一种防治心脑血管疾病及糖尿病的药物组合物的制作方法

专利名称：一种防治心脑血管疾病及糖尿病的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物或功能性保健品组合物，具体地说，是一种含有天然植物提取物或单体为活性成分的药用组合物，用于治疗和/或预防心脑血管疾病糖尿病。
背景技术：
心脑血管疾病及糖尿病是严重威胁人类健康的致死疾病，目前脑卒中、冠心病、糖尿病的发病率愈来愈高，而且日趋低龄化，是除恶性肿瘤外死亡率最高的疾病。针对这三种慢性疾病，人类目前尚无根治办法。
心脑血管疾病及糖尿病是一组高度相关的疾病，同一个患者往往同时罹患上述三种疾病中的多种疾病，比如同时患有冠心病和糖尿病。目前，现代医学已经认识到，上述疾病的发生、发展有着众多相同的病理机制，这些病理改变或互为因果、或互为相加，从而导致疾病发生。
目前，医学界公认，胰岛素抵抗(IR)是心脑血管疾病及糖尿病共有的发病机制。机体因为各种原因产生胰岛素抵抗后，会造成一系列的病理改变，比如肥胖、高血脂、糖耐量降低等。随着时间的推移，就会逐步产生高血压、动脉粥样硬化，从而导致冠心病及脑卒中。当然，胰岛素抵抗本身就是糖尿病的早期表现，其自然病程必定会导致糖尿病的发生。
因此，对于存在胰岛素抵抗但尚未发病的人群，针对胰岛素抵抗进行治疗干预，是预防上述疾病发生必需且有效的手段。
如果冠心病、脑卒中已经发生，无论是急性期还是恢复期治疗也同样有共同的干预靶点，比如抗氧化及抗炎。对于急性期治疗，抗氧化及抗炎药物可以减少细胞的死亡，最大限度的保留功能。对于恢复期治疗，抗氧化及抗炎及降低血脂可以延缓动脉粥样硬化的发生，降低再次发生血栓(或出血)的可能性。
由上可知，抗胰岛素抵抗、抗氧化、抗炎性反应及降血脂是心脑血管及糖尿病共同、必需的防治靶点。
遗憾的是，现有技术尚无法提供同时具备上述四种药理作用的单药。现有药物往往都是针对单个病理机制(靶点)进行干预(治疗)。比如，抗高血压药物只针对高血压，降血脂药物只针对高血脂，糖尿病药物只针对糖尿病，等等。因此，在治疗上一个患者往往要使用多种药物，这不但造成患者服药不便，更为严重的是众多药物往往会带来更多的副作用，也同时给医生的临床治疗决策带来困难。
所以，本领域对心脑血管疾病及糖尿病防治的多靶点药物有着强烈的需求。
医药界多年的实践使人们认识到，单一化合物很难满足多靶点药理作用需求。因此，本领域科研人员开始考虑降多种现有化合物组合成复方药物使用，以便满足需求。同时，也有愈来愈多的人将目光投向“天然”植物药物，因为天然药物有着化学合成药物所不可替代的优势。并且，随着现代科学的高速发展，植物药中各种成分可以被快速分离及鉴定，这为天然药物的发展打下了良好的基础。
近年来，医药界在本领域药用植物研究方面做了诸多工作，加强了对生物活性物质的分析和研究，以期进一步明确其功效。然而，取得的成效是有限的。这主要是由于心脑血管及糖尿病的致病机理复杂，常伴有不同类别的一种或多种并发症，已有的单一天然活性成分难以全方位奏效。
据报道，京尼平和芍药苷均能降低血糖，但是各自作用机制并不十分清楚(参见CELL METABOLISM，JUNE 2006；中药新药与临床药理2006，17(1)1-3；Planta Med1997，63(4)323)。芍药苷有抗炎、降血脂等作用(参见中国药理学通报ChinesePharmacological B ulletin 2003 Sep；19(9)965～70)，而关于京尼平的其他药理作用则很少有研究及报道，这对于科学地利用二者的优缺点来进一步改善糖尿病的治疗是不利的。
不同药物的联用，似乎总是一种不错的解决方案。然而，迄今为止，针对京尼平能否与芍药联合应用，二者的作用机制是加合、协同还是拮抗等基础问题，现有技术没有提供科学依据、甚至没有类似的暗示或尝试。

发明内容
本发明的一个目的在于提供京尼平和芍药在制备用于治疗和/或预防心脑血管疾病及糖尿病的药物中的应用。
心脑血管疾病本发明人的研究表明，京尼平和芍药的联合使用，在抗氧化、抗炎、调节血脂方面获得了协同作用，这是本领域第一次用基础试验得到的结果。推测其机理，我们估计是京尼平具有特定靶点的自由基捕获作用，在这种作用下，增强了芍药苷的抗氧化作用，同时减少了炎性反应，这在医学病理生理中是常见的现象。
本发明所述心脑血管疾病是指冠心病、脑卒中、心肌梗塞、血管性老年痴呆。
糖尿病京尼平需要相当大的剂量才有降血糖作用，并没有药用价值。在大量前期试验的指引下，经过大量的实验研究，本发明人首次确认京尼平和芍药可同时给予糖尿病患者。加入芍药苷后，达到相同的降糖水平时显著减少了京尼平的用量，使京尼平在有效地治疗或预防糖尿病方面具备了药用价值。
更为有利的是，进一步的研究表明二者的联用在解决胰岛素抵抗方面获得了协同作用，这是本领域技术人员无法预测的。
期望不受任何理论或组方所限，本发明人推测这是由于芍药和京尼平作用于不同靶点，尤其是在不同病理阶段发挥治疗作用，发挥了药物联用的整体治疗优势。
在临床应用时，医师可以根据患者的年龄、体制、严重程度等因素，制定个体给药方案，例如给予1/5-1倍治疗/预防有效量的本发明药物组合物。
其中，本发明所述糖尿病是指非胰岛素依赖型糖尿病和胰岛素依赖型糖尿病。
本发明的第二个目的在于本发明组合在制备功能性保健品中的应用。
由于本发明组合物具备上述功效，也符合功能性保健品安全性的要求。因此，本发明上述组合也可作为制备功能性保健食品的主要功能成分、或作为增益剂掺加到食品、饮料中，供适应人群长期使用。而且，在本发明试验的基础上，本领域技术人员可以理解的是，含有本发明上述组合的功能性保健品至少具有下述保健功能辅助降血脂功能、辅助降血糖功能、抗氧化功能。
同样，保健品制备技术也属于已知技术。相对于可药物而言，本发明组合物用于保健品的来源、条件可以更为广泛和宽松。例如，可以使用京尼平和芍药提取物组合，也可以直接选择京尼平和芍药苷组合，也可以选择京尼平和含有芍药苷的其它植物提取物或使用其化学全合成、半合成物。在保健品的功效成分构成中，可以仅含有本发明组合，也可以是本发明组合加其它辅助或加强功效的成分，如添加维生素E用以增强抗氧化功效，在此不再赘述。
本发明芍药苷、京尼平可以单独的制剂形式供联合给药，也可以同时含有二者的产品形式提供。
因此，本发明的另一个目的在于提供用于含有芍药苷和京尼平的药用组合物，以其中京尼平和芍药苷的计，二者的重量比例为0.1-10∶1，优选0.2-5∶1，和更优选1∶3、1∶1和1∶2。
本发明组合物中，可以选择药味(芍药)直接粉碎成粉末入药，也可以相当于上述中药材生药量的提取物或其他形式入药。因此，本发明药物组合物的活性组成包括药材原粉、脂或水溶性提取物、有效部位、或有效成分。例如，所述活性组成包括a)京尼平(genipin)栀子苷元，结构式如下
京尼平目前已经广泛作为蛋白交连剂，在制备如医用人工皮肤中使用。其制备方法及来源为已知技术，也可自市场中直接购得单体制剂，故在此不再叙述其制备方法；和b)以芍药苷(Paeoniflorin)为主要活性成分的物质芍药(白芍、赤芍、川赤芍)的干燥根粉末、含有苷类化合物(优选为芍药苷和芍药内酯苷)的提取物、或芍药苷单体或其衍生物。另外，研究表明，进一步含有芍药苷、芍药内酯苷、羟基芍药苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷和/或芍药新苷等的芍药提取物也是有益的。本领域技术人员可以理解的是，本发明芍药苷类的来源并不局限于芍药，含有芍药苷类的同属其它植物也可实现本发明，其提取和制备方法为已知技术，在此不作赘述。
有利的是，上述活性成分当以提取物形式入药时，芍药苷在所述提取物中的纯度为5-98wt％、优选30％、60％、75％或97％。
可以采用现代提取和分离技术以提高活性物质的纯度、尽量除去不需要的杂质，类似的技术在现有技术中已相当成熟有效，例如中国专利申请ZL021109737、ZL021332983、ZL031131263；和ZL99114969.6、ZL99112969.5、ZL03109126.1、ZL200510026142.6。
可针对芍药苷类、京尼平的溶解特性和体内吸收特点，采用标准制剂技术制成适宜的口服或非肠道给药剂型，类似的技术在现有技术中也已相当成熟有效，例如片剂、分散片、口腔快速崩解片、缓控释制剂、滴丸、软胶囊、稳定的注射或输液剂、或含磷脂制剂等剂型。
随后进行的研究表明，与现有的心脑血管及糖尿病药物组合相比，本发明药物组合物依然保持了相同、甚至就某些方面而言更为有利的药理作用(例如避免了不需要的不良反应)，多项指标显著优于单独施用的京尼平或芍药，这是本领域技术人员无法根据现有技术推测的。因此，本发明试图提供一种选择，它提供了一种新的有效产品作为现有技术的替代，这种产品及其相应治疗方案将是医生高度认可并着力推荐的。
药理药效试验研究1.对IR模型高血脂症大鼠的抗氧化及调节血脂作用材料本发明组合物A京尼平+芍药苷1∶3(80、20mg/kg)；本发明组合物B京尼平+芍药苷3∶1(80、20mg/kg)；本发明组合物C京尼平+芍药提取物(含芍药总苷65％)2∶1(80、20mg/kg)；正常对照组无；高血脂组无；对照药京尼平(20mg/kg、40mg/kg)；芍药苷(40mg/kg、20mg/kg)；阳性药罗格列酮组3mg/kg。
实验方法模型的建立SD大鼠适应性饲养1周后，随机分组，每组8只。正常组喂基础饲料，饮用清洁的自来水。其余大鼠喂高脂、高糖饲料(基础饲料42％、猪油23％、蔗糖24％、食盐5％)，并饮用1％的食盐水。每日一次，药物灌胃，连续4周后取血测定观察指标。
结果见下表1、2表1 对高血脂大鼠血清和肝脏LPO和SOD的影响(nmol/L)

与高血脂组比较*p＜0.05**p＜0.01
表2 对IR模型大鼠血脂的影响(mmol/L)

与高血脂组比较*p＜0.05**p＜0.01；与正常组比较△△p＜0.01结论高脂模型与正常组比较，血清和肝脏的LPO明显升高，而SOD活性明显降低，表明高血脂大鼠伴有自由基脂质过氧化损伤。同时，模型组的TC、TG及HDL-C较正常组明显升高，表明模型组具有脂代谢紊乱症状。
上述实验表明，单独施用的芍药苷大剂量时存在一定的抗氧化活性，低剂量芍药苷则不明显，京尼平则没有抗氧化活性，本发明组合物各组的低、高剂量组均有抗氧化活性，尤其是高剂量组的活性更显著(p＜0.01)，明显优于单独施用的芍药苷、京尼平和罗格列酮对照药，表明二者联合使用具有很好的协同抗氧化功效。各药物组对于血脂的影响表现基本与抗氧化活性一致，同样显示出本发明组合物的优势。
2、对肿瘤坏死因子损伤大鼠心脏微血管内皮细胞炎症因子的影响材料本发明组合物A京尼平+芍药苷1∶5(25、50、100μg/ml)；本发明组合物B京尼平+芍药提取物(含芍药苷50％)5∶1(25、50、100μg/ml)；对照药京尼平(50μg/ml、100μg/ml)；芍药苷(50μg/ml、100μg/ml)；方法通过CMEC体外培养技术，建立TNF-α损伤的细胞模型，以细胞活力(MTT)、乳酸脱氢酶(LDH)为评价指标，观察药物对损伤的CMEC的保护作用。以双抗体夹心ELISA法检测损伤CMEC上清液中白介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白介素8(IL-8)的含量；以实时定量PCR方法检测损伤CMEC IL-6、MCP-1、IL-8mRNA的表达为评价指标，观察药物在不同浓度对损伤的CMEC合成释放炎症介质的影响。
结果显示本发明组合物25～100μg/ml均可提高TNF-α损伤CMEC的细胞活力，降低LDH的释放，以50μg/ml效果最佳。京尼平无此作用，芍药苷100μg/ml有微弱作用，与本发明组合物25μg/ml相当。
本发明组合物在25～100μg/ml范围内能够浓度依赖性的抑制TNF-α损伤CMECIL-6的释放及mRNA的表达。京尼平无此作用，芍药苷100μg/ml有微弱作用，但稍弱于本发明组合物25μg/ml。
本发明组合物对TNF-α损伤CMEC作用3～12h内均可减少IL-6的释放，其中在9h时作用最为明显。在25～100μg/ml范围内能够浓度依赖性的抑制TNF-α损伤CMEC的MCP-1释放，且作用随时间的增长抑制作用逐渐减弱。25～50μg/ml的本发明组合物有降低损伤CMEC的MCP-1mRNA表达的趋势，100μg/ml的本发明组合物降低MCP-1的表达。本发明组合物对TNF-α损伤CMEC释放IL-8有降低的趋势。京尼平无此作用，芍药苷100μg/ml有微弱作用，但稍弱于本发明组合物25μg/ml。
本试验表明，本发明组合物能够抑制TNF-α诱导CMEC分泌IL-6、MCP-1的作用，降低其mRNA表达，阻抑炎症级联反应，减轻炎性因子对CMEC的损伤。单独给予的京尼平无此作用，芍药苷高浓度(大剂量)有微弱作用。可以得出京尼平和芍药合用具有协同抗炎作用的结论。
3.对正常大鼠血糖和血清胰岛素的影响方法8周龄SD大鼠随机分组，每组8只。
各组连续灌胃给药8d，每日1次，空白组给予等量蒸馏水。最后一次给药后2小时摘眼球取血，测定血糖和血清胰岛素。
实验药物格列本脲组25mg/kg；京尼平组(mg/kg)京尼平120、50；芍药A组(mg/kg)芍药提取物(芍药总苷含量60％)12、50；芍药B组(mg/kg)芍药苷80、20；组合A组(mg/kg)(京尼平∶芍药提取物(芍药总苷含量60％)＝1∶1)200、100、50；组合B组(mg/kg)(京尼平∶芍药苷＝1∶2)80、20；结果表3 对正常大鼠血糖及血清胰岛素影响(x±s)

*与空白组对比，前后差值P＜0.5；**与空白组对比，前后差值P＜0.01实验表明格列本脲组可以降低正常大鼠血糖及提高血清胰岛素水平，差异有显著性。京尼平大剂量组虽然可以降低正常大鼠血糖，但与空白组比较，差异无显著性。大剂量组可以提高血清胰岛素值，差异有显著性。芍药苷及芍药提取物组各剂量组不降低正常大鼠血糖，差异无显著性，各剂量组对血清胰岛素无显著性影响。
本发明组合物各剂量组均可降低大鼠正常血糖，但无显著性差异，对血清胰岛素影响也同样无显著性差异。
4.对链佐菌素所致糖尿病大鼠血糖和血清胰岛素的影响方法取雄性SD大鼠按标准方法制备小剂量链佐菌素致糖尿病大鼠模型，3d后根据大鼠血糖值随机分组，每组8只。
各组连续灌胃给药8d，每日1次，空白组给予等量蒸馏水。最后一次给药后2小时(二甲双胍组1小时)摘眼球取血，测定血糖和血清胰岛素。
实验药物阳性药二甲双胍组300mg/kg；京尼平(mg/kg)京尼平100、50；芍药A组(mg/kg)芍药提取物(芍药总苷含量50％)400、100；芍药B组(mg/kg)芍药苷80、20；组合A组(mg/kg)京尼平∶芍药提取物(芍药苷含量60％)＝1∶6200、100、50；组合B组(mg/kg)京尼平∶芍药苷＝6∶1100、50、30；结果表4 对链佐菌素所致大鼠糖尿病血糖及血清胰岛素影响(x±s)

*与空白组对比，前后差值P＜0.5；**与空白组对比，前后差值P＜0.01
实验表明二甲双胍组可以有效降低本模型大鼠血糖，差异有显著性，但不提高大鼠血清胰岛素水平。京尼平大剂量组有降血糖作用，对血清胰岛素升高有显著性影响。其余剂量组无明显降糖作用。
芍药苷及芍药提取物组大剂量组可以降低大鼠血糖，差异有显著性。各剂量组对血清胰岛素无显著性影响。
本发明组合物各组均可降低大鼠血糖，其作用优于二甲双胍或与之相当，中剂量(含)以上组可以提高血清胰岛素。
5.对高脂饲养所致胰岛素抵抗糖尿病大鼠血糖和血清胰岛素的影响方法取雄性SD大鼠随机分组，每组8只。
正常组给予普通饲养，其余各组给予高脂饲养至8周龄，第9周开始除正常组外，其余给予连续灌胃给药8d，每日1次，空白组给予等量蒸馏水。最后一次给药后2小时摘眼球取血，测定血糖和血清胰岛素。
实验药物阳性药罗格列酮组3mg/kg；京尼平(mg/kg)京尼平180、80、40；芍药组(mg/kg)芍药提取物(芍药总苷含量75％)360、180、80；组合A组(mg/kg)京尼平∶芍药提取物(芍药总苷含量40％)＝1∶8200、100、50组合B组(mg/kg)京尼平∶芍药苷＝8∶1150、60、30；结果表5 对高脂饲养所致大鼠糖尿病血糖及血清胰岛素影响(x±s)


*与空白组对比，前后差值P＜0.5；**与空白组对比，前后差值P＜0.01实验表明罗格列酮组对大鼠血糖降低作用有显著性差异，对血清胰岛素水平降低有显著影响。京尼平大剂量以上组均有降血糖作用，对血清胰岛素无显著性影响。芍药组中剂量以上组均可以降低大鼠血糖，差异有显著性，并对血清胰岛素降低有显著性影响。
本发明组合物各剂量组均可降低大鼠血糖并可使血清胰岛素降低有显著影响，其作用与罗格列酮相当。
讨论上述实验表明，京尼平和芍药对于糖尿病大鼠具有不同作用机制的降血糖作用。京尼平作用机理在于刺激胰腺β细胞分泌胰岛素，芍药作用于降低胰岛素抵抗和可能促外周葡萄糖利用。
本发明组合物同时具有上述所有的作用机理，并且极大的降低了单药剂量，而且有利的是二者的合用不降低正常血糖，其中机理是目前理论尚无法完全解释的，推测其机理可能为受体饱和及受体后机制。
实施例实施例1 胶囊剂取京尼平1份、赤芍水提取物5份，加入淀粉、硬脂酸镁，混匀，装入硬胶囊中。经检测，每胶囊中含有京尼平50mg、和芍药苷300mg。
实施例 2片剂取京尼平20g、芍药苷4g，加入低取代羟丙基纤维素、硬脂酸镁、淀粉、微晶纤维素，按照标准制粒和压片工艺制备100粒。经检测，含有京尼平200mg/片、和芍药苷40mg/片。
实施例3 软胶囊剂取京尼平1份，赤芍水提取物5份，加入淀粉、硬脂酸镁，混匀，按照标准工艺制成软胶囊。经检测，每胶囊中含有京尼平200mg、芍药苷30mg。
实施例4 缓释片取京尼平20g、芍药苷15g，加入乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙烯吡咯、硬质酸镁，按照标准制粒和压片工艺制备100粒。经检测，含有京尼平200mg/片、和芍药苷150mg/片。
实施例5 冻干针剂无菌条件下取京尼平50g、芍药苷50g，加注射用水至900ml，搅拌使溶解，调节pH值至6.5-7.5)，混合均匀、微孔滤膜过滤，再加注射用水至5000ml。然后，加配制量的0.02％活性炭搅拌5-10min，用无菌抽滤漏斗过滤，再用灭菌垂熔漏斗精滤或超滤，滤液检验合格后分装于1000支5ml安瓿中，低温冷冻干燥，无菌熔封即得。经检测，含有京尼平50mg/支、和芍药苷50mg/支。
权利要求
1.一种药物或保健品用组合物，由活性成分以及药用辅料或保健品用辅料组成，所述活性成份为a.京尼平；和b.芍药的干燥根粉末，或含有芍药苷和芍药内酯苷的芍药提取物，或芍药苷单体；其中a中京尼平与b中芍药苷的重量比例为0.1-10∶1。
2.如权利要求1的组合物，其中所述活性成份为a.京尼平；和b.含有芍药苷、芍药内酯苷的芍药提取物；其中a中京尼平与b中芍药苷的重量比例为1∶8-8∶1。
3.如权利要求1的组合物，其中所述活性成份为a.京尼平；和b.芍药苷单体；其中a中京尼平与b中芍药苷的重量比例为1∶5-5∶1。
4.如权利要求1至3之一的组合物，其中的芍药提取物中还含有羟基芍药苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷和芍药新苷。
5.如权利要求1至4之一的组合物，为口服或非肠道给药制剂。
6.权利要求5所述的组合物在制备用于治疗和/或预防心脑血管疾病及糖尿病的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种药物或功能性保健品组合物、制备方法及其应用，所述组合物含有天然植物提取物或单体为活性成分。本发明药物组合物可用于治疗和/或预防心脑血管疾病及糖尿病。
文档编号A61P3/10GK101053598SQ20071010602
公开日2007年10月17日 申请日期2007年5月29日 优先权日2007年5月29日
发明者潘锡平, 林艳和 申请人:深圳市生物谷科技有限公司