂制剂中，为实现某种作用，惯用的调理剂可以与本发明的结合角蛋白的效应分子组合使用。
这些包括例如以上提及具有INCI名称聚季铵盐的阳离子聚合物，尤其乙烯基吡咯烷酮/N-乙烯基咪唑啉鎓盐的共聚物(Luviquat FC，LuviquatHM，Luviquat MS，Luviquat Care)、以硫酸二乙酯季铵化的N-乙烯基吡咯烷酮/甲基丙烯酸二甲氨基乙酯的共聚物(Luviquat D PQ 11)、N-乙烯基己内酰胺/N-乙烯基吡咯烷酮/N-乙烯基咪唑啉鎓盐的共聚物(Luviquat DHold)、阳离子纤维素衍生物(羟乙基纤维素/二烯丙基二甲基氯化铵共聚物和聚季铵盐-10)、丙烯酰胺共聚物(聚季铵盐-7)。此外，可以使用蛋白水解物，还有基于硅氧烷化合物的调理物质，例如聚烷基硅氧烷、聚芳基硅氧烷、聚芳烷基硅氧烷、聚醚硅氧烷或硅氧烷树脂。其它合适的硅氧烷化合物是聚二甲基硅氧烷共聚醇(CTFA)和氨基官能性硅氧烷化合物，如氨基封端的聚二甲基硅氧烷(CTFA)。此外，可以使用阳离子瓜耳胶衍生物，如瓜耳羟丙基三甲基氯化铵(INCI)。
根据又一个实施方案，这种毛发化妆性或皮肤化妆制品起到护理和保护皮肤或毛发的作用并且其形式是乳剂、分散体、混悬剂、水质表面活性制品，乳、洗液、乳膏剂、香脂、软膏剂、凝胶、颗粒剂、散剂、棒状制品(stick preparation)如唇膏、泡沫、气溶胶或喷雾剂。此类制剂是极为适合于局部用制品。合适的乳剂是水包油乳剂和油包水乳剂或微乳状液。
原则上，毛发化妆性或皮肤化妆制品用于应用至皮肤(局部)或毛发。局部用制品在这里理解为意指适于以精细分布并且优选地以可由皮肤吸收的形式应用有效成分至皮肤上的制品。适合于此目的的例如是水溶液和水-醇溶液、喷雾剂、泡沫、泡沫气溶胶、软膏剂、水凝胶、油/水或水/油型乳剂、微乳状液或化妆性棒状制品。
根据本发明的化妆性组合物的优选实施方案，该组合物包含载体。优选的载体是水、气体、基于水的液体、油、凝胶、乳状液或微乳状液、分散体或其混合物。所述的载体表现良好的皮肤兼容性，对局部用制品特别有利的是水凝胶、乳状液或微乳状液。
可以使用的乳化剂是非离子表面活性剂、两性离子表面活性剂、两性表面活性剂或阴离子乳化剂。乳化剂可以基于组合物以0.1-10重量％、优选1-5重量％的量在本发明的组合物中存在。
所用非离子表面活性剂可以例如是来自以下至少一个组中的表面活性剂 2-30摩尔环氧乙烷和/或0-5摩尔环氧丙烷与具有8-22个碳原子的直链脂肪醇、与具有12-22个碳原子的脂肪酸和与烷基中具有8-15个碳原子的烷基苯酚的加成产物； 1-30摩尔的环氧乙烷与甘油的加成产物的C12/18-脂肪酸单酯和二酯；具有6-22个碳原子的饱和及不饱和脂肪酸的甘油单酯和二酯和脱水山梨糖醇单酯和二酯以及其环氧乙烷加成产物；在烷基基团中具有8-22个碳原子的烷基单糖苷和寡糖苷以及其乙氧基化类似物；15-60摩尔的环氧乙烷与蓖麻油和/或氢化蓖麻油的加成产物；多羟基化合物并且尤其聚甘油酯，如聚甘油聚蓖麻醇酸酯、聚甘油聚12-羟硬脂酸酯或聚甘油二聚亚油酸酯。同样合适的是来自这些物质组的两组或多组中的化合物的混合物； 2-15摩尔的环氧乙烷与蓖麻油和/或氢化蓖麻油的加成产物； 基于直链、支链、不饱和或饱和C6/22脂肪酸、蓖麻油酸和12-羟硬脂酸和丙三醇、聚甘油、季戊四醇、二季戊四醇、糖醇(例如山梨糖醇)、烷基葡糖苷(例如甲基葡糖苷、丁基葡糖苷、月桂基葡糖苷)和多葡糖苷(例如纤维素)的偏酯；单-、二-和三烷基磷酸酯和单-、二-和/或三-PEG烷基磷酸酯及其盐； 羊毛蜡醇； 聚硅氧烷-聚烷基聚醚共聚物和相应的衍生物； 如德国专利说明书1165574中季戊四醇、脂肪酸、柠檬酸和脂肪醇的混合酯和/或具有6-22个碳原子的脂肪酸、甲基葡萄糖和多羟基化合物、优选甘油或聚甘油以及聚烷撑二醇的混合酯。
此外，可以使用两性离子的表面活性剂作为乳化剂。两性离子表面活性剂是用来指在分子中携带至少一个季铵基和至少一个羧基或磺酸基的那些化合物的术语。特别合适的两性离子表面活性剂是所谓的甜菜碱，如N-烷基-N，N-二甲基甘氨酸铵，例如椰油烷基二甲基甘氨酸铵；N-酰胺基丙基-N，N-二甲基甘氨酸铵，例如椰油酰胺基丙基二甲基甘氨酸铵，和分别在烷基或酰基中具有8-18个碳原子的2-烷基-3-羧甲基-3-羟乙基咪唑啉，以及椰油酰胺基乙基羟乙基羧甲基甘氨酸盐。特别优选在CTFA名称椰油酰氨基丙基甜菜碱下已知的脂肪酸酰胺衍生物。
同样合适的乳化剂是两性表面活性剂。两性表面活性剂理解为意指这样的表面活性化合物，它们除了分子中的C8，18-烷基基或酰基之外，还包含至少一个游离氨基和至少一个-COOH-或-SO3H基团并且能够形成内盐。合适两性表面活性剂的实例是N-烷基甘氨酸、N-烷基甘丙酸、N-烷基氨基丁酸、N-烷基亚胺二丙酸、N-羟乙基-N-烷基酰胺基丙基甘氨酸、N-烷基牛黄酸、N-烷基肌氨酸、2-烷基氨基丙酸和烷基氨基乙酸，在每种情况下在烷基中具有约8-18个碳原子。
特别优选的两性表面活性剂是N-椰油烷氨基丙氨酸盐、椰油酰胺基乙基氨基丙氨酸盐和C12/18-酰基肌氨酸。除两性乳化剂之外，季铵型(quaternary)乳化剂也是合适的，优选那些酯季铵型(ester quat type)乳化剂，特别优选甲基季铵化二脂肪酸三乙醇胺酯盐。另外，可以使用的阴离子乳化剂是烷基醚硫酸盐、甘油一硫酸酯盐、脂肪酸硫酸酯、磺基琥珀酸酯和/或醚羧酸。
合适的油物质是基于具有6-18、优选8-10个碳原子的脂肪醇的格尔伯特醇类、直链C6-C22-脂肪酸与直链C6-C22-脂肪醇的酯、支链C6-C13羧酸与直链C6-C22-脂肪醇的酯、直链C6-C22-脂肪酸与支链醇尤其2-乙基己醇的酯、直链和/或支链脂肪酸与多元醇(如丙二醇、二聚二元醇(dimerdiol)或三聚三元醇(trimertriol))和/或格尔伯特醇类的酯、基于C6-C10脂肪酸甘油三酯、基于C6-C18-脂肪酸的液态甘油一-/二-、三酯混合物、C6-C22-脂肪醇和/或格尔伯特醇类与芳族羧酸尤其苯甲酸的酯、C2-C12-二羧酸与具有1-22个碳原子的直链或支链醇或具有2-10个碳原子和2-6个羟基的多羟基化合物的酯、植物油、支链伯醇、取代的环己烷、直链C6-C22脂肪醇碳酸酯、格尔伯特碳酸酯、苯甲酸与直链和/或支链C6-C22醇的酯(例如

TN)、二烷基醚、环氧化脂肪酸酯与多羟基化合物的开环产物、硅油和/或脂族烃或环烷烃。可以使用的油物质还有硅氧烷化合物，例如二甲基聚硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷、环状硅氧烷和室温可以处于液体形式或树脂形式的经氨基-、脂肪酸-、醇-、聚醚-、环氧-、氟-、烷基-和/或糖苷修饰的硅氧烷化合物。油物质可以在本发明的组合物中基于该组合物以1-90重量％，优选5-80重量％并且尤其10-50重量％的量存在。
可以与符合本发明和/或由本发明方法产生的结合角蛋白的效应分子一起使用的所述成分列表当然不应视为是穷尽或限制性的。所述成分可以单独地或彼此组合地使用。
本发明还提供在序列SEQ ID No168、176、182、188、194和200中显示的结合角蛋白的效应蛋白。
本发明同样提供根据SEQ ID No167、175、181、187、193和199的核酸分子和编码多肽的核酸分子，其中所述的多肽包含根据在SEQ ID No168、176、182、188、194和200中所示序列的至少一种多肽。
本发明还提供包含具有编码多肽的核酸序列的至少一个核酸分子的DNA表达盒，其中所述的多肽包含由根据SEQ ID No167、175、181、187、193或199中所示序列的核酸分子编码的至少一种多肽。根据本发明，优选包含具有根据SEQ ID No167中所示核酸序列的核酸分子的DNA表达盒。
优选地，本发明的这类构建体包含具体编码序列5′-上游的启动子和3′-下游的终止子序列以及根据需要还有其它惯用调节元件，它们分别与所述编码序列有效连接。
调节元件包括增强子、靶向性序列、多腺苷酸化信号、选择标记、扩增信号、复制起点等。合适的调节序列例如在Goeddel，Gene ExpressionTechnologyMethods in Enzymology 185，Academic Press，San Diego，CA(1990)中描述。
除了这些调节序列之外，这些序列的天然调节作用也可以存在于实际的结构基因之前，并且根据需要已经受到遗传修饰以至于这种天然调节作用已被关闭并且所述基因的表达已经增加。
优选的核酸构建体有利地还包含一个或更多个已经提及的与启动子功能性连接的＂增强子＂序列，这允许增加核酸序列的表达。在DNA序列的3’末端，还有可能插入额外的有利序列，如其它调节元件或终止子。
本发明的核酸可以以一个或更多个拷贝存在于构建体中。在构建体中，也可以存在根据需要用于对构建体选择的其它标记，如弥补抗生素抗性或营养缺陷型的基因。
对于本发明方法有利的调节序列例如存在于有利地用在革兰氏阴性细菌中的启动子，如cos、tac、trp、tet、trp-tet、Ipp、lac、Ipp、laclq-T7、T5、T3、gal、trc、ara、rhaP(rhaPBAD)SP6、λ-PR或imλ-P启动子。其它有利的调节序列存在于例如革兰氏阳性启动子amy和SP02中，存在于酵母或真菌启动子ADC1、MFα、AC、P-60、CYC1、GAPDH、TEF、rp28、ADH中。
还有可能使用用于调节的人工启动子。
为在宿主生物中表达，核酸构建体有利地插入允许该基因在宿主中最佳表达的载体，如质粒或噬菌体。除了质粒和噬菌体之外，载体也理解为意指本领域技术人员已知的全部其它载体，因此例如是病毒如SV40、CMV、杆状病毒和腺病毒、转座子、IS元件、噬菌粒、粘粒和线形或环状DNA以及农杆菌系统。
表达盒的产生可以使用本领域技术人员已知的惯用重组和克隆技术实现，如在例如Maniatis T，Fritsch EF和Sambrook J(1989)MolecularCloningA Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，ColdSpring Harbor(NY)、在Silhavy TJ，Berman ML和EnquistLW(1984)Experiments with Gene Fusions，Cold Spring HarborLaboratory，Cold Spring Harbor(NY)、在Ausubel FM等(1987)CurrentProtocols in Molecular Biology，Greene Publishing Assoc.and WileyInterscience中描述。然而在两个序列间还有可能安置具有例如带某些限制酶限制性位点的接头、信号肽或蛋白质锚状物(例如His标签)的功能的其它序列。序列的插入也可以导致融合蛋白的表达。优选地，由启动子与待表达核酸序列的连接构成的表达盒可以以整合方式在载体中存在并且例如通过转化插入细胞的基因组。插入载体的表达盒也可以在细胞中以染色体外方式存在并增殖。
除启动子之外，存在于本发明表达盒或载体中的核酸序列可以功能性地与其它遗传控制序列连接。术语遗传控制序列将在广义上理解并且意指对本发明表达盒的形成及功能有作用的全部那些序列。遗传控制序列调节例如原核及真核生物中的转录和翻译。优选地，本发明的表达盒包含待转基因表达的具体核酸序列5’-上游的启动子和3’-下游作为额外遗传控制序列的终止子序列以及根据需要还有其它惯用调节元件，它们分别与待转基因表达的核酸序列有效连接。
遗传控制序列还包含可以调节表达控制性特性其它启动子，启动子元件或最小启动子。原则上，有可能使用能够在优选生物中控制核酸分子的基因表达的具有其调节序列的全部天然启动子。此外，也可以有利地使用合成启动子。
此外，遗传控制序列还包含基因的5’-非翻译区、内含子或非编码3’区。例如，已经表明5’-非翻译序列可以增强异源基因的瞬时表达。
表达盒可以有利地还包含一个或更多个与启动子功能性连接的所谓＂增强子序列＂，这允许增加核酸序列的转基因表达。在待转基因表达的核酸序列的3’末端，还有可能插入额外的有利序列，如其它调节元件或终止子。待转基因表达的核酸序列可以以一个或更多个拷贝在基因构建体中存在。
此外，控制序列将理解为意指允许同源重组至和/或插入宿主生物基因组或允许从基因组中移出的那些控制序列。在同源重组的情况下，例如特定基因的天然启动子可以与具有其它特性的启动子交换。
表达盒和从其中衍生的载体可以包含其它功能性元件.术语功能性元件将在广义上理解并且意指对本发明的表达盒、载体或转基因生物的产生、复制及功能有作用的全部那些元件。可以提及以下非限制性实例 a)选择标记为成功选择转化细胞，通常需要额外地导入可以赋予成功选择转化的细胞对杀生物药剂(例如除草剂)、代谢抑制物或抗生素抵抗的可选择标记。该选择标记允许区别转化细胞与未转化细胞并且将所需的宿主生物加以单独地选择并且是本领域技术人员完全已知的。选择标记赋予例如对代谢抑制物如2-脱氧葡萄糖-6-磷酸(WO 98/45456)、抗生素或杀生物药剂、优选除草剂如对卡那霉素，G 418，博来霉素，潮霉素或卡那霉素等的抗性。作为选择标记，优选赋予对抗生素apectinomycin抗性的aasa基因、赋予对链霉素抗性的链霉素磷酸转移酶(SPT)基因、赋予对卡那霉素或遗传霉素(geneticidin)抗性的新霉素磷酸转移酶(NPTII)基因、赋予对潮霉素抗性的潮霉素磷酸转移酶(HPT)基因、赋予对磺酰脲类除草剂抗性的乙酰乳酸合酶基因(ALS)(例如具有如突变S4和/或Hra的突变性ALS变体)。
b)编码可轻易定量性蛋白质或通过固有颜色或酶活性确保评估转化效率或表达部位或时间的报道基因。本文非常特别优选报道蛋白(Schenborn E，Groskreutz D.Mol Biotechnol.1999；13(1)29-44)如“绿色荧光蛋白”(GFP)(Sheen等(1995)Plant Journal 8(5)777-784；Haseloff等(1997)Proc Natl Acad Sci USA 94(6)2122-2127；Reichel等(1996)Proc Natl Acad Sci USA 93(12)5888-5893；Tian等(1997)PlantCell Rep 16267-271；WO 97/41228；Chui WL等(1996)Curr Biol6325-330；Leffel SM等(1997)BioTechniques.23(5)912-8)、氯霉素转移酶、萤光素酶(Ow等(1986)Science 234856-859；Millar等(1992)PlantMol Biol Rep 10324-414)、水母发光蛋白基因(Prasher等(1985)Biochem Biophys Res Commun 126(3)1259-1268)、β-半乳葡糖苷酶。
c)确保本发明的表达盒或载体在例如大肠杆菌中复制的复制起点。通过举例方式，可以提及ORI(DNA复制的起点)、pBR322 ori或P15A ori(Sambrook等Molecular Cloning.A Laboratory Manual，第二版.Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，1989)。
将本发明的表达盒插入细胞或生物可以有利地使用其中存在该表达盒的载体而实现。可以将表达盒通过合适的限制性位点插入载体(例如质粒)。产生的质粒最初导入大肠杆菌。选择、收获正确转化的大肠杆菌并且重组质粒使用本领域技术人员熟悉的方法获得。限制性分析和测序也可以起到检验克隆步骤的作用。
本发明同样提供包含表达盒的载体，其中所述的表达盒包含具有根据在序列SEQ ID No167、175、181、187、193或199中所示核酸序列的核酸分子。
为在宿主生物中表达，核酸构建体有利地插入允许该基因在宿主中最佳表达的载体，如质粒或噬菌体。除了质粒和噬菌体之外，载体也理解为意指本领域技术人员已知的全部其它载体，因此例如是病毒如SV40、CMV、杆状病毒和腺病毒、转座子、IS元件、噬菌粒、粘粒和线形或环状DNA以及还有农杆菌系统。
这些载体可以在宿主内自主复制或染色体外地复制。这些载体代表本发明的又一个实施方案。合适质粒例如是在大肠杆菌中的pLG338、pQE30、pACYC184、pBR322、pUC18、pUC19、pKC30、pRep4、pHS1、pKK223-3、pDHE19.2、pHS2、pPLc236、pMBL24、pLG200、pUR290、pIN-III＂3-B1、tgt11或pBdCI、在链霉菌(Streptomyce)中的plJ101、pIJ364、plJ702或plJ361、在芽孢杆菌(Bacillus)中的pUB110、pC194、pWH320、pMM1520、pMM1525或pBD214、在棒状杆菌(Corynebacterium)中的pSA77或pAJ667、在真菌中的pALS1、plL2或pBB116、在酵母中的2α、pAG-1、YEp6、YEp13或pEMBLYe23或在植物中的pLGV23、pGHlac+、pBIN19、pAK2004或pDH51。所述的质粒代表可能质粒的一小部分选择。其它质粒是本领域技术人员已知的并且可以例如在书籍《Cloning Vectors》(编者Pouwels P.H.等Elsevier、Amsterdam-New York-Oxford、1985、ISBN 0 444 904018)中找到。
包含本发明核酸分子的本发明核酸构建体据或载体也可以有利地以线形DNA形式导入微生物或通过异源或同源重组整合至宿主生物基因组中。这种线形DNA可以由线性化载体如质粒构成或仅由本发明的核酸构建体或核酸构成。
为异源基因在生物中的最佳表达，有利的是修饰核酸序列以与该生物中所用的特定＂密码子使用频率＂对应。＂密码子使用频率＂可以使用所讨论生物的其它已知基因的计算机评估(例如通过从国际DNA序列数据库概括的密码子使用频率2000年现状。Nakamura，Y.，Gojobori，T.和Ikemura，T.(2000)Nucl.Acids Res.28，292.，http://www.kazusa.or.jp/codon/index.html)轻易地确定。
为在合适宿主生物中表达，重组核酸构建体或基因构建体有利地插入允许该基因在宿主中最佳表达的宿主特异性载体。载体是本领域技术人员充分已知的并且可以例如在书籍《Cloning Vectors》(编者Pouwels P.H.等Elsevier，Amsterdam-New York-Oxford，1985，ISBN 0 444 904018)中找到。
借助本发明的载体，有可能制备例如用至少一种本发明的载体转化并且可以使用于产生本发明多肽的重组微生物。本发明的重组构建体有利地插入合适的宿主系统并得到表达。本文中，优选使用本领域技术人员已知的惯用克隆及转染方法，如共沉淀、原生质体融合、电穿孔、逆转录病毒转染等，旨在引起所述核酸在特定表达系统中表达。合适的系统例如在Current Protocols in Molecular Biology，F.Ausubel等编辑，WileyInterscience，New York 1997或Sambrook等Molecular CloningALaboratory Manual.第二版，Cold Spring Harbor Laboratory，ColdSpring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，1989中描述。
根据本发明，还有可能制备同源重组微生物。为此目的，制备了其中包含本发明基因的至少一部分或编码序列的至少一部分的载体，在所述的部分中根据需要已经导入至少一个氨基酸缺失、添加或置换以便修饰，例如功能性地破坏本发明的序列(＂敲除＂载体)。插入的序列还可以例如是来自相关微生物的同源物或衍生自哺乳动物源、酵母源或昆虫源。可以备选地设计用于同源重组的载体以至于内源性基因在同源重组期间以某种方式受到突变或修饰，但是仍编码功能性蛋白质(例如若上游区域可以按照如此方式修饰以至于因而改变内源性蛋白质的表达)。本发明基因的修饰部分位于同源重组载体中。构建用于同源重组的合适载体例如在Thomas，K.R.和Capecchi，M.R.(1987)Cell 51503中描述。
适用于本发明核酸或核酸构建体的转基因重组宿主生物原则上是全部原核生物(包括古细菌)或真核生物。尤其包括嗜盐菌和甲烷球菌纲的细菌、真菌、昆虫细胞、植物细胞和哺乳动物细胞。所用的宿主生物使用有利地是微生物如细菌、真菌或酵母。可以有利地使用真菌、革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌、优选肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、假单胞菌科(Pseudomonadaceae)、根瘤菌科(Rhizobiaceae)、链霉菌科(Streptomycetaceae)或诺卡氏菌科(Nocardiaceae)的细菌，特别优选埃希氏菌属(Escherichia)、假单胞菌属(Pseudomonas)、链霉菌属(Streptomyces)、诺卡氏菌属(Nocardia)、伯克霍尔德氏菌属(Burkholderia)、沙门氏菌属(Salmonella)、农杆菌属(Agrobacterium)或红球菌属(Rhodococcus)的细菌。最优选大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、假单孢菌、乳酸杆菌、多形汉逊酵母、米曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、毕赤巴斯德酵母、里氏木霉和SF9细胞(或相关细胞)。
用于产生本发明的结合角蛋白的效应蛋白的生物以本领域技术人员已知的方式培育或培养，取决于宿主生物。微生物通常在液体培养基，在0°C和100℃间、优选在10℃至60℃间的温度氧气下培育，其中所述的包含液体培养基最常见形式是糖的碳源、最常见形式是有机氮源如酵母提取物或盐如硫酸铵的氮源、微量元素如铁盐、锰盐和镁盐以及(根据需要)维生素。在本文中，营养液的pH可以保持在固定值上，即在培养期间加以调节或不调节。培养可以分批式、半分批式和连续式的。营养物可以最初在发酵开始时导入或在此后半连续地或连续地送入。酶可以从该生物中通过实施例中描述的方法进行分离或作为反应的粗提物使用。
多肽还可以因此根据需要工业规模地产生。重组微生物可以通过已知方法培育和发酵。细菌可以例如在TB或LB培养基中及在20℃-40℃温度和6-9 pH上繁殖。具体地，合适的培养条件例如在T.Maniatis，E.F.Fritsch和J.Sambrook，Molecular CloningA Laboratory Manual，ColdSpring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，NY(1989)中描述。
破碎和纯化 若多肽不分泌至培养基中，则将细胞破碎并且产物通过已知的蛋白质分离方法从裂解物中获得。细胞可以按照所需通过高频超声波、通过高压如在法式(French)压力室中、通过渗透裂解、通过去垢剂、裂解酶或有机溶剂的作用、通过均化器或通过组合两种或多种所列的方法加以破碎。
多肽的纯化可以使用已知层析方法如分子筛层析(凝胶过滤)如Q-琼脂糖凝胶层析、离子交换层析和疏水层析并且还用其它常用方法如超滤、结晶、盐析、透析和天然凝胶电泳而实现。合适的方法例如在Cooper，F.G.，Biochemische Arbeits Methoden[Biochemical working Methods]，VerlagWater de Gruyter，Berlin，New York或在Scopes，R.，Protein Purification，Springer Verlag，New York，Heidelberg，Berlin中描述。
对分离重组蛋白可以有利的是使用这样的载体系统或寡核苷酸，其通过某些核苷酸序列而延长cDNA，因而编码发挥例如更容易纯化的作用的修饰多肽或融合蛋白。此类合适的修饰例如是发挥锚状物作用的所谓＂标签＂，如已知为六个组氨酸锚的修饰，或作为抗原可以由抗体识别的表位(例如在Harlow，E.和Lane，D.，1988，AntibodisA Laboratory Manual.ColdSpring Harbor(N.Y.)Press中描述)。其它合适的标签例如是HA、钙调蛋白-BD、GST、MBD；壳多糖-BD、链霉亲和素-BD-Avi标签、Flag标签、T7等。这些锚状物可以起到将蛋白质连接到固定支持物如聚合物基质上的作用，其中固定基质可以送入例如层析柱，或可以在微量滴定平板或另一种支持物上使用。相应纯化方法可从商业化亲和标签供应商处得到。
本发明的结合角蛋白的效应蛋白在其融合形式即与其融合伴侣部分在一起，和在分离形式下均具有结合角蛋白的蛋白质的所需特性。本发明的蛋白质因此可以直接作为融合蛋白使用或在切除并分离融合伴侣后作为“纯的”结合角蛋白的蛋白质使用。
如需要分离融合伴侣，建议将有效的切割位点(蛋白酶的特异性识别位点)在结合角蛋白的蛋白质部分与和融合伴侣部分之间并入融合蛋白。合适的切割位点尤其是在结合角蛋白的蛋白质部分和融合伴侣部分中均不存在的那些肽序列，这些肽序列可以使用生物信息学工具轻易确定。特别是适合的例如是BrCN对甲硫氨酸的切割或用因子Xa、肠激酶、凝血酶的蛋白酶介导性切割、TEV切割(烟草蚀纹病毒蛋白酶)。
此外，本发明提供转基因细胞，包含 v)至少一种以上提及的载体，或 w)至少一种以上提及的表达盒，或 x)至少一种以上提及的编码多肽的核酸分子，其中所述的多肽包含由根据SEQ ID No167、175、181、187、193或199中所示序列的核酸分子编码的至少一种多肽。
优选地，，细胞(见上文)或生物(见上文)是转基因细胞或生物，其已经用根据SEQ ID No167、175、181、187、193或199中所示序列的至少一个核酸分子转化。
特别优选的转基因生物是大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、米曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、毕赤巴斯德酵母、假单孢菌、乳酸杆菌、多形汉逊酵母、里氏木霉和SF9细胞(或相关细胞)。
序列 SEQ ID序列 NO类型序列说明 1 核酸智人(Homo sapiens)桥粒斑蛋白_登录号NM_004415 2 蛋白质 智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415 3 核酸智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415结构域B 4 蛋白质 智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415结构域B 5 核酸智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415结构域 B-1 6 蛋白质 智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415结构域 B-1 7 核酸智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415结构域 B-2 8 蛋白质 智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415结构域 B-2 9 核酸智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415结构域 C 10 蛋白质 智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415结构域 C 11 核酸智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415结构域 C-1 12 蛋白质 智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415结构域 C-1 13 核酸智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415结构域 C-2 14 蛋白质 智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415结构域 C-2 15 核酸智人_聚丝蛋白_登录号CAI19595 16 蛋白质 智人_聚丝蛋白_登录号CAI19596 17 核酸智人亲斑蛋白1登录号NM_001005337，转录物变体 1a 18 蛋白质 智人亲斑蛋白1登录号NM_001005337，转录物变体 1a 19 核酸智人亲斑蛋白1登录号NM_000299，转录物变体 1b 20 蛋白质 智人亲斑蛋白1登录号NM_000299，转录物变体 1b 小家鼠(Mus musculus)亲斑蛋白2登录号NM_026163 21 核酸NM_027894 22 蛋白质 小家鼠亲斑蛋白2登录号NM_026163NM_027895 23 核酸小家鼠亲斑蛋白1登录号NM_019645 24 蛋白质 小家鼠亲斑蛋白1登录号NM_019646 普通牛(Bos taurus)亲斑蛋白1部分mRNA，登录号 25 核酸XM_868348 26 蛋白质 普通牛亲斑蛋白1部分mRNA，登录号XM_868349 家犬(Canis familiaris)与相似亲斑蛋白1同种型1a，登录号 27 核酸XM_851528 28 蛋白质 家犬，与相似亲斑蛋白1同种型1a，登录号XM_851529 29 核酸 斑马鱼(Danio rerio)，与亲斑蛋白1相似，登录号XM_695832 30 蛋白质 斑马鱼与亲斑蛋白1相似，登录号XM_695833褐家鼠(Rattus norvegicus)，与亲斑蛋白1相似，登录号 31 核酸 XM_222666 32 蛋白质 褐家鼠与亲斑蛋白1相似，登录号XM_222667黑猩猩(Pan troglodytes)，与亲斑蛋白1相似，登录号 33 核酸 XM_514091 34 蛋白质 黑猩猩与亲斑蛋白1相似，登录号XM_514092 35 核酸 原鸡(Gallus gallus)，与亲斑蛋白1相似，登录号XM_419240 36 蛋白质 原鸡，与亲斑蛋白1相似，登录号XM_419241非洲爪蟾(Xenopus laevis)，与亲斑蛋白4相似，登录号 37 核酸 BI390496 38 蛋白质 非洲爪蟾，与亲斑蛋白4相似，登录号BI390497 39 核酸 智人桥粒斑蛋白，转录物变体2，登录号NM_001008844 40 蛋白质 智人桥粒斑蛋白，转录物变体2，登录号NM_001008845 41 核酸 小家鼠桥粒斑蛋白，登录号XM_621314 42 蛋白质 小家鼠桥粒斑蛋白，登录号XM_621315褐家鼠(Rattus norvegicus)，与桥粒斑蛋白同种型II相似，登 43 核酸 录号XM_225259 44 蛋白质 褐家鼠，与桥粒斑蛋白同种型II相似，登录号XM_225260 45 核酸 黑猩猩桥粒斑蛋白，登录号XM_518227 46 蛋白质 黑猩猩桥粒斑蛋白，登录号XM_518228 47 核酸 原鸡，与桥粒斑蛋白相似，登录号XM_418957 48 蛋白质 原鸡，与桥粒斑蛋白相似，登录号XM_418958 49 核酸 智人接头斑珠蛋白(JUP)，转录物变体2，登录号NM_021991 50 蛋白质 智人接头斑珠蛋白(JUP)，转录物变体2，登录号NM_021992 51 核酸 小家鼠，斑珠蛋白；γ-联蛋白，登录号NM_010593 52 蛋白质 小家鼠，斑珠蛋白；γ-联蛋白，登录号NM_010594 53 核酸褐家鼠γ-联蛋白(斑珠蛋白)，登录号NM_031047 54 蛋白质 褐家鼠γ-联蛋白(斑珠蛋白)，登录号NM_031048 55 核酸斑马鱼犰狳蛋白家族；斑珠蛋白，登录号NM_131177 56 蛋白质 斑马鱼犰狳蛋白家族；斑珠蛋白，登录号NM_131178 热带爪蟾(Xenopus tropicalis)接头斑珠蛋白，登录号 57 核酸BC064717 58 蛋白质 热带爪蟾接头斑珠蛋白，登录号BC064718 59 核酸家犬，与接头斑珠蛋白同种型10相似，登录号XM_856625 60 蛋白质 家犬，与接头斑珠蛋白同种型10相似，登录号XM_856626 61 核酸非洲爪蟾Jup蛋白质，登录号BC094116 62 蛋白质 非洲爪蟾Jup蛋白质，登录号BC094117 63 核酸普通牛接头斑珠蛋白，登录号NM_001004024 64 蛋白质 普通牛接头斑珠蛋白，登录号NM_001004025 65 核酸野猪(Sus scrofa)斑珠蛋白，登录号NM_214323 66 蛋白质 野猪斑珠蛋白，登录号NM_214324 67 核酸斑马鱼接头斑珠蛋白，登录号BC058305 68 蛋白质 斑马鱼接头斑珠蛋白，登录号BC058306 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，斑珠蛋白/犰狳蛋白/β- 69 核酸联蛋白，登录号AF005267 70 蛋白质 酿酒酵母，斑珠蛋白/犰狳蛋白/β-联蛋白，登录号AF005268 71 核酸智人网蛋白1，中间丝缔合蛋白，登录号NM_201380 72 蛋白质 智人网蛋白1，中间丝缔合蛋白，登录号NM_201381 小家鼠网蛋白1(Plec1)，转录物变体11，mRNA，登录号 73 核酸NM_201394 XM 小家鼠网蛋白1(Plec1)，转录物变体11，mRNA，登录号 74 蛋白质 NM_201394 XM 普通牛，与网蛋白1同种型1(LOC510991)相似，登录号 75 核酸XM_588232 普通牛，与网蛋白1同种型1(LOC510991)相似，登录号 76 蛋白质 XM_588233 77 核酸家犬，与网蛋白1同种型相似，登录号XM_539204 78 蛋白质 家犬，与网蛋白1同种型相似，登录号XM_539205 克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)，网蛋白样蛋白，登录号 79 核酸XM_809849 80 蛋白质 克氏锥虫，网蛋白样蛋白，登录号XM_809850 81 核酸褐家鼠网蛋白，登录号X59601 82 蛋白质 褐家鼠网蛋白，登录号X59602 83 核酸黑线仓鼠(Cricetulus griseus)网蛋白，登录号AF260753 84 蛋白质 黑线仓鼠网蛋白，登录号AF260754 85 核酸智人斑周蛋白，登录号NM_002705 86 蛋白质 智人斑周蛋白，登录号NM_002706 87 核酸小家鼠斑周蛋白，登录号NM_008909XM_358905 88 蛋白质 小家鼠斑周蛋白，登录号NM_008909XM_358906 89 核酸智人外被斑蛋白，登录号NM_001988 90 蛋白质 智人外被斑蛋白，登录号NM_001989 91 核酸小家鼠外被斑蛋白，登录号NM_025276XM_283024 92 蛋白质 小家鼠外被斑蛋白，登录号NM_025276XM_283025 93 核酸普通牛，与外被斑蛋白相似，登录号XM_587641 94 蛋白质 普通牛，与外被斑蛋白相似，登录号XM_587642 95 核酸家犬，与外被斑蛋白相似，登录号XM_540443 96 蛋白质 家犬，与外被斑蛋白相似，登录号XM_540444 97 核酸斑马鱼，与外被斑蛋白相似，登录号XM_687958 98 蛋白质 斑马鱼，与外被斑蛋白相似，登录号XM_687959 99 核酸 褐家鼠，与外被斑蛋白相似，db_xref基因ID303687 100 蛋白质 褐家鼠，与外被斑蛋白相似，db_xref基因ID303688 101 核酸 黑猩猩，与外被斑蛋白相似，登录号XM_511692 102 蛋白质 黑猩猩，与外被斑蛋白相似，登录号XM_511693 103 核酸 人大疱性类天疱疮抗原，登录号M63618 104 蛋白质 人大疱性类天疱疮抗原，登录号M63619 105 核酸 小家鼠大疱性类天疱疮抗原1(Bpag1)，登录号AF396877 106 蛋白质 小家鼠大疱性类天疱疮抗原1(Bpag1)，登录号AF396878 107 核酸 小家鼠毛透明蛋白样1，登录号NM_027762 108 蛋白质 小家鼠毛透明蛋白样1，登录号NM_027763 109 核酸 普通牛，与毛透明蛋白样1相似，登录号XM_597026 110 蛋白质 普通牛，与毛透明蛋白样1相似，登录号XM_597027 111 核酸 智人毛透明蛋白样1，登录号NM_001008536XM_060104 112 蛋白质 智人毛透明蛋白样1，登录号NM_001008536XM_060105 紫球海胆(Strongylocentrotus purpuratus)，与毛透明蛋白相 113 核酸 似，登录号XM_793822 114 蛋白质 紫球海胆，与毛透明蛋白相似，登录号XM_793823 115 核酸 克氏锥虫，推测性毛透明蛋白，登录号XM_809758 116 蛋白质 克氏锥虫，推测性毛透明蛋白，登录号XM_809759 蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)ATCC 50803毛透明蛋白， 117 核酸 登录号XM_765825 蓝氏贾第鞭毛虫ATCC 50803毛透明蛋白，登录号 118 蛋白质 XM_765826 烟曲霉(Giardia lamblia)Af293，毛透明蛋白，登录号 119 核酸 XM_748643 120 蛋白质 烟曲霉Af293，毛透明蛋白，登录号XM_748644 121 核酸 穴兔(O.cuniculus)毛透明蛋白，登录号Z19092 122 蛋白质 穴兔毛透明蛋白，登录号Z19093 123 核酸黑猩猩，与毛透明蛋白相似，登录号XM_526770 124 蛋白质 黑猩猩，与毛透明蛋白相似，登录号XM_526771 125 核酸人毛透明蛋白(TRHY)，登录号L09190 126 蛋白质 人毛透明蛋白(TRHY)，登录号L09191 127 核酸小家鼠脯氨酸丰富小蛋白3，登录号NM_011478 128 蛋白质 小家鼠脯氨酸丰富小蛋白3，登录号NM_011479 129 核酸智人脯氨酸丰富小蛋白2B(SPRR2B)，登录号NM_001017418 130 蛋白质 智人脯氨酸丰富小蛋白2B(SPRR2B)，登录号NM_001017419 131 核酸小家鼠毛囊蛋白质AHF，登录号XM_485271 132 蛋白质 小家鼠毛囊蛋白质AHF，登录号XM_485272 133 核酸智人表皮斑蛋白1(EPPK1)，登录号NM_031308XM_372063 134 蛋白质 智人表皮斑蛋白1(EPPK1)，登录号NM_031308XM_372064 135 核酸小家鼠表皮斑蛋白1，登录号NM_144848NM_173025 136 蛋白质 小家鼠表皮斑蛋白1，登录号NM_144848NM_173026 137 核酸小家鼠结构蛋白FBF1，登录号AF241249 138 蛋白质 小家鼠结构蛋白FBF1，登录号AF241250 变异链球菌(Streptococcus mutans)抗原I/II的spaP基因， 139 核酸登录号X17390 140 蛋白质 变异链球菌抗原I/II的spaP基因，登录号X17391 141 核酸PCR引物Bag 43的序列 142 核酸PCR引物Bag 44的序列 143 核酸PCR引物Bag 53的序列 144 核酸PCR引物Bag 51的序列 145 核酸PCR引物Lib197的序列 146 核酸PCR引物Lib198的序列 147 核酸使用PCR-引物Lib197(SEQ ID No145)和Lib198(SEQ ID No146)诱变的根据SEQ ID NoID3的序列的变体 148 核酸PCR引物的序列Lib201 149 核酸PCR引物的序列Lib202 编码来自十字园蛛的蜘蛛丝蛋白ADF-4C的C16结构体 150 核酸(module)的核酸 151 蛋白质 核酸分子SEQ ID No150的翻译产物 根据SEQ ID NoID3的序列的变体；通过PCR Lib151(SEQ 152 核酸ID No154)和Lib152(SEQ ID No155)扩增的DNA片段； 153 蛋白质 核酸分子SEQ ID No152的翻译产物 154 核酸PCR引物Lib151的序列 155 核酸PCR引物Lib152的序列 156 蛋白质 KBD-B_智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415结构域 B-3 157 蛋白质 KBD-B_智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415结构域 B-4 158 蛋白质 KBD-B_智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415结构域 B-5 159 核酸KBD-B_智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415结构域 B-6 160 蛋白质 KBD-B_智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415结构域 B-6 161 核酸智人多毛蛋白，BC004285 162 蛋白质 智人多毛蛋白，BC004285 智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415，与SEQ ID NoID 1 163 核酸相比具有核酸交换 智人桥粒斑蛋白登录号NM_004415，与SEQ ID NoID 1 164 蛋白质 相比在位置905、2687和2688处存在氨基酸交换交换 165 核酸KBD-B_智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415结构域 B-7 166 蛋白质 KBD-B_智人桥粒斑蛋白_登录号NM_004415结构域 B-7 编码来自十字园蛛的蜘蛛丝蛋白ADF-4C中C16结构体(SEQ ID No150)与编码KBD-B蛋白质的核酸分子(SEQ ID No 167 核酸147)融合的嵌合核酸分子 168 蛋白质 SEQ ID No167的嵌合翻译产物 169 核酸 PCR引物pLib199的序列 170 核酸 PCR引物pLib 200的序列来自家蚕的类胡萝卜素结合蛋白(CBP)(Swiss prot. 171 核酸 Q8MYA9_BOMMO)的核酸分子来自家蚕编码性基因的核酸分子SEQ ID No171 CBP的的 172 蛋白质 翻译产物 173 核酸 PCR引物HRe1的序列 174 核酸 PCR引物HRe2的序列与编码KBD-B蛋白质(SEQ ID.No166)的核酸分子(SEQ IDNo165)融合的编码CBP蛋白质(SEQ ID.No172)的嵌合核 175 核酸 酸分子 176 蛋白质 根据SEQ ID No175核酸分子的翻译产物 177 核酸 PCR引物Lib 212的序列 178 核酸 PCR引物Lib219的序列编码来自大肠杆菌的金属结合蛋白(ZntA)登录号NP_417926 179 核酸 的核酸分子 180 蛋白质 根据SEQ ID No179的核酸分子的翻译产物与编码KBD-B蛋白质(SEQ ID.No166)的核酸分子(SEQ IDNo165)融合的编码来自大肠杆菌的金属结合蛋白 181 核酸 (ZntA)(SEQ ID.No179)的嵌合核酸分子 182 蛋白质 根据SEQ ID No181的核酸分子的翻译产物 183 核酸 PCR引物Bag 102的序列 184 核酸 PCR引物Bag 103的序列编码来自大肠杆菌的(trxA)硫氧还蛋白基因登录号 185 核酸 NP_417926的核酸分子(登录号EG1103) 186 蛋白质 根据SEQ ID No185的核酸分子的翻译产物与编码KBD-B蛋白质(SEQ ID.No166)的核酸分子(SEQ IDNo165)融合的编码来自载体pThioHisC(SEQ ID.No185)的 187 核酸 硫氧还蛋白片段(SEQ ID.No185)的嵌合核酸分子 188 蛋白质 根据SEQ ID No187的核酸分子的翻译产物 189 核酸 PCR引物Bag 89的序列 190 核酸 PCR引物Bag 90的序列 191 核酸 编码来自载体pEGFP-1(Clontech)的eGFP片段的核酸分子 192 蛋白质 根据SEQ ID No191的核酸分子的翻译产物与编码KBD-B蛋白质(SEQ ID.No166)的核酸分子(SEQ IDNo165)融合的编码来自载体pEGFP-1(Clontech)的eGFP片 193 核酸 段(SEQ ID.No191)的嵌合核酸分子 194 蛋白质 根据SEQ ID No193的核酸分子的翻译产物 195 核酸 PCR引物Bag 93的序列 196 核酸 PCR引物Bag 94的序列编码来自载体pDX14(OmniGene Bioproducts)(登录号 197 核酸 BG10075)的YaaD片段的核酸分子 198 蛋白质 根据SEQ ID No197的核酸分子的翻译产物与编码KBD-B蛋白质(SEQ ID.No166)的核酸分子(SEQ IDNo165)融合的编码来自载体pDX14(OmniGene 199 核酸 Bioproducts)的YaaD片段(SEQ ID.No197)的嵌合核酸分子 200 蛋白质 根据SEQ ID No199的核酸分子的翻译产物 201 蛋白质 来自十字园蛛的AAC47011丝心蛋白 202 蛋白质 来自络新妇蛛登录号AY855102的丝蛋白 203 蛋白质 来自猫脸蛛登录号AY855101的丝蛋白 204 蛋白质 来自猫脸蛛登录号AY855100的丝蛋白 205 蛋白质 来自金蛛登录号AY855099的丝蛋白 206 蛋白质 来自金蛛登录号AY855098的丝蛋白 207 蛋白质 合成构建体蜘蛛丝蛋白样蛋白质(SF1)；登录号DQ001900 208 蛋白质 来自棒络新妇蛛登录号U37520的丝蛋白 209 蛋白质 合成构建体RGD-蜘蛛牵丝蛋白基因；登录号DQ186903来自黑寡妇蛛(Latrodectus Hesperus)登录号AY994149的 210 蛋白质 丝蛋白 211 蛋白质 来自家蚕登录号S78369的天蚕抗菌肽＝昆虫抗细菌蛋白具有氨基端组氨酸锚的KBD-D，智人亲斑蛋白1a登录号 212 核酸 NM_001005337具有氨基端组氨酸锚的KBD-D，智人亲斑蛋白1a登录号 213 蛋白质 NP_001005337具有羧基端组氨酸锚的KBD-D氨基酸1-273，智人亲斑蛋白 214 核酸 1a登录号NM_001005337具有羧基端组氨酸锚的KBD-D氨基酸1-273，智人亲斑蛋白 215 蛋白质 1a登录号NP_001005337 216 核酸 PCR引物HRe6的序列 217 核酸 PCR引物HRe9的序列 218 核酸 PCR引物HRe7的序列 219 核酸 PCR引物HRe8的序列 220 核酸 PCR引物HRe26的序列 221 核酸 PCR引物HRe27的序列嵌合核酸分子，其由与编码KBD-B蛋白质(SEQ ID No166)的核酸分子(SEQ ID No165)融合的编码CBP蛋白质(SEQID No172)的核酸分子(SEQ ID No171)以及突变的接头序 222 核酸 列构成 223 蛋白质 根据SEQ ID No222的核酸分子；核酸分子SEQ ID.No222的诱变的接头序列； 224 蛋白质 核酸分子SEQ ID No165与171之间的连接序列的翻译产物； 蛋白质序列GGTGGSELE至GGTGGSGGG的突变 225 核酸PCR引物Lib 230的序列 226 核酸PCR引物Lib 231的序列 嵌合核酸分子，其编码与来自十字园蛛的蜘蛛丝蛋白ADF-4C 的C16结构体(module)(SEQ ID No150)融合的KBD-B蛋 227 核酸白质(SEQ ID No166))融合 228 蛋白质 SEQ ID No227的嵌合翻译产物 229 核酸快速改变PCR引物HRe22的序列 230 核酸快速改变PCR引物HRe23的序列 实验性实施例 公开以下实施例以便说明本发明优选的实施方案。这些实施例将不视为穷尽或限制本发明的主题。
在实验描述中，使用以下缩略语 (2-氨基-2-甲基丙醇)AMP、(摄氏度)℃、(乙二胺四乙酸)EDTA、(位阻胺稳定剂)HA、(1，1-二氟乙烷)HFC 152、(化妆品成分的国际命名)INCI、(毫升)ml、(分钟)min、(水包油)油/水、(聚乙二醇)PEG-25、(对氨基苯甲酸)PABA、(每百万份)ppm、(适量)q.s.、(乙烯基吡咯烷酮)VP、(油包水)水/油、(有效成分)AI、(聚乙烯吡咯烷酮)PVP、(角蛋白结合结构域)KBD、(人桥粒斑蛋白的角蛋白结合结构域B)KBD-B、(人桥粒斑蛋白的角蛋白结合结构域C)KBD-C、(如在说明书中所解释的具有效应蛋白/肽的KBD的构建体，其中连接可以因化学反应而产生或已经直接产生作为融合蛋白(例如通过翻译融合DNA构建体在宿主生物中的表达)融合蛋白-KBD、(人亲斑蛋白的角蛋白结合结构域D)KBD-D。
实施例1表达载体和生产菌株 多种表达载体测试用于表达角蛋白结合结构域(KBD)。为此，使用多种启动子(例如IPTG诱导型，鼠李糖诱导型、阿拉伯糖诱导型、甲醇诱导型、组成型启动子等)。同样测试了其中KBD表达为融合蛋白(例如当与C16蜘蛛丝蛋白[Huemmerich等；2004，蜘蛛牵引丝的主要结构元件及其对蛋白质溶解度的贡献；Biochemistry 4313604-13612](以下也称作C16)、硫氧还蛋白或eGFP或YaaD[枯草芽孢杆菌，SWISS-PROTP37527，PDX1]、或类胡萝卜素结合性蛋白[家蚕，SWISS-PROTQ8MYA9](以下也称作CBP)、或金属结合蛋白ZntA[大肠杆菌，SWISS-PROTP37617])等融合时)的构建体。本文中，所述的KBD-B(角蛋白结合结构域B，SEQ IDNo4)和KBD-C(角蛋白结合结构域C，SEQ ID No10)和这两个结构域KBD-BC的组合均使用多种表达系统进行表达。所提及的载体构建体对于权利要求书是非限制性的。
代表性地给出作为实例的是IPTG诱导型载体pQE30-KBD-B(

图1)、pLib076(图2)和pRee017(图4)和pLib072(图5)的载体图。用于KBD-C的方法也可以类似用于所述的载体构建和表达。
为表达KBD，使用多种生产宿主，如大肠杆菌(E.Coli)菌株(见实施例2；例如XL10-Gold[Stratagene]、BL21-CodonPlus[Stratagene]和其它菌株)。不过，还使用了其它细菌性生产宿主如巨大芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌。当KBD在巨大芽孢杆菌中表达的情况下，开展与“Barg，H.，Malten，M.& Jahn，D.(2005)在巨大芽孢杆菌中的蛋白质和维生素生产”类似的方法。在Methods in Biotechnology-Microbial Products andBiotransformations(Barredo，J.-L.编辑，205-224)。
使用的真菌性生产菌株是巴斯德毕赤酵母(例如GS115和KM71[二者均来自Invitrogen]；和其它菌株)和构巢曲霉(例如RMS011[Stringer，MA，Dean，RA，SEwall，TC，Timberlake，WE(1991)Rodletless，通过直接基因活化而诱导的新型曲霉发育性突变体.Genes Dev 51161-1171]和SRF200[Karos，M，Fischer，R(1999)对构巢曲霉的一种进化高度保守性和高表达的蛋白质HymA的分子表征。Mol Genet Genomics 260510-521]和菌株)。不过，还有可能使用其它真菌性生产宿主如黑曲霉(KBD表达与EP 0635574A1和/或WO 98/46772类似)用于KBD表达。
实施例2在大肠杆菌菌株中用IPTG诱导型启动子例如通过表达质粒pQE30-KBD-B表达KBD 为了表达，使用多种生产宿主，如多种大肠杆菌菌株(例如XL10-Gold[Stratagene]、BL21-CodonPlus[Stratagene]和其它菌株)、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等。
代表性地作为实例，在此处中描述了克隆并且通过用pQE30-KBD-B转化的大肠杆菌表达KBD-B pQE30-KBD-B的克隆 λ-MaxiDNA(DNA-λ Maxi试剂盒，Qiagen)从人角质形成细胞cDNA库(BD Bioscience，Clontech，人角质形成细胞cDNA，对数期包皮原代培养物，载体λgt11)制备。
PCR使用以下寡核苷酸进行 Bag 43(5’-GGTCAGTTACGTGCAGCTGAAGG-3’)(SEQ ID No141)和 Bag 44(5’GCTGAGGCTGCCGGATCG-3’)(SEQ ID No142)50μl PCR混合物 10×用于超高保真性Pfu的PCR缓冲液 5μl λDNA(744ng/μl) 1μl(1:30稀释) dNTP混合物(10mM)1μl Oligo Bag 43(192ng/μl) 0.5μl Oligo Bag 44(181ng/μl) 0.5μl Pfu超高保真聚合酶1μl H2O 41μl 温度程序2分钟 95℃
10分钟 72℃ -将大小约1102bp的产生的PCR产物从琼脂糖凝胶中切出并纯化。
-使用纯化的PCR产物作为模板，随后进行第二轮PCR 使用的寡核苷酸 Bag 53(5’-CGCGCCTCGAGCCACATACTGGTCTGC-3’)(SEQ ID No143)和 Bag 51(5’-GCTTAGCTGAGGCTGCCGGATCG-3’)(SEQ ID No144) 50μl PCR混合物 10×PCR缓冲液TAQ 5μl 来自以上PCR的模板3.5μl dNTP混合物(10mM) 1μl Oligo Bag 53(345ng/μl) 0.5μl Oligo Bag 51(157ng/μl) 0.5μl TAQ聚合酶1μl H2O 39μl 温度程序 2分钟 95℃
10分钟 72℃ -将大小约1073bp的产生的PCR产物从琼脂糖凝胶中切出、纯化并在以下载体pCR2.1-TOPO(Invitrogen)中克隆。
-产生的载体pCR2.1-TOPO+KBD-B(5027bp)随后转化、在大肠杆菌中扩增，随后用XhoI和EcoRI切割并且将产生的KBD-B片段在pBAD/HisA(Invitrogen；同样用XhoI和EcoRI切割)中克隆。
-新形成的载体pBAD/HisA+KBD-B(5171bp)再次用SacI和StuI切割并且将产生的KBD-B片段在pQE30(Qiagen；用SacI和SmaI切割)中克隆。产生的表达载体pQE30-KBD-B(4321bp；也见图1)用于以的KBD-B表达。
通过载体pQE30-KBD-B在大肠杆菌中表达的KBD-B(SEQ ID No4)额外地在氨基端包括氨基酸MRGSHHHHHHGSACEL，并且在羧基端包括氨基酸GVDLQPSLIS(SEQ ID No166). KBD-B通过pQE30-KBD-B在大肠杆菌中的表达 -预培养物接种自含有pQE30-KBD-B转化的大肠杆菌菌株(例如XL10-Gold[Stratagene])的平板或甘油培养物。根据主培养的规模，在管或小烧瓶中接种LB培养基(约1:100)。
-抗生素根据所用菌株(对于pQE30-KBD-B，氨苄青霉素100μg/ml)而使用。
-温育在250转/分钟和37℃进行。
-用预培养物约1:100接种主培养物，主培养物具有相应抗生素的LB培养基或合适的基本培养基。在250转/分钟和37℃温育。
-诱导用1mM IPTG在OD(600nm)高于0.5时进行。
-诱导4小时后，将细胞离心下来。
在发酵罐中，过程是类似的，不过有可能在高得多的OD单位上实施诱导并且因此有可能显著地增加细胞和蛋白质产率。
实施例3在大肠杆菌菌株中用IPTG诱导型启动子例如通过表达质粒pLib76表达C16-KBD 为了表达，使用多种生产宿主，如多种大肠杆菌菌株(例如XL10-Gold[Stratagene]、BL21-CodonPlus[Stratagene]和其它菌株)、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等。
代表性地作为实例，在此处中描述了克隆并且通过用pLib76转化的大肠杆菌表达C16-KBD-B pLib76的克隆 -载体pQE30-KBD-B(见实施例2)的KBD-B序列中存在的BsgI切割位点使用Quickchange XL位点定向诱变试剂盒(Stratagene)，使用寡核苷酸Lib197(5’-GAGCTCTCGACTCCTGACAATCAC-3’) (SEQ ID NO145)和Lib198(5’-GAGCTCGGTTCCTCCGGTACCGCCTCTCCTGCGCAACAATCTTAACG-3’)(SEQ ID NO146)根据制造商说明书而除去(SEQ ID No147)。产生的载体称作pLib50。
-载体pLib50的质粒DNA用作寡核苷酸Lib201(5’-CGTACTGCATGCGGCGGTACCGGAGGAACTGCACAAGAGCTCGAGCCACATACTGGTCTGCTCTTGC-3’)(SEQ ID NO148)和Lib202(5’-CTGCAGGTCGACCCCCTCCTGAACAGACATTTC-3’)(SEQ ID NO149)的PCR模板。通过寡核苷酸Lib201，将BsgI切割位点导入片段。
PCR在具有以下组成的50μl反应混合物中进行 1μl的质粒DNA pLib50 1μl的dNTP混合物(各10mM；Eppendorf) 5μl的10×PCR缓冲液+MgCl2(Roche) 1μl的Lib201 5’引物(对应于50pmol) 1μl的Lib202 3’引物(对应于50pmol) 5 U Pwo-聚合酶(Roche) 用H2O添加至50μl。
PCR反应在以下循环条件下进行 步骤195℃，5分钟(变性) 步骤295℃，60秒 步骤350℃，45秒(复性) 步骤472℃，2分钟(延伸) 步骤2-4循环30次 步骤572℃，10分钟(后延伸) 步骤64℃(停止) -将大小约924bp的产生的PCR产物从琼脂糖凝胶中切出、纯化并在以下载体pCR2.1-TOPO(Invitrogen)中克隆。
-产生的载体pLib58随后转化、在大肠杆菌中扩增，随后用SphI/SalI切割并且将产生的KBD-B片段在pQE30-KBD-B(见实施例2；同样用SphI/SalI切割)中克隆。
-用BsgI/BseRI切割的蜘蛛丝蛋白ADF-4(Huemmerich等[2004；蜘蛛牵引丝的主要结构元件及其对蛋白质溶解度的贡献；Biochemistry4313604-13612])中C16结构体(module)的片段(SEQ ID No150)连接到产生的载体pLib59(用BsgI切割)中。
-这种克隆产生编码与KBD-B蛋白质(SEQ ID No166)融合的C16蛋白质(SEQ ID No151)的嵌合核酸分子(SEQ ID No167)。所述编码性核酸分子(SEQ ID No150和SEQ ID No147)的连接导致所述蛋白质的翻译融合，并且在翻译发生后产生根据SEQ ID No:168的蛋白质。产生的表达载体pLib76(也参见图2)用于后续的C16-KBD-B表达。
C16-KBD-B通过pLib76在大肠杆菌中的表达(也参见图2) 预培养物接种自含有pLib76转化的大肠杆菌菌株(例如XL10-Gold[Stratagene])的平板或甘油培养物。根据主培养的规模，在管或小烧瓶中接种LB培养基(约1:100)。
-抗生素根据所用菌株(对于pLib76，氨苄青霉素100μg/ml)而使用。
-温育在250转/分钟和37℃进行 -用预培养物约1:100接种主培养物，主培养物具有相应抗生素的LB培养基或合适的基本培养基。在250转/分钟和37℃温育。
-诱导用1mM IPTG在OD(600nm)高于0.5时进行。细胞随后在32℃和250转/分钟进行温育。
-诱导4小时后，将细胞离心下来。
-在发酵罐中，过程是类似的，不过有可能在高得多的OD单位上实施诱导并且因此有可能显著地增加细胞和蛋白质产率。
图6显示C16-KBD-B的表达，这由针对C16-KBD-B融合物氨基端His标签的抗体或针对KBD-B结构域的抗体在蛋白质印迹中检验。在每种情况下，检测到相同大小的蛋白质。这表明在大肠杆菌中表达的蛋白质确实包含C16结构域和KBD-B结构域。用于诱导的IPTG浓度实现了可比较的结果。
总之，该数据表明已经实现C16-KBD-B在大肠杆菌的成功表达。
3.a KBD-B-C16在大肠杆菌菌株中用IPTG诱导型启动子通过表达质粒pLib78的表达 与实施例3中描述的在氨基端包含C-16丝蛋白并且在羧基端包含KBD-B蛋白质的融合蛋白变体相反，该实施例描述所述融合蛋白的反向变体的克隆及表达。
使用多种生产宿主用于表达，如多种大肠杆菌菌株(例如XL10-Gold[Stratagene]、BL21-CodonPlus[Stratagene]、BLR(DE3)[Novagen]和其它菌株)、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等。
代表性地作为实例，在此处中描述了克隆并且通过用pLib78转化的大肠杆菌表达KBD-B-C16 pLib78的克隆 -包含KBD-B DNA序列的载体pLib15的质粒DNA用作寡核苷酸Lib230(5’-AGATCTCATCACCATCACCATCACGAGCCACATACT-3’)(SEQ ID NO225)和 Lib231(5’-AGATCTAGTTCCTCCGGTACCGCCGCTAATTAAGCTTGGCTGCAGGTC-3’)(SEQ ID NO226)的PCR的模板。
-在任何情况下，将BgIII切割位点经寡核苷酸Lib230和Lib231导入，并且接头序列通过寡核苷酸Lib231导入片段。
PCR在具有以下组成的100μl反应混合物中进行 5μl的质粒-DNA pLib15 1μl的dNTP混合物(10mM；Eppendorf) 10μl的herculase缓冲液(10×；Stratagene) 4μl的Lib230 5’引物(对应于50pmol) 4μl的Lib231 3’引物(对应于50pmol) 1μl的herculase聚合酶(5U/μl；Stratagene) 用H2O添加至100μl。
PCR反应在以下循环条件下进行 步骤195℃，5分钟(变性) 步骤295℃，1分钟 步骤360℃，1分钟(复性) 步骤472℃，1.5分钟(延伸) 步骤2-4循环30次 步骤572℃，10分钟(后延伸) 步骤64℃(停止) 将大小约945bp的产生的PCR产物从琼脂糖凝胶中切出、纯化并在以下载体pCR2.1-TOPO(Invitrogen)中克隆。新形成质粒叫做pLib77。
pLib77随后转化、在大肠杆菌中扩增，随后用BglII切割并且将产生的KBD-B片段在包含C16序列的质粒pET21a(+)C16(Hümmerich等，2004，Biochemistry 4313604-13612)中克隆。接受载体事先已经用BamHI切割。
这种克隆产生编码与C16蛋白质(SEQ ID No151)融合的KBD-B蛋白质(SEQ ID No166)的嵌合核酸分子(SEQ ID No227)。所述编码性核酸分子(SEQ ID No165和SEQ ID No150)的连接导致所述蛋白质的翻译融合，并且在翻译发生后产生根据SEQ ID No228的蛋白质。产生的表达载体pLib78(也参见图11)用于后续的KBD-B-C16表达。
KBD-B-C16通过pLib78在大肠杆菌中的表达 -预培养物接种自含有pLib78转化的来自Novagen的大肠杆菌菌株BLR(DE3)的平板或甘油培养物。根据主培养的规模，在管或小烧瓶中接种LB培养基(约1:100)。
-对应于该载体，使用的抗生素是氨苄青霉素100μg/ml。
-温育在250转/分钟和37℃进行 -主培养物用预培养物约1:100接种，主培养物含氨苄青霉素100μg/ml的LB培养基。在250转/分钟和37℃温育。
-诱导用100μM IPTG在高于OD(600nm)0.5时进行。细胞随后温育另外3小时。
-诱导3小时后，将细胞离心下来。
-在发酵罐中，过程是类似的，不过有可能在高得多的OD单位上实施诱导并且因此有可能显著地增加细胞和蛋白质产率。
图12显示KBD-B-C16的表达，这由针对KBD-B-C16融合物的T7标签、氨基端His标签的抗体或针对KBD-B结构域的抗体在蛋白质印迹中检验。在每种情况下，检测到相同大小的蛋白质。这表明在大肠杆菌中表达的蛋白质确实由C16结构域和KBD-B结构域组成。
总之，该数据表明已经实现KBD-B-C16在大肠杆菌的成功表达。
蛋白质的纯化如实施例11中所述进行。纯化的融合蛋白KBD-B-C16具有预期分子量约82 500。这可以用针对His标签的抗体、针对T7标签的抗体和针对KBD-B的抗体加以证实。
为检验所形成融合蛋白KBD-B-C16在角蛋白结合结构域方面的官能度，开展了毛发结合试验(见实施例16)。在该试验中，该融合蛋白对毛发的结合得到证实。KBD-B-C16融合蛋白中C16蛋白质部分的官能度通过产生微珠和膜装配形式(方法见实施例22a)进行检验。KBD-B-C16融合蛋白装配成膜和微珠并且因此表现如C16-KBD-B-融合蛋白那样。
实施例4在大肠杆菌菌株中用IPTG诱导型启动子例如通过表达质粒pRee017表达类胡萝卜素结合蛋白(CBP)-KBD 为了表达，使用多种生产宿主，如多种大肠杆菌菌株(例如XL10-Gold[Stratagene]、BL21-CodonPlus[Stratagene]和其它菌株)、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等。
代表性地作为实例，在此处中描述了克隆并且通过用pRee017转化的大肠杆菌表达CBP-KBD-B pRee017的克隆 -编码来自家蚕(B.mori)的CBP(SWISS-PROTQ8MYA9)的基因的DNA合成地制备并且连接到质粒载体内。产生的质粒051794pPCR-script用作寡核苷酸Lib199(5’-GAGCTCGCCGACTCTACGTCGAAAAGC-3’)(SEQ ID NO169)和Lib200(5’-GAGCTCAGAACCTCCGGTACCACCGATTTCGGCTCTGGCCTTCGCTTCGGCCAC-3’)(SEQ ID NO170)的PCR模板。
PCR在具有以下组成的100μl反应混合物中进行 1μl的带CBP的质粒DNA 051794 pPCR-script 1μl的dNTP混合物(各10mM；Eppendorf) 10μl的10×Herculase缓冲液(Stratagene) 4μl的Lib199 5’引物(240μg/ml) 4μl的Lib200 3’引物(730μg/ml) 5 U的Herculase(Stratagene) 用H2O添加至100μl PCR反应在以下循环条件下进行 步骤195℃，5分钟(变性) 步骤295℃，1分钟 步骤358℃，1分钟(复性) 步骤472℃，1.5分钟(延伸) 步骤2-4循环30次 步骤572℃，10分钟(后延伸) 步骤64℃(停止) -将大小约918bp的产生的PCR产物从琼脂糖凝胶中切出、纯化并在以下载体pCR2.1-TOPO(Invitrogen)中克隆。
-产生的载体pLib54随后转化并在大肠杆菌中扩增。
CBP基因在随后步骤中用以下引物 HRe1(5’-AAAGCATGCGCCGACTCTACGTCGAAAAGCGCG-3’)(SEQ ID No173)和 HRe2(5’-CCTTGAGCTCAGAACCTCCGGTACCACCGATT-3’)(SEQ ID No174)通过PCR扩增。
50μl的PCR混合物 10×用于Accu Prime聚合酶(Invitrogen)的PCR缓冲液 5μl pLib54(50ng) 1μl dNTP混合物(10mM) 3μl Oligo HRe1(312ng/μl) 1μl Oligo Hre2(338ng/μl) 1μl Accu Prime聚合酶(Invitrogen) 1μl H2O 38μl 温度程序 1分钟 95℃
8分钟 72℃ 产生的片段(SEQ ID No171)用SphI和SacI切割并克隆在pQE30-KBD-B(见实施例2；同样用SphI和SacI切割)中。这种克隆产生编码与KBD-B蛋白质(SEQ ID No166)融合的CBP蛋白质(SEQ ID No172)的嵌合核酸分子(SEQ ID No175)。产生的表达载体pRee017(图4)因此包含与编码KBD-B蛋白质(SEQ ID.No166)的核酸分子(SEQ ID No165)融合的编码CBP蛋白质(SEQ ID.No172)的核酸分子(SEQ ID.No175)。所述核酸分子的连接导致所述蛋白质的翻译融合，并且在翻译发生后产生根据SEQ ID No176的蛋白质。
在又一个实施方案中，产生了具有SEQ ID No175的嵌合核酸分子的又一个变体，其中将编码CBP蛋白质(SEQ ID No172)和KBD-B蛋白质(SEQ ID No166)的两种核酸连接的连接序列通过定向诱变(快速变化的位点定向诱变诱变试剂盒，Stratagene)加以改变。方法根据制造商的说明书进行。使用的寡核苷酸是HRe22(SEQ ID No229)和HRe23(SEQ ID No230)。使用的模板是pRee017(图4)。
产生的表达载体pRee023因此包含核酸分子SEQ ID No222，该核酸分子编码由CBP蛋白质(SEQ ID No172)和KBD-B蛋白质(SEQ ID No166)构成的融合蛋白，其中连接这两种蛋白质的序列是诱变的接头序列(SEQ ID No224)。所述核酸分子的连接导致所述蛋白质的翻译融合，并且在翻译发生后产生根据SEQ ID No223的蛋白质，蛋白质的特征是在生产菌株中特殊的蛋白酶解稳定性。产生的表达载体pRee017(也参见图4)和pRee023用于以下CBP-KBD-B表达。
CBP-KBD-B通过pRee017或pRee023在大肠杆菌中的表达 -预培养物接种自含有转化至大肠杆菌菌株的pRee017或pRee023的平板或甘油培养物。根据主培养的规模，在LB培养基的管或小烧瓶中(约1:100)进行接种。
-抗生素根据所用菌株(对于用pRee017或pRee023转化的菌株，氨苄青霉素100μg/ml)而使用。
-温育在250转/分钟和37℃进行 -主培养物用预培养物约1:100接种，主培养物含氨苄青霉素100μg/ml的LB培养基。在250转/分钟和37℃温育。
-诱导用1mM IPTG在OD(600nm)高于0.5时进行。细胞随后在32℃和250转/分钟进行温育。
-诱导4小时后，将细胞离心下来。
该蛋白质的纯化如实施例11中所述进行。纯化的融合蛋白CBP-KBD具有预期相对分子量约70 000。这可以用针对His标签的抗体和针对KBD的抗体加以证实。
实施例5在大肠杆菌菌株中用IPTG诱导型启动子例如通过表达质粒pLib72表达金属结合蛋白(ZntA)-KBD 为了表达，使用多种生产宿主，如多种大肠杆菌菌株(例如XL10-Gold[Stratagene]，BL21-CodonPlus[Stratagene]和其它菌株)、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等。
代表性地作为实例，在此处中描述了克隆并且通过用pLib72转化的大肠杆菌表达ZntA-KBD-B pLib72的克隆 -染色体大肠杆菌DNA用作寡核苷酸Lib212(5’-GAGCTCTCGACTCCTGACAATCAC-3’)(SEQ ID NO177)和Lib219(5’-GAGCTCGGTTCCTCCGGTACCGCCTCTCCTGCGCAACAATCTTAACG-3’)(SEQ ID No178)的PCR模板。
-将大小约2223bp的产生的PCR产物从琼脂糖凝胶中切出、纯化并在以下载体pCR2.1-TOPO(Invitrogen)中克隆。
产生的载体pLib71随后转化并在大肠杆菌中扩增，随后用SacI切割并且将产生的zntA片段(SEQ ID No179)克隆在pQE30-KBD-B(见实施例2；同样用SacI切割)中。这种克隆产生编码与KBD-B蛋白质(SEQ ID No166)融合的ZntA蛋白质(SEQ ID.No180)的嵌合核酸分子(SEQ ID No181)。产生的表达载体pLib72(图5)因此包含与编码KBD-B蛋白质(SEQ ID.No166)的核酸分子(SEQ ID No165)融合的编码ZntA蛋白质(SEQ ID.No180)的核酸分子(SEQ ID.No179)。所述核酸分子的连接导致所述蛋白质的翻译融合，并且在翻译发生后产生根据SEQ ID No182的蛋白质。产生的表达载体pLib72(也参见图5)用于以下ZntA-KBD-B表达。
PCR在具有以下组成的50μl反应混合物中进行 1μl的基因组DNA XL10-Gold(1.7μg) 1μl的dNTP混合物(各10mM；Eppendorf) 5μl的10×Herculase缓冲液(Stratagene) 1μl的Lib212 5’引物(341μg/ml) 2μl的Lib219 3’引物(464μg/ml) 5U的Herculase(Stratagene) 用H2O添加至50μl PCR反应在以下循环条件下进行 步骤195℃，5分钟(变性) 步骤295℃，1分钟 步骤360℃，45秒(复性) 步骤472℃，2分钟(延伸) 步骤2-4循环35次 步骤572℃，10分钟(后延伸) 步骤64℃(停止) 实施例6在大肠杆菌菌株中用IPTG诱导型启动子表达硫氧还蛋白-KBD 为了表达，使用多种生产宿主，如多种大肠杆菌菌株(例如XL10-Gold[Stratagene]、BL21-CodonPlus[Stratagene]和其它菌株)、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等。
代表性地作为实例，在此处中描述了克隆并且通过大肠杆菌表达硫氧还蛋白-KBD-B 首先，来自载体pThioHisC(Invitrogen)的目的硫氧还蛋白片段通过PCR扩增(PCR混合物条件类似于实施例2)。为此目的，使用以下寡核苷酸 Bag 102(5’-GTAAGAATGCGGCCGCCTCCTGAACAGACATTTCTTT ATTG-3’)(SEQ ID No183) Bag 103(5’-GCAGATCTAGAGGATCGCATCACCATCACCAT CACGGATCC-3’)(SEQ ID No184) 将扩增的PCR产物(SEQ ID No185)从琼脂糖凝胶中切出、纯化、用限制性核酸内切酶NotI和BglII切割并在pQE30-KBD-B(见实施例2)中克隆。
这种克隆产生编码与KBD-B蛋白质(SEQ ID No166)融合的硫氧还蛋白蛋白质(SEQ ID.No186)的嵌合核酸分子(SEQ ID No187)。产生的表达载体因此包含与编码KBD-B蛋白质(SEQ ID.No166)的核酸分子(SEQ IDNo165)融合的编码硫氧还蛋白蛋白质(SEQ ID.No186)的核酸分子(SEQID.No185)。所述核酸分子的连接导致所述蛋白质的翻译融合，并且在翻译发生后产生根据SEQ ID No188的蛋白质。产生的表达载体用于以下硫氧还蛋白-KBD-B表达。
实施例7在大肠杆菌菌株中用IPTG诱导型启动子表达eGFP-KBD 为了表达，使用多种生产宿主，如多种大肠杆菌菌株(例如XL10-Gold[Stratagene]，BL21-CodonPlus[Stratagene]和其它菌株)、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等。
代表性地作为实例，在此处中描述了克隆并且通过大肠杆菌表达eGFP-KBD-B 首先，目的eGFP片段通过PCR(PCR混合物条件类似于实施例2)从载体pEGFP-1(Clontech)中扩增。为此目的，使用以下寡核苷酸 Bag 89(5’-GCGAGCTCGTGAGCAAGGGCGAGGAGC-3’) Bag 90(5’-GCGAGCTCCTTGTACAGCTCGTCCATG-3’) 将扩增的PCR产物(SEQ ID No191)从琼脂糖凝胶中切出、纯化、用限制性核酸内切酶SacI切割并在pQE30-KBD-B(见实施例2)中克隆。
这种克隆产生编码与KBD-B蛋白质(SEQ ID No166)融合的eGFP蛋白(SEQ ID.No192)的嵌合核酸分子(SEQ ID No193)。产生的表达载体因此包含与编码KBD-B蛋白质(SEQ ID.No166)的核酸分子(SEQ ID No165)融合的编码eGFP蛋白(SEQ ID.No192)的核酸分子(SEQ ID.No191)。所述核酸分子的连接导致所述蛋白质的翻译融合，并且在翻译发生后产生根据SEQ ID No194的蛋白质。产生的表达载体用于以下eGFP-KBD-B表达。
实施例8在大肠杆菌菌株中用IPTG诱导型启动子表达YaaD-KBD 为了表达，使用多种生产宿主，如多种大肠杆菌菌株(例如XL10-Gold[Stratagene]、BL21-CodonPlus[Stratagene]和其它菌株)、巨大芽孢杆菌、尤其枯草芽孢杆菌。
代表性地作为实例，在此处中描述了克隆并且通过大肠杆菌表达YaaD-KBD 首先，来自载体pDX14(OmniGene Bioproducts)的目的YaaD片段通过PCR(PCR混合物条件类似于实施例2)扩增。为此目的，使用以下寡核苷酸 Bag 93(5’-GCGAGCTCGCTCAAACAGGTACTGAACG-3’)(SEQID No195) Bag 94(5’-GCGAGCTCCCAGCCGCGTTCTTGCATACG-3’)(SEQ ID No196) 将扩增的PCR产物(SEQ ID No197)从琼脂糖凝胶中切出、纯化并连接到pCR2.1 TOPO(无限制性消化)中。YaaD从质粒pCR2.1 TOPO-YaaD中用SacI切出并克隆至pQE30-KBD-B(见实施例2)。
这种克隆产生编码与KBD-B蛋白质(SEQ ID No166)融合的yaaD蛋白质(SEQ ID.No198))的嵌合核酸分子(SEQ ID No199)。产生的表达载体因此包含与编码KBD-B蛋白质(SEQ ID.No166)的核酸分子(SEQ ID No165)融合的编码yaaD蛋白质(SEQ ID.No198)的核酸分子(SEQ ID.No197)。所述核酸分子的连接导致所述蛋白质的翻译融合，并且在翻译发生后产生根据SEQ ID No200的蛋白质。产生的表达载体用于以下yaaD-KBD-B表达。
不言自明的是为生产角蛋白结合融合蛋白而在实施例3-8中通过举例方式所产生的DNA构建体也可以使用载体pRee024(图8，实施例18-22)而产生。因此形成的融合蛋白包含在pRee024情况时的KBD-D蛋白质(SEQ IDNo212)。
实施例9借助构巢曲霉菌株，使用诱导型alcA启动子例如通过表达质粒pLib 19(摇瓶)表达KBD 为了表达，使用构巢曲霉野生型菌株，如RMS011或SRF200。代表性地作为实例，在本文中描述用pLib19(图6)转化，通过构巢曲霉表达KBD-B。
-为构建pLib19，大小922bp的编码KBD-B的DNA片段(SEQ IDNo152)使用寡核苷酸Lib151(5’-CACCATGCATCACCATCACCATCACGAGCCACATACTGGTCTGCT-3’(SEQ ID No154)和Lib152(5’-GCTAATTAAGCTTGGCTGCA-3’(SEQ ID No155)以及载体pQE30-KBD-B(实施例2，图1)作为模板通过PCR扩增。
-PCR在具有以下组成的50μl反应混合物中进行 1μl的质粒DNA pQE30-KBD-B 1μl的dNTP混合物(各10mM；Eppendorf) 5μl的10×PCR缓冲液+MgCl2(Roche) 1μl的Lib151 5’引物(对应于50pmol) 1μl的Lib152 3’引物(对应于50pmol) 5U的Pwo聚合酶(Roche) PCR反应在以下循环条件下进行 步骤195℃，5分钟(变性) 步骤295℃，45秒 步骤353℃，45秒(复性) 步骤472℃，2分钟(延伸) 步骤2-4循环30次 步骤572℃，10分钟(后延伸) 步骤64℃(停止) -PCR产物连接到载体pENTR/D(pENTRTM Directional

克隆试剂盒，E型，Invitrogen)。正确的KBD-B扩增通过测序而检验。
-编码KBD-B的DNA片段至载体pMT-OvE(Toews MW，Warmbold J，Konzack S，Rischitor P，Veith D，Vienken K，VinuesaC，Wei H，Fischer R；mRFP1作为构巢曲霉中荧光标记的建立和使用体外重组法(GATEWAY)构建用于高通量蛋白质标签化的表达载体.(2004)Curr Genet 45383-389)的重组使用“

LR克隆酶TM酶混合物”(Invitrogen)进行。这产生载体pLib19(图6)。
-构巢曲霉野生型菌株的原生质体用环状载体pLib19(Yelton MM，Hamer JE，Timberlake WE；通过使用trpC质粒转化构巢曲霉，(1984)Proc Natl Acad Sci USA 811479-1474)转化。转化体使用染色体DNA通过PCR和DNA印迹分析。
-为了预培养表达KBD-B的构巢曲霉转化体，将100ml基本培养基(0.6％NaNO3；0.152％KH2PO4；0.052％KCI[pH6.5]；0.8％葡萄糖；0.05％MgSO4；1ml微量元素溶液[1g/l FeSO4×7H2O；8.8g/l ZnSO4×7 H2O；0.4g/l CuSO4×5 H2O；0.15g/l MnSO4×4 H2O；0.1g/lNa2B4O7×10 H2O；0.05g/l(NH4)6Mo7O24×4 H2O]，+菌株特异性补充物)或100ml完全培养基(2％麦芽浸膏；0.1％胨；2％葡萄糖；+菌株特异性补充物)在500ml烧瓶中用106-107个孢子接种并在200-250转/分钟和37℃温育16-24小时。
-在预培养后，真菌菌丝体通过过滤而收获、用蒸馏水洗涤并转移至含100-500ml新鲜基本培养基的烧瓶中。在这种主培养基中，使用0.1％果糖替代葡萄糖作为碳源。为诱导KBD表达，乙醇(1％终浓度)或甘油(50mM)或乙酸钠(50mM)或乙胺或苏氨酸额外地添加至该培养基中。所提及的用于诱导表达的添加物对于权利要求书是非限制性的。主培养物在200-250转/分钟和37℃再温育5-48小时。
-在培养结束时，真菌菌丝体在室温以1500-3000×g离心5分钟而收获并通过Menton-Gaulin破碎。
-除了多肽序列SEQ ID No4之外，构巢曲霉中表达的KBD-B(SEQ ID No152)(pLib19)额外地在氨基端包括氨基酸MHHHHHH，并且在羧基端包括氨基酸GVDLQPSLISKGGRADPAFLYKVVMIRLLTKPERKLLEGGPGTQLLFPLVRVNCALGVIMVIAVSCVKLLSAHNSTQHTSRKHKV。
实施例10细胞破碎和包涵体纯化(pQE30-KBD-B)。
可溶性表达的KBD或融合蛋白-KBD可以在细胞破碎(例如借助Menton-Gaulin)后直接使用)或通过层析而纯化(见实施例11)。不溶性表达的KBD或融合蛋白-KBD(例如在包涵体中)如下进行纯化 -将发酵罐内容物离心，沉淀悬浮在20mM磷酸盐缓冲液pH＝7.5并通过Menton-Gaulin破碎。
-将破碎的细胞再次离心(15000g)，来自本次离心的沉淀用20mM磷酸盐、500mM NaCl和8M脲处理并且如此进行搅拌。(溶解包涵体) -上清液的pH调节至7.5。
-离心随后再次进行并且将上清液施加至Ni螯合琼脂糖凝胶柱上并如实施例6所述进行纯化。
实施例11在Ni螯合琼脂糖凝胶上纯化角蛋白结合结构域B。
KBD或融合蛋白-KBD可以通过遍及Ni柱上所连接的His标签而层析地纯化。
柱材料高效Ni-琼脂糖凝胶Amersham Biosciences订单号17-5268-02 将该材料装填至柱(例如直径2.6cm，高度10cm)内并且用缓冲液A+4％缓冲液B(对应于20mM咪唑)平衡。
蛋白质提取物(见例如细胞破碎和包涵体纯化)使用Superloop(

系统)(流速约5ml/分钟)在pH 7.5施加至该柱上。
在施加后，洗涤用缓冲液A+20mM咪唑实施。
洗脱用缓冲液B(在缓冲液A中的500mM咪唑)实施。
洗脱液使用级分收集器分级收集。
洗脱液随后脱盐(有利于待浓缩的样品)。为此，洗脱液例如经过Sephadex G25中等柱(Amersham)进行脱盐。随后，为了浓缩，例如可以使用Amicon腔(搅拌式超滤室，Millipore)。
缓冲液A20mM磷酸二氢钠500mM NaCl (根据需要，还有可能使用具有更低浓度 NaCl的缓冲液浓度)8M脲 (若可溶性表达的“活性”KBD已经被层析， 则不需要使用脲。不用脲时，则不需要后 续的蛋白质复性。)pH＝7.50 缓冲液B20mM磷酸二氢钠500mM NaCl(根据需要，还有可能使用具有更低浓度 NaCl的缓冲液浓度)8M脲500mM咪唑pH＝7.50 实施例12角蛋白结合结构域B或融合蛋白-KBD的复性 可以使不溶性表达的角蛋白结合结构域或融合蛋白-KBD(例如来自包涵体)复性并因而如下活化 方法1:不连续透析 6.5ml Cellytic IB(Sigma，订单号C5236)和5mM DTT添加至8M脲(Ni螯合洗脱液，HiTrap)中的6.5ml KBD-B包涵体或融合蛋白-KBD。待复性的溶液随后倾入透析袋(SpectrumSpectra Por MWCO12-14kD)。
透析对1L的6M脲溶液在4℃实施约12小时，小心搅拌。
添加500ml的25mM Tris/HCl pH＝7.50并且透析在4℃如此进行9小时。随后再添加250ml Tris缓冲液(见上文)并且透析另外12小时。
随后再次添加500ml的25mM Tris/HCl pH＝7.50并且透析在4℃如此进行9小时.随后再添加250ml Tris缓冲液(见上文)并且透析另外12小时。
随后再次添加500ml的25mM Tris/HCl pH＝7.50并且透析在4℃如此进行9小时。随后将含有透析液的透析袋置于2L25mM Tris+150mMNaCl pH＝7.50内。透析随后在4℃再进行12小时。
随后取出透析袋的内容物。
方法2连续透析 在8M脲(Ni螯合洗脱液，HiTrap)中的20ml KBD-B包涵体(或融合蛋白-KBD)用10ml Cellytic IB(Sigma，订单号C5236)和5mM DTT处理。溶液随后倾入透析室Slide-A-Lyzer Dialyses Cassette PIERCE，MWCO10 kD.订单号66830。
透析随后对1L的6M脲溶液在4℃实施约1小时。
随后，以下缓冲液经48小时时间通过蠕动泵连续地计量加入25mMTris/HCl pH＝7.5 将含有透析液的透析袋随后移入2L终末缓冲液25mM Tris+150mMNaCl pH＝7.50并且透析在4℃进行约12小时。
随后取出透析袋的内容物。
实施例13皮肤的结合1(定性) 开发视观定性试验以检验KBD或融合蛋白-KBD是否与皮肤结合。
所用溶液 封闭液在TBS中稀释的Western封闭试剂1921673 Roche(10×溶液)。
TBS20mM Tris；150mM NaCl pH 7.5 TTBSTBS+0.05％吐温20 第一步是将皮肤的外侧角蛋白层转移至稳定支持物上。为此目的，将透明胶带牢固地施加在脱毛的人皮肤上并再次取下。该试验可以直接在透明胶带上进行，或粘着的角蛋白层可以通过重新的粘着作用而转移到载玻片上。结合作用如下显示 -为了与多种试剂温育，转移至法尔肯(Falcon)容器 -根据需要添加乙醇以脱脂，除去乙醇并干燥载玻片 -在室温与封闭缓冲液温育1小时 -用TTBS洗涤2次，每次5分钟 -用TBS洗涤1次，5分钟 -在室温与TBS/0.05％吐温20中待测试的KBD或融合蛋白-KBD(与标签例如His6、HA等偶联)或对照蛋白温育2-4小时 -除去上清液 -用TBS洗涤3次 -在室温与在TBS+0.01％封闭剂中1:2000稀释的抗多聚组氨酸单克隆(或特异性KBD兔)抗体温育1小时 -用TTBS洗涤2次，每次5分钟 -用TBS洗涤1次，5分钟 -在室温与在TBS+0.01％封闭剂中1:5000稀释的抗小鼠IgG碱性磷酸酶缀合物温育1小时 -用TTBS洗涤2次，每次5分钟 -用TBS洗涤1次，5分钟 -添加磷酸酶底物(NBT-BCIP；Boehringer MA 1片/40ml水，持续2.5分钟；终止用水) -用肉眼或使用显微镜光学地检测有色沉淀。蓝色沉淀表示KBD或融合蛋白-KBD已经与皮肤结合。
实施例14与皮肤的结合2(定量性) 开发了定量试验，其中KBD或融合蛋白-KBD的毛发/皮肤结合强度可以用所述的定量试验与非特异性蛋白进行比较。
使用5mm软木塞穿孔器以便从一片融化的干燥无毛发皮肤(人或猪)中钻取一个部分(或在表面试验的情况下，将皮肤部分插入法尔肯盖内)。皮肤样品随后转化成2-3mm厚度以除去任何存在的组织。皮肤样品随后转移至Eppendorf容器(低蛋白质结合性)以便实施结合作用展示(也参见图7；或者也可以使用来自L’Oreal的Episkin系统[重建的人皮肤]) -用PBS/0.05％吐温20洗涤2次 -添加在PBS中的1ml 1％BSA并且室温温育1小时，温和旋转运动(900转/分钟)。
-除去上清液 -添加在含0.05％吐温20的PBS中的100μg KBD或融合蛋白-KBD；室温温育2小时并且温和旋转运动(900转/分钟)。
-除去上清液 -用PBS/0.05％吐温20洗涤3次 -在室温与1ml带过氧化物酶缀合物的小鼠抗标签(His6或HA或特定KBD)单克隆抗体(在含0.05％吐温20的PBS中1:2000)[抗多聚组氨酸单克隆抗体-过氧化物酶缀合物，在小鼠中产生，冻干粉末，Sigma]温育2-4小时，温和旋转运动(900转/分钟) -用PBS/0.05％吐温20洗涤3次 -添加过氧化物酶底物(1ml/Eppendorf容器；组成见下文) -允许反应进行直至显示蓝色(约90秒)。
-反应用100μl 2M H2SO4终止。
-在405nm处测量吸收。
过氧化物酶底物(在用前不久制备) 0.1ml TMB溶液(在DMSO中的42mM TMB) +10ml底物缓冲液(0.1M乙酸钠，pH 4.9) +14.7μl H2O2 3％浓度 实施例15与毛发的结合(定量性) 为了能够显示KBD或融合蛋白-KBD对毛发的结合强度也与其它蛋白质有关，开发了一种定量性试验(也参见图7)。在该试验中，毛发首先与KBD(或融合蛋白-KBD)温育并且洗去过量的KBD(或融合蛋白-KBD)。抗体-过氧化物酶缀合物随后通过KBD(或融合蛋白-KBD)的His标签而偶联。再次洗去未结合的抗体-过氧化物酶缀合物。结合的抗体-过氧化物酶缀合物[抗多聚组氨酸单克隆抗体-过氧化物酶缀合物，在小鼠中产生，冻干粉末，Sigma]可以将无色底物(TMB)转化成可在405nm处以光度测定方式测量的有色产物。吸收的强度指示结合的KBD(或融合蛋白-KBD)或比对蛋白质的量。所选的比对蛋白质例如是来自枯草芽孢杆菌的YaaD，其中YaaD因该试验所需而同样具有用于检测的His标签。也可以使用与过氧化物酶缀合的其它特异性抗体替代His标签。
5mg毛发(人)切成长度5mm的段并将其转移至Eppendorf容器(低蛋白质结合性)以便实施结合作用展示 -添加1ml乙醇以脱脂 -离心，除去乙醇并用H2O洗涤毛发 -添加在PBS中的1ml 1％BSA并且室温温育1小时，温和旋转运动。
-离心，除去上清液 -添加在1ml PBS/0.05％吐温20中的待测试KBD(或融合蛋白-KBD)(与标签例如His6、HA等偶联)或对照蛋白；在4℃温育16小时(或室温至少2小时)，温和旋转运动。
-离心，除去上清液 -用PBS/0.05％吐温20洗涤3次 -在室温与1ml带过氧化物酶缀合物的小鼠抗标签(His6或HA)单克隆抗体(在PBS/0.05％吐温20中1:2000)[抗多聚组氨酸单克隆抗体-过氧化物酶缀合物，在小鼠中产生，冻干粉末，Sigma]温育2-4小时，温和旋转运动 -用PBS/0.05％吐温20洗涤3次 -添加过氧化物酶底物(1ml/Eppendorf容器) -允许反应进行直至显示蓝色(约2分钟)。
-反应用100μl 2M H2SO4终止。
-在405nm处测量吸收。
过氧化物酶底物(在用前不久制备) 0.1ml TMB溶液(在DMSO中的42mM TMB) +10ml底物缓冲液(0.1M乙酸钠pH 4.9) +14.7μl H2O2 3％浓度 BSA＝牛血清白蛋白 PBS＝磷酸盐缓冲的盐溶液 吐温20＝失水山梨醇聚氧乙烯醚单月桂酸酯，n约20 TMB＝3，5，3′，5′-四甲基联苯胺 与比较蛋白质YaaD明显较差的结合作用相比，对KBD-B通过举例方式在毛发实施的结合试验展示了KBD-B(SEQ ID No166)与毛发结合的明显优势 表7对毛发的定量的KBD活性试验1)缓冲液；2)比较蛋白质YaaD；3)变性KBD-B；4)复性KBD-B。本表显示在405nm处测量的吸收值。
实施例16融合蛋白-KBD-B的毛发结合活性 为了检验融合蛋白-KBD-B是否也与毛发结合，开发了一种定量性试验(见图7)。在该试验中，毛发首先与融合蛋白-KBD-B温育并且洗去未结合的融合蛋白-KBD-B。过氧化物酶随后通过KBD-B的His标签而偶联。再次洗去未结合的过氧化物酶。结合的过氧化物酶可以将无色底物(TMB)转化成可在405nm处以光度测定方式测量的有色产物。吸收的强度指示结合的融合蛋白-KBD-B的量。所选的比较样品是无融合蛋白的KBD-B。
C16-KBD-B融合蛋白与KBD-B参考蛋白质相比的毛发结合活性。如这些结果所示，与KBD-B蛋白质(A405nm＝0.65)相比较的融合蛋白(A405nm＝0.59)的毛发结合活性实际上未改变。
总之，这些活性试验表明多种融合蛋白-KBD-B构建体具有优异的毛发结合活性，如同KBD-B本身。在大多数情况下，毛发结合活性根本不降低，但是至少极少低于20％的无融合蛋白的KBD-B的结合活性。
实施例16aβ-胡萝卜素对根据实施例4制备的CBP-KBD融合蛋白的结合 通过举例方式对融合蛋白CBP-KBD-B(SEQ ID No.223)所进行的毛发结合试验显示与蛋白质KBD-B(SEQ ID No.4)相比较时CBP-KBD-B(SEQ ID No.223)对毛发的可比较结合作用。相同结果适用于通过举例方式用C16-KBD(SEQ ID No.168)和KBD-B-C16(SEQ ID 228)进行的毛发结合试验。
研究了与KBD(SEQ ID No.4)相比，β-胡萝卜素对CBP-KBD(SEQ IDNo.223)的结合。β-胡萝卜素的UV-Vis吸收谱具有在440nm的最大值。该特性用于研究β-胡萝卜素对融合蛋白的结合。首先，各种浓度(0-20μM)的CBP-KBD溶液与相同量的β-胡萝卜素的乙醇溶液混合。当融合蛋白的浓度增加，溶液的显色增加。该观察由在440nm的光度测量确定。
为验证β-胡萝卜素对CBP-KBD融合蛋白的结合，在任何情况下，KBD溶液和CBP-KBD溶液(分别具有相同的摩尔)与相同浓度的β-胡萝卜素的乙醇溶液混合并对缓冲液透析过夜。次日，β-胡萝卜素的结合作用通过在440nm测量溶液的吸收量值并与β-胡萝卜素溶液的校正曲线进行比较。得到的结论是尽管经过透析，CBP-KBD与KBD相比，结合两倍的β-胡萝卜素。该结果显示实现了由融合蛋白对β-胡萝卜素的成功结合。
实施例17检验成功的偶联作用(埃尔曼试验) 效应分子偶联的成功通过两种不同试验进行监测 (iv)其中可以测定蛋白质中的游离Cys-SH基在效应分子偶联之前和之后数目的埃尔曼试验。本文中，游离SH基在偶联后的明显减少表示良好反应过程。
(v)其中可以测定KBD(或融合蛋白-KBD)对毛发的结合活性试验。好的融合蛋白-KBD应当降低与非偶联的KBD相比的融合蛋白-KBD的活性。
参考(iii) 所需材料 -埃尔曼试剂在0.1M磷酸钠缓冲液中4mg/1ml的5，5’-二硫双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)； -0.1M磷酸钠缓冲液pH 8.0 -半胱氨酸溶液(26.3mg一水合盐酸半胱氨酸/100ml磷酸钠缓冲液)溶液是并且必须是用前不久制备的。
1.在任何情况下，将25μl、50μl、100μl、150μl、200μl和250μl半胱氨酸溶液移入试管(13 x 100mm)以形成校正曲线。待测定的蛋白质样品倾入各个试管(体积<＝250μl)。对于待测试的KBD，每个反应混合物分配至少1mg的量。在试管的情况下，则总体积在任何情况下用磷酸钠缓冲液调整至250μl。若250μl样品体积过量(由于所需的1mg KBD)，在第2点中用2.5ml磷酸钠缓冲液加液时，将这一点考虑进去。
2.在任何情况下，添加50μl埃尔曼试剂和2.5ml磷酸钠缓冲液。短暂混合并室温温育15分钟。
3.测量在412nm的吸收。
4.构建校正曲线，作图并读出待测定蛋白质样品的值。
实施例18通过大肠杆菌菌株使用带IPTG诱导型启动子的表达质粒pRee024(图8)表达KBD-D(SEQ ID No212) 为了表达，使用大肠杆菌菌株XL10 Gold[Stratagene]。
代表性地作为实例，在此处中描述了克隆并且通过用pRee024(图8)转化的大肠杆菌表达KBD-D蛋白质(SEQ ID No213) pRee024的克隆 λ-MaxiDNA(DNA-λ Maxi试剂盒，Qiagen)从人角质形成细胞cDNA库(BD Bioscience，Clontech，人角质形成细胞cDNA，对数期包皮原代培养物，载体λgt11)制备。
用于扩增KBD-D基因的PCR以两个步骤进行。首先，独立地扩增5’末端和3’末端。这些片段是用于扩增完整KBD-D基因的基础。
用于扩增5’末端的PCR如下进行 引物具有以下序列 HRe65’-ATGAACCACTCGCCGCTCAAGACCGCCTTG-3’(SEQID No216) HRe95’-CGTTCCCGGTTCTCCTCAGGAGGCTGACTG-3’(SEQ ID No217) 100μl PCR混合物 10×用于超高保真性Pfu的PCR缓冲液 10μl λ DNA(744ng/μl) 1μl(1:10稀释) dNTP混合物(10mM) 10μl HRe6(196ng/μl) 1μl HRe9(201ng/μl) 1μl Pfu超高保真聚合酶 1μl 双蒸H2O76μl 温度程序 2分钟 95℃
-在琼脂糖凝胶检测到大小约1kb的片段。将反应物纯化并且在下文用作扩增KBD-D基因的5’末端模板。
用于扩增3’末端的PCR如下进行 引物具有以下序列 HRe75’-TTAGAATCGGGAGGTGAAGTTCCTGAGGCT-3’(SEQID No218) HRe85’-CACCACCAACAAGCTGGAGACCCGGAG-3’(SEQ IDNo219) 100μl PCR混合物 10×用于超高保真性Pfu的PCR缓冲液10μl λ DNA(744ng/μl) 1μl(1:10稀释) dNTP混合物(10mM) 10μl Hre7(201ng/μl)1μl HRe8(209ng/μl)1μl Pfu超高保真聚合酶 1μl 双蒸H2O 76μl 温度程序 2分钟95℃
-在琼脂糖凝胶检测到大小约1.2kb的片段。将反应物纯化并且在下文用作扩增KBD-D基因的3’末端模板。
-为扩增KBD-D基因，使用5’末端模板和3’末端模板作为基础。PCR如下进行 100μl PCR混合物 10×用于超高保真性Pfu的PCR缓冲液 10μl dNTP混合物(10mM)10μl 双蒸H2O 75μl 5’末端模板 1μl 3’末端模板 1μl Pfu超高保真聚合酶 1μl H2O 76μl 温度程序
在10次循环后，添加1μl的引物HRe6(196μg/ml)和HRe7(206μg/ml)以及1μl Pfu超高保真聚合酶并且对该反应实施以下温度程序 温度程序 2分钟95℃
然后向其添加1μl Taq聚合酶，并将混合物在72℃温育10分钟。
-将大小约2150bp的产生的PCR产物从琼脂糖凝胶中切出、纯化并克隆入以下载体pCR2.1-TOPO(Invitrogen)。
产生的载体pRee019(6112bp)随后转化、在大肠杆菌中扩增，并且KBD-D基因通过测序进行检查。
随后，KBD-D基因克隆入表达载体内。为此，又一个PCR以载体pRee019为模板而进行 所用的寡核苷酸 HRe265’-CTCGGTACCAACCACTCGCCGCTCAAGACCGCCTTGGCG-3’(SEQ ID No220) HRe275’-ATTAAGCTTTTAGAATCGGGAGGTGAAGTTCCTGAGGCT-3’(SEQ ID No221) 100μl PCR混合物 10×用于超高保真性Pfu的PCR缓冲液 10μl pRee019(25ng/μl)1μl dNTP混合物(10mM)10μl HRe26(287ng/μl) 1μl HRe27(354ng/μl) 1μl Pfu超高保真聚合酶 1μl 双蒸H2O 76μl 温度程序2分钟 95℃
-在琼脂糖凝胶检测到大小约2.2kb的片段。将反应物纯化并且随后用限制性核酸内切酶KpnI和HindIII切割；将产生的片段克隆至表达载体中。这产生随后用于KBD-D表达的载体pRee024。
KBD-D(SEQ ID No212)通过pRee024在大肠杆菌中的表达 -预培养物接种自含有pRee024转化的大肠杆菌菌株(例如TG10)的平板或甘油培养物。根据主培养的规模，在管或小烧瓶中接种LB培养基(约1:100)。
-抗生素根据所用菌株(对于用pRee024 TG10转化的大肠杆菌，氨苄青霉素100μg/ml)而使用。
-温育在250转/分钟和37℃进行。
-用预培养物约1:100接种主培养物，主培养物具有相应抗生素的LB培养基或合适的基本培养基。在250转/分钟和37℃温育。
-诱导用1mM IPTG在高于1 OD578nm时进行。温育温度随后降低至室温(约20℃)。将细胞在诱导2小时后离心下来(见图9)。
实施例19细胞破碎和包涵体纯化(pRee024) 不溶性表达的KBD-D(SEQ ID No213)(例如在包涵体中)如下纯化 来自实施例2的细胞沉淀重悬于含100mM NaCl的20mM磷酸盐缓冲液pH＝7.5并通过超声处理破碎。
将破碎的细胞再次离心(4℃，12000g，20分钟)。弃去上清液。将沉淀溶解在缓冲液A(10mM NaH2PO4，2mM KH2PO4，100mM NaCl，8M脲，5mM DTT)中。将混合物再次离心并将上清液施加到Ni螯合琼脂糖凝胶上。在施加后，用缓冲液A和20mM咪唑洗涤。用缓冲液B(10mMNaH2PO4，2mM KH2PO4，100mM NaCl，8M脲，5mM DTT，500mM咪唑)实施从柱中的洗脱。洗脱液收集在级分中并通过SDS-PAGE进行分析。包含纯化KBD-D的级分如实施例13中所述进行复性。
实施例20角蛋白结合结构域D(SEQ ID No213)的复性 不溶性表达的角蛋白结合结构域(例如来自包涵体)可以通过透析而复性并因此活化。过程如下 来自实施例19的包含纯化KBD-D的级分倾入透析袋(MWCO12-14KD)。
透析随后对1L的8M脲溶液进行约1小时。
随后，2L软化水经12小时时段通过蠕动泵连续地计量进入。
随后取出透析袋的内容物。以这种方式活化的KBD-D用于以下活性试验。
实施例21与皮肤的定性结合 使用视观定性试验以检验KBD-D(SEQ ID No213)是否与皮肤结合。
使用的溶液 封闭液在TBS中稀释的Western封闭试剂1921673 Roche(10×溶液) TBS20mM Tris；150mM NaCl pH 7.5 TTBSTBS+0.05％吐温20 第一步是将皮肤的外侧角蛋白层转移至稳定支持物上。为此目的，将透明胶带牢固地施加在脱毛的人皮肤上并再次取下。该试验可以直接在透明胶带上进行，或粘着的角蛋白层可以通过重新的粘着作用而转移到载玻片上。结合作用如下显示 -为了与多种试剂温育，转移至法尔肯(Falcon)容器，根据需要添加乙醇以脱脂，除去乙醇并干燥载玻片 -在室温与封闭缓冲液温育1小时 -用TTBS洗涤2次，每次5分钟 -用TBS洗涤1次，5分钟 -在室温与TBS/0.05％吐温20中待测试的KBD(与标签例如His6、HA等偶联)温育2-4小时 -除去上清液 -用TBS洗涤3次 -在室温与具有过氧化物酶缀合物的小鼠抗标签(His6或HA)单克隆抗体(在TBS+0.01％封闭剂中1:2000)[抗多聚组氨酸单克隆抗体-过氧化物酶缀合物，在小鼠中产生，冻干粉末，Sigma]温育1小时 -用TTBS洗涤2次，每次5分钟 -用TBS洗涤1次，5分钟 -添加磷酸酶底物(NBT-BCIP；Boehringer MA 1片/40ml水，持续2.5分钟；终止用水) -用肉眼或使用显微镜光学地检测有色沉淀。在用KBD-D处理的透明胶带上可见到蓝色沉淀，即抗多聚组氨酸-AP缀合物与KBD-D相互作用的反应物。作为阴性对照，透明胶带仅用缓冲液处理。在其中不能检测到明显的蓝色显色。这些结果表明KBD-D已经与透明胶带上的皮肤角蛋白结合。
实施例22与皮肤和毛发的定量性结合 为研究与KBD-B(SEQ ID No166)相比，KBD-D(SEQ ID No213)对皮肤和毛发的结合强度，开展定量试验。在该试验中，毛发首先与KBD-B或KBD-D温育并且洗去过量的KBD-B或-D。抗体-过氧化物酶缀合物随后通过KBD-B或-D的His标签而偶联。再次洗去未结合的抗体-过氧化物酶缀合物。结合的抗体-过氧化物酶缀合物可以将无色底物(TMB)转化成可在405nm处以光度测定方式测量的有色产物。吸收的强度指示结合的KBD-B或-D的量。
与皮肤的结合的试验用人角质形成细胞在微量滴定平板中如下进行。
-用PBS/0.05％吐温20洗涤2次 -添加在PBS中的1ml 1％BSA并且室温温育1小时，温和旋转运动(900转/分钟)。
-除去上清液 -添加在含0.05％吐温20的PBS中的100μg KBD；室温温育2小时并且温和旋转运动(900转/分钟)。
-除去上清液 -用PBS/0.05％吐温20洗涤3次 -在室温与1ml小鼠抗标签-His6单克隆抗体温育2-4小时，温和旋转运动(900转/分钟) -用PBS/0.05％吐温20洗涤3次 -添加过氧化物酶底物(1ml/Eppendorf容器；组成见下文)反应直至显示蓝色(约90秒)。
-反应用100μl 2M H2SO4终止。
-在405nm处测量吸收。
过氧化物酶底物(在用前不久制备) 0.1ml TMB溶液(在DMSO中的42mM TMB) +10ml底物缓冲液(0.1M乙酸钠，pH 4.9) +14.7μl H2O2 3％浓度 为与KBD-B相比，表征KBD-D的毛发结合作用，进行以下结合试验 5mg毛发(人)切成长度5mm的段并将其转移至Eppendorf容器(低蛋白质结合性)以便实施结合作用展示 -添加1ml乙醇以脱脂 -离心，除去乙醇并用H2O洗涤毛发 -离心，除去上清液 -添加在PBS中的1ml 1％BSA并且室温温育1小时，温和旋转运动。
-离心，除去上清液 -添加在1ml PBS/0.05％吐温20中待测试的KBD(与标签例如His6、HA等偶联)或对照蛋白；室温温育2小时，温和旋转运动 -离心，除去上清液 -用PBS/0.05％吐温20洗涤3次 -在室温与1ml带过氧化物酶缀合物的小鼠抗标签(His6或HA)单克隆抗体(在PBS/0.05％吐温20中1:2000)[抗多聚组氨酸单克隆抗体-过氧化物酶缀合物，在小鼠中产生，冻干粉末，Sigma]温育2-4小时，温和旋转运动 -用PBS/0.05％吐温20洗涤3次 -添加过氧化物酶底物(1ml/Eppendorf容器) -允许反应进行直至显示蓝色(90秒)。
-反应用100μl 2M H2SO4终止。
在405nm处测量吸收。
过氧化物酶底物(在用前不久制备) 0.1ml TMB溶液(在DMSO中的42mM TMB) +10ml底物缓冲液(0.1M乙酸钠pH 4.9) +14.7μl H2O2 3％浓度 BSA＝牛血清白蛋白 PBS＝磷酸盐缓冲的盐溶液 吐温20＝失水山梨醇聚氧乙烯醚单月桂酸酯，n约20 TMB＝3，5，3′，5′-四甲基联苯胺
表10aKBD-D或KBD-B对皮肤的定量性结合。所列吸收值是对(皮肤)表面加以标准化的值。

表10bKBD-D对毛发的定量性结合。所列吸收值是对表面加以标准化的值。

表10c以％表示的相对于KBD-D和KBD-B未处理的毛发或皮肤，在10％浓度SDS处理后，KBD-D和KBD-B对皮肤和毛发的定量性结合作用。
这些结果显示蛋白质KBD-D可以与毛发结合并且更强烈地与皮肤结合(见表10)。相对于KBD-B(SEQ ID No166)，KBD-D(SEQ ID No168)的结合作用仅更微弱地受到用多达10％浓度的SDS溶液洗涤影响(见表10a)。
实施例22aC16-KBD的微珠和膜 在实验性分析法中，意图显示融合蛋白C16-KBD是否可以形成组装形式并且与毛发结合。微珠从(透析后5mM KH2PO4的)水溶液中通过用1-3体积的1M KH2PO4缓冲液沉淀而产生。纯的C16蜘蛛丝蛋白形成具有大小分布约100nm-10μm的球状微粒(图9)。C16-KBD-B融合蛋白也形成球状粒子(图9)。
膜同样可以从(透析后5mM KH2PO4的)蛋白质水溶液或从包含10-50mg/ml C16-KBD-B-融合蛋白的六氟异丙醇溶液中产生。为此目的，在实验室中，将数毫升所述溶液吸量至聚苯乙烯表面(例如琼脂平板)并且使溶剂蒸发。这产生可以从所述表面上揭下的水溶性蛋白质膜。C16蜘蛛丝蛋白的特殊性质是这种水溶性膜可以随后进行加工并且因此变成水不溶性的。为此，将KH2PO4的膜随后用100％乙醇处理。C16蛋白质膜则不再是水溶性的。若C16-KBD-B溶液施加至聚苯乙烯表面，随后在干燥后，膜同样形成，在用乙醇处理后该膜变成水不溶性的。总之，可以确定自C16-KBD融合蛋白能产生装配形式。
实施例22b在毛发上的膜形成 目的旨在显示C16-KBD融合蛋白的膜形成是否在毛发上发生。为此，将毛发在相应的蛋白质溶液中温育或不与蛋白质温育、干燥并通过电子显微镜(SEM)进行分析(见图10)。
在用C16-KBD处理毛发后，显著地使发鳞片光滑，这表明C16-KBD-B融合蛋白在毛发表面上成膜。
下文描述包含根据实施例3制备的结合角蛋白的效应分子C16-KBD-B(根据SEQ ID No168)的本发明皮肤化妆制品。C16-KBD-B通过代表上述的全部其它KBD融合蛋白方式作为融合蛋白-KBD而在以下实施例中提及。本领域技术人员将理解全部其它所述的KBD融合蛋白也可以使用相应的KBD融合蛋白构建体(例如pRee024(图8)中根据(SEQ ID No212的)KBD-D蛋白质)根据实施例3加以制备，并且在下文所述的制品中使用。
实施例23在油/水型日护理用乳剂中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 1.7 十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 0.7 十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 2.0 二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 2.0 PEG-14聚二甲基硅氧烷 3.6 十六/十八醇 6.0 甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0 己二酸二丁酯 B 5.0 甘油 0.2 EDTA二钠 1.0 泛醇 适量 防腐剂 67.8 软化水 C 4.0 甘油三(辛酸/癸酸)酯，丙烯酸钠共聚物 D 0.2 磷酸抗坏血酸钠 1.0 生育酚醋酸酯 0.2 防风根醇 1.0 甘油三(辛酸/癸酸)酯，抗坏血酸钠，生育酚，视黄醇 1.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 E 适量 氢氧化钠 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 1.7十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 0.7十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 2.0二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 2.0PEG-14聚二甲基硅氧烷 3.6十六/十八醇 6.0甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0己二酸二丁酯 B 5.0甘油 0.2EDTA二钠 1.0泛醇 适量 防腐剂 63.8 软化水 C 4.0甘油三(辛酸/癸酸)酯，丙烯酸钠共聚物 D 0.2磷酸抗坏血酸钠 1.0生育酚醋酸酯 0.2防风根醇 1.0甘油三(辛酸/癸酸)酯，抗坏血酸钠，生育酚，视黄醇 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 E 适量 氢氧化钠 制备对A相和B相彼此独立地加热至约80℃。将B相搅拌至A相中并均化。将C相搅拌至合并的A相和B相中并再次均化。冷却至约40℃，同时搅拌，添加D相，使用E相调节pH至约6.5，均化并冷却至室温，同时搅拌。
注意在无保护性气体下制备该制剂。装瓶必须在不透氧的包装物例如铝管内进行。
实施例24在油/水型保护性日霜中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 1.7十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 0.7十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 2.0二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 2.0PEG-14聚二甲基硅氧烷 3.6十六/十八醇 6.0甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0己二酸二丁酯 B 5.0甘油 0.2EDTA二钠 1.0泛醇 适量 防腐剂 68.6 软化水 C 4.0甘油三(辛酸/癸酸)酯，丙烯酸钠共聚物 D 1.0磷酸抗坏血酸钠 1.0生育酚醋酸酯 0.2防风根醇 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 E 适量 氢氧化钠 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 1.7十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 0.7十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 2.0二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 2.0PEG-14聚二甲基硅氧烷 3.6十六/十八醇 6.0甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0己二酸二丁酯 B 5.0甘油 0.2EDTA二钠 1.0泛醇 适量 防腐剂 64.6 软化水 C 4.0甘油三(辛酸/癸酸)酯，丙烯酸钠共聚物 D 1.0磷酸抗坏血酸钠 1.0生育酚醋酸酯 0.2防风根醇 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 E 适量 氢氧化钠 制备对A相和B相彼此独立地加热至约80℃。将B相搅拌至A相中并均化。将C相并入合并的A相和B相中并均化。冷却至约40℃，同时搅拌。添加D相，使用E相调节pH至约6.5并均化。冷却至室温，同时搅拌。
实施例25在油/水型面部清洁洗液中使用KBD AI 1％ ％成分(INCI) A 10.0乙基己酸十六/十八烷基酯 10.0甘油三(辛酸/癸酸)酯 1.5 环状五聚硅氧烷，环状六聚硅氧烷 2.0 聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油 B 3.5 甘油三(辛酸/癸酸)酯，丙烯酸钠共聚物 C 1.0 生育酚醋酸酯 0.2 防风根醇 适量防腐剂 适量芳香油 D 3.0 聚季铵盐-44 0.5 椰油基三甲基硫酸二甲铵 0.5 十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 2.0 泛醇，丙二醇 4.0 丙二醇 0.1 EDTA二钠 1.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 60.7软化水 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 10.0乙基己酸十六/十八烷基酯 10.0甘油三(辛酸/癸酸)酯 1.5 环状五聚硅氧烷，环状六聚硅氧烷 2.0 聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油 B 3.5 甘油三(辛酸/癸酸)酯，丙烯酸钠共聚物 C 1.0 生育酚醋酸酯 0.2 防风根醇 适量防腐剂 适量 芳香油 D 3.0聚季铵盐-44 0.5椰油基三甲基硫酸二甲铵 0.5十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 2.0泛醇，丙二醇 4.0丙二醇 0.1EDTA二钠 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 56.7 软化水 制备溶解A相。搅拌B相入A相中。将C相并入合并的A相和B相中。将D相溶解，搅拌至合并的A、B和C相中并均化。此后搅拌15分钟。
实施例26在日用身体护理喷雾剂中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 3.0甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 1.0聚季铵盐-44 3.0丙二醇 2.0泛醇，丙二醇 1.0环状五聚硅氧烷，环状六聚硅氧烷 10.0 辛基十二烷醇 0.5PVP 10.0 甘油三(辛酸/癸酸)酯 3.0苯甲酸C12-15烷基酯 3.0甘油 1.0生育酚醋酸酯 0.3防风根醇 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 59.2 醇 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 3.0甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 1.0聚季铵盐-44 3.0丙二醇 2.0泛醇，丙二醇 1.0环状五聚硅氧烷，环状六聚硅氧烷 10.0 辛基十二烷醇 0.5PVP 10.0 甘油三(辛酸/癸酸)酯 3.0苯甲酸C12-15烷基酯 3.0甘油 1.0生育酚醋酸酯 0.3防风根醇 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 55.2 醇 制备称量A相的各组分并溶解直至澄清。
实施例27在皮肤护理凝胶中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 3.6聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油 15.0 醇 0.1防风根醇 0.5生育酚醋酸酯 适量 芳香油 B 3.0泛醇 0.6卡波姆 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 75.4 软化水 C 0.8三乙醇胺 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 3.6聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油 15.0 醇 0.1防风根醇 0.5生育酚醋酸酯 适量 芳香油 B 3.0泛醇 0.6卡波姆 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 71.4 软化水 C 0.8三乙醇胺 制备将A相溶解直至澄清。使得B相溶胀并用C相中和。将A相搅拌至均化的B相内并且均化。
实施例28在剃须后用洗液中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 10.0基己酸十六/十八烷基酯 5.0 生育酚醋酸酯 1.0 防风根醇 0.1 芳香油 0.3 丙烯酸酯/丙烯酸C10-30烷基酯交联聚合物 B 15.0醇 1.0 泛醇 3.0 甘油 1.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.1 三乙醇胺 63.5软化水 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 10.0乙基己酸十六/十八烷基酯 5.0 生育酚醋酸酯 1.0 防风根醇 0.1 芳香油 0.3 丙烯酸酯/丙烯酸C10-30烷基酯交联聚合物 B 15.0醇 1.0 泛醇 3.0 甘油 5.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.1 三乙醇胺 59.5软化水 制备将A相的组分混合。将B相溶解，并入A相中并且均化。
实施例29在日晒后用洗液中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 0.4丙烯酸酯/丙烯酸C10-30烷基酯交联聚合物 15.0 乙基己酸十六/十八烷基酯 0.2防风根醇 1.0生育酚醋酸酯 适量 芳香油 B 1.0泛醇 15.0 醇 3.0甘油 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 63.2 软化水 C 0.2三乙醇胺 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 0.4丙烯酸酯/丙烯酸C10-30烷基酯交联聚合物 15.0 乙基己酸十六/十八烷基酯 0.2防风根醇 1.0生育酚醋酸酯 适量 芳香油 B 1.0泛醇 15.0 醇 3.0甘油 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 59.2 软化水 C 0.2三乙醇胺 制备将A相的组分混合。搅拌B相入A相中并均化。用C相中和并再次均化。
实施例30在防晒液中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 4.5甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 3.02-氰基-3，3-二苯基丙烯酸-2-乙基己酯 2.5苹果酸双C12-13烷基酯 0.5生育酚醋酸酯 4.0聚甘油(3)甲基葡萄糖二硬脂酸酯 B 3.5异壬酸十六/十八烷酯 1.0VP/二十碳烯共聚物 5.0异十六烷 2.5苹果酸双C12-13烷基酯 3.0二氧化钛，三甲氧基辛酰硅烷 C 5.0甘油 1.0十六/十八烷基硫酸钠 0.5黄原酸胶 59.7 软化水 D 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 1.0苯氧乙醇，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸乙酯，对羟基苯甲酸丁酯，对羟基苯甲酸丙酯，对羟基苯甲酸异丁酯 0.3防风根醇 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 4.5甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 3.02-氰基-3，3-二苯基丙烯酸-2-乙基己酯 2.5苹果酸双C12-13烷基酯 0.5生育酚醋酸酯 4.0聚甘油(3)甲基葡萄糖二硬脂酸酯 B 3.5异壬酸十六/十八烷酯 1.0VP/二十碳烯共聚物 5.0异十六烷 2.5苹果酸双C12-13烷基酯 3.0二氧化钛，三甲氧基辛酰硅烷 C 5.0甘油 1.0十六/十八烷基硫酸钠 0.5黄原酸胶 55.7 软化水 D 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 1.0苯氧乙醇，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸乙酯，对羟基苯甲酸丁酯，对羟基苯甲酸丙酯，对羟基苯甲酸异丁酯 0.3防风根醇 制备将A相和B相的组分彼此独立地加热至约80℃。将B相搅拌至A相中并均化。将C相加热至约80℃并且搅拌至合并的A相和B相中，同时均化。冷却至约40℃，同时搅拌，添加D相并再次均化。
实施例31在油/水型防晒液中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 3.0甘油三山萮酸酯 2.0十六/十八醇 2.0乙基己酸十六/十八烷基酯 5.0甲氧基肉桂酸乙基己酯 1.0乙基己基三嗪酮 1.0VP/二十碳烯共聚物 7.0肉豆蔻酸异丙酯 B 5.0氧化锌，三乙氧基辛酰硅烷 C 0.2黄原酸胶 0.5丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物， 角鲨烷，失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚硬脂酸酯 0.2EDTA二钠 5.0丙二醇 0.5泛醇 60.9 软化水 D 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5苯氧乙醇，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸乙酯，对羟基苯甲酸丁酯，对羟基苯甲酸丙酯，对羟基苯甲酸异丁酯 1.0生育酚醋酸酯 0.2防风根醇 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 3.0甘油三山萮酸酯 2.0十六/十八醇 2.0乙基己酸十六/十八烷基酯 5.0甲氧基肉桂酸乙基己酯 1.0乙基己基三嗪酮 1.0VP/二十碳烯共聚物 7.0肉豆蔻酸异丙酯 B 5.0氧化锌，三乙氧基辛酰硅烷 C 0.2黄原酸胶 0.5丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物， 角鲨烷，失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚硬脂酸酯 0.2EDTA二钠 5.0丙二醇 0.5泛醇 56.9 软化水 D 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5苯氧乙醇，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸乙酯，对羟基苯甲酸丁酯，对羟基苯甲酸丙酯，对羟基苯甲酸异丁酯 1.0生育酚醋酸酯 0.2防风根醇 制备加热A相至约80℃，搅拌到B相中并且均化3分钟。同样地加热C相至80℃并且搅拌至合并的A相和B相中，同时均化。冷却至约40℃，搅拌到D相中并再次均化。
实施例32在油/水型防晒液中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 3.5十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 1.5十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 7.5甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 2.0环状五聚硅氧烷，环状六聚硅氧烷 0.5蜂蜡 3.0十六/十八醇 10.0 甘油三(辛酸/癸酸)酯 B 5.0二氧化钛，二氧化硅，聚甲基硅氧烷，氧化铝 C 3.0甘油 0.2EDTA二钠 0.3黄原酸胶 1.0癸基葡糖苷 2.0泛醇，丙二醇 56.3 软化水 D 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 1.0生育酚醋酸酯 0.2防风根醇 适量 芳香油 适量 防腐剂 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 3.5十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 1.5十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 7.5甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 2.0环状五聚硅氧烷，环状六聚硅氧烷 0.5蜂蜡 3.0十六/十八醇 10.0 甘油三(辛酸/癸酸)酯 B 5.0二氧化钛，二氧化硅，聚甲基硅氧烷，氧化铝 C 3.0甘油 0.2EDTA二钠 0.3黄原酸胶 1.0癸基葡糖苷 2.0泛醇，丙二醇 52.3 软化水 D 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 1.0生育酚醋酸酯 0.2防风根醇 适量 芳香油 适量 防腐剂 制备加热A相至约80℃，搅拌到B相中并且均化3分钟。同样地加热C相至80℃并且搅拌至合并的A相和B相中，同时均化。冷却至约40℃，搅拌到D相中并再次均化。
实施例33在足香脂中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 5.0乙基己酸十六/十八烷基酯 4.0鲸蜡醇 4.0甘油硬脂酸酯 5.0矿物油 0.2薄荷醇 0.5樟脑 B 69.3 软化水 适量 防腐剂 C 1.0防风根醇 1.0生育酚醋酸酯 D 1.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 5.0 金缕梅提取物 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 5.0乙基己酸十六/十八烷基酯 4.0鲸蜡醇 4.0甘油硬脂酸酯 5.0矿物油 0.2薄荷醇 0.5樟脑 B 65.3 软化水 适量 防腐剂 C 1.0防风根醇 1.0生育酚醋酸酯 D 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 5.0金缕梅提取物 制备将A相和B相的组分彼此独立地加热至约80℃。搅拌B相入A相中，同时均化。冷却至约40℃，同时搅拌，添加C相和D相并且随后短暂均化。冷却至室温，同时搅拌。
实施例34在含防风根醇的水/油乳剂中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 6.0聚氧乙烯(7)氢化蓖麻油 8.0乙基己酸十六/十八烷基酯 5.0肉豆蔻酸异丙酯 15.0 矿物油 0.3硬脂酸镁 0.3硬脂酸铝 2.0PEG-45/十二烷基二醇共聚物 B 5.0甘油 0.7硫酸镁 55.6 软化水 C 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5生育酚醋酸酯 0.6防风根醇 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 6.0聚氧乙烯(7)氢化蓖麻油 8.0乙基己酸十六/十八烷基酯 5.0肉豆蔻酸异丙酯 15.0 矿物油 0.3硬脂酸镁 0.3硬脂酸铝 2.0PEG-45/十二烷基二醇共聚物 B 5.0甘油 0.7硫酸镁 51.6 软化水 C 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5生育酚醋酸酯 制备对A相和B相彼此独立地加热至约85℃。将B相搅拌至A相中并均化。冷却至约40℃，同时搅拌，添加C相并且短暂再次均化。冷却至室温，同时搅拌。
用于专利性角蛋白结合结构域-毛发护理的制剂列表 实施例35含定型剂(setting agent)的泡沫调理剂 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 10.0PVP/VA共聚物 0.2 羟乙基鲸蜡基二甲基磷酸铵 0.2 十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 0.5 聚二甲基硅氧烷共聚醇 适量芳香油 10.0醇 1.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 68.1软化水 10.0丙烷/丁烷 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 10.0PVP/VA共聚物 0.2 羟乙基鲸蜡基二甲基磷酸铵 0.2 十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 0.5 聚二甲基硅氧烷共聚醇 适量芳香油 10.0醇 5.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 64.1软化水 10.0丙烷/丁烷 制备一起称重A相的各组分，搅拌直至每种组分已经溶解并且装瓶。
实施例36泡沫调理剂 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 1.0羟乙基纤维素/二烯丙基二甲基氯化铵共聚物 0.5羟乙基鲸蜡基二甲基磷酸铵 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 适量 芳香油 适量 防腐剂 91.5 软化水 6.0丙烷/丁烷 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 1.0 羟乙基纤维素/二烯丙基二甲基氯化铵共聚物 0.5 羟乙基鲸蜡基二甲基磷酸铵 5.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 适量 芳香油 适量 防腐剂 87.5 软化水 6.0 丙烷/丁烷 制备一起称重A相的各组分，搅拌直至每种组分已经溶解以产生澄清溶液并且装瓶。
实施例37泡沫调理剂 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 1.0聚季铵盐-11 0.5羟乙基鲸蜡基二甲基磷酸铵 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 适量 芳香油 适量 防腐剂 91.5 软化水 6.0丙烷/丁烷 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 1.0聚季铵盐-11 0.5羟乙基鲸蜡基二甲基磷酸铵 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 适量 芳香油 适量 防腐剂 87.5 软化水 6.0丙烷/丁烷 制备称重A相的各组分，搅拌直至每种组分已经溶解以产生澄清溶液并且装瓶。
实施例38定发型泡沫 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 0.5月桂基聚氧乙烯(4)醚 适量 芳香油 B 77.3软化水 10.0聚季铵盐-28 1.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5 聚二甲基硅氧烷共聚醇 0.2 十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 0.2 泛醇 0.1 PEG-25 PABA 0.2 羟乙基纤维素 C 10.0HFC 152 A AI 5％ ％ 成分(INCI) A 0.5月桂基聚氧乙烯(4)醚 适量 芳香油 B 73.3 软化水 10.0 聚季铵盐-28 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5聚二甲基硅氧烷共聚醇 0.2十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 0.2泛醇 0.1PEG-25 PABA 0.2羟乙基纤维素 C 10.0 HFC 152 A 制备将A相的组分混合。逐个添加B相的各组分并且溶解。随C相装瓶。
实施例39定发型泡沫 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 2.0椰油基三甲基硫酸二甲铵 适量 芳香油 B 78.5 软化水 6.7丙烯酸酯共聚物 0.6AMP 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5聚二甲基硅氧烷共聚醇 0.2十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 0.2泛醇 0.1PEG-25 PABA 0.2羟乙基纤维素 C 10.0 HFC 152 A AI 5％ ％ 成分(INCI) A 2.0椰油基三甲基硫酸二甲铵 适量 芳香油 B 74.5 软化水 6.7丙烯酸酯共聚物 0.6AMP 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5聚二甲基硅氧烷共聚醇 0.2十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 0.2泛醇 0.1PEG-25 PABA 0.2羟乙基纤维素 C 10.0 HFC 152 A 制备将A相的组分混合。逐个添加B相的各组分并且溶解。随C相装瓶。
实施例40定发型泡沫 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 2.0椰油基三甲基硫酸二甲铵 适量 芳香油 B 7.70 聚季铵盐-44 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 适量 防腐剂 79.3 软化水 C 10.0 丙烷/丁烷 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 2.0椰油基三甲基硫酸二甲铵 适量 芳香油 B 7.70 聚季铵盐-44 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 适量 防腐剂 75.3 软化水 C 10.0 丙烷/丁烷 制备将A相的组分混合。溶解B相的组分直至澄清，随后搅拌B相入A相中。调节pH至6-7，随C相装瓶。
实施例41定发型泡沫 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 2.00椰油基三甲基硫酸二甲铵 适量芳香油 B 72.32 软化水 2.00VP/丙烯酸酯/甲基丙烯酸月桂醇酯共聚物 0.53AMP 1.00具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.20十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 0.50泛醇 0.055-苯甲酰基-4-羟基-2-甲氧基苯磺酸 0.20氨基封端的聚二甲基硅氧烷，十六烷基三甲基氯化铵，十三烷基聚氧乙烯(12)醚 15.00 醇 C 0.20羟乙基纤维素 D 6.00丙烷/丁烷 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 2.00椰油基三甲基硫酸二甲铵 适量芳香油 B 68.32 软化水 2.00VP/丙烯酸酯/甲基丙烯酸月桂醇酯共聚物 0.53AMP 5.00具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.20十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 0.50泛醇 0.055-苯甲酰基-4-羟基-2-甲氧基苯磺酸 0.20氨基封端的聚二甲基硅氧烷，十六烷基三甲基氯化铵，十三烷基聚氧乙烯(12)醚 15.00醇 C 0.20 羟乙基纤维素 D 6.00 丙烷/丁烷 制备将A相的组分混合。逐个添加B相的各组分并且溶解。将C相溶解在A与B的混合物中，随后调节pH至6-7。随D相装瓶。
实施例42定发型泡沫 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 2.00十六烷基三甲基氯化铵 适量芳香油 B 67.85 软化水 7.00羟乙基纤维素/二烯丙基二甲基氯化铵共聚物6 1.00具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.20十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 0.50泛醇 0.055-苯甲酰基-4-羟基-2-甲氧基苯磺酸 0.20氨基封端的聚二甲基硅氧烷，十六烷基三甲基氯化铵，十三烷基聚氧乙烯(12)醚 15.00 醇 C 0.20羟乙基纤维素 D 6.00丙烷/丁烷 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 2.00十六烷基三甲基氯化铵 适量芳香油 B 63.85 软化水 7.00羟乙基纤维素/二烯丙基二甲基氯化铵共聚物6 5.00具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.20十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 0.50泛醇 0.055-苯甲酰基-4-羟基-2-甲氧基苯磺酸 0.20氨基封端的聚二甲基硅氧烷，十六烷基三甲基氯化铵，十三烷基聚氧乙烯(12)醚 15.00 醇 C 0.20羟乙基纤维素 D 6.00丙烷/丁烷 制备将A相的组分混合。逐个添加B相的各组分并且溶解。将C相溶解在A与B的混合物中，随后调节pH至6-7。随D相装瓶。
实施例43定发型泡沫 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 适量聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油 适量芳香油 85.5软化水 B 7.0 聚苯乙烯磺酸钠 1.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5 十六烷基三甲基溴化铵 适量防腐剂 C 6.0 丙烷/丁烷 定发型泡沫 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 适量 聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油 适量 芳香油 81.5 软化水 B 7.0聚苯乙烯磺酸钠 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5十六烷基三甲基溴化铵 适量 防腐剂 C 6.0丙烷/丁烷 制备使A相增溶。将B相称重至A相中并溶解直至澄清。调节pH至 6-7，随C相装瓶。
实施例40定发型泡沫 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 适量 聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油 适量 芳香油 92.0 软化水 B 0.5聚季铵盐-10 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5十六烷基三甲基溴化铵 适量 防腐剂 C 6.0丙烷/丁烷 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 适量聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油 适量芳香油 88.0软化水 B 0.5 聚季铵盐-10 5.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5 十六烷基三甲基溴化铵 适量防腐剂 C 6.0 丙烷/丁烷 制备使A相增溶。将B相称重至A相中并溶解直至澄清。调节pH至6-7，随C相装瓶。
实施例44定发型泡沫 AI1 ％ ％ 成分(INCI) A 适量 聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油 适量 芳香油 82.5 软化水 B 10.0 聚季铵盐-16 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5羟乙基鲸蜡基二甲基磷酸铵 适量 防腐剂 C 6.0丙烷/丁烷 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 适量 聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油 适量 芳香油 78.5 软化水 B 10.0聚季铵盐-16 5.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5 羟乙基鲸蜡基二甲基磷酸铵 适量防腐剂 C 6.0 丙烷/丁烷 制备使A相增溶。将B相称重至A相中并溶解直至澄清。调节pH至6-7，随C相装瓶。
实施例45定发型泡沫 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 2.0椰油基三甲基硫酸二甲铵 适量 芳香油 B 84.0 软化水 2.0脱乙酰壳多糖 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5聚二甲基硅氧烷共聚醇 0.2十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 0.2泛醇 0.1PEG-25 PABA C 10.0 HFC 152 A AI 5％ ％成分(INCI) A 2.0 椰油基三甲基硫酸二甲铵 适量 芳香油 B 80.0 软化水 2.0 脱乙酰壳多糖 5.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5 聚二甲基硅氧烷共聚醇 0.2 十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 0.2 泛醇 0.1 PEG-25 PABA C 10.0HFC 152 A 制备将A相的组分混合。逐个添加B相的各组分并且溶解。随C相装瓶。
实施例46护理洗发剂 AI 1％ ％成分(INCI) A 30.0 月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠 6.0 N-椰油酰胺基乙基-N-羟基乙基氨基乙酸钠 6.0 椰油酰氨基丙基甜菜碱 3.0 月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠，二硬脂酸乙二醇酯，椰油酰基单乙醇胺 ，月桂基聚氧乙烯(10)醚 1.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 7.7 聚季铵盐-44 2.0 氨基封端的聚二甲基硅氧烷 适量 芳香油 适量 防腐剂 1.0 氯化钠 43.3 软化水 B 适量 柠檬酸 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 30.0 月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠 6.0 N-椰油酰胺基乙基-N-羟基乙基氨基乙酸钠 6.0 椰油酰氨基丙基甜菜碱 3.0 月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠，二硬脂酸乙二醇酯，椰油酰基单乙醇胺 ，月桂基聚氧乙烯(10)醚 5.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 7.7 聚季铵盐-44 2.0 氨基封端的聚二甲基硅氧烷 适量 芳香油 适量 防腐剂 1.0 氯化钠 39.3 软化水 B 适量 柠檬酸 制备将A相的组分混合并溶解。用柠檬酸调节pH至6-7。
实施例47淋浴凝胶 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 40.0月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠 5.0 癸基葡糖苷 5.0 椰油酰氨基丙基甜菜碱 1.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 1.0 泛醇 适量芳香油 适量防腐剂 2.0 氯化钠 46.0软化水 B 适量柠檬酸 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 40.0月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠 5.0 癸基葡糖苷 5.0 椰油酰氨基丙基甜菜碱 5.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 1.0 泛醇 适量芳香油 适量防腐剂 2.0 氯化钠 42.0软化水 B 适量柠檬酸 制备将A相的组分混合并溶解。用柠檬酸调节pH至6-7。
实施例48洗发剂 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 40.0 月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠 5.0C12-15烷基聚氧乙烯(15)醚磺酸钠 5.0癸基葡糖苷 适量 芳香油 0.1植烷三醇 44.6 软化水 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.3聚季铵盐-10 1.0泛醇 适量 防腐剂 1.0 月桂基聚氧乙烯(3)醚 2.0 氯化钠 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 40.0月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠 5.0 C12-15烷基聚氧乙烯(15)醚磺酸钠 5.0 癸基葡糖苷 适量芳香油 0.1 植烷三醇 40.6软化水 5.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.3 聚季铵盐-10 1.0 泛醇 适量防腐剂 1.0 月桂基聚氧乙烯(3)醚 2.0 氯化钠 制备将A相的组分混合并溶解。用柠檬酸调节pH至6-7。
实施例49洗发剂 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 15.00 椰油酰氨基丙基甜菜碱 10.00 N-椰油酰胺基乙基-N-羟基乙基氨基二乙酸二钠 5.00失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚月桂酸酯 5.00癸基葡糖苷 适量芳香油 适量防腐剂 1.00 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.15 瓜耳羟丙基三甲基氯化铵 2.00 月桂基聚氧乙烯(3)醚 58.00软化水 适量 柠檬酸 B 3.00 二硬脂酸聚乙二醇(150)酯 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 15.00椰油酰氨基丙基甜菜碱 10.00N-椰油酰胺基乙基-N-羟基乙基氨基二乙酸二钠 5.00 失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚月桂酸酯 5.00 癸基葡糖苷 适量 芳香油 适量 防腐剂 5.00 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.15 瓜耳羟丙基三甲基氯化铵 2.00 月桂基聚氧乙烯(3)醚 54.00软化水 适量 柠檬酸 B 3.00 二硬脂酸聚乙二醇(150)酯 制备称量A相的各组分并溶解。调节pH至6-7。添加B相并且加热至约50℃。冷却至室温，同时搅拌。
实施例50保湿性身体护理霜 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 2.0 十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 2.0 十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 3.0 乙基己酸十六/十八烷基酯 1.0 聚二甲基硅氧烷 4.0 十六/十八醇 3.0 自乳化型硬脂酸甘油酯 5.0 矿物油 4.0 西蒙得木(霍霍巴)籽油 3.0 矿物油，羊毛脂醇 B 5.0 丙二醇 1.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 1.0 泛醇 0.5 硅酸铝镁 q.s 防腐剂 65.5 软化水 C 适量 芳香油 D 适量 柠檬酸 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 3.0乙基己酸十六/十八烷基酯 1.0聚二甲基硅氧烷 4.0十六/十八醇 3.0自乳化型硬脂酸甘油酯 5.0矿物油 4.0西蒙得木(霍霍巴)籽油 3.0矿物油，羊毛脂醇 B 5.0丙二醇 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 1.0泛醇 0.5硅酸铝镁 q.s防腐剂 61.5 软化水 C 适量 芳香油 D 适量 柠檬酸 制备A相和B相分别加热至约80℃。短暂预均化B相，随后将B相搅拌至A相中并再次均化。冷却至约40℃，添加C相并且彻底再次均化用柠檬酸调节pH至6-7。
实施例51保湿性身体护理霜 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 6.0聚氧乙烯(7)氢化蓖麻油 10.0 乙基己酸十六/十八烷基酯 5.0肉豆蔻酸异丙酯 7.0矿物油 0.5牛油树脂(牛油树) 0.5硬脂酸铝 0.5硬脂酸镁 0.2防风根醇 0.7二氢化牛油基二甲基氯化铵-水辉石 B 5.0双丙二醇 0.7硫酸镁 适量 防腐剂 62.9软化水 C 适量芳香油 1.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 6.0聚氧乙烯(7)氢化蓖麻油 10.0 乙基己酸十六/十八烷基酯 5.0肉豆蔻酸异丙酯 7.0矿物油 0.5牛油树脂(牛油树) 0.5硬脂酸铝 0.5硬脂酸镁 0.2防风根醇 0.7二氢化牛油基二甲基氯化铵-水辉石 B 5.0双丙二醇 0.7硫酸镁 适量 防腐剂 58.9 软化水 C 适量 芳香油 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 制备A相和B相分别加热至约80℃。将B相搅拌至A相中并均化。冷却至约40℃，同时搅拌，添加C相并再次均化。允许冷却至室温，同时搅拌。
实施例52湿粉底-油/水型 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 6.0甘油硬脂酸酯 1.0鲸蜡醇 8.0矿物油 7.0乙基己酸十六/十八烷基酯 0.2聚二甲基硅氧烷 B 3.0丙二醇 1.0泛醇 适量 防腐剂 61.9 软化水 C 0.1防风根醇 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 适量 芳香油 D 5.7C.I.77891，二氧化钛 1.1氧化铁 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 6.0甘油硬脂酸酯 1.0鲸蜡醇 8.0矿物油 7.0乙基己酸十六/十八烷基酯 0.2聚二甲基硅氧烷 B 3.0丙二醇 1.0泛醇 适量 防腐剂 57.9 软化水 C 0.1防风根醇 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 适量 芳香油 D 5.7C.I.77891，二氧化钛 1.1氧化铁 制备A相和B相分别加热至约80℃。将B相搅拌至A相中并均化。冷却至约40℃，同时搅拌，添加C相和D相并且彻底再次均化。允许冷却至室温，同时搅拌。
实施例53 下文描述本发明的皮肤化妆制品，其包含根据实施例3制备的结合角蛋白的效应分子(根据SEQ ID No168的C16-KBD-B)。所述的结合角蛋白的融合蛋白作为占水溶液重量的约5重量％浓度使用。以下数据是重量份。
清洁洗发剂
洗发剂 清洁调理洗发剂

泡沫油/水乳剂 带珠光的调理洗发剂
调节pH至6.0 清洁调理洗发剂

调节pH至6.0 具有体积效应的清洁调理洗发剂
调节pH至6.0 凝胶乳霜


OW防晒制剂


水分散体


WO防晒乳剂


条状化妆品





凝胶乳霜
OW自我晒黑制剂 OW粉底(make-up) 自我晒黑用水分散剂

日光浴后水分散体

WO乳剂

固体稳定化乳剂 (皮克林乳剂) 条状化妆品

自我晒黑PIT乳剂

油凝胶剂 实施例54 在以下制剂中，描述了包含至少一种无机颜料，优选氧化锌和/或二氧化钛与有机UV-A和UV-B滤质的组合的化妆性防晒制品。
以下所述的制剂以本领域技术人员已知的惯用方式制备。
融合蛋白C16-KBD-B(根据SEQ ID No168)的含量指100％的有效成分。本发明的有效成分可以以纯粹形式或水溶液形式使用。在水溶液的情况下，软化水在具体制剂中的含量必须进行调整。
本领域技术人员将理解所提及的全部其它KBD融合蛋白也可以使用相应的KBD融合蛋白构建体(例如pRee024(图8)中根据(SEQ ID No212的)KBD-D蛋白质)根据实施例3加以制备，并且在下文所述的制品中使用。C16-KBD-B通过代表上述的全部其它KBD融合蛋白方式作为融合蛋白-KBD而在以下实施例中提及。








下文描述了本发明的皮肤化妆制品，其包含与实施例3相类似而制备的结合角蛋白的效应分子C16-KBD-D(根据pRee024(图8)中的SEQ ID No212)。C16-KBD-B通过代表上述的全部其它KBD融合蛋白方式作为融合蛋白-KBD而在以下实施例中提及。本领域技术人员将理解所提及的全部其它KBD融合蛋白也可以使用相应的KBD融合蛋白构建体根据实施例3加以制备，并且在下文所述的制品中使用。
实施例55在油/水型日护理用乳剂中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 1.7十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 0.7十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 2.0二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 2.0PEG-14聚二甲基硅氧烷 3.6十六/十八醇 6.0甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0己二酸二丁酯 B 5.0甘油 0.2EDTA二钠 1.0 泛醇 适量防腐剂 67.8软化水 C 4.0 甘油三(辛酸/癸酸)酯，丙烯酸钠共聚物 D 0.2 磷酸抗坏血酸钠 1.0 生育酚醋酸酯 0.2 防风根醇 1.0 甘油三(辛酸/癸酸)酯，抗坏血酸钠，生育酚，视黄醇 1.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 E 适量氢氧化钠 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 1.7十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 0.7十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 2.0二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 2.0PEG-14聚二甲基硅氧烷 3.6十六/十八醇 6.0甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0己二酸二丁酯 B 5.0甘油 0.2EDTA二钠 1.0泛醇 适量 防腐剂 63.8 软化水 C 4.0甘油三(辛酸/癸酸)酯，丙烯酸钠共聚物 D 0.2磷酸抗坏血酸钠 1.0生育酚醋酸酯 0.2防风根醇 1.0甘油三(辛酸/癸酸)酯，抗坏血酸钠，生育酚，视黄醇 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 E 适量 氢氧化钠 制备对A相和B相彼此独立地加热至约80℃。将B相搅拌至A相中并均化。将C相搅拌至合并的A相和B相中并再次均化。冷却至约40℃，同时搅拌，添加D相，使用E相调节pH至约6.5，均化并冷却至室温，同时搅拌。
注意在无保护性气体下制备该制剂。装瓶必须在不透氧的包装物例如铝管内进行。
实施例56在油/水型保护性日霜中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 1.7十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 0.7十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 2.0二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 2.0PEG-14聚二甲基硅氧烷 3.6十六/十八醇 6.0甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0己二酸二丁酯 B 5.0甘油 0.2EDTA二钠 1.0泛醇 适量 防腐剂 68.6软化水 C 4.0 甘油三(辛酸/癸酸)酯，丙烯酸钠共聚物 D 1.0 磷酸抗坏血酸钠 1.0 生育酚醋酸酯 0.2 防风根醇 1.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 E 适量氢氧化钠 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 1.7十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 0.7十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 2.0二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 2.0PEG-14聚二甲基硅氧烷 3.6十六/十八醇 6.0甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0己二酸二丁酯 B 5.0甘油 0.2EDTA二钠 1.0泛醇 适量 防腐剂 64.6 软化水 C 4.0甘油三(辛酸/癸酸)酯，丙烯酸钠共聚物 D 1.0磷酸抗坏血酸钠 1.0生育酚醋酸酯 0.2防风根醇 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 E 适量 氢氧化钠 制备对A相和B相彼此独立地加热至约80℃。将B相搅拌至A相中并均化。将C相并入合并的A相和B相中并均化。冷却至约40℃，同时搅拌。添加D相，使用E相调节pH至约6.5并均化。冷却至室温，同时搅拌。
实施例57在油/水型面部清洁洗液中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 10.0乙基己酸十六/十八烷基酯 10.0甘油三(辛酸/癸酸)酯 1.5 环状五聚硅氧烷，环状六聚硅氧烷 2.0 聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油 B 3.5 甘油三(辛酸/癸酸)酯，丙烯酸钠共聚物 C 1.0 生育酚醋酸酯 0.2 防风根醇 适量防腐剂 适量芳香油 D 3.0 聚季铵盐-44 0.5 椰油基三甲基硫酸二甲铵 0.5 十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 2.0 泛醇，丙二醇 4.0 丙二醇 0.1 EDTA二钠 1.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 60.7软化水 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 10.0乙基己酸十六/十八烷基酯 10.0甘油三(辛酸/癸酸)酯 1.5 环状五聚硅氧烷，环状六聚硅氧烷 2.0 聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油 B 3.5 甘油三(辛酸/癸酸)酯，丙烯酸钠共聚物 C 1.0 生育酚醋酸酯 0.2 防风根醇 适量防腐剂 适量芳香油 D 3.0 聚季铵盐-44 0.5 椰油基三甲基硫酸二甲铵 0.5 十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 2.0 泛醇，丙二醇 4.0 丙二醇 0.1 EDTA二钠 5.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 56.7软化水 制备溶解A相。搅拌B相入A相中。将C相并入合并的A相和B相中。将D相溶解，搅拌至合并的A、B和C相中并均化。此后搅拌15分钟。
实施例58在日用身体护理喷雾剂中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 3.0甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 1.0聚季铵盐-44 3.0丙二醇 2.0泛醇，丙二醇 1.0环状五聚硅氧烷，环状六聚硅氧烷 10.0 辛基十二烷醇 0.5PVP 10.0 甘油三(辛酸/癸酸)酯 3.0苯甲酸C12-15烷基酯 3.0甘油 1.0生育酚醋酸酯 0.3防风根醇 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 59.2 醇 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 3.0甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 1.0聚季铵盐-44 3.0丙二醇 2.0泛醇，丙二醇 1.0环状五聚硅氧烷，环状六聚硅氧烷 10.0 辛基十二烷醇 0.5PVP 10.0 甘油三(辛酸/癸酸)酯 3.0苯甲酸C12-15烷基酯 3.0甘油 1.0生育酚醋酸酯 0.3 防风根醇 5.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 55.2醇 制备称量A相的各组分并溶解直至澄清。
实施例59在皮肤护理凝胶中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 3.6聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油 15.0 醇 0.1防风根醇 0.5生育酚醋酸酯 适量 芳香油 B 3.0泛醇 0.6卡波姆 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 75.4 软化水 C 0.8三乙醇胺 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 3.6聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油 15.0 醇 0.1防风根醇 0.5生育酚醋酸酯 适量 芳香油 B 3.0泛醇 0.6卡波姆 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 71.4 软化水 C 0.8三乙醇胺 制备将A相溶解直至澄清。使得B相溶胀并用C相中和。将A相搅拌至均化的B相内并且均化。
实施例60在剃须后用洗液中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 10.0乙基己酸十六/十八烷基酯 5.0 生育酚醋酸酯 1.0 防风根醇 0.1 芳香油 0.3 丙烯酸酯/丙烯酸C10-30烷基酯交联聚合物 B 15.0醇 1.0 泛醇 3.0 甘油 1.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.1 三乙醇胺 63.5软化水 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 10.0乙基己酸十六/十八烷基酯 5.0 生育酚醋酸酯 1.0 防风根醇 0.1芳香油 0.3丙烯酸酯/丙烯酸C10-30烷基酯交联聚合物 B 15.0 醇 1.0泛醇 3.0甘油 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.1三乙醇胺 59.5 软化水 制备将A相的组分混合。将B相溶解，并入A相中并且均化。
实施例61在日光浴后用洗液洗液中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 0.4丙烯酸酯/丙烯酸C10-30烷基酯交联聚合物 15.0 乙基己酸十六/十八烷基酯 0.2防风根醇 1.0生育酚醋酸酯 适量 芳香油 B 1.0泛醇 15.0 醇 3.0甘油 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 63.2 软化水 C 0.2三乙醇胺 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 0.4丙烯酸酯/丙烯酸C10-30烷基酯交联聚合物 15.0 乙基己酸十六/十八烷基酯 0.2防风根醇 1.0生育酚醋酸酯 适量 芳香油 B 1.0泛醇 15.0 醇 3.0甘油 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 59.2 软化水 C 0.2三乙醇胺 制备将A相的组分混合。搅拌B相入A相中并均化。用C相中和并再次均化。
实施例62在防晒液中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 4.5甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 3.02-氰基-3，3-二苯基丙烯酸-2-乙基己酯 2.5苹果酸双C12-13烷基酯 0.5生育酚醋酸酯 4.0聚甘油(3)甲基葡萄糖二硬脂酸酯 B 3.5异壬酸十六/十八烷酯 1.0VP/二十碳烯共聚物 5.0异十六烷 2.5苹果酸双C12-13烷基酯 3.0二氧化钛，三甲氧基辛酰硅烷 C 5.0甘油 1.0十六/十八烷基硫酸钠 0.5黄原酸胶 59.7 软化水 D 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 1.0苯氧乙醇，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸乙酯，对羟基苯甲酸丁酯，对羟基苯甲酸丙酯，对羟基苯甲酸异丁酯 0.3防风根醇 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 4.5甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 3.02-氰基-3，3-二苯基丙烯酸-2-乙基己酯 2.5苹果酸双C12-13烷基酯 0.5生育酚醋酸酯 4.0聚甘油(3)甲基葡萄糖二硬脂酸酯 B 3.5异壬酸十六/十八烷酯 1.0VP/二十碳烯共聚物 5.0异十六烷 2.5苹果酸双C12-13烷基酯 3.0二氧化钛，三甲氧基辛酰硅烷 C 5.0甘油 1.0十六/十八烷基硫酸钠 0.5黄原酸胶 55.7 软化水 D 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 1.0苯氧乙醇，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸乙酯，对羟基苯甲酸丁酯，对羟基苯甲酸丙酯，对羟基苯甲酸异丁酯 0.3防风根醇 制备将A相和B相的组分彼此独立地加热至约80℃。将B相搅拌至A相中并均化。将C相加热至约80℃并且搅拌至合并的A相和B相中，同时均化。冷却至约40℃，同时搅拌，添加D相并再次均化。
实施例63在油/水型防晒液中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 3.0甘油三山萮酸酯 2.0十六/十八醇 2.0乙基己酸十六/十八烷基酯 5.0甲氧基肉桂酸乙基己酯 1.0乙基己基三嗪酮 1.0VP/二十碳烯共聚物 7.0肉豆蔻酸异丙酯 B 5.0氧化锌，三乙氧基辛酰硅烷 C 0.2黄原酸胶 0.5丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物， 角鲨烷，失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚硬脂酸酯 0.2EDTA二钠 5.0丙二醇 0.5泛醇 60.9 软化水 D 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5苯氧乙醇，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸乙酯，对羟基苯甲酸丁酯，对羟基苯甲酸丙酯，对羟基苯甲酸异丁酯 1.0生育酚醋酸酯 0.2防风根醇 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 3.0甘油三山萮酸酯 2.0十六/十八醇 2.0乙基己酸十六/十八烷基酯 5.0甲氧基肉桂酸乙基己酯 1.0乙基己基三嗪酮 1.0VP/二十碳烯共聚物 7.0肉豆蔻酸异丙酯 B 5.0氧化锌，三乙氧基辛酰硅烷 C 0.2黄原酸胶 0.5丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物， 角鲨烷，失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚硬脂酸酯 0.2EDTA二钠 5.0丙二醇 0.5泛醇 56.9 软化水 D 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5苯氧乙醇，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸乙酯，对羟基苯甲酸丁酯，对羟基苯甲酸丙酯，对羟基苯甲酸异丁酯 1.0生育酚醋酸酯 0.2防风根醇 制备加热A相至约80℃，搅拌到B相中并且均化3分钟。同样地加热C相至80℃并且搅拌至合并的A相和B相中，同时均化。冷却至约40℃，搅拌到D相中并再次均化。
实施例64在油/水型防晒液中
AI 1％ ％ 成分(INCI) A 3.5十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 1.5十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 7.5甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 2.0环状五聚硅氧烷，环状六聚硅氧烷 0.5蜂蜡 3.0十六/十八醇 10.0 甘油三(辛酸/癸酸)酯 B 5.0二氧化钛，二氧化硅，聚甲基硅氧烷，氧化铝 C 3.0甘油 0.2EDTA钠 0.3黄原酸胶 1.0癸基葡糖苷 2.0泛醇，丙二醇 56.3 软化水 D 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 1.0生育酚醋酸酯 0.2防风根醇 适量 芳香油 适量 防腐剂 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 3.5十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 1.5十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 7.5甲氧基肉桂酸乙基己酯 2.0二乙氨基羟苯甲酰基己基苯甲酸酯 2.0环状五聚硅氧烷，环状六聚硅氧烷 0.5蜂蜡 3.0十六/十八醇 10.0 甘油三(辛酸/癸酸)酯 B 5.0二氧化钛，二氧化硅，聚甲基硅氧烷，氧化铝 C 3.0甘油 0.2EDTA二钠 0.3黄原酸胶 1.0癸基葡糖苷 2.0泛醇，丙二醇 52.3软化水 D 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 1.0生育酚醋酸酯 0.2防风根醇 适量 芳香油 适量 防腐剂 制备加热A相至约80℃，搅拌到B相中并且均化3分钟。同样地加热C相至80℃并且搅拌至合并的A相和B相中，同时均化。冷却至约40℃，搅拌到D相中并再次均化。
实施例65在足香脂中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 5.0乙基己酸十六/十八烷基酯 4.0鲸蜡醇 4.0甘油硬脂酸酯 5.0矿物油 0.2薄荷醇 0.5樟脑 B 69.3 软化水 适量 防腐剂 C 1.0防风根醇 1.0生育酚醋酸酯 D 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 5.0金缕梅提取物 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 5.0乙基己酸十六/十八烷基酯 4.0鲸蜡醇 4.0甘油硬脂酸酯 5.0矿物油 0.2薄荷醇 0.5樟脑 B 65.3 软化水 适量 防腐剂 C 1.0防风根醇 1.0生育酚醋酸酯 D 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 5.0金缕梅提取物 制备将A相和B相的组分彼此独立地加热至约80℃。搅拌B相入A相中，同时均化。冷却至约40℃，同时搅拌，添加C相和D相并且随后短暂均化。冷却至室温，同时搅拌。
实施例66在含防风根醇的水/油乳剂中使用KBD AI 1％ ％ 成分(INCI) A 6.0聚氧乙烯(7)氢化蓖麻油 8.0乙基己酸十六/十八烷基酯 5.0肉豆蔻酸异丙酯 15.0 矿物油 0.3硬脂酸镁 0.3硬脂酸铝 2.0PEG-45/十二烷基二醇共聚物 B 5.0甘油 0.7硫酸镁 55.6 软化水 C 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5生育酚醋酸酯 0.6防风根醇 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 6.0聚氧乙烯(7)氢化蓖麻油 8.0乙基己酸十六/十八烷基酯 5.0肉豆蔻酸异丙酯 15.0 矿物油 0.3硬脂酸镁 0.3硬脂酸铝 2.0PEG-45/十二烷基二醇共聚物 B 5.0甘油 0.7硫酸镁 51.6 软化水 C 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 0.5生育酚醋酸酯 制备对A相和B相彼此独立地加热至约85℃。将B相搅拌至A相中并均化。冷却至约40℃，同时搅拌，添加C相并且短暂再次均化。冷却至室温，同时搅拌。
用于专利性角蛋白结合结构域-毛发护理的制剂列表 实施例67淋浴凝胶 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 40.0月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠 5.0 癸基葡糖苷 5.0 椰油酰氨基丙基甜菜碱 1.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 1.0 泛醇 适量芳香油 适量防腐剂 2.0 氯化钠 46.0软化水 B 适量柠檬酸 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 40.0月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠 5.0 癸基葡糖苷 5.0 椰油酰氨基丙基甜菜碱 5.0 具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 1.0 泛醇 适量芳香油 适量防腐剂 2.0 氯化钠 42.0软化水 B 适量柠檬酸 制备将A相的组分混合并溶解。用柠檬酸调节pH至6-7。
实施例68保湿性身体护理霜 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 3.0乙基己酸十六/十八烷基酯 1.0聚二甲基硅氧烷 4.0十六/十八醇 3.0自乳化型硬脂酸甘油酯 5.0矿物油 4.0西蒙得木(霍霍巴)籽油 3.0矿物油，羊毛脂醇 B 5.0丙二醇 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 1.0泛醇 0.5硅酸铝镁 q.s防腐剂 65.5 软化水 C 适量 芳香油 D 适量 柠檬酸 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 3.0乙基己酸十六/十八烷基酯 1.0聚二甲基硅氧烷 4.0十六/十八醇 3.0自乳化型硬脂酸甘油酯 5.0矿物油 4.0西蒙得木(霍霍巴)籽油 3.0矿物油，羊毛脂醇 B 5.0丙二醇 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 1.0泛醇 0.5硅酸铝镁 q.s防腐剂 61.5 软化水 C 适量 芳香油 D 适量 柠檬酸 制备A相和B相分别加热至约80℃。短暂预均化B相，随后将B相搅拌至A相中并再次均化。冷却至约40℃，添加C相并且彻底再次均化用柠檬酸调节pH至6-7。
实施例69保湿性身体护理霜 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 6.0聚氧乙烯(7)氢化蓖麻油 10.0 乙基己酸十六/十八烷基酯 5.0肉豆蔻酸异丙酯 7.0矿物油 0.5牛油树脂(牛油树) 0.5硬脂酸铝 0.5硬脂酸镁 0.2防风根醇 0.7二氢化牛油基二甲基氯化铵-水辉石 B 5.0双丙二醇 0.7硫酸镁 适量 防腐剂 62.9 软化水 C 适量 芳香油 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 6.0聚氧乙烯(7)氢化蓖麻油 10.0 乙基己酸十六/十八烷基酯 5.0肉豆蔻酸异丙酯 7.0矿物油 0.5牛油树脂(牛油树) 0.5硬脂酸铝 0.5硬脂酸镁 0.2防风根醇 0.7二氢化牛油基二甲基氯化铵-水辉石 B 5.0双丙二醇 0.7硫酸镁 适量 防腐剂 58.9 软化水 C适量 芳香油 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 制备A相和B相分别加热至约80℃。将B相搅拌至A相中并均化。冷却至约40℃，同时搅拌，添加C相并再次均化。允许冷却至室温，同时搅拌。
实施例70湿粉底-油/水型 AI 1％ ％ 成分(INCI) A 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 6.0甘油硬脂酸酯 1.0鲸蜡醇 8.0矿物油 7.0乙基己酸十六/十八烷基酯 0.2聚二甲基硅氧烷 B 3.0丙二醇 1.0泛醇 适量 防腐剂 61.9 软化水 C 0.1防风根醇 1.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 适量 芳香油 D 5.7C.I.77 891，二氧化钛 1.1氧化铁 AI 5％ ％ 成分(INCI) A 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(6)醚，十八烷醇 2.0十六/十八烷基聚氧乙烯(25)醚 6.0甘油硬脂酸酯 1.0鲸蜡醇 8.0矿物油 7.0乙基己酸十六/十八烷基酯 0.2聚二甲基硅氧烷 B 3.0丙二醇 1.0泛醇 适量 防腐剂 57.9 软化水 C 0.1防风根醇 5.0具有约5％融合蛋白-KBD的水溶液 适量 芳香油 D 5.7C.I.77 891，二氧化钛 1.1氧化铁 制备A相和B相分别加热至约80℃。将B相搅拌至A相中并均化。冷却至约40℃，同时搅拌，添加C相和D相并且彻底再次均化。允许冷却至室温，同时搅拌。
实施例71 下文描述包含根据实施例3制备的结合角蛋白的效应分子C16-KBD-D(根据pRee024(图8)中的SEQ ID No212)的本发明皮肤化妆制品。所述的结合角蛋白的融合蛋白作为占水溶液重量的约5重量％浓度使用。以下数据是重量份。凝胶乳霜


OW防晒制剂


水分散体


WO防晒乳剂


条状化妆品






凝胶乳霜

OW自我晒黑制剂 OW粉底(make-up) 自我晒黑用水分散剂

日光浴后水分散体

WO乳剂


固体稳定化乳剂 (皮克林乳剂) 条状化妆品

自我晒黑PIT乳剂


油凝胶剂 实施例72 在以下制剂中，描述了包含至少一种无机颜料，优选氧化锌和/或二氧化钛与有机UV-A和UV-B滤质的组合的化妆性防晒制品。
以下所述的制剂以本领域技术人员已知的惯用方式制备。
根据实施例3制备的结合角蛋白的效应分子C16-KBD-D(根据pRee024(图8)中的SEQ ID No212)的含量指100％的有效成分。本发明的有效成分可以以纯粹形式或水溶液形式使用。在水溶液的情况下，软化水在具体制剂中的含量必须进行调整。










权利要求
1.嵌合的结合角蛋白的效应蛋白，其包含
(a)至少一种结合角蛋白的多肽(i)和
(b)至少一种进一步的效应多肽(ii)。
2.根据权利要求1所述的结合角蛋白的效应蛋白，其中结合角蛋白的多肽(i)具有对人毛发角蛋白、甲角蛋白或皮肤角蛋白的结合亲和性。
3.根据权利要求1或2所述的结合角蛋白的效应蛋白，其中使用的结合角蛋白的多肽(i)
(a)包含至少一个根据SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215的序列，或
(b)对应于与至少一个根据SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215的序列至少40％同一并且能够结合角蛋白的多肽。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的结合角蛋白的效应蛋白，其中使用的结合角蛋白的多肽(i)由这样的核酸分子编码，所述核酸分子包含选自以下的至少一个核酸分子
c)核酸分子，其编码包含SEQ ID NO2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215中所示序列的多肽；
d)核酸分子，其包含SEQ ID NO1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、145、149、152、159、161、163、165、212或214中所示序列的至少一个多核苷酸；
e)核酸分子，其编码根据序列SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215的多肽；
f)具有与至少一个根据SEQ ID No1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、145、149、152、159、161、163、165、212或214的序列相对应的核酸序列的核酸分子，或因替换、缺失或插入而自其衍生的编码多肽的核酸分子，其中所述多肽与至少一个根据SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215的序列至少40％同一并且能够结合至角蛋白；
g)编码由单克隆抗体识别的多肽的核酸分子，其中所述的单克隆抗体针对根据(c)至(e)的核酸分子所编码的多肽；
h)编码结合角蛋白的蛋白质的核酸分子，其在严格条件下与根据(c)至(e)的核酸分子杂交；
i)编码结合角蛋白的蛋白质的核酸分子，所述核酸分子能够通过使用根据(c)至(e)的核酸分子或其包含至少15个核苷酸的部分片段作为探针在严格杂交条件下分离自DNA库，和
j)核酸分子，其能够通过反向翻译序列SEQ ID No2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、146、150、153、156、157、158、160、162、164、166、213或215中所示的氨基酸序列之一而产生。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的结合角蛋白的效应蛋白，其中效应多肽(ii)选自酶、抗体、效应物结合蛋白、荧光蛋白、抗微生物肽和自动装配蛋白。
6.根据权利要求5所述的结合角蛋白的效应蛋白，其中效应多肽(ii)是选自氧化酶、过氧化物酶、蛋白酶、酪氨酸酶、乳过氧化物酶、溶菌酶、淀粉葡糖苷酶、葡萄糖氧化酶、超氧化物歧化酶、光裂合酶和过氧化氢酶的酶。
7.根据权利要求6所述的结合角蛋白的效应蛋白，其中效应多肽(ii)是丝蛋白。
8.根据权利要求7所述的结合角蛋白的效应蛋白，其中丝蛋白包含至少一个根据SEQ ID No151、201、202、203、204、205、206、207、208、209或210的序列、或对应于与至少一个根据SEQ ID No151、201、202、203、204、205、206、207、208、209或210的序列至少40％同一的多肽。
9.根据权利要求7或8所述的结合角蛋白的效应蛋白，其中丝蛋白由这样的核酸分子编码，所述核酸分子包含选自以下的至少一个核酸分子
k)核酸分子，其编码包含SEQ ID NO151、201、202、203、204、205、206、207、208、209或210中所示序列的多肽；
l)核酸分子，其包含至少一个SEQ ID NO150中所示序列的多核苷酸；
m)核酸分子，其编码根据序列SEQ ID No151、201、202、203、204、205、206、207、208、209或210的多肽；
n)具有根据SEQ ID No150的核酸序列的核酸分子，或因替换、缺失或插入而自其衍生的编码多肽的核酸分子，其中所述多肽与根据SEQ IDNo151的序列至少40％同一；
o)编码由单克隆抗体识别的多肽的核酸分子，其中所述的单克隆抗体针对根据(k)至(m)的核酸分子所编码的多肽；
p)编码结合角蛋白的蛋白质的核酸分子，其在严格条件下与根据(k)至(m)的核酸分子杂交；
q)编码结合角蛋白的蛋白质的核酸分子，所述核酸分子能够通过使用根据(k)至(m)的核酸分子或其包含至少15个核苷酸的部分片段作为探针在严格杂交条件下分离自DNA库，和
r)核酸分子，其能够通过反向翻译序列SEQ ID No151、201、202、203、204、205、206、207、208、209或210中所示的氨基酸序列之一而产生。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的结合角蛋白的效应蛋白，其中多肽(i)和(ii)通过翻译融合而连接起来。
11.根据权利要求1至9中任一项所述的结合角蛋白的效应蛋白，其中多肽(i)和(ii)通过化学偶联反应而连接起来。
12.根据权利要求11所述的结合角蛋白的效应蛋白，其中效应多肽(ii)共价地结合至结合角蛋白的多肽(i)的内部氨基酸的侧链、羧基端或氨基端。
13.根据权利要求1至9中任一项所述的结合角蛋白的效应蛋白，其中效应多肽(ii)和结合角蛋白的多肽(i)通过间隔元件连接起来。
14.根据权利要求13所述的结合角蛋白的效应蛋白，其中间隔元件是交联剂。
15.根据权利要求13所述的结合角蛋白的效应蛋白，其中间隔元件是至少双官能的接头，所述接头通过结合至结合角蛋白的多肽(i)和效应多肽的内部氨基酸的侧链、羧基端或氨基端而将所述多肽共价地连接起来。
16.根据权利要求13所述的结合角蛋白的效应蛋白，其中间隔元件是多肽。
17.权利要求1-16中所述的结合角蛋白的效应蛋白在皮肤化妆品中的用途。
18.根据权利要求17所述的用途，其中皮肤化妆品是皮肤保护组合物、皮肤护理组合物、皮肤清洁组合物、毛发保护组合物、毛发护理组合物、毛发清洁组合物、染发剂或装饰性化妆品。
19.皮肤化妆品，其包含根据权利要求1至16所述的结合角蛋白的效应分子。
20.根据SEQ ID No168、176、182、188、194和200中所示氨基酸序列之一的蛋白质。
21.根据SEQ ID No167、175、181、187、193或199中所示序列的核酸分子。
22.DNA表达盒，其包含具有根据权利要求21所述核酸序列的核酸分子。
23.载体，其包含根据权利要求21或22所述的表达盒。
24.转基因细胞，其包含根据权利要求21的核酸分子、根据权利要求22的表达盒、或根据权利要求23的载体。
全文摘要
本发明涉及嵌合的结合角蛋白的效应蛋白，并涉及其在皮肤化妆品中的用途。
文档编号A61K8/64GK101365416SQ200680051662
公开日2009年2月11日 申请日期2006年11月15日 优先权日2005年11月24日
发明者H·巴尔格, B·利布曼, H·里恩茨, A·普托克 申请人:巴斯夫欧洲公司