专利名称：肝水解肽的医药新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及肝水解肽的医药新用途，属于医药技术领域。
背景技术：
再生障碍性贫血是由物理、化学、生物等因素引起的全血细胞减少性疾病，其临床特征以贫血、出血、感染、发热为主要表现。目前治疗再障的常规疗法是住院输血，激素控制，白蛋白改善，免疫抑制剂稳定，放化疗等，可昂贵的费用，动辄几万，不仅治疗费用贵，而且疗效一般。
肝水解肽是由健康猪或牛的肝脏经酶水解提取制得的含有多肽类、氨基酸、核酸类物质的提取液。肝水解肽能促进蛋白质合成，减少蛋白质分解，促进正常肝细胞的增值和再生，对四氯化碳诱导的肝细胞损伤有较好的保护作用，降低丙氨酸氨基转移酶，促进病变组织恢复。临床上采用肝水解肽制得的注射剂用于慢性肝炎、肝硬化等疾病的辅助治疗[参见国家食品药品监督管理局批准的注射用肝水解肽标准(YBH14942005)及其说明书和中国专利申请号200510031926.8的专利申请背景技术部分]。但肝水解肽在治疗再生障碍性贫血的应用未见报道。
发明内容
本发明所要解决的问题是提供肝水解肽的新用途，即肝水解肽在制备治疗再生障碍性贫血的药物中的应用，用肝水解肽制备的药物对再生障碍性贫血具有较好的疗效，且治疗费用较低。
本发明提供的技术方案是肝水解肽在制备治疗再生障碍性贫血的药物中的应用。
本发明以肝水解肽治疗再生障碍性贫血具有较好的疗效，且副作用少，治疗费用较低。本发明所述肝水解肽药物(如肝水解肽注射液、注射用肝水解肽、肝水解肽葡萄糖或氯化钠注射液等)可通过肌肉注射或静脉滴注给予。本领域技术人员可根据实际情况容易地确定给药剂量，一般可按照现有技术中肝水解肽的常规剂量给予。如肌肉注射时每日1-2次，0.02-0.04克/次；静脉滴注时每日1次，0.05-0.1克/次。
具体实施例方式
本发明通过以下实施例作进一步说明本发明通过采用马利兰诱导干细胞损伤成功复制了类似人类再生障碍性贫血模型，并采用肝水解肽药物对再生障碍性贫血模型小鼠进行治疗，取得了较好的治疗效果。
一、材料和方法1实验材料1)动物Balb/c小鼠，8～12周龄，16～20g。
2)药物及试剂(1)治疗药物注射用肝水解肽，湖南五洲通药业有限责任公司，规格20mg/瓶，用2ml蒸馏水溶解待用。
(2)模型药物马利兰，上海华联制药公司产品，2mg/片，用蒸馏水配成0.05％混悬液待用。
(3)阳性对照药物康力隆，广西南宁制药企业集团公司产品，2.0mg/片，用蒸馏水配成0.05％混悬液待用。
(4)阴性对照为生理盐水。
2方法1)动物造模小鼠再生障碍性贫血模型的建立用马利兰连续口服给药制成小鼠再生障碍性贫血模型，按照4ml马利兰·kg-1·d-1对小鼠灌胃给药6周，70％的给药小鼠外周血白细胞、血小板、血色素较正常小鼠降低1/3以上，成为小鼠再生障碍性贫血模型。表明马利兰可使造血干细胞受到损伤，数量明显减少，且恢复较慢，可用于观察药物对造血功能的影响。
2)小鼠分组造模成功小鼠随机分为5组模型组、阳性组、阴性组、肝水解肽小剂量组、肝水解肽大剂量组；每组15只。
(1)模型组造模后以生理盐水腹腔注射10天，0.2ml/天；(2)阳性组以康力隆灌胃10天，4毫克·公斤-1·天-1；(3)阴性组用正常小鼠以生理盐水腹腔注射10天，0.2ml/天；
(4)肝水解肽小剂量组肝水解肽腹腔注射10天，5毫克·公斤-1·天-1；(5)肝水解肽大剂量组肝水解肽腹腔注射10天，10毫克·公斤-1·天-1；3)指标测定(1)骨髓有核细胞计数颈椎脱臼处死小鼠，75％酒精浸泡消毒。取股骨，用RPMI-1640培养液冲出全部骨髓细胞。用7号针头反复吹打，过4号针头制成单细胞悬液，计数有核细胞。
(2)多能造血干细胞计数如(1)获得小鼠骨髓细胞，过4号针头制成单细胞悬液，按每只5×104有核细胞0.2ml，由尾静脉注入经850radγ线照射的Balb/c受体小鼠，9天后杀鼠取脾，固定于Boun′s液内，24h计脾结节数，并由供体股骨有核细胞数，计算出股骨内多能造血干细胞数。
(3)粒系祖细胞计数如(1)获得小鼠骨髓细胞，过4号针头制成单细胞悬液，培养体系包括RPMI-1640培养液，20％小牛血清，10％条件培养液，有核细胞105种入35mm培养皿，每皿1ml培养体系，在37℃，5％CO条件下培养7天后，低倍镜下按50个以上的细胞团为1个粒系祖细胞进行计数。
(4)红系祖细胞计数如(1)获得小鼠骨髓细胞，过4号针头制成单细胞悬液，注入双面扩散盒，每个双面扩散盒容积0.12ml，含1×104股骨有核细胞RPML-1640培养液，小牛血清和适量小鼠枸橼酸钠抗凝新鲜血浆，埋入受体小鼠腹腔，受体小鼠于埋盒前48h，分别腹腔注射50mg/kg盐酸苯肼各1次，埋盒后48h取出扩散盒，将其内容物制成压片，经联苯胺-苏木精染色，低倍镜下以8个以上联苯胺染色阳性的有核红细胞团为1个红系祖细胞进行计数。
统计方法采用SPSS9.0统计软件对各组数据进行单因素方差分析，组间比较采用t检验，全部结果均用X±SD表示。
二、结果和分析1.肝水解肽对再生障碍性贫血模型小鼠造血干细胞、造血祖细胞和骨髓有核细胞的影响表1各组小鼠的骨髓有核细胞数、多能造血干细胞、粒系祖细胞和红系祖细胞的检测结果
注与正常对照组比较，*P＜0.05；与模型对照组比较，△P＜0.05表1结果显示，与模型组比较，肝水解肽组对多能造血干细胞、粒系祖细胞、红系祖细胞和骨髓有核细胞数量回升有明显的促进作用，说明肝水解肽对再生障碍性贫血小鼠造血系统有促进造血作用。
2.肝水解肽对再生障碍性贫血模型小鼠外周血的影响表2各组小鼠的血红蛋白、红细胞、白细胞和血小板的检测结果
注与正常对照组比较，*P＜0.05；与模型对照组比较，△P＜0.05
表2结果表明，肝水解肽对再生障碍性贫血模型小鼠的血红蛋白、红细胞、白细胞和血小板有显著的恢复和治疗作用。
上述实动物实验证明肝水解肽可以有效提高再障小鼠红细胞、血红蛋白、白细胞和血小板的数目。说明肝水解肽对再生障碍性贫血有较好的治疗效果。
三、毒理学试验1、急性毒性试验按注射用肝水解肽1.3g/kg(相当临床推荐用量的625倍)的给药剂量对小鼠采用静脉和腹腔给药，连续观察14天，实验动物未见任何异常反应。
2、长期毒性试验按注射用肝水解肽临床推荐用量的2、50、100倍对大鼠和犬每天由静脉和腹腔两种方式给药，连续3个月，实验动物于给药结束及恢复期，血液学指标、血液生化指标与对照组比均无显著差异(p＞0.05)。系统尸解和病理组织学检查未见药物引起的异常改变和延迟性毒性反应。
权利要求
1.肝水解肽在制备治疗再生障碍性贫血的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及肝水解肽的医药新用途。本发明以肝水解肽治疗再生障碍性贫血具有较好的疗效，且副作用少，治疗费用较低。本发明所述肝水解肽药物(如肝水解肽注射液、注射用肝水解肽、肝水解肽葡萄糖或氯化钠注射液等)可通过肌肉注射或静脉滴注给予。本领域技术人员可根据实际情况容易地确定给药剂量，一般可按照现有技术中肝水解肽的常规剂量给予。如肌肉注射时每日1－2次，0.02－0.04克/次；静脉滴注时每日1次，0.05－0.1克/次。
文档编号A61K35/37GK101077414SQ200710052200
公开日2007年11月28日 申请日期2007年5月18日 优先权日2007年5月18日
发明者陈雪红, 廖毅, 杨旸 申请人:武汉同源药业有限公司