专利名称：超临界二氧化碳提取当归和川芎混合物中的总生物碱的方法
技术领域：
本发明涉及传统中草药领域，具体涉及超临界C02提取当归和川芎中 的总生物碱的方法。
背景技术：
当归为伞形科植物当归j"ge"o7w7im'^(01iv.)Diels的干燥根。当 归归肝、心、脾经，药性甘、辛、温，具有补血活血，调经止痛，润肠通 便的作用。用于血虚萎黄，眩晕心悸，月经不调，闭经痛经，虚寒腹痛， 肠燥便秘，风湿痹痛，跌打损伤，痈疽疮疡。主产于我国甘肃岷县。此外， 四川、陕西、云南、湖北等省亦有少量栽培。当归是传统中药，临床应用 广泛，有效部位及药理作用明确。近年来，国内外学者采用了植物化学、 分子生物学、生物化学、药理学等技术，开展了当归的化学成分及药理学 研究，取得长足进展，为当归的应用提供了依据。
川芎为伞形科植物h'gw"cwwc/^fl/o:/o/igHort.的干燥根茎，具有行气 活血、祛风止痛的功效。为活血化瘀常用中药。其化学成分的研究，国内 外报道较多。川芎主要成分的药理学研究表明总生物碱为川芎的主要有效 部位。
当归与川芎中含有的总生物碱具有扩张血管、降低血压、抗血小板聚 集、改善微循环等作用，是其发挥药效的主要的有效部位。
由于当归、川芎同属一科，有着伞形科植物共同的植物分类学特征， 有着相似的化学成分，有着相似的功能主治，常在活血和血的处方中同时 出现，常作为药对来应用，且应用十分广泛，2005版药典所载513首复方 成方制剂中有49首当归与川芎同用的处方。
现有技术提取总生物碱的方法有溶剂提取法、酸提碱沉法等，这些方 法提取工艺复杂，提取物中总生物碱的含量不高且含有大量的杂质，往往 需要进行进一步的纯化，并且在其提取的过程中需要大量的有机溶剂或酸
碱试剂。
超临界C02提取总生物碱的方法则可以解决上述的问题。
发明内容
为解决现有技术中提取总生物碱的方法的缺点，本发明对当归与川芎 进行了合提与分提的比较研究后，采用将当归和川芎药对混合物进行超临 界C02提取法，并以提取物中总生物碱含量为考察指标，对影响总生物碱
提取工艺的因素进行了研究，优选出当归和川芎中总生物碱的最佳超临界
萃取条件；经该工艺得到的提取物的总生物碱的含量可达40 52%。
超临界C02提取当归和川芎药对混合物中的总生物碱成分，需先进行
碱化，碱化剂的选择是非常重要的环节。常用的有三种碱化剂氢氧化钙、 氨水以及三乙胺，其中氨水的碱化效果较好。因此，本发明选择1 30%
氨水溶液作为碱化剂。同时为消除含水量对C02的超临界状态可能造成的
影响，还考虑增加夹带剂，本发明选择以70% 100%乙醇为夹带剂。 本发明的技术方案是
提供一种超临界C02提取当归和川芎混合物中的总生物碱的方法，其
特征在于，所述超临界C02的提取条件为萃取温度为60 80°C，萃取压 力为30 40MPa， C02流速为20 50L/h，萃取时间为1.0 2.0h，夹带剂 为70% 100%乙醇，碱化剂为1 30%氨水溶液，分离釜I温度40 55°C， 压力6 10Mpa，分离釜II温度30 40°C，压力4.0 6.0Mpa。
优选地，所述超临界C02的提取条件为萃取温度为65 75°C，萃取 压力为32 38MPa， C02流速为30 45L/h，萃取时间为1.2 1.8h，夹带 剂为90% 无水乙醇，碱化剂为5 25%氨水溶液，分离釜1温度40 50°C， 压力7 9Mpa，分离釜II温度32 38°C，压力4,5 5.5Mpa。
更优选地，所述超临界C02的提取条件为萃取温度为70。C，萃取压 力为35MPa， C(V流速为40L/h，萃取时间为1.5h，夹带剂为无水乙醇， 碱化剂为15%氨水溶液，分离釜I温度45°C，压力8 Mpa，分离釜II温度 35°C，压力5.0Mpa。
其中，所述夹带剂的用量为50 200ml /100g生药，所述碱化剂的用 量为20 100ml/100g生药，优选为80 180ml/100g生药，所述碱化剂的
用量为30 80ml/100g生药，更优选为150ml /100g生药，所述碱化剂的 用量为50ml/100g生药。
本发明还提供由该方法得到的总生物碱提取物，其中总生物碱的含量 为40 52%。
按照本发明方法得到的提取物中总生物碱的含量测定方法如下 标准曲线的制备
对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的川芎嗪对照品40mg，置 于20ml具塞试管中，氯仿定容至10ml，再加入磷酸盐缓冲液(pH5.8)5ml， 溴麝香草酚兰lml，振摇，静置使分层，分别吸取下层液4.0、 5.0、 6.0、 7.0、 8.0ml，氯仿定容至10ml。空白溶液的制备取20ml具塞试管，不 加川芎嗪对照品，加氯仿10ml，再加入磷酸盐缓冲液(pH5.8)5ml，溴麝 香草酚兰lml，振摇，静置使分层，取下层氯仿层液作空白对照。
取上述对照品溶液及空白溶液，于415nm波长处测定其吸光度值。以 对照品溶液的浓度为横坐标(X)，以相应的吸光度A为纵坐标(Y)，得回归 方程Y=0.3304X-0.1523，相关系数Y =0.9995。川芎嗪的标准曲线如图l 所示。
供试品溶液的制备精密称取超临界提取物100mg，置于10ml棕色 容量瓶中，用氯仿稀释至刻度，精密吸取5ml，置于15ml具塞试管中，用 氯仿定容至10ml，再加入磷酸盐缓冲液(pH5.8)5ml，溴麝香草酚兰lml， 振摇，取下层氯仿层液，作为供试品溶液。
含量测定分别取空白溶液、供试品溶液，于415nm波长处测定其吸 光度值，以标准曲线法计算超临界提取物中总生物碱的含量。
采用本发明方法提取当归与川芎混合药材中的总生物碱，具有低温操 作、耗能低、时间短、无有机残留等优点，所得固含物量少，总生物碱的 含量达到48 52%。该提取物可作为当归与川芎药对的有效部位进一步开 发制剂产品。
图1是川芎嗪的标准曲线。
具体实施方式
实施例1:
将当归与川芎的混合药材(l:l)粉末(40目)200g投入超临界萃取装 置的1L的萃取釜中，用超临界C02进行萃取。采用的碱化剂为15%的氨 水溶液100ml，夹带剂为无水乙醇300ml。萃取条件为萃取釜温度70。C， 压力35MPa;分离釜I温度45°C，压力8MPa;分离釜II温度35°C，压力 5.0MPa; CO2流速为40L/h;萃取时间为1.5h，得到超临界提取物。经该 工艺得到的超临界提取物经酸性染料比色法测定，总生物碱的含量为 52%。
实施例2:
将当归与川芎的混合药材(1:2)粉末(40目)200g投入超临界萃取装 置的1L的萃取釜中，用超临界C02进行萃取。采用的碱化剂为1%的氨水 溶液200ml，夹带剂为80。/。乙醇400ml。萃取条件为萃取釜温度75。C， 压力30MPa;分离釜I温度5(TC，压力10MPa;分离釜II温度4(TC，压力 6.0MPa; C02流速为50L/h;萃取时间为l.Oh，得到超临界提取物。经该 工艺得到的超临界提取物经酸性染料比色法测定，总生物碱的含量为 50%。
实施例3:
将当归与川芎的混合药材(1:0.5)粉末(40目)200g投入超临界萃取装 置的1L的萃取釜中，用超临界C02进行萃取。采用的碱化剂为30%的氨 水溶液40ml，夹带剂为90%乙醇100ml。萃取条件为萃取釜温度65。C， 压力40MPa;分离釜I温度4(TC，压力6MPa;分离釜II温度30°C，压力 5.5MPa; C02流速为30L/h;萃取时间为2.0h，得到超临界提取物。经该 工艺得到的超临界提取物经酸性染料比色法测定，总生物碱的含量为 49%。
实施例4:
将当归与川芎的混合药材(1:5)粉末(40目)200g投入超临界萃取装 置的1L的萃取釜中，用超临界C02进行萃取。采用的碱化剂为8%的氨水 溶液60ml，夹带剂为70%乙醇160ml。萃取条件为萃取釜温度60°C， 压力38MPa;分离釜I温度48°C，压力9MPa;分离釜II温度38°C，压力 5.5MPa; C02流速为45L/h;萃取时间为1,5h，得到超临界提取物。经该 工艺得到的超临界提取物经酸性染料比色法测定，总生物碱的含量为 47%。
实施例5:
将当归与川芎的混合药材(1:0.2)粉末(40目)200g投入超临界萃取装 置的1L的萃取釜中，用超临界C02进行萃取。采用的碱化剂为22%的氨 水溶液160ml，夹带剂为无水乙醇200ml。萃取条件为萃取釜温度8(TC， 压力32MPa;分离釜I温度55°C，压力7MPa;分离釜II温度35°C，压力 5.0MPa; C02流速为20L/h;萃取时间为1.5h,得到超临界提取物。经该 工艺得到的超临界提取物经酸性染料比色法测定，总生物碱的含量为 45%。
实施例6:
将当归与川芎的混合药材(1:3)粉末(40目)200g投入超临界萃取装 置的1L的萃取釜中，用超临界C02进行萃取。采用的碱化剂为10%的氨 水溶液80ml，夹带剂为75。/。乙醇350ml。萃取条件为萃取釜温度75匸， 压力35MPa;分离釜I温度35°C，压力8MPa;分离釜II温度35°C，压力 5.0MPa; C02流速为45L/h;萃取时间为1.5h，得到超临界提取物。经该 工艺得到的超临界提取物经酸性染料比色法测定，总生物碱的含量为 48%。
权利要求
1. 超临界CO2提取当归和川芎混合物中的总生物碱的方法，其特征在于，所述超临界CO2的提取条件为萃取温度为60～80℃，萃取压力为30～40MPa，CO2流速为20～50L/h，萃取时间为1.0～2.0h，夹带剂为70％～100％乙醇，碱化剂为1～30％氨水溶液，分离釜I温度40～55℃，压力6～10Mpa，分离釜II温度30～40℃，压力4.5～6.0Mpa。
2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述夹带剂的用量为50 200ml/100g生药，所述碱化剂的用量为20 100ml/100g生药。
3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超临界C02的提取条件 为萃取温度为65 75。C，萃取压力为32 38MPa， CO2流速为30 45L/h， 萃取时间为1.2 1.8h，夹带剂为90% 100%乙醇，碱化剂为5 25%氨水 溶液，分离釜I温度40 50。C，压力7 9 Mpa，分离釜II温度32 38。C ， 压力4.5 5.5Mpa。
4. 如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述夹带剂的用量为80 180ml /100g生药，所述碱化剂的用量为30 80ml/100g生药。
5. 如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述超临界C02的提取条件 为萃取温度为70。C，萃取压力为35MPa， CO2流速为40L/h，萃取时间为 1.5h，夹带剂为无水乙醇，碱化剂为15%氨水溶液，分离釜I温度45。C，压 力8Mpa，分离釜II温度35。C，压力5.0Mpa。
6. 如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述夹带剂的用量为150ml /100g生药，所述碱化剂的用量为50ml/100g生药。
7. 由权利要求1 6所述方法得到的总生物碱提取物。
8. 如权利要求7所述的总生物碱提取物，其特征在于，其中总生物碱 的含量为40 52%。
全文摘要
本发明提供一种超临界CO<sub>2</sub>提取当归和川芎混合物中的总生物碱的方法，其特征在于，所述超临界CO<sub>2</sub>的提取条件为萃取温度为60～80℃，萃取压力为30～40MPa，CO<sub>2</sub>流速为20～50L/h，萃取时间为1.0～2.0h，夹带剂为70％～100％乙醇，碱化剂为1～30％氨水溶液，分离釜I温度40～55℃，压力6～10MPa，分离釜II温度30～40℃，压力4.5～6.0MPa。
文档编号A61K36/236GK101380342SQ20071004568
公开日2009年3月11日 申请日期2007年9月6日 优先权日2007年9月6日
发明者杨义芳, 玫 许 申请人:上海医药工业研究院