Hif羟化酶抑制剂的制作方法

专利名称：Hif羟化酶抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及调节20G(2-氧代戊二酸)依赖性加氧酶、尤其是脯氨 酰羟化酶的化合物。这些化合物可用作HIF(低氧诱导因子)a(HIF-a) 脯氨酰羟化酶的调节剂。
背景技术：
转录因子HIF(低氧诱导因子)系统是对低氧反应的关键调节系 统，在很多种生物体内的氧稳态中占有主要的地位。已鉴定出很多 种转录靶标，它们在血管生成、红细胞生成、能量代谢、炎症、血 管舒缩功能及凋亡/增殖反应中起到重要的作用。上述系统对正常发 育来说是必需的，且其在对局部缺血/低氧的病理生理反应中起着关 键的作用。HIF在癌症中也很重要，通常其在癌症中受到正调节，对 胂瘤生长和血管生成具有主要的作用。HIF DNA结合复合体由a亚 单位和卩亚单位异二聚体组成。氧调节是通过对a亚单位的羟基化 来进行的，a亚单位会被氧合细胞的蛋白酶体迅速破坏。这涉及von Hippel-Lindau肿瘤抑制蛋白(pVHL)对HIF-a亚单位的结合，其中 pVHL作为泛素连接酶的识别成分或识别成分的一部分，所述识别成 分通过与HIF-a亚单位中的特异性序列相互作用来促进泛素依赖性蛋 白酶解作用。在低氧状况下，此过程被抑制，从而稳定HIF-a和容许 通过HIFa,P的转录激活。

发明内容
在我们的英国专利申请第0118952.1号中，我们公开了包括以下 多肽
(a) 具有HIF羟化酶活性，含有SEQ ID NO:2、 4或6氨基酸序 列的多肽；
(b) SEQ ID NO:2、 4或6氨基酸序列的变体，具有至少60%的一 致性，且具有羟化酶活性；或
(c) (a)或(b)的片断，其具有HIF鞋化酶活性。 优选所述多肽具有脯氨酰幾4b酶活性，且其活性需要Fe(II)。 从序列来看，所述多肽与其晶体结构已知的非血红素加氧酶如
脯氨酸-3-羟化酶(Clifton等，Eur. J. Biochem, 2001, 268, 6625-6636)有 关。
上述专利还公开了编码所述多肽的多核苷酸以及包含所述多核 苷酸的表达载体和能与所述多肽特异性结合的抗体。我们还公开了 鉴定HIF羟化酶活性的调节剂的测试方法，以及调节剂如肽活性抑 制剂在治疗以下病症中的用途与健康(正常)水平相比由于HIF水平 发生改变而导致的病症或疾病，以及HIF水平或活性改变会对其有 利的病症。
2-OG依赖性酶一一胶原脯氨酰-4-羟化酶(CPH)的抑制剂为本领 域所公知，它们曾被建议用于治疗肺纤维化、皮肤纤维化(硬皮病)、 动脉粥样石更化和其它与胶原生物合成有关的病症。对羟苯丙酮酸加 氧酶(用亚铁作为辅因子的非血红素加氧酶)的抑制剂如三酮被用作除 草剂(Lee D.等(1998) Pestic. Sci. 54(4) 377-384)。我们已公开，这些CPH 抑制剂(及其它成分)中有些也能抑制PHD多肽的生物学(即HPH)活 性。抑制PHD多肽的生物学活性的CPH抑制剂或修饰的CPH抑制 剂可用于治疗与降低的或亚适的HIF水平或活性有关的病症，或治 疗提高HIF水平或活性会对其有利的病症，例如局部缺血、伤口愈 合、自体移植、异体移植和异种移植、系统性高血压、癌症、炎症 和代谢紊乱。
已公开多种有关能抑制、增强、提高或刺激PHD多肽对HIF-a 的羟化的调节剂的方法和用途。破坏、干扰或调节PHD多肽对HIF-la的羟化的目的可以是调节细力包功能，如血管生成、红细胞生成、 能量代谢、炎症、基质代谢、血管舒缩功能及凋亡/增殖反应和对局 部缺血/低氧的病理生理反应，这些细胞功能如上所述均由HIFa介 导。
调节20G加氧酶尤其是CPH的化合物可用作HIF脯氨酰羟化
酶的调节剂，或可用作'前导，化合物，后者可被修饰和/或优化变
成HIF脯氨酰羟化酶的调节剂尤其是选择性调节剂。
这些化合物中的一些通常具有下式
RiA*B*c*D*(R2)y (a)
其中基团R1能与精氨酸残基的侧链发生静电作用，在催化过程中所
述精氨酸残基与其它残基一起结合2-氧代戊二酸酯的5-曱酸酯基，
A*B为由两个原子组成的能被官能化的链，所述两个原子可独立为
碳、氧、氮、或硫，y为O或l, C*D为由两个原子组成的能被官能
化的链，所述两个原子可独立为^友、氧、氮、或硫，A、 B、 C和D
通过单键和/或双键和/或三键相互连接，这样，当y为0或1时，其
中至少一个原子能与金属基团螯合，而当y为1时，所述链与能与
金属基团螯合的W连接。通常A、 B、 C和D至少有一个不为碳。
典型的链包括C-N-C-C、 C-O-C-C和C-C-C=0。链原子能构成环的
一部分。
本发明发现了几类新的HIF脯氨酰雍化酶调节剂。它们具有下 式(A)-(F)结构
<formula>formula see original document page 5</formula>
(a)
其中R1和RS各自独立为H; OH; SH;任选含有1个或多个(如2个)N、 S、 O或P链原子、能被官能化的支链或直链C广Q烷基链，尤其是
曱基；任何氨基酸侧链如丙氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸和谷氨酸侧链; 任选含有1个或2个N、 S、 O或P原子的4-7元杂环，或任选含有 1个或2个N、 O或S原子、能与另一个环稠合的5元或6元芳环； 或被所述芳环取代的所述烷基链，如芳氧基烷基；V为012或0; 而112和W各自独立为H; OH;任选含有1个或多个(如2个)N、 S、 O或P链原子、能任选被l、 2、 3、 4或5个囟基取代官能化的支链 或直链C广C6烷基链；任选含有1个或2个N、 S、 0或P原子的4-7 元杂环，或任选含有1个或2个N、 O或S原子、能与另一个环稠 合的5元或6元芳环；或被所述芳环取代的所述烷基链；
(B)
其中W定义同上，二为单键而T为CH2或C-0,或=为双键而 T为CH; A2为H或-XC02R, X为单键或支链或直链(^《6烷基链， 所述烷基链任选含有1个或多个(如2个)N、 S、 O或P链原子且任 选被如闺基、OH、 NHI^或NHCOR"取代，其中112和114定义同上且 R"表示H;任选含有1个或多个(如2个)N、 S、 O或P链原子的支 链或直链C广C6烷基链；任选含有1个或2个N、 S、 O或P原子的 4-7元杂环，或任选含有1个或2个N、 O或S原子、能与另一个环 稠合的5元或6元芳环；或其盐；
0 0
其中各X可相同或不同，代表NH; NR〃，其中R〃为OH;任选含有 1个或多个(如2个)N、 S、 O或P链原子、能被官能化的支链或直链 C广Q烷基链；或O,即XR'通常为OH或具有支链或直链C「C6烷 基链的O-烷基，尤其是MeO;各Y可相同或不同，代表O或S;各
R"可相同或不同，定义同上；
Q-(CH丄-COOH (D) 其中m为0或1, Q表示(RiR Z,其中x为0、 1或2， W定义同上,
R6的定义同R1， Z为P二0(OH)2、 B(OH)2或S03H;或其盐，通常为 钠盐；或者
其中各W可相同或不同，定义同上；R"表示OH或R^NH,其中R1D 为HO、RtO或HOOC(X)x，其中W定义同上，x为0或l，X为R1111。， 其中各R1可相同或不同，定义同上；或R1Q为氨基酸残基 H2N(R^C)CO-,其中各W可相同或不同，定义同上；n为1或2， R"为H或支链或直链C广Q烷基；或其盐。通常X为CH2或CHOH。
本发明另一方面涉及2-氧代戊二酸酯的类似物，其可作为HIF 羟化酶的改进的(相对于2-氧代戊二酸酯)的共底物。这种化合物为3-氟2-氧代戊二酸酯。用这种化合物取代2-氧代戊二酸酯进行测试表 明，HIF轻基化水平要比在类似条件下使用2-氧代戊二酸酯时观察到 的水平要高。
这些类似物具有下式结构 <formula>formula see original document page 7</formula>其中Zi和Z'各自独立为氬、SH或吸电子基团如囟素，优选氟，或 烷氧基如曱氧基，R^定义同上；或其盐。优选Zi和zs中一个为氬, 另一个为氟(3-F-2-OG)。
因此，本发明提供式(A)-(F)化合物，其用于治疗与HIF水平或 活性升高或减低有关的病症、或HIF水平或活性的提高或减低会对 其有利的病症，本发明还提供式(A)-(F)化合物在制备用于治疗所述病 症的药物中的用途。
所述烷基和链通常可用醇、氟、硫醇、羧酸、膦酸或次膦酸、 磺酸或其它螯合基团进行官能化，在链的情况下，通常通过烷基进 行官能化。
在本文所述的各结构式中，支链或直链(VQ烷基链可以是曱 基、乙基、丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、新戊基、叔戊基 或伯己基、仲己基或叔己基。杂原子如O、 S、 N和P可取代一个或
多个碳原子。优选烷基为曱基，优选的杂环为吡咯烷(pyrolidine)和四 氬吡喃，优选的芳环为苯、萘和p比啶。
通常，R'和RS各自独立为H; OH;任选含有1个或多个N、 S、 O或P链原子、能被官能化的支链或直链C广Q烷基链；任何氨基酸 侧链；任选含有1个或2个N、 S、 O或P原子的4-7元杂环；或任 选含有1个或2个N、 O或S原子、能与另一个环稠合的5元或6 元芳环；或被所述芳环取代的所述烷基链。
通常，^为CH2。
通常，A2为-XC02R4。
通常，RH表示R^NH,其中11'°为R'CO或HOOC(X)x,其中R1 定义同上，x为O或l, X为R1111(3，其中各W可相同或不同，定义 同上；或R1G为氨基酸残基H2N(R^C)CO-，其中各R1可相同或不 同，定义同上。
通常，21和22各自独立为氢或吸电子基团。
通常，在式(F)化合物中，I^为H。另外，R"可为支链或直链C广C6 烷基。
式(A)化合物为异羟肟酸酯。优选的化合物包括其中W为芳氧基 烷基，尤其是芳氧基曱基(oxyloxymethyl)如苯氧基曱基或苯基烷氧基 曱基，尤其是千氧基曱基或被取代的节氧基曱基如对羟基千氧基曱 基和/或其中R"和/或W为HOCH2的那些化合物。
典型的化合物包括N-苯氧基-乙酰基-(L)-丙氨酸-异羟肟酰胺(Is41) 和相应的(D)异构体(Is43)以及相应的酪氨酸衍生物(Is44和Is45)及L-
和D-苯基甘氨酸衍生物(Is46和Is47),还有苯异羟肟酸和N-苯氧基 乙酰基-D-苯丙氨酸异羟肟酸(Is42)。
这些化合物通常可按照Walter等，Tetrahedron 1997, 53, 7275-7290 和Biorg. Chem 1999, 27, 35-40的方法制备。
式(B)化合物为环状异羟肟酸酯。优选的化合物为其中X为单键 或曱基和/或R2为H或苯基烷基尤其是千基和/或R4为H或曱基的那 些化合物。典型的化合物包括(l-羟基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基)乙酸 (Is52)、 (l-羟基-2，5-二氧代-吡咯烷-3-基)曱酸(ANU2)及其N-苯曱酰氧 基衍生物(ANU1),还有(l-千氧基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基)乙酸(Is50) 和相应的甲酯(Is64)及N-羟基琥珀酰亚胺(C1)。注意，Is52(R2=H, T=C=0, X=CH2 R^H)高度活泼，这反映了其与2-氧代戊二酸酯的结 构类似性。这些化合物可用Schlicht等(US4446038)的一般方法制备。
式(C)化合物为2-氧代戊二酸酯的类似物或羟基乙酸酯和巯基乙 酸的草酰衍生物。优选的化合物包括其中X为O和/或R1为H或曱 基的那些化合物。典型的化合物包括草酰羟乙酸二曱酯(IslO)及其游 离酸(Isl4)及草酰疏基乙酸二曱酯(Is11)。这些化合物可按照Franklin 等，J. Med. Chem 1992, 35, 2652-2658或Kwon等，丄Am. Chem. Soc. 1989， 111, 1854-1860的方法制备。
式(D)化合物为具有膦酸、》黄酸或硼酸基团的羧酸及其盐。通常 W和W为氬。优选的化合物包括其中x为0、 1或2(分别为C3、 4 和5)的磷酸以及3-磺基-丙酸二钠(Is63)及其游离酸，及3-二羟硼基-丙酸(Is62)。
式(E)化合物为N-乙酰化氨基酸或聚羧酸。典型的化合物为其中 W为H和/或R"为H或乙基的那些化合物。当R"表示R1GNH时， 所述化合物通常为二肽，这样1110)为天然氨基酸如甘氨酸的酰基。典 型优选的这种化合物包括Asp-Gly(C18)、环型Asp-Gly(C19)、 (3-Asp-Gly(C20)、 Glu-Gly(C21)和Z-Glu-Gly(C22)。其它典型的化合物包括 其中R"为乙酰基或苯曱酰基的那些化合物，如L-天冬氨酸(C6)和L-
谷氨酸(C7)的N-乙酰化衍生物，即R"为乙酰基，以及谷氨酸(C15 和Is90)的N-苯曱酰化衍生物，即RW为苯曱酰基。其它典型的化合 物包括其中R11为-NHOH的那些化合物，如2-(羟基氨基)-戊二酸二 乙酯(Is51为该化合物的外消旋型)，以及其中R"为OH的化合物， 例如2-羟基戊二酸(Is57)。当R11为HOOC(X)x时，X特别为CH2或 CHOH。所述化合物通常为柠檬酸(C12)、丙三羧酸(C13)和琥珀酸以 及乙烷三羧酸以的三曱酯(Is72)。
式(F)化合物为2-氧代戊二酸酯的类似物。优选的化合物包括3-氟-2-氧代戊二酸酯化合物(即Z1为H, Z2为F)如3-氟-2-氧代戊二酸 (Isl8)及相应的二曱酯(Isl9)。
属于酸的化合物可以盐如钠盐的形式存在。
治疗时，所述化合物可与其它任何活性物质一起使用，例如在 抗肿瘤治疗中，可使用另一抗肺瘤化合物或疗法，如放射疗法或化 学疗法。
通常，调节剂提供为分离和/或纯化形式，即基本上纯的形式提 供。这可以包括組合物形式，其中调节剂为至少约98%的活性成分， 更优选至少约95%，还更优选至少约98%的活性成分。不过，任何 这样的组合物可包括惰性载体材术斗或其它药学上和生理上可接受的 赋形剂，如活性药物的正确给药、释放和/或稳定化所需要的那些载 体或赋形剂。如下所述本发明组合物除包含公开的调节剂化合物 外，还包含一种或多种具体有治疗用途的其它分子，如抗肿瘤药。
一般来说，它们采取组合物的形式，其中化合物与药学上可接 受的载体或稀释剂混合。所述载体可以是液体，例如盐水、乙醇.、 甘油及它们的混合物，或者是固体，例如片剂形式，或半固体形式， 如配制成贮库制剂的凝胶剂，或在透皮给药媒介中如透皮贴剂。调 节剂化合物或包含前者的组合物可配制成包衣移植(stent)的包衣。
本发明进一 步提供一种治疗方法，所述方法包括给予患者如上 定义的化合物。这样的治疗的示例性目的在本文另处讨论。
这样的方法或用途的治疗/预防目的可以是通过调节，例如破坏
或干扰HIFa的羟基化(可发生于例如脯氨酸402,564或其它脯氨基残 基)来调节细胞中的HIFot水平。HIFoc的羟基化促进pVHL结合，如 上所述会导致HIFa的泛素依赖性蛋白酶解。
治疗/预防目的可能与以下病症的治疗有关HIF水平或活性降 低、亚适水平或增加而导致的病症，以及HIF水平或活性的改变会 对其有利的病症。如(i)局部缺血病症，例如器官局部缺血，包括冠 状动脉、脑血管和周围血管供血不足。可按两种方法实施治疗在 已确定组织损伤后实施，如心肌^f更塞(目的是限制组织损伤)；预防性 地防止或改善局部缺血，例如在治疗绞痛中对冠状侧支的促进作用。
(ii) 伤口愈合和器官再生。
(iii) 自体移植、异体移植和异种移植。
(iv) 系统血压。
(v) 癌症；HIFa在肿瘤细胞中通常被上调，对肿瘤生长和血管生成具
有重要作用。
(vi) 炎症疾病。
(vii) 肺动脉血压，神经变性疾病。
(viii) ^i射疾病，》o净唐尿病。
可通过不同方式在人体、器官或一组细胞中对HIF脯氨酰基羟化 酶活性进行调节，以获得以下治疗效果
(a)非细胞自主型HIF系统是细胞用来影响向其它细胞发出信 号的物质的产生。然后所述信号在以下两处产生作用(i)远处作用(例 如)促进红细胞HIF生成素作用于骨髓)或(ii)局部作用(血管生成生 长因子提高血管在局部形成)。因此，通过改变羟化酶活性调控非细 胞自主作用可用于治疗贫血和局部缺血，例如眼睛、大脑、心脏和 四肢的局部缺血。许多参与生理稳态各方面的其它信号可通过或已 知通过HIF活化来调节。因此，改变HIF脯氨酰羟化酶活性可用来 激发或启动对治疗效果有帮助的反应，或用来防止或改善有害的反应。例如，这种方法可用来改变食欲，或全身或肺床的血压。
(b)细胞自主型HIF系统也被细胞用来调节细胞代谢，以及有 关分化、增殖和凋亡的决定。因此调控HIF系统可用来改变细胞的 活力和行为。细胞活力的提高可通过提高HIF活化来实现，例如在 局部缺血组织中。这种方法也可用来提高胰p细胞活力，以改善糖尿 病，或提高帕金森氏病、运动神经元疾病或各种形式痴呆的一组或 几组神经元的活力或功能。在一个不同的方法中可调控HIF信号来 防止一组细胞增殖或促进细胞的死亡或分化。例如在恶性肺瘤中HIF 系统的瞬时活化可用来促进大量肿瘤细胞死亡。
药用组合物
因此，本发明进一步的多方面提供药用组合物、药剂、药物或 者用于这类目的的其它组合物，所述组合物包含一种或多种式(A)至(F) 化合物或其衍生物；这类组合物在医疗方法中的应用，这种方法包 括将这种组合物给予患者，以便例如治疗(可包括预防性治疗)上述医 学病症；这种作用物化合物或物质在制备组合物、药剂或药物中的 应用，所述组合物、药剂或药物用于任何上述目的，例如治疗本文 所述病症；制备药用组合物的方法，该方法包括将这种作用物、化 合物或物质与药用赋形剂、溶媒或载体以及任选其它成分进行混合。
所述作用物可用作唯一活性剂或与另外一种或任何一种其它活 性物质(用抗胂瘤疗法举例来说，即为另 一种抗肿瘤化合物或疗法， 例如放疗或化疗)联合使用。
用于本发明医学治疗方法的作用物的使用量优选"预防有效量" 或"治疗有效量，，(不过根据情况，预防可以考虑为治疗)，所述用量 足以对不同个体产生有益作用。实际使用量、用药频率和疗程取决 于所治疗病症的性质和严重程度。处方治疗，例如决定剂量等，属 于普通执业医师和其它医疗医生的普通技能。
一种作用物或组合物可以单独使用或与其它治疗联合使用，根据所治疗的病症(例如上述病症)同时或序贯应用。
本发明药用组合物和按照本发明使用的药用组合物除了活性成 分之外，还可包含药用赋形剂、载体、緩冲剂、稳定剂或本领域技 术人员周知的其它物质。这种物质应当是无毒的，而且不应当干扰 所述活性成分的疗效。载体或其它物质的确切性质取决于给药途径， 给药途径可以为口服或注射，例如皮下或静脉注射。组合物通常是 无菌的。
口服应用的药用组合物可以为片剂、胶嚢剂、散剂或液体制剂。 片剂可以包含固体载体(例如明胶)或佐剂。液体药用组合物一4殳含有 液体载体，例如7jC、石油、动物或植物油、矿物油或合成油。可以 包含生理盐水、葡萄糖或其它糖;容液或二元醇(例如乙二醇、丙二醇 或聚乙二醇)。
对于静脉、皮内或皮下注射、或者病变部位注射而言，活性成 分为胃肠外可接受的水溶液，水溶液无致热原而且具有合适的pH、 等渗性和稳定性。本领域相关技术人员能够使用例如等渗溶媒(例如
氯化钠注射液、Ringer氏注射液、乳酸盐林^各氏注射液)制备合适的 溶液。根据需要，可以包含防腐剂、稳定剂、緩沖剂、抗氧化剂和/ 或其它添力口剂。
脂质体、尤其是阳离子脂质体可以以载体制剂使用。上述技术 和方案的实4列参见Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. (ed), 1980。
所述物质或组合物可以以局限化方式给药到特定部位，或者以 某种方式给药，而这种方式针对特定的细胞或组织，例如使用动脉 内stent型给药。
靶向疗法可以用来将活性物质更特异地给予某些类型的细胞， 其方法是使用靶向系统，例如抗体或细胞特异性配体。出于不同的 原因，可能需要靶向给药，例如如果所述作用物具有不可接受的毒 性时，或者如果需要使用非常高的剂量，或者如果作用物不能进入
靶细胞。
下列实施例进一步说明本发明。 实施例1
使用捕获试验体外筛选改善HIF的潜在抑制剂。表达HIF-lot残 基549-582的Gal/HIF-la/VP16融合蛋白用IVTT(参见英国申请号 0118952.1)制得，其用作这种试一险中的底物。未标记的底物用珠子纯 化，洗涤后等分，等份在存在RCC4细胞提取物下与100|LiMFeCl2 和2 mM潜在抑制剂进行温育。如所示，抑制剂溶于DMSO或Tris。 还设置了没有抑制剂但是加入等量DMSO或Tris的对照。洗涤后， 测试珠子与35-S标记的pVHL IVTT相互作用的能力。细胞提取物 中存在的HIF羟化酶对融合蛋白的羟化产生了捕获标记pVHL的能 力，然后可以测量结合融合蛋白的标记蛋白量，确定相对HIF羟化 酶活性。

图1-5图示相对于没有抑制剂(DMSO/Tris对照)测得的HIF 羟化酶活性时，存在特定抑制剂的HIF羟化酶活性。
CPCH0765123D 说明书的核苷酸和氨基酸序列序列表
<110> ISIS INNOVATION LIMITED <120> HIF羟化酶抑制剂 <藩N. 85209A PEJ
<160〉 6
<170> Patentln version 3. 1
<210> 1
<211> 2110
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens) <220>
<221〉 CDS
<222〉 (297). . (1517)
<223>
<400> 1
gctttcccct
agccaccctg
38gC33CCCC
accaggcccg ggcaccatgg
gcctgcctgt aagggtccct cagggcacga gtggccccca gcccgggcgg
Ctct3gtttC
tcccaagccc gaagagctct gctgcatcaa tgccctccat
tctcacatcc ttagggaccg tgctgtctgc gtggaggcgg gcccggggga
gac age Asp Ser
cca ggg Pro Gly
ccg tgc Pro Cys 5
tct teg
atg Met
tgt
Cys
50
gcc
Ala
ggg Gly
gcg Ala
gga Gly 35
CC3
Pro
Thr
cag Gin
ctg Leu
Ser 20 gtg Val
Ser
gag Gu
gga gtg Gly Val
gcc Ala
3CC
Thr
gat Asp
ggt Gly 85
gtC ￡ICC
Val Thr 100
cag Gin
Ser
Ser
cct Pro
tct
Ser
70
ggt
Gly
ccg Pro
gag Glu
tac Tyr
3gt
Ser 55
3CC
Thr
gag Glu
C3g CCC
Gin Pro
ccc ttg Pro Leu 25
ctg ccc
，ggg
Lys Gly
Ct3
Leu 10 gag Glu
agt Ser
cct Pro
cag Gin
gag Glu
Leu 40 gag Glu
act Thr
ctg Leu
tgc Cys
Pro
gcc Ala
gcc Ala
egg Arg
cag Gin 105
teg Ser
gca Ala
age Ser
ggg Gly 60 cct ctt Pro Leu 75
ccg ctg cag Pro Leu Gin 90
cga ttg gca Arg Leu Ala
cttttttttt tcctttctct cagaggactt ggggaccagc cctgcctcac cctgccccac aggaggaggc ggaggagggt tgaagacact getgee atg Met
tgt ccc ctg Cys Pro Leu
get Ala
cct Pro
etc
Leu
45
agt
Ser
egg Arg.
agt Ser
gcc Ala
etc cct Leu Pro
15 ggc egg
Gly 30 ccc Pro
ggg Gly
Arg
tec Ser
3CC
Thr
cag Gin
gcc Ala
tac T"
ccc Pro
1
tta Leu
agg Arg
C3C
His
aga Arg
ggt
Gly Phe
80 ggc get Gly Ala 95
cag ggc gca Gin Gly Ala
gac Asp
gaa Glu
65 ttt ggc
Gly
gca Ala
egg Arg
60 120 180 240 299
347
395
443
491
539
587
635
110
cct gag Pro Glu 115
tC3 CCC
Ser Pro 130
egg gag Arg Glu
3gt get Ser Ala
gcc ctg Ala Leu
aag gac Lys Asp 195
gtg g￡lg
Val Glu 210
age cag Ser Gin
tgg gtg Trp Val
gcc cat Ala His
tat gtc Tyr Val 275 aac ggg Asn Gly 290
cgc tgc Arg Cys
gtg C3t Val His
gCC 33C
Ala Asn
egg egg Arg Arg 355 ate act
gCC CCC 333
Ala Pro Lys
age aaa egg Ser Lys Arg
ggt Gy
ggg Gly
gac Asp 180 age Ser
ggc atg Gly Met 150 ctg atg Leu Met 165
tat ate Tyr lie
ttc ctg Phe Leu
gcc etc aaa Ala Leu Lys
agg Arg
gaa Glu
gtg Val 260
3tC
lie
gcg ate Ala lie 230 ggc cat Gly His 245
gac gcc Asp Ala
媒ggg Asn Gly
etc ggg tac Leu Gly Tyr
lie
ggc Gly
ate lie 340
Asn
￡ICC tgt
Thr Cys 310 ggc ctg Gly Leu 325
g3g cca Glu Pro
CCC C3C
Pro His
gtc tgg tat
Cgg 333
Arg Lys 120 ccc tgg Pro Trp 135
age tgc Ser Cys
gag gag Glu Glu
gtg ccc Val Pro
ggg gca Gly Ala 200 egg ggt Arg Gly 215
ccg ccg Pro Pro
Glu Pro
gtc ate Val lie
CgC 3CC
Arg Thr 280 gta agg Val Arg 295
ate tat lie Tyr
ctg cag Leu Gin
etc ttt Leu Phe
gag gtg Glu Va
360 ttt gat
tgg Trp
gcc Ala
3gC
Ser
gcg Ala
gcc gag gat ggt Ala Glu Asp Gly 125
Leu 170 tgc atg
agg caa gag Arg Gin Glu 140
tgc age agt Cys Ser 155 ctg ccc Pro
Ser
tct Ser
33C
Asn
ggc Gly
gcg Ala
ggg Gly
cag Gin
agt Ser
ccc Pro
gat Asp
gag Glu
Cys 185 gca Ala
ggg Gly
cgc Arg
ggc Gly
cgc Arg 265
Lys
cac His
tac Tyr
ate lie
Met
ctg Leu
cgc Arg
age Ser
egg Arg
ggc Gly
ctg Leu
tac Tyr
ggt Gly
tac 丁yr Gly
190 cgc gtg
gag Glu 175
ggC 3tC
ggt
Gly Glu 160 cgc
gcc cct Ala Pro
gca gag Ala Glu
145 gag gcc
Arg 205 cga gac
Arg 220 ate cgt
lie 235 tgt cga
Cys 250
C3C
His
gcc Ala
gtt Val
ctg Leu
Arg
tgc Cys
atg Met
gac Asp
Arg
age Ser
gca Ala
Asp
ggg Gly
att lie
ggg Gly
Val
ggg Gly
gac Asp
lie
ctg Leu
cag Gin
cag Gin
Arg
tgc
Cys
gcc Ala
eta Leu
Ala
ctg Leu
gtc Val
gag Glu
gtg Val
225 att gcc lie Ala
ggt Gly Ala
255 egg ctg Arg Leu
240 gcc etc
gtg
Val Ala
285 aat ccc
270 gcg tgt
Asn 300 aat cag
Asn 315 ttc cct
Phe 330 g3C egg Asp Arg 345
Lys Pro
Pro
ttg Leu
gcc Ala
Gin
gag Glu
etc Leu
tat Tyr
Pro
Asn
ggc Gly
Cys
C3C
His
tgg Trp
egg Arg
tac Tyr
ggc Gly
gac Asp Val 320 gtg
3tg
Met
age Ser
ggc Gly
ggg Gly 305 gtt ￡iag
Leu
ggc Gly
cca Pro
gat Asp
att lie Phe 350
gCC 3CC
Aa Thr
ccc Pro 335 ttc tgg
Trp
agg Arg
Val
tct Ser
t3C
Tyr
Lys
gta Val
gac Asp
gcc Ala
365
gcc aag gag egg gca gca gcc aaa gac
683
731
779
827
875
923
971
1019
1067
1115
1163
1211
1259
1307
1355
1403
1451
lie Thr Val Trp Tyr Phe Asp Ala Lys Glu Arg Ala Ala Ala Lys Asp 370 375 380 385
aag tat cag eta gca tea gga cag aaa ggt gtc caa gta cct gta tea Lys Tyr Gin Leu Ala Ser Gly Gin Lys Gly Val Gin Val Pro Val Ser
390 395 柳
cag ccg cct acg ccc acc tagtggccag tcccagagcc gcatggcaga Gin Pro Pro Thr Pro Thr 405
cagcttaaat gacttcagga gagccctggg cctgtgctgg ctgctccttc cctgccaccg ctgctgcttc tgactttgee tctgtcctgc ctggtgtgga gggctctgtc tgttgctgag gaccaaggag gagaagagac ctttgctgcc ccatcatggg ggctggggtt gtcacctgga cagggggcag ccgtggaggc caccgttacc aactgaagct gggggcctgg gtccUccct gtctggtcat gaccccatta ggtatggaga gctgggagga ggcattgtca cttcccacca ggatgcagga cttggggttg aggtgagtca tggcctcttg ctggcaatgg ggtgggagga gtacccccaa gtcctctcac tcctccagcc tggaatgtga agtgactccc caaccccttt ggccatggca ggcacctttt ggactgggct gccactgctt gggcagagta aaaggtgcca ggaggagcat gggtgtggaa gtcctgtcag ccaagaaata aaagtttacc teagagctge
1499
1547
1607 1667 1727 1787 1847 1907 1967 2027 2087 2110
<210> 2
<211> 407
<212〉 PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 2
Met 1
Leu
Arg
His
Arg
65
Gly
Ala
Arg
Pro
Glu 145 Ala
Leu
Asp
Pro
Met
Cys
50
Ala
Gly
Ala
Pro
Ser 130 Arg
Ser
Ala
Ser
Gly
Gly
35
Pro
Thr
Gin
Leu
Glu 115 Pro
Glu
Ala
Leu
Pro
Ser
20
Val
Gly
Ala
Asp
Val 100 Ala
Ser
Gly
Gly
Asp 180
Cys
Ser
Glu
Val
Thr
Gly
85
Thr
Pro
Lys
Gly
Leu
165
Tyr
Gin Pro Gin Pro Leu Ser Gin Ala Leu Pro Gin
10 15 Ser Glu Pro Leu Glu Pro Glu Pro Gly Arg Ala
30
Cys Pro Leu Leu Pro Ser Tyr 45
Ser Ala Gly Ser Gly Thr Pro 60
Ser Pro Leu 75
Pro Leu Gin
25
Ser Tyr Leu Pro 40
Pro Ser Glu 55
Ser Thr Thr 70
Gly Glu Leu
Ala Ala Arg
Lys Gly Cys
105
Lys Arg Lys Trp 120
Arg Pro Trp 135
Met Ser Cys 150
Met Glu Glu
90 Gin Arg
Ala Ser Ala
Ala Arg Cys
Leu Ala Glu Asp
Arg Ser Ala
Gly Asp Glu
Gly Phe
80 Gly Ala
95
Gin Gly
110 Gly Gly
lie Val Pro
125
Gin Glu Asn
140 Ser Ser Gly 155
Leu Pro Ser Ala 170
Cys Met Arg Tyr Tyr
Gin Ser Pro
Asp Glu
Ala Ala Ala
Gly Glu
160 Glu Arg 175
Gly lie Cys
185
190
Val Lys Asp Ser Phe Leu Gly Ala Ala Leu Gly Gly Arg Val Leu Ala
195 200 205
Glu Val Glu Ala Leu Lys Arg Gly Gly Arg Leu Arg Asp Gly Gin Leu
210 215 220
Val Ser Gin Arg Ala lie Pro Pro Arg Ser lie Arg Gly Asp Gin lie 225 230 235 240
Ala Trp Val Glu Gly His Glu Pro Gly Cys Arg Ser lie Gly Ala Leu
245 250 255
Met Ala His Val Asp Ala Val lie Arg His Cys Ala Gly Arg Leu Gly
260 265 270
Ser Tyr Val lie Asn Gly Arg Thr Lys Ala Met Val Ala Cys Tyr Pro
275 280 285
Gly Asn Gly Leu Gly Tyr Val Arg His Val Asp Asn Pro His Gly Asp
290 295 300
Gly Arg Cys lie Thr Cys lie Tyr Tyr Leu Asn Gin Asn Trp Asp Val 305 310 315 320
Lys Val His Gly Gly Leu Leu Gin lie Phe Pro Glu Gly Arg Pro Val
325 330 335
Val Ala Asn lie Glu Pro Leu Phe Asp Arg Leu Leu lie Phe Trp Ser
340 345 350
Asp Arg Arg Asn Pro His Glu Val Lys Pro Ala Tyr Ala Thr Arg Tyr
355 360 365
Ala lie Thr Val Trp Tyr Phe Asp Ala Lys Glu Arg Ala Ala Ala Lys
370 375 380
Asp Lys Tyr Gin Leu Ala Ser Gly Gin Lys Gly Val Gin Val Pro Val 385 390 395 400
Ser Gin Pro Pro Thr Pro Thr 405
<210> 3 <211> 5163 <212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens) <220〉
<220>
<221> CDS
<222> (3157).. (4434) <223>
<400〉 3
ttaggggcagaaaaacatttgtaataattaatggctttgagagacacaaggctttgtttg60
ccccsgagtattagttaacccacctagtgctcctaatcatacaatattaagg"tgggag120
ggacatteattgcctcactctctatttgtttcaccttctgtaaaattggtagaataatag180
tacccacttcatagcattgtatgatgattaaattggttaatatttttaaaatgcttagaa240
cacagattgggcacataacagcwgcaccacatgtgtttataagataaattcctttgtgt300
tgccttccgttaaagtttaaataagtaaataaataaataa atacttgeatgacattttga360
agtctctctataacatctgagtaagtggcggetgegacaatgctactggagttccagaat420
cgtgttggtgacaagattgttcaccagcatatggtgtggtgaaaactcactaatttggaa480
ttagttcagattattaagcctga由ggtgaaaatcctga^tcaaggatctttggaact540
atttgaaatcagtattttatattttcctgttgtattcattaaagtgttgcaagtgttcta600
tttgatgg"Uagtatatttaggatatacatgttcaatttgtgattttgtatacttaat660
tggaacaagaaagctaataaaggttttgatatggacatctattcttttaagtaaacttca720
atgaaaatatatgagtagagcatatagagatgtaaataatttgtggacacaccacagact780
gaaatagcaaatttaaaagaaattgttggaagaatcaagtgtttgtggaatgagtcctcc840
tagtaaagttcctgctcttgtgaataattaagcctcatgtataattactatagcaaaagg900
aagcct^gaagtattagactctacttgtatttaaattacattttacataatttatgtgt960
atgaaaaatgttttaaatgcttattttcgtaagccatgagatagctcctttatattttaa1020
gaatttctgaattaatttgcUggattttattagtgcaaatggcagagctagcaattcct潔O
UUctgtgttcccattccatcctattcatccctcttttaggaaactctgaactctggat1140
tgtccttgtttacatacctgcctcctgcattggactatgtgtctctgagtgtagtatgac1200
taattcatttgtttgt固ggactctcaatgcatttgttgaacagcctaattagtaatgt1260
ctgcaacaatgacattttactgtatttaataaagctctggg纖gUgg3tacacataag1320
acaggtctaggtctaaattctttacagaaacttggatttttagttcggtttgaaatttga1380
agatgtgagtatatttatctcagtttcccaaaggacaagctaattggaattatcatcctc1440
tttcacttgattggatccccagaatgccatttacgcatgcagcaggattttataacagtt1500
ttaaattctgtatstttgatgaagaggttttatatttttggattcaagcctctttttaaa1560
cttctac^tatggtttacaataattccttatatcctgcttttgaaatacaUttacaac1620
tttttaagtttggaaggctatatttcaaggactgaagttacagtatactcaagtgataca1680
caagcctagcaccccactttccacatagtgttcgataaagtcgaaatcac1740
agaccttttaattcttaagacaaatagcagcagaaagaaacatctttggcttatttctggl綱
Uaggtttttatgctctgtattgtattcatccgcgcagcacagattctat1860
tgtgagagtcgttaatgtagtactgctcatttaccatcaaaattcacttt1920
tcaggaataatcccatcagtttaaattggatattggaatgagcattgattacatttaact1980
tggtagcccaaaatttcttc"ggggttttgaactcggcgggatttcaaaggttttaaaa2040
atgagtttttgattttttttaatttcattacctttaaactaggtcgaasc2100
ggggCgC33gagattggatttaatacttattttgttcttaaccatttcag2160
ggcttcUgaaatagaggctgtatggtgtaatggaaaaaacagccttggaatctgggagc2220
ctgattcctggattcagtcccagttttgcgtgaccttgggcaagttactttacttctctg2280
aatttccgtttcctcctctgcaaaatgaggatcgcaatagccaccttgcaaccttgactg2340
gagcgagcctCgC3C3CCCCgcgccggcctggaggaag3gcagccatgattacgccgcct2400
tcgctccgctacccgcttgcggctggcgccctcctccagcaggtgtaggcgctgccgcgc2460
tgccccacgcctttccgccgctcgcgggcctgcgcctcggcgtccccgaggaggcegctg2520
cgggctgaggtagcgcaccggcctctcggcgtcccagtccggtcccgggcggaggg謹g2580
cgggcgacccacctccgaggcagaagccgaggcccggccccgccgagtgcggaggagege2640
aggcagcccccgcccctcggccctccccccggccctcccggccctccctccgccccctcc2700
gccctcgcgcgccgcccgcccgggtcgccgcggggccgtggtgtacgtgcagagegegea2760
gagcgagtggcgcccgUtgccctgcgctcctccacagcctgggccgggccgcccgggac2820
gctgaggcggcggcggcggccgagggggccggtcttgcgctccccaggcccgcgcgcctg2S80
3gcccaggttgccattcgccgcacaggccctattctctcagccctcggcggegstgagge2940
gctgaggcggctgccggcgctgcgccggagcttaggactcggaagcggccgggccgaggg3000
cgtggggtgccggcctccctgaggcgaggg"gcgggtgc"ggcgcagtaacggcccct3060
atctctctccccgctccccagcctcgggcgaggccgtccggccgctacccctcctgctcg3120
gccgccgcagtcgccgtcgccgccgccgccgccgcc atggcc aat gac age ggc3174
Met Ala Asn Asp Ser Gly 1 5
ggg ccc ggc ggg ccg sgc ccg age gag cga gac egg cag tac tgc gag 3222 Gly Pro Gly Gly Pro Ser Pro Ser Glu Arg Asp Arg Gin Tyr Cys Gluctg tgc Leu Cys
tec ttc Ser Phe 40
33g CtC
Lys l>eu 55
Pro His
agg gcc Arg Ala
gcc tec Ala Ser
Asp Pro 120 ggc tcg Gly Ser 135
gcc cgc Ala Arg
Asn 丁hr
ggg cag Gly Gin
gtg ccg Val Pro 200 ggc aag Gly Lys 215
Asp Thr
tcg tec Ser Ser
gag ccc Glu Pro
ggg
Gly
25
tac
Tyr
gtg Val
cag Gin
10
a￡ig
Lys
tgc Cys
tgc Cys
cat His
"g gag Met Glu
tgc aag Cys Lys
15
ctg ctg Asn Leu 30
C3C
His
20
cag Gin
ggc Gly 60 tec ggc
ggg Gly
gcc Ala 90 ggg gsc Gly 105
gcg Ala
Ser 75 egg Arg
Gly
gag Glu
Asp
gcg Ala
gcg gtg Ala Val
tea tcg Ser Ser
ccc Pro
ggg Gly 170
acg aag Thr Lys 185
tgc atg Cys Met
gag acc Glu 丁hr
ggg sag Gly Lys
aag gac Lys Asp 250 ggc tgc Gly Cys 265
gcg gcc Ala Ala
gcc gcg Ala Ala
get gcc Ala Ala 140 ctg ttc Leu Phe 155
gat gcg Asp Ala
ccc ctg Pro Leu
Asn Lys
gga cag
Gly Gin 220
ttc acg
Phe Thr 235
ate cga
lie Arg
gaa 3CC Glu Thr
gag Glu 45 3gc Ser
ccc Pro
ccc Pro
Lys
Leu Gin
cgc tgc age cgc Arg Cys Ser Arg 35
gag Glu
gcg Ala
agg Arg
ggc Gly
ccg Pro
cgt cag gac Arg Gin Asp 50
gcc etc Ala Leu
65 ccg get Ala
ggc Gly
Pro 80 aag gca
gca Ala
tgg Trp
cac His
gtg Val
tgc Cys
Lys
gga Gly
ccg Pro
cgc Arg
aag Lys
gtg Val
age Ser
cac His
ggc Gly
70 ccg ccc Pro Pro
Lys 95
gg3雄
Gly 110 tcg ccg Ser Pro 125
gaa gcc Glu Ala
cag gag Gin Glu
ctg age Leu Ser
ccg gcg Pro Ala 190 cac ggc His Gly 205
cag ate Gin lie
gac ggg Asp Gly
ggc g" Gly Asp
"t ggg lie Gly 270
Lys
tgt
Cys
gag Glu
aag Lys
ccc Pro 175 ctg Leu
ate lie
ggc Gly
Ala
gta Val
cgt Arg
ccc Pro
gcg Ala
aag Lys
gcg Ala
]
ggc Gly
gcg Ala
gcc Ala Lys 115
cgc Arg Arg
100 aag
85 egg gac
gcc Ala 130 aag Lys
145 gcg aac Ala Asn 160 ggc Gly
aag Lys
tgt Cys
ggc Gly
ctg Leu
ctg Leu
ggc Gly
gcg Ala
gcc Ala
gag Glu
tac Tyr
ctg Leu
ccc Pro
ggc Gly
gag Glu
Asp
ccg Pro
ggc Gly
ccg Pro
Asn
gcc Ala
cag Gin
ccg Pro
150
ccc Pro

egg Arg
CC3
Pro 165 ccc Pro
180 etc gag Leu Glu
g3C
Asp Glu 225 cag ctg gtc Gin Leu Val
240 aag ate Lys lie 255
ctg etc Leu Leu
gtg Val Val 210 gag gtg
195 gtg gac
acc Thr
atg Met
Val
age Ser
tgg Trp
age Ser
Asp
cgc Arg
gac Asp
gcc Ala
tac Tyr
ttc Phe
ctg Leu
age Ser
Asn
ate lie
etc Leu
cac His
230
cag aag agt gac
Gin Lys Ser Asp 245
ate gag ggc aag
lie Glu Gly Lys 260
age atg gsc gac
Ser Met Asp Asp
3270
3318
3366
3414
3462
3510
3558
3606
3654
3702
3750
3798
3846
3894
3942
3990
275
ctg ata Leu lie 280 egg acg Arg Thr 295
g" cgt Val Arg
ata tat lie Tyr
ctt cga Leu Arg
aaa ttt Lys Phe 360 gaa gta Glu Val 375
ttt gat Phe Asp
Glu Lys
Lys Asp
cgc Arg
Lys
His
tat Tyr
att lie 345 g" Asp
C33
Gin
Ala
ggt Gly
cac His
gcc Ala
gtt Val
ctt Leu 330 ttt Phe
tgt aac ggg Cys Asn Gly 285
atg gtt get Met Val 300
g3t 33t
Asn
Ala
Asp 315 aat Asn
cca Pro
aaa Lys
g3C
Asp
cca gaa ggc aaa Pro Glu Gly Lys 350
aga ctg ctg ttt ttc Arg Leu Leu Phe Phe 365
cca gca tat get aca Pro Ala Tyr Ala Thr 380
gat gag aga gca cga Asp Glu Arg Ala Arg 395
gtg agg gtt gaa etc Val Arg Val Glu Leu 410
aag ctg ggc age tac Lys Leu Gly Ser Tyr 290
tgt tat ccg ggc aat Cys Tyr Pro Gly 305
aat gga gat gga Asn Gly Asp Gly 320
tgg gat gcc aag Trp Asp Ala Lys 335 gcc
Asn
aga Arg
gta Val
Lys
gga Gly
tgt Cys
lie
aat ggc Asn Gly
Ala
cag Gin
ttt Phe
get Ala Asp
355 cgt cgc
agt
Ser Gly
340 gac att
acg ggt tat Thr Gly Tyr
310 gtg aca tgt Val Thr
325 gga ggt Gly
Cys lie
lie
33C
Asn
Val
tgg tct gac
Trp Ser Asp Arg Arg 370
agg tac gca ata act
Arg Tyr Ala lie Thr 385
get aaa gta aaa tat
Ala Lys Val Lys Tyr 400
aat aaa cct tea gat
Asn Lys Pro Ser Asp 415 420
gaa Glu
cct Pro
ccc Pro
His
tat Tyr
tgg Trp
390 aca ggt Thr Gly 405 teg gtc ggt Ser Val Gly
Ct3
Leu
gtc ttc tagagecttt
Val Phe
425
gatccagcaa taccccactt cacctacaat
4038
4086
4134
4182
4230
4278
4326
4374
4422
4474
attgttaactatttgttaacttgtgaatacgaataaatgggataaagaaaa由g3caac4534
cagttegcattttaataaggaactttttgtgttgcatcaaacagaagatt4594
ttgactgctgtgactttgtactgeatgateaacttcaaatctgtgattgctt織ggagg4654
aagataagctactaattgaaaatggtttttacatctggatatgaaa ttmgtgccctgtgt4714
agaatttttttcattcttatattttgccagatctgttatctagctgagttcatttcatct4774
ctcccttttttatatcaagtttgaatttgggataatttttctatattaggtacaatttat4834
ctaaactgaattgagaaaaaatt过cagtattattcctcaaaataacatcaatctattttt4894
gtaaacctgttcatactattaaattttgeectaaaagacctcttaataatgattgttgcc4954
agtgactgatgatUattttattttacttaaaataagaaaaggagcactttaattacaac5014
tgaaaaatcagattgttttgcagtccttecttacactaatttgaactcttaaagattget5074
gctttttttttgacattgtcaataacgaaacctaattgtaaaacagtcaccatttactac5134
tagttaatgttttacaagg5163
<210> 4
<211> 426
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 4 Met Ala 1
Asp Arg
Cys Ser
Gin Asp
50
Leu Gly 65
Ala Ala
Ala Ala
Lys Ala
Ala Ala 130 Gly Lys 145
Asn Leu
Gly Gly
Leu Ala
Val Val 210 Glu Val 225
Val Ser
Thr Trp
Met Ser
Ser Tyr 290 Gly Asn 305
Gly Arg
Lys Val
Phe Ala
Asp Arg 370 Ala lie
Asn
Gin
Arg
35
Trp
His
Val
Arg
Asp Ser Gly Gly Pro Gly Gly Pro Ser Pro Ser Glu Arg
5 10 15
Tyr Cys Glu Leu Cys Gy Lys Met Glu Asn Leu Leu Arg
20 25 Cys Arg Ser Ser Phe Tyr 40
Lys Lys His Lys Leu 55
Gly Val Gly Pro His 70
Pro Pro Pro Arg Ala 85
Arg Asp Asn Ala Ser 100
30
Cys Cys Lys Glu His 45
Cys Gin Gly Ser 60
His Ser Gly Pro 75
Ala Arg Glu Pro 90
Gly Asp Ala Ala Lys 105 110
Val Gin Gly
Glu Ala Arg
Gin Arg Gly Ala
Pro Pro
80 !>ys Ala 95
Gly Lys Val
Pro Ala Glu Ser
lie Gly Asp
Lys Pro Pro Ala Asp Pro Ala Ala Ala Ala Ser 115 120 125
Ala Gly Gly Gin Gly Ser Ala Val Ala Ala Glu
135 140 Glu Glu Pro Pro Ala Arg Ser Ser Leu Phe Gin
150 155 Tyr Pro Pro Ser Asn Thr Pro Gly Asp Ala Leu
165 170 Leu Arg Pro Asn Gly Gin Thr Lys Pro Leu Pro
180 185 190
Leu Glu Tyr lie Val Pro Cys Met Asn Lys His Gly 195 200 205
Asp Asp Phe Leu Gly Lys Glu Thr Gly Gin Gin
215 220 Arg Ala Leu His Asp Thr Gly Lys Phe Thr Asp
230 235 Gin Lys Ser Asp Ser Ser Lys Asp lie Arg Gly
245 250 lie Glu Gly Lys Glu Pro Gly Cys Glu Thr lie Gly
260 265 270
Ser Met Asp Asp Leu lie Arg His Cys Asn Gly Lys 275 280 285
Lys lie Asn Gly Arg Thr Lys Ala Met Val Ala
295 300 Gly Thr Gly Tyr Val Arg His Val Asp Asn
310 315 Cys Val Thr Cys lie Tyr Tyr Leu Asn Lys
325 330 Ser Gly Gly lie Leu Arg lie Phe Pro Glu
340 345 Asp lie Glu Pro Lys Phe Asp Arg Leu Leu 355 360 365
Arg Asn Pro His Glu Val Gin Pro Ala Tyr Ala
375 380 Thr Val Trp Tyr Phe Asp Ala Asp Glu Arg Ala
Cys Arg Glu Pro
Lys Ala
160 Pro Gly 175
Ala Leu Lys
lie Cys Gly Asp
Gin Leu
240 Lys lie 255 Leu Leu
Pro Asp Gly
Cys Asn Trp
Leu Gly Tyr Pro
Gly Asp
320 Asp Ala 335
Lys Ala Gin 350
Phe Phe Trp Ser
Thr Arg Tyr Arg Ala Lys 385 390 395 權
Val Lys Tyr Leu Thr Gly Glu Lys Gly Val Arg Val Glu Leu Asn Lys
405 410 Pro Ser Asp Ser Val Gly Lys Asp Val Phe 420 425
415
<210> 5
<211> 2770
<212> DM
<213〉 智人(Homo sapiens) <220>
<221> CDS
<222> (327). (1043) <223>
<400> 5
gagtctggcc gcagtcgcgg cttgcgccgc actgctcgcc ccgctggttc ccgaaggcag ccgacgctgc agcggctcgg tccccgcgcc tcggcttcgc tcccggacct cgattctgcg
cagtggtggc ttcccatccc
gggccagtcc ggaaacgggt
atcccttctc ccgagagttg
gtaccgtggc agccgcaggt
gctcgtgtag atcgttccct
ggcgag atg ccc ctg gga
caaaaggcgc cctccgactc cgtggagctc cgcaccactc cgagaaactt tcccttgtcc ttctgaaccc cgggccacgc ctctggttgc acgctgggga cac ate atg agg ctg
gac
Asp
10
gtg
Val
tgc Cys
gac Asp
egg Arg
gcc Ala 90
ggg Gly
ctg Leu
ggc Gly
gtc Val
ggc Gly
ggc
Gly
75
ate
lie
3gc Ser
gag Glu
ttc Phe
ctg Leu
cag
Gin
60
gac
Asp
age Ser
egg Arg
aw Lys
tgc Cys
gag
Glu
45
ctg
Leu
cag Gin
ttc Phe
ctg Leu
gtg get tgc tat Val Ala Cys Tyr 125
aac ccc aac ggt
att lie
tac
Tyr
30
cgc
Arg
gcg Ala
"c lie
etc Leu
ggc Gly 110 ccg Pro
gat
Met 1
gcc ctg gag Ala Leu Glu 15
ctg gac aac Leu Asp Asn
gtc aag cag Val Lys Gin
Pro Leu Gly His lie Met Arg Leu
tac ate gtg Tyr lie Val 20
ttc ctg ggc Phe Leu 35
ctg cac His
Gly
tgc Cys
ccc Pro
gag Glu
Thr
Leu 50
ggg ccg cgc gcc ggc gtc Gly Pro Arg Ala Gly Val 65
acg tgg ate ggg ggc aac Thr Trp lie Gly Gly Asn
80 85 ctg tec etc ate gac agg ctg Leu Ser Leu lie Asp 95
aaa tac tac Lys Tyr Tyr
tgt Cys
gtg Val
ggg Gly
tec
Ser Lys 70
Ala 55 sag cg3
ctg cac gag Leu His Glu
25 gtg ggc Val Gly
40 gcc ctg Leu
gac Asp
egg Arg
gag Glu
gtc Val
Arg 100 aag gag Lys Glu 115
aca ggt tat Thr Gly Tyr 130
ggt cgc tgc ate acc tgc
gga aat gga Gly Asn Gly
Leu
agg Arg
gtt Val
ate
gag Glu
gtc Val
tct Ser
cgc Arg
Arg
ggc Gly
etc Leu
ctg Leu
gag Glu
tgc Cys 105 gca atg
C3C
His
tgc Cys
t3C
Tyr
Met
aag
Lys Ala
120 cac gtg gac His Val Asp
135 tac tat
ctg aac
60 120 180 240 300 353
401
"9
497
545
593
641
689
737
785
Asn Pro Asn Gly Asp 140
tgg g" gcc
Trp Asp Ala
aag Lys
gag Glu 170 ctg Leu
tac Tyr
agg Arg
tct Ser
33t
Asn 155
ggg Gly
ttc Phe
aaa Lys
ttc Phe
tea Ser
tgg Trp
gca Ala
acc Thr
aga Arg 205 gaa gcc Glu Ala 220 gcc etc act Ala Leu Thr
gca Ala
ttc Phe
tC3
Ser 190 tat Tyr
Lys
Glu
Gly Arg Cys 145
aag eta cat Lys Leu 160
Ala
His
lie 175 gat Asp
get Ala
aag Lys
gac Asp
gat Asp
cgt Arg
atg Met
Lys
agg Arg
Thr
lie
gaa Glu
ttt Phe
act Thr
Arg
ttt Phe
lie Thr Cys lie Tyr 150
ggt ggg ate ctg egg Gly Gly lie Leu 165
gtg gag ccc att Val Glu Pro 180
38C CC3 C3C
Asn Pro His 195
gtc tgg tac Val Trp Tyr 210
ttc agg aat tta Phe Arg Asn Leu 225
Tyr Leu Asn
ata lie
gac Asp
ttt Phe
cca Pro
gtg Val
aga etc Arg Leu
185 ccc tct
cag
Gin Pro Ser
200 get gaa Ala Glu 215 agg aaa act Arg Lys Thr
gat Asp
gaa Glu
gaa Glu
230
tgaccgtgct ctgaaatctg ctggccttgt
833
881
929
977
1025
1073
235 tcattttagtaacggttcctg^t tctcttaaattctt tgagatccaaagatggcctctt1133
cagtgacaacaatctccctgctacttcttgcatccttcacatccctgtcttgtgtgtggt1193
acttcatgttttcttgccaagactgtgttgatcttcagatactctctttgccagatgaag1253
ttatttgetaactccagaaattcctgeagacatcctactcggccagcggtttacctgata1313
gatteggtaatactatcaagagaagagectaggagcacagcgagggaatgaaccttactt1373
gcactttatgtatacttcctgatttgaaaggaggaggtttgasaagsaaa纖tggaggt1433
ggtagatgeeacagagaggcateaeggaagccttaacagcaggaaacagag扁tttgtg1493
tcatctgaacaatttccagatgttcttaatccagggctgttggggtttct1553
cticaacctaaacctctagaaagggctgetgtcatagtgaacaattU taa1613
gtgtccc"ggggc，cactccttttttcccagtcctgcaacctggattttctgcctca1673
gctccattttgctgaaaataatgactttctgaataaagatggcaacacaattttttctcc1733
attttcagttctUcctgggaacctaattccccagaagctaaaaaactagacattagttg1793
ttttggttgctttgttggaatggaatttaaatttaaatgaaaggaeiaaatatatccctgg1853
tagttttgtgttaaccactgat雄tgtggaaagagctaggtctactgatatacaataaa1913
catgtgtgcatcttgaacaatttgagaggggaggtggagttgg雄tgtgggtgttcctg1973
ttttttttttttttttttttUtttttagttttcctttttaatgagctcaccctttaaca2033
caa^aaagcagggtgatgtattt taaawaggaagtggaaataaaaaMtctcaaagct2093
atttgagttctcgtctgtccctagcagtctttcttcagctcacttggctctctagatcca2153
ctgtggttggcagtatgaccagaatcatggaacttgetagaactgtggaagcttctactc2213
ctgcagtaagcacagatcgcactgcctcaataacttggtattgagcacgtattttgeaaa2273
agctacttttcctagttttcagtattactttcatgttttaaaaatccctttaatttcttg2333
cttgaaaatcccatgaacattaaagagecagaaatattttcctttgttatgtaeggatat2393
atatatatatatagtcttecaagatagaagtttactttttcctcttctggttttggaaaa2453
tttccagataagacatgtcaccattaattctcaacgactgctctattttgttgtacggta2513atagttatca ccttctaaat tactatgtaa tttactcact tattatgttt attgtcttgt 2573
atcctttctc tggagtgtaa gcacaatgaa gacaggaatt ttgUtattt ttaaccaatg 2633
caacatactc tcagcaccta aaatagtgcc gggaacatag taagggctca gtaaatactt 2693
gttgaataaa ctcagtctcc tacattagca ttctaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2753
aaaaaaaaaa aaaaaag 2770
<210〉 6
<211〉 239
<212〉 PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 6
Met 1
Glu
Asn
Gin
Arg
65
lie
Leu
Tyr
Gly
Cys 145 His
Asp
Arg
Thr
Phe 225
Pro
Tyr
Phe
Leu
50
Ala
Gly
lie
Val
Thr 130 lie
Gly
Val
Asn
Val 210 Arg
Leu
lie
Leu
35
His
Gly
Gly
Asp
Lys 115 Gly
Thr
Gly
Glu
Pro 195 丁rp
Asn
Gly
Val
20
Gly
Cys
Val
Asn
Arg 100 Glu
Tyr
Cys
lie
Pro 180 His
Tyr
Leu
His lie Met Arg Leu Asp Leu Glu Lys lie Ala Leu
5 10 15
Pro Cys Leu His Glu Val Gly Phe Cys Tyr Leu Asp
25 30 Glu Val Val Gly Asp Cys Val Leu Glu Arg Val Lys
40 45 Thr Gly Ala Leu Arg Asp Gly Gin Leu Ala Gly Pro
55 60 Ser Lys Arg His Leu Arg Gly Asp Gin lie Thr Trp
70 75 80
Glu Glu Gly Cys Glu Ala lie Ser Phe Leu Leu Ser
95
Ser Arg Leu Gly Lys 110
Ala Cys Tyr Pro 125
Pro Asn Gly Asp
140 Asn Trp
Gly Gly
Tyr Asn Arg
85 90 Leu Val Leu Tyr Cys Gly 105
Arg Ser Lys Ala Met Val 120
Val Arg His Val Asp Asn 135
lie Tyr Tyr Leu Asn Lys
150 155 Leu Arg lie Phe Pro Glu Gly Lys 165 170 lie Phe Asp Arg Leu Leu Phe Phe 185
Glu Val Gin Pro Ser Tyr Ala Thr
200 205 Phe Asp Ala Glu Glu Arg Ala Glu Ala Lys Lys Lys
215 220 Thr Arg Lys Thr Glu Ser Ala Leu Thr Glu Asp 230 235
Asp Ala Ser Phe
Lys Leu
160 lie Ala
175
Trp Ser Asp Arg 190
Arg Tyr Ala Met
权利要求
1.下式(B)的化合物或其盐在制备用于治疗与HIF水平或活性升高或减低有关的病症、或用于治疗HIF水平或活性升高或减低会对其有利的病症的药物中的用途其中R2定义同上，为单键而T为CH2或C＝O，或为双键而T为CH；A2为H或-XCO2R4；X为单键或支链或直链C1-C6烷基链，所述烷基链任选含有1个或多个N、S、O或P链原子且任选被如卤基、OH、OR4、NRR2或NHCOR4取代，其中R2、R3和R4定义同上且R4表示H；支链或直链C1-C6烷基；任选含有1个或2个N、S、O或P原子的4-7元杂环；或任选含有1个或2个N、O或S原子、能与另一个环稠合的5元或6元芳环。
2.权利要求l的用途，其中X为单键或曱基，R2为H或苯基烷 基，R4为H或曱基。
全文摘要
本发明的发明名称为HIF羟化酶抑制剂。本发明提供如本文定义的式(A)、(B)、(C)、(D)、(E)、(F)之一的化合物或其盐，其用于治疗与HIF水平或活性提高或减低有关的病症、或HIF水平或活性提高或减低会对其有利的病症。
文档编号A61P35/00GK101199512SQ20071030816
公开日2008年6月18日 申请日期2003年3月21日 优先权日2002年3月21日
发明者C·J·肖菲尔德, C·W·普格赫, P·H·马西维尔, P·J·拉特里费 申请人:埃西斯创新有限公司