专利名称：：一种防治人乳头瘤病毒感染的复方疫苗组合物、复方疫苗阴道喷雾剂及其用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种防治人乳头瘤病毒感染的复方疫苗组合物、复方疫苗阴道喷雾剂及其用途，属于具有针对性治疗适应症的疫苗制剂领域。
背景技术：
：人乳头瘤病毒(HPV)是最常见的性传播疾病的病原体，最近报道表明，全球一半以上的成人被HPV所感染，约有30%通过性传播。有报道指出，与其它性传播疾病不同，HPV很易通过与感染的皮肤或与污染的物品直接接触而传播。因为病毒存活在生殖道的外层皮肤细胞之内和阴道宫颈、肛门和尿道细胞内，避孕套不能保护所有这些部位的病毒传播，因此所谓的安全性行为不能阻止HPV的传播。HPV感染十分常见，美国的资料表明，大约有2000万人感染有HPV，约有80%的女性在50岁以前将有HPV感染。目前已鉴定的HPV型别已达100多个，每个性活动期的妇女可接触多种型别的HPV，它感染特定部位或引起特定临床症状。HPV与人类疾病的关系见下表<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>在HPV引起的人类疾病中，妇女宫颈的HPV感染最为常见，危害性也最大，HPV是慢性宫颈炎的主要病原。在宫颈粘膜柱状上皮和鳞状上皮转变的区带处，是嗜粘膜型乳头瘤病毒繁殖的部位，也是慢性宫颈炎的好发部位。慢性宫颈炎的病因复杂，1989年中国病毒基因工程国家重点实验室和北京天坛医院合作研究发现，慢性宫颈炎患者宫颈中HPV的检出率均明显高于正常宫颈。HPV16感染与慢性宫颈炎关系更为密切，我国的研究发现，慢性宫颈炎患者的宫颈组织和洗液中，HPV16的检出率可高达20-50%。目前所知，HPV是人类肿瘤病毒病因中最为重要的一类病毒，它与人类皮肤与粘膜的良性与恶形肿瘤关系最为密切，是宫颈癌的病因。大量的研究表明，宫颈癌发生以前有一系列不正常的细胞改变，称为子宫颈上皮内肿瘤形成(cervicalintra印ithelialneoplasia,CIN)I,II和III，其中CINIII即是原位癌。HPV可以引起CIN，在辅助因子的作用下，可以发展成宫颈癌。依据如下1组织癌前变化(CIN)有规律地与某些型别的HPV有关，2在子宫癌组织中可以有规律地检出HPVDNA序列，有97.9y。的宫颈癌组织中可以发现HPVDNA序列，主要是HPV16或HPV18，但有地区性的差异，3不仅是宫颈癌组织而且来自宫颈癌的细胞株，如HeLa、SIHA和CASKI均含有HPV16、18或其它型别的HPVDNA，后者于染色体上一个位点或多个位点处整合并有转录，4人类生殖器的癌前组织学病理改变,与动物乳头瘤病毒感染时所引起的病理改变是相一致的，如常有凹空细胞(Koilocytosis)，5HPVDNA的存在方式与癌变过程有一定联系，在癌前病灶中，HPVDNA呈游离状态，在浸润癌组织细胞中则呈整合状态并有一定的整合部位，即在E1-E2之间，6宫颈癌的高发区，阴茎癌的发生也疣状表皮发育不良症至少12，17和20可以恶化3，5，8，9，10,12，14，15，17，19，25,28，36，40趾疣和寻常疣良性4花斑糠疹斑肉类与动物管理人员的寻常疣Bowen氏病样丘疹喉、食道癌，某些支气管癌皮肤疣，免疫缺陷患者皮肤疣，接受肾移植者皮肤、中间疣喉癌非生殖器Bowen氏病角化棘皮瘤(Kerato-acanthoma)黑色素瘤Bowenoi満灶多发性湿疣和皮肤扁平疣生殖器疣有30"/。Pj以恶化常是良性667122o12444癌性知知知化性性性性性恶未未未原良恶良n较高，7—般认为检出HPV16或HPV18的患者不一定就发展成恶性肿瘤，在HPV感染的基础上加上其它的辅助因子才发生癌变，可能的辅助因子包括a.某些其它病毒(如HSV，CMV)或微生物(如沙眼衣原体)的合并感染，后者可能导致宿主细胞和HPV基因表达的改变，b.激活生长因子和癌基因，c.宿主免疫状态的异常，d.对抗原和代谢物引起的炎症反应，e.放射线照射，f.类放射药物,烟草代谢物和其它致癌物质,g.自然的避孕药的激素紊乱，h.刺激导致创伤上皮的反复出现。引起宫颈癌的HPV型别较多，近年来研究者鉴定了有30个型别的HPV与宫颈癌有关，癌症患者最常见的型别依次为16，18，45，31，33，52，58和35，其中前4种型别占全球宫颈癌病因的80%。宫颈癌是世界上妇女仅次于乳腺癌的第二位最常见的癌症，是全球妇女癌症死亡率的第三位。全球每年有约50万新宫颈癌病例，每年有27万妇女死于此病。2006年6月，美国FDA批准了Merck公司开发生产的4价(6,11，16，和18型)HPV疫苗GARDASI1^，不仅是人类第一个特异性预防癌症的疫苗，也是第一个不仅预防宫颈癌，也预防性疣的疫苗。GARDASIL预防由HPV16，18引起的宫颈癌；宫颈癌前病变(宫颈上皮内瘤形成cervicalintra印ithelialneoplasia(CIN)2/3和原位腺癌(AIS));阴户前癌(阴户上皮内瘤形成intra印ithelialneoplasia(VIN)2/3)和阴道前癌(阴道上皮内癌形成(ValN)2/3)。在临床试验中GARDASIL可以预防过去未接触过HPV的，由HPV16和18引起的宫颈癌，效果达到100y。。GARDASIL同样还可预防由HPV6，11，16和18引起的性疣和低度宫颈病灶(CIN1)，批准用于9-26岁的女性，虽然GARDASIL是四价疫苗，可以预防由HPV6、11、16和18引起的感染，预防宫颈癌和性疣，美国FDA批准用于9-26岁的女性，目前还存在如下问题1.HPV有100多个型别，GARDASIL疫苗可预防HPV6、11、16和18引起的感染，但是对其它HPV型感染无任何作用。而且，由于HPV6、11、16和18的被抑制，根据病毒干扰原理，很可能会促进阴道和宫颈其它型别的HPV感染；2.GARDASIL疫苗对已有的HPV6、11、16和18感染无治疗作用；3.GARMSIL疫苗的使用年龄段为9-26岁，对26岁以上已婚妇女的HPV感染无能为力；4.GARDASIL疫苗要免疫程序是在6个月内上臂肌肉注射接种3次，推荐的用法是在选择的日期打第l针，2个月后打第2针，在第1针6个月后打第3针。所以，GARDASIL疫苗注射应用不利于推广。阴道粘膜局部免疫，无痛苦，易于接受，依从性好；5.GARDASIL疫苗只能产生系统免疫，而阴道和宫颈的HPV感染为粘膜局部感染；因此，局部粘膜免疫比系统免疫更为重要；6.阴道粘膜免疫有较宽的抗原交叉保护谱；7.GARDASIL疫苗价格昂贵，每剂量为120美元，完整的一个免疫程序需要360美元，广大的发展中国家显然无力支付这样高的费用。在专利文献方面，申请号为200380109729.2的中国专利公布了题为HPV-16和HPV-18L1VLP疫苗，文中包含HPV16的VLP和HPV18的VLP的组合物在制备用于预防由一组致癌HPV型中的一种或多种HPV型引起的感染和/或疾病药物中的用途，这种疫苗是HPV的VLP和佐剂联合应用，佐剂是铝盐和3D-MPL的组合，在这篇专利申请中提到了这种包含HPV16和HPV18的VLP的混合物在预防由HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66和HPV68引起的感染性疾病的发生。同时在这片文章中还提到了这种疫苗可以通过口服、局部、皮下、粘膜(阴道内)、静脉内、肌肉、鼻肉、舌下、真皮内及通过栓剂供给。2006年10月的《国际肿瘤学杂志》公布了题为"人乳头瘤病毒疫苗临床试验进展"一文，文中提到了治疗HPV感染的疫苗，这类疫苗包括多肽疫苗，病毒载体疫苗以及DNA疫苗，结果表明用HPV16E743-77的35个氨基酸长的肽制成的多肽疫苗具有治疗治疗HPV病毒感染的效果，同样HPV16和HPV18的E6和E7蛋白重组痘苗病毒载体疫苗也可以治疗HPV病毒的感染。申请号为200510049486.9题为"一种多肽疫苗及其制备方法"的中国专利公布了一种HPV的治疗性疫苗，这种疫苗是由一份HPV16E7n-2。，1份HPV16E7,3，l份破伤风类毒素制成，该发明中的疫苗是以注射剂型的形式进行使用的。而本发明人在长期研究中发现了一种新的疫苗组合物，即在HPV16的VLP和HPV18的VLP的组合物基础上辅以人干扰素等细胞因子，既可预防宫颈癌又可治疗HPV感染，包括慢性宫颈炎、宫颈上皮发育不良，包括CINI、II、III度等，防治两用，而且适用于任何年龄的已婚妇女，可以反复使用；将组合物制成喷雾剂特别是阴道喷雾剂，使用方便，而且阴道粘膜免疫的免疫谱较广，不仅对HPV16和18感染有预防作用，对其它型别HPV感染也有一定的交叉保护作用；不仅能产生系统免疫，也能产生局部粘膜免疫，此外还有成本低，价格低，便于个体自用，无疼痛等优点。
发明内容本发明的目的在于提供一种防治人乳头瘤病毒感染的复方疫苗组合物。本发明的另一目的在于提供一种根据上述复方疫苗组合物制备的复方疫苗阴道喷雾剂。本发明的又一目的在于提供上述复方疫苗组合物和阴道喷雾剂在预防或治疗女性生殖器的人乳头瘤病毒感染上的用途。本发明提供的防治人乳头瘤病毒(HPV)感染的复方疫苗组合物，包括HPV-16的L1蛋白的病毒样颗粒、HPV-18的Ll蛋白的病毒样颗粒和人干扰素，其比例为40120mg:2060mg:100-300万单位，所述人干扰素包括天然的人干扰素和/或通过基因技术构建的重组人干扰素。其中，HPV-16和HPV-18L1蛋白为L1全长基因按酵母的密码偏嗜性改造后在酵母中表达并纯化。这种改造可以用生物学软件VectorNTI10对HPV16，18的密码子进行全基因改造，Ll蛋白形成病毒样颗粒(VLP)，形成完整的空间构像，保持其抗原性。HPV-16和HPV-18的L1蛋白的VLP制备已经为现有技术，具体参见专利W09913056。HPV-16和HPV-18的L1蛋白的VLP可引起较好的免疫反应。人干扰素作为一种具有广谱抗病毒、抗细胞分裂、免疫调节活性的蛋白质，是细胞因子的一种，近半个世纪的基础和临床研究证明它是一种重要的广谱抗病毒、抗肿瘤药物。人干扰素首先与特异性细胞受体结合，调节信号传递，激活细胞基因表达，从而发挥人干扰素的生物学活性。迄今为止，已知人干扰素存在多个型别，如干扰素-a,p，S，y,e,k,X,t，co，limitin等，它们的主要特点和可能的临床应用各不相同，国内外大量的研究证明干扰素-a，p,y对hpv的感染和治疗都有作用，目前在临床治疗中也发挥了重要作用。本发明人经过大量研究发现，HPV-16的Ll蛋白的病毒样颗粒、HPV-18的Ll蛋白的病毒样颗粒和人干扰素在临床治疗时起协同作用，效果优于单独使用人干扰素，试验结果可见实验例2。其原因在于HPV-16和HPV-18的Ll蛋白的VLP可引起较好的免疫反应，促使人体产生抗体蛋白，抗体蛋白与人千扰素协同作用，抑制HPV病毒的增殖。上述复方疫苗组合物中还优选包括人白细胞介素-2，与HPV-16的Ll蛋白的病毒样颗粒的比例为10-20万单位40120mg。人白细胞介素-2(IL-2)也是一种细胞因子，不仅能够治疗HPV感染的作用，抑制HPV繁殖，还可扩张毛细血管，促进疫苗的免疫反应；又可刺激机体细胞免疫水平，后者与病毒感染密切有关。同时，上述复方疫苗组合物中还可以包括人白细胞介素-12、胸腺素P4以及乳铁蛋白中的一种或者2种以上的组合，其与组合物中HPV-16的Ll蛋白的病毒样颗粒的比例为10—50万单位1—10mg:5—100mg:40120mg。白细胞介素-12、胸腺素P4以及乳铁蛋白也属于细胞因子，是由免疫细胞和某些非免疫细胞经诱导而合成和分泌的一类生物活性的小分子，在细胞生长、活化、炎症、免疫、造血、肿瘤发生、组织修复等生物学过程中发挥着重要的作用，作为免疫佐剂，有促进阴道免疫反应，其中胸腺素e4也具有治疗HPV感染的作用。此外，本发明复方疫苗组合物还可以包括天然多糖，天然多糖与HPV-16的Ll蛋白的病毒样颗粒的比例为12mg:40120mg，天然多糖包括纤维素、透明质酸、淀粉、几丁质、壳聚糖或上述几种物质的衍生物中的一种或者几种，天然多糖能够增加组合物在粘膜表面停留的时间，扩展上皮细胞层的细胞间隙，使HPVL1蛋白和细胞因子进入粘膜上皮内，直接与树突状细胞相接触，充分发挥免疫作用。上述复方疫苗组合物可以制成各种剂型，如片剂、胶囊剂、注射剂、吸入粉雾剂或喷雾剂等等。但为了使用方便，本发明优选将上述复方疫苗组合物制成复方疫苗阴道喷雾剂，制备方法为将所述各组分溶于蒸馏水中即得。这是因为阴道和宫颈的HPV感染为粘膜局部感染；因此，局部粘膜免疫比系统免疫更为重要；而且阴道粘膜免疫有较宽的抗原交叉保护谱，在阴唇和会阴部同时有HPV感染时，易于扩展新适应症。复方疫苗阴道喷雾剂中各组分含量为HPV-16的Ll蛋白的病毒样颗粒40120mg/ml，优选80mg/ml;HPV-18的Ll蛋白的病毒样颗粒2060mg/ml，优选40mg/ml;人干扰素100-300万单位/ml。其中，人干扰素单位至少为IOO万单位，这是因为根据我们在1985-1989年临床试验数据，在宫颈直接贴敷，每次至少为IOO万单位才有明显效果。上述复方疫苗阴道喷雾剂还可以包括人白细胞介素-2:10-20万单位/ml，其作用如在前述组合物中作用相同。此外，上述复方疫苗阴道喷雾剂中还可以包括以下浓度的其它细胞因子的一种或2种以上的组合人白细胞介素-12:10—50万单位/ml胸腺素p4:l—10mg/ml人乳铁蛋白5—100mg/ml。为了增加复方疫苗阴道喷雾剂的使用效果，其中还可以添加天然多糖，天然多糖的浓度为12rag/ml。天然多糖能够增加喷雾剂的粘稠度和在粘膜表面停留的时间扩展上皮细胞层的细胞间隙，使HPVL1蛋白和干扰素进入粘膜上皮内，直接与树突状细胞相接触，充分发挥免疫作用。此外，为了不破坏阴道的酸性环境，可以将复方疫苗阴道喷雾剂的pH调节为4.04.5，pH的调节优选磷酸缓冲液，磷酸缓冲液参见《实用药剂工作手册》，为现有技术。同时，为了维持人体正常的盐度平衡和渗透压，复方疫苗阴道喷雾剂还可以含有质量百分比浓度为0.9%的NaCl。本发明还提供了上述的复方疫苗阴道喷雾剂在预防或治疗女性生殖器的人乳头瘤病毒感染上的用途。上述的人乳头瘤病毒为与宫颈癌和尖锐湿疣相关的16，18，31，33，35，39，45，51，52，56,58，59，68，6，11,26，40,42，43，44，53，54，55，62或66型别，人乳头瘤病毒感染包括慢性宫颈炎或子宫颈上皮内瘤形成I、II和III，感染的部位在女性宫颈、阴道壁、前庭、阴唇或会阴。本发明复方疫苗组合物和复方疫苗阴道喷雾剂，既可预防宫颈癌，又可治疗HPV感染；适用于任何年龄的已婚妇女；预防和治疗性传播的HPV感染引起的慢性宫颈炎，宫颈上皮发育不良，包括CINI、II、III度，抑制HPV繁殖，预防宫颈癌。本发明复方疫苗阴道喷雾剂的用法为每疗程共使用4次，每次1.0毫升，前2次使用间隔l周，后2次使用间隔3周。每晚睡前病人或伴侣给药，采取截石位将喷雾嘴直接指向宫颈，前、左、右各喷2下,后喷4下，每喷1次为0.1毫升。每次使用均为一次性。如已经有HPV感染需要治疗时，可以重复多次使用。综上所述，本发明的优越性概括如下1.复方阴道喷雾HPV疫苗既可预防宫颈癌又可治疗HPV感染，包括慢性宫颈炎、宫颈上皮发育不良，包括CINI、II、III度等，防治两用；2.适用于任何年龄的已婚妇女，可以反复使用；3.阴道粘膜免疫的免疫谱较广，不仅对HPV16和18感染有预防作用，对其它型别HPV感染也有一定保护作用；4.由于干扰素的广谱抗病毒活性，它可抑制由于HPV16和18的被抑制而导致其它型别HPV的繁殖；5.不仅能产生系统免疫，也能产生局部粘膜免疫；6.不含任何可能有对阴道有刺激性的物质。7.成本低，价格低，便于个体自用，无疼痛。具体实施方式-实施方式中，天然多糖中各组分均购于美国Sigma公司。细胞因子中人干扰素是购买自北京远策药业股份有限公司生产的干扰素a2b(商品名远策素)，人白细胞介素-2(IL-2)是购买自北京远策药业股份有限公司生产的IL-2(商品名远策欣)，细胞因子的其他组分为自制，其参考文献如下人乳铁蛋白参考文献应革，吴淑华，王静，赵小东，陈建明，张晓光，侯云德。重组巴氏毕赤酵母高密度发酵表达人乳铁蛋白的研究，中华实验和临床病毒学杂志，2002(4):181-185胸腺素P4(TB4)参考文献(1)CheYK,YangH,LuF,PuQ,LiRD,ZhaoZL.CloningexpressioninE.coliandbiologicalactivityofhumanthymosinbeta(4).ShengWuHuaXueYuShengWuWuLiXueBao(Shanghai).2002Jul;34(4):502-505.(2)LiQY,JonesPL,LaffertyRP，SaferD,LevyRJ.Thymosinbeta4regulation,expressionandftmctioninaorticvalveinterstitialcells.JHeartValveDis.2002Sep;ll(5):726-35.人白细胞介素-I2(IL-12)参考文献(1)王自力，梁国栋,付士红,周国林，刘礼初,陈飞,施侣元,侯云德.重组腺病毒介导的白细胞介素-12(IL-12)在肝癌细胞中的表达.病毒学报,1999，15(2):119-124(2)曲春枫,孙宗棠.人IL-12的克隆、表达及生物活性的鉴定.中国免疫学杂志，1999，15(1):1349(3)LeongSR，ChangJC，OngR，DawesQStemmerWP，PunnonenJ.OptimizedexpressionandspecificactivityofIL-12bydirectedmolecularevolution.ProcNatlAcadSci.2003,100(3):1163-8.实施例1:复方疫苗组合物，由以下成分组成HPV-16的L1蛋白的病毒样颗粒40gHPV-18的LI蛋白的病毒样颗粒20g人干扰素100Xl(f万单位将上述各组分混匀后按《药剂学》(毕殿洲主编，人民卫生出版社，第四版)的方法加入蒸馏水溶解至1000ml制成吸入粉雾剂。实施例2:复方疫苗组合物，由以下成分组成HPV-16的L1蛋白的病毒样颗粒120gHPV-18的L1蛋白的病毒样颗粒60g人干扰素300X1(T万单位人白细胞介素-2:10Xl(r万单位将上述各组分混匀后按《药剂学》(毕殿洲主编，人民卫生出版社,第四版)的方法制成分散片1000片。实施例3:复方疫苗组合物，由以下成分组成HPV-16的L1蛋白的病毒样颗粒80gHPV-18的Ll蛋白的病毒样颗粒40g人干扰素200Xl(f万单位人白细胞介素-2:20X103万单位人白细胞介素-12:10Xl(f万单位将上述各组分混匀后按《药剂学》(毕殿洲主编，人民卫生出版社,第四版)的方法制成胶剂500个。实施例4:复方疫苗组合物，由以下成分组成HPV-16的L1蛋白的病毒样颗粒100gHPV-18的L1蛋白的病毒样颗粒50g人干扰素150乂103万单位人白细胞介素-12:50X103万单位胸腺素(34:lg人乳铁蛋白5g透明质酸lg将上述各组分混匀后按《药剂学》(毕殿洲主编，人民卫生出版社,第四版)的方法制成注射剂1000支。实施例5复方疫苗组合物，由以下成分组成HPV-16的L1蛋白的病毒样颗粒90gHPV-18的L1蛋白的病毒样颗粒30g人干扰素250Xl(^万单位人白细胞介素-2:15X103万单位人白细胞介素-12:20Xl(^万单位胸腺素P4:10g人乳铁蛋白100g淀粉2g将上述各组分混匀后按《药剂学》(毕殿洲主编，人民卫生出版社,第四版)的方法加入蒸馏水溶解至1000ml制成吸入粉雾剂。实施例6:复方疫苗阴道喷雾剂，为将HPV-16的L1蛋白的病毒样颗粒80gHPV-18的L1蛋白的病毒样颗粒40g人干扰素200X103万单位加入蒸馏水溶解至1000ml，摇匀后制得。实施例7复方疫苗阴道喷雾剂，为将HPV-16的L1蛋白的病毒样颗粒120gHPV-18的L1蛋白的病毒样颗粒60g人干扰素300Xl()3万单位人白细胞介素-2:10X103万单位NaCl9g加入蒸馏水溶解至1000ml，摇匀后制得。实施例8复方疫苗阴道喷雾剂，为将HPV-16的Ll蛋白的病毒样颗粒40gHPV-18的Ll蛋白的病毒样颗粒20g人干扰素100xl(f万单位人白细胞介素-2:20xl(f万单位人白细胞介素-12:10乂103万单位壳聚糖lgNaCl9g加入蒸馏水溶解至1000ml，摇匀后，用磷酸缓冲液调节pH到4制得。实施例9复方疫苗阴道喷雾剂，为将HPV-16的Ll蛋白的病毒样颗粒90gHPV-18的Ll蛋白的病毒样颗粒50g人干扰素20(^103万单位人白细胞介素-12:50xl()3万单位胸腺素P4:lg人乳铁蛋白5g透明质酸0.2g淀粉0.3g几丁质1.5gNaCl9g加入蒸馏水溶解至1000ml，摇匀后，用磷酸缓冲液调节pH到4.5制得。实施例10复方疫苗阴道喷雾剂，为将HPV-16的Ll蛋白的病毒样颗粒110gHPV-18的Ll蛋白的病毒样颗粒30g人干扰素250xl(f万单位人白细胞介素-2:15xl()3万单位胸腺素P4:10g人乳铁蛋白100g纤维素lg淀粉0.5gNaCl9g加入蒸馏水溶解至1000ml，摇匀后，用磷酸缓冲液调节pH到4.2制得。实施例11复方疫苗阴道喷雾剂，为将HPV-16的Ll蛋白的病毒样颗粒80gHPV-18的Ll蛋白的病毒样颗粒40g人干扰素人白细胞介素-2:人白细胞介素-12:胸腺素P4:乳铁蛋白纤维素几丁质NaCl200x103万单位20x103万单位50x103万单位5g50g0.5g0.5g9g加入蒸馏水溶解至lOOOml，摇匀后，用磷酸缓冲液调节pH到4.5制得'实验例l此实验为本发明复方疫苗阴道喷雾剂对小鼠的免疫原性测定选4周雌性Balb/c小鼠，给予实施l的吸入粉雾剂、6—11的复方疫苗阴道喷雾剂20ul，在第一次免疫后3周和6周加强免疫2次，在第三次免疫后2周取小鼠血清，用市售的HPV疫苗GARDASIL为抗原，ELISA方法检测小鼠血清抗体滴度。测定结果如表1表l小鼠血清抗体滴度实验分组小鼠血清抗体滴度实施例11:64实施例61:64实施例71-'64实施例81:64实施例91:64实施例101128实施例111:128说明本发明复方疫苗阴道喷雾剂可以引起较好的免疫反应。实验例2此实验为本发明复方疫苗阴道喷雾剂实施例6和实施例11对人乳头瘤病毒(HPV)感染及宫颈上皮内瘤样变(CIN)疗效的的临床观察研究对象选择为HPV感染合并湿疣或CINI-II。入选标准1.年龄^18岁，有性生活史的女性；2.HPV高危型DNA检测为阳性；3.病理检查为湿疣或CINI-II;4.无药物过敏史。剔除标准1.免疫功能低下者，如肿瘤术后或放、化疗后，艾滋病及系统性红斑狼疮等；2.妊娠和哺乳期妇女；3.患有急性生殖道炎症，如淋病、支原体或衣原体感染等；筛査流程1.宫颈细胞学(TCT)检査；2.阴道镜指示下宫颈活检；3.病理检査结果为湿疣或CINI-II;4.HPV高危型DNA检测阳性者入选实验方法实验组用药为本发明的复方疫苗阴道喷雾剂，对照组药物为a-2b干扰素栓剂，空白对照组不使用任何药物。实验组药物使用方法如说明书中所述；对照组患者使用a-21)干扰素栓剂，使用时间与次数与实验组一致；空白对照组阴道内不使用任何药物。停药3天后复査。用药期间注意事项性生活均应使用避孕套；电话随访，督促用药，监测有无副反应。药物效果评判标准1.对HPV高危型DNA检测阳性治疗有效RLU/C0〈1(或HPV高危型转为阴性);好转RLU/C0比值下降2/3;无效RLU/CO比值无变化或增高。2.病理学诊断有效CIN/湿疣转为炎症；无效无变化或病变进展。实验结果-_表2不同用药组别对HPV高危型DNA检测阳性患者治疗情况<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>经卡方检验，实验组的显效率(有效+好转)均高于干扰素对照组和空白对照组(P〈0.05)表3不同用药组别对CINI-II/湿疣患者治疗情况<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>经卡方检验，实验组的有效率均高于干扰素对照组和空白对照组(P〈0.1)以上结果说明本发明复方疫苗阴道喷雾剂对人体HPV感染和CINI-II/湿疣的治疗有显著疗效，且效果好于单独使用干扰素。权利要求1、一种防治人乳头瘤病毒感染的复方疫苗组合物，其特征在于，包括HPV-16的L1蛋白的病毒样颗粒、HPV-18的L1蛋白的病毒样颗粒和人干扰素，其比例为40～120mg∶20～60mg∶100-300万单位，所述人干扰素为天然的人干扰素和/或通过基因技术表达的重组人干扰素。2、根据权利要求1所述的复方疫苗组合物，其特征在于，所述的复方疫苗组合物还包括人白细胞介素-2，人白细胞介素-2与所述的HPV-16的Ll蛋白的病毒样颗粒的比例为10-20万单位:40120mg。3、根据权利要求1或2所述的复方疫苗组合物，其特征在于，所述的复方疫苗组合物还包括其它细胞因子，所述的其它细胞因子为人白细胞介素-12、胸腺素P4以及乳铁蛋白中的一种或者2种以上的组合，所述的复方疫苗组合物中人白细胞介素-12和/或胸腺素e4和/或乳铁蛋白与所述的HPV-16的Ll蛋白的病毒样颗粒的比例为10—50万单位1—10mg:5—100mg:40120mg。4、根据权利要求1所述的复方疫苗组合物，其特征在于，所述的复方疫苗组合物还包括天然多糖；天然多糖与所述的HPV-16的Ll蛋白的病毒样颗粒的比例为1~2mg:40120mg;所述的天然多糖是纤维素、透明质酸、淀粉、几丁质、壳聚糖或上述几种物质的衍生物的一种或者2种以上的组合。5、一种根据权利要求l一4任何一项所述的复方疫苗组合物制备的复方疫苗阴道喷雾剂，其特征在于，制备方法为将所述各组分溶于蒸馏水中即得。6、根据权利要求5所述的复方疫苗阴道喷雾剂，其特征在于，所述喷雾剂包括HPV-16的Ll蛋白的病毒样颗粒40120mg/ml，优选80mg/ml;HPV-18的Ll蛋白的病毒样颗粒2060mg/ml，优选40mg/ml;人干扰素100-300万单位/ml更优选进一步包括人白细胞介素-2:10-20万单位/ml。7、根据权利要求6所述的复方疫苗阴道喷雾剂，其特征在于，所述喷雾剂还包括以下浓度的其它细胞因子的一种或2种以上的组合人白细胞介素-12:10—50万单位/ml胸腺素P4:l—10mg/ml人乳铁蛋白5—100mg/ml8、根据权利要求6或7所述的复方疫苗阴道喷雾剂，其特征在于，所述的复方疫苗阴道喷雾剂中还包括天然多糖l2mg/ml;所述的天然多糖是纤维素、透明质酸、淀粉、几丁质、壳聚糖或上述几种物质的衍生物的一种或者一种以上的组合。9、根据权利要求5—8任何一项所述的复方疫苗阴道喷雾剂，其特征在于，所述复方阴道疫苗喷雾剂的pH为4.04.5，所述pH的调节优选磷酸缓冲液，所述复方阴道疫苗喷雾剂还进一步优选包括质量百分比浓度为0.9%的NaCl。10、权利要求l一4任何一项所述的复方疫苗组合物或权利要求5—9任何一项所述的复方疫苗阴道喷雾剂在预防或治疗女性生殖器的人乳头瘤病毒感染上的用途，所述的人乳头瘤病毒为与宫颈癌和尖锐湿疣相关的16，18，31，33，35，39,45，51，52，56，58，59，68，6，11，26，40，42，43，44，53,54，55，62或66型别，所述人乳头瘤病毒感染的部位在女性宫颈、阴道壁、前庭、阴唇、会阴，所述人乳头瘤病毒感染为慢性宫颈炎或子宫颈上皮内瘤形成I、II和III。全文摘要本发明涉及一种防治人乳头瘤病毒感染的复方疫苗组合物、复方疫苗阴道喷雾剂及其用途，属于具有针对性治疗适应症的疫苗制剂领域。本发明产品既可预防宫颈癌，又可治疗HPV感染；适用于任何年龄的已婚妇女；预防和治疗性传播的HPV感染引起的慢性宫颈炎，宫颈上皮发育不良，包括CINI、II、III度，抑制HPV繁殖，预防宫颈癌。文档编号A61K39/12GK101181636SQ200710188168公开日2008年5月21日申请日期2007年11月13日优先权日2006年11月14日发明者侯云德,郑丽舒申请人:北京金迪克生物技术研究所