3，4，5，4’-四甲氧基-α，β-二苯乙烷-3’-O-硫酸酯钠盐及其应用的制作方法

专利名称：：3，4，5，4’-四甲氧基-α，β-二苯乙烷-3’-O-硫酸酯钠盐及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及3,4，5，4，-四甲氧基-a，p-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐及其用途。技术背景癌症是一种严重危害人类健康的疾病。在全球，癌症每年大约夺去600万人的生命，并有1000万人处于死亡的边缘。世界卫生组织预测21世纪癌症将成为人类的"第一杀手"。根据全国性死因回顾调査表明，20年来中国的癌症发病和死亡率逐年上升，每5个因病死亡的人中，就有l个是死于癌症，每200个家庭中，有l个家庭因有癌症病人而遭受磨难。在过去的几十年中出现了多种癌症治疗方法，主要包括手术治疗、放射治疗、化学治疗、激素治疗、基因治疗和免疫治疗。其中，手术治疗、放射治疗、化学治疗已成为主要手段。化学治疗指运用化学药物来治疗癌症。化学药物治疗是肿瘤诊疗中发展最快的一个领域，大量的针对不同靶点的新药开始应用于临床，对药物作用机制及药代动力学研究的进展，也使临床给药途径与方式更加适合于杀伤肿瘤细胞、保护正常组织。目前化学治疗的药物主要有影响核酸生物合成的药物(抗代谢物)，如氟尿嘧瞎、6-羟基嘌呤、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、羟基脲；直接破坏DNA并阻止其复制的药物如烷化剂类；抗肿瘤抗生素类如顺铂及卡铂；干扰转录过程阻止RNA合成的药物，如放线菌素D、阿霉素、其他抑制转录过程的抗生素；影响蛋白质合成的药物，如长春碱类、鬼臼毒素类、三尖杉酯碱、L-门冬酰胺酶；激素类，如肾上腺皮质激素、雌激素、雄激素、他莫西芬、氨鲁米特。目前常用抗癌化疗与放疗的方法可造成对人体不利的严重毒副反应。许多天然药物的干扰微管蛋白聚合或解聚特性，被认为是具有抗肿瘤的活性，包括长春新碱，紫杉烷和大环内酯类抗肿瘤药。微管在细胞分裂中具有重要作用，开发微管蛋白结合因子是基于他们具有干扰细胞增殖的能力。微管蛋白的解聚因子，如秋水仙素和长春新碱，具有抗有丝分裂的作用，导致肿瘤血管闭合。但是这个使肿瘤血管闭合的作用只能在药量接近MTD(最高耐受剂量)时产生。最新被发现的血管生成抑制因子Endostatin，对新生血管生成有抑制作用，而对已形成的血管并没有明显作用，对肿瘤血管也没有明显的耙向作用。近几年发现的一类新型的微管蛋白解聚因子能解决这个问题，它能在低于MTD的剂量下就能使血管闭合(ExpertOpinInvestigDrugs.2004Sep;13(9)1171-82)。LoYcVincent等人在2005年提到了一类具有类似属性的新型微管蛋白解聚因子,作为血管靶点因子(VTAs)能破坏微管蛋白骨架，文献数据显示血管靶点因子能选择性诱导肿瘤血管的衰退，部分通过VE-cadherin信号通道。这类微管蛋白解聚因子选择性的破坏肿瘤血管，并阻止新生肿瘤血管形成，而且对正常血管系统没有影响。同时它能抑制微管蛋白的聚合、选择性的导致肿瘤血管功能紊乱和结构的破坏、诱导血管内皮细胞调亡，使得肿瘤细胞失去营养和氧气的支持，而发挥其杀伤肿瘤细胞或抑制肿瘤转移的作用。GillianM.Tozer等人于2005年曾在具影响力的杂志NatureRevCancer中报道，指出该类化合物不但影响血管内皮细胞的增殖，也影响内皮细胞的迁移，快速改变血管内皮细胞形态，引起内皮细胞凋亡，打断血管中内皮细胞的连接，从而迅速导致肿瘤血管功能紊乱和结构的破坏。由于一般正常血管都是通过平滑肌细胞支撑的，这一类化合物只作用于没有平滑肌细胞支持的血管，对平滑肌支持的血管没有影响，从而迅速并有选择性的导致肿瘤血管功能紊乱和结构的破坏，进而能选择性的作用于肿瘤细胞，对正常细胞的毒性大大降低(NatRevCancer.2005Jun;5(6)423-35、J.Clin.Invest"November1，2005;115(11):2992-3006)。这类药物目前被认为是抗肿瘤最有前景的药物之一。目前国外同时在开展研究的该类药物只有CombretastatinA-4进入临床研究，由于通过双键连接，在Combretastatin中芪类单元的最有效破坏肿瘤血管是顺式构型，而反式构型的芪类化合物对肿瘤没有抑制作用。由于存在顺反异构，极易发生异构化等反应，反式结构不但没有药效，同时也会带来一定的毒副作用(CombretastatinA-4LD50为500mg/kg)，使得CombretastatinA-4在保存和实际应用中带来了很大的困难。本发明中3，4，5，4，-四甲氧基-ci，e-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐为合成的化合物，其结构式如式(I):它是由本公司自己创新、研制的一种全新化学物质、全新结构的肿瘤血管抑制剂，不同于CombretastatinA-4，两个苯环是通过单键连接，使得3，4，5,4'-四甲氧基-a，P-二苯乙垸-3，-0-硫酸酯钠盐和(:01111^&31^1^-4结构的不同、构象、结合力、逆反等作用都不同，极大的提高了药物的稳定性(光能使CombretastatinA-4异构为反式构型。因此需要避光保存)，也提高了对微管蛋白的作用功能。3，4,5，4，-四甲氧基-a，p-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐具有良好的水溶性，它通过定向打靶，针对性地作用于是肿瘤血管，对非肿瘤血管没有作用，这比直接抑制肿瘤细胞生长的传统化疗药物有更大的优势；克服了传统的抗肿瘤药物的毒副作用大，会导致耐药的局限。对其在抗肿瘤的研究表明，3，4，5,4'-四甲氧基-a,e-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐不但对肿瘤细胞具有杀伤作用，联合用药的试验表明，3,4，5，4，-四甲氧基-ct,e-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐对于化疗药物具有显著的增效作用。
发明内容本发明的一个目的在于提供式(I)化合物，化学名为3，4，5，4'-四甲氧基-a，P-二苯乙垸-3，-0-硫酸酯钠盐。o式(I)中Na也可以为H、K或NH4等金属、铵盐或有机胺。本发明的另一个目的在于提供含有式(I)化合物的药物组合物，以式(I)化合物为药效成分，添加药学上可接受的辅料，可以获得本发明的药物组合物。本发明的再一个目的在于提供式(I)化合物和含有式(I)化合物的药物组合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。本发明的再一个目的在于提供式(I)化合物和含有式(I)化合物的药物组合物在制备联合抗肿瘤药物的应用。本发明所指的肿瘤可为实体肿瘤例如肉瘤和癌(例如纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝脏肿瘤、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维耳姆斯氏瘤、颈癌、子宫癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质细胞瘤、神经鞘瘤、脑膜瘤、黑素瘤、神经母细胞瘤和成视网膜细胞瘤)，也可为血液瘤例如白血病(例如急性白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、急性髓母细胞白血病、急性前髓细胞白血病、急性髓单核细胞白血病、急性单核细胞细胞白血病、急性红白血病、慢性白血病、慢性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病)、真性红细胞增多、淋巴瘤(何杰金氏病、非何杰金氏病)、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症、重链病。优选地，为肉瘤、肝癌、肺癌、黑色素瘤、白血病、人食管癌、胃腺癌。研究表明，3，4,5，4，-四甲氧基-ci，g-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐通过抑制微管蛋白的聚合、选择性的导致肿瘤血管功能紊乱和结构的破坏、诱导血管内皮细胞调亡，使得肿瘤细胞失去营养和氧气的支持，而发挥其杀伤肿瘤细胞或抑制肿瘤转移的作用。3，4，5，4，-四甲氧基-a，P-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐还可以联合其他治疗方法，如化学治疗、外科手术、放射治疗、免疫疗法、抗血管生成疗法或者基因疗法，显著增加对肿瘤的治疗效果。优选地，所述另外的治疗为使用抗肿瘤药物的化学疗法。更优选地，所述另外的治疗为使用细胞毒素和抗增殖、抑制血管生成的药物的治疗，优选的药物包括顺铂、氟尿嘧啶、阿霉素、瘤可宁、美法仑、红豆杉醇、依立替康(irinotecan，CPT-ll)、阿瓦斯汀(Avastin)、ZD6126(N-acetylcochinol-O-phosphate)和脉管转點蛋白(vascularendothelial-cadherin)的抗体anti-VE-cadherin(BV13)或againstVE-cadherin(E4G10)等。在与DDP联合用药对S180肿瘤模型实验中(实施例)，3，4，5，4'-四甲氧基-01,(3-二苯乙垸-3，-0-硫酸酯钠盐显示了与DDP的联合用药对抑制S180肿瘤有很好的协同作用。以3,4，5,4，-四甲氧基-a，e-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐为药效成分，添加药学上可接受的药用辅料并通过本领域的常规方法可以制备用于本发明的药物组合物。本药物组合物的剂型可以是口服给药的剂型诸如片剂、胶囊(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊和微囊)、粉剂、颗粒剂和糖浆剂；非口服给药的剂型诸如注射剂、冻千制剂、栓剂、丸剂、凝胶剂和贴剂。除这些常规剂型外，还可以将口服的速释固体制剂(例如片剂、颗粒剂等)和用于口服或非口服给药的缓释制剂(片剂、颗粒、精细颗粒、丸剂、胶囊、糖浆、乳剂、悬浮液、溶液)用于本发明，通过常规方法也可以制备这些制剂。本发明中的制剂可以是包衣或未包衣的形式，视需要而定。本发明优选的是将3,4,5,4'-四甲氧基-a,P-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐用于注射给药和口服的剂型。本发明中的药用辅料包括用于固体制剂的赋形剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、稳定剂、发泡剂、包衣剂等，或用于半固体制剂、液体制剂的溶剂、增溶剂、悬浮剂、等渗剂、缓冲剂、润肤剂、乳化剂等，此外，也可以根据需要使用其它药用添加剂诸如防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂和矫味剂等。下列实施例只用于说明发明，而对本发明的保护范围无任何的限制。具体实施方式3,4,5,4，-四甲氧基-a,P-二苯乙垸-3，-0魂酸酯钠盐的制备实施例13，4，5，4，-四甲氧基-a,P-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐的制备3,4，5，4，-四甲氧基-a,e-二苯乙垸-3，-0-硫酸酯钠盐由浙江赛尔生物医学研究有限公司提供，其他试剂材料如无特别说明均为市售产品。3，4，5，4，-四甲氧基-a，p-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐的制备方法具体描述如下1、3，4,5-三甲氧基苄醇的制备250ml的三颈瓶中，加入3，4,5-三甲氧基苯甲醛15g(76.45mmol)，200ml的无水乙醇，加热4(TC溶解，再加入硼氢化钠1.48g(38.23mmo1)，加热回流45min后，TLC检测，反应完全后，冷却至室温，加入去离子水10ml(555.8mmo1)，淬灭后，抽滤，滤渣用20ml无水乙醇洗涤，合并滤液后，用旋转蒸发仪浓縮至干，加入lOOml二氯甲烷溶解，用2N氢氧化钠溶液50mlx2洗涤，再用去离子水50mlx2洗涤，加入适量的无水硫酸镁干燥过夜。过滤，用20ml二氯甲烷洗涤滤渣，合并滤液，用旋转蒸发仪浓縮至干，得3，4，5-三甲氧基苄醇，无色油状物14.05g，收率92.72%。得到的产物不需要进一步纯化，即可进行下一步反应。若想得到纯品可以减压蒸馏，收集BP216—218'C/12mmHg的馏分。2、3,4，5-三甲氧基苄溴的制备3，4，5-三甲氧基苄醇14.05g(70.89mmo1)，用100ml二氯甲烷溶解，加入到250ml的三颈瓶中，三溴化磷6.73ml(70.89mmo1)溶于25ml二氯甲烷中，室温反应50min后，冰浴冷却，缓慢滴加18ml去离子水18ml(l.Omol)，淬灭反应。然后再用100mlx2去离子水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，用20ml二氯甲烷洗涤滤渣，合并滤液，用旋转蒸发仪浓縮至干，真空干燥，得3,4,5-三甲氧基苄溴，淡黄色固体16.05g，收率84.44%。得到的产物不需要进一步纯化，即可进行下一步反应。若想得到纯品可以用乙酸乙酯正己烷=1:3重结晶，得到白色片状晶体。3、3，4,5-三甲氧基苄溴-三苯基溴化磷的制备3，4，5-三甲氧基苄溴16.05g(61.47mmol)溶于150ml甲苯中，加入到250ml的三颈瓶中，加入三苯基磷16.12g(61.47mmo1)，立即溶解，加热回流lhr，有白色固体析出，冷却到室温，抽滤，滤饼用30ml甲苯洗涤，真空干燥后，得3,4，5-三甲氧基节溴三苯基溴化磷，白色粉末固体27.81g，收率为86.44%得到的产物不需要进一步纯化，即可进行下一步反应。若想得到纯品可以用丙酮洗涤固体，得白色粉末固体。4、苄基保护异香兰素的制备250ml三颈瓶中，加入异香兰素15g(98.59mmo1)，200ml无水乙醇，加热到40。C溶解，加入碳酸钾9g(65.07mmo1)，搅拌下加入氯化节15ml(130.13mmol)，加热回流lhr，TLC检测反应完全后，冷却到5(TC，趁热过滤，滤液放入冰箱中冷却过夜，晶体析出，抽滤，滤饼用30ml无水乙醇洗涤，真空干燥后，得苄基保护异香兰素，白色针状晶体19.72g，收率为82.56%。得到的产物不需要进一步纯化，即可进行下一步反应。若想得到纯品可以用无水乙醇重结晶，得到白色柱状晶体。5、(Z)和(E)-3,4,5-三甲氧基-3，-苄氧基-4，-甲氧基二苯乙烯的制备250ml三颈瓶中，加入3,4,5-三甲氧基苄溴三苯基溴化磷20.00g(38.21mmo1)，150ml四氢呋喃，搅拌悬浮液，苄基保护异香兰素10.00g(41.27mmo1)溶于70ml四氢呋喃，放入100ml的滴液漏斗中。反应瓶中加入固体叔丁醇钾7.46g(66.49mmo1)，反应体系变为血红色，室温搅拌5min，缓慢滴加苄基保护异香兰素的溶液，再室温搅袢20min，TLC检测反应完全后，倒入500ml的分液漏斗中，加入140ml去离子水后，溶液分层，加入乙醚300mlx2萃取，合并乙醚层，用无水硫酸镁干燥，过滤，滤饼用50ml乙醚洗涤，滤液旋转蒸发仪浓缩至干，得油状物25g，加入20ml无水乙醇固化，抽滤得淡黄色固体12.50g，收率为80.48%。6、(Z)和(E)-3，4,5-三甲氧基-3，-苄氧基-4，-甲氧基二苯乙烯的重结晶50ml的圆底烧瓶中，加入顺反异构体12.50g(30.75mmo1)，加入20ml无水乙醇，加热部分固体溶解后，室温搅拌，抽滤，滤饼用10ml的无水乙醚洗涤后，红外灯干燥，得纯顺反异构体9.27g，淡黄色粉末固体，收率为74.16%。7、3，4,5-三甲氧基-3，-羟基-4，-甲氧基二苯乙烷的制备250ml的三颈瓶中，加入纯(Z)和(E)-3，4,5-三甲氧基-3，-苄氧基-4，-甲氧基二苯乙烯5.14g(12.56mmo1)，溶于100ml乙酸乙酯和60ml无水乙醇中，淡黄色溶液，加入5Q/。钯炭0.50g后，搅拌下通氢气，室温搅拌lhr，过滤，得无色滤液，旋转蒸发仪浓縮至干，得油状物4.05g，3，4，5-三甲氧基-3，-羟基-4，-甲氧基二苯乙烷粗品，收率为100%。8、3,4，5-三甲氧基-3，-羟基-4，-甲氧基二苯乙烷的精制500ml的圆底烧瓶中，加入3，4，5-三甲氧基-3，-羟基-4，-甲氧基二苯乙烷粗品4.05g(12.72mmo1)，用20ml无水乙醇溶解，若有不溶物，过滤除去，室温静止，有晶体析出，放置过夜，溶剂挥发完全，大量白色晶体析出。过滤，滤饼用乙醇洗涤，白色晶体3.56g，收率为100%。9、成盐反应在250ml圆底烧瓶中加入3，4,5-三甲氧基-3，-羟基-4，-甲氧基-二氢化二苯乙烯10mmo1，N、N-二甲基苯胺75mmo1，并加入与N、N-二甲基苯胺等体积的CH2C12，在冰盐水浴中搅拌(-5-10。C)，然后逐滴加入氯磺酸12.5mmo1。加完后在盐水浴中继续搅拌lh。然后移去盐水浴，在室温下搅拌24h。用10mo1/1的NaOH在搅拌下将反应液调pH至lO，冷却(或冰柜中冷却)后过滤。并用无水乙醚洗。干燥后将固体产物溶解在甲醇中过柱。溶剂抽干后得3,4，5，4，-四甲氧基-a,P-二苯乙垸-3，-0-硫酸酯钠盐。白色固体(易吸水)。物理性质鉴定1HNMR(D20):S2.79(d，lH,J=13.7Hz，H-la，)，2.80(d，lH，J=13.7Hz,H-la)，3.67(s，3H，4，=OCH3),3.74(s,6H，3，5國OCH3)，3.75(s，3H，4-OCH3)，6.55(s，2H，H-2，6)，6.58(d，lH，J=8.36Hz,H-5，)，6.85(d,lH,J=8.36Hz，H-6，)，7.33(d,lH,J=1.8Hz,H-2，).13CNMR(D20):5152.27，148.05，148.00，143.35，139.54，135.14，134.71，122.32，120.63,114.33，108.03，106.21，61.01，56.30，56.09，37.590，36.70;IR(KBr):"539s，3433m，3001w，2939m，2841m，1589s，1508s，1446m，1422m，1330m，1262m，1242s，1174m，1131s，1014m，619m，cm画l.ESIMS:m/z:398.427(M+).Calc.421.46forC18H2208SNa.3,4,5,4，-四甲氧基-ot,B-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐的安全性评价实施例23，4,5,4，-四甲氧基-a,J3-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐的LDs。测定l.实验动物选用KM小鼠，上海斯莱克实验动物中心提供，雌雄各半，共设6组，每组10只；用苦味酸标记。2.3，4，5，4，-四甲氧基-a,p-二苯乙垸-3，-0-硫酸酯钠盐(AS)溶液的配置:AS由浙江赛尔生物医学研究有限公司提供，按照实施例1所述方法制备。配制成等比药液用0.9X的NaCl溶液溶解，配制成336mg/7ml、316.96mg/7ml、299.32mg/7ml、282.52mg/7ml、266.84mg/7ml、252mg/7ml浓度的药液。3.给药剂量以0.5ml/20g的剂量，从低剂量往高剂量给药。4.给药方式尾静脉注射。5.实验方法:给药后0.25h、0.5h、lh、2h、4h、24h分别观察一次，以后每天观察1次，持续14天，第15天处死未死亡的小鼠，记录死亡率。表l剂量一死亡率数据表(n=3)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注-n为实验重复次数四、实验结果AS的LD5。=1077mg/kg，LD5()(Feiller校正)95%的置信区间为1033mg/kg￡LD50Sl134.7mg/kg说明3,4，5，4，-四甲氧基-a，p-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐毒性很低，具有很好的临床用药安全性。3,4,5,4，-四甲氧基-ouB-二苯乙垸-3，-0羞酸酯钠盐在Sl柳肿瘤模型药效学试验实施例93,4，5，4，-四甲氧基-a,p-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐对S180肿瘤作用1、实验样品(1)样品3，4，5，4'-四甲氧基-a,p-二苯乙垸-3，-0-硫酸酯钠盐(AS)，由浙江赛尔生物医学研究有限公司提供，按照实施例1方法制备。用生理盐水溶解配制为所需浓度。(2)对照品注射用环磷酰胺(CTX)，江苏恒瑞制药股份有限公司，批号04123021。配制时用生理盐水溶解。2、动物和瘤株(1)S180肉瘤荷瘤KM小鼠。(2)KM小鼠50只，雌性，体重18-22g，由浙江省中医学院提供。3、实验方法(1)S180荷瘤KM小鼠，无菌条件下抽取腹水，按照l:3的比例用生理盐水稀释，按0.2ml/只给KM小鼠右前肢腋下皮下接种。次日将小鼠随机均分为5组，每组10只。(2)接种肿瘤第3天开始按体重给药，静脉0.5ml/20g，连续11天，给药后第11天处死，取瘤块称重，计算抑瘤率。(3)给药剂量(mg/kg./d)及给药途径AS:50mg/kg，尾静脉注射给药AS:100mg/kg，尾静脉注射给药AS:200mg/kg，尾静脉注射给药CTX:30mg/kg，尾静脉注射给药另设空白对照组，尾静脉注射0.9%NaCl0.5ml。(4)结果判定根据以下公式对照组瘤重一给药组瘤重抑瘤率=-X100%对照组瘤重二、实验结果实验期间各组均未见死亡。AS用药抑制S180肉瘤实验的实验结果见表1。表1、AS用药抑制S180肉瘤荷瘤鼠肿瘤实验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>3<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>结果分析-3，4，5，4'-四甲氧基-a，p-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐对S180肿瘤有很好抑制作用。3,4,5,4，-四甲氧基-a,B-二苯乙烷-3，-O魂酸酯钠盐联合DDP在S180肿瘤模型药效学试验实施例103,4，5，4，-四甲氧基-a，p-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐联合DDP对SI80肿瘤作用一、实验内容1、实验样品(1)3,4,5，4，-四甲氧基-a，l3-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐(AS)，由浙江赛尔生物医学研究有限公司提供，按照实施例1方法制备。用生理盐水溶解配制为所需浓度。(2)顺铂注射用顺铂(DDP)，齐鲁制药有限公司，批号5120282DC。配制时用生理盐水溶解(3)对照品注射用环磷酰胺(CTX)，江苏恒瑞制药股份有限公司，批号04123021。配制时用生理盐水溶解。2、动物和瘤株(1)S180肉瘤荷瘤KM小鼠。(2)KM小鼠70只，雌性，体重18-22g，由浙江省中医学院提供。3、实验方法(1)S180荷瘤KM小鼠，无菌条件下抽取腹水，按照l:3的比例用生理盐水稀释，按0.2ml/只给KM小鼠右前肢腋下皮下接种。次日将小鼠随机均分为7组，每组10只。(2)接种肿瘤第3天开始按体重给药，静脉0.5ml/20g，连续11天，给药后第11天处死，取瘤块称重，计算抑瘤率。(3)给药剂量(mg/kg./d)及给药途径AS:50mg/kg，尾静脉注射给药AS:100mg/kg，尾静脉注射给药AS:200mg/kg，尾静脉注射给药DDP:lmg/kg，尾静脉注射给药AS+DDP:50mg/kg+lmg/kg，尾静脉注射给药CTX:30mg/kg，尾静脉注射给药DDP:lmg/kg，尾静脉注射给药另设空白对照组，尾静脉注射0.9%NaCl0.5ml。(4)结果判定根据以下公式-对照组瘤重一给药组瘤重抑瘤率=--xioo%对照组瘤重二、实验结果实验期间各组均未见死亡。AS以及AS与DDP联合用药抑制S180肉瘤实验的实验结果见表2。表2、AS与DDP联合用药抑制S180肉瘤荷瘤鼠肿瘤实验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>结果分析3，4,5，4，-四甲氧基-a，P-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐与DDP的联合用药对抑制S180肿瘤有较好的协同作用。3,4,S,4，-四甲氧基-ot,^二苯乙烷-3，-0魂酸酯钠盐与DDP联合用药对Lewis肺癌小鼠模型抑瘤率实验实施例103，4,5，4，-四甲氧基-a，卩-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐联合DDP对Lewis肺癌小鼠模型的肿瘤抑制作用一、实验内容1、实验样品(1)3，4,5，4，-四甲氧基-a,p-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐(AS):原料药，由浙江赛尔生物医学研究有限公司提供，按照实施例1方法制备。批号061025。用生理盐水溶解配制为所需浓度(2)顺铂注射用顺铂(DDP)，齐鲁制药有限公司，批号5120282DC;配制时用生理盐水溶解。(3)对照品注射用环磷酰胺(CTX)，江苏恒瑞制药股份有限公司，批号04123021;配制时用生理盐水溶解。2、动物和瘤株(1)Lewis肺癌荷瘤C57BL/6J小鼠(2)C57BL/6J小鼠70只，雌性，体重17-21g。由浙江赛尔生物医学研究有限公司动物房提供。3、实验方法(1)Lewis肺癌荷瘤C57BL/6J小鼠，无菌条件下取瘤，磨碎，用生理盐水按照1:3(重量:体积)的比例稀释，按0.21111/只给小鼠右前肢腋下皮下接种。次日将小鼠随机均分为7组，每组10只。(2)动物接种待肿瘤生长致可触及后开始按体重给药，静脉0.5ml/20g,连续11天，根据体重给药，接种后第19天处死，取瘤块称重，计算抑瘤率。(3)给药剂量(mg/kg./d)及给药途径如表3:表3给药剂量(mg/kg./d)及给药途径<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>(4)结果判定根据以下公式对照组瘤重一给药组瘤重抑瘤率=-xioo%对照组瘤重二、实验结果实验期间各组均未见死亡。AS以及AS与DDP联合用药抑制Lewis肺癌肿瘤实验的实验结果见表4。表4、<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>四、结果判定3，4，5，4，-四甲氧基-a，l3-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯钠盐对Lewis肺癌小鼠模型的有较好的肿瘤抑制作用，其与DDP对Lewis肺癌小鼠模型的联合治疗对抑制肿瘤生长有一定的协同作用。3,4,5,4，-四甲氧基-a，P-二苯乙烷-3，-O-硫酸酯钠盐通过定向打耙，针对性地作用于肿瘤血管，对所有的实体瘤均有抑制肿瘤的效果，对于同类药物CombretastatinA-4也有各种适应证的研究报道，因此可利用以上实验作出各种改变，适用的所有实体瘤均在本发明要求的权利范围之内。以上对本发明实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。权利要求1.具有式(I)结构的化合物3，4，5，4’-四甲氧基-α，β-二苯乙烷-3’-O-硫酸酯钠盐id="icf0001"file="A2007100634720002C1.gif"wi="85"he="54"top="48"left="60"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>2、含有权利要求1所述的式(I)化合物的药物组合物。3、式(I)化合物或含有式(I)化合物的药物组合物在制备抗肿瘤和/或抑制肿瘤转移药物中的应用<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>(1)。4、权利要求3所述的应用，其中Na为H、K或NH4、铵盐、有机胺及其他金属盐或有机盐替代。5、权利要求3所述的应用，其中所述的肿瘤为实体瘤。6、权利要求5所述的应用，其中所述实体瘤为肉瘤和癌。7、权利要求6所述的应用，其中所述肉瘤和癌为纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝脏肿瘤、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维耳姆斯氏瘤、颈癌、子宫癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质细胞瘤、神经鞘瘤、脑膜瘤、黑素瘤、神经母细胞瘤或成视网膜细胞瘤。8、权利要求6所述的应用，其中所述肿瘤为肉瘤。9、权利要求6所述的应用，其中所述肿瘤为肺癌。10、式(I)化合物或含有式(I)化合物的药物组合物与抗肿瘤治疗剂的组合在制备抗肿瘤药物中的应用<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>11、权利要求io所述的应用，其中所述抗肿瘤治疗剂为化疗药物。12、权利要求10所述的应用，其中所述化疗药物为顺钼、氟尿嘧啶、阿霉素、瘤可宁、美法仑、红豆杉醇、依立替康、阿瓦斯汀、N-acetylcochinol--phosphate或脉管钙黏蛋白的抗体anti-VE-cadherin或againstVE-cadherin。13、权利要求12所述的应用，其中所述化疗药物为顺钼。全文摘要本发明涉及式(I)化合物，3，4，5，4’-四甲氧基-α，β-二苯乙烷-3’-O-硫酸酯钠盐及其在制备抗肿瘤药物中的应用。文档编号A61P35/00GK101235003SQ20071006347公开日2008年8月6日申请日期2007年2月1日优先权日2007年2月1日发明者周丹萍,宁李,李亦平,陈立钻申请人:浙江赛尔生物医学研究有限公司