含有杂质人参皂苷Rh₁的人参皂苷Rb₁的制作方法

专利名称：：含有杂质人参皂苷Rh₁的人参皂苷Rb₁的制作方法
技术领域：
：本发明涉及中药
技术领域：
，具体涉及一种标准的人参皂苷Rb,有效成分。本发明在于提供一种标准的中药有效成分，即含有杂质人参皂苷Rh,的标准的人参皂苷Rlv
背景技术：
人参皂苷具有很好的药理活性，按苷元不同分为齐墩果酸类、人参二醇类、人参三醇类，具有很好药理活性的是人参二醇皂苷、人参三醇皂苷，单体皂苷有-Ro、RApR^、-Ra2、-Ra3、國Rt^、-Rb2、-Rb3、-Rg、-Rd、-Rg、-Rg卜-Rg2、-Rg3、-Rh"-計2等，人参二醇皂苷以人参皂苷Rb,为主，有着很好的药理作用如:人参二醇组皂苷对大鼠心肌细胞钙通道阻滞作用(基础医学与临床，1994，02)、人参二醇单体对大鼠心肌作用的单钙通道分析及ESR谱研究(基础医学与临床，1994，04)、人参二醇组皂苷对心肌缺血再灌犬CO、TPVR及血清NE含量的影响(白求恩医科大学学报1995，05)、人参二醇皂苷对沙土鼠急性脑缺血一再灌注损伤的保护作用(中国药理学通报、1996、06)、人参二醇组皂苷对兔缺血再灌注损伤心脏血流动力学的影响(中国中医药科技200403)等；人参皂苷Rb,主要来源于五加科人参属人参、三七、西洋参、越南人参、竹节参，葫芦科绞股蓝属绞股蓝、缘果绞股蓝等植物的根、茎、叶、花蕾中，应用不同种属的中药材进行提取纯化得到的人参皂苷Rb,的杂质肯定是不同的，因此，应针对的人参皂苷Rb,的杂质进行深入的研究，将中药有效成分中的杂质研究清楚，特别是将含量较大的杂质进行研究并定量控制，有助于我们清楚的了解有效成分的物质基础，在药物上市后，发生不良反应或副作用时，有利于我们进行有效的追踪根源，有效杂质或协同作用杂质应该进行定量控制，无效杂质应该进行含量限定，有毒杂质或有害杂质应该进一步去除，或者含量限定到对人体无害的范围(比如小于IOPPM)，因此，对中药有效成分中的杂质进行深入的研究，具有深远的意义，有助于中药现代化、有助于中药走向世界，更加有利于人类的身体健康。人参皂苷Rh多采用实验室方法获得少量(mg级至g级)，比如制备高效液相色谱法、硅胶柱层析等方法，用于科学研究，但无法获得批量(kg级以上)人参皂苷Rb,用于成药开发与工业化生产，因此这是人参皂苷Rb,至今难于成药的原因和难点。申请号为03127664.4的专利文献"环保型人参皂苷Rbi高获取量产业化分离"，该文献公开了可以得到含量大于95%的人参皂苷Rbp采用硅胶柱层析方法，该方法造价昂贵，难于工业化生产；该文献另一主要问题是没有分析检测的方法表明人参皂苷Rbi的含量达到95X，其可信度值得怀疑；申请号为03148803,x的专利文献"人参皂苷R&的制备工艺"，该文献公开了采用大孔树脂法+硅胶柱层析的方法+硅胶柱层析的方法得到人参皂苷Rbp同样该方法仅适用于实验室研究，难于实现工业化生产；该文献另一主要问题是得到人参皂苷Rbr没有纯度，也没有含量测定的方法；申请号"200610093610.6"的专利文献"一种从人参叶中提取分离人参皂苷单体的方法"，该文献公开了采用大孔树脂法+硅胶柱层析的方法分离得到不同人参皂苷单体的方法，包括人参皂苷Rb,;其主要问题还是没有纯度的要求，没有含量测定方法，并且该工艺方法还是采用了柱层析这种复杂、造价高、无法工业化生产的方法。综上所述，在得到人参皂苷Rb,有效成分的基础上，针对其杂质特别是含量较大的杂质进行研究，得到标准有效成分，具有着深远的意义。
发明内容基于上述原因，我们的科研人员对不同种属的药材、不同方法的得到人参皂苷Rb,进行深入的分析，在"含量大于90X的人参皂苷Rb,，总杂质小于等于IO%"的基础上，通过创造性的劳动，确证了人参皂苷Rb,中含量较大的的杂质之一是人参皂苷Rh,，因为，人参皂苷Rh,具有很强的溶血作用，属于即是有效成分又是有害成分，因此，我们对人参皂苷Rh,进行限量控制，得到标准人参皂苷Rb,有效成分，即保留了杂质人参皂苷Rh,的药理活性，又保证了其在一定范围内，溶血作用降至最低，这种标准化的人参皂苷Rb,有效成分，可以直接作为药物原料在市场销售，也可以作为药剂制备的制剂原料使用，这样，有利于中药原料的标准化，有利于中药制剂生产的标准化；同时，我们科研人员还针对人参皂苷Rb,的提取纯化工艺进行研究采用大孔树脂法，以总皂苷为原料，分离得到人参皂苷Rbi粗品，再通过重结晶法，得到人参皂苷Rb,，该工艺方法简单、可以实现工业化生产，得到的人参皂苷Rb,造价不高，对其含量和杂质进行分析，人参皂苷Rb,含量大于等于90%，杂质中人参皂苷Rh,含量小于5X，符合标准人参皂苷Rb,有效成分的要求；本申请对含有杂质人参皂苷R^的人参皂苷Rb,进行药理活性实验，发现其除具有很好的治疗心脑血管疾病等作用外，还具有很好的抗肿瘤的作用，与现有人参皂苷Rb,(不含有人参皂苷R1^或含量极低)比较，在抗肿瘤作用方面具有显著性差异(P<0.05)。本发明通过以下技术方案实现的。本申请在于提供一种标准的人参皂苷Rbp即标准的中药有效成分将有效成分进行含量确定，对杂质进行物质确定和含量确定；本申请的标准人参皂苷Rb,有效成分可以作为药物制剂原料药使用，在符合药物制剂要求的基础上，制备的人参皂苷药物制剂可以用于治疗人体疾病。本申请的标准的人参皂苷Rb,有效成分为(1)一种人参皂苷Rb,，人参皂苷Rb,含量大于等于90X且小于100%，杂质含量大于0且小于等于10%，其特征在于杂质包括人参皂苷Rh,，R^的含量大于0且小于5%。(2)—种人参皂苷Rbp人参皂苷Rbi含量大于等于90X且小于100%，其中杂质人参皂苷Rhi的含量大于等于0.1%且小于5%。(3)—种人参皂苷Rbp人参皂苷Rbi含量大于等于90X且小于100%,其中杂质人参皂苷Rh,的含量大于等于0.5%且小于等于3.0%。上述标准有效成分中人参皂苷Rh,为杂质中含量较大之一，通过科学实验将其分离，再通过系列实验确定其结构。上述标准有效成分可以由人参、三七、西洋参、越南人参、竹节参，葫卢科绞股蓝属绞股蓝、缘果绞股蓝等植物的根、茎、叶、花蕾中得到总皂苷，再经过高效液相色谱制备方法进行纯化得到，也可以由硅胶柱层析进行单体分离，高效液相色谱法控制终点得到，等等；本申请上述标准人参皂苷Rb,有效成分也可以由下述方法得到(1)取三七、人参、西洋参或绞股蓝提取得到的总皂苷；(2)总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过非极性或弱极性大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥；(3)干燥物用乙醇、95%乙醇、正丁醇或甲醇溶解，滤过，滤液加入或者不加入有机溶剂，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb,。上述步骤1中的总皂苷可以直接由市场购买或根据科技文献制备；上述步骤(3)得到的人参皂苷Rb,可以重复步骤(3)的方法；-所述三七总皂苷可以通过市售购买，或者根据现有专利文献或科技文献制备得到(魏均娴、陈业高、曹树明，三七果梗皂甙成分的研究，中国中药杂志，1992，17(9):611-613;杨崇仁、王国燕、伍明珠、等，三七芦头的皂甙成分，药学通报，1985，20(6):337-338;董阿玲、郑俊华、果德安等，从三七中分离微量成分三七皂苷的方法，中国中药杂志，2002，27(10):793-794;欧来良、史作清、施荣富、等，强性大孔吸附树脂对三七皂苷的分离纯化研究，中草药，2003，34(10):卯5-907;章观德，吸附树脂法测定三七及其制剂冠心宁总皂甙，中草药，1981，12(11):23-25.)。所述大孔树脂柱为HPD-IOO、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、DlOl、1300-1、1400或AB-8。所述有机溶剂为丙酮、乙酸乙酯中的一种或两种。上述人参皂苷Rbt为活性物质制备的单位剂量的药物制剂。上述人参皂苷Rb,为活性物质制备的药物制剂，其中单位剂量为lmg—4000mg。上述人参皂苷Rb,为活性物质制备的药物制剂，其中单位剂量为5mg—2000mg。上述人参皂苷在制备治疗和/或预防心脑血管疾病、肿瘤、衰老、记忆力减退药物中的应用。一、检测方法实验方法采用高效液相色谱法进行检测分析；采用高效液相色谱法进行检测分析；色谱柱ds反相色谱柱；色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/min;柱温25。C;检测波长203nm;理论板数按人参皂苷计应不低于2500;以水乙腈为流动相，按下述梯度洗脱条件进行梯度洗脱，运行60分钟；0—40分钟时，水的比例由80%降至50°/。，已腈的比例由20%升至至50%;40—43分钟时，水的比例由50%降至20%，已腈的比例由50%升至80%;43—48分钟时，保持水的比例为20%，保持已腈的比例为80%;48—50分钟时，水比例由20%升至80%，水的比例由80%降至20%;50—60分钟保持水的比例为20%，己腈的比例80%;对照品溶液的配制精密称取人参皂苷Rb,对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；供试品溶液的配制精密称取或量取样品到容量瓶中加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各，注入液相色谱仪，采用按外标法以峰面积计算，即得。注本申请人参皂苷Rb,对照品是法定标准品，购买自中国药品生物制品鉴定所购买。本申请标准人参皂苷Rb,有效成分的检测分析取本申请标准人参皂苷Rb,有效成分，按照上述实验方法进行检测分析实验结果见表h表l人参皂苷Rb,样品测定结果批号人参皂苷Rb,M(%)人参阜苷Rh,耀(％)錄阜苷Rh,W1f司辦194.034.9813.20.99294.204.0313.51.7795.693.4214.10.89495.023.0013.21.9896.912.5914.60.50696.141.7214.42.14794.260.5014.15,24898.720.3413.80.94999.810.1013.30.09^99.74^实验结论通过上述实验表明，本申请标准人参皂苷Rl^有效成分中，人参皂苷含量大于等于90%且小于100%，杂质人参皂苷Rh,的含量大于0且小于5%;人参皂苷Rb!含量大于等于90M且小于100%,杂质人参皂苷Rh!的含量大于等于0.1%且小于5%;人参皂苷Rb,含量大于等于90X且小于100%，杂质人参皂苷的含量大于等于0.5%且小于等于3%。二、人参皂苷R^结构确证资料取本申请标准人参皂苷Rb,有效成分，经过硅胶柱层析分离，结合高效液相色谱液法，将含量较大的杂质、人参皂苷Rb,分别分离，得到杂质单体，进行结构确证，确证资料如下13C-NMR:见表2表2人参皂苷Rh,结构确证资料c5(ppm)CS(ppm)CS(ppm)38.80c1347~48溶剂掩盖c25130.57c226.20Ci451.12C2624.47c377.69c1529.98c2716.43c439.0925.9830.50c560.40c1753.73C2914.70c676.26c1816.17C3015.61c743.9816.29Glu-CV104.16c840.47C2073.02c2'74.11c949.51c2125.11c3'79.52Cio39.0034.88c/70.67c30.55c2321.88c5'78.47c1270.33C24124.77c6'61.54'H國NMR:1、.949，1.000，1.010，1.096，1.158，1.332，1.627，1.689存在8个甲基峰信号对应结构中的CH3-18，19，21，26，27，28，29，30。2、55.146，t为CH-24的信号峰。3、34.350，d，J=7.6为葡萄糖1位碳所连H的信号峰。实验结论通过上述实验表明，本申请含量较大杂质之一是人参皂苷Rhl。三、溶血性实验研究实验方案方案l:人参皂苷Rb!含量90.02%,杂质人参皂苷Rhi含量9.14X。方案2:人参皂苷Rb,含量91.89。％，杂质人参皂苷Rhi含量7.76X。方案3:人参皂苷Rbi含量92.57%,杂质人参皂苷Rh,含量6.33X。方案4:人参皂苷Rb,含量93.18%,杂质人参皂苷RlM含量5.27X。方案5:人参皂苷Rb,含量94.10%,杂质人参皂苷Rhi含量5.02X。方案6:人参皂苷Rl^含量94.27%,杂质人参皂苷Rh,含量4.99X。方案7:人参皂苷Rbi含量95.31%，杂质人参皂苷R^含量3.87X。方案8:人参皂苷Rbt含量96.72%，杂质人参皂苷Rhi含量3.00X。方案9:人参皂苷Rl^含量97.03%，杂质人参皂苷RlM含量L95X。方案10:人参皂苷Rb,含量98.31%,杂质人参皂苷Rh!含量0.50X。方案ll:人参皂苷Rbi含量99.24%,杂质人参皂苷Rht含量0.10X。方案12:人参皂苷Rb,含量99.87%，杂质人参皂苷Rh,含量0.07X。方案13:生理盐水。实验方法取去纤维蛋白兔全血，加生理盐水，摇匀，离心，倾去上清液，反复清涤至不成红色为止，量取红细胞，加生理盐水稀释成2%的混悬液，取上述不同方案的人参皂苷Rbi，加入2%红细胞混悬液2.5ml,补加生理盐水至5ml，轻轻摇匀，置37X:恒温水浴中，观察1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时溶血情况，实验结果见表3。表3不同方案的溶血情况组别1小时~~2小时4小时5小时6小时注+表示溶血，-表示不溶血，+-表示有溶血现象但不完全实验结果通过溶血性实验研究表明，当杂质人参皂苷R^含量小于5X时，几乎没有溶血作用，说明含有的杂质人参皂苷Rh,应该限定在大于0且小于5%的范围内。四、药理实验实验l对大鼠肝肿瘤抑制的比较实验动物大鼠，150g—180g，雌雄不分。实验药物生理盐水；本申请标准人参皂苷Rb,有效成分(符合本申请标准有效成分对杂质人参皂苷Rh,的限定)；市售人参皂苷Rb,单体(中国药品生物制品鉴定所)；斑蝥素钠注射液(贵州神奇制药有限公司)实验方法取大鼠分为生理盐水组、市售斑蝥素钠注射液组、本申请标准人参皂苷Rb,有效成分组、市售人参皂苷Rb,单体组，作W256的肝内接种，接种7天后，用戊巴比妥钠按35mg/kg的剂量腹腔注射麻醉，固定，剖腹暴露肝，测量肝上肿瘤表面最大径(a)和最小径(b)，按(a*b2)/2=V(肿瘤体积)。分离胃、++十++......+++++--+++++......++++,,++++,,,+++2456789012r案案案案案案案案案案案案案方方方方方方方方方方方方方十二指肠动脉、肝总动脉和肝固有动脉，结扎胃、十二指肠动脉远端，以银夹阻断肝总动脉，于手术放大镜下在胃十二指肠动脉上切口并插入外径0.3mm导管后再送入肝固有动脉，然后按实验分组分别注入受试药物(给药量相同)，术后拔管结扎胃十二指肠动脉，放开肝总动脉银夹，再缝合切口，将大鼠置于动物室待苏醒，继续词养观察，手术后8天，按上法检测肿瘤体积，实验结果见表4:表4各组制剂对肿瘤的抑制比较~^给药前肿瘤体积给药后肿瘤体积体积变化百分数组别33mmmm%生理盐水组4.17±0.826.01±0.97+44.12±1.92市售斑蝥素钠注射液4.01±0.333.21±0.59—19.95±2.77**市售人参皂苷Rb!组4.08±0.702.81±0.34—31.13±4.80**本申请标准人参皂苷Rb,组4.11±0.652.07±0.11—49.66±6.60**弁注与生理盐水组比较"PO.01;与阳性对照组市售斑蝥素钠注射液组比较弁P0.05实验2物理、化学和生物因素均能诱发癌症，但人癌发病原因的80%-90%认为是环境化学物质引起的。对二乙基亚硝胺(DENA)诱发大鼠肝癌的抑制实验动物大鼠，120g左右，雌雄不分，。实验药物生理盐水；本申请标准人参皂苷Rbi有效成分(符合本申请标准有效成分对杂质人参皂苷R^的限定)；市售人参皂苷Rb,单体(中国药品生物制品鉴定所)；斑蝥素钠注射液(贵州益佰制药股份有限公司)实验方法用含二乙基亚硝胺(DENA)的饮水喂养大鼠，36周得原发性肝癌，按照实验l的方法进行实验，记录大鼠存活天数，实验结果见表5:表5大鼠存活天数比较<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注与生理盐水组比较"P《.01;与阳性对照组市售斑蝥素钠注射液组比较弁P0.05实验3对大鼠脑梗塞的保护作用实验药物本申请标准人参皂苷Rb,有效成分(符合本申请标准有效成分对杂质人参皂苷Rhi的限定)；市售人参皂苷Rb,单体(中国药品生物制品鉴定所)；血栓通注射液。实验动物SD大鼠，250—300g，雌雄各半。实验方法取大鼠，水合氯醛300mg/kgip麻醉，颈部切口，分离并结扎右侧颈总动脉，缝合肌肉皮肤后,右侧位固定，在右耳和右眼外眦连线中点切开皮肤，分离颞肌，暴露颧突及颞骨,在颧突的头端12mm处开一约3x3mm的骨窗，暴露大脑中动脉(MCA)，将MCA灼断，缝合切口。参考Bederson法给药，处死动物，取右大脑半球，切成5片，置于2g/LNPT中37'C温育15min染色，仔细挖取并称重未被染成兰色的白色梗塞脑组织，实验结果见表6。表6不同药物对大鼠脑梗塞保护情况组别给药剂量动物数脑梗塞组织重量g/kg只mg生理盐水10121.10±39.57血栓通注射液0.21081.26±19.50**市售人参皂苷Rb,单体0.061067.34±15.22**本申请标准人参皂苷Rb,有效成分0.061055.11±8.77**#注与生理盐水组比较*叩<0.01;与血栓通注射液组比较弁P0.05实验4对狗心肌缺血保护作用实验动物Beagle狗，体重7.5隱10kg。实验药物本申请标准人参皂苷Rb,有效成分；市售人参皂苷Rb,单体(中国药品生物制品鉴定所)；血塞通注射液.实验方法取实验狗，分为生理盐水组、血塞通注射液组、本申请标准人参皂苷Rb,有效成分组、市售人参皂苷Rb,单体组，给药组分别在狗前肢皮下头静脉给药，给药量每次20mg/kg，生理盐水组等容不等量，每天给药1次，连续给药3天，给药第3天后用戊巴比妥钠25mg/kg静脉麻醉，气管插管，接人工呼吸机加以正压呼吸，从左侧第五肋开胸，剪开心包，暴露心脏，将心包切开缘缝于胸壁，在左冠状动脉前降支分二期结扎，并缓慢iv利多卡因8mg/kg以防结扎前可能引起的心室颤动，随后缝合心包及胸壁。心梗后24h，狗经戊巴比妥钠麻醉后处死，迅速取出心脏，切除大血管和脂肪组织，核对前降支结扎点的位置，称全心重，然后切除右心室和左右心房，留下室中隔及左心房，称得左心室重，从心尖和开始与前降支垂直方向将左心室切成2-3mm厚的肌片，浸于硝基四唑蓝溶液(NBT)中染色30min，剪下缺血区心肌组织称重，计算心肌梗塞范围，即心梗范围=缺血区重/左心室重x100。/。，结果见表7。表7对狗心室梗塞范围的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注与生理盐水组比较，*叩〈0.01;与阳性对照组血塞通注射液组比较弁P0.05注将本申请标准人参皂苷Rbt有效成分与市售人参皂苷Rb,单体进行小鼠记忆功能的实验、抗痴呆实验、改善性功能实验，实验结果显示，本申请标准人参皂苷Rb,有效成分比市售人参皂苷Rb,单体药理活性好。讨论通过上述药理实验表明，本申请含有杂质人参皂苷Rhi的人参皂苷Rb,比含量接近100X的人参皂苷Rb,单体药理活性要好，经过我们研究，初步解释为.-人参皂苷Rhl也是活性成分，同时也是人参皂苷Rb,的降解产物，二者在进入体内，除具有相加作用外，还会具有协同作用，另外，含有一定量杂质人参皂苷Rhl的人参皂苷Rb,在药物代谢方面，能够促进人参皂苷Rbl的吸收，而含量接近IOO%的人参皂苷Rb!可能是不含有人参皂苷Rhl或含量微量，对人参皂苷Rb,的影响很小，不能产生协同作用(药理和药代等方面)，因此，其药理活性要比本申请标准人参皂苷R^有效成分的药理活性低。四、剂量筛选实验对小鼠Swo肿瘤生长抑制作用实验动物健康小鼠，体重16—20g，雌雄各半。实验方法取接种传代小鼠S咖，在匀浆器中加入生理盐水，制成小鼠S^瘤匀浆液，再以生理盐水l:3稀释，然后取0.21111注入小鼠左腋下皮下，24小时称重，小鼠每日尾静脉给药一次，生理盐水等容不等量，共7天。停药次日处死小鼠，称体重并细心剥离皮下瘤块，于EM50电子天平称取瘤重，并计算抑瘤率，见表8:表8不同给药剂量对小鼠S湖肿瘤生长抑制作用n瘤体重量抑瘤率mg%生理盐水1.49±0.32=^康莱特注射液1.12±0.2724.6土3.4本申请人参皂苷剂量1组0.87±0.1241.4±5.7*本申请人参皂苷Rbi剂量2组0.65±0.0947.3±5.9**本申请人参皂苷Rb,剂量3组0.43±0.0753.9±6.4**本申请人参皂苷Rh剂量4组0.28±0.0458.2±7.4**注与阳性对照组康莱特注射液组比较"PO.Ol，*P<0.05。实验结论通过剂量筛选实验表明，本申请人参皂苷Rb,随剂量增加药理活性也加强，与很多药物的药理活性不同(大部分药物随剂量增加而药理活性会到达一个平台期，即剂量再增加而活性不增加)，随着剂量增加活性一直增加，没有平台期，一直可以到出现毒性为止；经过我们剂量筛选实验和毒性实验，确定本申请人参皂苷Rb,的单位剂量为lmg—4000mg;优选单位剂量为5mg—2000mg(剂量大于4000mg出现毒性反应，小于lmg与模型组没有显著性差异)。本申请标准人参皂苷Rb,有效成分与现有技术人参皂苷Rbt("申请号为03127664.4的专利文献<环保型人参皂苷Rb,高获取量产业化分离>，该文献公开了可以得到含量大于95X的人参皂苷Rb/'等方法得到的)比较具有以下特点1、本申请将人参皂苷Rbi中含量较大的杂质之一进行的归属，确定了其是人参皂苷Rh,，进一步明确了物质基础，而现有技术中只是得到了一定含量的人参皂苷Rb,，没有进行深入的研究，物质基础模糊；2、本申请标注人参皂苷Rbi有效成分可以作为药物制剂的原料，在临床应用中，发生任何不良反应或副作用，因为物质基础较明确，特别是杂质的明确可以在后续的药物临床研究中，明确出药物本身成分引起的，还是药物制剂制备过程中引入的无关物质(比如热源、污染等因素)造成的，有利于药物的发展，而现有技术中的人参皂苷Rb,虽然是有效成分，但还存在着一定的暗箱，特别是发生不良反应或副作用时，无法追索渊源，造成药物发展的障碍(比如鱼腥草注射液事件)；3、本申请在研究中，确定杂质人参皂苷Rh,属于既是有效杂质又是有毒杂质，并且限定了其范围，在一定基础上对有效成分人参皂苷Rb,具有协同作用，属于有效杂质，而现有技术只是明确了人参皂苷Rh的含量，对其余物质属于有效杂质、无效杂质或有害杂质一无所知，研究属于起始阶段。四、实施例实施例1一种人参皂苷Rbp人参皂苷Rl^含量90.01%，杂质人参皂苷Rh,含量4.99%。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例2一种人参皂苷Rh，人参皂苷Rbi含量99.9%，杂质人参皂苷含量0.03%。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例3一种人参皂苷Rb,,人参皂苷Rb,含量94.82%，杂质人参皂苷Rh,含量4.10%。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例4一种人参皂苷Rbp人参皂苷Rbi含量98.93%，杂质人参皂苷Rh,的含量0.10%。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例5一种人参皂苷Rb,，人参皂苷Rl^含量96.11%，杂质人参皂苷Rh,的含量3.00%。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例6一种人参皂苷Rb,，人参皂苷Rb,含量96.19%，杂质人参皂苷R1m的含量0.50%。上述人参皂苷作为R^药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例7一种人参皂苷Rb,，人参皂苷Rbi含量98.26%，杂质人参皂苷Rh,的含量0.32%。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例8一种人参皂苷Rb,，人参皂苷Rb,含量97.30%，杂质人参皂苷RlM的含量1.19%。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例9一种人参皂苷Rb,，人参皂苷Rb,含量97.09%，杂质人参皂苷Rhi的含量1.83%。上述人参皂苷作为mM药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例io一种人参皂苷Rb,，人参皂苷Rb,含量96.54%，杂质人参皂苷Rhl的含量2.68%。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。上述实施例1—10标准有效成分中人参皂苷Rh,为杂质中含量较大之一，通过科学实验将其分离，再通过系列实验确定其结构。上述实施例1一10标准有效成分可以由人参、三七、西洋参、越南人参、竹节参，葫芦科绞股蓝属绞股蓝、缘果绞股蓝等植物的根、茎、叶、花蕾中得到总皂苷，再经过高效液相色谱制备方法进行纯化得到，也可以由硅胶柱层析进行单体分离，高效液相色谱法控制终点得到，等等；实施例11取西洋参提取得到的西洋参总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-100A大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用乙醇溶解，滤过，滤液加入丙酮，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb"西洋参提取总皂苷的方法根据现有专利文献或科技文献进行制备。上述人参皂苷作为Rbi药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例12取三七提取得到的三七总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-100大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂乙酸乙酯，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rbp所述三七总皂苷提取方法根据现有专利文献或科技文献进行制备。上述人参皂苷作为Rl^药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例13取绞股蓝提取得到总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-400大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂丙酮、乙酸乙酯，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rbj。所述绞股蓝总皂苷提取方法根据现有专利文献或科技文献进行制备。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例14取人参提取得到的总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-300大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用甲醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂丙酮，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rbp所述人参总皂苷的提取方法可以通根据现有专利文献或科技文献进行制备。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例15取西洋参总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-450大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50Q/^乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用乙醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂乙酸乙酯，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb,。所述西洋参总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例16取三七总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-400A大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂丙酮，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb,。所述三七总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到(章观德，吸附树脂法测定三七及其制剂冠心宁总皂甙，中草药，1981，12(11):23-25.)。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例17取三七总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过1300-1大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂丙酮、乙酸乙酯，放置析出，滤过、千燥，得到人参皂苷Rb,。所述三七总皂苷通过市售购买。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例18取三七总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过1400大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用甲醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂乙酸乙酯，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb卜所述三七总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到(杨崇仁、王国燕、伍明珠、等，三七芦头的皂甙成分，药学通报，1985，20(6):337-338)。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例19取西洋参提取得到的总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过D101大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂乙酸乙酯，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb,。所述西洋参总皂苷提取方法根据现有专利文献或科技文献制备得到。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例20取人参总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过AB-8大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂丙酮，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb,。所述人参总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到。上人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例21取绞股蓝提取得到总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过1400大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂乙酸乙酯，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rbp所述绞股蓝总皂苷提取方法根据现有专利文献或科技文献制备得到。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例22取三七提取得到总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过D101大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用甲醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂乙酸乙酯，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb卜所述三七总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例23取三七总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-300大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用甲醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂丙酮，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb,。所述三七总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到(杨崇仁、王国燕、伍明珠、等，三七芦头的皂甙成分，药学通报，1985，20(6):337-338;)。上述人参皂苷作为Rbi药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例24取三七总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-100大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用乙醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂乙酸乙酯，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rbj。所述三七总皂苷通过市售购买，上述人参皂苷作为Rbi药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例25取三七提取得到的三七总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-450大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用乙醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rbp所述三七总皂苷制备方法根据现有专利文献或科技文献进行制备；上述人参皂苷作为Rbt药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例26取人参提取得到的人参总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-300大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb,。所述人参总皂苷提取方法根据现有专利文献或科技文献制备得到。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例27取西洋参提取得到总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-100A大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb!。所述西洋参总皂苷提取方法根据现有专利文献或科技文献制备得到。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例28取三七提取得到的总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过AB-8大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用甲醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb,。所述三七总皂苷的提取方法可以通根据现有专利文献或科技文献制备得到。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例29取绞股蓝总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过1400大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用乙醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rbp所述绞股蓝总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例30取人参总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过1400大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50°/。洗脱液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb,。所述人参总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到。上述人参皂苷作为Rbt药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例31取三七提取得到总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过D101大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb,。所述三七总皂苷提取方法根据现有文献制备得到。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例32取人参提取得到总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-450大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用甲醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rbj。所述人参总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例33取绞股蓝提取得到的总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-400A大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb"所述绞股蓝总皂苷提取方法根据现有专利文献或科技文献进行制备。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例34取人参总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过1400大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb"所述人参总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例35取绞股蓝提取得到总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过D101大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb,。所述绞股蓝总皂苷提取方法根据现有专利文献或科技文献进行制备。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例36取三七提取得到总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过AB-8大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用甲醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb,。所述三七总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到。上述人参皂苷作为R^药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例37取三七总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过1300-1大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用甲醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb"所述三七总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到。上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。实施例38取人参总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过D101大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用乙醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rbi。所述人参总皂苷通过市售购买，上述人参皂苷作为Rb,药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。上述实施例11一38得到人参皂苷Rbl有效成分中，人参皂苷Rb,含量大于等于90%且小于100%,杂质人参皂苷Rht的含量大于0且小于5M;或者人参皂苷Rb,含量大于等于90%且小于100%，杂质人参皂苷Rh,的含量大于等于0.1%且小于5%;或者人参皂苷R^含量大于等于90X且小于100%，杂质人参皂苷Rh,的含量大于等于0.5。％且小于等于3.0%;上述实施例1一38的人参皂苷Rb,为活性物质制备的药物制剂，其中单位剂量为lmg—4000mg。上述实施例1一38上述人参皂苷Rb,为活性物质制备的药物制剂，其中单位剂量为5mg—2000mg。上述人参皂苷Rb,在制备治疗和/或预防心脑血管疾病、肿瘤、衰老、记忆力减退药物中的应用。注:本发明所要求保护的具体技术方案，不限于上述实施例所表达的技术方案的具体组合。权利要求1、一种人参皂苷Rb1，人参皂苷Rb1含量大于等于90％且小于100％，杂质含量大于0且小于等于10％，其特征在于杂质包括人参皂苷Rh1，人参皂苷Rh1含量大于0且小于5％。2、根据权利要求1所述的一种人参皂苷RbP其中杂质人参皂苷Rhi的含量大于等于0.1%且小于5。％。3、根据权利要求1所述的一种人参皂苷Rbi，其中杂质人参皂苷Rh,的含量大于等于0.5%且小于等于3%。4、根据权利要求l一3任一项所述的一种人参皂苷Rb,，其制备方法为取三七、人参、西洋参或绞股蓝提取得到的总皂苷，总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过非极性或弱极性大孔吸附树脂柱，水洗、40%乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50%乙醇洗脱，收集50%洗脱液，干燥，干燥物用乙醇、95%乙醇、正丁醇或甲醇溶解，滤过，滤液加入或者不加入有机溶剂，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rh。5、根据权利要求l一3任一项所述的一种人参皂苷Rb,，其分析检测方法为采用高效液相色谱法进行检测分析；色谱柱<:18反相色谱柱；色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/min;柱温25'C;检测波长203nm;理论板数按人参皂苷Rb,计应不低于2500;以水乙腈为流动相，按下述梯度洗脱条件进行梯度洗脱，运行60分钟；0—40分钟时，水的比例由80%降至50%，已腈的比例由20%升至50%;40—43分钟时，水的比例由50%降至20%,已腈的比例由50%升至80%;43—48分钟时，保持水的比例为20%，保持已腈的比例为80%;48—50分钟时，水比例由20%升至80%,水的比例由80%降至20%;50—60分钟保持水的比例为20%，已腈的比例80%;对照品溶液的配制精密称取人参皂苷Rb,对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；供试品溶液的配制精密称取或量取样品到容量瓶中加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各，注入液相色谱仪，采用按外标法以峰面积计算，即得。6、根据权利要求1一3任一项所述的一种人参皂苷Rb,为活性物质制备的单位剂量的药物制剂。7、根据权利要求4所述的一种人参皂苷Rb"其中制备方法中所述的非极性或弱极性大孔树脂为HPD-IOO、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-1、1400或AB-8。8、根据权利要求4所述的一种人参皂苷Rbp其中制备方法中所述的有机溶剂为丙酮、乙酸乙酯中的一种或两种。9、根据权利要求6所述的一种人参皂苷Rb,为活性物质制备的药物制剂，其中单位剂量为lmg—4000mg。10、根据权利要求9所述的一种人参皂苷Rh为活性物质制备的药物制剂，其中单位剂量为5mg—2000mg。11、根据权利要求l一6任一项所述的一种人参皂苷Rbi在制备治疗和/或预防心脑血管疾病、肿瘤、衰老、记忆力减退药物中的应用。全文摘要本发明公开了一种标准人参皂苷Rb₁有效成分，包括含量大于等于90％且小于100％的人参皂苷Rb₁，其特征在于杂质人参皂苷Rh₁含量大于0且小于5％；或者杂质人参皂苷Rh₁的含量大于等于0.1％且小于5％；或者杂质人参皂苷Rh₁的含量大于等于0.5％且小于等于3.0％；药理实验表明，本申请标准有效成分具有很好的药理作用，可以制备成药剂学上药物制剂。文档编号A61P25/00GK101392013SQ20071012191公开日2009年3月25日申请日期2007年9月18日优先权日2007年9月18日发明者严刘,李志刚,林治荣,渠守峰,米长江,郭小鹏,金治刚,阮爱华,群顾申请人:北京本草天源药物研究院