专利名称：葡萄多糖及其提取方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及从葡萄或葡萄干中提取葡萄多糖方面的技术领域，是一种葡萄多糖及其提取 方法和应用。
背景技术：
葡萄是我国传统医学和维吾尔医学常用的药食兼用植物，多糖是葡萄中的主要活性成份 之一，其主要功效是能提高机体的免疫能力，从而可以治疗因免疫功能异常而引起的疾病， 如感冒、麻疹和肝炎等症。葡萄中的糖类以单糖和寡糖居多，多糖含量大于6%，相对较少。 在以往的多糖提取工艺中，多具有长时间高热的提取过程，如煎煮和浓縮，这样不仅会使最 终产品颜色加深，同时也使许多多糖断裂成寡糖和单糖。根据研究报道，有明显药理作用的 多糖，其分子量多在l万以上，而单糖和寡糖目前研究认为无明显药理作用，故研究葡萄多 糖的分离、提取和纯化技术是批量生产高质量葡萄多糖的必要条件。
发明内容
本发明提供一种葡萄多糖及其提取方法和应用，其克服了上述现有技术之不足，能有效 提取得到葡萄多糖，该提取方法简单，所得葡萄多糖能应用于制备用于治疗因免疫功能异常 而引起的疾病或用于调节因疾病引起机体免疫功能异常的状态方面的药物组合物。
本发明的技术方案之一是通过以下方式得到的 一种葡萄多糖，其按下述步骤得到向 葡萄浓縮液中加入4倍至9倍葡萄浓縮液重量的95%乙醇，常温下充分搅拌，静置4小时至12小 时后析出粗多糖，用300目至500目的滤布进行过滤，收集得到粗多糖。
本发明的技术方案之二是通过以下方式得到的 一种葡萄多糖提取方法，其按下述步骤 进行向葡萄浓縮液中加入4倍至9倍葡萄浓縮液重量的95%乙醇，常温下充分搅拌，静置4小 时至12小时后析出粗多糖，用300目至500目的滤布进行过滤，收集得到粗多糖。
下面是对上述技术方案之一和技术方案之二的进一步优化和/或选择
可将上述葡萄粗多糖用10倍至20倍葡萄粗多糖重量的水进行溶解得到粗多糖水溶液，用 500目的滤布进行过滤并收集滤液，将滤液通过截流分子量为l万的超滤膜过滤，滤液再经截 流分子量为100至1000的反渗透膜即纳滤膜浓縮，收集得到葡萄多糖浓縮液。
可将上述葡萄多糖浓縮液经冷冻干燥得到葡萄多糖干粉。
上述葡萄浓縮液可经过以下方法得到以鲜葡萄为原料，经挑拣后，用自来水冲洗干净，
压汁，除去葡萄皮和葡萄籽，用300目至500目滤布过滤，在5(TC下减压浓縮得到葡萄浓縮液， 该葡萄浓縮液的比重为l. 05至1. 3。
上述葡萄浓縮液可经过以下方法得到以葡萄干为原料，经挑拣后，用自来水冲洗干净， 室温晾干，粉碎，加入10倍葡萄干重量的蒸馏水，在8(TC下提取3小时，共提取3次，合并提 取液，用300目至500目滤布过滤，在5(TC下减压浓縮得到葡萄浓縮液，该葡萄浓縮液的比重 为l. 05至1. 3。
本发明的技术方案之三是通过以下方式得到的上述所得葡萄多糖在制备用于治疗因免 疫功能异常而引起的疾病或用于调节因疾病引起机体免疫功能异常的状态方面的药物组合物 的应用。
本发明能有效提取得到葡萄多糖，该提取方法简单，所得葡萄多糖能应用于制备用于治 疗因免疫功能异常而引起的疾病或用于调节因疾病引起机体免疫功能异常的状态方面的药物 组合物。所得葡萄多糖在体内、外试验中具有一致的较强的免疫保护作用，提示本发明所得 葡萄多糖作为免疫增强剂和免疫调节剂具有良好的应用前景。
具体实施例方式
本发明不受下述实施例的限制，可根据上述本发明的技术方案和实际情况来确定具体的 实施方式。
下面结合实施例对本发明作进一步论述 实施例l，新鲜葡萄中葡萄多糖的制备
取新鲜葡萄5000克，经挑拣后，用自来水冲洗干净，压汁，除去葡萄皮和葡萄籽，过滤，滤 液减压浓縮。在浓縮液中加入4倍或9倍量95%乙醇，常温下充分搅拌，静置沉淀4小时或12小 时，过滤，回收乙醇，收集粗多糖，滤布以水洗涤3次，洗涤液与粗多糖合并，搅拌溶解，得 粗多糖水溶液，过滤，收集滤液，将滤液通过超滤膜和反渗透膜后得葡萄多糖浓縮液，葡萄 多糖浓縮液可直接利用，也可进一步冷冻干燥得葡萄多糖干粉。
实施例2，葡萄干中葡萄多糖的制备
取葡萄干2000克，经挑拣后，用自来水冲洗干净，室温晾干，置容器中，加入10倍量蒸 馏水，8(TC提取3小时，共3次，合并提取液，5(TC减压浓縮。在浓縮液中加入4倍或9倍量 95%乙醇，常温下充分搅拌，静置沉淀4小时或12小时，过滤，回收乙醇，收集粗多糖，滤布 以水洗涤3次，洗涤液与粗多糖合并，搅拌溶解，得粗多糖水溶液，过滤，收集滤液，将滤 液通过超滤膜和反渗透膜后，得到葡萄多糖浓縮液，葡萄多糖浓縮液可直接利用，也可进一 步冷冻干燥得葡萄多糖干粉。
对于上述实施例1和实施例2，可进一步进入下述的优化和/或选择
(1) 提取新鲜葡萄经挑拣后，洗净，压汁，除去皮和籽，得葡萄原汁，此原汁采用 300目至500目滤布过滤，滤液减压浓縮至一定量(比重为1.05或1.3);葡萄干以自来水洗 净，晾干，粉碎，然后再加10倍量蒸馏水8(TC回流提取，提取液同样采用滤布过滤，滤液在 5(TC下减压浓縮至一定量(比重为1.05或1.3)。
(2) 醇沉为了使多糖充分沉淀下来，采用4倍或9倍量95%乙醇进行醇沉，使溶液中乙 醇浓度在80%以上，即往步骤1所产生的葡萄浓縮液中加入4倍或9倍量95%乙醇，使溶液中乙 醇浓度在80%以上，此操作要在不断搅拌下进行，醇沉4小时或12小时。
(3) 过滤采用300目至500目滤布过滤，得粗多糖，滤液回收乙醇，粗多糖以水溶解， 滤布以蒸馏水洗三次，水洗液合于粗多糖水溶液中。
(4) 超滤采用天津膜天膜工程技术有限公司的中空纤维膜组件，膜材料为聚砜，截 流分子量为l万，工作压力0.05 MPa或O. 15MPa。
(5) 反渗透采用国产纳滤膜组件，膜材料为醋酸纤维素(CA)、醋酸-三醋酸纤维素 (CA-CTA)等，截流分子量100或1000，脱去盐和一些小分子物质，工作压力O. 3MPa或
0.8MPa。
以上实例仅为了对本发明作进一步的说明，而本发明的范围不受所举实施例的局限。 本发明提供的是一种新型的天然药物抓葡萄多糖，可用于治疗因免疫功能异常而引起的
疾病或调节因疾病引起机体免疫功能异常的状态，为证明其效果，将上述实施例l或实施例
2所得葡萄多糖，进行了体内外药效学试验，其结果如下 1、体外药效学试验
为观察实施例1或实施列2所得葡萄多糖(以下简称为VTP)作为提高和调节机体免疫功 能治疗药物的效果，本实验采用卡介苗(BCG)整体致敏，脂多糖(LPS)离体攻击法建立了 大鼠原代肝细胞免疫损伤模型，研究VTP在体外对大鼠免疫性肝损伤的治疗作用。经尾静脉 注射BCG 8mg/ml致敏大鼠12天后，采用两步灌流法取肝细胞，接种肝细胞与24孔板16小时后， 加入10mg/1的LPS攻击，同时给予葡萄多糖进行干预，分别于3、 6、 12和24小时取细胞上清 液，测定其丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬门氨酸氨基转移酶(AST)的活性。
结果表明正常大鼠肝细胞上清AST和ALT活力随时间的延长变化不大；与正常对照组比 较，BCG+LPS损伤后模型组大鼠肝细胞上清AST和ALT活力随时间的延长逐步升高，在12小时 明显升高，肝损伤细胞模型建立成功；VTP 5、 20、 80mg/l各剂量组在6、 12和24小时均可不 同程度地使升高的AST和ALT下降，其作用与阳性对照药物联苯双酯(DDB)相似；VTP高剂量
组在3小时可显著降低AST和ALT，并与低、中剂量组间存在显著差异；而VTP各剂量组在6、 12和24小时均可显著降低AST和ALT，且高剂量组与低、中剂量组间存在显著差异，存在明显 的剂量依赖关系，即随着药物浓度的增加，降酶活性逐步增强。说明VTP具有较强的免疫保 护作用，可显著降低免疫性损伤对肝细胞功能的影响，提示VTP作为免疫调节剂应有良好的 前景。
2、体内药效学试验
为观察实施例1或实施例2所得葡萄多糖(以下简称为VTP)作为提高和调节机体免疫功 能治疗药物的效果，本实验采用BCG联合LPS诱导小鼠建立免疫性肝损伤模型，研究VTP在体 内对小鼠免疫性肝损伤的治疗作用。经尾静脉注射BCG lmg/ml致敏小鼠，次日开始灌胃给予 VTP干预治疗，连续12天，第12天时经尾静脉注射LPS7. 5 yg/只，16小时后称重，各组小鼠 摘眼球取血后，立即脱颈椎处死，取肝右叶相同部位的一小块肝组织，以4。C 0.9%的生理盐 水制成10%的肝匀浆，测定AST、 ALT和SOD的活性及NO和MDA的含量。另夕卜，取每组小鼠肝左 叶相同部位肝组织，用10%甲醛固定，石蜡包埋切片；常规HE染色，观察肝组织病理改变情 况。
结果表明与正常对照组比较，BCG+LPS模型组小鼠肝组织匀浆AST 、 ALT和SOD活力显 著降低，MDA和NO含量显著增加，病理检査可见肝组织有大量炎性细胞浸润，并出现大片坏 死，说明模型建立成功；VTP分为50、 150、 300mg/kg低、中、高3个剂量组，其中，高剂量 组可显著升高小鼠肝组织匀浆AST 、 ALT和SOD活力，降低MDA和NO含量，并能明显改善受损 肝组织的炎性浸润和坏死，说明VTP对免疫性肝损伤具有较强的治疗和保护作用。
综上所述，VTP在体内、外试验中具有一致的较强的免疫保护作用，提示VTP作为免疫增 强剂和免疫调节剂具有良好的应用前景。
权利要求
1、一种葡萄多糖，其特征在于该葡萄多糖按下述步骤得到向葡萄浓缩液中加入4倍至9倍葡萄浓缩液重量的95％乙醇，常温下充分搅拌，静置4小时至12小时后析出粗多糖，用300目至500目的滤布进行过滤，收集得到粗多糖。
全文摘要
本发明涉及从葡萄或葡萄干中提取葡萄多糖方面的技术领域，是一种葡萄多糖及其提取方法和应用，该葡萄多糖按下述步骤得到向葡萄浓缩液中加入4倍至9倍葡萄浓缩液重量的95％乙醇，常温下充分搅拌，静置4小时至12小时后析出粗多糖，用300目至500目的滤布进行过滤，收集得到粗多糖。本发明能有效提取得到葡萄多糖，该提取方法简单，所得葡萄多糖能应用于制备用于治疗因免疫功能异常而引起的疾病或用于调节因疾病引起机体免疫功能异常的状态方面的药物组合物。所得葡萄多糖在体内、外试验中具有一致的较强的免疫保护作用，提示本发明所得葡萄多糖作为免疫增强剂和免疫调节剂具有良好的应用前景。
文档编号A61K31/715GK101104648SQ20071020135
公开日2008年1月16日 申请日期2007年8月14日 优先权日2007年8月14日
发明者涛 刘, 周晓辉, 军 赵, 龙 马 申请人:新疆医科大学