专利名称：：多西他赛长循环制剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及抗肿瘤药物多西他赛的长循环制剂，该制剂可以为隐形纳米粒、隐形脂质体和隐形胶束，尤其涉及所述制剂使用的主要载体材料、该制剂的制备方法和用途。
背景技术：
：多西他赛(docetaxel/Taxotere)是一种新型抗胂瘤药物。分子式为C43H53N014,结构式为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>它是由法国原Rhone-PoulencRorer、即现Sanofi-Aventis公司开发的一种半合成抗肿瘤药物，1995年4月在墨西哥首次上市，目前则已在包括中国和欧、美、日等在内的世界近百个国家或地区获准销售。2003年9月27日安万特(中国)投资有限公司首先进行进口产品注册，多西他赛注射剂2004年列入我国医保目录乙类品种。多西他赛属紫杉烷类药物，它能通过实质上"冻结"细胞内在骨架而抑制肿瘤细胞分化。细胞骨架由微管组成，而微管在细胞周期中会适时发生装配和分拆现象。多西他赛可以促使微管装配并阻止微管分拆，由此抑制肿瘤细胞分化，最终导致肿瘤细胞死亡。多西他赛为有丝分裂抑制剂，对多种实体瘤具有较强的抗肿瘤活性，体外实验结果表明，多西他赛可以抑制肺腺癌细胞的生长，而且随着剂量的增大抑制作用增强，这种作用与该药物诱导细胞发生生长阻滞有关。多西他赛的作用机制与紫杉醇类似，但抗肿瘤活性是紫杉醇的1.3-12倍。多西他赛目前已在全球各主要国家获得了用于治疗现今世界最为常见的三种肺瘤即乳腺癌、非小细胞肺癌和前列腺癌的多种适应症，并已正在成为这些癌种治疗的最常用或标准疗法之一。多西他赛还广泛用于治疗胃癌、头颈部肿瘤、食管癌、卵巢癌等的后期临床研究，对这些适应症的治疗日后有望能获得欧美批准。目前在日本多西他赛用于治疗胃癌、头颈部肿瘤、食管癌、卵巢癌和子宫内膜癌已获得批准。但是多西他赛水溶性差，目前市售的多西他赛以浓缩输注用液剂型应市，其具体制剂规格有20mg/0.5ml和80mg/2ml两种，常规推荐剂量方案是每3周1次1小时静脉输注75mg/m2。多西他赛注射剂是采用吐温-80(tween-80)作溶剂溶解多西他赛为1支药液，另同时再配有含13°/。乙醇的稀释液1支。由于吐温-80具有溶血性，用于静脉内注射时会引起过敏反应，包括休克、呼吸困难、低血压、血管性水肿、风療等，这些不良反应在人的临床实验中引起十分严重的后果，且有死亡报道。故临床用药常规实施预处理。一些病人(12.2。/。)尽管在药物预防之后，仍然会过敏。15%的病人会因为过敏而不得不停止使用。6.5%的病人会产生过敏水肺。为了提醒医生和病人认识到该药毒副反应的严重性，美国的药物产品说明书中对该产品的过敏休克副反应加有严重警告术语；并且吐温-80黏性大，给临床用药也带来不便。基于上述问题的考虑，本发明提供了一种多西他赛长循环制剂，其为隐形纳米粒、隐形脂质体或隐形胶束。该制剂用生理盐水稀释后可直接静脉给药，不需要其他的溶剂和稀释剂，这样就可避免过敏反应等副作用。更为重要的是，由于在制剂表面通过物理吸附或共价结合亲水性聚合物，形成一层或多层保护性的亲水衣膜，可阻碍调理作用，制成隐形制剂。具有隐形作用的聚合物的最重要的性质是亲水性和柔韧性。亲水性强，氢键结合大量水分子，看起来才更像水；具有柔韧性，高分子链可以自由摆动，能更好地阻止调理素对制剂表面的调理作用，又可避开肝脏枯否氏细胞的吞噬，使多西他赛可转运至其他组织和器官或长时间存在于体循环中。在经过多次循环后，可显著地浓集于体内肝脏外的其他组织或器官，达到靶向性的目的。因此，多西他赛的隐形纳米粒或隐形脂质体或隐形胶束比普通的多西他赛制剂(泰索帝)以及无隐形作用的纳米粒、脂质体、胶束具有更大的AUC面积，对肿瘤具有更强的抑制作用。
发明内容本发明的目的是提供了一种抗肿瘤药物多西他赛的长循环制剂，它可以是隐形纳米粒、隐形脂质体或隐形胶束。所述多西他赛的长循环制剂包含多西他赛0.1%~5wt%载体材料0.01%~48wt%附加剂50%~99.8wt%。所述载体材料为亲水性物质聚乙土醇修饰的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚十六烷基氰基丙烯酸酯、聚乳酸、聚乳酸乙醇酸共聚物、聚己内酯共聚物、磷脂酰乙醇胺、聚谷氨酸千酯的一种或多种。具体为聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)、聚乙二醇化聚十六烷基氰基丙烯酸酯(PEG-PHDCA)、聚乙二醇聚乳酸共聚物(PEG-PLA)、聚乙二醇聚乳酸乙醇酸共聚物(PEG-PLGA)、聚乙二醇聚己内酯共聚物(PEG-PCL)、聚乙二醇聚乳酸(PEG-PLA')和聚乳酸(PLA)的混合物、聚乙二醇化磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)、聚乙二醇化聚谷氨酸千酯(PEG-PBLG)等两亲嵌段共聚物。所述聚乙二醇为选自PEG1000、PEG2000、PEG4000、PEG6000中任意一种或几种的混合物。所述附加剂是能帮助长循环制剂形成的卵磷脂、胆固醇、维生素E、聚乙烯醇(PVA)、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯酮、曱基聚唑啉、聚山梨酯、三乙胺、聚氧乙烯中的任意一种。根据本发明的多西他赛长循环制剂的隐形纳米粒、隐形脂质体和隐形胶束制剂的粒径在20~500nm的范围内。优选的粒径范围为100~300腦。本发明的另一目的是提供多西他赛长循环制剂的制备方法(a)取多西他赛、载体材料及附加剂溶于有机溶剂中，水浴减压除去有机溶剂，形成薄膜后，加入水溶液使得薄膜溶胀水合，超声分散形成多西他赛隐形脂质体;或(b)取多西他赛溶于无水乙醇中，加入含有载体材料的有机溶剂，超声乳化得W/0初乳；再将此初乳加入含附加剂的水溶液中，超声得W/0/W复乳；加入水溶液中，减压蒸发，除去有机溶剂即得隐形纳米粒胶体溶液，离心、沉淀洗涤即得多^他赛隐形纳米粒；或(c)取多西他赛溶于乙醇，加入含载体材料和附加剂的有机溶剂，用旋转仪除去有机溶剂形成含药脂膜，再真空干燥除尽残留的有机溶剂，加入緩沖溶液水浴中水化，室温下放置即得包栽多西他赛的隐形胶束。所述有机溶剂为无水乙醇、二氯曱烷、三氯曱烷中任意一种或多种。另外，本发明的多西他赛长循环制剂可制成注射剂，用于静脉注射，还可进一步冷冻干燥制成冻干粉针。所述冻干粉针的支撑剂为葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露醇的一种或几种的混合物。本发明的再一目的是提供所述多西他赛长循环制剂在用于制备治疗恶性肿瘤的药物中的应用。有益效果本发明的多西他赛长循环制剂，由于在制剂表面通过物理吸附或共价结合亲水性聚合物，形成一层或多层保护性的亲水衣膜，可阻碍调理作用，躲过肝脾网状内皮系统的捕捉吞噬；具有隐形作用的聚合物的最重要的性质是亲水性和柔韧性，亲水性强，氢键结合大量水分子，能更好地阻止调理素对制剂表面的调理作用，又可避开肝脏枯否氏细胞的吞噬，使多西他赛可转运至其他组织和器官或长时间存在于体循环中。在经过多次循环后，可显著地浓集于体内肝脏外的其他组织或器官，达到靶向性的目的。因此，本发明的多西他赛长循环制剂对肿瘤具有更强的抑制作用。用普通多西他赛注射液(商品名泰索帝)、多西他赛非隐形脂质体和多西他赛隐形脂质体给药后，在不同时间段取血，测定大鼠的药动学数据。同时测定并对比接种肺瘤后三组药物的抑瘤率。体内试验结果见表1，数据证明本发明的长循环制齐'j的AUC面积是普通多西他赛注射剂的AUC面积的3.01倍，抑瘤率是普通多西他赛注射剂的2.69倍，与非隐形的制剂相比，本发明的多西他赛长循环制剂也具有更好的效果。表l:普通多西他赛注射液、多西他赛非隐形脂质体和多西他赛隐形脂质体效果比较<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>图1实施例1制备的多西他赛隐形脂质体粒径的测定结果。具体实施例方式下面将通过具体实施例进一步说明本发明，但以下描述为非限制性的，并不限制本发明的权利要求所要保护的范围。试剂与仪器卵磷脂(德国Degussa);胆固醇(上海如吉生物科技发展有限公司)；PEG系列(上海高桥化工厂)；多西他赛原料(上海三维制药有限公司)；PEG2000-DSPE、PEG4000-DSPE(德国Lipoid公司和美国Avanti公司)；HPLC仪(Aglient1100);粒径测定仪(NICOMP380ZLS);冷冻干燥机(Labconco6L)。实施例1精确称取卵磷脂15.8mg、胆固醇7.8mg和PEG2000-DSPE0.6mg、维生素E0.1mg、多西他赛2mg共同溶于5ml氯仿中，所得溶液置于50ml茄形烧瓶中，37。C水浴减压除去氯仿，在茄形烧瓶壁上形成均匀透明的薄膜后，加入0.02mol/L的pH6.8磷酸盐緩冲溶液6ml，继续在37。C水浴常压下旋转30min，使得薄膜溶胀水合，所得的混悬液漩涡震荡10min。常温下经超声分散lmin后即得多西他赛隐形脂质体溶液，透析除盐。加20ml水稀释，加甘露醇1.0g作为支撑剂冷冻干燥制成冻干粉针。以去离子水为分散介质测定样品的平均粒径，测得粒径为20-500nm，平均粒径120nm。结果见图1。普通多西他赛注射液(商品名泰索帝)、多西他赛非隐形脂质体(自制，即用DSPE代替PEG2000-DSPE用上述相同方法制备)和上述的多西他赛隐形脂质体均用生理盐水稀释至多西他赛剂量0.65mg/mL，给药量5mg/kg，大鼠尾静脉注射。给药后于l、3、6、12、24和48h取血，用肝素抗凝，离心分离血浆。加入内标物，用曱醇混合5min后移至离心管，4000rpm离心5min,4是取。氛气吹干。力口lml流动相溶解，取20piL进样，进行RP-HPLC测定。色谱条件Discovery柱(25cmx4.6mm,5jum)，流动相曱醇乙腈(25:75)，流速1.0mL/min,检测波长227nm。数据处理方法血药浓度数据用中国药理学会编制的3P87药动学程序进行处理。结果测得的三种制剂的AUC面积分别为98.54hjxg/mL(泰索帝注射液)、125.81h'吗/mL(多西他赛非隐形脂质体)和257.65h.pg/mL(多西他赛隐形脂质体)。为了评价多西他赛隐形脂质体的抗肺瘤效果，用MTT法测定它抑制人乳腺癌细胞(MCF-7)的增殖情况，并以多西他赛原料为对照。用Logit法分别计算两种制剂的IC50值，IC50值分别为0.057±0.001nmol/L(多西他赛隐形脂质体)和4.24±0.24nmol/L(多西他赛原料)，表明隐形脂质体增强了多西他赛对乳腺癌细胞生长的抑制作用，与多西他赛原料相比，多西他赛隐形脂质体显示更强的抗肺瘤活性。实施例2精确称取卵磷脂20mg、胆固醇5.6mg和PEG4000-DSPE1.0mg、多西他赛5mg共同溶于10ml二氯曱烷中，所得溶液置于50ml茄形烧瓶中，37。C水浴减压除去二氯曱烷，在茄形烧瓶壁上形成均匀透明的薄膜后，加入0.01mol/L的pH6.8磷酸盐緩冲溶液10ml，继续在37。C水浴常压下旋转30min，使得薄膜溶胀水合，所得的混悬液旋涡震荡10min。常温下经超声分散lmin后即得多西他赛隐形脂质体溶液，透析除盐。加20ml水稀释，加入作为支撑剂的甘露醇0.5g和葡萄糖0.4g，冷冻千燥制成冻干粉针。以去离子水为分散介质测定样品的平均粒径，测得粒径为100~400nm,平均粒径220nm。泰索帝注射液、多西他赛非隐形赠质体(自制，即用DSPE代替PEG4000-DSPE用上述相同方法制备)和多西他赛隐形脂质体均用生理盐水稀释至多西他赛剂量0.65mg/mL,给药量5mg/kg，大鼠尾静脉注射。给药后于l、3、6、12、24和48h取血，用肝素抗凝，离心分离血浆。加入内标物，用曱醇混合5min后移至离心管，4000rpm离心5min,提取。氮气吹干。加lml流动相溶解,取20(xL进样，进行RP-HPLC测定。色语条件Discovery柱(25cmx4.6mm，5|am)，流动相曱醇乙腈(25:75),流速1.0mL/min,检测波长227nm。数据处理方法血药浓度数据用中国药理学会编制的3P87药动学程序进行处理。结果测得的三种制剂的AUC面积分别为98.54h.pg/mL(泰索帝注射液)、125.81h.pg/mL(多西他赛非隐形脂质体)和296.65h.pg/mL(多西他赛隐形脂质体)。将前肢腋皮下接种H22肿瘤后约10d、肿瘤实体长至重约lg时的荷瘤小鼠随机分为空白给药对照组、泰索帝注射液组、多西他赛非隐形脂质体组和多西他赛隐形脂质体组，尾静脉注射剂量分别为4mg/kg的多西他赛，l次/d,连续5d。末次给药后4h同时处死，剖取实体瘤，称瘤重，计算抑瘤率。按抑瘤率=(1-给药后小鼠平均瘤重/空白对照组小鼠平均瘤重)x100%计算。抑瘤率分别为49.54%(多西他赛隐形脂质体)，27.45%(多西他赛非隐形脂质体)，18.45%(泰索帝注射液组)。上述数据表明隐形脂质体能增强多西他赛对肿瘤细胞的抑制作用。实施例3取多西他赛10mg,溶于25ml无水乙醇中，注入30mg含有聚乙二醇化聚十六烷基氰基丙烯酸酯(PEG6000-PHDCA,其制法为现有技术中的常规方法，具体如下将PHDCA20mg,N，N-二环己基碳酰亚胺10mg，N-羟基丁二酰亚胺10mg溶于二曱亚砜25ml，搅拌3小时，过滤取滤液，PEG600020mg溶于二氯甲烷15ml后加入其中，继续搅拌4小时，过滤取滤液，0匸放置24小时重结晶，过滤，冷冻干燥，即得。)的二氯曱烷溶液30ml中，超声波细胞粉碎机(60W，30分钟)连续超声乳化后，得到W/0初乳。再将此初乳加入到50ml,4。/。的PVA溶液中，水浴下，再用超声波细胞粉碎机脉沖超声5分钟，得到W/0/W复乳。将所得复乳加入到120mL含有lwt%PVA的溶液中，室温减压蒸发，除去二氯曱烷，即得隐形纳米粒胶体溶液，14000rpm离心40min，弃去上清液，沉淀用蒸馏水洗3次，即得多西他赛隐形纳米粒。加50ml水稀释，加蔗糖5.4g作为支撑剂，冷冻干燥制成冻千粉针。以去离子水为分散介质测定样品的平均粒径，测'得粒径为20~150nm，平均粒径80nm。以聚十六烷基氰基丙烯酸酯(PHDCA)替代PEG-PHDCA,以上述相同的方法制备无隐形作用的非隐形纳米粒，测定包封率。包封率的测定结果为12.14%(多西他赛非隐形纳米粒)和54.17%(多西他赛隐形纳米氺立)。泰索帝注射液、多西他赛非隐形纳米粒和多西他赛隐形纳米粒均用生理盐水稀释至多西他赛剂量0.65mg/mL，给药量5mg/kg,大鼠尾静脉注射。给药后于l、3、6、12、24和48h取血，用肝素抗凝，离心分离血浆。加入内标物，用曱醇混合5min后移至离心管，4000rpm离心5min，提取。氮气吹干。加lml流动相溶解，取20pL进样，进行RP-HPLC测定。色i普条件Discovery柱(25cmx4.6mm,5nm)，流动相曱醇乙腈(25:75),流速1.0mL/min，检测波长227nm。数据处理方法血药浓度数据用中国药理学会编制的3P87药动学程序进行处理。结果测得的三种制剂的AUC面积分別为98.54h.ng/mL(泰索帝注射液)、128.46hpg/mL(多西他赛非隐形纳米粒)和350.42hpg/mL(多西他赛隐形纳米粒)。用MTT法测定多西他赛隐形纳米粒抑制人乳腺癌细胞(MCF-7)的增殖情况，并以多西他赛原料为对照。用Logit法分别计算两种制剂的ICso值，ICso值分别为0.042±0.036nmol/L(多西他赛隐形纳米粒)和4.24±0.24nmol/L(多西他赛原料)，实验数据表明隐形纳米粒增强了多西他赛对乳腺癌细胞生长的抑制作用。与多西他赛原料相比，多西他赛隐形纳米粒显示更强的抗肿瘤活性。实施例4取多西他赛15mg，溶于30ml无水乙醇中，注入30mg含有聚乙二醇聚乳酸共聚物(PEG6000-PLA,自制，制法如下将PLA15mg、N,N-二环己基碳酰亚胺15mg、N-羟基丁二酰亚胺15mg溶于二曱亚砜30ml，搅拌5小时，过滤取滤液，PEG600020mg溶于二氯曱烷15ml后加入其中，继续搅拌4小时，用分子量为5000的透析袋透析，冷冻干燥，即得。)的二氯曱烷溶液25ml中，用超声波细胞粉碎机(60W,10分钟)连续超声乳化后，得到W/0初乳。再将此初乳加入到50ml,5%的PVA溶液中，冰浴下，再用超声波细胞粉碎机脉沖超声5分钟，得到W/0/W复乳。将所得复乳加入到120mL含有1%PVA的溶液中，室温减压蒸发，除去二氯曱烷，即得隐形纳米粒胶体溶液，14000rpm离心40min，弃去上清液，沉淀用蒸馏水洗3次，加50ml水稀释，即得多西他赛隐形纳米粒溶液。以去离子水为分散介质测定样品的平均粒径，测得粒径为50-200nm,平均粒径100nm。以PLA替代PEG6000-PLA用上述相同的方法制备多西他赛非隐形纳米粒。.泰索帝注射液、多西他赛非隐形纳米粒和多西他赛隐形纳米粒均用生理盐水稀释至多西他赛剂量0.65mg/mL，给药量5mg/kg，大鼠尾静脉注射。给药后于1、3、6、12、24和48h取血，用肝素抗凝，离心分离血浆。加入内标物，用曱醇混合5min后移至离心管，4000rpm离心5min，提取。氮气吹干。力。lml流动相溶解，取20pL进样，进行RP-HPLC测定。色i普条件Discovery柱(25cmx4.6mm，5jxm),流动相曱醇乙腈(25:75),流速1.0mL/min，检测波长227nm。数据处理方法血药浓度数据用中国药理学会编制的3P87药动学程序进行处理。结果测得的三种制剂的AUC面积分别为98.54h.pg/mL(泰索帝注射液)、125.46h.ing/mL(多西他赛非隐形纳米粒)和298.47hpg/mL(多西他赛隐形纳米粒)。实施例5取多西他赛15mg，溶于30ml无水乙醇，注入30mg含有聚乙二醇聚乳酸乙醇酸共聚物(PEG2000-PLGA，制法如下将PLGA15mg、N,N-二环己基碳酰亚胺15mg、N-羟基丁二酰亚胺15mg溶于二曱亚砜35ml，搅拌5小时，过滤取滤液，PEG200020mg溶于二氯曱烷25ml后加入其中，继续搅拌4小时，用分子量为1500的透析袋透析，除去小分子物质，冷冻干燥，即得。)的二氯曱烷溶液55ml中，加入25mg聚乙烯吡咯酮，用超声波细胞粉碎机(60W,10分钟)连续超声乳化后，得到W/0初乳。再将此初乳加入到50ml，4。/。的PVA溶液中，冰浴下，再用超声波细胞粉碎机脉冲超声IO分钟，得到w/o/w复乳。将所得复乳加入到120mL含有l。/。PVA的溶漆中，室温减压蒸发，除去二氯曱烷，即得隐形纳米粒月交体溶液，14000rpm离心40min,弃去上清液，沉淀用蒸馏水洗3次，即得多西他赛隐形纳米粒。加50ml水稀释，加葡萄糖1.5g作为支撑剂，冷冻干燥制成冻干粉针。以去离子水为分散介质测定样品的平均粒径，测得粒径为120~350nm，平均粒径210mn。以PLGA替代PEG2000-PLGA用上述相同的方法制备多西他赛非隐形纳米粒。泰索帝注射液、多西他赛非隐形纳米粒和多西他赛隐形纳米粒均用生理盐水稀释至多西他赛剂量0.65mg/mL,给药量5mg/kg，大鼠尾静脉注射。给药后于l、3、6、12、24和48h取血，用肝素抗凝，离心分离血浆。加入内标物，用曱醇混合5min后移至离心管，4000rpm离心5min，提取。氮气吹干。力。lml流动相溶解，取20pL进样，进行RP誦HPLC测定。色语条件Discovery柱(25cmx4.6mm，5|im),流动相曱醇乙腈(25:75)，流速1.0mL/min,检测波长227nm。数据处理方法血药浓度数据用中国药理学会编制的3P87药动学程序进行处理。结果测得的三种制剂的AUC面积分别为98.54h.pg/mL(泰索帝注射液)、159.82hvg/mL(多西他赛非隐形纳米粒)和328.47hfxg/mL(多西他赛隐形纳米粒)。实施例66g卵磷脂、5g聚乙二醇聚己内酯共聚物(PEG4000-PCL，制法如下将PCL15mg、N,N-二环己基碳酰亚胺10mg、N-羟基丁二酰亚胺10mg溶于二曱亚砜25ml，搅拌4小时，过滤取滤液，PEG400020mg溶于二氯曱烷15ml后加入其中，继续搅拌5小时，用分子量为3500的透析袋透析，冷冻千燥，即得。)和110mg多西他赛溶于100ml乙醇溶液中，然后加入含有lg泊洛沙姆的水溶液150ml中，高速剪切力搅拌下分散形成初分散体。减压去乙醇，再将初分散体于200-500个大气压下经高压乳匀机处理23次，即可得到所需的多西他赛隐形纳米粒。加蔗糖1.5g作为支撑剂，冷冻千燥制成冻干私M十。以去离子水为分散介质测定样品的平均粒径，测得粒径为40240nrn,平均粒径100nm。以PCL代替PEG4000-PCL,用上述相同的方法制备多西他赛非隐形纳米粒。泰索帝注射液、多西他赛非隐形纳米粒和多西他赛隐形纳米粒均用生理盐水稀释至多西他赛剂量0.65mg/mL，给药量5mg/kg,大鼠尾静脉注射。给药后于l、3、6、12、24和48h取血，用肝素抗凝，离心分离血浆。加入内标物，用曱醇混合5min后移至离心管，4000rpm离心5min,提取。氮气吹干。力口lml流动相溶解，取20pL进样，进行RP-HPLC测定。色谱条件Discovery柱(25cmx4.6mm，5pm),流动相曱醇乙腈(25:75)，流速1.0mL/min，检测波长227nm。数据处理方法血药浓度数据用中国药理学会编制的3P87药动学程序进行处理。结果测得的三种制剂的AUC面积分别为98.54hpg/mL(泰索帝注射液)、168.41h'昭/mL(多西他赛非隐形纳米粒)和528.45hTig/mL(多西他赛隐形纳米粒)。实施例7lg卵磷脂、3gPEG6000-PLA:PLA(50:50)混合物(取实例4制备的PEG6000-PLA与PLA以1:1混合)和100mg多西他赛溶于80ml乙醇溶液中，然后加入含有lg泊洛沙姆的水溶液140ml中，高速剪切力搅拌下分散形成初分散体。减压去乙醇，再将初分散体于200-500个大气压下经高压乳匀机处理2~3次，即可得到所需的多西他赛隐形纳米粒。50ml水稀释，加蔗糖1.5g作为支撑剂，冷冻干燥制成冻干粉针。以去离子水为分散介质测定样品的平均粒径，测得粒径为50-460nm，平均粒径190nm。以PLA代替PEG6000-PLA:PLA.以上述相同的方法制备多西他赛非隐形纳米粒。泰索帝注射液、多西他赛非隐形纳米粒和多西他赛隐形纳米粒均用生理盐水稀释至多西他赛剂量0.65mg/mL,给药量5mg/kg，大鼠尾静脉注射。给药后于l、3、6、12、24和48h取血，用肝素抗凝，离心分离血浆。加入内标物，用曱醇混合5min后移至离心管，4000rpm离心5min,提取。氮气吹干。加lml流动相溶解，取20(iL进样，进4亍RP-HPLC测定。色i普条件Discovery柱(25cmx4.6mm,5^im),流动相曱醇乙腈(25:75)，流速1.0mL/min，检测波长227nm。数据处理方法血药浓度数据用中国药理学会编制的3P87药动学程序进行处理。结果测得的三种制剂的AUC面积分别为98.54hpg/mL(泰索帝注射液)、168.57h.pg/mL(多西他赛非隐形纳米粒)和485.24h吗/mL(多西他赛隐形纳米粒)。实施例8取20mg多西他赛溶于50ml乙醇，加入20g/L的聚乙二醇化磷脂酰乙醇胺(PEG2000-PE，制法如下将PE20mg、N,N-二环己基碳酰亚胺10mg、N-羟基丁二酰亚胺10mg溶于二曱亚砜25ml，搅拌3小时，过滤取滤液，PEG200020mg溶于二氯甲烷25ml后加入其中，继续搅拌4小时，过滤取滤液冷冻千燥即得。)三氯曱烷溶液50ml，置于旋蒸瓶中，再加入10mg曱基聚唑啉，混合均匀。于4(TC恒温水浴中用旋转仪除去有机溶剂形成含药脂膜，再真空千燥除尽残留的有机溶剂。于上述脂膜中加入pH6.8磷酸盐緩沖溶液100ml，充氮气，密封，于40°C恒温水浴中水化30min，室温下放置2h后即得包载多西他赛的隐形胶束，50ml水稀释，加蔗糖1.5g作为支撑剂，冷冻干燥制成冻干粉针。以PE代替PEG2000-PE，以上述相同的方法制备多西他赛非隐形胶束。以去离子水为分散介质测定样品的平均粒径，测得粒径为20~400nm，平均粒径210nm。测定包封率包封率-(l-游离多西他赛/总多西他赛)xi00%;药物包载量是评价药物纳米输送载体的一个重要指标，高包载效率的纳米载体不但可以减少纳米材料的用量，更重要的是降低纳米材料本身的不良反应及其对药物的影响。测得的多西他赛隐形胶束的包封率为85%,多西他赛非隐形胶束的包封率为38%。泰索帝注射液、多西他赛非隐形胶束和多西他赛隐形胶束均用生理盐水稀释至多西他赛剂量0.65mg/mL,给药量5mg/kg，大鼠尾静脉注射。给药后于1、3、6、12、24和48h取血，用肝素抗凝，离心分离血浆。加入内标物，用曱醇混合5min后移至离心管，4000rpm离心5min，提取。氮气吹干。力口lml流动相溶解，取20pL进样，进行RP-HPLC测定。色语条件Discovery柱(25cmx4.6mm，5pm),流动相曱醇乙腈(25:75),流速1.0mL/min，才企测波长227nm。数据处理方法血药浓度凄t据用中国药理学会编制的3P87药动学程序进行处理。结果测得的三种制剂的AUC面积分别为98.54h.pg/mL(泰索帝注射液)、246.19hfxg/mL(多西他赛非隐形胶束)和489.25hpg/mL(多西他赛隐形胶束)。实施例9取20mg多西他赛溶于50ml乙醇，加入20g/L的聚乙二醇化聚谷氨酸节酯(PEG4000-PBLG)两亲嵌段共聚物(制法如下将PBLG20mg、N,N-二环己基碳酰亚胺10mg、N-羟基丁二酰亚胺10mg溶于二曱亚砜25ml,搅拌3小时，过滤取滤液，PEG400020mg溶于二氯曱烷30ml后加入其中，继续搅拌4小时，过滤取滤液，0。C放置24小时重结晶，过滤，冷冻干燥，即得。)三氯曱烷溶液50ml，置于旋蒸瓶中，再加入20mg聚山梨酯80,混合均匀.于40。C恒温水浴中用旋转仪除去有机溶剂形成含药脂膜，再真空干燥除尽残留的有机溶剂。于上述脂膜中加入pH6.8磷酸盐緩冲溶液100ml，充氮气，密封，于40。C恒温水浴中水化30min,室温下放置2h后即得多西他赛的隐形胶束，50ml水稀释，加蔗糖1.5g作为支撑剂，冷冻干燥制成冻干粉针。以PBLG代替PEG4000-PBLG以上述相同的方法制备多西他赛非隐形胶束。以去离子水为分散介质测定样品的平均粒径，测得粒径为60~360nm，平均粒径190nm。测定包封率包封率=(1-游离多西他赛/总多西他赛)x100%;测得的多西他赛隐形胶束的包封率为85.6%。泰索帝注射液、多西他赛非隐形胶束和多西他赛隐形胶束均用生理盐水稀释至多西他赛剂量0.65mg/mL,给药量5mg/kg，大鼠尾静脉注射。给药后于l、3、6、12、24和48h取血，用肝素抗凝，离心分离血浆。加入内标物，用曱醇混合5min后移至离心管，4000rpm离心5min，提取。氮气吹干。加lml流动相溶解，取20iiL进样，进行RP-HPLC测定。色i普条4牛Discovery柱(25cmx4.6mm,5jim)，流动相曱醇乙腈(25:75),流速1.0mL/min，检测波长227nm。数据处理方法血药浓度凄t据用中国药理学会编制的3P87药动学程序进行处理。结果测得的三种制剂的AUC面积分别为98.54h.pg/mL(泰索帝注射液)、175.58h屮g/mL(多西他赛非隐形胶束)和404.58h'吗/mL(多西他赛隐形胶束)。实施例10取15mg多西他赛溶于80ml乙醇，加入20g/L的聚乙二醇化聚谷氨酸节酯(PEG4000-PBLG)两亲嵌段共聚物(制法同实施例9)三氯曱烷溶液60ml和聚氧乙烯25mg，置于旋蒸瓶中，再加入0.5mg三乙胺，混合均匀。于4(TC恒温水浴中用旋转仪除去有机溶剂形成含药脂膜，再真空干燥除尽残留的有机溶剂。于上述脂膜中加入pH6.8磷酸盐緩冲溶液100ml，充氮气，密封，于4(TC恒温水浴中水化30min，室温下放置2h后即得包载多西他赛的隐形胶束，50ml水稀释，加蔗糖1.5g作为支撑剂，冷冻干燥制成冻干粉针。用PBLG代替PEG4000-PBLG使用上述相同的方法制备多西他赛非隐形胶束。以去离子水为分散介质测定样品的平均粒径，测得粒径为70~420nm，平均粒径220nm。测得的多西他赛隐形胶束的包封率为80.56%。泰索帝注射液、多西他赛非隐形胶束和多西他赛隐形胶束均用生理盐水稀释至多西他赛剂量0.65mg/mL,给药量5mg/kg，大鼠尾静脉注射。给药后于l、3、6、12、24和48h取血，用肝素抗凝，离心分离血浆。加入内标物，用甲醇混合5min后移至离心管，4000rpm离心5min，提取。氮气吹干。力。lml流动相溶解，取20pL进样，进行RP画HPLC测定。色i普条4牛Discovery柱(25cmx4.6mm，5(im)，流动相曱醇乙腈(25:75)，流速1.0mL/min，才企测波长227nm。数据处理方法血药浓度数据用中国药理学会编制的3P87药动学程序进行处理。结果测得的三种制剂的AUC面积分别为98.54h.(xg/mL(泰索帝注射液)、168.79h.jig/mL(多西他赛非隐形胶束)和325.59h.pg/mL(多西他赛隐形胶束)。权利要求1、一种长循环制剂，该制剂为隐形纳米粒、隐形脂质体或隐形胶束，其特征在于，所述制剂包含多西他赛0.1％～5wt％载体材料0.01％～48wt％附加剂50％～99.8wt％。2、如权利要求l所述的长循环制剂，所述载体材料为亲水性物质聚乙二醇修饰的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚十六烷基氰基丙烯酸酯、聚乳酸、聚乳酸乙醇酸共聚物、聚己内酯共聚物、磷脂酰乙醇胺、聚谷氨酸卡酯的一种或多种。3、如权利要求2所述的长循环制剂，所述聚乙二醇选自PEG1000、PEG2000、PEG4000、PEG6000中任意一种或几种的混合物。4、如权利要求1所述的长循环制剂，所述附加剂选自卵磷脂、胆固醇、维生素E、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯酮、泊洛沙姆、曱基聚唑啉、聚山梨酯、三乙胺、聚氧乙烯中的任意一种。5、如权利要求l所述的长循环制剂，.其粒径在20~500nm的范围内。6、一种制备权利要求1所述的长循环制剂的方法，其特征在于，(a)取多西他赛、载体材料及附加剂溶于有机溶剂中，水浴减压除去有机溶剂，形成薄膜后，加入水溶液，使得薄膜溶胀水合，超声分散形成多西他赛隐形脂质体；或(b)取多西他赛溶于无水乙醇中，加入含有载体材料的有机溶剂，超声乳化得W/0初乳；再将此初乳力口入含附加剂的水溶液中，超声得W/0/W复乳；加入水溶液中，减压蒸发，除去有机溶剂即得隐形纳米粒胶体溶液，离心、沉淀洗涤即得多西他赛隐形纳米粒；或(C)取多西他赛溶于乙醇，加入含载体材料和附加剂的有机溶剂，用旋转仪除去有机溶剂形成含药脂膜，再真空干燥除尽残留的有机溶剂，加入緩沖溶液水浴中水化，室温下放置即得包载多西他赛的隐形胶束；所述有机溶剂为无水乙醇、二氯曱烷、三氯曱烷中的任意一种或多种。7、如权利要求1所述的长循环制剂，其特征在于，可制成注射剂。8、如权利要求1所述的长循环制剂，其特征在于，还可经冷冻干燥制成冻干粉针。9、如权利要求8所述的长循环制剂，所述冻干粉针的支撑剂为葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露醇的一种或九种的混合物。10、如上述权利要求19任一项所述的长循环制剂在用于制备治疗恶性肿瘤的药物中的应用。全文摘要本发明提供了一种长循环制剂，其为包含多西他赛、载体材料和附加剂的隐形纳米粒、隐形脂质体或隐形胶束。该长循环制剂通过由亲水性物质聚乙二醇修饰的载体材料包裹多西他赛制备而成。本发明的多西他赛长循环制剂可以在体内躲过肝脾网状内皮系统的捕捉吞噬，延长了在血液内的循环时间，与普通多西他赛注射液及多西他赛非隐形脂质体相比，本发明的多西他赛长循环制剂对肿瘤具有更强的抑制作用。文档编号A61P35/00GK101317816SQ200710041810公开日2008年12月10日申请日期2007年6月8日优先权日2007年6月8日发明者李亚平,陈伶俐,顾王文申请人:中国科学院上海药物研究所