从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法

专利名称：从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法
技术领域：
本发明涉及一种从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法，属于从天然产 物中提取生物活性成分的技术。
背景技术：
桑叶异名铁扇子，为桑科植物桑(Morus alba丄)的叶，味苦，甘、寒，分布于全国大部分 地区。现代药理研究证明桑叶可抑制血糖升高，可预防和治疗糖尿病。此外，桑叶还具有祛 风清热、凉血明目的功效，药性平和且无毒副作用，已经被国家卫生部正式归入"既是食品又 是药品"之列。桑叶中含有多种活性成分，包括生物碱、多糖、黄酮、多酚、氨基酸以及多种微量元素， 其中最主要的活性成分为生物碱、多糖及黄酮。AsanoN从桑叶中分离鉴定出ll种生物碱， 其中l-脱氧野尻霉素(DNJ)在桑叶中的含量达0.1%，远高于其他植物，是a-葡萄糖苷酶最 有效的抑制剂之一，具有很强的降血糖作用。桑叶总多糖也是桑叶中的主要活性成分，对四 氧嘧啶糖尿病小鼠有显著的降血糖作用。桑叶中总黄酮含量约占桑叶干重的1.0% 3.0%，主 要含有芦丁、异槲皮苷，槲皮素-3-三葡萄糖苷及紫云英苷等，具有抗氧化、抑制血清脂质增 加以及抑制动脉粥样硬化形成等作用。有研究表明，桑叶黄酮也具有降血糖作用，且将黄酮 与DNJ结合，比单独的DNJ更能有效地抑制血糖的上升。且因此提取分离和纯化桑叶中的 生物碱、多糖以及黄酮类活性有效部位，制成中成药或功能保健食品均具有广阔的前景。目前关于桑叶中活性有效部位的分离方面已有一些相关专利，如国内专利号03101988.9 "一种含有桑叶总碱浸膏的制剂及其制备方法"，公开了一种桑叶中的生物碱的制备方法；专 利号200510012388.8 "—种桑叶黄酮提取方法"，公开了一种分离桑叶中的黄酮的方法；专 利号01129976.2 "—种桑叶多糖产品及其用途"，公开了一种多糖的提取工艺；专利号 200610038713.2 "桑叶降血糖有效组分组合物及制备方法"公开了一种分离桑叶中的生物碱 和多糖的方法。但是这些专利仅能分离出一种或两种有效成分，其它有效成分则在纯化过程 中不得不被作为杂质除去，不仅造成了很大的资源浪费，产品成本也较高。而且现有的专利 均以水为溶剂提取桑叶中的生物碱，而我们的研究实验表明，水对生物碱的提取率低于一定 浓度溶剂的提取率，而且水提液中成分复杂，给后续的分离带来了困难。另外，目前对提取 的桑叶多糖一般概念笼统，对其结构和类别的分析还未见报道。发明内容本发明的目的是提供一种从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法，该方 法过程简单，提取物中生物碱、黄酮和多糖含量高。本发明是通过以下技术方案加以实现的， 一种从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活 性成分的方法，其特征在于包括以下过程1) 按干燥桑叶重量与溶液的体积比为1: 10 15，将粉碎后的干燥桑叶浸泡于体积浓度 为20% 90%的乙醇溶液，或浸泡于体积浓度为10% 卯％的丙酮溶液，在95'C条件下回流 提取3次，每次提取30min，将提取液混合并减压过滤，得到滤液和滤渣。2) 将步骤l)所得滤液经减压蒸发除去乙醇，然后按干燥桑叶重量与去离子水的体积比 为l: 10 15加入去离子水，静置2h，离心分离。上清液通过大孔树脂X-5、 DlOl、 D4020、 或H103，在20 3(TC吸附，首先用离子水洗脱大孔树脂，然后用乙醇或丙酮溶液洗脱大孔树 脂，收集洗脱液，洗脱液经减压蒸发去除乙醇或者丙酮，得到质量含量为30% 50%的黄酮 类化合物，黄酮的主要成分是芦丁和异槲皮苷。3) 流经过大孔树脂后的溶液，通过型号为001X7、 001X4或001X7X7的阳离子交换 树脂在20 30'C吸附5 10h,先用去离子水冲洗树脂，再以氨水洗脱树脂得到洗脱液，洗脱液 浓縮至无氨水残留，再通过型号为201X7、 D201或201X4的阴离子交换树脂吸附，用去离 子水洗脱阴离子交换树脂得洗脱液，洗脱液经减压蒸发，得到质量含量为40% 60%的生物 碱化合物，生物碱的主要成分是1-脱氧野尻霉素(DNJ)。4) 将步骤l)中得到的桑叶滤渣用10 15倍体积的去离子水在60 90'C下煎煮两次，减 压过滤，收集滤液，滤液经过活性炭脱色，脱色后的滤液减压浓縮至提取液体积的1/5 1/10， 之后向浓縮液中加入乙醇，使浓縮液中乙醇体积浓度为10% 60%，静置10 15h，离心分离 得沉淀物。再依次用无水乙醇、丙酮以及乙醚洗涤沉淀物，得到质量含量为55% 85%的多 糖类化合物，该多糖化合物主要成分为酸性多糖，其分子量500,000 550,000Da。本发明的优点在于，选用的20% 90%的乙醇或10% 90%的丙酮溶液对桑叶中的生物 碱和黄酮具有很好的浸取能力，而对桑叶中多糖浸取能力差，另外，过程中所采用的大孔树 脂对黄酮有较强的吸附能力，但对生物碱吸附能力较差，因此过程中能连续地将桑叶中的生 物碱、黄酮和多糖分离，且分离速率快，产物中成分含量高。


图1为本发明实施例2所提取的黄酮的液相色谱图，图中峰1为芦丁成分，峰2为异槲皮苷成分。图2为本发明实施例2所提取的生物碱的液相色谱图，图中峰1为1-脱氧野尻霉素成分。 图3为本发明实施例2所提取多糖的HP-GPC图，图中峰1为多糖成分。
具体实施方式
例1将粉碎后的桑叶原料400g加入4L的30%乙醇水溶液，在95'C条件下回流提取，重复 提取3次，每次30min，三次得到的提取液分别为2.9L、 3.7L、 4.1L，合并提取液，过滤。
滤渣晾干备用，将所得滤液中乙醇蒸干得浸膏，然后在浸膏中加入2L去离子水将其溶解，静 置2h，离心分离。上清液通过200g D4020大孔树脂，在25"C条件下吸附5h。然后先用2L 去离子水冲洗大孔树脂，再用1L的60%的乙醇水溶液洗脱大孔树脂，收集乙醇洗脱液，减 压蒸干洗脱液，得到浸膏6.3g，其中总黄酮的质量含量为31%。流经大孔树脂后的溶液，通过50g的001X4阳离子交换树脂在25。C下吸附5h，先用 500ml去离子水冲洗树脂，再以150ml氨水洗脱树脂得洗脱液，将洗脱液浓縮至30ml，浓縮 后得洗脱液再通过201X4阴离子交换树脂(50 g)，并用500ml去离子水洗脱阴离子交换树 脂，洗脱液经减压蒸发，得浸膏1.3g，其中生物碱DNJ的质量含量为43.0W。以上述提取完生物碱及黄酮后的桑叶滤渣为原料，加入3L去离子水，放入70。C恒温水 浴中，浸提1.5h，提取2次，两次提取液分别为1.8L和2.7L，合并提取液并过滤，调节滤液 pH3.0，滤液经200g活性炭脱色后浓縮至500ml,然后在浓縮后的提取液中加入乙醇，调节 乙醇体积浓度为40%,静置12h，离心分离得沉淀。依次采用无水乙醇、丙酮以及乙醚洗涤 沉淀物，得桑叶总多糖沉淀6.28，其中中性多糖含量21%，酸性多糖含量为51.3%。 例2将粉碎后的桑叶原料400g加入4L的70%乙醇水溶液，在95。C回流提取3次，每次30min， 得到三次的提取液分别为2.8L、 3.3L、 3.8L，合并提取液并过滤，滤渣晾干备用，将所得滤 液中乙醇蒸干得浸膏，然后在浸膏中加入4L蒸馏水，静置2h，离心分离。上清液通过200g 的H-103大孔树脂，在3(TC条件下吸附。然后先用2L去离子水冲洗大孔树脂，再用1L的 60%的丙酮水溶液洗脱大孔树脂，减压蒸干洗脱液，得到浸膏7.6g，其中总黄酮的质量含量 为36%。流经大孔树脂后的溶液，通过60g的001X7阳离子交换树脂在25'C下吸附5h，先用 600ml去离子水冲洗树脂，再以300ml氨水洗脱树脂得洗脱液，将洗脱液浓缩至50ml，浓缩 后得洗脱液再通过201X7阴离子交换树脂(80g)吸附，并用500ml去离子水洗脱阴离子交 换树脂，减压蒸干洗脱液，得浸膏1.0g，其中生物碱DNJ质量含量50.2n/0。以上述提取完生物碱及黄酮成分后的桑叶滤渣为原料，加入2L去离子水，放入6(TC恒 温水浴中，浸提1.5h，提取2次，两次提取液分别为UL和1.9L，合并提取液并过滤，调节 滤液pH4.0，滤液经200g活性炭脱色后浓縮至400ml，然后在浓縮后的提取液中加入乙醇， 调节乙醇体积浓度为60%，静置12h，离心分离得沉淀。依次用无水乙醇、丙酮以及乙醚洗 涤沉淀物，得桑叶总多糖沉淀7.1g，其中中性多糖含量15%，酸性多糖含量为56.8%。 例3将粉碎后的桑叶原料400g加入4L的30%乙醇水溶液，95"C回流提取3次，每次30min， 得到三次的提取液分别为2.8L、 3.5L、 4.2L,合并提取液并过滤，滤渣晾干备用，将所得滤 液中乙醇蒸干得浸膏，然后在浸膏中加入4L蒸馏水，静置2h，离心分离。上清液通过200g 的D101大孔树脂，在28。C下吸附。然后先用2L去离子水冲洗大孔树脂，再用化的60%的
丙酮水溶液洗脱大孔树脂，将得到的洗脱液减压蒸干，得到浸膏6.5g，其中总黄酮的质量含 量为37%。流经大孔树脂后的溶液，通过80g的001X7X7阳离子交换树脂在25'C下吸附5h，先 用800ml去离子水冲洗树脂，再以200ml氨水洗脱树脂，收集氨水洗脱液并浓缩至50ml，浓 縮后的洗脱液再过D201阴离子交换树脂(100g)吸附，并用1L去离子水洗脱阴离子交换树 脂，减压蒸干洗脱液，得浸膏l,2g，其中生物碱DNJ的质量含量为40.3Q/0。以上述提取完生物碱及黄酮成分后的桑叶滤渣为原料，加入2L去离子水，放入8(TC恒 温水浴中，浸提1.5h，提取2次，两次提取液分别为UL和1.9L，合并提取液并过滤，调节 滤液pH2.0，滤液经300g活性炭脱色后浓縮至500ml，然后在浓缩后的提取液中加入乙醇， 调节乙醇体积浓度为15%，静置12h，离心分离得沉淀。依次用无水乙醇、丙酮以及乙醚洗 涤沉淀物，得桑叶总多糖沉淀7.0g，其中中性多糖含量25%，酸性多糖含量为59.2%。
权利要求
1、一种从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法，其特征在于包括以下过程1)按干燥桑叶重量与溶液的体积比为1∶10～15，将粉碎后的干燥桑叶浸泡于体积浓度为20％～90％的乙醇溶液，或浸泡于体积浓度为10％～90％的丙酮溶液，在95℃条件下回流提取3次，每次提取30min，将提取液混合并减压过滤，得到滤液和滤渣；2)将步骤1)所得滤液经减压蒸发除去乙醇，然后按干燥桑叶重量与去离子水的体积比为1∶10～15加入去离子水，静置2小时，离心分离，上清液通过大孔树脂D4020或H103在20～30℃吸附，首先用离子水洗脱大孔树脂，然后用乙醇或丙酮溶液洗脱大孔树脂，收集洗脱液，洗脱液经减压蒸发去除乙醇或者丙酮，得到黄酮类化合物浸膏；3)流经过大孔树脂后的溶液，通过型号为001×7或001×7×7的阳离子交换树脂在20～30℃吸附5～10小时，先用去离子水冲洗树脂，再以氨水洗脱树脂得到洗脱液，所得洗脱液浓缩到无氨水残留，浓缩后的洗脱液再通过型号为201×7或201×4的阴离子交换树脂吸附，再用去离子水洗脱阴离子交换树脂得洗脱液，洗脱液经减压蒸发，得到生物碱化合物浸膏；4)将步骤1)中得到的桑叶滤渣用3倍体积的去离子水在60～80℃下煎煮两次，减压过滤，收集滤液，滤液经过活性炭脱色，脱色后的滤液减压浓缩至提取液体积的1/5～1/10，之后向浓缩液中加入乙醇，使浓缩液中乙醇体积浓度为10％～60％，静置10～15小时，离心分离得沉淀物，再依次用无水乙醇、丙酮以及乙醚洗涤沉淀物，得到质多糖类化合物。
全文摘要
本发明涉及一种以桑叶为原料连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法。包括以下步骤选用溶剂为20％～90％的乙醇或10％～90％的丙酮回流提取，得到滤液和滤渣；滤液浓缩、加水溶解后，通过大孔树脂分离得含量为30％～50％的黄酮类化合物；经过大孔树脂后的溶液，再通过离子交换树脂分离得含量为40％～60％的生物碱类化合物；桑叶滤渣，用水煎煮并脱色，10％～60％醇沉，得含量为55％～85％的酸性多糖类化合物。本发明通过一次投料连续高效地分离了桑叶中生物碱、黄酮及多糖三种生物活性成分，各步骤互不干扰且提取率高，工艺操作简单，成本低，利于工业推广和应用。
文档编号A61K36/605GK101209284SQ20071006012
公开日2008年7月2日 申请日期2007年12月24日 优先权日2007年12月24日
发明者李淑芬, 杨鸿玲, 林江博, 田松江, 贾冬冬 申请人:天津大学