专利名称：：洪连提取物及其在制备抗病毒药物和保肝药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种藏药洪连提取物及其这种提取物在制备抗病毒药物和保肝药物中的应用，属于民族医药范畴。
背景技术：
：随着全球"天然药物热"的兴起，藏药以其独特的疗效倍受人们的关注和青睐[1]。藏药之所以具有独特的疗效，是由其生长环境的特殊性决定的，藏药植物多生长在青藏高原气候干燥、寒冷、风力强劲的气候环境中，而且多生长在海拔3800米以上的高原上，加上高原空气稀薄，太阳辐射强烈等的因素，导致了藏药所特有的次生代谢物质，奠定了藏药药用成分的基础[2—3]。洪连是常用的藏药[4]，又叫藏黄连，兔耳草，全草入药，主要用于治疗全身发烧、肾炎、肺病、阴道流黄黑色液物、湿热泻痢、高血压病、动脉粥样硬化症、综合性毒物中毒及"心热"等疾病。据藏药典藉《晶珠本草》记载藏药洪连苦寒，能清热解毒，行血调经，平逆降压。用于五脏有热，血分热毒，急慢性肝炎，月经不调。《藏药志》记载其全草具有清热解毒，治血旺、急慢性肝炎、肺病、高热的功效[5]。据记载[6—7]，各地作为洪连入药的兔耳草属植物主要有短管兔耳草L.brevituba、大萼兔耳草L.clarkei、全缘兔耳草L.integra、圆禾惠兔耳草L.ramalana、矢豆禾惠兔耳草L.brachystachyaMaxim、矮兔耳草LagotishumilisTsoongetH.P.Yang、兔耳草LglaucaGaertn及Lstolonifera等。肝脏是人体的中心代谢器官，肝损伤是影响人类健康的最重要的常见病之一。各种有害因素所致的肝损伤主要有病毒性肝炎、酒精性肝炎和药物性肝炎等，临床表现为肝坏死、脂肪肝、胆汁郁积、肝硬化以及肝癌等[8]。目前对肝损伤的防治仍是一个全球性的严峻课题。我国是个肝炎大国，病毒性肝炎发病数位居法定管理传染病的第一位，仅慢性乙型肝炎病毒感染者就达1.2亿。慢性乙型肝炎病程迀延，如得不到及时的治疗，将会发展为肝硬化甚至肝癌，严重危害人类健康。尽管目前治疗肝炎的药物较多，然而能够达到令人满意疗效的药物较少。而藏药洪连以其特有的药用功效，在预防和治疗肝病方面有着独特的优势，使其成为具有广阔利用选择空间和较高潜在医用价值的宝贵资源。病毒性疾病治疗药物发展较迟缓，主要由于病毒有严格寄生性，与细胞关系密切，病毒感染细胞后，进入细胞内，在宿主细胞内利用细胞酶系统复制;有些病毒核酸整合于细胞染色体，难于清除。病毒严格寄生在细胞内，使得药物杀伤病毒的同时对机体细胞也有损害。现有的抗病毒化学药物即因为毒性太大或耐药性的产生，其临床难以取得令人满意的效果。本发明以单纯疱疹病毒为例，阐明藏药洪连提取物在制备抗病毒药物中的应用。单纯疱疹病毒引起的性传播性疾病，与宫颈癌关系密切。目前国内外研究的抗病毒药物已接近50种，但真正应用于临床的只有阿昔洛韦、拉米夫定等少数几类核苷类药物，这类药物作用靶点为病毒DNA聚合酶。它们以酶反应底物类似物的形式与正常底物竞争，直接降低或阻断病毒DNA聚合酶活性，其共同缺点是易产生耐药毒株，抗病毒谱窄，毒副作用大，价格高昂或药理特性不理想。因此，寻求更新更好的抗病毒药物已势在必行。本发明提供了一种藏药洪连提取物，该提取物可以在制备抗病毒药物和保肝药物中应用，与现有药物相比，其毒性低，安全可靠，药效作用强，而且藏药洪连原料丰富、价廉、萃取工艺简单、制备成本低，可以制成各种剂型。参考文献加措.藏药资源的科学发展战略探讨.西藏科技，2007，5:14-16[2]强巴赤烈.中国的藏医.北京中国藏学出版社，2000[3]蔡景峰.中国藏医学.北京科学出版社，1999中国医学科学院药用植物研究所.中药志(第4册).北京人民卫生出版社，1998中科院西北高原生物研究所编著.藏药志.西宁青海人民出版社，1991郑秀萍，石建功.短筒兔耳草化学成分的研究.中草药，2004，35(5):503504中国植物志编辑委员会.中国植物志.北京科学出版社，1979[8]陈勇，程明，韩凤梅，等.CCU肝损伤与免疫性肝损伤小鼠模型间差异性比较.研究实验生物学报，2005，35(5):417422刘燕.抗肝炎中药研究概括.新疆医科大学学报，2005，28(7):68668
发明内容将洪连全草在磨碎机上磨碎，过40目筛备用。称取300g粉末，用4倍体积的75%乙醇溶液加热回流提取5h，趁热用四层纱布过滤，再用布氏漏斗抽滤。之后再加入乙醇加热回流，反复处理四次，合并提取液，用旋转蒸发仪蒸干乙醇后得到总浸膏。将总浸膏用温水溶解，加入石油醚除去色素、油脂等杂质。萃取多次，直到石油醚层透亮且颜色不再变浅为止。水相再用正丁醇萃取多次，直至正丁醇颜色不再变浅为止。将正丁醇相在旋转蒸发仪上减压蒸干，所得固体物质即为总皂苷。以洪连总皂苷灌胃昆明种小鼠，CC14(四氯化碳)诱导肝损伤，解剖发现肝脏颜色呈现暗红色，且表面斑点不明显，斑点数量较少。镜检观察发现炎性细胞浸润明显减轻，肝窦结构清晰，未发现明显的肝细胞坏死。血清中ALT(谷丙转氨酶)，AST(谷草转氨酶)均降低，且随着剂量增加ALT，AST值越趋于正常值，有明显的量效关系。通过采用上述方法处理所得的洪连提取物，可以按中国药典2005版的标准制成各种制剂，包括栓剂，栓剂、片剂、丸剂、颗粒剂、膜剂、微囊剂、滴丸剂、气雾剂、酒剂、糖浆剂、口服液、注射液或注射粉针剂，这些药物组合物可以含有O.1%100%洪连提取液，本发明所提供得洪连提取物对于治疗肝炎、改善和恢复肝功能方面疗效显著。具体实施例方式实施例一洪连总皂苷提取物的制备将洪连全草在磨碎机上磨碎，过40目筛得粉末。称取300g粉末，用4倍体积的75%乙醇溶液加热回流提取5h，趁热用四层纱布过滤，再用布氏漏斗抽滤。之后再加入乙醇加热回流，反复处理四次，合并提取液，旋转蒸发仪蒸干乙醇后得到总浸膏。将总浸膏用温水溶解，加入石油醚除去色素、油脂等杂质。萃取多次，直到石油醚层透亮且颜色不再变浅为止。水相再用正丁醇萃取多次，直至正丁醇颜色不再变浅为止。将正丁醇相在旋转蒸发仪上减压蒸干，所得固体物质即为总皂苷。实施例二CC14肝损伤模型的建立昆明种小鼠，普通级，体重为1822g，兰州大学医实验动物中心提供。将小鼠禁食24h，随机分成正常对照组、CCU模型组、洪连提取物治疗组。对照组和CCl4模型组以生理盐水0.25ml/10g灌胃，治疗组以洪连提取物灌胃，每天1次，共7d，药物浓度分别为125mg/kg、250mg/kg、500mg/kg。末次给药后lhCCl4模型组和治疗组均腹腔注射0.2XCCl4，每只小鼠注射0.2ml，同时正常对照组腹腔注射生理盐水0.2ml/只，之后禁食不禁水。16h后以摘除眼球取血法取血，收集血液，4"C静置30min后于4000转/分离心10min。收集血清，于4。C保存待测。小鼠取血后立即以颈椎脱臼法处死。解剖，取肝组织，用生理盐水清洗后拍照观察。实施例三洪连提取物对肝损伤小鼠血清中ALT、AST活性的影响与对照组相比，CC14模型组小鼠血清ALT，AST值明显升高(表l)。治疗组与CCU模型组相比ALT，AST均降低，且随着剂量增加，ALT、AST值越趋于正常值，有明显的量效关系。表l洪连提取物对肝损伤小鼠血清中ALT、AST活性的影响±s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>实施例四洪连提取物对肝损伤小鼠肝脏的治疗作用cci4模型组小鼠在注射ccu后早期即有明显的肝损伤表现，镜下可见肝小叶中央静脉周围及小叶内外有弥漫的炎性细胞浸润同时伴有肝细胞变性及点、片状坏死，且随着时间的延长损伤不断加重。但治疗组小鼠肝损伤情况明显轻于同时间CCU模型组，前者炎性细胞浸润明显减轻，肝窦结构清晰，未发现明显的肝细胞坏死。实施例五洪连提取物的抗病毒作用表2显示，洪连总皂苷可通过抑制吸附、直接杀灭等方式对HSV-2病毒产生明显的抑制作用。表2洪连总皂苷对HSV-2病毒的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>实施例六洪连提取物急性毒性试验的初步研究昆明种小鼠同实施例2LD50的测定参考改良寇氏法，昆明种小鼠购买后适应环境3天。在预实验的基础上选择5个剂量组，分别为1250.Omg/kg、1062.5mg/kg、900.0mg/kg、765.0mg/kg、650.0mg/kg，每组10只，雌雄各半。灌胃给药0.25ml/10g，给药后让小鼠自由摄食及饮水每天上、下午各观察一次，连续观察7d，记录毒性反应情况和死亡动物分布，对死亡动物进行解剖，观察病变情况。按下式计算药物的LD5o:LD50=lg-l[lgDm-lgr(EP-0.5)]表3洪连提取物急性毒性试验结果齐<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>根据公式r=lg-l[(lgDm-lgDn)/(G-1)];LD50=lg-1[lgDm-lgr(EP-0.5)]得出LD50=916.22mg/kg(式中r一目邻两组剂量的比值；Dn^最大剂量；D『最小剂量；11=预分组数=5)。小鼠给药后，未立刻出现死亡。部分小鼠出现蜷縮及活动减少，但无竖毛、抽搐、翻倒等现象。5h后最大剂量组小鼠开始出现死亡。死亡动物的主要表现为动物毛色无光、不顺、弓背、精神不振，对外界声音及刺激表现不敏感，不思饮食。解剖胸腔和腹腔，观察未见异常病变，死亡动物无性别差异。洪连提取物灌胃给药，小鼠的急性毒性试验LD5o二916.22mg/kg。参考我国中药的毒性分级标准，洪连提取物属于中等毒性的药物。权利要求1.一种洪连提取物，其特征是该提取物可以在制备抗病毒药物和治疗肝病的药物中应用，尤其是在制备抗单纯疱疹病毒药物中应用。2.根据权利要求l所述的洪连提取物，其特征在于该提取物按下列方法制备将洪连全草在磨碎机上磨碎，过40目筛得粉末。称取300g粉末，用4倍体积的75%乙醇溶液加热回流提取5h，趁热用四层纱布过滤，再用布氏漏斗抽滤。之后再加入乙醇加热回流，反复处理四次，合并提取液，旋转蒸发仪蒸干乙醇后得到总浸膏。将总浸膏用温水溶解，加入石油醚除去色素、油脂等杂质。萃取多次，直到石油醚层透亮且颜色不再变浅为止。水相再用正丁醇萃取多次，直至正丁醇颜色不再变浅为止。将正丁醇相在旋转蒸发仪上减压蒸干，所得固体物质即为总皂苷。3.根据权利要求1至2所述的洪连提取物，其特征在于该提取物可以单独或与其它药物配伍或加入药学上可以接受的辅料，制备成软胶囊、或硬胶囊、或滴丸、微囊剂、或片剂、或分散片、或颗粒剂、或注射液、或注射粉针剂、或口服液、气雾剂、酒剂、糖浆剂、或栓剂、膜剂、经口服或皮肤或粘膜或直肠方式应用。洪连总皂苷在其中的含量可以为O.1%100%。全文摘要本发明为藏药洪连提取物及其在制备抗病毒药物和保肝药物中的应用。本发明所提供的藏药洪连提取物为有机溶剂乙醇加热回流提取，经石油醚、正丁醇去除杂质所得的总皂苷。该藏药洪连提取物具有明显的抗病毒作用，以及保护肝细胞，降低血清中的谷丙转氨和谷草转氨酶的活性，从而改善和恢复肝功能的作用。故而该提取物可以在制备抗病毒药物和保肝药物中应用。本发明提供的藏药洪连提取物可以在制备抗病毒药物和保肝药物中以单味或者复方方式制备成药物组合物，同时，其原料丰富、价廉、萃取工艺简单，成本低，并可很方便地做成各种剂型。具有重要的开发与应用前景。文档编号A61K36/185GK101167779SQ20071020206公开日2008年4月30日申请日期2007年10月16日优先权日2007年10月16日发明者傅永红,田允,张春江,李红玉,王晓琴,璐白申请人:李红玉;兰州大学