专利名称：一种银杏叶提取液/物的制备方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，具体的说，涉及一种新的银杏叶提取液/物的制备方法。
背景技术：
舒血宁注射液系银杏叶提取物配制成的无菌水溶液，其有效成分主要是黄酮苷类和萜类内酯活性物质，包括槲皮素、山柰素、银杏三酯、银杏内酯、苦内脂等。具有扩张心脑血管、改善微循环、抗血小板激活因子(PAF)、抗氧化清除和抑制氧自由基、抗病毒、抗菌消炎等药理作用，被应用于多种疾病，并取得显著效果。目前其制备工艺中仍存在许多需要改进的地方。
发明内容
本发明的目的是提供一种新的银杏叶提取液/物的制备方法。
为了实现本发明的目的，本发明提供了一种新的银杏叶提取液/物的制备方法，包括如下步骤1)取银杏叶粉碎至小块，加入银杏叶质量2～16倍的50％～85％的乙醇浸泡12小时以上，加热回流提取至少1次，每次1～3小时，过滤，合并提取液，调节pH值7.0～9.0，过滤，回收乙醇；2)滤液加水稀释至生药4～6倍量体积，调节pH值3.0～6.5，过滤，加于已处理好的大孔树脂柱上，以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用树脂1倍量纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的2～4％的醋酸钠溶液以5.0～6.0BV/h的流速冲洗树脂柱，继续用纯化水以6.0～7.5BV/h的流速冲洗树脂柱至中性，再用树脂1.5倍量的20％～30％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的60～80％乙醇加入树脂柱内浸泡30min，以1.0-1.2BV/h的流速洗脱，收集洗脱液，经微孔滤膜精滤后，回收乙醇；3)滤液浓缩至4g生药/ml，加入高浓度乙醇使含醇量达到85％，用10％NaOH调pH值7.3～7.8，静置24h，上清液经微孔滤膜精滤，沉淀用离心机离心后经微孔滤膜过滤，回收乙醇至无醇味，加注射用水稀释至生药等量，灌于适宜的容器中，110℃30分钟高压灭菌，冷冻，冷藏，获得银杏叶提取液；或回收乙醇后减压干燥得银杏叶提取物。其中所述的大孔树脂可以是HPD450、D101、DM130。
所述步骤1)优选的方案为取银杏叶适量，粉碎至0.5～1.5cm的小块，加入5倍量的50％的乙醇浸泡24h，回流提取2h；第二次加入4倍量50％乙醇回流提取1.5h；合并提取液，调节pH值7.5～8.0，过滤，回收乙醇。
所述步骤2)优选的方案为滤液加纯化水稀释至生药5倍量体积，调节pH值4.0～4.5，过滤，加于已处理好的大孔树脂柱上，以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用树脂1倍量纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的3.0％的醋酸钠溶液以5.0～6.0BV/h的流速冲洗树脂柱，继续用纯化水以6.0～7.5BV/h的流速冲洗树脂柱至中性，再用树脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的70％乙醇加入树脂柱内浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脱。收集洗脱液，经0.2～0.3μm的微孔滤膜精滤后，回收乙醇。
所述步骤3)优选的方案为滤液浓缩至4g生药/ml，加入高浓度乙醇使含醇量达到85％，用10％NaOH调pH值7.3～7.8，静置24h，上清液经0.2～0.3μm的微孔滤膜精滤，沉淀用离心机离心后经0.2～0.3μm的微孔滤膜过滤，回收乙醇至无醇味，加注射用水稀释至生药等量，灌于适宜的容器中，110℃30分钟高压灭菌，冷冻，冷藏，获得银杏叶提取液；或回收乙醇后减压干燥得银杏叶提取物。
本发明也提供了所述提取方法制得的银杏叶提取液/物，其中银杏叶提取液中总黄酮醇苷的含量为1.0～8.0mg/ml，银杏内酯A的含量为0.07～0.8mg/ml，银杏内B的含量为0.03～0.5mg/ml，银杏内酯C的含量为0.04～0.6mg/ml，而以干燥品重量计，所制得的银杏叶提取物中的总黄酮醇苷的含量为20～36％，银杏内酯A的含量不少于1.7％。银杏内酯B的含量不少于0.3％。银杏内酯C的含量不少于1.0％。
本发明的银杏叶提取液/物的各项成分纯度更高，由此降低了将来由于中药成分复杂所带来的问题，由其制备得到的制剂质量完全满足有关规定，可以更好的为患者所使用。
本发明也提供了含有银杏叶提取液/物与药用辅料的制剂，其特征在于，所述的银杏叶提取液/物通过上述制备方法制得，药用辅料包括葡萄糖、乙醇(95％)，甘露醇，右旋糖酐，乳糖，氯化钠，聚山梨酯80等。所述制剂可以是注射液、冻干粉针剂、输液剂、口服液、胶囊剂、颗粒剂、片剂等。当该制剂为注射液时，每1ml该注射液含有总黄酮醇苷0.76～1.25mg，银杏内酯A 0.07～0.3mg，银杏内酯B 0.01～0.15mg，银杏内酯C 0.02～0.2mg具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1 银杏叶提取液的制备取银杏叶适量，粉碎至1cm的小块，加入5倍量的50％的乙醇浸泡12h，回流提取2h；第二次加入4倍量50％乙醇回流提取1.5h；合并提取液，调节pH值7.6，过滤，回收乙醇，加水稀释至生药5倍量体积，调节pH值4.2，过滤，加于已处理好的HPD450大孔吸附树脂柱上。以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用树脂1倍量纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的3.0％的醋酸钠溶液以5.0～6.0BV/h的流速冲洗树脂柱，继续用纯化水以6.0～7.5BV/h的流速冲洗树脂柱至中性，再用树脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的70％乙醇加入树脂柱内浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脱。收集洗脱液，经0.22μm的微孔滤膜精滤后，回收乙醇，并浓缩至4g(生药)/ml，加入高浓度乙醇使含醇量达到85％，用10％NaOH调pH值7.5，静置24h。上清液经0.22μm的微孔滤膜精滤，沉淀用离心机离心后经0.22μm的微孔滤膜过滤，回收乙醇至无醇味。加注射用水稀释至生药等量，灌于适宜的容器中，110℃30分钟高压灭菌，冷冻，冷藏，获得银杏叶提取液。
经测定，该提取液中总黄酮醇苷的含量为1.0mg/ml，银杏内酯A的含量为0.14mg/ml，银杏内B的含量为0.06mg/ml，银杏内酯C的含量为0.07mg/ml。
实施例2 银杏叶提取液的制备取银杏叶适量，粉碎至1cm的小块，加入8倍量的70％的乙醇浸泡18h，回流提取3h；第二次加入6倍量70％乙醇回流提取2h；第三次加入5倍量70％乙醇回流提取1h；合并提取液，调节pH值至7.8，过滤，回收乙醇，加水稀释至生药5倍量体积，调节pH值至4.3，过滤，加于已处理好的HPD450大孔吸附树脂柱上。以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用树脂1倍量纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的4.0％的醋酸钠溶液以5.0～6.0BV/h的流速冲洗树脂柱，继续用纯化水以6.0～7.5BV/h的流速冲洗树脂柱至中性，再用树脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的70％乙醇加入树脂柱内浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脱。收集洗脱液，经0.22μm的微孔滤膜精滤后，回收乙醇，并浓缩至4g(生药)/ml，加入高浓度乙醇使含醇量达到85％，用10％NaOH调pH值至7.6，静置24h。上清液经0.22μm的微孔滤膜精滤，沉淀用离心机离心后经0.22μm的微孔滤膜过滤，回收乙醇至无醇味。加注射用水稀释至生药等量，灌于适宜的容器中，110℃30分钟高压灭菌，冷冻，冷藏，获得银杏叶提取液。
经测定，该提取液中总黄酮醇苷的含量为6.2mg/ml，银杏内酯A的含量为0.45mg/ml，银杏内B的含量为0.20mg/ml，银杏内酯C的含量为0.30mg/ml。
实施例3 银杏叶提取液的制备取银杏叶适量，粉碎至1cm的小块，加入10倍量的80％的乙醇浸泡24h，回流提取3h；第二次加入8倍量80％乙醇回流提取2h；第三次加入6倍量80％乙醇回流提取1h；第四次加入4倍量80％乙醇回流提取1h；合并提取液，调节pH值至7.5，过滤，回收乙醇，加水稀释至生药5倍量体积，调节pH值至4.4，过滤，加于已处理好的HPD450大孔吸附树脂柱上。以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用树脂1倍量纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的4.0％的醋酸钠溶液以5.0～6.0BV/h的流速冲洗树脂柱，继续用纯化水以6.0～7.5BV/h的流速冲洗树脂柱至中性，再用树脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的70％乙醇加入树脂柱内浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脱。收集洗脱液，经0.22μm的微孔滤膜精滤后，回收乙醇，并浓缩至4g(生药)/ml，加入高浓度乙醇使含醇量达到85％，用10％NaOH调pH值至7.7，静置24h。上清液经0.22μm的微孔滤膜精滤，沉淀用离心机离心后经0.22μm的微孔滤膜过滤，回收乙醇至无醇味。加注射用水稀释至生药等量，灌于适宜的容器中，110℃30分钟高压灭菌，冷冻，冷藏，获得银杏叶提取液。
经测定，该提取液中总黄酮醇苷的含量为5.12mg/ml，银杏内酯A的含量为0.8mg/ml，银杏内B的含量为0.5mg/ml，银杏内酯C的含量为0.6mg/ml。
实施例4 银杏叶提取物的制备取银杏叶适量，粉碎至1cm的小块，加入6倍量的60％的乙醇浸泡30h，回流提取2h；第二次加入3倍量60％乙醇回流提取1.5h；合并提取液，调节pH值7.5，过滤，回收乙醇，加水稀释至生药5倍量体积，调节pH值4.3，过滤，加于已处理好的HPD450大孔吸附树脂柱上。以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用树脂1倍量纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的3.0％的醋酸钠溶液以5.0～6.0BV/h的流速冲洗树脂柱，继续用纯化水以6.0～7.5BV/h的流速冲洗树脂柱至中性，再用树脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的70％乙醇加入树脂柱内浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脱。收集洗脱液，经0.22μm的微孔滤膜精滤后，回收乙醇，并浓缩至4g(生药)/ml，加入高浓度乙醇使含醇量达到85％，用10％NaOH调pH值7.5，静置24h。上清液经0.22μm的微孔滤膜精滤，沉淀用离心机离心后经0.22μm的微孔滤膜过滤，回收乙醇后减压干燥得银杏叶提取物。
经测定，以干燥品重量计，该提取物中含总黄酮醇苷为20％，含银杏内酯A为1.7％、含银杏内酯B为0.3％、含银杏内酯C为1.0％。
实施例5 银杏叶提取物的制备取银杏叶适量，粉碎至1cm的小块，加入10倍量的75％的乙醇浸泡24h，回流提取3h；第二次加入7倍量75％乙醇回流提取2h；第三次加入6倍量75％乙醇回流提取1h；合并提取液，调节pH值至7.7，过滤，回收乙醇，加水稀释至生药5倍量体积，调节pH值至4.5，过滤，加于已处理好的HPD450大孔吸附树脂柱上。以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用树脂1倍量纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的3.0％的醋酸钠溶液以5.0～6.0BV/h的流速冲洗树脂柱，继续用纯化水以6.0～7.5BV/h的流速冲洗树脂柱至中性，再用树脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的70％乙醇加入树脂柱内浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脱。收集洗脱液，经0.22μm的微孔滤膜精滤后，回收乙醇，并浓缩至4g(生药)/ml，加入高浓度乙醇使含醇量达到85％，用10％NaOH调pH值至7.5，静置24h。上清液经0.22μm的微孔滤膜精滤，沉淀用离心机离心后经0.22μm的微孔滤膜过滤，回收乙醇后减压干燥得银杏叶提取物。
经测定，以干燥品重量计，该提取物中含总黄酮醇苷为36％，含银杏内酯A为8.2％、含银杏内酯B为4.0％、含银杏内酯C为5.3％。
实施例6 银杏叶提取液的测定取实施例1所制备的银杏叶提取液，用0.22μm微孔滤膜过滤，加注射用水稀释，用氢氧化钠溶液调pH5.0，加入0.3％药用炭，搅拌均匀，煮沸15分钟，调pH6.0，粗滤脱炭，0.22μm微孔滤膜精滤后，灌装，105℃30分钟高压灭菌，得规格为2ml/支的银杏叶注射液。
经测定，该注射液中含总黄酮醇苷0.88mg/ml，含银杏内酯A0.12mg/ml，银杏内酯B 0.05mg/ml，银杏内酯C 0.06mg/ml。
实施例7 银杏叶提取液的测定取实施例3所制备的银杏叶提取液，用0.22μm微孔滤膜过滤，加注射用水稀释，用氢氧化钠溶液调pH5.5，加入0.3％药用炭，搅拌均匀，煮沸15分钟，调pH6.5，粗滤脱炭，0.22μm微孔滤膜精滤后，灌装，105℃30分钟高压灭菌，得规格为2ml/支的银杏叶注射液。
经测定，该注射液中含总黄酮醇苷1.18mg/ml，含银杏内酯A0.22mg/ml，银杏内酯B 0.12mg/ml，银杏内酯C 0.15mg/ml。
实施例8 银杏叶提取物的测定取实施例5所制备的银杏叶提取物，用注射用水溶解，用0.22μm微孔滤膜过滤，加注射用水稀释，用氢氧化钠溶液调pH5.6，加入0.3％药用炭，搅拌均匀，煮沸15分钟，调pH6.4，粗滤脱炭，0.22μm微孔滤膜精滤后，灌装，105℃30分钟高压灭菌，得规格为2ml/支的银杏叶注射液。
经测定，该注射液中含总黄酮醇苷1.25mg/ml，含银杏内酯A0.3mg/ml，银杏内酯B 0.15mg/ml，银杏内酯C 0.2mg/ml。
而目前的生产工艺制得的舒血宁注射液中各成分的含量为总黄酮醇苷0.84mg/ml，银杏内酯A 0.07mg/ml，银杏内酯B 0.03mg/ml，银杏内酯C 0.04mg/ml。
由此可以看出，本发明所述提取方法制得的银杏叶提取液/物中，各项成分纯度更高，可降低将来由于中药成分复杂所带来的问题。由其制得的制剂，含量高，疗效好，更安全。
权利要求
1.一种银杏叶提取液/物的制备方法，包括如下步骤1)取银杏叶粉碎至小块，加入银杏叶质量2～16倍的50％～85％的乙醇浸泡12小时以上，加热回流提取至少1次，每次1～3小时，过滤，合并提取液，调节pH值7.0～9.0，过滤，回收乙醇；2)滤液加水稀释至生药4～6倍量体积，调节pH值3.0～6.5，过滤，加于已处理好的大孔树脂柱上，以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用树脂1倍量纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的2～4％的醋酸钠溶液以5.0～6.0BV/h的流速冲洗树脂柱，继续用纯化水以6.0～7.5BV/h的流速冲洗树脂柱至中性，再用树脂1.5倍量的20％～30％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的60～80％乙醇加入树脂柱内浸泡30min，以1.0-1.2BV/h的流速洗脱，收集洗脱液，经微孔滤膜精滤后，回收乙醇；3)滤液浓缩至4g生药/ml，加入高浓度乙醇使含醇量达到85％，用10％NaOH调pH值，静置24h，上清液经微孔滤膜精滤，沉淀用离心机离心后经微孔滤膜过滤，回收乙醇至无醇味，加注射用水稀释至生药等量，灌于适宜的容器中，110℃30分钟高压灭菌，冷冻，冷藏，获得银杏叶提取液；或回收乙醇后减压干燥得银杏叶提取物。
2.如权利要求1所述的银杏叶提取液/物制备方法，其特征在于，所述步骤1)为取银杏叶适量，粉碎至0.5～1.5cm的小块，加入5倍量的50％的乙醇浸泡24h，回流提取2h；第二次加入4倍量50％乙醇回流提取1.5h；合并提取液，调节pH值7.5～8.0，过滤，回收乙醇。
3.如权利要求1所述的银杏叶提取液/物制备方法，其特征在于，所述步骤2)为滤液加纯化水稀释至生药5倍量体积，调节pH值4.0～4.5，过滤，加于已处理好的大孔树脂柱上，以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用树脂1倍量纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的3.0％的醋酸钠溶液以5.0～6.0BV/h的流速冲洗树脂柱，继续用纯化水以6.0～7.5BV/h的流速冲洗树脂柱至中性，再用树脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的70％乙醇加入树脂柱内浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脱，收集洗脱液，经0.2～0.3μm的微孔滤膜精滤后，回收乙醇。
4.如权利要求1-3任一项所述的银杏叶提取液/物制备方法，其特征在于，步骤3)为滤液浓缩至4g生药/ml，加入高浓度乙醇使含醇量达到85％，用10％NaOH调pH值7.3～7.8，静置24h，上清液经0.2～0.3μm的微孔滤膜精滤，沉淀用离心机离心后经0.2～0.3μm的微孔滤膜过滤，回收乙醇至无醇味，加注射用水稀释至生药等量，灌于适宜的容器中，110℃30分钟高压灭菌，冷冻，冷藏，获得银杏叶提取液；或回收乙醇后减压干燥得银杏叶提取物。
5.根据权利要求1或3的银杏叶提取液/物制备方法，其特征是所用大孔树脂包括HPD450、D101、DM130。
6.根据权利要求1～5任意一项方法制备的银杏叶提取液，其特征在于，该银杏叶提取液中总黄酮醇苷的含量为1.0～8.0mg/ml，银杏内酯A的含量为0.07～0.8mg/ml，银杏内酯B的含量为0.03～0.5mg/ml，银杏内酯C的含量为0.04～0.6mg/ml。
7.根据权利要求1～5任意一项方法制备的银杏叶提取物，其特征在于，以干燥品重量计，该银杏叶提取物中总黄酮醇苷的含量为20～36％，银杏内酯A的含量不少于1.7％。银杏内酯B的含量不少于0.3％。银杏内酯C的含量不少于1.0％。
8.一种含有银杏叶提取液/物制剂，其特征在于，所述的银杏叶提取液/物通过权利要求1-5任一项制备方法制得，药用辅料包括葡萄糖、乙醇(95％)，甘露醇，右旋糖酐，乳糖，氯化钠，聚山梨酯80等。
9.根据权利要求8所述的制剂，其特征在于，该制剂可以是注射液、冻干粉针剂、输液剂、口服液、胶囊剂、颗粒剂、片剂。
10.根据权利要求8或9所述的制剂，其特征在于，该制剂为注射液，每1ml该注射液含有总黄酮醇苷0.76～1.25mg，银杏内酯A0.07～0.3mg，银杏内酯B 0.01～0.15mg，银杏内酯C 0.02～0.2mg。
全文摘要
本发明涉及一种新的银杏叶提取液/物的制备方法，根据本发明所述方法得到的银杏叶提取液/物，各项成分纯度更高，可大大减少将来由于中药成分复杂所带来的问题，由其制备的制剂，疗效更好，安全性更高。
文档编号A61K9/08GK101032533SQ20071009849
公开日2007年9月12日 申请日期2007年4月18日 优先权日2007年4月18日
发明者方同华 申请人:黑龙江省珍宝岛制药有限公司