专利名称：：抗tat226抗体和免疫偶联物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及抗TAT226抗体及其免疫偶联物。本发明进一步涉及使用TAT226抗体及其免疫偶if关物的方法。
背景技术：
：已经证明，能结合癌细胞表面上表达的多肽的抗体是有效的抗癌疗法。此类抗体通过多种机制起作用，包括例如激活抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC);抗体诱导补体依赖性细胞毒性(CDC);增强细胞因子释放；和诱导凋亡。参见例^口Cardarellietal.(2002)CancerImmunol.Immunother.51:15-24。例如，HERCEPTIN⑧和RITUXAN⑧(都来自GenentechInc.,SouthSanFrancisco,California)分别是已经成功用于治疗乳腺癌和非何杰金氏淋巴瘤的抗体。HERCEPTIN⑧是能选择性结合人表皮生长因子受体2(HER2)原癌基因的胞外结构域的重组DNA衍生的人源化单克隆抗体。在25-30%的原发性乳腺癌中观察到HER2蛋白质过表达。RITUXAN⑧是针对在正常和恶性B淋巴细胞表面上发现的CD20抗原的遗传工程嵌合鼠/人单克隆抗体。这两种抗体都是在CHO细胞中重组生产的。HERCEPTIN⑧表现为至少部分通过抑制血管发生来起作用(Izumietal.(2002)Nature416:279-280)，而RITUXAN⑧表现为至少部分通过诱导凋亡来起作用(Cardarellietal.(2002)CancerImmunol.Immimother.51:15-24)。免疫偶联物，或"抗体-药物偶联物"，对于在癌症治疗中局部投递细胞毒剂是有用的。参见例如Syrigosetal.(1999)AnticancerResearch19:605-614;Niculescu-Duvazetal.(1997)Adv.DrugDeliv.Rev.26:151-172;美国专利No.4,975,278。免疫偶联物容许靶向投递药物模块(moiety)至肿瘤，而系统性施用未偶联的细胞毒剂可能在试图消除的肿瘤细胞之外导致正常细胞不可接受的毒性水平。参见Baldwinetal.(Mar.15,1986)Lancetpp.603-05;Thorpe(1985)"AntibodyCarriersOfCytotoxicAgentsInCancerTherapy:AReview,"inMonoclonalAntibodies'84:BiologicalandClinicalApplications(A.Pincheraetal.，eds.)pp.475-506。为了治疗癌症，已经开发了并在继续开发靶向细胞表面多肽的免疫偶联物。综述参见例如Hamannetal.(2005)ExpertOpin.Ther.Patents(2005)15:1087-1103。显然，为了诊断和/或治疗目的，对于靶向细胞表面多肽的药剂存在持续的需要。本文所述发明满足了这一需要并提供了其它好处。完整收入本文中引用的所有参考文献(包括专利申请和出版物)作为参考。发明概述本发明提供了抗TAT226抗体及其使用方法。一方面，提供了能结合TAT226的抗体，其中所述抗体包含至少一个、两个、三个、四个、五个、或六个选自下组的HVR:(1)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:4;(2)HVR-H2,其包含氨基酸序列SEQIDNO:5;(3)HVR-H3，其包含符合共有序列SEQIDNO:11的氨基酸序列；(4)HVR-L1,其包含氨基酸序列SEQIDNO:12;(5)HVR-L2,其包含氨基S吏序列SEQIDNO:13;和(6)HVR-L3，其包含符合共有序列SEQIDNO:19的氨基酸序列。另一方面，能结合TAT226的抗体包含(a)HVR-H3，所述HVR-H3包含符合共有序列SEQIDNO:ll的氨基酸序列和(b)至少一个、两个、三个、四个或五个选自下组的HVR:(1)HVR-Hl，其包含氨基S吏序列SEQIDNO:4;(2)HVR-H2,其包含氨基酸序列SEQIDNO:5;(3)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:12;(4)HVR-L2,其包含氨基酸序列SEQIDNO:13;和(5)HVR-L3,其包含符合共有序列SEQIDNO:19的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述抗体包含HVR-L3，所述HVR-L3包含符合共有序列SEQIDNO:19的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述抗体进一步包含HVR-H1和HVR-H2，所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:4，所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5。在一个实施方案中，所述抗体进一步包含HVR-L1和HVR-L2，所述HVR-L1包含氨基酸序列SEQNO:12,所述HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13。在一个实施方案中，所述抗体包含HVR-H3,其包含选自SEQIDNO:6-10的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述抗体进一步包含HVR-L3，所述HVR-L3包含选自SEQIDNO:14-18的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:9，所述HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:17。在一个实施方案中，所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:10，所述HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:18。在一个实施方案中，所述抗体进一步包含HVR-H1和HVR-H2，所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:4,所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5。在一个实施方案中，所述抗体进一步包含HVR-L1和HVR-L2,所述HVR-L1包含氨基酸序列SEQNO:12，所述HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13。一方面，提供了能结合TAT226的抗体，其中所述抗体包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自下组的HVR:(1)HVR-Hl,其包含氨基酸序列SEQIDNO:l;(2)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:2;(3)HVR-H3,其包含氨基S吏序列SEQIDNO:3;(4)HVR-L1,其包含氨基酸序列SEQIDNO:12;(5)HVR-L2,其包含氨基酸序列SEQIDNO:13;和(6)HVR-L3,其包含氨基酸序列SEQIDNO:14。另一方面，能结合TAT226的抗体包含(a)HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:3和(b)至少一个、两个、三个、四个或五个选自下组的HVR:(1)HVR-Hl,包含氨基酸序列SEQIDNO:l;(2)HVR-H2，包含氨基酸序列SEQIDNO:2;(3)HVR-L1,包含氨基酸序列SEQIDNO:12;(4)HVR-L2，包含氨基酸序列SEQIDNO:13;和(5)HVR-L3,包含氨基酸序列SEQIDNO:14。在一个实施方案中，所述抗体包含HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:14。在一个实施方案中，所述抗体进一步包含HVR-Hl和HVR-H2,所述HVR-Hl包含氨基酸序列SEQIDNO:l，所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:2。在一个实施方案中，所述抗体进一步包含HVR-L1和HVR-L2，所述HVR-L1包含氨基酸序列SEQNO:12，所述HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13。在某些实施方案中，任何上述抗体进一步包含至少一种选自VH亚组III共有框架和VL亚组I共有框架的框架。一方面，提供了能结合TAT226的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQIDNO:21-25的氨基酸序列具有至少90。/。序列同一性的重链可变域。在一个实施方案中，所述抗体进一步包含与选自SEQIDNO:26-31的氨基酸序列具有至少90°/。序列同一性的轻链可变域。在一个实施方案中，所述抗体包含与氨基酸序列SEQIDNO:24具有至少90。/。序列同一性的重链可变域。在一个实施方案中，所述抗体进一步包含与氨基酸序列SEQIDNO:29具有至少90。/。序列同一性的轻链可变域。在一个实施方案中，所述重链可变域包含氨基酸序列SEQIDNO:24,所述轻链可变域包含氨基酸序列SEQIDNO:29。在一个实施方案中，所述抗体包含与氨基酸序列SEQIDNO:25具有至少90。/。序列同一性的重链可变域。在一个实施方案中，所述抗体进一步包含与氨基酸序列SEQIDNO:30具有至少90%序列同一性的轻链可变域。在一个实施方案中，所述重链可变域包含氨基酸序列SEQIDNO:25，所述轻链可变域包含氨基酸序列SEQIDNO:30。一方面，提供了能结合TAT226的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQIDNO:20具有至少90。/。序列同一性的重链可变域。在一个实施方案中，所述抗体进一步包含与氨基酸序列SEQIDNO:26具有至少90。/。序列同一性的轻链可变域。在一个实施方案中，所述重链可变域包含氨基酸序列SEQIDNO:20，所述轻链可变域包含氨基酸序列SEQIDNO:26。在某些实施方案中，提供了编码任何上述抗体的多核苷酸。在一个实施方案中，提供了包含所述多核苷酸的载体。在一个实施方案中，提供了包含所述载体的宿主细胞。在一个实施方案中，所述宿主细胞是真核的。在一个实施方案中，所述宿主细胞是CHO细胞。在一个实施方案中，提供了制备抗TAT226抗体的方法，其中所述方法包括在适于编码所述抗体的多核苷酸表达的条件下培养宿主细胞，并分离所述抗体。一方面，提供了能结合在细胞表面上表达的TAT226的抗体。在一个实施方案中，所述抗体能结合TAT226中SEQIDNO:75氨基酸21-l15区域内的表位。在一个实施方案中，所述细胞是癌细胞。在一个实施方案中，所述癌细胞是卵巢癌细胞、脑肿瘤细胞、或维尔姆斯氏肿瘤(Wilm，stumor)细胞。在某些实施方案中，任何上述抗体是单克隆抗体。在一个实施方案中，所述抗体是选自Fab、Fab，-SH、Fv、scFv、或(Fab，)2片段的抗体片段。在一个实施方案中，所述抗体是人源化的。在一个实施方案中，所述抗体是人的。在一个实施方案中，所述抗体能与选自YW0.32、YWO,49、YWO.49.B7、YWO.49.C9、YW0.49.H2和YW0.49.H6的抗体结合相同表位。一方面，提供了一种检测生物学样品中TAT226的存在的方法，所述方法包括在容许所述抗体结合TAT226的条件下使所述生物学样品接触任何上述抗体，并检测在所述抗体与TAT226之间是否形成复合物。在一个实施方案中，所述生物学样品包含卵巢肿瘤细胞、脑肿瘤细胞、或维尔姆斯氏肿瘤细胞。一方面，提供了一种诊断与TAT226表达升高有关的细胞增殖性病症的方法，所述方法包括使测试细胞接触任何上述抗体；通过检测抗体与TAT226的结合来测定测试细胞的TAT226表达水平；并比较测试细胞的TAT226表达水平与对照细胞的TAT226表达水平，其中测试细胞的TAT226表达水平比对照细胞高指示存在与TAT226表达升高有关的细胞增殖性病症。在一个实施方案中，所述测试细胞是来自怀疑患有细胞增殖性病症的患者的细胞。在一个实施方案中，所述细胞增殖性病症选自卵巢癌和维尔姆斯氏肿瘤。在一个实施方案中，所述方法包括测定测试细胞表面上的TAT226表达水平，并比较测试细胞表面上的TAT226表达水平与对照细胞表面上的TAT226表达水平。本发明进一步提供了免疫偶联物及其使用方法。一方面，免疫偶联物包含任何上述抗TAT226抗体，其共价附着至细胞毒剂。在一个实施方案中，所述细胞毒剂选自毒素、化疗剂、抗生素、放射性同位素和核溶酶(nucleolyticenzyme)。一方面，提供了具有通式Ab-(L-D)p的免疫偶联物，其中(a)Ab是任何上述抗TAT226抗体；(b)L是接头；(c)D是通式的De或Df的药物15<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>且其中112和116各自是曱基，R和W各自是异丙基，R"是仲丁基，每个RS选自CH3、0-CH3、OH、和H;R9是H;R"是芳基;Z是-O-或-NH-;R"是H、C广Q烷基、或-(CH2)2-0-(CH2)2-0-(CH2)2-0-CH3;而1118是-(:(118)2-0(118)2-芳基；且(d)p的范围为约l到8。在一个实施方案中，所述抗体(Ab)包含1)HVR-L3,所述HVR-L3包含符合共有序列SEQIDNO:ll的氨基酸序列和2)至少一个、两个、三个、四个或五个选自下组的HVR:(i)HVR-H1,其包含氨基酸序列SEQIDNO:4;(ii)HVR陽H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:5;(iii)HVR-L1,其包含氨基酸序列SEQIDNO:12;(iv)HVR-L2，其包含氨基S吏序列SEQIDNO:13;和(v)HVR-L3，其包含符合共有序列SEQIDNO:19的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述抗体包含HVR-L3，所述HVR-L3包含符合共有序列SEQIDNO:19的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述抗体包含HVR-H3和HVR-L3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:9，所述HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:17。在一个实施方案中，所述抗体包含HVR-H3和HVR-L3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:10,所述HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:18。在一个实施方案中，所述抗体进一步包含HVR-H1、HVR-H2、HVR-L1和HVR-L2，所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:4，所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5,所述HVR-L1含氨基酸序列SEQIDNO:12，HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13。在一个实施方案中，所述抗体包含与选自SEQIDNO:21-25的氨基酸序列具有至少90。/。序列同一性的重链可变区和与选自SEQIDNO:26-31的氨基酸序列具16有至少90%序列同一性的轻链可变区。在一个实施方案中，所述抗体包含与氨基酸序列SEQIDNO:24具有至少90。/。序列同一性的重链可变区和与氨基酸序列SEQIDNO:29具有至少90。/。序列同一性的轻链可变区。在一个实施方案中，所述抗体包含包含氨基酸序列SEQIDNO:24的重链可变区和包含氨基酸序列SEQIDNO:29的轻链可变区。在一个实施方案中，所述抗体包含与氨基酸序列SEQIDNO:25具有至少90。/。序列同一性的重链可变区和与氨基酸序列SEQIDNO:30具有至少卯。/。序列同一性的轻链可变区。在一个实施方案中，所述抗体包含包含氨基S交序列SEQIDNO:25的重链可变区和包含氨基酸序列SEQIDNO:30的轻链可变区。关于任何上述免疫偶联物，进一步提供了以下实施方案。在一个实施方案中，免疫偶联物具有体外或体内细胞杀伤活性。在一个实施方案中，所述接头经抗体上的硫醇基团附着于抗体。在一个实施方案中，所述接头是蛋白酶可切割的。在一个实施方案中，所述接头包含val-cit二肽。在一个实施方案中，包含对氨基苯曱基单元。在一个实施方案中，所述对氨基苯曱基单元部署在药物与接头中的蛋白酶切割位点之间。在一个实施方案中，所述对氨基苯曱基单元是对氨基苯曱基氧羰基(PAB)。在一个实施方案中，所述接头包含6-马来酰亚氨基己酰基(6-maleimidocaproyl)。在一个实施方案中，所述6-马来酰亚氨基己酰基部署在抗体与接头中的蛋白酶切割位点之间。上述实施方案可以单独的或彼此任意组合的发生。在一个实施方案中，所述药物选自MMAE和MMAF。在一个实施方案中，所述免疫偶联物具有通式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>其中Ab是任何上述抗TAT226抗体，S是硫原子，而p的范围为2到5。在一个实施方案中，所述免疫偶联物具有通式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>其中Ab是任何上述抗TAT226抗体，S是^5危原子，而p的范围为2到5。一方面，提供了包含任何上述免疫偶联物及药物学可接受载体的药用组合物。一方面，提供了治疗细胞增殖性病症的方法，其中所述方法包括给个体施用所述药用组合物。在一个实施方案中，所述细胞增殖性病症选自卵巢癌、子宫癌、脑肿瘤、和维尔姆斯氏肿瘤。在一个实施方案中，所述细胞增殖性病症与TAT226在细胞表面上的表达升高有关。一方面，提供了抑制细胞增殖的方法，其中所述方法包括将细胞在容许免疫偶联物结合TAT226的条件下暴露于任何上述免疫偶联物。在一个实施方案中，所述细胞是肿瘤细胞。在一个实施方案中，所述肿瘤细胞是卵巢肿瘤细胞、子宫肿瘤细胞、脑肿瘤细胞、或维尔姆斯氏肿瘤细胞。在一个实施方案中，所述细胞是异种移植物。在一个实施方案中，所述暴露发生于体外。在一个实施方案中，所述暴露发生于体内。附图简述图l显示了来自人、猕猴("cyno")、小鼠、和大鼠的TAT226的对比。方框标示的残基在各物种间相同。剩余的残基在四种物种中的至少两种间不同。来自人、猕猴、小鼠、和大鼠的TAT226间的氨基酸同一性百分比的对比列在下面的表中。同一性百分比是使用ClustalW程序计算得出的。图2显示了称为YW0.32和YW0.49的抗TAT226单克隆抗体的H1、H2、和H3重链高变区(HVR)序列，如实施例B所述。氨基酸位置依照Kabat编号系统编号，如下所述。图3显示了称为YW0.32和YW0.49的抗TAT226单克隆抗体的L1、L2、和L3轻链HVR序列，如实施例B所述。氨基酸位置依照Kabat编号系统编号，如下所述。图4显示了YWO.49及使用HVR-H3和HVR-L3软随机化文库通过YW0.49的亲和成熟产生的YW0.49.B7、YWO.49.C9、YWO,49,H2和YW0.49.H6的HVR-H3和HVR-L3序列，如实施例B所述。还显示了共有HVR-H3和HVR-L3序列。图5A和5B显示了用于实施本发明的例示性的受体人可变重链(VH)共有框架序列，序列标识符如下-人VH亚组I共有框架"A，，减去KabatCDR(SEQIDNO:32、33、34、35)。-人VH亚组I共有框架"B"、"C"、和"D"减去延伸的高变区(SEQIDNO:36、37、34、35;SEQIDNO:36、37、38、35;和SEQIDNO:36、37、39、35)。-人VH亚组II共有框架"A"减去KabatCDR(SEQIDNO:40、41、42、35)。-人VH亚组II共有框架"B"、"C"、和"D"减去延伸的高变区(SEQIDNO:43、44、42、35;SEQIDNO:43、44、45、35;和SEQIDNO:43、44、46、35)。-人VH亚组III共有框架"A"减去KabatCDR(SEQIDNO:47、48、49、35)。-人VH亚组III共有框架"B"、"C"、和"D"减去延伸的高变区(SEQIDNO:50、51、49、35;SEQIDNO:50、51、52、35;和SEQIDNO:50、51、53、35)。-人VH受体框架"A,，减去KabatCDR(SEQIDNO:54、48、55、35).-人VH受体框架"B"和"C"减去延伸的高变区(SEQIDNO:50、51、55、35;和SEQIDNO:50、51、56、35)。-人VH受体2框架"A，，减去KabatCDR(SEQIDNO:54、48、57、35)。-人VH受体2框架"B"、"C"、和"D"减去延伸的高变区(SEQIDNO:50、51、57、35;SEQIDNO:50、51、58、35;和SEQIDNO:50、51、59、35)。图6A和6B显示了用于实施本发明的例示性的受体人可变轻《连(VL)共有框架序列，序列标识符如下-人VLK亚组I共有框架(Kvl):SEQIDNO:60、61、62、63-人VLK亚组II共有框架(Kv2):SEQIDNO:64、65、66、63-人￥1^亚组111共有框架(1^3):SEQIDNO:67、68、69、63-人VLK亚组IV共有框架(Kv4):SEQIDNO:70、71、72、63图7显示了huMAb4D5-8轻链和重链的框架序列。上标/粗体的数字指示依照Kabat的氨基酸位置。图8显示了具有指定修饰的huMAb4D5-8轻链和重链的框架序列。上标/粗体的数字指示依照Kabat的氨基酸位置。图9显示了YW0.32、YW0.49、YW0.49.B7、YW0.49.C9、YW0.49.H2、和YWO,49.H6的重链可变区(VH)序列。HVR标有下划线。图10显示了YWO.32、YW0.49、YWO.49.B7、YW0.49.C9、YW0.49.H2、和YWO.49.H6的轻链可变区(VL)序歹']。人源化单克隆抗体4D5-8("huMAb4D5-8,，)和"经修饰"huMAb4D5-8的VL序列分别显示于SEQIDNO:31和SEQIDNO:26。YWO,32和YW0.49具有与"经修饰"huMAb4D5-8VL(SEQIDNO:26)相同的VL序列，其相对于SEQIDNO:31包含以下替代N30S、R66G、和H91S。HVR标有下划线。图ll显示了YWO,32、YWO,49、YWO.49.B7、YWO.49.C9、YW0.49.H2、和YWO,49.H6的重链可变区序列的对比。HVR标有方框。YWO.49.B7、YWO.49.C9、YWO.49.H2、和YW0.49.H6的HVR-H3中与YW0.49的HVR-H3的相应残基不同的残基标有阴影。图12显示了YW0.32、YWO,49、YWO.49.B7、YWO.49.C9、YW0.49.H2、和YWO.49.H6的轻链可变区序列的对比。HVR标有方框。YWO.49.B7、YWO.49.C9、YWO.49.H2、和YW0.49.H6的HVR-L3中与YW0.49的HVR-L3的相应参见不同的残基标有阴影。图13显示了各种组织中人TAT226基因表达水平的示意图，如实施例A所述。图14显示了正常卵巢；正常输卵管；透明细胞、粘液性(mucinous)、和浆液性(serous)嚢腺癌(cystoadenocarcinoma)亚型的卵巢癌；转移性卵巢癌；和其它类型的卵巢癌中人TAT226基因表达水平的示意图，如实施例A所述。图15显示了在无或有指定抗TAT226抗体时OVCAR3细胞的焚光激活细胞分拣(FACS)结果，如实施例D所述。图16显示了通过5，核酸酶(TaqMan)测定法和免疫组化(IHC)对OVCAR3细胞和一组卵巢癌样品测定的TAT226mRNA和蛋白质表达，如实施例E所述。图17显示了多种YW0.49.H2和YW0.49.H6抗体-药物偶联物(ADC)在OVCAR3细胞杀伤测定法中的体外活性，如实施例H所述。图18显示了多种YW0.49.H2和YWO,49.H6ADC在使用HCT116存9-4稳定转染子的细胞杀伤测定法中的体外活性，如实施例H所述。图19显示了YW0.49.H6ADC的体内活性，其中使用小鼠异种移植物，如实施例H所述。图20显示了YWO.49.H6ADC的体内活性，其中使用衍生自人类患者肿瘤的小鼠异种移植物，如实施例H所述。发明详述提供了能结合TAT226的分离的抗体。进一步提供了包含抗TAT226抗体的免疫偶联物。本发明的抗体和免疫偶联物对于例如与TAT226的表达改变(例如表达升高)有关的病症的诊断或治疗是有用的。在某些实施方案中，本发明的抗体或免疫偶联物对于细胞增殖性病症(诸如肿瘤或癌症)的诊断或治疗是有用的。在某些实施方案中，本发明的抗体免疫偶联物对于TAT226(例如在细胞表面上表达的TAT226)的一企测是有用的。提供了编码抗TAT226抗体的多核苷酸。提供了包含编码抗TAT226抗体的多核苷酸的载体，并提供了包含此类载体的宿主细胞。提供了包含本发明的多核苷酸、抗TAT226抗体、或免疫偶联物中的任何一种或多种的组合物，包括药用组合物。通用技术本文中描述或提到的技术和规程一般得到了本领域技术人员的充分理解，而且通常利用常规方法得以采用，诸如例如下列文献中记载的广泛应用的方法Sambrooketal.,MolecularCloning:ALaboratoryManual3rd.edition(2001)ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.;GurrentProtocolsinMolecularBiology(F.M.Ausubel,etal.eds.,(2003》；theseriesMethodsinEnzymology(AcademicPress,Inc.):Per2:APracticalApproach(M.J.MacPherson,B.D.HamesandG.R.Tayloreds.(1995》，HarlowandLane,eds.(1988)Antibodies,ALaboratoryManual,andAnimalCellCulture(R.I.Freshney,ed.(1987));OligonucleotideSynthesis(M.J.Gait,ed.，1984);MethodsinMolecularBiology,HumanaPress;CellBiology:ALaboratoryNotebook(J.E.Cdlis,ed.,1998)AcademicPress;AnimalCellCulture(R.I.Freshney),ed"1987);IntroductiontoCellandTissueCulture(J.P.MatherandP.E.Roberts,1998)PlenumPress;CellandTissueCulture:LaboratoryProcedures(A.Doyle,J.B.Griffiths,andD.GNewell,eds.，1993-8)J.WileyandSons;HandbookofExperimentalImmunology(D.M.WeirandC.C.Blackwell,eds.);GeneTransferVectorsforMammalianCells(J.M.MillerandM.P.Calos,eds.，1987);PCR:ThePolymeraseChainReaction,(Mullisetal"eds"1994);GurrentProtocolsinImmunology(J.E.Coliganetal"eds"1991);ShortProtocolsinMolecularBiology(WileyandSons,1999);Immunobiology(C.A.JanewayandP.Travers,1997);Antibodies(P.Finch,1997);Antibodies:APracticalApproach(D.Catty"ed.，IRLPress,1988-1989);MonoclonalAntibodies:APractical21Approach(P.ShepherdandC.Dean,eds.，OxfordUniversityPress,2000》UsingAntibodies:ALaboratoryManual(E.HarlowandD.Lane(ColdSpringHarborLaboratoryPress,1999);TheAntibodies(M.ZanettiandJ.D.Capra,eds.,HarwoodAcademicPublishers,1995);andCancer:PrinciplesandPracticeofOncology(V.T.DeVitaetal.，eds.,J.B.LippincottCompany,1993)。I.定义和缩写A.定义"分离的"抗体指已经鉴定且自其天然环境的一种成分分开和/或回收的抗体。其天然环境的污染性成分指将会干扰该抗体的研究、诊断或治疗用途的物质，可包括酶、激素、和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在有些实施方案中，将抗体纯化至(l)根据例如Lowry法的测定，抗体重量超过95%,而在有些实施方案中，重量超过99%，(2)足以通过使用例如转杯式测序仪获得至少15个残基的N-末端或内部氨基g臾序列的程度，或(3)根据还原性或非还原性条件下的SDS-PAGE及使用例如考马斯蓝或银染色，达到同质。既然抗体天然环境的至少一种成分不会存在，那么分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体。然而，分离的抗体通常将通过至少一个纯化步骤来制备。"分离的"核酸分子指与例如该核酸分子的天然来源中通常与之关联的至少一种其它核酸分子分开的核酸分子。分离的核酸分子进一步包括包含在通常表达该核酸分子的细胞中的核酸分子，但是所述核酸分子是以染色体外形式存在的或在染色体上的定位不同于它其天然染色体定位。"纟屯化的"意味着分子以至少95%(以重量计)、或至少98%(以包含它的样品的重量计)的浓度存在于样品中。短语"基本上相似，，或"基本上相同，，在用于本文时表示两个数值(例如，一个涉及本发明的抗体而另一个涉及参照/比较抗体)之间足够高的相似程度，以致本领域技术人员将认为在用所述数值(例如Kd值)所测量的生物学特性背景内两个数值之间的差异具有很小的或没有生物学和/或统计学显著性。作为参照/比较值的函数，所述两个数值之间的差异例如小于约50%,小于约40%,小于约30%，小于约20%,和/或小于约10%。短语"实质性降低"或"实质性不同"在用于本文时表示两个数值(通常一个与某分子有关而另一个与参照/比较分子有关)之间足够高的差异程度，以致本领域技术人员将认为在用所述数值(例如Kd值)所测量的生物学特性背景内两个数值之间的差异具有统计学显著性。作为参照/比较分子该数值的函数，所述两个数值之间的差异例如大于约10%，大于约20%,大于约30%,大于约40%,和/或大于约50%。术语"载体"在用于本文时意指能够运输与其连接的其它核酸的核酸分子。一类载体是"质粒"，指其中可连接另外的DNA区段的环状双链DNA。另一类载体是噬菌体载体。另一类载体是病毒载体，其中可将另外的DNA区段连接到病毒基因组中。某些载体能够在其所导入的宿主细胞中自主复制(例如具有细菌复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)。其它载体(例如非附加型哺乳动物载体)可在导入宿主细胞后整合到宿主细^;的基因组中，由此随着宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导与其可才喿作连接的基因表达。此类载体在本文中称为"重组表达载体"(或简称为"表达载体")。通常，在重组DNA技术中有用的表达载体常常是质粒形式。在本说明书中，"质粒"和"载体"可互换使用，因为质粒是载体的最常用形式。"多核脊酸"或"核酸"在本文中可互换使用，指任何长度的核苷酸聚合物，包括DNA和RNA。核苦酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经过修饰的核苦酸或碱基、和/或其类似物，或者是可通过DNA或RNA聚合酶或者通过合成反应掺入聚合物的任何底物。多核苷酸可包含经过修饰的核苷酸，诸如曱基化核苦酸及其类似物。如果有的话，对核苷酸结构的修饰可以在装配聚合物之前或之后进行。核苷酸序列可以由非核苷酸组分中断。多核苷酸可以在合成后包含修饰，诸如偶联至标记物。其它类型的修饰包括例如"帽"，将一个或多个天然存在的核苷酸用类似物替代，核苷酸间修饰诸如例如具有不带电荷连接(例如膦酸曱酯、磷酸三酯、磚酰胺酯(phosphoamidate)、氨基甲酸酯等)和具有带电荷连接(例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的修饰，含有悬垂模块(pendantmoiety)诸如例如蛋白质(例如核酸酶、毒素、抗体、信号肽、聚L-赖氨酸等)的修饰、具有嵌入剂(例如吖啶、补骨脂素等)的修饰、含有螯合剂(例如金属、放射性金属、硼、氧化性金属等)的修饰、含有烷化剂的修饰、具有经修饰连接(例如a端基异构核酸(anomericnucleicacid)等)的修饰、以及未修饰形式的多核苷酸。另外，通常存在于糖类中的任何羟基可以用例如膦酸(phosphonate)基团、磷酸(phosphate)基团替换，用标准保护基团保护，或活化以制备与别的核苷酸23的别的连接，或者可偶联至固体或半固体支持物。5'和3'末端OH可磷酸化或者用胺或1-20个碳原子的有机加帽基团模块取代。其它羟基也可衍生成标准保护基团。多核苷酸还可含有本领域普遍知道的核糖或脱氧核糖糖类的类似物形式，包括例如2'-氧-曱基-、2'-氧-烯丙基-、2'-氟-或2'-叠氮-核糖，碳环糖类似物，a-端基异构糖，差向异构糖诸如阿拉伯糖、木糖或来苏糖、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖，无环类似物及脱碱基核苷类似物诸如曱基核糖核苷。可用备选连接基团替换一个或多个磷酸二酯连接。这些备选连接基团包括但不限于以下实施方案，其中磷酸酯用P(O)S("硫代酸酯"(thioate))、P(S)S("二硫代酸酯"(dithioate))、(0)NR2("酰胺酯"(amidate))、P(O)R、P(O)OR'、CO或CH2("曱缩醛"(formacetal))替代，其中R或R'各自独立为H或者取代或未取代的烷基(1-20个C),任选含有醚(-O-)连接、芳基、烯基、环烷基、环烯基或芳烷基(araldyl)。并非多核苷酸中的所有连接都必需是相同的。前述描述适用于本文中提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。"寡核苦酸，，在用于本文时一般指短的多核苷酸，一般是单链，一般是合成的，长度一般但不是必需小于约200个核苷酸。术语"寡核苷酸"与"多核苷酸"并不互相排斥。上文关于多核苷酸的描述平等且完全适用于寡核苷酸。关于参考多肽序列的"氨基酸序列同一性百分比(％)"定义为对比序列并在必要时引入缺口以获取最大百分比序列同一性后，且不将任何保守替代视为序列同一性的一部分时，候选序列中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分率。为测定百分比氨基酸序列同一性目的的对比可以本领域技术范围内的多种方式进行，例如使用公众可得到的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可决定用于对比序列的适宜参数，包括对所比较序列全长获得最大对比所需的任何算法。然而，为了本发明的目的，％氨基酸序列同一性值是使用序列比较计算机程序ALIGN-2获得的。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech公司编写，源代码已经连同用户文档一起提交给美国版权局(USCopyrightOffice,WashingtonD.C.，20559)，并以美国版权注册号TXU510087注册。/>众可自Genentech公司(SouthSanFrancisco,Califomia)得到ALIGN-2程序，或者可以自源代码编译。ALIGN2程序应当编译成在UNIX操作系统，优选数码UNIXV4.0D上使用。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设定且不变。在采用ALIGN-2来比较氨基酸序列的情况中，给定氨基酸序列A相对于(to)、与(with)、或针对(against)给定氨基酸序列B的。/。氨基酸序列同一性(或者可表述为具有或包含相对于、与、或针对给定氨基酸序列B的某一。/。氨基酸序列同一性的给定氨基酸序列A)如下计算分凄tX/Y乘100其中X是由序列对比程序ALIGN-2在该程序的A和B对比中评分为相同匹配的氨基酸残基数，且其中Y是B中的氨基酸残基总数。可以领会，若氨基酸序列A的长度与氨基酸序列B的长度不相等，则A相对于B的。/。氨基酸序列同一性将不等于B相对于A的。/。氨基S臾序列同一性。除非另有具体说明，本文中所使用的所有°/。氨基酸序列同一性值都是依照上一段所述，使用ALIGN-2计算机程序获得的。术语"TAT226"在用于本文时指来自任何脊推动物来源的任何天然TAT226，包括哺乳动物，诸如灵长类动物(例如人)和啮齿类动物(例如小鼠和大鼠)，除非另有说明。该术语涵盖"全长"未加工的TAT226以及自细胞中加工得到的任何形式的TAT226。该术语还涵盖天然存在的TAT226变体，例如剪接变体或等位变体。"成熟形式"的TAT226指已经经历加工的TAT226形式，例如已经经历N-末端(例如信号序列)和/或C-末端切割和/或附着GPI锚的修饰。在一个实施方案中，"成熟形式，，的TAT226在细胞表面上表达。"抗体"(Ab)和"免疫球蛋白"(Ig)是具有相似结构特征的糖蛋白。虽然抗体展现出对特定抗原的结合特异性，但是免疫球蛋白包括抗体和一般缺乏抗原特异性的其它抗体样分子二者。后一类多肽例如由淋巴系统以低水平生成而由骨髓瘤以升高的水平生成。术语"抗体"和"免疫球蛋白"以最广义互换使用，包括单克隆抗体(例如全长或完整单克隆抗体)、多克隆抗体、单价抗体、多价抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体，只要它们展现出期望的生物学活性)，而且还可以包括某些抗体片段(如本文中更为详细描述的)。抗体可以是嵌合的、人的、人源化的和/或亲和力成熟的。术语"抗TAT226抗体"或"能结合TAT226的抗体"指能够以足够亲和优选的是，抗TAT226抗体结合无关、非TAT226蛋白的程度小于抗体对TAT22625结合的约10%,根据放射免疫测定法(RIA)的测量。在某些实施方案中，能结合TAT226的抗体具有^lpM、Sl00nM、SlOnM、^lnM、或^0.1nM的解离常数(Kd)。在某些实施方案中，抗TAT226抗体能结合在来自不同物种的TAT226间保守的TAT226表位。抗体的"可变区(variableregion)"或"可变i或(variabledomain)"才旨抗体重链或轻链的氨基末端结构域。重链的可变域可以称为"VH"。轻链的可变域可以称为"VL"。这些结构域一般是抗体的最易变部分且包含抗原结合位点。术语"可变的"指可变域中的某些部分在抗体序列间差异广泛且用于每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性的实情。然而，变异性并非均匀分布于抗体的整个可变域。它集中于轻链和重链可变域中称作互补决定区(CDR)或高变区(HVR)的三个区段。可变域中更加高度保守的部分称作框架区(FR)。天然重链和轻链的可变域各自包含四个FR区，它们大多采取p-折叠片构象，通过形成环状连接且在有些情况中形成(3-折叠片结构一部分的三个CDR连接。每条链中的CDR通过FR区非常接近的保持在一起，并与另一条链的CDR—起促成抗体的抗原结合位点的形成(参见Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版，NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.(1991))。恒定域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应器功能，诸如抗体依赖性细胞的细胞中抗体的参与。根据其恒定域的氨基酸序列，来自任何脊推动物物种的抗体(免疫球蛋白)的"轻链"可归入两种截然不同的型中的一种，称作卡巾自(K)和拉姆达(l)。根据其重链恒定域的氨基酸序列，抗体(免疫球蛋白)可归入不同的类。免疫球蛋白有五大类IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中有些可进一步分为亚类(同种型)，例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。将与不同类的免疫球蛋白对应的重链恒定域分别称作a、S、e、y和P。不同类别免疫球蛋白的亚基结构和三维构造是众所周知的，一般性描述于例如Abbasetal.,CellularandMol.Immunology,4thed.(2000)。抗体可以是抗体与一种或多种其它蛋白质或肽共价或非共价关联而形成的更大融合分子的一部分。术语"全长抗体"和"完整抗体"在本文中可互换使用，指基本上完整形式的抗体而非如下文所定义的抗体片段。该术语具体指重链包含Fc区的抗体。"抗体片段，，只包含完整抗体的一部分，其中所述部分保留该部分存在于完整抗体中时通常与之有关的至少一项、多至大多数或所有功能。在一个实施方案中，抗体片段包含完整抗体的抗原结合位点，如此保留结合抗原的能力。在另一个实施方案中，抗体片段，例如包含FC区的抗体片段，保留通常与FC区存在于完整抗体中时通常与之有关的至少一项生物学功能，诸如FcRn结合、抗体半衰期调控、ADCC功能和补体结合。在一个实施方案中，抗体片段是体内半衰期与完整抗体基本上相似的单价抗体。例如，这样的抗体片段可包含一个抗原结合臂且其与能够赋予该片段以体内稳定性的Fc序列相连。用木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称为"Fab"片段，各自具有一个抗原结合位点，及一个剩余的"Fc，，片段，其名称反映了它易于结晶的能力。胃蛋白酶处理产生一个F(ab')2片段，它具有两个抗原结合位点且仍能够交联抗原。"Fv"是包含完整抗原结合位点的最小抗体片段。在一个实施方案中，双链Fv种类由紧密、非共价结合的一个重链可变域和一个轻链可变域的二聚体组成。在单链Fv(scFv)种类中，一个重链可变域和一个轻链可变域可以通过柔性肽接头共价相连，使得轻链和重链在与双链Fv种类类似的"二聚体"结构中相结合。正是在这种构造中，各可变域的三个CDR相互作用而在VH-VL二聚体表面上确定了一个抗原结合位点。六个CDR共同赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使是单个可变域(或只包含对抗原特异的三个CDR的半个Fv)也具有识别和结合抗原的能力，只是亲和力低于完整结合位点。Fab片段包含重链和轻链可变域，而且还包含轻链的恒定域和重链的第一恒定域(CH1)。Fab'片段与Fab片段的不同之处在于重链CHl结构域的羧基末端增加了少数残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH是本文中对其中恒定域半胱氨酸残基携带游离硫醇基的Fab'的称谓。F(ab')2抗体片段最初是作为在Fab'片段之间有铰链半胱氨酸的成对Fab'片段生成的。还知道抗体片段的其它化学偶联。"单链Fv"或"scFv"抗体片段包含抗体的VH和V^结构域，其中这些结构域存在于一条多肽链上。一般而言，scFv多肽在VH与Vt结构域之间还包含多肽接头，使得scFv能够形成结合抗原的期望结构。关于scFv的综述参见Pluckthun，于ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies,vol.113,27RosenburgandMoore编,Springer-Verlag，NewYork,pp.269-315(1994)。术语"双抗体"指具有两个抗原结合位点的小型抗体片段，该片段在同一条多肽链(Vh-Vl)中包含相连的重链可变域(VH)和轻链可变域(VO。通过使用过短的接头使得同一条链上的两个结构域之间不能配对，迫使这些结构域与另一条链的互补结构域配对，从而产生两个抗原结合位点。双抗体可以是二价的或双特异性的。双抗体更完整的记载于例如EP404,097;W093/1161;Hudsonetal.(2003)淑Mo/.9:129-134;及Hollingeretal"Pro"Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448(1993)。三抗体(Triabody)和四抗体(tetrabody)也记载于Hudsonetal.(2003)Ato.MW.9:129-134。术语"单克隆抗体"在用于本文时指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各个抗体相同，除了可能以极小量存在的可能的突变，例如天然存在的突变。如此，修饰语"单克隆，，表明抗体不是分立的抗体的混合物的特征。在某些实施方案中，此类单克隆抗体典型的包括包含结合靶物的多肽序列的抗体，其中靶物结合多肽序列是通过包括从众多多肽序列中选择单一耙物结合多肽序列在内的过程得到的。例如，选择过程可以是从众多克隆诸如杂交瘤克隆、噬菌体克隆或重组DNA克隆的集合中选择独特克隆。应当理解，所选择的靶物结合序列可进一步改变，例如为了提高对靶物的亲和力、将靶物结合序列人源化、提高其在细胞培养物中的产量、降低其在体内的免疫原性、创建多特异性抗体等，而且包含改变后的靶物结合序列的抗体也是本发明的单克隆抗体。与典型的包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，单克隆抗体制备物的每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。在它们的特异性外，单克隆抗体制备物的优势在于它们通常未受到其它免疫球蛋白的污染。修饰语"单克隆"表明抗体从基本上同质的抗体群获得的特征，不应解释为要求通过任何特定方法来生产抗体。例如，将依照本发明使用的单克隆抗体可通过多种技术来生成，包括例如杂交瘤法(例如Kohler"a/.,A^wre256:495(1975);Harlowa/.，Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,2nded.1988;Hammeiiinga/.，于MonoclonalAntibodiesandT陽CellHybridomas,563-681，Elsevier，N.Y.，1981)、重组DNA法(参见例如美国专利No.4,816,567)、噬菌体展示技术(参见例如Clackson"a/.，淑匿352:624-628(1991);Marks"a/.，Mo/.脂.222:581-597(1992);Sidhua/"/Mo/.338(2):299-310(2004);Leeda/.,/Mo/.所o/.340(5):1073-1093(2004);Fellouse,Prac.TVa/.爿cac/.5W.tTS^101(34):12467-12472(2004);Lee"a/.,/画画/.M"/zoofe284(1-2):119-132(2004))、及用于在具有部分或整个人免疫球蛋白基因座或编码人免疫球蛋白序列的基因的动物中生成人或人样抗体的技术(参见例如WO98/24893;WO96/34096;WO96/33735;WO91/10741;Jakobovitsea/"Ato/,Jcad5W.90:2551(1993);Jakobovits"a/.，Atow362:255-258(1993);Bruggemann"/，/"//wm/w.7:33(1993);美国专利No.5,545,807;5,545,806;5,569,825;5,625,126;5,633,425;5,661,016;Marks"历o/rec/z"o/，10:779-783(1992);Lonberg"a/.,A^wre368:856-859(1994);Morrison,A^ww368:812-813(1994);Fishwild"a/,，脂廳肠tec/mo/.14:845-851(1996);Neuberger,TVaZ^eB/ofec/zo/.14:826(1996);LonbergandHuszar,/"few./mm"rto/.13:65-93(1995))。单克隆抗体在本文中明确包括"嵌合"抗体，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们展现出期望的生物学活性(美国专利No.4,816,567;MorrisonWWa//.爿cadL481:6851-6855(1984))。非人(例如鼠)抗体的"人源化"形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗体。在一个实施方案中，人源化抗体指人免疫球蛋白(受体抗体)中的高变区残基用具有期望特异性、亲和力和/或能力的非人物种(供体抗体)诸如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物的高变区残基替换的免疫球蛋白。在有些情况中，将人免疫球蛋白的框架区(FR)残基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体或供体抗体中没有找到的残基。进行这些修饰可以是为了进一步改进抗体的性能。一般而言，人源化抗体将包含至少一个、通常两个基本上整个如下可变域，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋白的高变环，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体任选还将包含至少部分免疫球蛋白恒定区(Fc),通常是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节参见JonesWa/.,A^wre321:522-525(1986);Riechmann"a/.,Atowre332:323-329(1988);禾口Presta,29CwrO/J.2:593-596(1992)。还可参见以下综述及其引用的参考文献VaswaniandHamilton,Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105-115(1998》Harris,Biochem.Soc.Transactions23:1035-1038(1995》HurleandGross,Curr.Op.Biotech.5:428-433(1994)。"人抗体"指拥有与由人生成的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列和定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。术语"高变区"、"HVR"或"HV"在用于本文时指抗体可变域中序列上高度可变和/或形成结构上定义的环的区域。通常，抗体包含六个高变区三个在VH中(Hl、H2、H3)，三个在VL中(Ll、L2、L3)。在天然抗体中，H3和L3展示这六个高变区的最大多样性，而且认为特别是H3在贝武予抗体以精密特异性中发挥独特作用。Xuetal.(2000)/mm""*13:37-45;JohnsonandWu(2003)于她f/zo(is1Mo/ecMAar历o/c^gy248:1-25(Lo,ed"HumanPress,Totowa,NJ)。事实上，仅由重链组成的天然存在camelid抗体在缺乏轻链时是有功能的且稳定的。Hamers-Cast函anetal.(1993)胸脏363:446-448;Sheriffetal,(1996)淑脏3:733-736。本文中使用且涵盖许多高变区的4又述。Kabat互补决定区(CDR)是以序列变异性为基础的，而且是最常用的(Kabat"a/,'5^wewc&^o/o//wwwo/og/ca//"fern,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.(1991))。Chothia改为指结构环的位置(ChothiaandLeskJ.Mo/.AW.196:901-917(1987))。AbM高变区代表KabatCDR与Chothia结构环之间的折衷，而且得到OxfordMolecular的AbM抗体建模软件的使用。"接触"高变区是以对可获得的复合物晶体结构的分析为基础的。下文记录了这些高变区中每一个的残基。环KabatAbMChothia接触L24-L34L24-L34L26-I32L30-L36L50-L56L50-L56L50-L52L46-L55L3L89-L97L89-L97L91-L96L89-L96HIH31-H35BH26-H35BH26-H32H30-H35B(Kabat编号)<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>高变区可包括如下"延伸的高变区":VL中的24-36或24-34(Ll)、46-56或50-56(L2)和89-97或89-96(L3)及VH中的26-35(Hl)、50-65或49-65(H2)和93-102、94-102或95-102(H3)。对于这些定义中的每一个，可变域残基是依照Kabat等，见上文编号的。"框架"或"FR"残基指可变域中除本文中所定义的高变区残基外的那些残基。术语"依照Kabat的可变域残基编号"或"依照Kabat的氨基酸位置编号"及其哭体指Kabatetal"SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.(1991)中的抗体编辑用于重链可变域或轻链可变域的编号系统。使用此编号系统，实际的线性氨基酸序列可包含较少或另外的氨基酸，对应于可变域FR或HVR的缩短或插入。例如，重链可变域可包含H2残基52后的单一氨基酸插入(依照Kabat为残基52a)及重链FR残基82后的插入残基(例如依照Kabat为残基82a、82b和82c等)。给定抗体的Kabat残基编号可通过将抗体序列与"标准"Kabat编号序列对比同源区来确定。"亲和力成熟的"抗体指在抗体的一个或多个HVR中具有一处或多处改变、导致该抗体对抗原的亲和力与没有这些改变的亲本抗体相比有所改进的抗体。在一个实施方案，亲和力成熟的抗体具有纳摩尔或甚至皮摩尔量级的对靶抗原的亲和力。亲和力成熟的抗体可通过本领域已知规程来生成。Marks"a/.，A'o/rec/ww/ogy10:779-783(1992)记载了通过VH和VL结构域改组进行的亲和力成熟。以下文献记载了HVR和/或框架残基的随机诱变Barbas"，尸rac.Ato.爿c^/.5W.t75L491:3809-3813(1994);Schier&a/.，169:147-155(1995);Yelton"a/"/謂画/,155:1994-2004(1995);Jackson&a/.，《//mww朋/.154(7):3310-9(1995);Hawkins&o/.，/Mo/.说o/.226:889-896(1992)。"阻断性"抗体或"拮抗性"抗体指抑制或降低其所结合的抗原的生物活性。"激动性抗体"在用于本文时指模拟目的多肽的至少一项功能性活性的抗体。抗体"效应器功能"指那些可归于抗体Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)且随抗体同种型而变化的生物学活性。抗体效应器功能的例子包括Clq结合和补体依赖性细胞毒性；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC);吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体)下调；和B细胞活化。"Fc受体"或"FcR"描述结合抗体Fc区的受体。在有些实施方案中，FcR是天然人FcR。在有些实施方案中，FcR是结合IgG抗体的FcR(y受体)，包括FqRI、FcYRII和FcYRin亚类的受体，包括那些受体的等位变体和可变剪接形式。FcyRII受体包括FcyRIIA("活化受体")和FcyRIIB("抑制受体")，它们具有相似的氨基酸序列，区别主要在其胞质结构域中。活化受体FcyRHA在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受体FcYRIIB在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的抑制基序(ITIM)(参见Dagron,/历w丽o/.15:203-234(1997))。FcR的综述参见RavetchandKinet，yi朋w.Wev.7w附鹏o/.9:457-492(1991);Capelea/.，Immunomethods4:25-34(1994);deHaas"a/"J.丄a6.C"".Med126:330-41(1995)。术语"FcR，，在本文中涵盖其它FcR，包括那些未来将会鉴定的。术语"Fc受体"或"FcR"还包括新生儿受体，FcRn,它负责将母体IgG哞争牙多纟合月台JL(Guyer"a/.,乂/mmww/.117:587(1976)详口Kim"a/.,//mmimo/.24:249(1994))和调节免疫球蛋白的动态平衡。测量对FcRn的结合的方法是已知的(参见例如Ghetie1997，Hinton20(K)。可测定人FcRn高亲和力结合多肽与人FcRn的体内结合和血清半衰期，例如在表达人FcRn的转基因小鼠或经转染的人细胞系中，或者在施用了Fc变体多肽的灵长类动物中。WO00/42072(Presta)记载了对FcR的结合得到改良或消除的抗体变体。将该专利出版物的内容明确收入本文作为参考。还可参见Shieldsetal.J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。"人效应细胞，，指表达一种或多种FcR并行使效应器功能的白细胞。在某些实施方案中，该细胞至少表达FcyRIII并行使ADCC效应器功能。介导ADCC的人白细胞的例子包括外周血单个核细胞(PBMC)、天然杀伤(NK)纟田32胞、单核细胞、细胞毒性T细胞和嗜中性粒细胞。效应细胞可以从其天然来源分离，例如血液。"抗体依赖性细胞介导的细胞毒性"或"ADCC"指其中结合到某些细胞毒性细胞(例如天然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)上存在的Fc受体(FcR)上的分泌型Ig使得这些细胞毒性效应细胞能够特异性结合携带抗原的耙细胞，随后用细胞毒素杀死耙细胞的细胞毒性形式。介导ADCC的主要细胞，NK细胞，只表达FcyRin,而单核细胞表达FcYRI、FcyRII和FcyRIII。RavetchandKinet,iev./mmw"o/.9:457-92(1991)第464页表3总结了造血细胞上的FcR表达。为了评估目的分子的ADCC活性，可进行体外ADCC测定法，诸如美国专利No.5，500,362或5，821，337或Presta美国专利No.6，737，056中所记载的。可用于此类测定法的效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。或者/另外，可在体内评估目的分子的ADCC活性，例如在动物模型中，诸如Clynes&a/.,/WJS卩OS^95:652-656(1998)中所披露的。"补体依赖性细胞毒性"或"CDC"指存在补体时对靶细胞的溶解。经典补体途径的激活是由补体系统第一组分(Clq)结合其关联抗原所结合的抗体(适宜亚类的)起始的。为了评估补体激活，可进行CDC测定法，例如如Gazzano-Santoro"a/.，J./mmww/.We^zoA202:163(1996)中所i己载的。具有改变的Fc区氨基酸序列及提高的或降低的Clq结合能力的多肽变体加载于美国专利No.6，194，551B1和W099/51642。将那些专利出版物的内容明确收入本文作为参考。还可参见Idusogie^a/.■//www"o/.164:4178-4184(2000)。术语"含Fc区多肽"指包含Fc区的多肽，诸如抗体或免疫粘附素。Fc区的C-末端赖氨酸(依照EU编号系统的残基447)可以消除，例如在纯化多肽的过程中或者通过重组改造编码多肽的核酸。因此，依照本发明包含具有Fc区的多肽的组合物可包含具有K447的多肽、消除了所有K447的多肽、或具有与没有K447残基的多肽的混合物。就本文目的而言，"受体人框架"是包含衍生自人免疫球蛋白框架或人共有框架的VL或VH框架之氨基酸序列的框架。"衍生自"人免疫球蛋白框架或人共有框架的受体人框架可包含与之相同的氨基酸序列，或者可包含预先存在的氨基酸序列变化。在有些实施方案中，预先存在的氨基酸变化的数目是33IO个或更少、9个或更少、8个或更少、7个或更少、6个或更少、5个或更少、4个或更少、3个或更少、2个或更少。当VH中存在预先存在的氨基酸变化时，优选那些变化只存在于71H、73H和78H中的三个、两个或一个位置；例如，位于那些位置的氨基酸残基可以是71A、73T和/或78A。在一个实施方案中，VL受体人框架在序列上与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。"人共有框架，，指代表人免疫球蛋白VL或VH框架序列选集中最常见的氨基酸残基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列选集来自可变区序列亚型。通常，序歹'J亚型是如Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD(1991)中的亚型。在一个实施方案中，对于VL，亚型是如Kabat等人，见上文中的亚型Kl。在一个实施方案中，对于VH，亚型是如Kabat等人，见上文中的亚型III。"VH亚型III共有框架"包含从Kabat等人，见上文中的可变重链亚型III中的氨基酸序列获得的共有序列。在一个实施方案中，VH亚型III共有框架氨基酸序列包含下列各序列的至少一部分或整个全部EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(SEQIDNO:50)-HI-WVRQAPGKGLEWV(SEQIDNO:51)-H2-WGQGTLVTVSS(SEQIDNO:35)。"VL亚型I共有框架，，包含从Kabat等人，见上文中的可变轻链K亚型I中的氨基酸序列获得的共有序列。在一个实施方案中，VL亚型I共有框架氨基酸序列包含下列各序列的至少一部分或整个DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQIDNO:60)-Ll-WYQQKPGKAPKLLIY(SEQIDNO:61)-L2-FGQGTKVEIK(SEQIDNO:63)。"结合亲和力"通常指分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间全部非共价相互作用总和的强度。除非另有说明，在用于本文时，"结合亲和力"指反映结合对的成员(例如抗体与抗原)之间l:l相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可用解离常数(Kd)来表述。亲和力可通过本领域知道的常用方法来测量，包括本文中所描述的。低亲和力抗体通常緩慢的结合抗原且趋于容易解离，而高亲和力抗体通常更快速的结合抗原且趋于保持更长时间的结合。本领域知道测量结合亲和力的多种方法，其中任一种都可用于本发明的目的。下文描述了具体的示例性实施方案。在一个实施方案中，依照本发明的"Kd，，或"Kd值"是通过如下测定法所述使用Fab型式的目的抗体及其抗原进行的放射性标记抗原结合测定法(RIA)来测量的通过在存在未标记抗原的滴定系列的条件下，用最小浓度的(125i)标记抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体包被的平板捕捉结合的抗原来测量Fab对抗原的溶液结合亲和力(Chen，etal.,JMolBiol293:865-881(1999))。为了确定测定条件，用50mM碳酸钠(pH9.6)中的5吗/ml捕捉用抗Fab抗体(CappelLabs)包被微量滴定板(Dynex)过夜，随后用PBS中的2。/。(w/v)牛血清清蛋白在室温(约23。C)封闭2-5小时。在非吸附平板(Nunc#269620)中，将100pM或26pM[1251]-抗原与连续稀释的目的Fab混合(例如与Prestaetal.,CancerRes.57:4593-4599(1997)中抗VEGF抗体，Fab-12的评估一致)。然后将目的Fab保温过夜；不过，保温可持续更长时间(例如约65个小时)以保证达到平衡。此后，将混合物转移至捕捉板以进行室温保温(例如l小时)。然后除去溶液，并用含0.1%Tween-20的PBS洗板8次。平板干燥后，加入150(1丄/孔闪烁液(MicroScint-20;Packard),然后在Topcount伽马计数器(Packard)上对平板计数10分钟。选择各Fab给出小于或等于最大结合之20%的浓度用于竟争性结合测定法。依照另一实施方案，Kd或Kd值是通过表面等离振子共振测定法使用BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000(BIAcore，Inc.,Piscataway,NJ)在25。C使用固定化抗原CM5芯片在约10个响应单位(RU)测量的。简而言之，依照供应商的说明书用盐酸W-乙基-iV'-(3-二曱基氨基丙基)-碳化二亚胺(EDC)和7V-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧曱基化右旋糖苦生物传感器芯片(CM5,BIAcoreInc.)。用10mM乙酸钠pH4.8将抗原稀释至5吗/ml(约0.2(iM),然后以5pl/分钟的流速注入至获得约10个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入抗原后，注入1M乙醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学测量，在25。C以约25pl/分钟的流速注入在含0.05%Tween-20的PBS(PBST)中两倍连续稀释的Fab(0.78nM至500nM)。使用筒单一对一朗格繆尔(Langmuir)结合模型(BIAcoreEvaluationSoftwareversion3.2)通过同时拟合结合和解离传感图计算结合速率(kon)和解离速率(koff)。平衡解离常数(Kd)以比率k()ff/k(jn计算。参见例如Chen,Y.，etal.,JMolBiol293:865-881(1999)。如果根据上文表面等离振子共振测定法，结合速率超过106M-1s-1,那么结合速率可使用荧光淬灭技术来测定，即根据分光计诸如配备了断流装置的分光光度计(astop-flowequippedspectrophometer)(AvivInstruments)或8000系歹寸SLM-Aminco分光光度计(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯的测量，在存在浓度渐增的抗原的条件下，测量PBS,pH7.2中的20nM抗抗原抗体(Fab形式)在25。C的荧光发射强度(激发二295nm;发射二340nm，16nm带通)的升高或降低。依照本发明的"结合速率，，(on-rate，rateofassociation,associationrate)或"k。n"也可如上所述使用BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000系统(BIAcore，Inc.:Piscataway，NJ)来测定。何疾患或疾病。这包括慢性和急性病症，包括那些使哺乳动物趋向于所讨论病症的病理状况。本文中待治疗病症的非限制性例子包括癌性疾患，诸如肿瘤(tumor)，例如癌瘤(carcinoma)(上皮月中瘤)和母细月包瘤(blastomas)(胚月台组织衍生的肺瘤)，及有些实施方案中的卵巢癌、子宫癌(包括子宫内膜癌)、脑肿瘤(例如星形细胞瘤(astrocytoma)和神经力交质瘤)、和肾癌，包括肾胚细胞瘤(nephroblastoma)(例如维尔姆斯氏肿瘤(Wilms，tumor))。术语"细胞增殖性病症"和"增殖性病症"指与一定程度的异常细胞增殖有关的病症。在一个实施方案中，细胞增殖性病症指癌症。"月中瘤，，在用于本文时指所有肿瘤性细胞生长和增殖，无论是恶性的还是良性的，及所有癌前(pre-cancerous)和癌性纟田胞和组织。术语"癌症"、"癌性"、"细胞增殖性紊乱"、"增殖性紊乱"和"肿瘤"在本文中提到时并不互相排斥。术语"癌症"和"癌性"指向或描述哺乳动物中特征通常为细胞生长/增殖不受调控的生理疾患。癌症的例子包括但不限于癌、淋巴瘤(例如何杰金氏(Hodgkin)淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤)、母细胞瘤、肉瘤和白血病。此类癌症的更具体例子包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌、肺的鳞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、神经胶质瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌(livercancer)、膀胱癌、肝瘤(hepatoma)、乳腺癌、结肠癌、结36肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、曱状腺癌、肝癌(hepaticcarcinoma)、白血病和其它淋巴增生性病症、及各种类型的头和颈癌。在用于本文时，"治疗"(及变化形式，诸如"处理"或"处置")指试图改变所治疗个体或细胞的自然进程的临床干预，可以是为了预防或在临床病理学的进程中进行。治疗的期望效果包括预防疾病的发生或复发、緩解症状、削弱疾病的任何直接或间接病理学后果、预防转移、减缓疾病进展的速率、改善或减轻疾病状态、及免除或改善预后。在有些实施方案中，本发明的抗体用于延迟疾病或病症的发生/发展，或用于减緩疾病或病症的进展。"个体"指脊推动物。在某些实施方案中，脊推动物指哺乳动物。哺乳动物包括，但不限于，牲畜(诸如牛)、运动用动物、宠物(诸如猫、犬、和马)、灵长类动物、小鼠和大鼠。在某些实施方案中，哺乳动物是人。"有效量"指在必需的剂量和时间上有效实现期望的治疗或预防效果的量。本发明的物质/分子的"治疗有效量"可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重及该物质/分子在个体中引发期望应答的能力等因素而变化。治疗有效量涵盖该物质/分子的治疗有益效果胜过任何有毒或有害后果的量。"预防有效量"指在必需的剂量和时间上有效实现期望的预防效果的量。通常而非必然，由于预防剂量是在疾病发作之前或在疾病的早期用于受试者的，因此预防有效量将低于治疗有效量。术语"细胞毒剂"在用于本文时指抑制或防止细胞功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。该术语意图包括放射性同位素，例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re'88、Sm153、Bi212、P32、Pb犯和Lu的放射性同位素；化疗剂，例如曱氨蝶呤(methotrexate)、阿霉素(adriamycin)、长春花生物碱类(vincaalkaloids)(长春新减(vincristine)、长春减(vinblastine)、依托泊苦(etoposide))、多柔比星(doxorubicin)、美法仑(melphalan)、丝裂霉素(mitomycin)C、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、柔红霉素(daunorubicin)或其它嵌入剂；酶及其片段，诸如溶核酶；抗生素；和毒素，诸如小分子毒素或者细菌、真菌、植物或动物起源的酶活毒素，包括其片段和/或变体；及下文披露的各种抗肿瘤药或抗癌药。下文记载了其它细胞毒剂。杀肿瘤药引起肿瘤细胞的破坏。"毒素，，指能够对细胞的生长或增殖产生有害效果的任何物质。"化疗剂"指可用于治疗癌症的化学化合物。化疗剂的实例包括烷化剂类(alkylatingagents)，诸如塞替派(thiotepa)和CYTOXAN环磷酰胺(cyclophosphamide);石黄酸烷基酉旨类(alkylsulfonates),i者如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)禾口p底泊舒凡(piposulfan);氮丙卩定类(aziridines)，i者3口苯佐替派(benzodepa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedepa)和乌瑞替派(uredepa);乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撑磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三乙撑石克代确酰胺(triethylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylolomelamine);番篇枝内酯类(acetogenin)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone));3-9-四氢大麻酚(tetrahydrocannabinol)(屈大麻酚(dronabinol),MARINOL);(3-4立帕酉昆(lapachone);拉帕醇(lapachol);秋水仙素类(colchicines);白桦月旨酸(betulinicacid);喜树石咸(camptothecin)(包括合成类似、物4乇泊康(topotecan)(HYCAMTIN)、CPT-11(伊立替康(irinotecan),CAMPTOSAR)、乙酰喜树碱、东莱菪亭(scopoletin)和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素(bryostatin);callystatin;CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin);鬼臼酸(podophyllinicacid);替尼泊苦(teniposide);隐藻素类(cryptophycins)(特另ll是隐藻素1和隐藻素8);多拉司他汀(dolastatin);duocarmycin(包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1);艾榴塞洛素(eleutherobin);pancratistatin;sarcodictyin;〉'每纟帛承卩素(spongistatin);氛齐类(nitrogenmustards),"i者长口笨丁酉吏氣芥(chlorambucil)、茶氮芥(chlomaphazine)、月旦石粦酰胺(cholophosphamide)、雄莫司汀(estramustine)、异环石粦酰胺(ifosfamide)、双氯乙基曱胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamineoxidehydrochloride)、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥月旦甾醇(phenesterine)、》发尼莫司汀(prednimustine)、曲石粦胺(trofosfamide)、尿嘧口定氮芥(uracilmustard);亚硝'脲类(nitrosoureas),i者如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、一畐莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimustine);抗生素类，诸如烯二炔类抗生素(enediyne)(如加利车霉素(calicheamicin)，尤其是加利车霉素yll和加利车霉素o)il(参见例如Agnew,Chem.Intl.Ed.Engl.33:183-186(1994));蒽环类抗生素(dynemicin),包括dynemicinA;埃斯波霉素38(esperamicin);以及新制癌素(neocarzinostatin)发色团和相关色蛋白烯二炔类抗生素发色团)、阿克拉霉素(aclacinomycin)、放线菌素(actinomycin)、氨茴霉素(anthmmycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋红霉素(carminomydn)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、；也4乇比星(detorubicin)、6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸、ADRIAMYCIN⑧多柔比星(doxorubicin)(包括吗啉代多柔比星、氰基吗啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星(epimbicin)、依索t匕星(esorubicin)、^f尹达t匕星(idarubicin)、麻西罗霍素(marcellomycin)、丝裂審素类(mitomycins)诸如丝裂霉素C、霉酚酸(mycophenolicacid)、诺拉霉素(nogalamycin)、揪揽霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、potfiromycin、噪呤霉素(puromycin)、三纟失阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、《连黑菌素(streptonigrin)、4连佐星(streptozocin)、杀结4亥菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司4也丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin);^t^i射对勿类，i者如曱氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU);叶酸类似物，诸如二曱叶酸(denopterin)、曱氨虫莱t令、虫泉酰三谷氨酸(pteropterin)、三曱曲沙(trimetrexate);。票"令类似物，it如氟达才立滨(fludarabine)、6-5克基噤口令(mercaptopurine)、辟l口米噤p令(thiamiprine)、硫鸟口票呤(thioguanine);嘧咬类似物，诸如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双脱氧尿苦(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苦(floxuridine);力,;敫素类，i者如卡鲁睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolonepropionate)、表石克名,醇(epitiostano1)、美力食烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone);抗肾上腺类，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米^6坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane);叶酸补充齐'J，诸如亚叶酸(folinicacid);醋葡醛内酯(aceglatone);醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside);氨基乙酰丙酉臾(aminolevulinicacid);恩、尿。密口定(eniluracil);安p丫口定(amsacrine);bestrabucil;t匕生群(bisantrene);依达曲沙、(edatraxate);;也石舞酰胺(defosfamide);i也美可辛(demecolcine);;也吖醌(diaziquone);elfornithine;依利醋按(elliptiniumacetate);埃坡霉素(epothilone);依托格鲁(etoglucid);硝酸镓；羟脲(hydroxyurea);香菇多糖(lentinan);氯尼达明(lonidamine);美登木素生物石成类(maytansinoids),i者如美登素(maytansine)和美登醇(maytansinol);安丝菌素(ansamitocin);米4乇脈月宗(mitoguazone);米托蒽醌(mitoxantrone);莫口底达醇(mopidamol);二胺硝吖口定(nitracrine);喷司他丁(pentostatin);蛋氨氮芥(phenamet);p比柔比星(pirarubicin);洛索蒽醌(losoxantrone);2-乙基酰肼(ethylhydrazide);丙卡巴肼(procarbazine);PSK多糖复合物(JHSNaturalProducts,Eugene,OR);雷佐生(razoxane);根霉素(rhizoxin);西索菲兰(sizofiran);虫累S走4者(spirogermanium);纟田交《连孑包菌酉同酉交(tenuazonicacid);三亚胺醌(triaziquone);2,2'，2"-三氯三乙胺；单端孑包菌素类(trichothecenes)(尤其是T-2毒素、祝孢菌素(verrucarin)A、杆孢菌素(roridin)A和蛇行菌素(anguidin));乌拉坦(urethan);长春地辛(vindesine)(ELDISINE,FILDESIN);达卡巴。秦(dacarbazine);甘露醇氮芥(mannomustine);二溴甘露醇(mitobronitol);二溴卫矛醇(mitolactol);。底泊溴烷(pipobroman);gacytosine;阿糖月包苦(arabinoside)("Ara-C，，)；塞替派(thiotepa);类紫杉醇(taxoids)，例如TAXOL⑧紫杉醇(paclitaxel)(Bristol-MyersSquibbOncology,Princeton,N丄)、ABRAXANEtm不含克列莫佛(Cremophor),清蛋白改造的纳米颗粒剂型紫杉醇(AmericanPharmaceuticalPartners,Schaumberg,Illinois)和TAXOTERE⑧多西他塞(docetaxel)(Rh6ne-PoulencRorer,Antony,France);苯丁酸氮芥(chlorambucil);吉西他滨(gemcitabine)(GEMZAR);6-石克鸟嘌p令(thioguanine);巯基口票p令(mercaptopurine);曱氨虫莱p令(methotrexate);4白类似物，诸如顺柏(cisplatin)和卡柏(carboplatin);长春石成(vinblastine)(VELBAN);铂；依托泊苷(et叩oside)(VP-16);异环磷酰胺(ifosfamide);米托蒽醌(mitoxantrone);长春新石威(vincristine)(ONCOVIN);奥沙利柏(oxaliplatin);亚叶酸(leucovorin);长春瑞滨(vinorelbine)(NAVELBINE);能灭瘤(novantrone);依达曲沙(edatrexate);道诺霉素(daunomycin);氛基蝶呤(aminopterin);伊本膦酸盐(ibandronate);拓朴异构酶抑制剂RFS2000;二氟甲基鸟氨酸(DMFO);类维A酸(retinoids),诸如维A酸(retinoicacid);卡培他滨(capecitabine)(XELODA);任何上述物质的药学可接受盐、酸或衍生物；以及两种或多种上述物质的组合，诸如CHOP(环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼4公龙联合疗法的缩写)和FOLFOX(奥沙利铂(ELOXATINTM)联合5-FU和亚叶酸的治疗方案的缩写)。该定义还包括作用为调节、降低、阻断、或抑制可促进癌生长的激素效果的抗激素剂，且常常是系统或全身治疗的形式。它们自身可以是激素。实40例包括抗雌激素类和选择性雌激素受体调节剂类(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADEX⑧他莫昔芬)、EVISTA⑧雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和FARESTON托瑞米芬(toremifene);抗孕酮类；雌激素受体下调剂类(ERD);功能为抑制或关闭卵巢的药剂，例如促黄体生成激素释^:激素(LHRH)激动剂，诸如LUPRON⑧和ELIGARD醋酸亮丙瑞林(leuprolideacetate)、醋酸戈舍瑞林(goserelinacetate)、醋酉臾布舍^^木(buserelinacetate)和曲普瑞一木(triptorelin);其它才元雄激素类，诸如氟他米特(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)和比卡米特(bicalutamide);及抑制在肾上腺中调节雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制剂，诸如例如4(5)-咪唑、氨鲁米特(aminoglutethimide)、MEGASE⑧醋酸曱地孕酮(megestrolacetate)、AROMASIN依西美坦(exemestane)、福美坦(formestane)、法倔唑(fadrozole)、RIVISOR⑧伏罗唑(vorozole)、FEMARA来曲唑(letrozole)和ARIMIDEX⑧阿那曲唑(anastrozole)。另夕卜，化疗剂的这种定义包4舌二膦酸盐类(bisphosphonates)，i者如氯膦酸盐(clodronate)(例如BONEFOS⑧或OSTAC⑧)、DIDROCAL⑧依替膦酸钠(etidronate)、NE-58095、ZOMETA⑧哇来膦酸/峻来膦酸盐(zoledronicacid/zoledronate)、FOSAMAX阿伦膦酸盐(alendronate)、AREDIA⑧帕米膦酸盐(pamidronate)、SKELID⑧替鲁膦酸盐(tiludronate)或ACTONEL⑧利塞膦酸盐(risedronate);以及曲沙他滨(troxacitabine)(1，3-二氧戊环核苦胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，特别是抑制涉及粘着细胞增殖的信号途经中的基因表达的反义寡核苦酸，诸如例如PKC-a、Raf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R);疫苗，诸如THERATOPE⑧疫苗和基因疗法疫苗，例如ALLOVECTIN疫苗、LEUVECTIN疫苗和VAXID⑧疫苗；LURTOTECAN⑧拓朴异构酶l抑制剂；ABARELIXrmRH;lapatinibditosylate(ErbB-2和EGFR双重酪氨酸激酶小分子抑制剂，也称为GW572016);及任何上述物质的药学可接受盐、酸或衍生物。"生长抑制剂"在用于本文时指在体外或在体内抑制细胞(诸如表达TAT226的细胞)生长的化合物或组合物。因此，生长抑制剂可以是显著降低处于S期的细胞(诸如表达TAT226的细胞)百分比的药剂。生长抑制剂的例子包括阻断细胞周期行进(处于S期以外的位置)的药剂，诸如诱导G1停滞和M期停滞的药剂。经典的M期阻断剂包括长春药类(vincas)(长春新碱(vincristine)和长春碱(vinblastine))、紫杉烷类(taxanes)、和拓朴异构酶II抑制齐'J诸如多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、依托泊苷(etoposide)和博来霉素(bleomycin)。那些阻滞G1的药剂也溢出进入S期停滞，例如DNA烷化剂类诸如他莫昔芬(tamoxifen)、泼尼松(prednisone)、达卡巴口秦(dacarbazine)、双氯乙基曱胺(mechlorethamine)、顺铂(cisplatin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、5-氟尿嘧咬(5-fluorouracil)和ara-C。更多信息可参见《TheMolecularBasisofCancer》，Mendelsohn和Israel编，第1章，题为"Cellcycleregulation,oncogenes,andantieioplasticdrugs",Murakaini等人，WBSaunders,Philadelphia,1995，尤其是第13页。紫杉烷类(紫杉醇(paclitaxel)和多西他赛(docetaxel))是衍生自紫杉树的抗癌药。衍生自欧洲紫杉的多西他赛(TAXOTERE⑧，Rhone-PoulencRorer)是紫杉醇(TAXOL⑧，Bristol-MyersSquibb)的半合成类似物。紫杉醇和多西他赛促进由微管蛋白二聚体装配成微管并通过防止解聚使微管稳定，导致对细胞中有丝分裂的抑制。术语"胞内代谢物"指由细胞内对抗体-药物偶联物(ADC)的代谢过程或反应产生的化合物。所述代谢过程或反应可以是酶促过程，诸如ADC的肽接头的蛋白水解切割、或官能基诸如腙、酯或酰胺的水解。胞内代谢物包括但不限于在进入、扩散、摄取或转运进入细胞后经历胞内切割的抗体和游离药物。术语"胞内切割的"和"胞内切割"指细胞内对抗体-药物偶联物(ADC;)的代谢过程或反应，由此共价附着，即药物模块(D)与抗体(Ab)之间的接头被打断，导致在细胞内游离药物与抗体解离。ADC别切割的模块因而是胞内代谢物。术语"生物利用度，，指施用于患者的给定量的药物的系统利用度(即血液/血浆水平)。生物利用度是表明药物从所施用的剂量形式到达大循环的时间(速率)和总量(程度)二者度量的绝对项。术语"细胞毒活性"指抗体-药物偶联物或抗体-药物偶联物的胞内代谢物的细胞杀伤、细胞抑制、或生长抑制效果。细胞毒活性可以表述为ICso值，即半数细胞存活时每单位体积的浓度(摩尔或质量)。"烃基"指含正、仲、叔或环碳原子的Cl-Cl8烃(碳氢化合物)。实例有曱基(Me,-CH3)、乙基(Et,-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr，正丙基，-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr,异丙基，-CH(CH3)2)、l-丁基(n-Bu，正丁基,-CH2CH2CH2CH3)、2-曱基-l-丙基(i-Bu，异丁基，-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu，仲丁基，-CH(CH3)CH2CH3)、2-曱基-2-丙基(〖-Bu，赵丁基，-C(CH3)3)、l-戊基(n-戊基，-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-曱基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-曱基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-曱基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-曱基-l-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、l画己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3》、2-曱基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-曱基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-曱基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3画曱基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-曱基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二曱基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3。术语"CrCs烃基"在用于本文时指具有1-8个碳原子的直链或分支的、饱和的或不饱和的烃。代表性的"d-C8烃基"包括但不限于-曱基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基、-正己基、-正庚基、-正辛基、-正壬基和-正癸基；而分支的C「C8烃基包括但不限于-异丙基、-仲丁基、-异丁基、-叔丁基、-异戊基、2-曱基丁基，不饱和的C广C8烃基包括但不限于-乙烯基、-丙烯基、-l-丁烯基、-2-丁烯基、-异丁婦基、-l-戊烯基、-2-戊烯基、-3-曱基-1-丁烯基、-2-曱基-2-丁烯基、-2,3-二曱基-2-丁烯基、己烯基、2-己烯基、3-己烯基、-乙炔基、-丙炔基、-l-丁炔基、-2-丁炔基、-l-戊炔基、-2-戊炔基、-3-曱基-l-丁炔基。曱基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基、异己基、2-甲基戊基、3-曱基戊基、2，2-二曱基丁基、2,3-二曱基丁基、2,2-二曱基戊基、2，3-二曱基戊基、3,3-二甲基戊基、2,3,4-三曱基戊基、3-曱基己基、2,2-二曱基己基、2,4-二曱基己基、2,5-二曱基己基、3,5-二曱基己基、2，4-二甲基戊基、2-曱基庚基、3-曱基庚基、正庚基、异庚基、正辛基、和异辛基。C,-C8烃基基团可以是未取代的，或者是被一个或多个下述基团取代的，包括但不限于-d-C8烃基、-O-Cd-Cs烃基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R,、-C(O)OR'、-C(0)NH2、-C(O)NHR'、陽C(0)N(R,)2、-NHC(O)R,、-S03R，、-S(0)2R，、-S(O)R，、-OH、-卤素、-N3、-NH2、-NH(R，)、-N(R，)2和-CN;其中每个R，独立选自H、-d-Q烃基和芳基。"烯基"指有至少一个不饱和位点即碳-碳，s/双键的含正、仲、叔或环碳原子的C2-Cl8烃。实例包括但不限于乙烯或乙烯基(-CH^CH2)、丙烯基(画CH2CH二CH2)、环戊烯基(-C5H7)、和5隱己烯基(-CH2CH2CH2CH2CH二CH2)。"炔基，，指有至少一个不饱和位点即即碳-碳，^三键的含正、仲、叔或环碳原子的C2-Cl8烃。实例包括但不限于乙炔基(-OCH)和丙炔基(-CH2OCH)。"亚烃基(Alkylene)"指l-18个碳原子且具有两个单价基心(radicalcenter)(通过从亲本烃的同一碳原子或两个不同碳原子除去两个氢原子而衍生的)的饱和的、分支的或直链的或环状的烃基。典型的亚烃基包括但不限于亚曱基(-CH2-)、1,2-乙基(应为亚乙基)(-CH2CH2-)、1，3-丙基(应为亚丙基)(-CH2CH2CH2-)、1，4-丁基(应为亚丁基)(-CH2CH2CH2CH2-^*。"C广d。亚烃基"指通式-(CH2)wo-的直链、饱和烃基。C广d。亚烃基的实例包括亚曱基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基、亚己基、亚庚基、亚辛基、亚壬基和亚癸基。"亚烯基，，指2-18个碳原子且具有两个单价基心(radicalcenter)(通过从亲本烯烂的同一碳原子或两个不同碳原子除去两个氢原子而衍生的)的不饱和的、分支的或直链的或环状的烃基。典型的亚烯基包括但不限于1,2-亚乙烯基(-CH二CH陽)。"亚炔基，，指指2-18个碳原子且具有两个单价基心(radicalcenter)(通过从亲本炔烃的同一碳原子或两个不同碳原子除去两个氢原子而衍生的)的不饱和的、分支的或直链的或环状的烃基。典型的亚炔基包括但不限于亚乙炔基(-C三C-)、亚丙炔基(-CH2OC-)、和亚4-戊炔基(-CH2CH2CH2C三C-)。"芳基"指碳环芳香基。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、和蒽基。碳环芳香基或杂环芳香基可以是未取代的，或者是被一个或多个下述基团取代的，包括但不限于-C,-C8烃基、-O-(d-Cs烃基)、-芳基、-C(0)R，、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(0)NH2、-C(O)NHR'、-C(0)N(R，)2、-NHC(O)R'、-S(0)2R，、-S(O)R'、-OH、-卣素、-N3、-NH2、-NH(R，)、-N(R，)2和-CN;其中每个R，独立选自H、-C,-C8烃基和芳基。"亚芳基"指具有两个共价键且可以是邻位、间位或对位构型的芳基，如下述结构所示其中苯基可以是未取代的，或者是被至多四个下述基团取代的，包括但不限于-C广Cs烃基、-O-(C广Cs烃基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR，、-C(0)NH2、-C(O)NHR'、-C(0)N(R，)2、-NHC(O)R，、-S(0)2R，、-S(O)R'、匿OH、-卣素、-N3、-NH2、-NH(R，)、-N(R，)XN;其中每个R，独立选自H、-d-C8烂基和芳基。"芳基烃基"指键合至碳原子(通常是末端或sp&灰原子)的氢原子之一被芳基取代的非环烃基。典型的芳基烃基包括但不限于千基、2-苯基乙烷-1-基、2-苯基乙烯-l-基、萘基曱基、2-萘基乙烷-l-基、2-萘基乙烯-l-基、萘并千基、2-萘并苯基乙烷-l-基等等。芳基烃基包含6-20个碳原子，例如芳基烃基的烃基模块(包括烷基、烯基或炔基)是l-6个碳原子，芳基模块是5-14个碳原子。"杂芳基烃基"指键合至碳原子(通常是末端或spS碳原子)的氢原子之一被杂芳基取代的非环烃基。典型的杂芳基烃基包括但不限于2-苯并咪唑基曱基、2-呋喃基乙基等等。杂芳基烃基包含6-20个碳原子，例如杂芳基烃基的烃基模块(包括烷基、烯基或炔基)是l-6个碳原子，杂芳基模块是5-14个碳原子和1-3个选自N、0、P和S的杂原子。杂芳基烃基的杂芳基^f莫块可以是具有3-7个环成员(2-6个碳原子和1-3个选自N、O、P和S的杂原子)的单环或具有7-10个环成员(4-9个碳原子和l-3个选自N、0、P和S的杂原子)的双环，例如双环[4，5]、[5,5]、[5，6]或[6，6]系统。"取代的烃基"、"取代的芳基"、和"取代的芳基烃基"分别指其中一个或多个氢原子各自独立被取代基取代的烃基、芳基、和芳基烃基。典型的取代基包括但不限于-X、-R、-CT、陽OR、-SR、-S-、-NR2、-NR3、=NR、-CX3、-CN、-OCN、-SCN、-N=C=0、-NCS、-NO、-N02、=N2、-N3、NC(=0)R、陽C(:O)R、-C(=0)NR2、-S03-、-S03H、-S(=0)2R、-OS(=0)2OR、-S(=0)2NR、-S(=0)R、-OP(=0)(OR)2、-P(=0)(OR)2、-P0.3、-P03H2、-C(=0)R、-C(=0)X、-C(=S)R、-C02R、-C02、-C(=S)OR、-C(:O)SR、-C(=S)SR、-C(K))NR2、-C(=S)NR2、-C(=NR)NR2,其中每个X独立为卤素F、Cl、Br、或I;且每个R独立为-H、C2-Ci8烃基、C6-Cm芳基、C3-Ct4杂环、保护基团或前体药物45模块。上文所述亚烃基/亚烷基、亚烯基、和亚炔基也可以被类似的取代。"杂芳基"和"杂环"指其中一个或多个环原子是杂原子(例如氮、氧和硫)的环体系。杂环基包含1-20个碳原子和1-3个选自N、O、P和S的杂原子。杂环可以是具有3-7个环成员(2-6个碳原子和l-3个选自N、O、P和S的杂原子)的单环或具有7-10个环成员(4-9个碳原子和l-3个选自N、O、P和S的杂原子)的双环，例如双环[4，5]、[5,5]、[5，6]或[6,6]体系。杂3不i己载于Paquette，LeoA.;"PrinciplesofModernHeterocyclicChemistry"(W.A.Benjamin,NewYork,1968),特别是Chapters1，3，4，6,7，9;"TheChemistryofHeterocyclicCompounds,AseriesofMonographs"(JohnWiley&Sons,NewYork,1950至今)，特别是Volumes13,14，16,19,28;AJ.j附.C7ze肌Soc,(I960)82:5566。举例而言，杂环的实例包括但不限于吡啶基、二氢吡咬基、四氢吡啶基(哌啶基)、噻唑基、四氢硫苯基、硫氧化的四氢硫苯基、嘧啶基、呋喃基、逸吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、硫萘基、吲哚基、indolenyl、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、哌啶基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、2-吡咯烷酮基、吡咯啉基、四氢吹喃基、双-四氢呋喃基、四氪吡喃基、双-四氢吡喃基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、八氢异喹啉基、吖辛因基(azocinyl)、三嗪基、6H-l,2，5-噻二嗪基、2H,6H-l，5,2-二噻嗪基、噻吩基、噻蒽基、吡喃基、异苯并呋喃基、色烯基、0占吨基、酚噻a恶基(phenoxathinyl)、2H-吡咯基、异噻唑基、异n恶哇基、他口秦基、哒嗪基、吲嗪基、异。引咮基、3H-吲咮基、1H-吲唑基、。票呤基(purinyl)、4H-喹嗪基、酞,基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、喋啶基、4aH-咔唑基、咔唑基、(3-呼啉基、菲咬基、吖啶基、嘧咬基、菲咯啉基、酚嗪基、酚噻嗪基、呋咱基、酚0恶溱基、异色满基、色满基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、哌嗪基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、奎宁环基、吗啉基、口恶唑烷基、苯并三唑基、苯并异0恶唑基、羟吲哚基、苯并a恶唑啉基、和isatinoyl。举例而言而非限制，碳键合的杂环键合于吡啶的2、3、4、5、或6位，口达唤的3、4、5、或6位，嗜口定的2、4、5、或6位，口比漆的2、3、5、或6位，呋喃、四氢p夫喃、p塞p分(thioforan)、p塞p分(thiophene)、p比卩各或四氢吡p各的2、3、4、或5位，口恶唑、咪唑或噻唑的2、4、或5位，异口恶哇、吡哇或异逸唑的3、4、或5位，吖丙啶的2或3位，吖丁啶的2、3、或4位，壹啉的2、3、4、465、6、7、或8位，或异喹啉的l、3、4、5、6、7、或8位。还要更典型的是，碳键合的杂环包括2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、5-吡咬基、6-吡啶基、3-哒。秦基、4-哒嗪基、5-哒。秦基、6-哒,基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧咬基、2-吡嗪基、3-吡嗪基、5-吡嗪基、6-他。秦基、2-噻唑基、4-蓉峻基、或5-。塞唑基。举例而言而非限制，氮键合的杂环键合于吖丙啶、吖丁啶、吡咯、吡咯》克、2-p比p各淋、3-p比p各啉、口米哇、口米峻啉、2-口米p坐淋、3-口末p坐啉、p比唾、p比唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌。秦、口引咮、二氢卩引。呆、1H-"引唑的1位，异口引咮或异二氬p引咮的2位，吗啉的4位，及寸唑或(3-。卡啉的9位。还要更典型的是，氮键合的杂环包括l-aziridyl、l-azetedyl、l-吡咯基、l-咪唑基、1-吡峻基、和l-哌啶基。"C3-C8杂环"指其中1-4个环碳原子被选自0、S和N的杂原子独立取代的芳香族或非芳香族CVC8碳环。C3-Cs杂环的代表性实例包括但不限于苯并呋喃基、苯并噻吩(benzothiophene)、吲哚基、苯并吡唑基、香豆素基、异会啉基、吡咯基、硫苯基、呋喃基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、三唑基、喹啉基、嘧咬基、吡啶基、吡啶酮基、吡嗪基、哒嗪基、异噻唑基、异D恶唑基、和四唑基。C3-Q杂环可以是未取代的，或者是被至多7个下述基团取代的，包括但不限于-c,-C8烷基、-0-(<:1-0:8烷基)、-芳基、-c(o)r'、-oc(o)r，、-C(O)OR'、-C(0)NH2、-C(O)NHR，、-C(0)N(R，)2、-NHC(O)R，、-S(0)2R，、-S(O)R'、-OH、-卣素、-N3、-NH2、-NH(R，)、-N(R，)2和-CN;其中每个R，独立选自H、-d-Q烷基和芳基。"C3-Cs杂环基/C3-C8杂环并"指其中杂环基团的氢原子之一被键取代的上文定义的C3-Cs杂环基团。C3-C8杂环基可以是未取代的，或者是被至多6个下述基团取代的，包括但不限于-d-C8烷基、-0-((^-(:8烷基)、-芳基、-C(O)R，、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(0)NH2、-C(O)NHR，、-C(0)N(R，)2、-NHC(O)R，、-S(0)2R，、-S(O)R'、-OH、-卤素、-N3、-NH2、-NH(R，)、-N(R，)2和-CN;其中每个R，独立选自H、-C广Cs烷基和芳基。"碳环"指饱和的或不饱和的环，作为单环具有3-7个碳原子，作为双环具有7-12个碳原子。单环碳环具有3-6个环原子，还要更典型的是5或6个环原子。双环碳环具有7-12个环原子，例如排列成双环[4,5]、[5,5]、[5，6]或[6,6]体系，或者具有9或10个环原子，排列成双环[5,6]或[6，6]体系。单环碳环的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、l-环戊-l-烯基、l-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、l-环己-l-蹄基、l-环己-2-烯基、l-环己-3-烯基、环庚基、和环辛基。"CrC8碳环"指3、4、5、6、7或8个成员的饱和的或不饱和的非芳香族碳环。代表性的CVC8碳环包括但不限于-环丙基、-环丁基、-环戊基、画环戊二烯基、-环己基、-环己烯基、-1,3-环己二烯基、-1,4-环己二烯基、-环庚基、-1，3-环庚二烯基、-1,3,5-环庚二烯基、-环辛基、和-环辛二烯基。CrC8碳环基团可以是未取代的，或者是被一个或多个下述基团取代的，包括但不限于-CrQ烷基、-O-(C,-Q烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR，、-C(0)NH2、-C(O)NHR'、-C(0)N(R，)2、-NHC(O)R'、-S(0)2R，、-S(O)R'、-OH、-囟素、-N3、-NH2、-NH(R，)、-N(R，)2和-CN;其中每个R，独立选自H、-d-Cs烷基和芳基。"C3-C8碳环基/C3-C8碳环并"指其中碳环基团的氢原子之一被键取代的上文定义的C3-Cs碳环基团。"接头"指包含将抗体共价附着于药物模块的共价键或原子链的化学模块。在各个实施方案中，接头包括诸如烃基二基、芳基二基、杂芳基二基的二价基，诸如-(CR2)nO(CR2)n-的模块，烃基氧(例如聚乙烯氧、PEG、聚亚曱基氧)和烃基氨基(例如聚乙烯氨基、Jeffamine)的重复单元；及二酸酯和酰胺，包4舌琥珀酸酯、琥珀酰胺、二乙醇酸酯、丙二酸酯、和己酰胺(caproamide)。术语"手性"指分子具有镜像对映体不可重叠的特性，而术语"非手性"指分子可重叠于其镜像对映体上。术语"立体异构体"指具有相同的化学结构，但是在原子或基团的空间排列方面有所不同的化合物。"非对映异构体，，指具有两个或多个手性中心且其分子彼此不为镜像对映体的空间异构体。非对映体具有不同的物理特性，例如熔点、沸点、光语特征、和反应性。非对映异构体的混合物可以在高分辨力的分析规程下分开，诸如电泳和层析。"对映异构体"指化合物的彼此为不可重叠镜像的两种空间异构体。本文中所使用的立体化学定义和规则一般遵循S.P.Parker,Ed.,Mc(7raw-Z)/c"'oor_yo/C7z缀/ca/7^r腊(1984)McGraw-HillBookCompany,NewYork;及Eliel，E.andWilen，S.，iS^eoc/zem/s^yo/Orgam'cCow;w柳A(1994)JohnWiley&Sons,Inc.，NewYork。许多有机化合物以旋光型存在，即它们具有旋转平面偏振光的平面的能力。在描述旋光性化合物时，使用前缀D和L，或者i和S来表示分子关于其手性中心的绝对构型。采用前缀d和l或者(+)和(-)来指示化合物对平面偏振光的旋转，(-)或l意味着化合物是左旋的。带有前缀(+)或d的化合物是右旋的。对于给定的化学结构，这些立体异构体是相同的，只是它们互为镜像。特定的立体异构体还可以称为对映异构体，而且此类异构体的混合物常常称为对映混合物。对映异构体的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋物，其可以在化学反应或过程中没有立体选择或立体特异性时发生。术语"外消旋混合物，，和"外消旋物，，指两种对映异构体的等摩尔混合物，其没有旋光性。"离去基团"指可以被另一官能基取代的官能基。某些离去基团是本领域公知的，实例包括但不限于囟化物(例如氯化物、溴化物、碘化物)、曱基磺酰基(甲磺酰基)、对曱苯磺酰基(甲苯磺酰基)、三氟甲基磺酰基(triflate)、和三氟曱基磺酸根。缩写接头组件MC=6-马来酰亚氨基己酰基(6-maleimidocaproyl)Val-Cit或"vc"=缬氨酸-瓜氨酸(蛋白酶可切割接头中的例示二肽)瓜氨酉臾=2-氨基-5-脲基戊酉交(2-amino-5-ureidopentanoicacid)PAB=对氨基苯曱基氧羰基(p-aminobenzyloxycarbonyl)(自我牺牲的"(self-immolative)"接头构建的例示)Me-Val-Cit=N-曱基-缬氨酸-瓜氨酸(其中接头肽键已经修饰以防止其受到组织蛋白酶B的切割)MC(PEG)6-OH=马来酰亚氨基己酰基-聚乙二醇(maleimidocaproyl-polyethyleneglycol)(可附着于抗体半胱氨酸)。细月包毒性药物MMAE=单甲基auristatinE(mono-methylauristatinE)(MW718)MMAF=auristatinE(MMAE)的变体，其在药物的C-末端处有苯丙氨酸(MW731.5)49MMAF-DMAEA=有DMAEA(二曱基氨基乙胺)以酰胺连接至C-末端苯丙氨酸的MMAF(MW801.5)MMAF-TEG=有四乙二醇酯化至苯丙氨酸的MMAFMMAF-NtBu=正叔丁基作为酰胺附着于MMAF的C-末端别的缩写如下AE指auristatinE;Boc指正(叔丁氧羰基)；cit指瓜氨酸；dap指dolaproine;DCC指1，3-二环己基碳二亚胺；DCM指二氯曱烷；DEA指二乙胺；DEAD指二乙基偶氮二羧酸根(diethylazodicarboxylate);DEPC指二乙基磷酰基氰酸根(diethylphosphorylcyanidate);DIAD指二异丙基偶氮二羧酸根；DIEA指7V，N-二异丙基乙胺；dil指dolaisoleucine;DMA指二曱基乙酰胺；DMAP指4-二曱基氨基吡啶；DME指乙二醇二曱基醚(或1,2-二曱氧乙烷)；DMF指W,N-二甲基曱酰胺；DMSO指二曱基亚砜；doe指dolaphenine;dov指yV,N-二曱基缬氨酸；DTNB指5，5，-二硫双(2-硝基苯曱酸)；DTPA指二乙烯三胺五乙酸；DTT指二硫苏糖醇；EDCI指l-(3-二曱基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺氢氯化物；EEDQ指2-乙氧基-l-乙氧羰基-l,2-二氢喹啉；ES-MS指电喷雾质谱；EtOAc指乙酸乙酯；Fmoc指正-(9-芴基曱氧羰基)；gly指甘氨酸；HATU指CK7-氮杂苯并三唑-l-基)-A^A^7V'，iV'-四曱基脲六氟磷酸酯；HOBt指l-鞋基苯并三唑；HPLC指高压液相层析；ile指异亮氨酸；lys指赖氨酸；MeCN(CH3CN)指乙腈；MeOH指曱醇；Mtr指4-茴香基联苯基曱基(或4-曱氧基三苯曱基)；nor指(ASV2R)-(+)-去曱麻黄碱；PBS指磷酸盐緩沖盐水(pH7.4);PEG指聚乙二醇；Ph指苯基；Pnp指对硝基苯基；MC指6-马来酰亚氨基己酰基；phe指L-苯丙氨酸；PyBrop指溴三吡咯烷膦六氟磷酸酯(bromopyrrolidinophosphoniumhexafluorophosphate);SEC指大小排阻层析；Su指琥珀酰亚胺；TFA指三氟乙酸；TLC指薄层层析；UV指紫外线；而val指缬氨酸。III.组合物及其制备方法提供了能结合TAT226的抗体。提供了包含抗TAT226抗体的免疫偶联物。本发明的抗体和免疫偶联物对于例如与TAT226表达改变(例如表达升高)有关的病症的诊断或治疗是有用的。在某些实施方案中，本发明的抗体免疫偶联物对于细胞增殖性病症(诸如癌症)的诊断或治疗是有用的。A.抗TAT226抗体TAT226("肿瘤相关抗原性把物No.226"即Tumor-associatedAntigenic50Targetno.226)是在某些细胞类型(包括肿瘤细胞)表面上加工和表达的蛋白质。具体而言，人TAT226先前已有报道在某些类型的肿瘤中过表达，包括卵巢肿瘤、子宫肿瘤、子宫内膜肿瘤、肾肿瘤、肺肿瘤、胰腺肿瘤、肾上腺肿瘤、和肝细胞肿瘤。参见例如美国专利申请公开号US2003/0148408Al，US2004/0229277Al，和US2003/0100712Al(将TAT226称为"PR09917");及美国专利No.6,710,170B2(SEQIDNO:215)。涉及TAT226的其它凄史据库条目和公开如下NCBI编号AY358628—1(将人TAT226称为"PSCAHlog");NCBI编号AAQ88991.1和"gi，，no.37182378(将人TAT226称为"PSCAHlog，，)；RIKENcDNA2700050C12;US2003/0096961Al(SEQIDNO:16);US2003/0129192Al(SEQIDNO:215);US2003/0206918Al(实施例5;SEQIDNO:215);US2003/0232056Al(SEQIDNO:215);US2004/0044179Al(SEQIDNO:16);US2004/0044180Al(SEQIDNO:16);US2005/0238649Al(将人TAT226称为"PSCAHlog");WO2003/025148(SEQIDNO:292);WO2003/105758(SEQIDNO:14);及EP1347046(SEQIDNO:2640)。全长TAT226在细胞中经历加工，产生在细胞表面上表达的成熟形式的蛋白质。例如，SEQIDNO:75所示全长人TAT226包含氨基酸l-20或l-22的预测信号肽序列，预计其从蛋白质中切割掉。预计氨基酸116-141的C-末端从蛋白质中切割掉，而GPI部分附着于蛋白质的氨基酸H5。成熟形式的人TAT226，即SEQIDNO:75的氨基酸21-115或23-115，预测经GPI部分锚定至细胞表面。猴和啮齿类TAT226(见例如SEQIDNO:76-78)与人TAT226高度相似，因而认为在对等的氨基酸位置受到切割和修饰。见图l。所得成熟形式的人、猴、和啮齿类TAT226,即氨基酸21-115或23-115(如图l所示)是100°/。相同的。人TAT226的其它特征包括位于SEQIDNO:75氨基酸45的预测的n-糖基化位点(凭经验确定的)和氨基酸94-107的预测的Ly6/u-PAR结构域。人TAT226与前列腺干细胞抗原(PSCA)具有约32。/。的氨基酸同源性，后者是经GPI连接在细胞表面上表达的前列腺癌特异性肿瘤抗原。参见Reiteretal.(1998)Prac,Jcad5W.95:1735-1740。PSCA在超过80。/o的前列腺癌中过表达。同上。与TAT226—样，它包含预测的Ly6/u-PAR结构域，其已经与诸如信号转导和细胞粘附的细胞功能联系起来。同上。一方面，本发明提供了能结合TAT226的抗体。在有些实施方案中，提供了能结合成熟形式的TAT226的抗体。在一个这样的实施方案中，成熟形式的TAT226具有SEQIDNO:75氨基酸21-115或23-115的氨基酸序列。在有些实施方案中，针对TAT226的抗体能结合在细胞表面上表达的成熟形式TAT226。在有些实施方案中，能结合在细胞表面上表达的成熟形式TAT226的抗体能抑制细胞生长。在有些实施方案中，抗TAT226抗体能结合在细胞表面上表达的成熟形式TAT226并抑制细胞增殖。在某些实施方案中，抗TAT226抗体能结中，抗TAT226抗体能结合在癌细胞表面上表达的成熟形式TAT226。在有些实施方案中，抗TAT226抗体能结合相对于相同组织起源的正常细胞在癌细胞表面上过表达的成熟形式TAT226。一方面，抗TAT226抗体是单克隆抗体。一方面，抗TAT226抗体是抗体片段，例如Fab、Fab，-SH、Fv、scFv、或(Fab，)2片段。一方面，抗TAT226抗体是嵌合的、人源化的、或人的抗体。一方面，本文所述任何抗TAT226抗体是纯化的。本文中提供了衍生自噬菌体文库的例示性单克隆抗体，如实施例B所述。用于筛选文库的抗原是具有SEQIDNO:75氨基酸l-115序列的多肽，其对应于缺少推定GPI附着位点C-末端氨基酸的TAT226形式。文库筛选所得抗体命名为YW0.32和YWO.49。将YW0.49亲和力成熟，产生YWO.49.B7、YWO.49.C9,、YWO.49.H2、和YWO,49.H6。YW0.32、YWO,49、YWO.49.B7、YW0.49.C9、YWO.49.H2、和YW0.49.H6的重链和轻链可变域序列对比分别显示于图11和12。一方面，提供了能与YW0.32、YWO,49、YWO.49.B7、YWO.49.C9、YWO.49.H2、或YW0.49.H6竟争TAT226结合的单克隆抗体。还提供了能与YWO,32、YW0.49、YWO.49.B7、YWO.49.C9、YWO.49.H2、或YW0.49.H6结合相同表位的单克隆抗体。在本发明的一个方面，提供了编码抗TAT226抗体的多核苷酸。在某些实施方案中，提供了包含编码抗TAT226抗体的多核苷酸的载体。在某些实施方案中，提供了包含此类载体的宿主细胞。在本发明的另一个方面，提供了包含抗TAT226抗体或编码抗TAT226抗体的多核苦酸的组合物。在某些实施方案中，本发明的组合物是用于治疗细胞增殖性病症(诸如本文中所列举的)的药用组合物。例示性抗TAT226抗体的详细描述如下1.抗TAT226抗体的具体实施方案一方面，本发明提供了包含至少一个、两个、三个、四个、五个、或六个选自下组的HVR的抗体(a)HVR-Hl,其包含氨基酸序列SEQIDNO:l或SEQIDNO:4;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:2或SEQIDNO:5;(c)HVR-H3，其包含选自SEQIDNO:3和6-ll的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:12;(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:13;及(f)HVR-L3，其包含选自SEQIDNO:14-19的氨基酸序列。一方面，本发明4是供了包含至少一个、至少两个、或所有三个选自下组的VHHVR序列的抗TAT226抗体(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQIDNO:l或SEQIDNO:4;(b)HVR-H2,其包含氨基酸序列SEQIDNO:2或SEQIDNO:5;及(c)HVR-H3，其包含选自SEQIDNO:3和6-l1的氨基酸序列。一方面，本发明提供了包含HVR-H1的抗TAT226抗体，所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:l或SEQIDNO:4。一方面，本发明提供了包含HVR-H2的抗TAT226抗体，所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:2或SEQIDNO:5。一方面，本发明提供了包含HVR-H3的抗TAT226抗体，所述HVR-H3包含选自SEQIDNO:3和6-ll的氨基酸序列。一方面，本发明提供了包含HVR-H3的抗TAT226抗体，所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:9或10。HVR-H3包含选自SEQIDNO:3和6-l1的氨基S交序列，所述HVR-H1包含选自SEQIDNO:l和SEQIDNO:4的氨基酸序列。一方面，本发明提供了包含HVR-H3和HVR-H1的抗TAT226抗体，所述HVR-H3包含选择的氨基酸序列SEQIDNO:6-11，所述HVR-H1包含SEQIDNO:4。一方面，本发明提供了包含HVR-H3和HVR-H1的抗TAT226抗体，所述HVR-H3包含SEQIDNO:9或10,所述HVR-H1包含SEQIDNO:4。一方面，本发明提供了包含HVR-H3和HVR-H1的抗TAT226抗体，所述HVR-H3包含SEQIDNO:3,所述HVR-H1包含SEQIDNO:l。一方面，本发明提供了包含HVR-H3和HVR-H2的抗TAT226抗体，所述HVR-H3包含选自SEQIDNO:3和6-l1的氨基酸序列，所述HVR-H2包含选自SEQIDNO:2和SEQIDNO:5的氨基酸序列。一方面，本发明提供了包含HVR-H3和HVR-H2的抗TAT226抗体，所述HVR-H3包含选自SEQIDNO:6-l1的氨基S吏序列，所述HVR-H2包含SEQIDNO:5。一方面，本发明提供了包53含HVR-H3和HVR-H2的抗TAT226抗体，所述HVR-H3包含SEQIDNO:9或10,所述HVR-H2包含SEQIDNO:5。一方面，本发明提供了包含HVR-H3和HVR-H2的抗TAT226抗体，所述HVR-H3包含SEQIDNO:3，所述HVR-H2包含SEQIDNO:2。一方面，本发明提供了包含HVR-H1、HVR-H2、和HVR-H3的抗TAT226抗体，所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:l或SEQIDNO:4;所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:2或SEQIDNO:5;所述HVR-H3包含选自SEQIDNO:3和6-ll的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:4;所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5;所述HVR-H3包含选自SEQIDNO:6-ll的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:4;所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5;所述HVR-H3包含SEQIDNO:9或10。在一个实施方案中，所述HVR-Hl包含氨基酸序列SEQIDNO:1;所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:2;所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:3。一方面，本发明提供了包含至少一个、至少两个、或所有三个选自下组的VLHVR序列的抗TAT226抗体(a)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:12;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:13;及(c)HVR-H3,其包含选择的氨基酸序列SEQIDNO:14-19。一方面，本发明4是供了包含HVR-L3的抗TAT226抗体，所述HVR-L3包含选自SEQIDNO:14-19的氨基酸序列。一方面，本发明提供了包含HVR-L3的抗TAT226抗体，所述HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:17或18。一方面，本发明提供了包含HVR-H3和HVR-L3的抗TAT226抗体，(a)所述HVR-H3包含选自SEQIDNO:3和6-ll的氨基酸序列，(b)所述HVR-L3包含选自SEQIDNO:14-19的氨基酸序列。一方面，本发明提供了包含HVR-H3和HVR-L3的抗TAT226抗体，(a)所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:3，(b)所述HVR-L3包含氨基S臾序列SEQIDNO:14。在有些实施方案中，所述TAT226抗体进一步包含HVR-H1和HVR-H2，所述HVR-H1包含SEQIDNO:1，所述HVR-H2包含SEQIDNO:2.一方面，本发明提供了包含HVR-H3和HVR-L3的抗TAT226抗体，(a)所述HVR-H3包含选自SEQIDNO:6-l1的氨基酸序列，(b)所述HVR-L3包含选自SEQIDNO:14-19的氨基酸序列。在有些实施方案中，所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:9，所述HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:17。在有些实施方案中，所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:IO,所述HVR-L3包含氨基S吏序列SEQIDNO:18。在有些实施方案中，所述TAT226抗体进一步包含HVR-H1和HVR-H2,所述HVR-H1包含SEQIDNO:4，所述HVR-H2包含SEQIDNO:5。一方面，本发明提供了包含HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2、和HVR-L3的抗TAT226抗体，(a)所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:l或SEQIDNO:4;(b)所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:2或SEQIDNO:5;(c)所述HVR-H3包含选自SEQIDNO:3和6-ll的氨基酸序歹'J;(d)所述HVR-L1包含氨基酸序列SEQIDNO:12;(e)所述HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13;(f)所述HVR-L3包含选自SEQIDNO:14-19的氨基酸序列。一方面，本发明提供了包含HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2、和HVR-L3的抗TAT226抗体，(a)所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:l;(b)所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:2;(c)所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:3;(d)所述HVR-L1包含氨基酸序列SEQIDNO:12;(e)所述HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13;(f)所述HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:14。一方面，本发明提供了包含HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2、和HVR-L3的抗TAT226抗体，(a)所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:4;(b)所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5;(c)所述HVR-H3包含选自SEQIDNO:6-ll的氨基酸序列；(d)所述HVR-L1包含氨基酸序列SEQIDNO:12;(e)所述HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13;(f)所述HVR-L3包含选自SEQIDNO:14-19的氨基S吏序列。一方面，本发明提供了包含HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2、和HVR-L3的抗TAT226抗体，(a)所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:4;(b)所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5;(c)所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:9;(d)所述HVR-L1包含氨基酸序列SEQIDNO:12;(e)所述HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13;(f)所述HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:17。一方面，本发明提供了包含HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2、和HVR-L3的抗TAT226抗体，(a)所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:4;(b)所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5;(c)所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:10;(d)所述HVR-L1包含氨基酸序列SEQIDNO:12;(e)所述HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13;(f)所述HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:18.在有些实施方案中，将抗TAT226抗体亲和力成熟，以获得期望的靶物结合亲和力。。在有些实施方案中，在如下HVR位置(Kabat编号的)将抗体的一个或多个氨基酸替代H98、H99、HI00、H100B、L90、L92、L93、L96、和L97。例如，在有些实施方案中，可以将任何一个或多个如下替代任意组合-在HVR-H3(SEQIDNO:6)中V98I;S99T;R100L或I;G100bA、S、或P.在HVR-L3(SEQIDNO:14)中Q卯R、K、H、或N;Y92V;T93F、N、G、或A;P96F;T97I或A共有序列SEQIDNO:ll(HVR-H3)和SEQIDNO:19(HVR-L3)涵盖了上述替代的所有可能组合。抗TAT226抗体可以包含任何合适的框架可变域序列，倘若抗体保留结合TAT226的能力的话。例如，在有些实施方案中，本发明的抗TAT226抗体包含人亚组III重链框架共有序列。在这些抗体的一个实施方案中，重链框架共有序列在第71、73和/或78位包含替代。在这些抗体的一个实施方案中，第71位是A，第73位是T,和/或第78位是A。在一个实施方案中，这些抗体包含huMAb4D5-8的重链可变域框架序列，例如SEQIDNO:50、51、59、35(分别为FR1、2、3、4)。huMAb4D5-8在商业上称为HERCEPTIN,Genentech,Inc.,SouthSanFrancisco,CA,USA;在美国专利No.6,407,213&5，821，337及Leeetal.,J.Mol.Biol.(2004)340(5):1073-93中也有提到。在一个这样的实施方案中，这些抗体进一步包含人Kl轻链框架共有序列。在一个这样的实施方案中，这些抗体包含huMAb4D5-8的轻链可变域框架序列。在一个实施方案中，抗TAT226抗体包含重链可变域，所述重链可变域包含框架序列和高变区，其中框架序列包含选自图5A和5B所示的FR1-FR4序列；HVRHI包含氨基酸序列SEQIDNO:4;HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5;而HVR-H3包含选自SEQIDNO:6-ll的氨基酸序列。在这些抗体的一个实施方案中，HVR-H3包含氨基M"列SEQIDNO:9或10。在一个实施方56案中，抗TAT226抗体包含轻链可变域，所述轻链可变域包含框架序列和高变区，其中框架序列包含选自图6A和6B所示的FR1-FR4序列；HVR-L1包含氨基酸序列SEQIDNO:12;HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13;而HVR-L3包含选自SEQIDNO:14-19的氨基酸序列。在这些抗体的一个实施方案中，HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:17或18。在一个实施方案中，抗TAT226抗体包含重链可变域，所述重链可变域包含框架序列和高变区，其中框架序列包含如图7所示的FR1-FR4序列SEQIDNO:50、51、59、和35;HVRHl包含氨基酸序列SEQIDNO:4;HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5;而HVR-H3包含选自SEQIDNO:6-l1的氨基酸序列。在这些抗体的一个实施方案中，HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:9或10。在一个实施方案中，抗TAT226抗体包含轻链可变域，所述轻链可变域包含框架序列和高变区，其中框架序列包含如图6A和6B所示的FR1-FR4序列SEQIDNO:60、61、62、和63;HVR-L1包含氨基酸序列SEQIDNO:12;HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13;而HVR-L3包含选自SEQIDNO:14-19的氨基酸序列。在这些抗体的一个实施方案中，HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:17或18。在一个实施方案中，抗TAT226抗体包含重链可变域，所述重链可变域包含框架序列和高变区，其中框架序列包含如图8所示的FR1-FR4序列SEQIDNO:50、51、53、和35;HVRHl包含氨基酸序列SEQIDNO:4;HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5;而HVR-H3包含选自SEQIDNO:6-l1的氨基酸序列。在这些抗体的一个实施方案中，HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:9或10。在一个实施方案中，抗TAT226抗体包含轻链可变域，所述轻链可变域包含框架序列和高变区，其中框架序列包含如图8所示的FR1-FR4序列SEQIDNO:60、61、62、和74;HVR-L1包含氨基酸序列SEQIDNO:12;HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13;而HVR-L3包含选自SEQIDNO:14-19的氨基酸序列。在这些抗体的一个实施方案中，HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:17或18。在有些实施方案中，本发明提供了包含重链可变域的抗TAT226抗体，所述重链可变域包含与选自SEQIDNO:20-25的氨基酸序列具有至少90。/0、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%序列同一性的氨基酸序列。在有些实施方案中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%序列同一性的氨基酸相对于参考序列包含替代、插入、或删除，但是包含该氨基酸序列的抗体仍保留结合TAT226的能力。在有些实施方案中，选自SEQIDNO:20-25的序列中有总共l-10个氨基酸-陂替代、插入、或删除。在有些实施方案中，替代、插入、或删除发生于HVR以外的区域(即在FR中)。在有些实施方案中，抗TAT226抗体包含重链可变域，所述重链可变域包含选自SEQIDNO:20-25的氨基S吏序列。在有些实施方案中，本发明提供了包含如下文SEQIDNO:31所示的人源化4D5抗体(huMAb4D5-8)(HERCEPTIN,Genentech，Inc.,SouthSanFrancisco,CA，USA)(在美国专利No.6,407，213及Leeetal.，J.Mol.Biol.(2004)，340(5):1073-93中也有提到)的轻链可变域的抗TAT226抗体。ValThrHeThrCysArgAlaSerGinAspValAwThrAlaValAlaTrpTyrGinGinLysProGlyLysAlaProLysLeuLeulieTyrSerAlaSerPheLeuTyrSerGlyValProSerArgPheSerGlySerSerGlyThrAspPheThrLeuThrlieSerSerLeuGinProGluAspPheAlaThrTyrTyrCysGinGin/faTyrThrThrProProThrPheGlyGinGlyThrLysValGlulieLysArg108(SEQIDNO:31)(HVR残基是加下划线的)在有些实施方案中，huMAb4D5-8轻链可变域序列在第30、66和91位(分别如上文粗体/斜体中所示的Asn、Arg和His)的一个或多个位置处被》务饰。在一个实施方案中，修饰的huMAb4D5-8序列在第30位包含Ser,在第66位包含Gly和/或在第91位包含Ser。因此，在一个实施方案中，本发明的抗体包含含有如下文SEQIDNO:26所示序列的轻链可变域ValThrlieThrCysAmAlaSerGinAspValSgrThrAlaValAlaTrpTyrGinGinLysProGlyLysAlaProLysLeuLeulieTyrSerAlaSerPheLeuTyrSerGlyValProSerArgPheSerGlySerGfySerGlyThrAspPheThrLeuThrlieSerSerLeuGinProGluAspPheAlaThrTyrTyrCysGinGinTyrThrThrProProThrPheGlyGinGlyThrLysValGlulieLysArg108(SEQIDNO:26)(HVR残基是加下划线的)相对于huMAb4D5-8的替代残基在上文中以粗体/斜体标示。一方面，本发明提供了包含轻链可变域的抗TAT226抗体，所述轻链可变域包含与选自SEQIDNO:26-31的氨基酸序列具有至少90。/。、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%序列同一性的氨基酸序列。在有些实施方案中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%序列同一性的氨基酸序列相对于参考序列包含替代、插入、或删除，但是包含该氨基酸序列的抗体仍保留结合TAT226的能力。在有些实施方案中，选自SEQIDNO:26-31的序列中有总共1-10个氨基酸被替代、插入、或删除。在有些实施方案中，所述替代、插入、或删除发生于HVR以外的区域(即在FR中)。在有些实施方案中，抗TAT226抗体包含轻链可变域，所述轻链可变域包含选自SEQIDNO:26-31的氨基酸序列。一方面，本发明提供了包含重链可变域和轻链可变域的抗TAT226抗体，(a)所述重链可变域包含与选自SEQIDNO:20-25的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%序列同一性的氨基酸序列；(b)所述轻链可变域包含与选自SEQIDNO:26-31的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94。/o、95%、96%、97%、98%、或99%序列同一性的氨基酸序列。在有些实施方案中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%序列同一性的氨基酸序列相对于参考序列包含替代、插入、或删除，但是包含该氨基酸序列的抗体仍保留结合TAT226的能力。在有些实施方案中，参考序列中有总共1-10个氨基酸被替代、插入、或删除。在有些实施方案中，所述替代、插入、或删除发生于HVR以外的区域(即在FR中)。在有些实施方案中，抗TAT226抗体包含重链可变域和轻链可变域，所述重链可变域包含选自SEQIDNO:20-25的氨基酸序列，所述轻链可变域包含选自SEQIDNO:26-31的氨基酸序列。在有些实施方案中，抗TAT226抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含氨基酸序列SEQIDNO:20,所述轻链可变区包含氨基酸序列SEQIDNO:26。在有些实施方案中，抗TAT226抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含氨基酸序列SEQIDNO:21，所述轻链可变区包含氨基酸序列SEQIDNO:26。在有些实施方案中，抗TAT226抗体重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含氨基酸序列SEQIDNO:22，所述轻链可变区包含氨基酸序列SEQIDNO:27。在有些实施方案中，抗TAT226抗体重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含氨基S菱序列SEQIDNO:23，所述轻链可变区包含氨基酸序列SEQIDNO:28。在有些实施方案中，抗TAT226抗体重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含氨基S史序列SEQIDNO:24，所述轻链可变区包含氨基酸序列SEQIDNO:29。在有些实施方案中，抗TAT226抗体重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含氨基酸序列SEQIDNO:25，所述轻链可变区包含氨基酸序列SEQIDNO:30。一方面，本发明提供了如下抗TAT226抗体，其包含(a)—个、两个、或三个选自图2和4所示的VHHVR和/或(b)—个、两个、或三个选自图3和4所示的VLHVR。一方面，本发明提供了如下抗TAT226抗体，其包含选自图9和11所示的重4连可变域和选自图10和12所示的轻链可变域。2.抗体片段本发明涵盖抗体片段。抗体片段可以通过传统手段来生成，诸如酶促消化，或者通过重组技术来生成。在某些情况中，使用抗体片段有优势，而不是完整抗体。片段的较小尺寸容许快速清除，而且可导致更易于接近实体瘤。某些抗体片段的综述参见Hudsonetal.(2003)Mz/.9:129-134。已经开发了用于生成抗体片段的多种技术。传统上，通过蛋白水解消化完整抗体来衍生这些片段(参见例如Morimotoetal.,JournalofBiochemicalandBiophysicalMethods24:107-117(1992);Bren腿etal"Science229:81(1985))。然而，现在可直接由重组宿主细胞生成这些片段。Fab、Fv和scFv抗体片段都可在大肠杆菌中表达及由大肠杆菌分泌，如此容许容易的生成大量的这些片段。可从上文讨论的噬菌体抗体库中分离抗体片段。或者，可直接从大肠杆菌回收Fab'-SH片段并化学偶联以形成F(ab'》片段(Carteretal.,Bio/Technology10:163-167(1992))。依照另一种方法，可直接从重组宿主细胞培养物分离F(ab')2片段。包含补救受体结合表位残基、具有延长的体内半衰期的Fab和F(ab')2片段记载于美国专利No.5,869，046。用于生成抗体片段的其它技术对于熟练从业人员将是显而易见的。在某些实施方案中，抗体是单链Fv片段(scFv)。参见WO93/16185;美国专利No.5,571,894;及5,587,458。Fv和scFv是具有完整结合位点、缺少恒定区的唯一类型；如此，它们可能适于在体内使用时降低非特异性结合。可构建scFv融合蛋白以生成效应器蛋白质在scFv的氨基或羧基末端的融合。参见AntibodyEngineering,Borrebaeck编，supra。抗体片段还可以是"线性抗体"，例如如美国专利No.5，641,870中所记载的。此类线性抗体可以是单特异性的或双特异性的。3.人源化抗体60本发明涵盖人源化抗体。本领域知道用于人源化非人抗体的多种方法。例如，人源化抗体可具有一个或多个从非人来源引入的氨基酸残基。这些非人氨基酸残基常常称为"输入，，残基，它们通常取自"输入"可变区。基本上可遵循Winter及其同事的方法进行人源化(Jonesetal.,Nature321:522-525(1986);Riechmannetal.,Nature332:323-327(1988);Verhoeyenetal"Science239:1534-1536(1988))，即用非人高变区序列替代人抗体的对应序列。因此，此类"人源化，，抗体是嵌合抗体(美国专利4,816,567)，其中显著少于完整的人可变区用非人物种的相应序列替代。在实践中，人源化抗体通常是如下人抗体，其中有些高变区残基和可能的有些FR残基用啮齿类抗体类似位点的残基替代。用于制备人源化抗体的人轻链和重链可变区的选择对于降低抗原性可能是重要的。依照所谓的"最适(best-fit)"方法，用啮齿类抗体的可变区序列对已知人可变区序列的整个文库进行筛选。然后选择与啮齿类最接近的人序列作为人源化抗体的人框架(Simsetal"J.Immunol.151:2296(1993);Chothiaetal.,J.Mol.Biol.196:901(1987))。另一种方法-使用由特定轻《连或重链亚类(subgroup)的所有人抗体的共有序列衍生的特定框架。相同框架可用于几种不同的人源化抗体(Carteretal"Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:4285(1992);Prestaetal"J.Immunol.151:2623(1993))。一般还希望的是，抗体在人源化后保留对抗原的高亲和力和其它有利的生物学特性。为了达到此目的，依照一种方法，通过使用亲本序列和人源化序列的三维模型分析亲本序列和各种概念性人源化产物的过程来制备人源化抗体。通常可获得免疫球蛋白三维模型，这是本领域技术人员所熟悉的。还可获得图解和显示所选候选免疫球蛋白序列的可能三维构象结构的计算机程序。通过检查这些显示图像能分析残基在候选免疫球蛋白序列发挥功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。这样，可以从受体序列和输入序列中选出FR残基并组合，从而得到期望的抗体特征，诸如对靶抗原的亲和力升高。一般而言，高变区残基直接且最实质的涉及对抗原结合的影响。4.人抗体本发明的人抗TAT226抗体可以通过如上所述耳关合选自人衍生噬菌体展示库的Fv克隆可变域序列与已知的人恒定域序列来构建。或者，可以通过杂交瘤方法来生成本发明的人单克隆抗TAT226抗体。用于生成人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系已有记载，例如KozborJ.Immunol.,133:3001(1984);Brodeuretal.,MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,pp.51-63(MarcelDekker，Inc,，NewYork,1987);及Boerneretal.,J.Immunol.,147:86(1991).例如，现在有可能生成在缺乏内源免疫球蛋白生成的情况下能够在免疫后生成人抗体完整全集的转基因动物(例如小鼠)。例如，已经记载了嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(JH)基因的纯合删除导致内源抗体生成的完全抑制。在此类种系突变小鼠中转移大量人种系免疫球蛋白基因将导致在抗原攻击后生成人抗体。参见例如Jakobovitsetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:2551(1993);Jakobovitsetal.，Nature362:255-258(1993);Brugge腿nnetal.，YearinImmunol.7:33(1993》基因改组也可用于在体外自非人(例如啮齿类)抗体衍生人抗体，其中人抗体具有与起始非人抗体相似的亲和力和特异性。依照此方法，它也称为"表位印记"(epitopeimprinting),如本文所述通过谨菌体展示兮支术得到的非人抗体片段的重链或轻链可变区用人V结构域基因全集替换，产生非人链-人链scFv或Fab嵌合物群。用抗原进行的选择导致非人链/人链嵌合scFv或Fab的分离，其中人链在一级噬菌体展示克隆中消除相应的非人链后恢复了抗原结合位点，即表位决定(印记，imprint)人链配偶体的选择。在重复该过程以替换剩余非人链时，得到人抗体(参见PCTWO93/06213，公开于1993年4完全人的抗体，它们不含非人起源的FR架或CDR残基。还可以由体外激活的B细胞来生成人抗体(参见美国专利No.5,567,610和5,229,275)。5.双特异性抗体双特异性抗体指对至少两种不同抗原具有结合特异性的单克隆抗体。在某些实施方案中，双特异性抗体是人抗体或人源化抗体。在某些实施方案中，结合特异性之一针对TAT226，结合特异性之另一针对任何其它抗原。在某些实施方案中，双特异性抗体可结合TAT226的两种不同表位。双特异性抗体还可用于将细胞毒剂定位于表达TAT226的细胞。这些抗体拥有TAT226结合臂和结合细胞毒剂(诸如例如肥皂草毒蛋白、抗千扰素-cu长春花生物碱类、蓖麻毒蛋白A链、曱氨蝶呤或放射性同位素半抗原)的臂。可将双特异性抗体制备成全长抗体或抗体片段(例如F(ab')2双特异性抗体)。用于构建双特异性抗体的方法是本领域已知的。在传统上，双特异性抗体的重组生产基于两对免疫球蛋白重链-轻链的共表达，其中两种重链具有不同的特异性(MillsteinandCuello，A^w305:537(1983))。由于免疫J求蛋白重链和轻链的随机分配，这些杂交瘤(四源杂交瘤(quadroma))生成10种不同抗体分子的潜在混合物，其中只有一种具有正确的双特异性结构。通常通过亲和层析步骤进行的正确分子的纯化相当麻烦且产物产量低。类似的规程4皮露于WO93/08829，公开于1993年5月13日及Trauneckeraa/.,10:3655(1991)。依照一种不同的方法，将具有期望结合特异性(抗体-抗原结合位点)的抗体可变域与免疫球蛋白恒定域序列融合。例如，与包含至少部分铰链、CH2和CH3区的免疫球蛋白重链恒定域进行融合。在某些实施方案中，在至少一种融合物中存在包含轻链结合所必需的位点的第一重链恒定区(CHl)。将编码免疫球蛋白重链融合物和，在需要时，免疫球蛋白轻链的DNA插入分开的表达载体，并共转染到合适的宿主生物体中。在用于构建的三种多肽^^比例不等时提供最佳产量的实施方案中，这为调整三种多肽片段的相互比例提供了极大的灵活性。然而，在至少两种多肽链以相同比例表达导致高产量时或在该比例没有特别意义时，有可能将两种或所有三种多肽链的编码序列插入一个表达载体。在该方法的一个实施方案中，双特异性抗体由一个臂上具有第一结合特异性的杂合免疫球蛋白重链，和另一个臂上的杂合免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)构成。由于免疫球蛋白轻链仅在半个双特异性分子中的存在提供了便利的分离途径，因此发现这种不对称结构便于将期望的双特异性复合物与不想要的免疫球蛋白链组合分开。该方法披露于WO94/04690。关于生成双特异性抗体的进一步详情参见例如Suresh"a/.,M"Ws/"121:210(1986)。依照另一种方法，可改造一对抗体分子间的界面，以将从重组细胞培养物回收的异二聚体的百分比最大化。界面包含至少部分抗体恒定域CH3结构域。在该方法中，将第一抗体分子界面的一个或多个小氨基酸侧链用较大侧链(例如酪氨酸或色氨酸)替换。通过将大氨基酸侧链用较小氨基酸侧链(例63如丙氨酸或苏氨酸)替换，在第二抗体分子的界面上产生与大侧链相同或相似大小的补偿性"空腔"。这提供了较之其它不想要的终产物诸如同二聚体提高异二聚体产量的机制。双特异性抗体包括交联或"异源偶联"抗体。例如，异源偶联物中的一种抗体可与亲合素偶联，另一种抗体与生物素偶联。例如，此类抗体已经建议用于将免疫系统细胞靶向不想要的细胞(美国专利No.4,676,980)，及用于治疗HIV感染(WO91/00360，WO92/00373和EP03089)。可使用任何便利的交联方法来制备异源偶联抗体。合适的交联剂是本领域众所周知的，连同许多交联技术一起披露于美国专利No.4,676,980。文献中还记载了由抗体片段生成双特异性抗体的技术。例如，可使用化学连接来制备双特异性抗体。Brennan"Sc/e"ce229:81(1985)记载了通过蛋白水解切割完整抗体以生成F(ab')2片段的规程。将这些片段在存在二硫醇络合剂亚砷酸钠的情况下还原，以稳定邻近的二;5危醇并防止分子间二石危《定的形成。然后将产生的Fab，片段转变为硫代硝基苯曱酸酯(TNB)衍生物。然后将Fab'-TNB衍生物之一通过巯基乙胺的还原重新恢复成Fab'-硫醇，并与等摩尔量的另一种Fab'-TNB衍生物混合，以形成双特异性抗体。产生的双特异性抗体可用作酶的选择性固定化试剂。最新的进展便于从大肠杆菌直接回收Fab'-SH片段，这些片段可化学偶联以形成双特异性抗体。ShalabyWa/.，/Exp.Med175:217-225(1992)记载了完全人源化的双特异性抗体F(ab')2分子的生成。由大肠杆菌分开分泌每种Fab'片段，并在体外进行定向化学偶联以形成双特异性抗体。如此形成的双特异性抗体能够结合过表达HER2受体的细胞和正常人T细胞，以及触发人细胞毒性淋巴细胞针对人乳腺肺瘤靶物的溶解活性。还记载了从重组细胞培养物直接生成和分离双特异性抗体片段的多种技术。例如，已使用亮氨酸拉链生成双特异性抗体。Kostelnyefa/.,J/mww"o/.148(5):1547-1553(1992)。将来自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉链肽通过基因融合与两种不同抗体的Fab'部分连接。抗体同二聚体在铰链区还原以形成单体，然后重新氧化以形成抗体异二聚体。这种方法也可用于生成抗体同二聚体。Hollinger"a/.,尸rac.iVa".JcaJ.aSL490:6444-6448(1993)记载的"双抗体"技术提供了构建双特异性抗体片段的替代机制。该片段包含通过接头相连的重链恒定域(VH)和轻链恒定域(vo，所述接头太短使得同一条链上的两个结构域之间不能配对。因此，迫使一个片段上的VH和VL结构域与另一个片段上的互补V^和VH结构域配对，由此形成两个抗原结合位点。还报道了通过使用单链Fv(sFv)二聚体构建双特异性抗体片段的另一种策略。参见Gruberefa/.,/mmwm/,152:5368(1994)。设想了具有超过两个效价的抗体。例如，可制备三特异性抗体。Tutt"a/.，//薩謹/.147:60(1991)。6.多价抗体多价抗体可以比二价抗体更快的受到表达该抗体所结合抗原的细胞的内在化(和/或异化)。本发明的抗体可以是可容易地通过编码抗体多肽链的核酸的重组表达而生成的、具有三个或更多抗原结合位点(例如四价抗体)的多价抗体(IgM类别以外的)。多价抗体可包含二聚化结构域和三个或更多抗原结合位点。在某些实施方案中，二聚化结构域包含(或由其组成)Fc区或铰链区。在这种情况中，抗体将包含Fc区及Fc区氨基末端的三个或更多抗原结合位点。在某些实施方案中，多价抗体包含(或由其组成)三个至大约八个抗原结合位点。在一个这样的实施方案中，多价抗体包含(或由其组成)四个抗原结合位点。多价抗体包含至少一条多肽链(例如两条多肽链)，其中所述多肽链包含两个或多个可变域。例如，多肽链可包含VDl-(Xl)n-VD2-(X2)n-Fc,其中VD1是第一可变域，VD2是第二可变域，Fc是Fc区的一条多肽链，X1和X2代表氨基酸或多肽，而n是0或l。例如，多肽链可包含VH-CHl-柔性接头-VH-CH1-Fc区链；或VH-CH1-VH-CH1-Fc区链。本文中的多价抗体可进一步包含至少两条(例如四条)轻链可变域多肽。本文中的多价抗体可包含例如约两条至约八条轻链可变域多肽。本文设想的轻链可变域多肽包含轻链可变域，且任选进一步包含CL结构域。7.单域抗体在有些实施方案中，本发明的抗体是单域抗体(single-domainantibody)。单域抗体是包含抗体的整个或部分重链可变域或者整个或部分轻链可变域的单一多肽链。在某些实施方案中，单域抗体是人单域抗体(Domantis，Inc.，Waltham，MA;参见例如美国专利No.6,248,516Bl)。在一个实施方案中，单域抗体由抗体的整个或部分重链可变域组成。8.抗体变体在有些实施方案中，设想了本文所述抗体的氨基酸序列修饰。例如，可能希望改进抗体的结合亲和力和/或其它生物学特性。抗体的氨基酸序列变体此类修饰包括例如抗体氨基酸序列内的残基删除和/或插入和/或替代。可进行任何删除、插入和替代组合以获得最终的构建物，倘若最终的构建物具有期望的特征。可在制备序列时将氨基酸改变51入所要改变的抗体的氨基S交序列。可用于鉴定抗体中作为优选诱变位置的某些残基或区域的方法有"丙氨酸扫描诱变"，如CunninghamandWells,Science244:1081-1085(1989)中所述。这里，鉴定一个残基或一组靶残基(如带电荷的残基，诸如精氨酸、天冬氨酸、组氨酸、赖氨酸和谷氨酸)并用中性或带负电荷的氨基酸(例如丙氨酸或多聚丙氨酸)替代，以影响氨基酸与抗原的相互作用。然后通过在或对替代位点引入更多或其它变体，推敲对替代展示功能敏感性的氨基酸位置。由此，尽管用于引入氨基酸序列变异的位点是预先决定的，然而突变本身的本质不必预先决定。例如，为了分析指定位点处突变的后果，在靶密码子或区域进行丙氨酸扫描或随机诱变，并对所表达免疫球蛋白筛选期望的活性。氨基酸序列插入包括氨基和/或羧基末端的融合，长度范围由一个残基至包含一百或更多残基的多肽，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的例子包括具有N端曱硫氨酰残基的抗体。抗体分子的其它插入变体包括将抗体的N或C端与酶(如用于ADEPT)或延长抗体血清半衰期的多肽融合。在某些实施方案中，本发明的抗体发生了改变以提高或降低抗体糖基化的程度。多肽的糖基化典型的或是N-连接的或是O-连接的。N-连接指碳水化合物模块附着于天冬酰胺残基的侧链。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X是除脯氨酸外的任何氨基酸)是将碳水化合物模块酶促附着于天冬酰胺侧链的识别序列。如此，多肽中这两种三肽序列任一的存在产生了潜在的糖基化位点。O-连接的糖基化指将糖类N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖之一附着于羟基氨基酸，最常见的是丝氨酸或苏氨酸，但也可使用5-羟脯氨酸或5-羟赖氨酸。向抗体中添加或删除糖基化位点可通过改变氨基酸序列从而创建或消除一个或多个上述三肽序列而便利地完成(用于N-连接的糖基化位点)。所66述改变还可通过向原始抗体的序列中添加、删除、或替代一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基来进行(用于O-连接的糖基化位点)。若抗体包含FC区，则可改变附着其上的碳水化合物。例如，美国专利申请US2003/0157108(Presta,L.)中记载了有缺乏岩藻糖的成熟碳水化合物结构附着于抗体Fc区的抗体。还可参见US2004/0093621(KyowaHakkoKogyoCo"Ltd.)。WO2003/011878(Jean-Mairet等人)和美国专利第6，602,684号(Umana等人)中提到了在附着于抗体Fc区的碳水化合物中有等分N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)的抗体。WO1997/30087(Patel等人)中报告了在附着于抗体Fc区的寡糖中有至少一个半乳糖残基的抗体。关于有更改碳水化合物附着于其Fc区的抗体还可参见WO1998/58964(Raju,S.)和WO1999/22764(Raju，S.)。关于具有改良糖基化的抗原结合分子还可参见US2005/0123546(Umanaetal.)。在某些实施方案中，糖基化变体包含Fc区，其中附着于Fc区的碳水化合物结构缺乏岩藻糖。此类变体具有改进的ADCC功能。任选的是，Fc区还包含进一步改进ADCC的一个或多个氨基酸替代，例如Fc区位置298、333和/或334处的替代(Eu残基编号方式)。涉及"脱岩藻糖型"或"岩藻糖缺乏型"抗体的出版物的例子包括US2003/0157108;WO2000/61739;WO2001/29246;US2003/0115614;US2002/0164328;US2004/0093621;US2004/0132140;US2004/0110704;US2004/0110282;US2004/0109865;WO2003/085119;WO2003/084570;WO2005/035586;WO2005/035778;WO2005/053742;Okazakietal.J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004);Yamane-Ohnukietal.Biotech.Bioeng.87:614(2004)。生成脱岩藻糖化抗体的细胞系的例子包括蛋白质岩藻糖化缺陷的Lec13CHO细胞(Ripkaetal.Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986);美国专利申请号US2003/0157108Al,Presta，L;及WO2004/056312Al，Adamsetal"尤其是实施例1l)和敲除细胞系，诸如a-l,6-岩藻糖转移酶基因，FUT8,敲除的CHO细胞(Yamane-Ohnukietal.Biotech.Bioeng.87:614(2004》。另一类变体是氨基酸替代变体。这些变体在抗体分子中有至少一个氨基酸残基用不同残基替代。进行替代诱变的感兴趣位点包括高变区，但是也设想了FR改变。表l中"优选替代"栏显示了保守替代。如果此类替代导致期望的生物学活性变化，那么可导入表l中称为"例示替代"的更实质变化，或如下文参照氨基酸分类进一步所述，并筛选产物。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table>对抗体生物学特性的实质性修饰可通过选择对维持以下方面的效果差异显著的替代来实现(a)替代区域中多肽主链的结构，例如(折叠)片或螺旋构象，(b)靶位点处分子的电荷或疏水性，或(c)侧链的体积。根据其侧链特性的相似性，可将氨基酸如下分组(A.L.Lehninger，inBiochemistry,seconded.,pp.73-75,WorthPublishers,NewYork(1975》(1)非才及性的Ala(A)、Val(V)、Leu(L)、lie(1)、Pro(P)、Phe(F)、Trp(W)、Met(M)(2)不带电荷的、极性的Gly(G)、Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q)(3)酸性的Asp(D)、Glu(E)(4)碱性的Lys(K)、Arg(R)、His(H)或者，根据共同的侧链特性，天然存在残基可如下分组(1)疏水性的正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、lie;(2)中性、亲水性的Cys、Ser、Thr、Asn、Gln;(3)酸性的Asp、Glu;(4)石咸性的His、Lys、Arg;(5)影响链取向的残基Gly、Pro;(6)芳香力臭的Trp、Tyr、Phe。非保守替代需要用这些类别之一的成员替换另一个类别的。此类替代残基还可以导入保守替代位点，或导入剩余(非保守)位点。一类替代变体涉及替代亲本抗体(例如人源化或人抗体)的一个或多个高变区残基。通常，选"^用于进一步开发的所得变体相对于产生它们的亲本抗体将具有改变的(例如改进的)生物学特性。用于生成此类替代变体的一种便利方法涉及使用噬菌体展示的亲和力成熟。简而言之，将数个高变区位点(例如6-7个位点)突变，在各个位点产生所有可能的氨基酸替代。如此生成的抗体展示在丝状噬菌体颗粒上，作为与各个颗粒内包装的噬菌体外壳蛋白(例如M13基因III产物)至少一部分的融合物。然后对噬菌体展示的变体筛选其生物学活性(例如结合亲和力)。为了鉴定用于修饰的候选高变区位点，可进行扫描诱变(例如丙氨酸扫描)以鉴定对抗原结合具有重要贡献的高变区残基。或者/另外，分析抗原-抗体复合物的晶体结构以鉴定抗体和抗原之间的接触点可能是有益的。所述接触残基及邻近残基是依照本领域已知的技术(包括本文详述的技术)进行替代的候选位点。一旦产生这样的变体，使用本领域已知的技术(包括本文所述的技术)对该组变体进行筛选，编码抗体氨基酸序列变体的核酸分子可通过本领域知道的多种方法来制备。这些方法包括但不限于从天然来源分离(在天然发生氨基酸序列变体介导的(或定点)诱变、PCR诱变和盒式诱变来制备。可能希望在本发明抗体的Fc区中引入一处或多处氨基酸修饰，由此生成Fc区变体。Fc区变体可包括在一个或多个氨基酸位置(包4舌铰链半胱氨酸)包含氨基酸修饰(如替代)的人Fc区序歹'J(如人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4Fc区)。依照此描述和本领域的教导，设想了在有些实施方案中，本发明的抗体与野生型对应抗体相比可在例如Fc区中包含一处或多处改变。与它们的野生型对应物相比，这些抗体仍将基本上保留治疗功效所需要的相同特性。例如，认为可在Fc区中进行将会导致Clq结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)改变(即或是增强或是削弱)的某些改变，例如W099/51642中所述。还可参见关注Fc区变体其它实例的DuncanandWinter,Nature322:738-40(1988);美国专利5，648,260;美国专利5，624，821;及W094/29351。WO00/42072(Presta)和WO2004/056312(Lowman)记载了对FcR的结合提高或降低的抗体变体。在此明确收入这些专利出版物的内容作为参考。还可参见Shieldsetal.J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。半衰期延长且对新生儿Fc受体(FcRn)(它负责将母体IgG转移给胎儿)(Guyeretal.,J.Immunol.117:587(1976)及Kimetal.，J.Immunol.24:249(1994))的结合改良的抗体记载于US2005/0014934A1(Hintonetal.)。这些抗体包含具有一处或多处改进Fc区与FcRn结合的替代的Fc。具有改变的Fc区氨基酸序列且Clq结合能力升高或降低的多肽变体记载于美国专利No.6,194,551B1,W099/51642。在此明确收入这些专利出版物的内容作为参考。还可参见Idusogieetal.J.Immunol.164:4178-4184(2000)。一方面，本发明提供了在包含Fc区的Fc多肽的界面中包含修饰的抗体，其中所述修饰便于和/或促进二聚化。这些修饰包括在第一Fc多肽中导入隆起(protuberance)和在第二Fc多肽中导入空腔(cavity)，其中所述隆起可位于所述空腔中，从而促进第一与第二Fc多肽的复合。生成具有这些修饰的抗体的方法是本领域已知的，例如记载于美国专利No.5,731,168。9.抗体f斤生物可进一步修饰本发明的抗体以包含本领域知道的且易于获得的额外非蛋白质性质部分。优选的是，适于抗体衍生化的部分是水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧曱基纤维素、右旋糖苷、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-l，3-二氧戊环、聚-l，3,6-三噁烷、乙烯/马来酸肝共聚物、聚氨基酸(均聚物或随机共聚物)、和右旋糖苷或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。由于其在水中的稳定性，聚乙二醇丙醛在生产中可能具有优势。聚合物可以是任何分子量，而且可以是分支的或不分支的。附着到抗体上的聚合物数目可以变化，而且如果附着了超过一个聚合物，那么它们可以是相同或不同的分包括但不限于待改进抗体的具体特性或功能、抗体衍生物是否将用于指定条件下的治疗等。在另一个实施方案中，提供了抗体与可通过暴露于辐射而选择性加热的非蛋白质性质模块的偶联物。在一个实施方案中，该非蛋白质性质模块是碳纳米管(Kametal.，Proc.Natl.Acad.Sci.102:11600-11605(2005))。辐射可以是任何波长的，包括但不限于对普通细胞无害但将非蛋白质性质模块加热至接近抗体-非蛋白质性质模块的细胞被杀死的温度的波长。B.制备抗体的某些方法1.某些基于杂交瘤的方法
技术领域：
：本发明的抗TAT226单克隆抗体可使用最初由Kohler"，A^似w256:495(1975)记载的杂交瘤方法来制备，或者可以通过重组DNA方法(美国专利No.4,816,567)来制备。在杂交瘤方法中，免疫小鼠或其它适宜的宿主动物，诸如仓鼠，以引发生成或能够生成如下抗体的淋巴细胞，所述抗体将特异性结合用于免疫的蛋白质。TAT226的抗体一般通过在动物中多次皮下(sc)或腹膜内(ip)注射TAT226和佐剂来生成。TAT226可以使用本领域众所周知的方法来制备，其中有些方法在本文中有描述。例如，TAT226可以重组生产。在一个实施方案TAT226衍生物免疫。在一个实施方案中，将动物用TAT226-IgGl融合蛋白免疫。在一个实施方案中，将动物用在单磷酰脂质A(MPL)/海藻糖dicrynomycolate(TDM)(RibiImmunochem.Research,Inc.,Hamilton,MT)的溶液中的TAT226免疫原性衍生物进行免疫，溶液皮内注射于多个部位。2周后，对动物进行加强免疫。7-14天后，对动物采血，并测定抗TAT226滴度。对动物进行加强免疫，直到滴度达到平台(plateaus)。或者，可以在体外免疫淋巴细胞。然后，使用合适的融合剂诸如聚乙二71醇将淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，以形成杂交瘤细胞(Goding,Mowoc/o""/^wa力ocfej1..尸n'wci^/asaw//Vac/ce，pp.59-103,AcademicPress,1986)。将如此制备的杂交瘤细胞在合适的培养基中接种和培养，例如含有抑制未融合的亲本骨髓瘤细胞生长或存活的一种或多种物质的培养基。例如，若亲本骨髓瘤细胞缺乏酶次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT或HPRT),则用于杂交瘤的培养基典型的将含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸苷(HAT培养基)，这些物质阻止HGPRT缺陷细胞生长。在某些实施方案中，骨髓瘤细胞是那些高效融合、支持所选抗体生成细胞稳定的高水平生成抗体、并对诸如HAT培养基的培养基^:感的。例示性的骨髓瘤细胞包括但不限于鼠骨髓瘤系，诸如那些可从索尔克研究所细胞分配中心(SalkInstituteCellDistributionCenter,SanDiego,California,USA)获得的MOPC-21和MPC-11小鼠肿瘤及可从美国典型培养物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,Rockville，Maryland,USA)获4寻的SP-2或X63-Ag8-653细胞所衍生的。人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系也已记载用于生成人单克隆抗体(Kozbor,乂/附w丽o/.133:3001(1984);Brodeur"a/.,Mowoc/o腦/」油力o办尸W(iwWow7^c/zm'，es<3"<i^///cWc>ra,pp.51-63,MarcelDekker,Inc.,NewYork,1987)。可对杂交瘤细胞正在其中生长的培养液测定能结合TAT226的单克隆抗体的生成。优选的是，通过免疫沉淀或通过体外结合测定法，诸如放射免疫测定法(RIA)或酶联免疫吸附测定法(ELISA)，测定由杂交瘤细胞生成的单克隆抗体的结合特异性。单克隆抗体的结合亲和力可通过例如MunsonWa/.，说oc/^m.107:220(1980)的Scatchard分析来测定。在鉴定得到生成具有期望特异性、亲和力和/或活性的抗体的杂交瘤细胞后，该克隆可通过有限稀释规程进行亚克隆并通过标准方法进行培养(Goding,Mwoc/o腦/v4w幼oWw尸W"一/esawJPra"/ce,pp.59-103,AcademicPress,1986)。适于这一目的的培养基包括例如D-MEM或RPMI-1640培养基。另外，杂交瘤细胞可在动物中作为腹水瘤进行体内培养。可通过常规免疫球蛋白纯化规程，诸如例如蛋白A-Sepharose、羟磷灰石层析、凝胶电泳、透析或亲和层析，将亚克隆分泌的单克隆抗体与培养液、腹水或血清适当分开。2.某些文库筛选方法
技术领域：
：本发明的抗TAT226抗体可以通过使用组合库筛选具有期望活性的抗体来创建。例如，本领域知道用于构建噬菌体文库及对此类文库筛选具有期望的结合特性的抗体的多种方法。此类方法一般记载于Hoogenboometal.(2001)于Afe/Zzofiy7Wb/ecw/ar^/o/o^178:1-37(O'Brienetal.，ed.,HumanPress,Totowa,NJ),在某些实施方案中是Leeetal.(2004)Mo/.所o/.340:1073-1093。在原理上，通过筛选噬菌体文库来选^^合成抗体克隆，所述噬菌体文库含有展示融合至噬菌体外壳蛋白的各种抗体可变区(Fv)片段的噬菌体。通过针对所需抗原的亲和层析淘选此类噬菌体文库。表达能够结合所需抗原的Fv片段的克隆被吸附至抗原，从而与文库中不结合的克隆分开。然后将结合的克隆从抗原上洗脱，而且可以通过额外的抗原吸附/洗脱循环进一步富集。本发明的任何抗TAT226抗体可以如下获得，即设计合适的抗原筛选规程来选择感兴趣的噬菌体克隆，接着使用来自感兴趣的噬菌体克隆的Fv序列和Kabatetal"SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,NIHPublication91-3242,BethesdaMD(1991)，vols.1-3中记载的合适的恒定区(Fc)序列构建全长抗TAT226抗体克隆。在某些实施方案中，抗体的抗原结合域由两个约110个氨基酸的可变(V)区形成，分别来自重链(VL)和轻链(VH)，都呈现三个高变环(HVR)或互补决定区(CDR)。可变域可以功能性的展示在噬菌体上，或是作为单链Fv(scFv)片段(其中VH和VL通过短的、柔性的接头共价相连)，或者作为Fab片段(其中它们各自与恒定域融合且非共价相互作用)，如Winteretal.,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)所述。在用于本文时，编码scFv的噬菌体克隆和编码Fab的噬菌体克隆统称为"Fv噬菌体克隆"或"Fv克隆"。VH和VL基因的全集可以通过聚合酶链式反应(PCR)分开克隆，并在噬菌体文库中随机重组，然后可以搜索抗原结合克隆，如Winteretal.,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)所述。来自经免疫来源的文库能提供对免疫原有高亲和力的抗体，无需构建杂交瘤。或者，可以克隆未免疫的全集，用于为广泛的非自身的及自身的抗原提供单一人抗体来源，无需任何免疫，如Griffithsetal.,EMBOJ，12:725-734(1993)所述。最后，未免疫的文库还可以以合成方式来构建，即从干细胞克隆未重排的V基因，并4吏用包含随机序列的PCR引物来编码高度可变的CDR3区及用来在体外实现重排，如HoogenboomandWinter,J.Mol.Bio1.，227:381-388(1992)所述。在某些实施方案中，通过与次要外壳蛋白pIII融合，-使用丝状噬菌体来展示抗体片段。抗体片段可以展示为单链Fv片段，其中VH与VL结构域通过柔性多肽间隔物在同一多肽链上相连，例如如Marksetal.，J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)所述，或者展示为Fab片段，其中一条链与pIII融合，另一条链分泌到细菌宿主细胞周质中，在此装配Fab-外壳蛋白结构，其通过取代一些里于生型夕卜壳蛋白而展示在p藍菌体表面上，^f列^口^口Hoogenboometal.,Nucl.AcidsRes.,19:4133-4137(1991)所述。酸。如果希望文库偏向抗TAT226克隆，那么可以给受试者免疫TAT226以产生抗体应答，并回收脾细胞和/或循环B细胞或其它外周血淋巴细胞(PBL)用于文库构建。在一个优选的实施方案中，如下得到了偏向抗TAT226克隆的人抗体基因片段文库，即在携带功能性人免疫球蛋白基因阵列(且缺乏功能性内源抗体生成系统)的转基因小鼠中产生抗TAT226抗体应答，使得TAT226免疫产生生成针对TAT226的人抗体的B细胞。生成人抗体的转基因小鼠的生成在下文中有描述。可以如下获得抗TAT226反应性细胞群的进一步富集，即使用合适的筛选规程来分离表达TAT226特异性膜结合抗体的B细胞，例如通过使用TAT226亲和层析进行的细胞分离或者细胞对荧光标记的TAT226的吸附及后续的荧光激活细胞分选(FACS)。能的抗体全集的更佳展现，而且还容许使用TAT226在其中没有抗原性的动物(人或非人的)物种构建抗体文库。为了构建掺入体外抗体基因的文库，从受试者收获干细胞以提供编码未重排抗体基因区段的核酸。可以从多种动物物种(诸如人、小鼠、大鼠、兔类、luprine、犬、猫、猪、牛、马、和禽类等)获得感兴趣的免疫细胞。从感兴趣的细胞回收编码抗体可变基因区段(包括VH和VL区段)的核酸并扩增。就重排的VH和VL基因文库而言，可以如下获得所需DNA，即从淋巴细胞分离基因组DNA或mRNA,接着用与重排的VH和VL基因的5'和3'末端匹配的引物进行聚合酶链式反应(PCR)，如Orlandietal.,Proc.Natl.Acad.Sci.(USA),86:3833-3837(1989)所述，由此构建多样性V基因全集供表达。可以从cDNA和基因组DNA扩增V基因，反向引物位于编码成熟V结构域的外74显子的5'末端，正向引物基于J区段内部，如Orlandietal.(1989)和Wardeta1.,Nature,341:544-546(1989)所述。然而，为了从cDNA进行扩增，反向《1物还可基于前导外显子内，如Jonesetal.,Biotechnol.,9:88-89(1991)所述,正向引物基于恒定区内，如Sastryetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.(USA),86:5728-5732(1989)所述。为了使互补性最大化，引物中可以掺入简并性，如Orlandietal.(1989)或Sastryeta1.(1989)所述。在某些实施方案中，如下将文库多样性最大化，即使用靶向每个V基因家族的PCR引物来扩增免疫细胞核酸样品中存在的所有可获得的VH和VL重排，例如如Marksetal.,J.Mol.Biol.，222:581-597(1991)或Orumetal.，NucleicAcidsRes.,21:4491-4498(1993)所述。为了将所扩增的DNA克隆到表达载体中，可以在PCRi1物的一端引入罕见的限制性位点作为标签，如Orlandietal.(1989)所述，或者用带标签的引物进行进一步的PCR扩增，如Clacksonetal.,Nature,352:624-628(1991)所述。合成重组的V基因全集可以在体外从V基因区段衍生。大多数人V膝因区段已经克隆和测序(Tomlinsonetal.，J.Mol.Biol.,227:776-798(1992))，并定位(Matsudaetal.，NatureGenet.，3:88-94(1993》;这些克隆的区段(包括H1和H2环的所有主要构造)可用于生成多样性VH基因全集，用到编码序列和长度多样性的H3环的PCR引物，如HoogenboomandWinter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)所述。VH全集还可如下生成，所有序列多^^性集中于单一长度的长H3环，如Barbasetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89:4457-4461(1992)所述。人VK和VX区段已经克隆和测序(WilliamsandWinter,Eur.J.Immunol.,23:1456-1461(1993))，而且可用于生成合成轻《连全集。基于一系列VH和VL折叠结构及L3和H3长度的合成V基因全集将编码具有可观结构多样性的抗体。扩增编码V基因的DNA后，依照HoogenboomandWinter,J.Mol.Biol.，227:381-388(1992)的方法，可以在体外重排种系V基因区段。抗体片段全集可以如下构建，即以数种方式将VH与VL基因联合在一起。可以在不同载体中创建各个全集，并在体外重组载体，例如如Hogrefeetal.，Gene,128:119-126(1993)所述，或者在体外通过组合感染来重组载体，例如Waterhouseetal.,Nucl.AcidsRes.,21:2265-2266(1993)中记载的loxP系统。体内重组方法利用Fab片段的双链性质来克服因大肠杆菌转化效率施加的库容量限制。分开克隆未免疫的VH和VL全集，一个克隆入噬菌粒，另一个克隆入噬菌体载体。然后通过用噬菌体感染含噬菌粒的细菌使得每个细胞包含一种不同组合来联合两个文库，库容量只受细胞存在数的限制(约1012个克隆)。两种载体都包含体内重组信号，使得VH与VL基因重组到单一复制子上，并共包装成噬菌体病毒粒。这些巨型文库提供了大量的具有优良亲和力(Kd"为约10—8M)的多样性抗体。或者，可以将全集依次克隆入同一载体，例如如Barbasetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88:7978-7982(1991)所述，或者通过PCR装配到一起，然后克隆，如Clacksonetal.,Nature,352:624-628(1991)所述。PCR装配还可用于将VH和VLDNA与编码柔性肽间隔物的DNA连接以形成单链Fv(scFv)全集。在另一种技术中，"细胞内PCR装配"用于通过PCR在淋巴细胞内联合VH与VL基因，然后克隆所连接基因的全集，如Embletonetal.,Nucl.AcidsRes.,20:3831-3837(1992)所述。未免疫文库(naivelibrary)(天然的或合成的)生成的抗体可具有中等亲和力(KcT'为约10M(fM")，但还可以如下在体外模拟亲和力成熟，即构建和再次选4奪次生文库，如Winteretal.(1994)，见上文所述。例如，在Hawkinsetal.,J.Mol.Biol.,226:889-896(1992)的方法或Grametal.,Proc.Natl.Acad.SciUSA,89:3576-3580(1992)的方法中，使用易错聚合酶在体外随机引入突变(Leimgetal.,Technique,1:11-15(1989))。另外，可以通过随机突变一个或多个CDR来进行亲和力成熟，例如在选定的个别Fv克隆中使用携带跨越感兴趣CDR的随机序列的引物进行PCR并筛选更高亲和力的克隆。WO9607754(公开于1996年3月14日)记载了用于在免疫球蛋白轻链的互补决定区中诱导诱变以创建轻链基因文库的方法。另一种高效方法是将通过噬菌体展示选出的VH或VL结构域与得自未免疫供体的天然存在V结构域变体组合，并在数轮链改组中筛选更高亲和力，如Marksetal.,Biotechnol.，10:779-783(1992)所述。此技术容许生成亲和力约10—9M或更低的抗体和抗体片段。文库的筛选可通过本领域已知的多种技术来实现。例如，TAT226可用于包被吸附板的孔，在附着至吸附板的宿主细胞上表达，或用于细胞分选，或者偶联至生物素以用链霉亲合素包被的珠捕捉，或者用于淘选噬菌体展示库的任何其它方法。在适于至少部分噬菌体颗粒结合吸附剂的条件下，使噬菌体文库样品接触固定化的TAT226。正常情况下，选择包括pH、离子强度、温度等等的条件来模拟生理学条件。结合至固相的噬菌体进行清洗，然后用酸洗脱，例如如Barbasetal.,Proc.Natl.Acad.SciUSA，88:7978-7982(1991)所述，或者用碱洗脱，例如如Marksetal.,J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)所述，或者通过TAT226抗原竟争洗脱，例如在与Clacksonetal.,Nature,352:624-628(1991)的抗原竟争法类似的规程中。噬菌体在单轮选择中可以富集20-l,000倍。此夕卜，富集的噬菌体可以在细菌培养物中进行培养，并进行更多轮选择。选择的效率取决于许多因素，包括清洗过程中解离的动力学，及单个噬菌体上的多个抗体片段是否能同时结合抗原。具有较快解离动力学(和弱结合亲和力)的抗体可以通过使用短时间的清洗、多价噬菌体展示、及固相中的高抗原包被密度来保留。高密度不仅通过多价相互作用而稳定了噬菌体，而且有利于已解离的噬菌体的再结合。具有较慢解离动力学(和强结合亲和力)的抗体的选择可以通过使用长时间的清洗和单价噬菌体展示(如Bassetal.，Proteins,8:309-314(1990)和WO92/09690所述)及低抗原包被密度(如Marksetal.,Biotechnol.,10:779-783(1992)所述)来促进。有可能在对TAT226具有不同亲和力的噬菌体抗体之间进行选择，甚至是亲和力略有差异的。然而，选定抗体的随机诱变(例如如有些亲和力成熟技术进行)有可能产生许多突变体，多数结合抗原，少数具有更高的亲和力。通过限制TAT226,罕见的高亲和力噬菌体能竟争胜出。为了保留所有较高亲和力的突变体，可以将噬菌体与过量的生物素化TAT226—起温育，但是生物素化TAT226的摩尔浓度低于TAT226的目标摩尔亲和常数。然后用链霉亲合素包被的顺磁珠捕捉高亲和力的结合噬菌体。此类"平衡捕捉"容许依照结合亲和力来选择抗体，其灵敏性容许从大大过量的低亲和力噬菌体中分离出亲和力只有原值2倍的突变体克隆。还可以操作清洗结合至固相的噬菌体的条件来进行基于解离动力学的区分。抗TAT226克隆可以基于活性进行选4奪。在某些实施方案中，本发明提供第二蛋白质结合的抗TAT226抗体。对应于此类抗TAT226抗体的Fv克隆可以如下选出(1)如上所述从噬菌体文库分离抗TAT226克隆，并任选通过在合适的细菌宿主中培养来扩增所分离的噬菌体克隆群；(2)选出分别想阻断和不阻断其活性的TAT226和第二蛋白质；(3)使抗TAT226噬菌体克隆吸附至固定化的TAT226;(4)使用过量的第二蛋白质来洗脱任何不想要的、识别77TAT226结合决定簇(其与第二蛋白质的结合决定簇交叠或共享)的克隆；并(5)洗脱在步骤(4)后仍然吸附的克隆。任选的是，具有期望的阻断/不阻断特性的克隆可以通过一次或多次重复本文所述选"^规程来进一步富集。编码本发明杂交瘤衍生单克隆抗体或噬菌体展示Fv克隆的DNA易于使用常规规程分离和测序(例如通过使用设计成自杂交瘤或噬菌体DNA模板特异性扩增感兴趣的重链和轻链编码区的寡核苷酸引物)。一旦分离，可将DNA置于表达载体中，然后将该表达载体转染到原本不生成免疫球蛋白蛋白质的宿主细胞中，诸如大肠杆菌细胞、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞，以在重组宿主细胞中获得所需单克隆抗体的合成。关于编码抗体的DNA在细菌中的重组表达的综述性-沦文包括Skerraetal.，Curr.OpinioninImmunol"5:256(1993)及Pluckthun,Immunol.Revs,130:151(1992)。编码本发明Fv克隆的DNA可以联合编码重链和/或轻链恒定区的已知DNA序歹'J(例如适宜的DNA序列可得自Kabatetal.,见上文)以形成编码全长或部分重链和/或轻链的克隆。应当领会，任何同种型的恒定区都可用于此目的，包括IgG、IgM、IgA、IgD和IgE恒定区，而且此类恒定区可以得自任何人或动物物种。衍生自一种动物(诸如人)物种的可变域DNA,然后与另一动物物种的恒定区DNA融合以形成"杂合的"全长重《连和/或轻链的编码序列的Fv克隆包括在本文所用"嵌合"和"杂合"抗体的定义中。在某些实施方案中，衍生自人可变DNA的Fv克隆与人恒定区DNA融合以形成全长或部分人重链和/或轻^涟的编码序列。还可以修饰编码衍生自本发明杂交瘤的抗TAT226抗体的DNA,例如通过替代，即用人重链和轻链恒定区的编码序列代替衍生自杂交瘤抗体的同源鼠源序歹'J(例如如Morrisonetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984)中的方法)。可以进一步修饰编码杂交瘤或Fv克隆衍生抗体或片段的DNA，通过共价接合免疫球蛋白编码序列和非免疫球蛋白多肽的整个或部分编码序列。可以以该方式制备具有本发明的Fc克隆或杂交瘤克隆衍生抗体的结合特异性的"嵌合"或"杂合"抗体。3.载体、宿主细胞和重组方法为了重组生产本发明的抗体，分离编码它的核酸，并将其插入可复制载体，用于进一步克隆(DNA扩增)或表达。可使用常规流程容易的分离编码抗体的DNA并测序(如使用能够与编码抗体重链和轻链的基因特异结合的寡核苷酸探针)。可利用许多载体。载体的选择部分取决于将要使用的宿主细胞。一般而言，宿主细胞或是原核或是真核(通常是哺乳动物)起源的。应当领会，任何同种型的恒定区可用于此目的，包括IgG、IgM、IgA、IgD和IgE恒定区，而且此类恒定区可以从任何人或动物物种获得。a)-使用原核宿主细J包生成抗体(1)载体构建可使用标准重组技术来获得编码本发明抗体多肽构件的多核苷酸序列。可从抗体生成细胞诸如杂交瘤细胞分离期望的多核苷酸序列并测序。或者，可使用核苷酸合成仪或PCR技术合成多核苷酸。一旦得到，将编码多肽的序列插入能够在原核宿主中复制并表达异源多核苷酸的重组载体。为了本发明，可使用本领域可获得的且知道的许多载体。适宜载体的选择将主要取决于将要插入载体的核酸的大小和将要用载体转化的具体宿主细胞。根据其功能(扩增或表达异源多核苷酸，或二者兼之)及其与它在其中驻留的具体宿主细胞的相容性，每种载体含有多种构件。载体构件通常包括但不限于复制起点、选4奪标志基因、启动子、核糖体结合位点(RBS)、信号序列、异源核酸插入片段、和转录终止序列。一般而言，与宿主细胞一起使用的质粒载体包含衍生自与这些宿主相容物种的复制子和控制序列。载体通常携带复制位点，以及能够在转化细胞中提供表型选择的标志序列。例如，通常用衍生自大肠杆菌物种的质粒pBR322转化大肠杆菌。pBR322包含编码氨节青霉素(Amp)和四环素(Tet)抗性的基因，由此提供轻松鉴定转化细胞的手段。pBR322、其衍生物、或其它微生物质粒或噬菌体还可包含或经修饰而包含可被微生物生物体用于表达内源蛋白质的启动子。Carter等人，美国专利5,648，237中详细记载了用于表达特定抗体的pBR322衍生物的实例。另外，可将包含与宿主微生物相容的复制子和控制序列的噬菌体载体用作这些宿主的转化载体。例如，可使用噬菌体诸如入GEM.TM.-11来构建可用于转化易感宿主细胞诸如大肠杆菌LE392的重组载体。本发明的表达载体可包含两种或多种启动子-顺反子对，它们编码每一种多肽构件。启动子是位于顺反子上游(5')的非翻译调控序列，它调控顺反子的表达。原核启动子通常分成两类，诱导型的和组成性的。诱导型启动子指响应培养条件的变化(如营养物的存在与否或温度变化)而启动受其控制的顺反子的升高水平转录的启动子。众所周知受到多种潜在宿主细胞识别的大量启动子。通过限制酶消化切下源DNA中的启动子并将分离的启动子序列插入本发明的载体，由此可将选择的启动子与编码轻链或重链的顺反子DNA可操作连接。天然启动子序列和许多异源启动子都可用于指导靶基因的扩增和/或表达。在有些实施方案中，使用异源启动子，因为与天然靶多肽启动子相比，它们通常容许所表达靶基因的更高转录和更高产量。适用于原核宿主的启动子包括PhoA启动子、(3-半乳糖苷酶和乳糖启动子系统、色氨酸(trp)启动子系统、和杂合启动子诸如tac或trc启动子。然而，在细菌中有功能的其它启动子(诸如其它已知的细菌或噬菌体启动子)也是合适的。它们的核苷酸序列已经发表，由此熟练工作人员能够使用提供任何所需限制位点的接头或衔接头将它们与编码靶轻链和重链的顺反子可操作连接(Siebenlistetal.，Cell20:269(1980))。在本发明的一个方面，重组载体内的每个顺反子都包含指导所表达多肽穿膜转运的分泌信号序列构件。一般而言，信号序列可以是载体的构件，或者它可以是插入载体的靶多肽DNA的一部分。为了本发明而选择的信号序列应当是受到宿主细胞识别并加工(即被信号肽酶切除)的信号序列。对于不识别并加工异源多肽的天然信号序列的原核宿主细胞，将信号序列用选自例如下组的原核信号序列替代碱性磷酸酶、青霉素酶、Ipp、或热稳定的肠毒素II(STII)前导序列、LamB、PhoE、Peffi、OmpA和MBP。在本发明的一或其变体。在另一方面，依照本发明的免疫球蛋白的生成可在宿主细胞的细胞质中发生，因此不需要在每个顺反子内存在分泌信号序列。在那点上，免疫球蛋白轻链和重链在细胞质内表达、折叠和装配而形成功能性免疫球蛋白。某些宿主菌株(如大肠杆菌trxB-菌抹)提供有利于二硫键形成的细胞质条件，从而容许所表达蛋白质亚基的正确折叠和装配。ProbaandPluckthun,Gene159:203(1995))。本发明的抗体可使用如下表达系统来生成，其中所表达多肽构件的数量比率可以受到调控，从而将分泌且正确装配的本发明抗体的产量最大化。这种调控是至少部分通过同时调控多肽构件的翻译强度而实现的。Simmons等人，美国专利5,840，523中公开了用于调控翻译强度的一种技术。它在顺反子内利用翻译起始区(TIR)的变体。对于指定TIR,可创建具有一定范围翻译强度的一系列氨基酸或核苷酸序列变体，由此提供针对特定链的期望表达水平调节此因素的方便手段。可通过常规诱变技术导致能改变氨基酸序列的密码子变化来生成TIR变体。在某些实施方案中，核苷酸序列中的变化是沉默的。TIR中的改变可包括例如Shine-Dalgarno序列的数目或间距的改变，及信号序列中的改变。用于生成突变型信号序列的一种方法是在编码序列的开端生成不改变信号序列氨基酸序列的"密码子库"(即变化是沉默的)。这可通过改变每个密码子的第三个核苷酸位置来实现；另外，有些氨基酸，诸如亮氨酸、丝氨酸、和精氨酸，具有多种第一个和第二个位置，这可在建库中增加复杂性。Yansuraetal.,METHODS:ACompaniontoMethodsinEnzymol.4:151-158(1992)中详细记载了这种诱变方法。在一个实施方案中，对于载体中的每个顺反子，生成具有一定范围TIR强度的一组载体。这个有限集合提供了每条链的表达水平以及期望抗体产物的产量在各种TIR强度组合下的比较。可通过量化报道基因的表达水平来测定TIR强度，Simmons等人，美国专利5,840,523中有详细描述。根据翻i奪强度的比较，选择期望的个别TIR在本发明的表达载体构建物中进行组合。适于表达本发明抗体的原核宿主细胞包括古细菌(Archaebacteria)和真细菌(Eubacteria),诸如革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体。有用细菌的实例包括埃希氏菌属(Escherichia)(如大肠埃希氏菌E.coli)、芽孢杆菌属(Bacillus)(如枯草芽孑包杆菌B.subtilis)、肠杆菌属(Enterobacterial々支单胞菌属(Pseudomonas)(如铜绿假单胞菌P.aeruginosa)物种、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)、粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescans)、克雷伯氏菌属(Klebsiella),变形菌属(Proteus)、志贺氏菌属(Shigella)、根瘤菌属(Rhizobium)、透明颤菌属(Vitreoscilla)、或副-求菌属(Pamcoccus)。在一个实施方案中，使用革兰氏阴性细胞。在一个实施方案中，使用大肠杆菌细胞作为本发明的宿主。大肠杆菌菌抹的实例包括菌4朱W3110(Bachmann，CellularandMolecularBiology,第2巻，Washington,D.C.，美国孩史生物学学会，1987，第1190-1219页；ATCC保藏号27，325)及其衍生物，包括具有基81因型W3110AfhuA(AtonA)ptr3lacIqlacL8AompTA(nmpc-fepE)degP41kanR的菌林33D3(美国专利号5,639,635)。其它菌抹及其衍生物，诸如大肠杆菌294(ATCC31,446)、大肠杆菌B、大肠杆菌;U776(ATCC31,537)和大肠杆菌RV308(ATCC31，608)也是合适的。这些实例只是例示而非限制。本领域知道用于构建具有指定基因型的任何上述细菌衍生物的方法，参见例如Bassetal.，Proteins8:309-314(1990)。通常必需考虑复制子在细菌细胞中的可复制性来选择适宜的细菌。例如，在使用众所周知的质粒诸如pBR322、pBR325、pACYC177或pKN410来提供复制子时，大肠杆菌、沙雷氏菌属、或沙门氏菌属物种可能适于用作宿主。通常，宿主细胞应当分泌最小量的蛋白水解酶，而且可能希望在细胞培养中掺入额外的蛋白酶抑制剂。C2)抗体生成用上述表达载体转化宿主细胞，并在为了诱导启动子、选择转化子或扩增编码期望序列的基因而适当改动的常规营养培养基中进行培养。转化即将DNA导入原核宿主，使得DNA能够进行复制，或是作为染色体外元件或是通过染色体成分。根据所用宿主细胞，使用适于这些细胞的标准技术进行转化。采用氯化钙的钙处理通常用于具有坚固细胞壁屏障的细菌细胞。另一种转化方法采用聚乙二醇/DMSO。使用的还有一种技术是电穿孔。在本领域知道的且适于培养选定宿主细胞的培养基中培养用于生成本发明多肽的原核细胞。合适培养基的实例包括添加了必需营养补充物的LB培养基(Luriabroth)。在有些实施方案中，培养基还含有根据表达载体的构建而选择的选择剂，以选择性容许包含表达载体的原核细胞生长。例如，向用于培养表达氨千青霉素抗性基因的细胞的培养基中添加氨千青霉素。除了碳、氮、和无初』磷酸盐来源以外，还可含有适当浓度的任何必需补充物，或是单独加入或是作为与另一种补充物或培养基的混合物，诸如复合氮源。任选的是，培养基可含有一种或多种选自下组的还原剂谷胱甘肽、半胱氨酸、胱胺、巯基乙酸盐/酯、二硫赤藓糖醇和二硫苏糖醇。在合适的温度培养原核宿主细胞。在某些实施方案中，对于培养大肠杆菌，培养温度的范围为约20。C至约39。C、约25。C至约37。C、或约30。C。主要取决于宿主生物体，培养基的pH可以是范围为约5至约9的任何pH。在某些实施方案中，对于大肠杆菌，pH是约6.8至约7.4、或约7.0。如果本发明的表达载体中使用诱导型启动子，那么在适于激活启动子的条件下诱导蛋白质表达。在本发明的一个方面，使用PhoA启动子来控制多肽的转录。因此，为了诱导，在磷酸盐限制培养基中培养经过转化的宿主细胞。在某些实施方案中，磷酸盐限制培养基是C.R.A.P培养基(参见例如Simmonsetal.,J.Immunol.Methods263:133-147(2002))。根据所采用的载体构建物，可采用多种其它诱导物，正如本领域所知道的。在一个实施方案中，所表达的本发明多肽分泌到宿主细胞的周质中并从中回收。蛋白质回收通常涉及破坏微生物，通常通过诸如渗压震扰(osmoticshock)、超声处理或裂解等手段。一旦细胞遭到破坏，可通过离心或过滤清除细胞碎片或整个细胞。可以通过例如亲和树脂层析进一步纯化蛋白质。或者，蛋白质可能转运到培养液中并从中分离。可从培养液清除细胞，并将培养物上清液过滤和浓缩，用于进一步纯化所生成蛋白质。可使用普遍知道的方法诸如聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和Western印迹分析进一步分离和鉴定所表达蛋白质。在本发明的一个方面，通过发酵过程大量进行抗体生产。多种大规模补料-分批发酵流程可用于生产重组蛋白。大规模发酵具有至少1000升的容量，在某些实施方案中是约1，000至100,000升的容量。这些发酵罐使用搅拌器叶轮来分配氧和养分，尤其是葡萄糖(优选的碳源/能源)。小规模发酵通常指在体积容量不超过约100升的发酵罐中进行的发酵，范围可以是约l升至约IOO升。在发酵过程中，通常在将细胞在合适条件下培养至期望密度(如OD550约180-220,在此阶段细胞处于早期稳定期)后启动蛋白质表达的诱导。根据所采用的载体构建物，可使用多种诱导物，正如本领域知道的和上文描述的。可在诱导前将细胞培养更短的时间。通常将细胞诱导约12-50小时，但是可使用更长或更短的诱导时间。为了提高本发明多肽的产量和质量，可修改多项发酵条件。例如，为了改善所分泌抗体多肽的正确装配和折叠，可使用过度表达伴侣蛋白诸如Dsb蛋白(DsbA、DsbB、DsbC、DsbD和/或DsbG)或FkpA(具有伴侣活性的一种肽基脯氨酰-顺式,反式-异构酶)的额外载体来共转化宿主原核细胞。已经证明伴倡蛋白促进在细菌宿主细胞中生成的异源蛋白质的正确折叠和溶解度。Chenetal.,J.Biol.Chem.274:19601-19605(1999);Georgiou等人，美国专利6，083，715;Georgiou等人，美国专利6,027，888;BothmannandPluckthun,J.83Biol.Chem.275:17100-17105(2000);RammandPluckthun,J.Biol.Chem.275:17106-17113(2000);Arieetal.,Mol.Microbiol.39:199-210(2001))。为了将所表达异源蛋白质(尤其是对蛋白水解敏感的异源蛋白质)的蛋白水解降至最低，可将蛋白水解酶缺陷的某些宿主菌抹用于本发明。例如，可修饰宿主细胞菌抹，在编码已知细菌蛋白酶的基因中进行遗传突变，诸如蛋白酶III、OmpT、DegP、Tsp、蛋白酶I、蛋白酶Mi、蛋白酶V、蛋白酶VI及其组合。可以获得有些大肠杆菌蛋白酶缺陷菌株，参见例如Jolyetal.，(1998)见上文；Georgiou等人，美国专利5，264，365;Georgiou等人，美国专利5，508,192;Haraetal.,MicrobialDrugResistance2:63-72(1996)。在一个实施方案中，在本发明的表达系统中使用蛋白水解酶缺陷且经过过度表达一种或多种伴侣蛋白的质粒转化的大肠杆菌菌抹作为宿主细胞。(3)抗体纯化在一个实施方案中，进一步纯化本文中生成的抗体蛋白质以获得基本上同质的制品，用于进一步的测定和使用。可采用本领域知道的标准蛋白质纯化方法。下面的流程是合适纯化流程的例示免疫亲和或离子交换柱上的分馏、乙醇沉淀、反相HPLC、硅土或阳离子交换树脂诸如DEAE上的层析、层析聚焦、SDS-PAGE、硫酸铵沉淀、和使用例如SephadexG-75的凝胶过滤。在一个方面，将固定在固相上的蛋白A用于本发明抗体产物的免疫亲和纯化。蛋白A是来自金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureas)的WkD细胞壁蛋白质，它以高亲和力结合抗体Fc区。Lindmarketal.，J.Immunol.Meth.62:1-13(1983))。蛋白A固定其上的固相可以是具有玻璃或石英表面的柱子，或者可控孔径玻璃柱或硅酸柱。在有些应用中，柱子以诸如甘油等试剂包被，用以有可能防止污染物的非特异粘附。作为纯化的第一步，可以将衍生自如上所述细胞培养物的制备物施加到蛋白A固定化固相上，使得目的抗体特异结合蛋白A。然后清洗固相以清除与固相非特异结合的污染物。最后通过洗脱从固相回收目的抗体。b)j吏用真核宿主细月包生成抗体在真核宿主细胞中使用的载体通常包含一种或多种非限制性构件信号序列、复制起点、一种或多种标志基因、增强子元件、启动子、和转录终止序列。(1)信号序列构件在真核宿主细胞中使用的载体还可在目的成熟蛋白质或多肽的N端包含信号序列或具有特异切割位点的其它多肽。可以选4奪受到宿主细胞识别并加工(即被信号肽酶切除)的异源信号序列。在哺乳动物细胞表达中，可利用哺乳动物信号序列以及病毒分泌前导，例如单纯疱疹病毒gD信号。将这些前体区的DNA连接到编码抗体的DNA的读码框中。(2)复制起点通常，哺乳动物表达载体不需要复制起点构件。例如，SV40起点通常可能只因包含早期启动子才使用。(3)选择基因构件表达和克隆载体可包含选择基因，也称为选择标志。典型的选择基因编码如下蛋白质(a)赋予对抗生素或其它毒素的抗性，如氨卡青霉素、新霉素、甲氨蝶呤或四环素；(b)补足相应的营养缺陷；或(c)提供不能从复合培养基获得的关键营养物。选择方案的一个实例利用药物来阻滞宿主细胞的生长。经异源基因成功转化的那些细胞生成赋予药物抗性的蛋白质，因而幸免于选4奪方案。此类显性选择的实例使用药物新霉素、霉酚酸和潮霉素。适于哺乳动物细胞的选择标志的另一个实例是能够鉴定有能力摄取抗体核酸的细胞的选择标志，诸如DHFR、胸苷激酶、金属硫蛋白I和II(优选灵长类金属硫蛋白基因)、腺苷脱氨酶、鸟氨酸脱羧酶等。例如，在有些实施方案中，可以首先通过将所有转化子在含有甲氨蝶呤(Mtx，DHFR的一种竟争性拮抗剂)的培养基中进行培养来鉴定经DHFR选择基因转化的细胞。在有些实施方案中，在采用野生型DHFR时，适宜的宿主细胞是DHFR活性缺陷的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系(如ATCCCRL-卯96)。或者，可通过在含有针对选择标志的选择剂诸如氨基糖苷抗生素如卡那霉素、新霉素或G418的培养基中培养细胞来选择经编码抗体、野生型DHFR蛋白、和另一种选择标志诸如氨基糖苷3'-磷酸转移酶(APH)的DNA序列转化或共转化的宿主细胞(特别是包含内源DHFR的野生型宿主)。参见美国专利4,965,199。(4)启动子构件表达和克隆载体通常包含受到宿主生物体识别的启动子，且与编码感兴趣多肽(例如抗体)的核酸可操作连接。已知真核细胞的启动子序列。例如，事实上所有真核基因都具有富含AT区，它位于起始转录的位点上游约25至30个碱基处。在许多基因的转录起点上游70至80个碱基处发现的另一种序列是CNCAAT区，其中N可以是任何核芬酸。在大多数真核基因的3'端是AATAAA序列，它可能是向编码序列的3'端添加聚腺苷酸(polyA)尾的信号。在某些实施方案中，任何或所有这些序列可以合适的插入真核表达载体中。在哺乳动物宿主细胞中由载体转录受到例如从病毒(诸如多瘤病毒、禽痘病毒、腺病毒(诸如2型腺病毒)、牛乳头瘤病毒、禽类肉瘤病毒、巨细胞病毒、逆转录病毒、乙肝病毒、和猿猴病毒40(SV40))基因组获得的、来自异源哺乳动物启动子(如肌动蛋白启动子或免疫球蛋白启动子)的、来自热休克启动子的启动子的控制，倘若这些启动子与宿主细胞系统相容的话。方便的以SV40限制性片段的形式获得SV40病毒的早期和晚期启动子，该片段还包含SV40病毒复制起点。方便的以HindIIIE限制性片段的形式获得人巨细胞病毒的立即早期启动子。美国专利4,419,446中公开了使用牛乳头瘤病毒作为载体在哺乳动物宿主中表达DNA的系统。美国专利4,601，978中记载了该系统的一种》f改。还可参见Reyesetal.，Nature297:598-601(1982),其记载了在小鼠细胞中在来自单纯疱渗病毒的胸苷激酶启动子的控制下表达人P-干扰素cDNA。或者，可使用劳氏肉瘤病毒长末端重复序列作为启动子。(5)增强子元件构件常常通过在载体中插入增强子序列来提高高等真核细胞对编码本发明抗体的DNA的转录。现在知道来自哺乳动物基因(球蛋白、弹性蛋白酶、清蛋白、a-胎蛋白和胰岛素)的许多增强子序列。然而，通常使用来自真核细胞病毒的增强子。实例包括SV40复制起点晚期侧的增强子(bp100-270)、巨细胞病毒早期启动子增强子、多瘤病毒复制起点晚期侧的增强子、和腺病毒增强子。还可参见Yaniv,Nature297:H-l8(1982)，其记载了激活真核启动子的增强子元件。增强子可剪接到载体中，位于抗体多肽编码序列的5'或3'位置，但是一般位于启动子的5'位点。(6)转录终止构件在真核宿主细胞中使用的表达载体可以还包含终止转录和稳定mRNA所必需的序列。此类序列通常可从真核或病毒DNA或cDNA非翻译区的5'端86和偶尔的3'端获得。这些区域包含在编码抗体的mRNA的非翻译区中转录成聚腺苷酸化片段的核苷酸区段。一种有用的转录终止构件是牛生长激素聚腺苷酸化区。参见WO94/11026及其中公开的表达载体。(7)宿主细胞的选择和转化适于克隆或表达本文载体中的DNA的宿主细胞包括本文描述的高等真核细胞，包括脊推动物宿主细胞。脊推动物细胞在培养(组织培养)中的繁殖已经成为常规流程。有用哺乳动物宿主细胞系的实例有经SV40转化的猴肾CV1系(COS-7,ATCCCRL1651)、人胚肾系(293细胞或为悬浮培养而亚克隆的293细胞，Grahametal.,J.Gen.Virol.36:59(1977))、幼仓鼠肾细胞(BHK，ATCCCCL10)、中国仓鼠卵巢细胞ADHFR(CHO，Urlaubetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216(1980))、小鼠塞托利(Sertoli)细胞(TM4，Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980))、猴肾细胞(CVl,ATCCCCL70)、非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCCCRL1587)、人宫颈癌细胞(HELA，ATCCCCL2)、犬肾细胞(MDCK，ATCCCCL34)、牛鼠(buffalorat)肝细胞(BRL3A,ATCCCRL1442)、人肺细胞(W138,ATCCCCL75)、人肝细胞(H印G2，HB8065)、小鼠乳瘤(MMT060562,ATCCCCL51)、TRI细胞(Matheretal.,AnnalsN.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982))、MRC5细胞、FS4细胞和人肝细胞瘤(hepatoma)系(HepG2)。为了生成抗体，用上文所述表达或克隆载体转化宿主细胞，并在为了诱导启动子、选择转化子或扩增编码期望序列的基因而适当改动的常规营养培养基中进行培养。(8)宿主细胞的培养可在多种培养基中培养用于生成本发明抗体的宿主细胞。商品化培养基诸如Ham氏F10(Sigma)、极限必需培养基(MEM,Sigma)、RPMI-1640(Sigma)、和Dulbecco氏修改Eagle氏培养基(DMEM,Sigma)适于培养宿主细胞。另夕卜，可使用下列文献中记载的任何培养基作为宿主细胞的培养基Hametal.，Meth.Enz.58:44(1979);Barnesetal"Anal.Biochem.102:255(1980);美国专利4,767，704;4,657,866;4,927,762;4，560，655;5,122,469;WO90/03430;WO87/00195;或美国专利复审30,985。任何这些培养基可才艮据需要补充激素和/或其它生长因子(诸如胰岛素、运铁蛋白或表皮生长因子)、盐(诸如氯化钠、4丐、镁和磷酸盐)、緩沖剂(诸如HEPES)、核苷酸(诸如腺苷和胸苷)、抗生素(诸如GENTAMYCINTM药物)、痕量元素(定义为通常以微摩尔范围的终浓度存在的无机化合物)、和葡萄糖或等效能源。还可以适宜浓度含有本领域技术人员知道的任何其它补充物。培养条件诸如温度、pH等即为表达而选择的宿主细胞先前所用的，这对于普通技术人员是显然的。(9)抗体的纯化在使用重组技术时，可在细胞内生成抗体，或者直接分泌到培养基中。如果在细胞内生成抗体，那么首先可以通过例如离心或超滤清除微粒碎片，或是宿主细胞或是裂解片段。如果抗体分泌到培养基中，那么可以首先使用商品化蛋白质浓缩滤器(例如Amicon或MilliporePellicon超滤单元)浓缩来自这些表达系统的上清液。可在任何上述步骤中包括蛋白酶抑制剂诸如PMSF以抑制蛋白水解，而且可包括抗生素以防止外来污染物的生长。可使用例如羟磷灰石层析、凝胶电泳、透析和亲和层析(亲和层析是一种便利的技术)来纯化从细胞制备的抗体组合物。蛋白A作为亲和配体的适宜性取决于抗体中存在的任何免疫球蛋白Fc结构域的种类和同种型。蛋白A可用于纯4匕基于人yl、y2、或y4重4连的^t体(Lindmarketal.，J.Immunol.Methods62:1-13(1983))。蛋白G推荐用于所有小鼠同种型和人y3(Gussetal.，EMBOJ.5:1567-1575(1986))。亲和配体所附着的基质可以是琼脂糖，但是可使用其它基质。物理稳定的基质诸如可控孔径玻璃或聚(苯乙烯二乙烯)苯能获得比琼脂糖更快的流速和更短的加工时间。若抗体包含CH3结构域，则可使用BakerbondABXTM树脂(J.T.Baker，Phillipsburg,NJ)进行纯化。根据待回收的抗体，也可使用其它蛋白质纯化技术诸如离子交换柱上的分馏、乙醇沉淀、反相HPLC、硅土上的层析、肝素SEPHAROSETM上的层析、阴离子或阳离子交换树脂(诸如聚天冬氨酸柱)上的层析、层析聚焦、SDS-PAGE和石克酸铵沉淀。在任何初步纯化步骤之后，可将含有目的抗体和污染物的混合物进行进一步的纯化，例如低pH疏水相互作用层析，使用pH约2.5-4.5的洗脱緩冲液，优选在低盐浓度(如约0-0.25M盐)进行。一般而言，用于制备供研究、测试和临床使用的抗体的各种方法是本领域已完善建立的，与上文所述方法是一致的和/或本领域技术人员认为对于特定的感兴趣抗体是适宜的。88c.免疫偶联物本发明还提供了包含偶联有一种或多种细胞毒剂的本发明任何抗TAT226抗体的免疫偶联物(可互换的称为"抗体-药物偶联物"或"ADC"),所述细胞毒剂诸如化疗剂、药物、生长抑制剂、毒素(例如细菌、真菌、植物或动物起源的酶活性毒素或其片段)或放射性同位素(即放射偶联物)。免疫偶联物可以在癌症治疗中用于局部投递毒害细胞剂(即杀死或抑制月中瘤细月包生长或增殖的药物)(SyrigosandEpenetos(1999)^""ca"cw7ayearc/z19:605-614;Niculescu-DuvazandSpringer(1997)j(iv.DragDe/z》.iev.26:151-172;美国专利No.4,975,278)。免疫偶联物容许将药物才莫块靶向投递至肺瘤，并在那儿进行细胞内积累，而系统施用这些未经偶联的药物可能在试图消除的肿瘤细胞以外导致不可接受的对正常细胞的毒性水平(Baldwinetal"(Mar.15，1986)pp.603-05;Thorpe(1985)"AntibodyCarriersOfCytotoxicAgentsInCancerTherapy:AReview",于M9"0c/0腦/J油.6oWes历o/og/ca/勘dC7/"/ca/^9/7//c加'ow(A.Pincheraetal"eds)pp.475-506)。多克隆抗体和单克隆抗体皆有才艮道可用于这些策略(Rowlandetal.，(1986)Cawcer//ww謂o/./wwww决w21:183-87)。这些方法中所使用的药物包括道"i若霉素(daunomycin)、多柔比星(doxorubicin)、曱氨虫莱令(methotrexate)和长春地辛(vindesine)(Rowlandetal.，(1986)见上文)。抗体-毒素偶联物中所使用的毒素包括细菌毒素诸如白喉毒素、植物毒素诸如蓖麻毒蛋白、小分子毒素诸如格尔德霉素(geldanamycin)(Mandleretal(2000)0/Ato.C朋cerTrtW.92(19):1573-1581;Mandleretal(2000)肠org師'c&她t/.CTzem.10:1025-1028;Mandleretal(2002)所oco"^gafeC/zem.13:786-791)、美登木素生物石威类(EP1391213;Liuetal"(1996)尸nc.A^//.y4cadSd.93:8618-8623)、和加利车霉素(Lodeetal(1998)Ca"cer58:2928;Hinmanetal(1993)Ca"cer/e5.53:3336-3342)。毒素可通过包括微管蛋白结合、DNA结合或拓朴异构酶抑制在内的机制发挥其细胞毒效应。有些细胞毒药物在与大的抗体或蛋白质受体配体偶联时趋于失活或活性降低。ZEVALIN(ibritumomabtiuxetan，Biogen/Idec)是由针对在正常和恶性B淋巴细胞表面上发现的CD20抗原的鼠IgG1K单克隆抗体与通过石克脲接头-螯合剂所结合的lllIn或90Y放射性同位素构成的抗体-放射性同位素偶联物(Wisemanetal(2000)/匿MW.27(7):766-77;Wisemanetal(2002)5W99(12):4336-42;Witzigetal(2002)■/C"".(9腳/.20(10):2453-63;Witzigetal(2002)/.C//".(9"co/.20(15):3262-69)。尽管ZEVALIN具有针对B细胞非何杰金氏(Hodgkin)淋巴瘤(NHL)的活性，然而施药在大多数患者中导致严重且长时间的血细月包减少。MYLOTARGTM(gemtuzumabozogamicin,WyethPharmaceuticals),即由人CD33抗体与加利车霉素连接而构成的抗体-药物偶联物，在2000年批准用于经注射治疗急性骨髓性白血病(DmgsoftheFuture(2000)25(7):686;美国专利No.4970198;5079233;5585089;5606040;5693762;5739116;5767285;5773001)。Cantuzumabmertansine(Immunogen,Inc.),即由huC242抗体经二硫化物接头SPP与美登木素生物碱药物部分DMl连接而构成的抗体-药物偶联物，在进入用于治疗表达CanAg的癌症诸如结肠癌、胰腺癌、胃癌和其它癌的II期试验。MLN-2704(MillenniumPharm.,BZLBiologies,ImmunogenInc.),即由抗前列腺特异膜抗原(PSMA)单克隆抗体与美登木素生物碱药物部分DMl连接而构成的抗体-药物偶联物，在开发用于前列腺肿瘤的潜在治疗。将多拉司他汀(dolastatin)的合成类似物auristatin肽、auristatinE(AE)和单曱基auristatin(MMAE)与嵌合单克隆抗体cBR96(对癌上的LewisY特异)和cAC10(对恶性血液胂瘤上的CD30特异)偶联(Doroninaetal(2003)AtowreS/ofec/z"o/.21(7):778-784),且正在进行治疗性开发。在某些实施方案中，免疫偶联物包含抗TAT226抗体和化疗剂或其它毒素。本文中(上文)描述了可用于生成免疫偶联物的化疗剂。也可使用酶活性毒素及其片段，这些酶活性毒素及其片段已在说明书中描述。在某些实施方案中，免疫偶联物包含抗TAT226抗体和一种或多种小分子毒素，包括但不限于小分子药物，诸如加利车霉素(calicheamicin)、美登木素生物石成类(maytansinoids)、多拉司他汀(dolastatin)、auristatin、单端孢霉素(trichothecene)和CC1065及这些药物具有细胞毒活性的片段。此类免疫偶联物的例子在下文中有更为详细的讨"i仑。1.例示性的免疫偶联物本发明的免疫偶联物(或"抗体-药物偶联物"("ADC"))可以是下文通式I，其中抗TAT226抗体经任选的接头(L)与一个或多个药物模块(D)偶联(即共价附着)。Ab—(L-D)pI因而，抗TAT226抗体可直接的或经接头偶联至药物。在通式I中，p是每个抗体的平均药物模块数，其范围可以是例如每个抗体约1个到约20个药物模块，在某些实施方案中是每个抗体1个到约8个药物模块。a)例示性的接头接头可以由一种或多种接头构件构成。例示性的接头构件包括6-马来酰亚胺己酰基("MC，，)、马来酰亚胺丙酰基("MP")、缬氨酸-瓜氨酸("val-cit"或"vc，，)、丙氨酸-苯丙氨酸("ala-phe，，)、对氨基苄氧羰基("PAB")、4-(2-吡啶基硫代)戊酸N-琥珀酰亚氨基酯("SPP")、4-(N-马来酰亚胺曱基)环己烷-l羧酸N-琥珀酰亚氨基酯("SMCC，，)、和(4-碘-乙酰基)氨基苯曱酸N-琥珀酰亚氨基酯("SIAB")。本领域知道多种接头构件，下文也描述了一些。接头可以是便于在细胞中释放药物的"可切割接头"。例如，可使用酸不稳定接头(例如腙)、蛋白酶敏感(例如肽酶敏感)接头、光不稳定接头、二曱基^妄头、或含二石克化物接头(Charietal.,CancerResearch52:127-131(1992);美国专利No.5,208,020)。在有些实施方案中，接头构件可以包含将抗体连接至另一接头构件或药物模块的"延伸物单元，，(stretcherunit)。例示性的延伸物单元显示于下文(其中波形线指示抗体共价附着位点)〇91<formula>formulaseeoriginaldocumentpage92</formula>在有些实施方案中，接头构件可包含氨基酸单元。在一个这样的实施方案中，氨基酸单元容许蛋白酶切割接头，由此便于在暴露于胞内蛋白酶(诸如溶酶体酶)后从免疫偶联物释放药物。参见例如Doroninaetal.(2003)Ato.肌ofec/z，/.21:778-784。例示性的氨基酸单元包括但不限于二肽、三肽、四肽、和五肽。例示性的二肽包括缬氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit);丙氨酸-苯丙氨酸(af或ala-phe);苯丙氨酸-赖氨酸(fk或phe-lys);或N-曱基-缬氨酸-瓜氨酸(Me-val-cit)。例示性的三肽包括甘氨酸-缬氨酸-瓜氨酸(gly-val-cit)和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(gly-gly-gly)。氨基酸单元可以包含天然存在的氨基酸残基，以及次要氨基酸和非天然存在氨基酸类似物，诸如瓜氨酸。氨基酸单元可以在它们对特定酶(例如肿瘤相关蛋白酶，组织蛋白酶B、C和D,或血浆蛋白酶)的酶促切割的选择性方面进行设计和优化。在有些实施方案中，接头构件可以包含将抗体连接(或是直接的或是通过延伸物单元和/或氨基酸单元)至药物模块的"间隔物'，单元。间隔物单元可以是"自我牺牲的"(self-immolative)或"非自我牺牲的"。"非自我牺牲的"间隔物单元指间隔物单元的部分或整体在ADC的酶促(蛋白水解)切割后保持结合于药物模块的间隔物单元。非自我牺牲的间隔物单元的例子包括但不限于甘氨酸间隔物单元和甘氨酸-甘氨酸间隔物单元。还涵盖对序列特异性酶促切割易感的肽间隔物的其它组合。例如，肿瘤细胞相关蛋白酶对含甘氨酸-甘氨酸间隔物单元的ADC的酶促切割将导致甘氨酸-甘氨酸-药物模块从ADC的剩余部分释放。在一个这样的实施方案中，甘氨酸-甘氨酸-药物模块然后在肿瘤细胞中进行分开的水解步骤，如此从药物模块切割甘氨酸-甘氨酸间隔物单元。"自我牺牲的"间隔物单元容许释放药物^^莫块而没有分开的水解步骤。在某些实施方案中，接头的间隔物单元包含对氨基苯曱基单元。在一个这样的实施方案中，将对氨基苯曱醇经酰胺键附着至氨基酸单元，并且在苯曱醇与细胞毒剂之间生成氨基曱酸酯、曱基氨基曱酸酯、或碳酸酯。参见例如Hamannetal.(2005)五;c戸f(9—.77^尸她她(2005)15:1087-1103。在一个实施方案中，间隔物单元是对氨基千氧羰基(PAB)。在某些实施方案中，对氨92基千基单元的亚苯基部分是用Qm取代的，其中Q是-d-Cs烷基、-0-(<:1-(:8烷基)、-卣素、_硝基、或-氰基；而m是范围为0-4的整数。自我牺牲的间隔物单元的例子进一步包括但不限于在电子上与对氨基苯曱醇相似的芳香族化合物(参见例如US2005/0256030Al),诸如2-氨基咪唑-5-曱醇衍生物(Hayetal.(1999)历owg.C7zem.丄e".9:2237)和邻位或对位氨基千基乙缩醛。可以使用在酰胺键水解后发生环化的间隔物，诸如取代的和未取代的4-氨基丁酸酰胺(Rodriguesetal.,C/zew/^o;1995,2，223);适当取4戈的双环和双环[2.2.2]环体系(Storm，etal,,/v4mwC7zem.5bc,1972,94,5815);及2-氨基苯基丙酸酰胺(Amsberry,etal.，■/C/2em.，1990，55,5867)。消除在甘氨酸a位取代的含胺药物(Kingsbury，etal.,/Mec/.CTzew.,1984，27，1447)也是可用于ADC的自我牺牲的间隔物的例子。在一个实施方案中，间隔物单元是下文所示分支的双(羟曱基)苯乙烯(BHMS)单元，其可用于掺入和释放多个药物。II<formula>formulaseeoriginaldocumentpage93</formula>其中Q是-C,-C8烷基、-0-(C广C8烷基)、-卤素、硝基、或氰基；m是范围为0-4的整数；n是0或l;而p的范围是l到约20。接头可以包含任何一种或多种上述接头化合物。在某些实施方案中，接头在下述ADC通式II中显示在方括号内Ab~^Aa-Ww-Yy]—D)pII其中A是延伸物单元，而a是0到l的整数；W是氨基酸单元，而w是0到12的整数；Y是间隔物单元，而y是0、1、或2;且Ab、D、和p如上文通式I的定义。此类接头的例示性实施方案记载于US2005-0238649Al,明确收入本文作为参考。显示了下文通式II的ADC背景中的例示性接头构件及其组合<formula>formulaseeoriginaldocumentpage94</formula>接头构件，包括延伸物、间隔物、和氨基酸单元，可以通过本领域已知方法合成，诸如US2005-0238649Al中所记载的。b)例示性的药物模块(1)美登素和美登木素生物碱类在有些实施方案中，免疫偶联物包含偶联有一个或多个美登木素生物碱分子的本发明抗体。美登木素生物碱类是通过抑制微管蛋白多聚化来发挥作用的有丝分裂抑制剂。美登素最初从东非灌木齿叶美登木(Maytenusserrata)分离得到(美国专利3,896,111)。随后发现某些微生物也生成美登木素生物碱类，诸如美登醇和C-3美登醇酯(美国专利4,151,042)。例如下列美国专利公开了合成美登醇及其衍生物和类似物4,137,230;4,248,870;4,256,746;4,260,608;4,265,814;4,294,757;4,307,016;4,308,268;4,308,269;4,309,428;4,313,946;4,315,929;4,317,821;4,322,348;4,331,598;4,361,650;4,364,866;4,424,219;4,450,254;4,362,663;及4，371，533。美登木素生物碱类药物模块在抗体药物偶联物中是有吸引力的药物模块，因为它们(i)相对易于通过发酵或发酵产物的化学修饰或衍生化来制备；(ii)易于用适于通过非二硫化物接头的偶联的官能基衍生化；(iii)在血浆中稳定；且(iv)有效针对多种肿瘤细胞系。适于用作美登木素生物碱类药物模块的美登素化合物是本领域公知的，而且可以依照已知方法从天然来源分离，或是使用遗传工程技术生产(参见Yuetal(2002)PNAS99:7968-7973)。美登醇和美登醇类似物也可以依照已知方法合成制备。例示性的美登木素生物碱类药物模块包括那些具有修饰的芳香环的，诸如C-l^脱氯(美国专利No.4256746)(通过安丝菌素(ansamytocin)P2的氢化铝锂还原来制备)；C-20-羟基(或C-20-脱曱基)+/-C-19-脱氯(美国专利No.4361650和4307016)(通过使用链霉菌或放线菌的脱曱基化或使用LAH的脱氯化来制备)；及C-20-脱曱氧基，C-20-酰氧基(-OCOR),+/-脱氯(美国专利No.4,294,757)(通过使用酰氯的酰化来制备)，以及在其它位置具有修饰的。例示性的美登木素生物碱类药物模块还包括那些具有修饰的，诸如C-9-SH(美国专利No.4424219)(通过美登醇与H2S或P2S5的反应来制备)；C-14-烷氧基曱基(脱曱氧基/CH20R)(US4331598);C-14-羟甲基或酰氧曱基(CH20H或CH20Ac)(美国专利No.4450254)(自诺卡氏菌制备)；C-15-羟基/酰氧基(US4364866)(通过链霉菌对美登醇的转化来制备)；C-15-曱氧基(美国专利No.4313946和4315929)(自Trew/a層d/y7ora分离)；C-18-N-脱曱基(美国专利No.4362663和4322348)(通过链霉菌对美登醇的脱曱基化来制备)；及4,5-脱氧(US4371533)(通过美登醇的三氯化钛/LAH还原来制备)。美登木素生物碱类药物模块的例示性实施方案包括具有如下结构的DM1、DM3和DM4:其中波形线指示药物的硫原子对抗体-药物偶联物的接头(L)的共价附着。HERCEPTIN(trastuzumab)经SMCC连接DMl已有报道(WO2005/037992;US2005/0276812Al)。其它例示性的美登木素生物碱类抗体-药物偶联物具有如下结构和缩写(其中Ab是抗体，而p是l到约8):ch3ohAb-SMCC-DM1其中DM1经BMPEO接头连接抗体>5克醇基的例示性抗体-药物偶联物具有如下结构和缩写Ab其中Ab是抗体；n是0、1、或2;而p是l、2、3、或4。例如下列专利公开了包含美登木素生物碱类的免疫偶联物及其制备方9法和治疗用途美国专利5，208，020;5,416,064;US2005/0276812Al;及欧洲专利EP0425235Bl，明确将其公开内容收入本文作为参考。Liuetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:8618-8623(1996)记载了包含与针对人结肠直肠癌的单克隆抗体C242连接的称为DM1的美登木素生物碱的免疫偶联物。发现该偶联物具有针对培养的结肠癌细胞的高度细胞毒性，而且在体内肺瘤生长测定法中显示抗胂瘤活性。Charietal.，CancerResearch52:127-131(1992)记载了其中美登木素生物碱经二硫化物接头与结合人结肠癌细胞系上抗原的鼠抗体A7或结合HER-2/neu癌基因的另一种鼠单克隆抗体TA.1偶联的免疫偶联物。在体外在人乳癌细胞系SK-BR-3上测试了TA.1-美登木素生物碱偶联物的细胞毒性，该细胞系每个细胞表达3xl()S个HER-2表面抗原。药物偶联物达到了与游离美登木素生物碱药物相似的一定程度的细胞毒性，这可通过增加每个抗体分子偶联的美登木素生物碱分子数目来提高。A7-美登木素生物碱偶联物在小鼠中显示低系统性细胞毒性。抗体-美登木素生物碱偶联物通过将抗体与美登木素生物碱分子化学连接且不显著削弱抗体或美登木素生物碱分子的生物学活性来制备。参见例如美国专利No.5,208,020，明确将其公开内容收入本文作为参考。每个抗体分子偶联平均3-4个美登木素生物碱分子在增强针对靶细胞的细胞毒性中显示功效，且对抗体的功能或溶解度没有负面影响，尽管预计甚至一个分子的毒素/抗体也将较之棵抗体的使用增强细胞毒性。美登木素生物碱类在本领域是众所周知的，而且可通过已知技术合成或从天然来源分离。例如美国专利生物碱类。优选的美登木素生物碱类是美登醇和美登醇分子的芳香环或其它位置经过修饰的美登醇类似物，诸如各种美登醇酯。本领域知道许多连接基团可用于制备抗体-美登木素生物碱偶联物，包括例如美国专利5,208，020或欧洲专利0425235Bl;Charietal.,CancerResearch52:127-131(1992);及US2005/016993Al中所公开的，明确将其公开内容收入本文作为参考。包含接头构件SMCC的抗体-美登木素生物碱类偶耳关物可以如US2005/0276812Al，"Antibody-drugconjugatesandMethods"中所披露的来制备。接头包含二硫化物基团、硫醚基团、酸不稳定基团、光不稳定基团、肽酶不稳定基团、或酯酶不稳定基团，正如上文所述专利中所公开的。本文中描述和例示了别的接头。可使用多种双功能蛋白质偶联剂来制备抗体和美登木素生物碱的偶联物，诸如N-琥珀酰亚氨基-3-(2-吡咬基二硫代)丙酸酯(SPDP)、琥珀酰亚氨基-4-(N-马来酰亚氨基曱基)环己烷-l-羧酸酯(SMCC)、亚氨基硫烷(IT)、亚氨酸酯(诸如盐酸己二酰亚氨酸二甲酯)、活性酯类(诸如辛二酸二琥珀酰亚氨基酯)、醛类(诸如戊二醛)、双叠氮化合物(诸如双(对-叠氮苯曱酰基)己二胺)、双重氮衍生物(诸如双(对-重氮苯曱酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(诸如曱苯2，6-二异氰酸酯)、和双活性氟化合物(诸如l，5-二氟-2,4-二硝基苯)的双功能衍生物。在某些实施方案中，偶联剂是N-琥珀酰亚氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)(Carlssonetal.,Biochem.J.173:723-737(1978))或N-琥珀酰亚氨基-4-(2-吡咬基硫代)戊酸酯(SPP),由此提供二硫键连接。根据连接的类型，可将接头附着于美登木素生物碱分子的多个位置。例如，可使用常规偶联技术通过与羟基的反应来形成酯一建。反应可发生在具有羟基的C-3位置、经羟曱基修饰的C-14位置、经羟基修饰的C-15位置、和具有羟基的C-20位置。在一个实施方案中，在美登醇或美登醇类似物的C-3位置形成键连接。(2)Auristatin和多4立司他汀在有些实施方案中，免疫偶联物包含与多拉司他汀(dolastatin)或多拉司他汀肽类似物或衍生物(例如auristatin)(美国专利No.5,635,483;5,780,588)偶联的本发明抗体。多拉司他汀类和auristatin类已经显示出干扰微管动力学、GTP水解、及核和细胞分裂(Woykeetal(2001)颠.m/cra6.朋dC7zemo/ZeK45(12):3580-3584)且具有抗癌(美国专利No.5663149)和抗真菌活性(Pettitetal(1998)爿w"7m'cra6.C7^wo^zw42:2961-2965)。多4i司他汀或auristatin药物模块可经由肽药物模块的N(氨基)末端或C(羧基)末端附着于抗体(WO02/088172)。例示性的auristatin实施方案包括N-末端连接的单曱基auristatin药物模块DE和DF，披露于Senteretal,ProceedingsoftheAmericanAssociationforCancerResearch,Volume45，AbstractNumber623，presentedMarch28,2004,明确将其公开内容完整收入本文作为参考。肽药物模块可以选自下文通式De和Df:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage100</formula>其中DE和DF的波形线指示抗体或抗体-接头构件的共价附着位点，且每个位置是独立的R2选自H和d-Cs烷基；R选自H、C,-Cs烷基、CrCs碳环、芳基、d-Cs烷基-芳基、d-Cs烷基-(C3-C8碳环)、C3-C8杂环和d-Q烷基-(CrCs杂环)；R4选自H、C,-Cs烷基、C3-(38碳环、芳基、CrCs烷基-芳基、d-C8烷基-(C3-Cs碳环)、C3-C8杂环和C广C8烷基-(C3-C8杂环)；R5选自H和曱基；或者W与RS—起形成碳环且具有通式-(CRaRb)n-，其中Ra和Rb独立地选自H、d-Cs烷基和C3-C8碳环，而n选自2、3、4、5和6;R6选自H和d-Cs烷基；R7选自H、C广Cs烷基、C3-Cs碳环、芳基、d-Cs烷基-芳基、d-Cs烷基-(C3-C8碳环)、C3-Cs杂环和d-Q烷基-(C3-Q杂环)；每个R8独立地选自H、OH、C广Cs烷基、C3-Cs碳环和0-(d-C8烷基)；R9选自H和CrQ烷基；R'G选自芳基或C3-Cs杂环；Z为O、S、NH或NR12，其中R^为C,-Cs烷基；R11选自H、C广C20烷基、芳基、C3-C8杂环、-(R130)m-R14或-(R130)m-CH(Rl5)2;m是范围为l-1000的整数；1113为(:2《8烷基；R"为H或C广C8烷基；R15每次出现独立为H、COOH、-(CH2)n-N(R16)2、-(CH2)n-S03H或-(CH2)n-S03-C,-C8烷基；R16每次出现独立为H、C,-Q烷基或-(CH2)n-COOH;R18选自-C(R8)2-C(R8)2-芳基、-C(R8)2-C(R8)2-(C3-C8杂环)和-C(R8)2-C(R8)2-(C3-C^1%);且n是范围为0到6的整数。在一个实施方案中，R3、114和117独立为异丙基或仲丁基，而RS为-H或曱基。在一个例示性的实施方案中，113和114各自为异丙基，RS为-H,而W为仲丁基。在又一个实施方案中，112和116各自为曱基，而W为-H。在又一个实施方案中，118每次出现为-0013。在一个例示性的实施方案中，113和114各自为异丙基，112和116各自为曱基，R5为-H,R7为仲丁基，R8每次出现为-OCH3，而R9为-H。在一个实施方案中，Z为-O-或-NH-。在一个实施方案中，R"为芳基。在一个例示性的实施方案中，111()为-苯基。在一个例示性的实施方案中，若Z为-O-,则RH为-H、曱基或叔丁基。在一个实施方案中，若Z为-NH，则R11为-CH(R15)2，其中R"为-(CH2)n-N(RI6)2,而R"为-C广C8烷基或-(CH2)n-COOH。在另一个实施方案中，若Z为-NH，则R"为-CH(R'5)2,其中R"为-(CH2)n-S03H。通式DE的一种例示性auristatin实施方案是MMAE,其中波形线指示共价附着至抗体-药物偶联物的接头(L):MMAE通式Dp的一种例示性auristatin实施方案是MMAF,其中波形线指示共价附着至抗体-药物偶联物的接头(L)(参见US2005/0238649ADoroninaetal.(2006)fiz》co"乂wgafeC&w.17:114-124):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage102</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage103</formula>一方面，可以将亲水性基团在R"处附着于药物模块，所述亲水性基团包括但不限于三乙二醇酯(triethyleneglycolester，TEG)，如上所述。不限于任何特定理论，所述亲水性基团有助于药物模块的内在化和不聚集(non-agglomeration)。包含auristatin/多拉司他汀或其衍生物的通式IADC的例示性实施方案记载于US2005-0238649Al及Doroninaetal.(2006)肠c呵.，feC/z缀17:114-124，明确收入本文作为参考。包含MMAE或MMAF及各种接头构件的通式IADC的例示性实施方案具有如下结构和缩写(其中"Ab"是抗体；p是1到约8;"Val-Cit"是缬氨酸-瓜氨酸二肽；而"S，，是硫原子)Ab-MC-vc-PAB-MMAFAb陽MC-vc-PAB-MMAEAb-MC-MMAF包含MMAF及各种接头构件的通式IADC的例示性实施方案进一步包括Ab-MC-PAB-MMAF和Ab-PAB-MMAF。有趣的是，包含经不可蛋白水解切割的接头附着于抗体的MMAF的免疫偶联物显示出具有与包含经可蛋白水解切割的接头附着于抗体的MMAF的免疫偶联物相当的活性。参见Doroninaetal.(2006)S&cow乂MgWeCAem.17:114-124。在这种情况中，认为药物释放是由细胞中的抗体降解来实现的。同上。典型的是,基于肽的药物模块可通过在两个或多个氨基酸和/或肽片段之间形成肽键来制备。此类肽键可依照例如肽化学领域众所周知的液相合成法来制备(参见E.Schr6derandK.LUbke,"ThePeptides",volume1,pp76-136,1965，AcademicPress)。auristatin/多拉司他汀药物模块可依照以下文献中的方法来制备US2005-0238649Al;美国专利No.5635483;美国专利No.5780588;Pettitetal(1989)/J附.C72e附.111:5463-5465;Pettitetal(1998)C"wcwDragDew'g"13:243-277;Pettit,G.R.，etal.Sj^决&s^，1996,719-725;Pettitetal(1996)J.C7e附.5bc.PeA/"7>am.15:859-863;及Doronina(2003)淑肠tec/m/.21(7):778-784。具体而言，通式Dp诸如MMAF及其衍生物的auristatin/多拉司他汀药物模块可以使用US2005-0238649Al及Do腿inaetal.(2006)肠c—，teC7z缀17:114-124中记载的方法来制备。通式De诸如MMAE及其衍生物的auristatin/多拉司他汀药物模块可以使用Doroninaetal.(2003)Ato.历0tec/2.21:778-784中加载的方法来制备。可以通过常规方法方便地合成药物-接头模块(moiety)MC-MMAF、MC-MMAE、MC-vc-PAB匿MMAF、和MC-vc-PAB-MMAE,例如Doroninaetal.(2003)Waf.祝otec/z.21:778-784及美国专利申请公开号US2005/0238649Al中所记载的，然后将它们偶联至感兴趣的抗体。("加利车霉素在其它实施方案中，免疫偶联物包含偶联有一个或多个加利车霉素分子的本发明抗体。加利车霉素抗生素家族能够在亚皮摩尔浓度生成双链DNA断裂。关于加利车霉素家族偶联物的制备参见美国专利No.5,712,374;5,714,586;5J39，116;5,767,285;5,770,701;5,770,710;5,773,001;5，877,296(都授予美国Cyanamid公司)。可用的加利车霉素结构类似物包括但不限于y11、a21、a31、N-乙酰基-ylI、PSAG和011(Hinmanetal"CancerResearch53:3336-3342(1993);Lodeetal"CancerResearch58:2925-2928(1998);及上述授予美国Cyanamid公司的美国专利)。可与抗体偶联的另一种抗肿瘤药物是QFA，它是一种抗叶酸药物。加利车霉素和QFA都具有胞内作用位点，且不易穿过质膜。因此，这些试剂经由抗体介导的内在化的细胞摄取大大增强了它们的细胞毒效应。(c)其它细胞毒剂可与本发明抗体偶联的其它抗肿瘤剂包括BCNU、链佐星(streptozoicin)、长春新碱(vincristine)、5-氟尿嘧咬、美国专利No.5，053，394、5，770,710中记载的统称为LL-E33288复合物的试剂家族、及埃斯波霉素类(esperamicins)(美国专利No.5,877,296)。可用的酶活性毒素及其片段包括白喉毒素A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌Pseudomonasaeruginosa),蓖麻毒蛋白(ricin)A纟连、相思豆毒蛋白(abrin)A纟连、蒴莲才艮毒蛋白(modeccin)A《连、a-帚曲霉素(sarcin)、油桐(Aleutitesfordii)毒蛋白、香石竹(dianthin)毒蛋白、美105洲商陆(Phytolacaamericana)毒蛋白(PAPI、PAPII和PAP画S)、苦瓜(Momordicacharantia)抑制物、麻疯树毒蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白(crotin)、月巴皂草(sapaonariaofficinalis)承卩制物、白才对毒蛋白(gelonin)、丝4木霉素(mitogellin)、局卩艮曲菌素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、依i若霉素(enomycin)禾口单3耑孢菌素(trichothecenes)。参见例如1993年10月28日公布的WO93/21232。本发明还设想了抗体和具有核酸降解活性的化合物(如核糖核酸酶或DNA内切核酸酶，诸如脱氧核糖核酸酶；DNA酶)之间形成的免疫偶联物。在某些实施方案中，免疫偶联物可包含高度放射性原子。多种放射性同位素可用于生成放射偶联抗体。实例包括At211、I131、I125、Y9G、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb^和Lu的放射性同位素。在将免疫偶联物用于检测时，可包含放射性原子用于闪烁照相研究，例如Tc^或I123，或是包含自旋标记物用于核磁共振(NMR)成像(也称为磁共振成像，MRI)，诸如碘-123、碘-131、铟-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、礼、锰或铁。可以已知方式将放射性或其它标记物掺入免疫偶联物。例如，可生物合成肽，或是通过化学氨基酸合成法合成肽，其中使用涉及例如氟-19代替氢的合适氨基酸前体。可经肽中的半胱氨酸残基来附着标记物，诸如Tc"m或I123、Re186、Re鹏和In111。可以经赖氨酸残基来附着钇-90。IODOGEN法(Frakeretal.(1978)Biochem.Biophys.Res.Commun.80:49-57)可用于掺入碘-123。《MonoclonalAntibodiesinImmunoscintigraphy》(Chatal，CRCPress,1989)详细记载了其它方法。在某些实施方案中，免疫偶联物可以包含偶联至前体药物活化酶的本发明抗TAT226抗体，所述前体药物活化酶能将前体药物(例如肽基化疗剂，参见WO81/01145)转变成活性药物，诸如抗癌药。此类免疫偶联物可用于抗体依赖性酶介导的前体药物疗法("ADEPT")。可以偶联至本发明抗TAT226抗体的酶包括但不限于可将含磷酸盐/酯的前体药物转变为游离药物的碱性磷酸酶；可将含硫酸盐/酯的前体药物转变为游离药物的芳基硫酸酯酶；可将无毒5-氟胞嘧啶转变为抗癌药物5-氟尿嘧啶的胞嘧啶脱氨酶；可将含肽的前体药物转变为游离药物的蛋白酶，诸如沙雷氏菌蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、羧肽酶和组织蛋白酶(诸如组织蛋白酶B和L);可转化含D-氨基酸替代的前体药物的D-丙氨酰羧肽酶；可将糖基化前体药物转变为游离药物的碳水化合物切割酶类，诸如p-半乳糖苷酶和神经氨酸酶；可将P-内酰胺衍生的药物转变为游离药物的p-内酰胺酶；及可将在其胺氮处分别用苯氧乙酰基或苯乙酰基衍生的药物转变成游离药物的青霉素酰胺酶，诸如青霉素V酰胺酶或青霉素G酰胺酶。可以通过本领域众所周知的重组DNA技术将酶共价结合至本发明的抗TAT226抗体。参见例如Neubergeretal.,M^wre312:604-608(1984)。d)药物加载药物加载由p表示，即通式I的分子中每个抗体的平均药物模块数。药物加载的范围可以为每个抗体1-20个药物模块(D)。通式I的ADC包括偶联有一系列(l-20个)药物模块的抗体。来自偶联反应的ADC制备物中每个抗体的平均药物模块数可以通过常规手段来表征，诸如质谱、ELISA测定法、和HPLC。还可以测定ADC在p方面的定量分布。在有些情况中，将p为某数值的同质ADC从具有其它药物加载的ADC中分离、纯化、和表征可以通过诸如反相HPLC或电泳的手段来实现。对于有些抗体-药物偶联物，p可能受到抗体上附着位点数目的限制。例如，若附着是半胱氨酸^L醇，正如上文例示性实施方案中的那样，则抗体可能只有一个或数个半胱氨酸硫醇基，或者可能只有一个或数个有足够反应性的硫醇基，可附着接头。在某些实施方案中，较高的药物加载，例如p"，可引起某些抗体-药物偶联物的聚集、不溶性、毒性、或丧失细胞通透性。在某些实施方案中，本发明ADC的药物加载的范围为1到约8;约2到约6;或约3到约5。事实上，对于某些ADC已经显示了每个抗体的药物模块数的最佳比率可以为小于8，可以为约2到约5。参见US2005-0238649Al。在某些实施方案中，在偶联反应中将少于理论最大值的药物模块偶联至抗体。抗体可包含例如赖氨酸残基，其不与药物-接头中间物或接头试剂起反应，如下文所讨论的。一般而言，抗体不包含许多游离的和反应性的半胱氨酸硫醇基，其可连接药物模块；事实上，抗体中的大多数半胱氨酸硫醇基以二硫桥形式存在。在某些实施方案中，可以在部分或完全还原性条件下用还原剂诸如二硫苏糖醇(DTT)或三羰基乙基膦(TCEP)还原抗体以产生反应性半胱氨酸硫醇基。在某些实施方案中，将抗体置于变性条件以暴露反应性亲核基团，诸如赖氨酸或半胱氨酸。ADC的加载(药物/抗体比率)可以以多种方式来控制，例如通过(i)限制药物-接头中间物或接头试剂相对于抗体的摩尔过量，(ii)限制偶联反应的时间和温度，及(iii)部分或限制半胱氨酸硫醇修饰的还原性条件。应当理解，若超过一个亲核基团与药物-接头中间物或接头试剂接着药物模块试剂起反应，则所得产物是具有一个或多个药物模块附着于抗体之分布的ADC化合物混合物。可以通过对抗体特异性的和对药物特异性的双重ELISA抗体测定法自混合物计算每个抗体的平均药物数。混合物中的各种ADC分子可以通过质谱来鉴定，并通过HPLC来分离，例如疏水相互作用层才斤(参见侈'B口Hamblett，K.J.,etal."Effectofdrugloadingonthepharmacology,pharmacokinetics,andtoxicityofananti-CD30antibody-drugconjugate,"AbstractNo.624,AmericanAssociationforCancerResearch,2004AnnualMeeting,March27-31,2004,ProceedingsoftheAACR,Volume45,March2004;Alley,S.C.，etal."Controllingthelocationofdrugattachmentinantibody-drugconjugates,"AbstractNo.627,AmericanAssociationforCancerResearch,2004AnnualMeeting,March27-31,2004，ProceedingsoftheAACR,Volume45,March2004)。在某些实施方案中，可以通过电泳或层析从偶联混合物中分离具有单一加载值的同质ADC。e)制备免疫偶联物的某些方法可以采用本领域技术人员知道的有机化学反应、条件和试剂通过数种路径来制备通式I的ADC，包括(l)抗体的亲核基团经共价键与二价接头试剂反应，经共价键形成Ab-L,接着与药物模块D反应；和(2)药物模块的亲核基团与二价接头试剂反应，经共价键形成D-L，接着与抗体的亲核基团反应。经后一种路径制备通式I的ADC的例示性方法记载于US2005-0238649Al，明确收入本文作为参考。抗体的亲核基团包括但不限于(i)N末端胺基；(ii)侧链胺基，例如赖氨酸；(iii)侧链硫醇基，例如半胱氨酸；和(iv)糖基化抗体中糖的羟基或氨基。胺、硫醇、和羟基是亲核的，能够与接头模块上的亲电子基团反应而形成共价键，而接头试剂包括(i)活性酯类，诸如NHS酯、HOBt酯、卤代甲酸酯、和酸性卣化物；(ii)烷基和苄基卣化物，诸如囟代乙酰胺；(iii)醛类、酮类、羧基和马来酰亚胺基团。某些抗体具有可还原的链间二硫键，即半胱氨酸桥。可通过还原剂诸如DTT(二硫苏糖醇)或三羰基乙基膦(TCEP)处理使抗体完全或部分还原，从而具有与接头试剂偶联的反应活性。每个半胱氨酸桥理论上将形成两个反应性硫醇亲核体。可经由赖氨酸的修饰将额外亲核108基团引入抗体，例如通过使赖氨酸残基与2-亚氨基硫烷(Traut氏试剂)起反应，导致胺转变为石克醇。可以通过导入一个、两个、三个、四个、或更多个半胱氨酸残基(例如通过制备包含一个或多个非天然半胱氨酸氨基酸残基的变体抗体)而将反应性^琉醇基导入抗体。还可通过抗体上的亲电子基团(诸如醛或酮羰基)与接头试剂或药物上的亲核基团之间的反应来生成本发明的抗体-药物偶联物。接头试剂上的有用亲核基团包括但不限于酰肼、肟、氨基、肼、缩氨基硫脲、肼羧酸酯、和芳基酰肼。在一个实施方案中，修饰抗体以导入能够与接头试剂或药物上的亲核取代基起反应的亲电子模块。在另一个实施方案中，可以用例如高碘酸盐氧化剂氧化糖基化抗体的糖，从而形成可与接头试剂或药物模块的胺基团反应的醛或酮基团。所得亚胺Schiff碱基可形成稳定的连接，或者可以用例如硼氬化物试剂还原而形成稳定的胺连接。在一个实施方案中，糖基化抗体的碳水化合物部分与半乳糖氧化酶或偏高碘酸钠的反应可以在抗体中生成羰基(酪基和酮基)，它可与药物上的适宜基团反应(Hermanson，BioconjugateTechniques)。在另一个实施方案中，包含N-末端丝氨酸或苏氨酸残基的抗体可以与偏高硪酸钠反应，导致在第一个氨基酸处生成醛(Geoghegan&Stroh，(1992)所oco"y'MgafeC7ze附.3:138-146;US5362852)。这样的醛可与药物模块或4妄头亲核体反应。药物模块上的亲核基团包括但不限于胺、硫醇、羟基、酰肼、肟、肼、缩氨基硫脲、肼羧酸酯、和芳基酰肼基团，它们能够与接头模块上的亲电子基团反应而形成共价4建，而接头试剂包括(i)活性酯类，诸如NHS酯、HOBt酯、卣代曱酸酯、和酸性卣化物；(ii)烷基和苯曱基卣化物，诸如面代乙酰胺；(iii)醛类、酮类、羧基、和马来酰亚胺基团。本发明的化合物明确涵盖但不限于用如下交联试剂制备的ADC:BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、sulfo-EMCS、sulfo陽GMBS、sulfo醫KMUS、s函-MBS、sulfo-SIAB、sulfo-SMCC和sulfo-SMPB、及SVSB(琥珀酰亚氨基-(4-乙烯基砜)苯曱酸酯)，它们可通过商业途径获得(例如PierceBiotechnology,Inc.,Rockford,IL.,U.S.A;参见2003-2004年度应用手册和产品目录(2003-2004ApplicationsHandbookandCatalog)第467-498页)。还可使用多种双功能蛋白质偶联剂来制备包含抗体和细胞毒剂的免疫偶联物，诸如N-琥珀酰亚氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、琥珀酰亚氨基—4-(N-马来酰亚氨基甲基)环己烷-l-羧酸酯(SMCC)、亚氨基硫烷(IT)、亚氨酸酯(诸如盐酸己二酰亚氨酸二曱酯)、活性酯类(诸如辛二酸二琥珀酰亚氨基酯)、醛类(诸如戊二醛)、双叠氮化合物(诸如双(对-叠氮苯曱酰基)己二胺)、双重氮衍生物(诸如双(对-重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异硫氰酸酯(诸如曱苯2,6-二异氰酸酯)、和双活性氟化合物(诸如l,5-二氟-2，4-二硝基苯)的双功能衍生物。例如，可如Vitettaetal.,^SWe"ce238:1098(1987)中所述制备蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14标记的l-异硫氰酸苯曱基-3-曱基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于将放射性核苷酸与抗体偶联的例示性螯合剂。参见W094/11026。或者，可通过例如重组技术或肽合成来制备包含抗体和细胞毒剂的融合蛋白。重组DNA分子可以包含各自编码偶联物的抗体和细胞毒部分的区域，彼此或是毗邻或是由编码接头肽的区域分开，该接头肽不破坏偶联物的期望特性。在又一个实施方案中，可以将抗体与"受体"(诸如链霉亲合素)偶联从而用于肿瘤预先靶向，其中对患者施用抗体-受体偶联物，接着使用清除剂由循环中清除未结合的偶联物，然后施用与细胞毒剂(如放射性核苷酸)偶联的"配体，，(如亲合素)。D.药用配制剂一方面，本发明进一步提供了包含至少一种本发明的抗TAT226抗体和/或至少一种其免疫偶if关物的药物配制剂。在有些实施方案中，药用配制剂包含1)抗TAT226抗体和/或其免疫偶联物，和2)制药学可接受的载体。在有些实施方案中，药物配制剂包含1)抗TAT226抗体和/或其免疫偶联物，和任选地2)至少一种其它的治疗剂。所述其它的治疗剂包括但不限于下文E.2部分所述。可通过将具有期望纯度的抗体或免疫偶联物与任选的生理学可接受的载体、赋开》剂或稳定齐'J(《Remington'sPharmaceuticalSciences》，第16版，Osol，A.编，1980)混合，以水溶液或冻干或其它干燥剂型的形式，制备包含本发明抗体或免疫偶联物的药用配制剂供贮存。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，包括緩冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐、组氨酸和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和曱硫氨酸；防腐剂(诸如氯化十八烷基二曱基千基铵；氯化己烷双胺；苯扎氯铵、苯索氯铵；酚、丁醇或苯曱醇；对羟基苯曱酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸曱酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间曱酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白、明胶或免疫王求蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA;糖类，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐反荷离子，诸如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如tweentm、PLURONICStm或聚乙二醇(PEG)。用于体内施用的配制剂必须是无菌的。这可容易的通过使用无菌滤膜过滤来实现。活性成分还可包载于例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶嚢中(例如分别是羟曱基纤维素或明胶微胶嚢和聚(曱基丙烯酸曱酯)微胶嚢)、在胶状药物投递系统中(例如脂质体、清蛋白微球体、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶嚢)、或在粗滴乳状液中。此类技术7>开于例如《Remington'sPharmaceuticalSciences》，第16版，Osol,A.编，1980。免疫偶联物的固体疏水性聚合物半透性基质，该基质是定型产品的形式，例如薄膜或微胶嚢。持续释放基质的例子包括聚酯、水凝胶(例如聚(2-羟乙基-曱基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美国专利第3，773,919号)、L-谷氨酸和L-谷氨酸Y乙酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物诸如LUPRONDEPOT(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林构成的可注射微球体)及聚-D-(-)-3-羟基丁酸。虽然诸如乙烯-乙酸乙烯和乳酸-乙醇酸等聚合物能够释放分子达100天以上，但是某些水凝胶释放蛋白质的时间较短。当胶嚢化抗体或免疫偶联物在体内长时间维持时，它们可能由于暴露于37。C的潮湿环境而变性或聚集，导致生物学活性损失和免疫原性可能改变。可以根据相关机制来设计合理的稳定化策略。例如，如果发现聚集机制是经由硫醇-二硫化物互换的分子间S-S键形成，那么可通过修饰巯基残基、由酸性溶液冻干、控制湿度、采用适宜添加剂和开发特定聚合物基质组合物来实现稳定。mE.4吏用抗TAT226抗体和免疫偶联物的方法1.诊断方法和检测方法TAT226的存在。术语'4企测"在用于本文时涵盖定量或定性;险测。在某些实施方案中，生物学样品包含细胞或组织，诸如图13所列组织。在某些实施方案中，此类组织包括相对于其它组织以更高水平表达TAT226的正常的和/或癌性的组织，例如印巢、肾、脑、子宫内膜、肾上腺、骨、肺、皮肤、和软组织。一方面，本发明提供了检测生物学样品中TAT226的存在的方法。在某些实施方案中，所述方法包括在容许抗TAT226抗体结合TAT226的条件下使生物学样品接触抗TAT226抗体，并检测在抗TAT226抗体与TAT226之间是否形成复合物。一方面，本发明提供了诊断与TAT226表达升高有关的病症的方法。在某些实施方案中，所述方法包括使测试细胞接触抗TAT226抗体；通过检测抗TAT226抗体对TAT226的结合，测定测试细胞的TAT226表达水平(或是定量的或是定性的)；并比较测试细胞的TAT226表达水平与对照细胞(例如与测试细胞相同组织起源的正常细胞或以与这样的正常细胞相当的水平表达TAT226的细胞)的TAT226表达水平，其中测试细胞的TAT226表达水平比对照细胞高指示存在与TAT226表达升高有关的病症。在某些实施方案中，测试细胞得自怀疑患有与TAT226表达升高有关的病症的患者。在某些实施方案中，所述病症是细胞增殖性病症，诸如癌症或肿瘤。如肿瘤，例如癌瘤(上皮肿瘤)和母细胞瘤(胚胎组织衍生胂瘤)，和某些实施方案中的卵巢癌、子宫癌(包括子宫内膜癌)、和肾癌(包括肾胚细胞瘤，例如维尔姆斯氏肿瘤)。具体而言，卵巢癌涵盖一组衍生自卵巢的异质的恶性肿瘤。大约90。/。的恶性卵巢肺瘤是上皮起源的；其余是生殖细胞和基质肺瘤。上皮卵巢肿瘤分为如下组织学亚型浆液性腺癌(serousadenocarcinomas)(占上皮卵巢肺瘤的约50%);子宫内膜样腺癌(endometrioidadenocarcinomas)(约20%);粘液性腺癌(mucinousadenocarcinomas)(约10%);透明细月包癌(clearcellcarcinomas)(约5-10%);布<仑纳瘤(Brennertumor)(移行细胞瘤)(相对罕见)。卵巢癌(女性中第六位最常见癌症)的预后通常较差，5年存活率的范围为5-30%。关于卵巢癌的综述参见Foxetal.(2002)"Pathologyofepithelialovariancancer,"于Ovar/朋Ca"cerch.9(Jacobsetal.,eds.,OxfordUniversityPress,NewYork);Morinetal.(2001)"OvarianCancer,"于￡>c_yc/opWc7^/^e"ceo/Ca"cer，pp.654-656(Schwab,ed.,Springer-Verlag,NewYork)。本发明涵盖上文所述任何上皮卵巢肺瘤亚型，特别是浆液性腙_癌亚型的诊断或治疗方法。在某些实施方案中，诊断或检测方法，诸如上文所述，包括检测抗TAT226的膜制备物中的TAT226的结合。在某些实施方案中，所述方法包括在容许抗TAT226抗体结合TAT226的条件下使细胞接触抗TAT226抗体，并检测在抗^复合物。用于检测抗结合的例示性测定法是"FACS，，测定法，诸如下文实施例D中所述。法包括但不限于本领域公知的抗原结合测定法，诸如Western印迹、放射免疫测定法、ELISA(酶联免疫吸附测定法)、"三明治/夹心式"免疫测定法、免疫沉淀测定法、焚光免疫测定法、蛋白A免疫测定法、和免疫组化(IHC)。在某些实施方案中，抗TAT226抗体是经过标记的。标记物包括但不限于直接检测的标记物或模块(诸如荧光、显色、电子密度、化学发光、和放射性标记物)，以及间接检测的模块，诸如酶或配体，例如通过酶促反应或分子相互作用。例示性的标记物包括但不限于放射性同位素"P、14C、125I、3H、和1311,荧光团诸如稀土螯合物或荧光素及其衍生物，罗丹明及其衍生物，丹酰，伞形酮，萤光素酶例如萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶(美国专利No.4,737,456)，萤光素，2,3-二氬萘嗪二酮，辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶，(3-半乳糖苦酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖氧化酶例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶、和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，杂环氧化酶诸如尿酸酶和黄噤呤氧化酶，偶联利用过氧化氢氧化染料前体的酶HRP、乳过氧化物酶、或微过氧化物酶，生物素/亲合素，自旋标记物，噬菌体标记物，稳定自由基等等。在某些实施方案中，抗TAT226抗体是固定在不溶性基质上的。固定化能够将抗TAT226抗体与仍然在溶液中游离的任何TAT226分开。这可以如下常规进行或是通过在测定规程之前使抗TAT226抗体不溶解，即通过吸附至水113不溶性基质或表面(Bennich"a/.,U.S.3,720,760)或通过共价偶耳关(例如4吏用戊二醛交联)；或者通过在抗TAT226抗体与TAT226之间形成复合物之后使抗TAT226抗体不溶解，即例如通过免疫沉淀。可以使用本发明的免疫偶联物来实施诊断或检测的任何上述实施方案，或是将所述免疫偶联物替换为抗TAT226抗体或是所述免疫偶联物与抗TAT226抗体一起i吏用。2.治疗方法
技术领域：
：本发明的抗体或免疫偶联物可用于例如体外、回体(exvivo)、和体内治疗方法。一方面，本发明提供了在体内或在体外抑制细胞生长或增殖的方法，所述方法包括在容许免疫偶联物结合TAT226的条件下使细胞暴露于抗TAT226抗体或其免疫偶联物。"抑制细胞生长或增殖"意味着将细胞的生长或增殖降低至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、或100%,而且包括诱导细胞死亡。在某些实施方案中，所述细胞是肿瘤细胞。在某些实施方案中，所述细胞是卵巢肿瘤细胞、子宫肿瘤细胞、月S肿瘤细胞、或肾肿瘤细胞。在某些实施方案中，所述细胞是异种移植物，例如本文中所例示的。一方面，本发明的抗体或免疫偶联物可用于治疗或预防细胞增殖性病症。在某些实施方案中，所述细胞增殖性病症与TAT226的表达和/或活性升高有关。例如，在某些实施方案中，所述细胞增殖性病症与细胞表面上的TAT226表达升高有关。在某些实施方案中，所述细胞增殖性病症是肿瘤或癌症。有待用本发明的抗体或免疫偶联物治疗的细胞增殖性病症的实例包括但不限于癌性疾患，诸如肿瘤，例如癌瘤(carcinomas)(上皮肿瘤)和母细胞瘤(胚胎组织衍生肿瘤)，和某些实施方案中的卵巢癌；子宫癌，包括子宫内膜癌；脑肿瘤(例如星形细胞瘤，包括晚期神经胶质瘤，也称为多形成胶质细胞瘤(glioblastomamultiforme));和肾癌，包括肾胚细胞瘤(例如维尔姆斯氏瘤)。一方面，本发明提供了治疗细胞增殖性病症的方法，包括给个体施用有效量的抗TAT226抗体或其免疫偶联物。在某些实施方案中，用于治疗细胞增殖性病症的方法包括给个体施用有效量的药用组合物，其包含包含抗TAT226抗体和任选的至少一种别的治疗剂，诸如下文所提供的。在某些实施方案中，含1)包含抗TAT226抗体与细胞毒剂的免疫偶联物；和任选地2)至少一种别的治疗剂，诸如下文所提供的。一方面，本发明的至少有些抗体或免疫偶联物可结合来自人以外物种的TAT226。因而，本发明的抗体或免疫偶联物可用于结合例如包含TAT226的细胞培养物中的、人中的、或具有本发明与其交叉反应的TAT226的其它哺乳动物(例如黑猩猩、狒狒、狨、猕猴和恒河猴，猪或小鼠)中的TAT226。在一个实施方案中，抗TAT226抗体或免疫偶3f关物可用于抑制TAT226活性，其通过使所述抗体或免疫偶联物接触TAT226使得TAT226活性受到抑制。在一个实施方案中，所述TAT226是人TAT226。在一个实施方案中，抗TAT226抗体或免疫偶联物可用于结合患有与TAT226表达和/或活性升高有关的病症的个体中的TAT226的方法，所述方法包括给个体施用抗体或免疫偶联物使得个体中的TAT226得到结合。在一个实施方案中，所述TAT226是人TAT226,所述个体是人个体。或者，所述个体可以是表达抗TAT226抗体与其结合的TAT226的哺乳动物。还有，所述个体可以是导入了TAT226的个体(例如通过施用TAT226或通过表达编码TAT226的转基因)。可以出于治疗目的将抗TAT226抗体或免疫偶联物施用于人。此外，可以出于兽医目的或作为人类疾病的动物模型将抗TAT226抗体或免疫偶联物施大鼠、或小鼠)。关于后者，此类动物模型可用于评估本发明抗体或免疫偶联物的疗效(例如测试施用的剂量和时间进程)。本发明的抗体或免疫偶联物可以在治疗中单独使用或联合其它组合物施用。例如，本发明的抗体或免疫偶联物可以与至少一种别的治疗剂和/或佐剂共施用。在某些实施方案中，别的治疗剂是细胞毒剂、化疗剂、或生长抑制剂。在一个这样的实施方案中，化疗剂是卵巢癌治疗中所使用的药剂或药剂组合，诸如鉑化合物(例如顺鉑或卡铂)；紫杉烷(例如帕利他塞或多西他塞)；拓朴替康；蒽环类抗生素(例如多柔比星(ADRIAMYCIN⑧)或脂质体多柔比星(DOXIL⑧))；吉西他滨；环磷酰胺；长春瑞滨(NAVELBINE⑧)；六甲蜜胺；异磷酰胺；和依托泊苷。在另一个这样的实施方案中，化疗剂是子宫癌或子宫内膜癌治疗中所使用的药剂或药剂组合，诸如顺铂、卡铂、多柔比星、帕利他塞、曱氨蝶呤、氟尿嘧啶、和曱羟孕酮。在另一个这样的实施方案中，化疗剂是脑肿瘤治疗中所使用的药剂或药剂组合，诸如亚硝基脲(例如卡莫司汀或洛莫司汀)；细胞毒剂(例如伊立替康或替莫唑胺)；抗血管发生剂(例如沙利度胺、TNP-470、血小板因子4、干扰素和内皮他汀)；分化剂(例如类视黄醇、丁酸苯酯、乙酸苯酯、和抗瘤酮)；抗侵入剂(例如基质金属蛋白酶抑制剂，诸如马里马司他)；信号转导调控剂(例如他莫昔芬、苔藓抑素、和0-6benzyguanine);拓朴异构酶抑制剂(例如伊立替康或托泊替康)；及生长因子抑制剂(例如酪氨酸激酶抑制剂)。在另一个这样的实施方案中，化疗剂是肾癌(例如维尔姆斯氏瘤)治疗中所使用的药剂或药剂组合，诸如长春新^喊、放线菌素D、阿霉素、多柔比星、环磷酰胺、异磷酰胺、依托泊苷、和卡铂。在某些实施方案中，本发明的抗体可以与抗炎剂和/或防腐剂组合。上文所述此类联合疗法涵盖联合施用(其中两种或多种治疗剂包含在同一配制剂中或分开的配制剂中)和分开施用，其中本发明抗体或免疫偶联物的施用可以在别的治疗剂和/或佐剂的施用之前、同时、和/或之后进行。本发明的抗体或免疫偶联物还可以与放疗联合。本发明的抗体或免疫偶联物(及任何别的治疗剂或佐剂)可以通过任何合适的手段来施用，包括胃肠外、皮下、腹膜内、肺内、和鼻内，及损伤内施用(如果希望局部治疗的话)。胃肠外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内、或皮下施用。另外，通过脉沖输注来施用抗体或免疫偶联物是合适的，特别是使用递减剂量的抗体或免疫偶联物。剂量给药可以通过任何合适的路径，例如通过注射，诸如静脉内或皮下注射，这部分取决于施用是短暂的还是长时间的。若结合靶物位于脑中，则本发明的某些实施方案提供了抗体或免疫偶联物来穿越血脑屏障。数种本领域已知方法可用于运输分子穿过血脑屏障，包括但不限于物理方法、基于脂质的方法、基于干细胞的方法、及基于受体和通道的方法。避(circumventing)血脑屏障，或者通过在血脑屏障中创建开口。规避法包括^旦不限于直才妄注射入月il(参见例如Papanastassiouetal.,T7zera;少9:398-406(2002》、间质输注(interstitialinfusion)/对流增强投递(convection-enhanceddelivery)(参见例如Boboetal.，尸rac.7Va/7.」cac/.^SW.f7S^11691:2076-2080(1994))、和在脑中植入投递装置(参见例如Gilletal.，A^w阳9:589-595(2003);GliaddWafers,GuildfordPharmaceutical)。在屏障中创建开口的方法包括但不限于超声波(参见例如美国专利公开号2002/0038086)、渗透压(例如通过施用高渗甘露醇(Neuwelt，E.A.,/mp//ca"'o"o/f/ze5a/r/erowe//fe7W"aw^7w/aft.ow,Vols1&2,PlenumPress,N.Y".(1989)))、通过例如緩激肽(bradykinin)或透化剂(permeabilizer)A-7的透化(参见例如美国专利No.5,112,596;5,268,164;5,506,206;和5,686，416)、及用包含编码抗体的基因的载体转染跨骑(straddle)血脑屏障的神经元(参见例如美国专利公开号2003/0083299)。运输抗体或免疫偶联物穿越血脑屏障的基于脂质的方法包括但不限于将抗体或免疫偶联物封装在脂质体中，该脂质体偶联有结合血脑屏障的血管内皮上受体的抗体结合片段(参见例如美国专利申请公开号20020025313)，及在低密度脂蛋白颗粒(参见例如美国专利申请公开号20040204354)或载脂蛋白E(参见例如美国专利申请公开号20040131692)中包被抗体或免疫偶联物。运输抗体或免疫偶联物穿越血脑屏障的基于干细胞的方法需要遗传工程改造神经前体细胞(NPC)以表达感兴趣的抗体或免疫偶联物，然后将干细胞植入待治疗个体的脑中。参见Behrstocketal.(2005)G朋e77zw2005年12月15曰提前在先公开(报告了经遗传工程改造而表达神经营养因子GDNF的NPC在植入啮齿类和灵长类模型的脑后降低了帕金森病的症状)。运输抗体或免疫偶联物穿越血脑屏障的基于受体和通道的方法包括但不限于使用糖皮质激素阻断剂来提高血脑屏障的通透性(参见例如美国专利申请公开号2002/0065259;2003/0162695;2005/0124533);活化钾通道(参见例如美国专利申请公开号2005/0089473);抑制ABC药物转运物(参见例如美国专利申请公开号2003/0073713);用运铁蛋白包被抗体或免疫偶联物并调控一种或多种运铁蛋白受体的活性(参见例如美国专利申请公开号2003/0129186);及4吏抗体或免疫偶3f关物阳离子化(参见例如美国专利No.5,004,697)。可以与优良医学实践一致的方式配制、剂量给药和施用本发明的抗体或免疫偶联物。在此内容中考虑的因素包括所治疗的具体病症、所治疗的具体哺乳动物、患者个体的临床状况、病症的起因、投递药剂的部位、施药的方法、施药的日程安排、和医学从业人员知道的其它因素。不是必需而是任选将抗体或免疫偶联物与目前用于预防或治疗所讨论病症的一种或多种药剂一起配制。此类其它药剂的有效量取决于配制剂中存在的抗体或免疫偶联物的量、病症或治疗的类型、和上文讨论的其它因素。这些通常是以与本文所用相同剂量和施用路径使用，或是本文所述剂量的大约1-99%，或是凭经验/在临床上确定为适宜的任何剂量和任何路径。对于疾病的预防或治疗，本发明抗体或免疫偶:f关物的适宜剂量(在单独使用或联合一种或多种其它别的药剂诸如化疗剂时)将取决于待治疗疾病的类型、抗体或免疫偶联物的类型、疾病的严重程度和进程、施用抗体或免疫偶联物是出于预防还是治疗目的、先前的疗法、患者的临床病史和对抗体或免疫偶联物的响应、及主治医师的判断。合适的是，一次性或通过一系列治疗将抗体或免疫偶联物施用于患者。根据疾病的类型和严重程度，施用于患者的初始候选剂量可以是约llig/kg至15mg/kg(例如0.1mg/kg-10mg/kg)抗体或免疫偶联物，例如或是通过一次或多次分开施药或是通过连续输注。根据上文所述因素，典型日剂量的范围可以是约ljig/kg至100mg/kg或更多。对于持续数天或更长的重复施药，根据状况，通常持续治疗直至疾病症状发生期望的抑制。抗体或免疫偶联物的例示剂量的范围可以是约0.05mg/kg至约10mg/kg。如此，可对患者施用约0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或其任意组合)的一剂或多剂。这些剂量可间歇施用，例如每周或每三周(例如使得患者接受约2剂至约20剂，例如约6剂抗体或免疫偶联物)。可施用一剂较高的初始加载剂量，后续一剂或多剂较低剂量。例示性剂量给药方案包括施用一剂约4mg/kg抗体的初始加载剂量，后续每周一剂约2mg/kg的维持剂量。然而，其它剂量方案也可能是有用的。这种疗法的进程易于通过常规技术和测定法来监测。3.测定法本发明的抗TAT226抗体和免疫偶联物可以通过本领域知道的各种测定法来表;[正其物理Mb学特性和/或生物学活性。a)活性测定法一方面，提供了用于鉴定具有生物学活性的抗TAT226抗体或其免疫偶联物的方法。生物学活性可以包括例如抑制细胞生长或增殖的能力(例如"细胞杀伤"活性)、或诱导细胞死亡(包括程序性细胞死亡(凋亡))的能力。还提供了在体内和/或在体外具有此类生物学活性的抗体或免疫偶联物。在某些实施方案中，测试抗TAT226抗体或其免疫偶联物在体外抑制细胞生长或增殖的能力。抑制细胞生长或增殖的测定法是本领域公知的。细胞增殖的某些测定法，以本文所述"细胞杀伤"测定法为例，测量细胞存活力(viability)。一种这样的测定法是CellTiter-GloTM发光细胞存活力测定法，其可购自Promega(Madison，WI)。该测定法基于存在的ATP(有4、iU"活性的细胞的一项指标)的定量来测定培养物中的存活细胞数。参见Crouchetal(1993)//wm#ra/.Me仇160:81-88;美国专利No.6602677。该测定法可以以96孔或384孔形式进行，使之适应自动化高通量筛选(HTS)。参见Creeetal(1995)爿w〃Ca"cerDra^6:398-404。该测定法规程涉及直接向培养细胞添加单一试剂(CellTiter-Gk^试剂)。这导致细胞溶解和通过萤光素酶反应产生的发光信号的生成。发光信号与存在的ATP的量成正比，后者直接与培养物中存在的存活细胞数成正比。可以通过光度计或CCD照相机成像装置来记录数据。发光输出表述成相对光单位(RLU)。细胞增殖的另一种测定法是"MTT"测定法，一种测量3-(4，5-二曱基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑氮溴化物被线粒体还原酶氧化成曱膪(formazan)的比色测定法。与CellTiter-GloTM测定法一样，此测定法指示细胞培养物中存在的有代谢活性的细胞的量。参见例如Mosmann(1983)J/附m丽o/.M"/2.65:55-63;Zhangetal.(2005)Owceriw.65:3877-3882。一方面，测试抗TAT226抗体在体内诱导细胞死亡的能力。诱导细胞死亡的测定法是本领域公知的。在有些实施方案中，此类测定法测量例如膜完整性的丧失，其通过石典化丙口定(PI)、锥虫蓝(参见Mooreetal.(1995)C>totec/"o/ogy，17:1-11)、或7AAD的^聂取来指示。在一种例示性PI摄取测定法中，将细胞在补充有10。/。热灭活FBS(Hyclone)和2mML-谷氨酰胺的Dulbecco氏改良Eagle培养基(D-MEM):Ham'sF-12(50:50)中培养。如此，该测定法在缺乏补体和免疫效应细胞时进行。将细胞以3x106个/盘接种入100x20mm盘，并容许附着过夜。除去培养基，并用单独的培养基或含有各种浓度抗体或免疫偶联物的培养基更换。将细胞温育3天时间段。处理后，将细胞单层用PBS清洗，并通过胰蛋白酶处理而脱离。然后将细胞于4。C以1200rpm离心5分钟，将沉淀物重悬于3ml冷的Ca"结合緩沖液(10mMHepes,pH7.4，140mMNaCl,2.5mMCaCl2)，并等分入35mm盖有滤网(strainer-capped)的12x75mm管(lml/管，3管/处理组)以除去细胞团快。然后向管中加入PI119(10吗/ml)。使用FACSCANtm流式细胞仪和FACSCONVERTTMCellQuest软件(BectonDickinson)分析样品。根据PI摄取的测定诱导统计学显著水平的细月包死亡的抗体或免疫偶联物如此得到鉴定。一方面，测试抗TAT226抗体或免疫偶联物诱导凋亡(程序性细胞死亡)的能力。诱导凋亡的抗体或免疫偶联物的一种例示性测定法是膜联蛋白结合测定法。在一种例示性的膜联蛋白结合测定法中，将细胞如上一段所述培养并接种入盘。除去培养基，并用单独的新鲜培养基或含有0.001-10iug/ml抗体或免疫偶联物的培养基更换。3天温育期后，将细胞单层用PBS清洗，并通过胰蛋白酶处理脱离。然后将细胞如上一段所述离心，重悬于Ca"结合緩沖液，并等分入管。然后向管中加入标记的膜联蛋白(例如膜联蛋白V-FITC)(1pg/ml)。使用FACSCANtm流式细胞仪和FACSCONVERTTMCellQuest软件(BectonDickinson)分析样品。相对于对照诱导统计学显著水平的膜联蛋白结合的抗体或免疫偶联物如此得到鉴定。诱导凋亡的抗体或免疫偶联物的另一种例示性测定法是组蛋白DNAELISA比色测定法，其用于检测基因组DNA的核小体间降解。这样的测定法可使用例如细胞死亡4全测ELISA试剂盒(Roche,PaloAlto,CA)来进行。改造而表达TAT226的细胞或细胞系。此类细胞包括相对于同一组织起源的正常细胞过表达TAT226的肿瘤细胞。此类细胞还包括表达TAT226的细胞系(包括胂瘤细胞系)和在正常情况下不表达TAT226但经TAT226编码核酸转染的细胞系。本文中所提供用于任何上述体外测定法的例示性细胞系包括表达TAT226的OVCAR3人卯巢癌细胞系和经TAT226编码核酸转染的HCT116人结肠癌细胞系。一方面，测试抗TAT226抗体或其免疫偶联物在体内抑制细胞生长或增殖的能力。在某些实施方案中，测试抗TAT226抗体其或免疫偶if关物在体内抑制肿瘤生长的能力。体内模型系统，诸如异种移植物模型，可用于此类测试。在一种例示性异种移植物系统中，将人肿瘤细胞导入合适的免疫受损的非人动物，例如无胸腺"棵鼠"。将本发明的抗体或免疫偶联物施用于所述动物。测量抗体或免疫偶联物抑制或降低肿瘤生长的能力。在上述异种移植物系统的某些实施方案中，所述人肿瘤细胞是来自人类患者的肿瘤细胞。此类异种移植物模型可购自OncotestGmbH(Frieberg,Germany)。在某些实施方案中，所述人肺瘤细胞是来自人肺瘤细胞系的细胞，诸如本文中所例示的OVCAR3细胞。在某些实施方案中，通过皮下注射或通过移植入合适的位点(诸如乳房脂肪垫)，将人肿瘤细胞导入合适的免疫受损的非人动物。b)结合测定法和其它测定法一方面，对抗TAT226抗体测试其抗原结合活性。例如，在某些实施方案中，对抗TAT226抗体测试其结合在细胞表面上表达的TAT226的能力。可以将FACS测定法用于此类测试，诸如实施例D中所述。一方面，可以将竟争测定法用于鉴定与YW0.32、YWO,49、YWO.49.B7、YWO.49.C9、YWO.49.H2、或YW0.49.H6竟争结合TAT226的单克隆抗体。在某些实施方案中，这样的竟争性抗体与YW0.32、YW0.49、YWO.49.B7、YWO.49.C9、YWO.49.H2、或YWO,49.H6结合相同的表位(例如线性表位或构象表位)。例示性的竟争测定法包括但不限于常规测定法，诸如HarlowandLane(1988)」/^oratoryMawwa/ch.14(ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,NY)中所提供的。定位抗体所结合表位的详细的例示性方法见Morris(1996)"EpitopeMappingProtocols,"于Me/zotfcAfo/ecw/flr&o/ogyvol.66(人aPress,Totowa,NJ)。若两种抗体各自阻断4皮jt匕50%或更多的结合，则说这两种抗体结合相同表位。在一种例示性的竟争测定法中，将固定化的TAT226在包含能结合TAT226的第一经标记抗体(例如YWO.32、YWO.49、YWO.49.B7、YWO.49.C9、YWO.49.H2、或YW0.49.H6)和要测试其与第一抗体竟争结合TAT226的第二未标记抗体的溶液中温育。所述第二抗体可以存在于杂交瘤上清液中。作为对照，将固定化的TAT226在包含第一经标记抗体但没有第二未标记抗体的溶液中温育。在容许第一抗体结合TAT226的条件下温育后，除去过量的未结合抗体，并测量与固定化的TAT226结合的标记物的量。如果测试样品中与固定化TAT226结合的标记物的量相对于对照样品有实质性降低，那么这指示所述第二抗体与所述第一抗体竟争结合TAT226。在某些实施方案胞的膜制备物中。一方面，纯化的抗TAT226抗体可以通过一系列测定法进一步表征，包括但不限于N-末端测序、氨基酸分析、非变性大小排阻、高压液相层析(HPLC)、质谱、离子交换层析、和木瓜蛋白酶消化。在一个实施方案中，本发明涵盖了改良的抗体，其具有一些但非所有效应器功能，这使之成为其中抗体体内半衰期是重要的但某些效应器功能(诸如补体和ADCC)不是必需的或有害的许多应用的期望候选物。在某些实施方案中，测量抗体的Fc活性以确保只保留了期望的特性。可进行体外和/或体内细胞毒性测定法来证实CDC和/或ADCC活性的降低/消除。例如，可以进行Fc受体(FcR)结合测定法来确认抗体缺乏FcyR结合(从此有可能缺乏ADCC活性)，但保留FcRn结合能力。介导ADCC的主要细胞，NK细胞，只表达FcyRIII,而单核细胞表达FcyRI、FcyRII和FcyRIII。RavetchandKinet,iev./附w朋o/.9:457-92(1991)第464页表3总结了造血细胞上的Fc錄达。美国专利No.5,500，362或5,821,337中记载了评估感兴趣分子的ADCC活性的体外测定法的实例。可用于此类测定法的效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC:和天然杀伤(NK)细胞。或者/另外，可以在体内评估感兴趣分子的ADCC活性，例如在动物模型中，诸如Clynesda/./WJS(^SW)95:652-656(1998)中所披露的。还可以进行Clq结合测定法来证实抗体不能结合Clq及从此缺乏CDC活性。为了评估补体激活，可进行CDC测定法，例如如Gazzano-Santoro"a/.，J//wm,朋/.A/eAoA202:163(1996)中所记载的。还可以使用本领域知道的方法进行FcRn结合和体内清除/半衰期测定。F.制品在本发明的另一个方面，提供了包含可用于治疗、预防和/或诊断上文所述紊乱的物质的制品。制品包括容器和贴在所述容器上或与其相关的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶子、小管、注射器等。容器可用各种材料制成，诸如玻璃或塑料。容器中装有其自身或联合其它组合物有效治疗、预防和/或诊断疾患的组合物，而且可具有无菌存取口(例如容器可以是具有皮下注射针头可刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小管)。组合物中的至少一种活性剂是本发明的抗体或免疫偶联物。标签或包装插页指示该组合物用于治疗选择的疾患。此外，制品可包括(a)其中装有组合物的第一容器，其中所述组合物包含本发明的抗体或免疫偶联物；和(b)其中装有组合物的第二容器，其中所述组合物包含别的细胞毒剂或其它治疗剂。本发明此实施方案中的制品还可包括指示组合物可用于治疗特定疾患的包装插页。或者/另外，制品还可包括第二(或第三)容器，其中装有制药学可接受的緩沖剂，诸如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸盐緩冲盐水、林格氏(Ringer)溶液和右旋糖溶液。它还可包括商业和用户立场上所需的其它物质，包括其它緩冲剂、稀释剂、滤器、针头和注射器。IV.实施例以下是本发明方法和组合物的实例。应当理解，考虑到上文提供的一般性描述，可以实施各种其它实施方案。A.TAT226基因表达的分析使用包含基因表达信息的私有数据库(GeneExpress⑧，GeneLogicInc.,Gaithersburg,MD)，分析人TAT7^基因表达。GeneExpress⑧数据库的图形分析使用微阵列序型浏览器来进行。图13是多种组织(列于左边)中TAT226基因表达的示意图。穿过图上部的刻度指示基于杂交信号强度的基因表达水平。点出现于邻近每种所列组织的线的上面和下面。出现在线上方的点代表正常组织中的基因表达。出现在线下方的点代表肿瘤或患病组织中的基因表达。图13显示了肿瘤或患病组织中TAT226基因表达相对于其正常配对物升高的趋势。具体而言，TAT226显示出肿瘤和患病卵巢中相对于正常卵巢的实质性过表达及维尔姆斯氏肿瘤相对于正常肾的实质性过表达。显示出在肿瘤或患病组织中相对于正常组织过表达的其它组织包括子宫内膜、肾上腺、骨、肺、皮肤、和软组织。另外，TAT226在正常脑组织中(诸如嗅脑、海马、和基底神经节)及在肺瘤或患病脑组织(诸如神经胶质瘤)中强烈表达。还使用GeneExpress⑧数据库来分析正常卵巢；正常输卵管；透明细胞、粘液性、和浆液性嚢腺癌(cystoadenocarcinoma)亚型的卯巢癌；转移性卯巢癌；和其它类型的卵巢癌中的人TAT226基因表达。结果以图形形式报告于图14，具体的组织类型标示在图形下方。图形y轴上的刻度指示基于杂交信号强度的基因表达水平。浆液性嚢腺癌(serouscystoadenocarcinoma)和转移性卵巢癌显示出相对于正常卵巢的TAT226强烈过表达。透明细胞和粘液性亚型显示出与正常卵巢相当的表达。正常输卵管也显示出TAT226的实质性表达。值得注意的是，浆液性亚型的卵巢癌在组织学上与输卵管表皮密切类似，而且卵巢和输卵管都衍生自同一胚胎组织。参见Foxetal.(2002)"Pathologyofepithelialovariancancer",于Ovan'awCa"cerch.9(Jacobsetal.，eds.，Oxford123UniversityPress,NewYork)。B.抗TAT226抗体的生成针对TAT226的抗体是通过用包含SEQIDNO:75氨基酸l-115和C-末端多组氨酸标签的重组"TAT226-His"融合蛋白筛选噬菌体文库生成的。所述噬菌体展示库是使用Fab'-zip-噬菌体系统生成的(Fab')2合成库。参见Leeetal.(2004)J/www"o/.MeAoA284:119-132。该文库包含huMAb4D5-8重链可变区框架(参见图5A和5B,第二受体"B"，SEQIDNO:50、51、57、35)中的重链HVR文库和固定的huMAb4D5-8轻链可变区(如SEQIDNO:26所示)。使用噬菌体ELISA针对TAT226-His筛选使用噬菌体展示选出的克隆(参见例如Sidhuetal.(2004)J.Mo/.肌o/.338:299-310)。选择克隆YW0.32和YW0.49供进一步分析。为了改进YWO,49的亲和力，在YW0.49的背景中生成噬菌体展示库，以HVR-H3和HVR-L3为目标进行软随机化，其中指定HVR中的选定氨基酸残基保持不变，而对其它氨基酸残基进行诱变。通过噬菌体ELISA筛选所选克隆。选择命名为YW0.49.B7、YW0.49.C9、YW0.49.H2、和YW0.49.H6的亲和力成熟抗体供进一步分析。测定了YWO,32、YWO,49、YW0.49.B7、YWO.49.C9、YWO.49.H2、和YW0.49.H6的VH和VL区的核苷酸序列和所编码的多肽序列，如图9和10所示。YWO.32、YWO.49、YW0.49.B7、YWO.49.C9、YW0.49.H2、和YW0.49.H6的重链和轻链HVR序列显示于图2-4。衍生自YWO,49、YWO.49.B7、YW0.49.C9、YWO.49.H2、和YWO,49.H6的共有HVR-H3和HVR-L3序列显示于图4。通过使用重组技术将Fab，片段嫁接到适宜的恒定区上，将YW0.49、YW0.49.B7、YWO,49,C9、YW0.49.H2、和YWO,49.H6重定格式成全长IgG。以下所述实验是使用所述重定格式的抗体进行的。C.对重组抗原的结合亲和力的表征使用BIACORE⑧3000系统(Biacore,Inc.,Piscataway,NJ)通过表面等离振子共4展测量测定YW0.49、YWO.49.B7、YWO.49.C9、YWO.49.H2、和YW0.49.H6对重组抗原的结合亲和力。简言之，依照供应商的说明书用盐酸AA-乙基-7V'-(3-二曱基氨基丙基)-碳化二亚胺(EDC)和7V-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧曱基化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5，BIAcoreInc.)。抗用10mM乙酸钠pH4.8将TAT226抗体稀释至5吗/ml，然后以5^1/分钟的流速注入至获得约500个响应单位(RU)的偶联蛋白质。接着，注入1M乙醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学测量，于25。C以约25jil/分钟的流速注入在含0.050/()Tween-20的PBS(PBST)中两倍连续稀释的TAT226-His(0.7nM到500nM)。使用简单一对一朗格缪尔(Langmuir)结合模型(BIAevaluationSoftwareversion3.2)计算结合速率(kon)和解离速率(koff)。平衡解离常数(Kd)以比率koff/kon计算。此实验的结果显示于下文表2。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage125</column></row><table>D.对抗体结合细胞表面TAT226的表征检验了抗TAT226抗体结合在OVCAR3(人卯巢癌细胞系)表面上表达的TAT226的能力。在缺乏和存在YWO.49、YWO.49.B7、YW0.49.C9、YW0.49.H2、或YWO.49.H6时对OVCAR3细胞进行焚光激活细胞分拣(FACS)。简言之，将解吸的细胞与5iig/ml—抗在冰上温育l小时，清洗，并与二抗(偶联至藻红蛋白的抗人IgG)在冰上温育30分钟。使用FACScanTM流式细胞仪(BDBiosciences,SanJose，CA)进行FACS。YWO,49、YWO.49.H2、和YWO.H6的FACS分析结果显示于图15。每张图左侧的峰代表"背景"结合，即只有二抗时的结合。每张图右侧的峰代表指定抗TAT226抗体的结合。才艮据FACS,YWO,49.B7不显著结合OVCAR3细胞，尽管它以对YW0.49和其它亲和力成熟抗体观察到的Kd范围内的Kd结合重组抗原(见BIACORE⑧分析结果，上文表2)。YWO,49.C9的结合与对YWO,49.H2和YWO.H6观察到的相当。E.对细胞表面抗原的结合亲和力的表征使用竟争测定法检验YW0.49.H2和YW0.49.H6对在OVCAR3细胞表面上表达的TAT226的结合亲和力。筒言之，在存在未标记抗体时容许标记的(碘化的)YW0.49.H2或YW0.49.H6结合至OVCAR3细胞。依照最初记载于Munsonetal.,爿"a/.历oc/7ew.107:220(1980)的Scatchard分才斤法测定抗体的结合亲和力。此实验的结果显示于下文表3。表3克隆Kd(nM)YW0.49.H20.348YWO.49.H60.404YW0.49.H2和YW0.49.H6对在OVCAR3细胞表面上表达的TAT226的Kd高于对重组TAT226-His的Kd(YW0.49.H2和YW0.49.H6的Kd比较见表2和表3),表明YW0.49.H2和YW0.49.H6结合重组TAT226-His的亲和力略高于结合在OVCAR3细胞表面上表达的TAT226的亲和力。F.TAT226mRNA和蛋白质表达使用5'核酸酶(TaqMan⑧)测定法和实时定量PCR，分析OVCAR3细胞中和一组卵巢癌样品中的TAT226mRNA表达。卵巢癌样品(在图16中称为"HF絲##")是冷冻组织切片。从组织切片分离RNA,使用Ambion的MessageAmpII试剂盒(Ambion,Austin,TX)扩增，并逆转录成cDNA。从OVCAR3细胞分离RNA，并逆转录成cDNA。在存在对扩增产物特异性的不可延伸的报道探针时通过实时PCR扩增TAT226cDNA。测定循环阈值或"Ct"(由报道探针的切割产生的信号超过背景时的循环数)，并用于计算起始TAT226mRNA水平。该组卵巢癌样品中的TAT226mRNA水平表述成相对于OVCAR3细胞中的TAT226mRNA水平，如图16中的条线图所示。如下使用免疫组化(IHC)，分析OVCAR3细胞中和上述那组卵巢癌样品126中的TAT226蛋白质表达。将卵巢癌样品的组织切片(冷冻的或石蜡包膜的)在丙酮/乙醇中固定5分钟。将切片在PBS中清洗，用亲合素和生物素(VectorLaboratories,Inc.,Burlingame,CA)各封闭10分钟，并再次在PBS中清洗。然后将切片用10%血清封闭20分钟，并吸去过量的血清。然后以10吗/ml的浓度添加一抗(YW0.49.H2或YW0.49.H6)至切片达l小时。然后在PBS中清洗切片。添加生物素化抗人二抗至所述切片达30分钟，然后用PBS清洗切片。然后将切片暴露于VectorABC试剂盒(VectorLaboratories,Inc.,Burlingame,CA)的试剂达30分钟，然后在PBS中清洗。然后将切片暴露于二氨基联苯胺(Pierce)达5分钟，然后在PBS中清洗。然后将切片用Mayers苏木精复染，盖上盖玻片，并观察。使用相同方案对OVCAR3细胞进行IHC,只是细胞先沉淀，冷冻，然后切片。然后对切片进行上述方案。定性结果报告于图16，将表达水平分类为"-"、"+/-"、或"+"。一般而言，在TAT226mRNA表达水平与OVCAR3细胞表面上的TAT226蛋白质表达之间有总体相关性。IHC实验还证实了抗体能识别细胞表面上的TAT226。卵巢癌细胞组中每种细胞的组织学也报告于图16，其中缩写"adenoca."表示"腺癌"。G.抗TAT226ADC的生成通过将YW0.49.H2和YWO,49.H6偶联至如下药物-接头才莫块，生成抗TAT226ADC:MC-vc-PAB陽MMAE;MC-vc-PAB匿MMAF;和MC-MMAF，其描述于上文III.C.l.b.2部分。在偶联前，依照WO2004/010957A2中记载的方法学使用标准方法将抗体用TCEP部分还原。依照Doroninaetal.(2003)Ato.Aofec/wo/.21:778-784和US2005/0238649Al中记载的方法学使用标准方法将部分还原的抗体偶联至上述药物-接头模块。简言之，将部分还原的抗体与药物-接头模块混合，以容许所述模块偶联至半胱氨酸残基。将偶联反应淬灭，并纯化ADC。通过HPLC测定每种ADC的药物载荷(每个抗体的平均药物模块数)，如下ADC药物载荷YW0.49.H2-MC-vc-PAB-MMAE3.8YW0.49.H2-MC-vc-PAB-MMAF4.7YW0.49.H2-MC-MMAF4.9YW0.49.H6-MC-vc-PAB-MMAE4.4YW0.49.H6陽MC-vc-PAB-MMAF4.4YW0.49.H6-MC-MMAF4.1H.细胞杀伤测定法在下述体外和体内细胞杀伤测定法中测试抗体-药物偶联物(ADC)抑制表达TAT226的细胞增殖的能力I.OVCAR3体外细胞杀伤测定法测试YW0.49.H2和YW0.49.H6ADC抑制OVCAR3细胞增殖的能力。将OVCAR3细胞在含200/。FBS的RPMI中接种入96孔板。将OVCAR3细胞以3000细胞/孔的密度与不同浓度的ADC的一起温育，如图17所示。将偶联至MC-vc-PAB-MMAE的抗MUC16/CA125抗体用作阳性对照。MUC16/CA125是已知的卵巢癌抗原。参见例如Yinetal.(2001)所o/.CTzem.276:27371-27375。将偶联至MC-vc-PAB-MMAE的抗IL-8抗体用作阴性对照。温育5天后，使用CellTiter-GloTM发光细胞存活力测定法(Promega,Madison,WI)依照制造商的说明书测量细胞存活力。图17的y轴上的刻度指示来自萤光素酶发光的相对光单位，或"RLU"，这是细胞存活力的一种度量。图17显示了，与阳性对照相似，YW0.49.H2-MC-vc-PAB-MMAF和YW0.49.H6-MC-vc-PAB-MMAF具有显著的细胞杀伤活性，特别是在0.01和0.1jug/ml的浓度及附近。YWO,49.H2-MC-vc-PAB-MMAE和YW0.49.H6-MC-vc-PAB-MMAE也具有细胞杀伤活性，但是其程度低于对YW0.49.H2-MC-vc匿PAB-MMAF和YW0.49.H6-MC-vc-PAB-MMAF所看到的。YWO,49.H2-MC-vc-PAB-MMAF和YWO.49.H6-MC-vc-PAB-MMAF的IC50为约0.005nM，而YW0.49.H2-MC-vc-PAB-MMAE和YWO.49.H6-MC-vc-PAB-MMAE的IC50为约0.2nM。游离MMAE的IQo为约O.lnM。YW0.49.H2-MC-MMAF和YW0.49.H6-MC-MMAF在此测定法中未显示出显著的细胞杀伤活性。在此具体测定系统中注意到，在高浓度ADC(包括阴性对照ADC),细胞存活力由于总体高浓度MMAE和MMAF有实质性降低。2.使用HCT116转染细胞的体外细胞杀伤测定法测试YWO，49.H2和YW0.49.H6ADC抑制稳定转染了编码人TAT226核酸的HCT116细胞(一种结肠癌细胞系)增殖的能力。在正常情况下，未转染的HCT116细胞对游离(未偶联)MMAE的敏感性比OVCAR3细胞低约5-6倍。简言之，如下转染HCT116细胞。在哺乳动物表达载体pcDNA3.1(Invitrogen,Carlsbad,CA)中构建编码带表位标签的人TAT226的核酸。表位标签由l型单纯疱渗病毒糖蛋白D氨基酸l-53("gD"标签)组成，用它置换人TAT226的N-末端氨基酸l-22的信号序列。使用Lipofectamine200(Invitrogen)依照制造商的方案将所述重组载体转染入HCT116细胞。将转染的HCT116细胞在含10%FBS和0.4mg/mlG418的McCoy，氏5a培养基中培养。将细胞用抗gD抗体染色，并通过FACS分拣以选择表达重组gD:人TAT226融合蛋白的个别克隆。选择命名为HCT116#9-4的一个克隆用于进一步分析。为了实施细胞杀伤测定法，将HCT116弁9-4细胞接种入96孔板。将HCT116弁9-4细胞以1000细胞/孔的密度与不同浓度的ADC—起温育，如图18所示。将偶联至MC-vc-PAB-MMAE的抗gpl20抗体用作阴性对照。温育3天后，使用CellTiter-GloTM发光细胞存活力测定法(Promega，Madison,WI)依照制造商的说明书测量细胞存活力。图18显示了YWO.49.H2-MC-vc-PAB-MMAF和YW0.49.H6-MC-vc-PAB-MMAF具有显著的细胞杀伤活性，特别是在约0.01(ig/ml和直至所测试的最高浓度。YW0.49.H2-MC-vc-PAB-MMAF和YWO.49.H6-MC-vc-PAB-MMAF的IC50为约0.05nM,而游离MMAE的ICso为约0.9nM。YW0.49.H2-MC-vc-PAB-MMAE和YW0.49.H6-MC-vc-PAB-MMAE在此具体测定法中相对于阴性对照不具有实质性细胞杀伤活性。YW0.49.H2-MC-vc-PAB-MMAE和YW0.49.H6-MC-vc-PAB-MMAE在此测定法中的细胞杀伤活性与OVCAR3细胞杀伤测定法(上文)相比的差异可归于多种因素，例如细胞密度和/或药物敏感性的差异。注意到，对于所测试的在正常情况下表达TAT226mRNA或蛋白质的有些其它细胞系，YW0.49.H2和YW0.49.H6ADC未显示出显著细胞杀伤活性。这可能是由于多种因素，例如细胞类型特异性效应、细胞表面TAT226表达水平、和/或药物敏感性的差异。3.使用HCT116弁9-4异种移植物的体内测定法使用体内异种移植物模型来测试未偶联的和偶联的YWO,49.H6在体内抑制表达TAT226的肿瘤细胞增殖的能力。通过皮下注射约5乂106个HCT116糾-4细胞入无胸腺"nu-nu"棵鼠的背侧，在该鼠中诱导肿瘤。容许肿瘤生长，直至它们达到200mn^的平均肿瘤体积。该时间点称为"第0天"。如图19所示，小鼠在第0、7、和16天接受静脉内注射3mg/kg指定的未偶联抗体或ADC。未偶联的和偶联的抗豚草抗体(anti-ragweedantibody)(Ab)充当阴性对照。在第3、7、10、16、和21天测量平均肺瘤体积。如图19所示，在此具体异种移植物模型中，根据平均肺瘤体积的测量，与抗豚草Ab-MC-vc-PAB-MMAF相比，YWO,49.H6-MC-vc-PAB-MMAF显示出显箸的肺瘤细胞杀伤活性。在此异种移植物模型中，相对于抗豚草Ab-MC-vc-PAB-MMAE，YW0.49.H6-MC-vc-PAB-MMAE未显示显著的肿瘤细胞杀伤活性。然而，此异种移植物模型可能由于多种因素而不反映YW0.49.H6-MC-vc-PAB-MMAE在体外观察到的细胞杀伤活性，例如由于异种移植物肿瘤微环境中细胞表面TAT226表达水平或药物敏感性的差异。4.其它异种移植物模型可以使用其它异种移植物模型来测试未偶联的和偶联的抗TAT226抗体在体内抑制表达TAT226的肺瘤细胞增殖的能力。例如，可以通过公开来源提供卵巢肿瘤和脑肿瘤的异种移植物模型，诸如OncotestGmbH(Frieberg，Germany)和SouthernResearchInstitute(Birmingham,AL)。具体而I，Oncotest模型是通过在免疫缺陷棵鼠中培养患者肿瘤而开发的。表达TAT226mRNA和/或蛋白质的异种移植物可用于证明抗TAT226抗体的体内细胞杀伤活性。对偶联的YW0.49.H6在Oncotest摸型OVXF1023中测试了在体内抑制卵巢肺瘤细胞增殖的能力。Oncotes讨莫型OVXF1023衍生自转移的、分化差的乳头状浆液性腺瘤状卵巢癌，Ml期。如图20所示用ADC处理OVXF1023小鼠。在图20中，YW0.49.H6称为"H6，，；抗豚草(对照)抗体称为"RW，，；而接头-MC-vc-PAB-缩写为"vc"。以图20所示时间和浓度施用ADC。图20所示结果指出相对于其它ADC,YW0.49.H6-MC-vc-PAB-MMAF和YWO,49.H6-MC-MMAF显著降低肿瘤体积。在相似条件下用OVXF1023重复上述实验，只是剂量给药和对照ADC有变化。在重复实验中，用较高剂量(5mg/kg)的YW0.49.H6-MC-vc-PAB-MMAE130和较低剂量(5mg/kg)的YW0.49.H6-MC-vc-PAB-MMAF和YW0.49.H6-MC-MMAF处理小鼠。结果证明了H6ADC(特别是YW0.49.H6-MC-vc-PAB-MMAE)显示出相对于其相应对照ADC(抗gpl20画MC-vc-PAB-MMAE,6.4mg/kg;抗gpl20-MC-vc-PAB-MMAF,7.2mg/kg;和抗gpl20-MC-MMAF，5.4mg/kg)降低肿瘤体积，尽管H6ADC及其相应对照ADC之间的功效差异在有些时间点不是统计学上显著的(数据未显示)。这些结果与在第一种OVXF1023实验中得到的结果之间的差异可归于H6ADC剂量给药和对照抗gp120ADC在降低肺瘤体积中显示出出乎意料的活性的观察结果之间的差异。另外，还在另一种Oncotest模型OVXF899(衍生自中等分化的乳头状浆液性卵巢癌(原发性肺瘤))中测试了H6ADC。H6ADC在此模型中未降低肺瘤体积(数据未显示)。然而，此具体Oncotest模型显示出TAT226低表达，这可能是所观察到的结果的原因。I.ThioMAb创建了半胱氨酸改造的抗体或"thioMAb",其中将YWO,49.H6的选定残基用半胱氨酸替代以提供偶联接头-药物模块的额外位点。具体的说，在YW0.49.H6的重链中进行A118C替代(EU编号方式)，或者在YW0.49.H6的轻链中进行V205C替代(Kabat编号方式)。然后将所得A118CthioMAb偶联至MC-MMAF，将所得V205CthioMAb偶联至MC-MMAF或MC-vc-PAB-MMAE。根据FACS分析，所有thioMAb都能够结合OVCAR3细胞(数据未显示)。尽管为了清楚理解的目的，已经通过说明和举例较为详细的描述了上述发明，说明书和实施例不应解释为限制本发明的范围。完整收录本文中所引用的所有专利和科学文献的公开内容明确作为参考。权利要求1.一种抗体，其能结合TAT226，其中所述抗体包含(a)HVR-H3，所述HVR-H3包含符合共有序列SEQIDNO11的氨基酸序列和(b)至少一个、两个、三个、四个或五个选自下组的HVR(1)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO4；(2)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO5；(3)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO12；(4)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO13；和(5)HVR-L3，其包含符合共有序列SEQIDNO19的氨基酸序列。2.权利要求l的抗体，其包含HVR-L3，所述HVR-L3包含符合共有序列SEQIDNO:19的氨基酸序列。3.权利要求2的抗体，其进一步包含HVR-H1和HVR-H2，所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:4，所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5。4.权利要求3的抗体，其进一步包含HVR-L1和HVR-L2，所述HVR-L1包含氨基酸序列SEQNO:12，所述HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13。5.权利要求l的抗体，其中所述抗体包含HVR-H3，其包含选自SEQIDNO:6-10的氨基酸序列。6.权利要求5的抗体，其包含HVR-L3,所述HVR-L3包含选自SEQIDNO:14-18的氨基酸序列。7.权利要求6的抗体，其进一步包含HVR-H1和HVR-H2，所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:4，所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5。8.权利要求7的抗体，其进一步包含HVR-L1和HVR-L2，所述HVR-L1包含氨基酸序列SEQNO:12，所述HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13。9.权利要求6的抗体，其中所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:9，所述HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:17。10.权利要求9的抗体，其进一步包含HVR-H1和HVR-H2，所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:4，所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5。11.权利要求10的抗体，其进一步包含HVR-L1和HVR-L2，所述HVR-L1包含氨基酸序列SEQNO:12，所述HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13。12.权利要求6的抗体，其中所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:IO，所述HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:18。13.权利要求12的抗体，其进一步包含HVR-H1和HVR-H2，所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:4，所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5。14.权利要求13的抗体，其进一步包含HVR-L1和HVR-L2，所述HVR-L1包含氨基酸序列SEQIDNO:12,所述HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13。15.权利要求l的抗体，其进一步包含至少一种选自VH亚组III共有框架和VL亚组I共有框架的框架。16.—种抗体，其能结合TAT226，其中所述抗体包含与选自SEQIDNO:21-25的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的重链可变域。17.权利要求16的抗体，其中所述抗体进一步包含与选自SEQIDNO:26-31的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的轻链可变域。18.权利要求16的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQIDNO:24具有至少90%序列同一性的重链可变域。19.权利要求18的抗体，其进一步包含与氨基酸序列SEQIDNO:29具有至少90%序列同一性的轻链可变域。20.权利要求19的抗体，其中所述重链可变域包含氨基酸序列SEQIDNO:24,所述轻链可变域包含氨基酸序列SEQIDNO:29。21.权利要求16的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQIDNO:25具有至少90%序列同一性的重链可变域。22.权利要求21的抗体，其进一步包含与氨基酸序列SEQIDNO:30具有至少卯％序列同一性的轻链可变域。23.权利要求22的抗体，其中所述重链可变域包含氨基酸序列SEQIDNO:25，所述轻《连可变域包含氨基酸序列SEQIDNO:30。24.—种多核苷酸，其编码权利要求16的抗体。25.—种载体，其包含权利要求24的多核苷酸。26.—种宿主细胞，其包含权利要求25的载体。27.权利要求26的细胞，其中所述宿主细胞是真核的。28.权利要求27的细胞，其中所述宿主细胞是CHO细胞。29.制备抗TAT226抗体的方法，其中所述方法包括a)在适于表达编码所述抗体的多核苷酸的条件下培养权利要求26的宿主细胞，并b)分离所述抗体。30.—种抗体，其能结合在细胞表面上表达的TAT226。31.权利要求30的抗体，其中所述抗体能结合TAT226中SEQIDNO:75氨基酸21-115区域内的表位。32.权利要求30的抗体，其中所述细胞是癌细胞。33.权利要求32的抗体，其中所述癌细胞是卵巢癌细胞、脑肿瘤细胞、或维尔姆斯氏肺瘤细胞。34.权利要求l、16或30任一项的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。35.权利要求34的抗体，其中所述抗体是选自Fab、Fab，-SH、Fv、scFv或(Fab，)2片段的抗体片段。36.权利要求34的抗体，其中所述抗体是人源化的。37.权利要求34的抗体，其中所述抗体是人的。38.权利要求34的抗体，其中所述抗体能与选自YWO,32、YWO.49、YWO.49.B7、YWO.49.C9、YW0.49.H2和YW0.49.H6的抗体结合相同表位。39.—种检测生物学样品中TAT226的存在的方法，所述方法包括在容许所述抗体结合TAT226的条件下使所述生物学样品接触权利要求1、16或30任一项的抗体，并检测在所述抗体与TAT226之间是否形成复合物。40.权利要求39的方法，其中所述生物学样品包含卵巢肿瘤细胞、脑肿瘤细胞、或维尔姆斯氏胂瘤细胞。41.一种诊断与TAT226表达升高有关的细胞增殖性病症的方法，所述方法包括使测试细胞接触权利要求l、16或30任一项的抗体；通过检测所述抗体与TAT226的结合来测定测试细胞的TAT226表达水平；并比较测试细胞的TAT226表达水平与对照细胞的TAT226表达水平，其中测试细胞的TAT226表达水平比对照细胞高指示存在与TAT226表达升高有关的细胞增殖性病症。42.权利要求41的方法，其中所述测试细胞是来自怀疑患有细胞增殖性病症的患者的细胞。43.权利要求41的方法，其中所述细胞增殖性病症选自卵巢癌和维尔姆斯氏肿瘤。44.权利要求41的方法，其中所述方法包括测定测试细胞表面上的TAT226表达水平，并比较测试细胞表面上的TAT226表达水平与对照细胞表面上的TAT226表达水平。45.一种免疫偶联物，其包含共价附着至细胞毒剂的权利要求l、16或30任一项的能结合TAT226的抗体。46.权利要求45的免疫偶联物，其中所述细胞毒剂选自毒素、化疗剂、抗生素、放射性同位素和核溶酶。一种免疫偶联物，其具有通式Ab-(L-D)p,其中(a)Ab是一种抗体，其能结合TAT226且其包含1)HVR-H3，所述HVR-H3包含符合共有序列SEQIDNO:ll的氨基酸序列和2)至少一个、两个、三个、四个或五个选自下组的HVR:(i)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:4;(ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:5;(iii)HVR-Ll,其包含氨基酸序列SEQIDNO:12;(iv)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:13;和(v)HVR-L3，其包含符合共有序列SEQIDNO:19的氨基酸序列；(b)L是接头；(c)D是通式De或Df的葯物47.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>且其中112和116各自是曱基，113和114各自是异丙基，R7是仲丁基，每个R8独自选自CH3、0-CH3、OH、和H;R9是H;R"是芳基；Z是-O-或-丽-;R"是H、Q誦C8烷基、或-(CH2)2-0-(CH2)2-0-(CH2)2-0-CH3;而R"是-C(r8)2-C(r8)2-芳基；且(d)p的范围为约l到8。48.权利要求47的免疫偶联物，其中所述抗体包含HVR-L3，所述HVR-L3包含符合共有序列SEQIDNO:19的氨基酸序列。49.权利要求48的免疫偶联物，其中所述抗体包含HVR-H3和HVR-L3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:9，所述HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:17。50.权利要求49的免疫偶联物，其中所述抗体进一步包含HVR-H1、HVR-H2、HVR-L1和HVR-L2，所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:4，所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5，所述HVR-L1含氨基酸序列SEQIDNO:12，HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13。51.权利要求48的免疫偶联物，其中所述抗体包含HVR-H3和HVR-L3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:10，所述HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:18。52.权利要求51的免疫偶联物，其中所述抗体进一步包含HVR-H1、HVR-H2、HVR-L1和HVR-L2，所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:4，所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5，所述HVR-L1包含氨基酸序列SEQIDNO:12，所述HVR-L2包含氨基s臾序列SEQIDNO:13。53.权利要求47的免疫偶联物，其中所述抗体包含与选自SEQIDNO:21-25的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的重链可变区和与选自SEQIDNO:26-31的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的轻链可变区。54.权利要求53的免疫偶联物，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQIDNO:24具有至少90%序列同一性的重链可变区和与氨基酸序列SEQIDNO:29具有至少90%序列同一性的轻链可变区。55.权利要求54的免疫偶联物，其中所述抗体包含含有氨基酸序列SEQIDNO:24的重链可变区和含有氨基酸序列SEQIDNO:29的轻链可变区。56.权利要求53的免疫偶联物，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQIDNO:25具有至少90%序列同一性的重链可变区和与氨基酸序列SEQIDNO:30具有至少90%序列同一性的轻链可变区。57.权利要求56的免疫偶联物，其中所述抗体包含含有氨基酸序列SEQIDNO:25的重链可变区和含有氨基酸序列SEQIDNO:30的轻链可变区。58.权利要求47的免疫偶联物，其具有体外或体内细胞杀伤活性。59.权利要求47的免疫偶联物，其中所述接头经抗体上的硫醇基团附着于抗体。60.权利要求47的免疫偶联物，其中所述接头是蛋白酶可切割的。61.权利要求60的免疫偶联物，其中所述接头包含val-cit二肽。62.权利要求47的免疫偶联物，其中所述接头包含对氨基苯曱基单元。63.权利要求47的免疫偶联物，其中所述接头包含6-马来酰亚氨基己酰基。64.权利要求47的免疫偶4关物，其中所述药物选自MMAE和MMAF。65.权利要求64的免疫偶联物，其中所述药物是MMAE。66.权利要求64的免疫偶联物，其中所述药物是MMAF。67.权利要求64的免疫偶联物，其中所述接头是蛋白酶可切割的接头。68.权利要求67的免疫偶联物，其中所述接头包含val-cit二肽。69.权利要求67的免疫偶联物，其中所述接头包含对氨基苯甲基单元。70.权利要求69的免疫偶联物，其中所述对氨基苯曱基单元是对氨基苯曱基氧羰基(PAB)。71.权利要求67的免疫偶联物，其中所述接头包含6-马来酰亚氨基己酰基。72.权利要求65的免疫偶联物，其中所述免疫偶联物具有通式其中S是硫原子，而p的范围为2到5。73.权利要求72的免疫偶联物，其中所述抗体包含HVR-L3，所述HVR-L3包含符合共有序列SEQIDNO:19的氨基酸序列。74.权利要求73的免疫偶联物，其中所述抗体包含HVR-H3和HVR-L3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:9，所述HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:17。75.权利要求74的免疫偶联物，其中所述抗体进一步包含HVR-H1、HVR-H2、HVR-L1和HVR-L2,所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:4,所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5,所述HVR-L1包含氨基酸序列SEQIDNO:12,所述HVR-L2包含氨基S臾序列SEQIDNO:13。76.权利要求73的免疫偶联物，其中所述抗体包含HVR-H3和HVR-L3，所述77.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:10,所述HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:18。78.权利要求76的免疫偶联物，其中所述抗体进一步包含HVR-H1、HVR-H2、HVR-L1和HVR-L2，所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:4，所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5，所述HVR-L1包含氨基酸序列SEQIDNO:12，所述HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13。79.权利要求72的免疫偶联物，其中所述抗体包含与选自SEQIDNO:21-25的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的重链可变区和与选自SEQIDNO:26-31的氨基S臾序列具有至少90%序列同一性的轻链可变区。权利要求78的免疫偶联物，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQIDNO:24具有至少90%序列同一性的重链可变区和与氨基酸序列SEQIDNO:29具有至少90%序列同一性的轻链可变区。80.权利要求79的免疫偶联物，其中所述抗体包含含有氨基酸序列SEQIDNO:24的重链可变区和含有氨基酸序列SEQIDNO:29的轻链可变区。81.权利要求78的免疫偶联物，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQIDNO:25具有至少90%序列同一性的重链可变区和与氨基酸序列SEQIDNO:30具有至少90%序列同一性的轻链可变区。82.权利要求81的免疫偶联物，其中所述抗体包含含有氨基酸序列SEQIDNO:25的重链可变区和含有氨基酸序列SEQIDNO:30的轻链可变区。83.权利要求66的免疫偶联物，其中所述免疫偶联物具有通式Ab-S、ZO》0-—。人N、Val-Ci卜fO/\0\0cy,、0H、/p其中S是硫原子，而p的范围为2到5。84.权利要求83的免疫偶联物，其中所述抗体包含HVR-L3，所述HVR-L3包含符合共有序列SEQIDNO:19的氨基酸序列。85.权利要求84的免疫偶联物，其中所述抗体包含HVR-H3和HVR-L3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:9，所述HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:17。86.权利要求85的免疫偶联物，其中所述抗体进一步包含HVR-H1、HVR-H2、HVR-L1和HVR-L2，所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:4，所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5，所述HVR-L1包含氨基酸序列SEQIDNO:12，所述HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13。87.权利要求84的免疫偶联物，其中所述抗体包含HVR-H3和HVR-L3,所述HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:10,所述HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:18。88.权利要求87的免疫偶联物，其中所述抗体进一步包含HVR-Hl、HVR-H2、HVR-L1和HVR-L2，所述HVR-H1包含氨基酸序列SEQIDNO:4，所述HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:5，所述HVR-L1包含氨基酸序列SEQIDNO:12,所述HVR-L2包含氨基酸序列SEQIDNO:13。89.权利要求83的免疫偶联物，其中所述抗体包含与选自SEQIDNO:21-25的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的重链可变区和与选自SEQIDNO:26-31的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的轻链可变区。90.权利要求89的免疫偶联物，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQIDNO:24具有至少90%序列同一性的重链可变区和与氨基酸序列SEQIDNO:29具有至少90%序列同一性的轻链可变区。91.权利要求卯的免疫偶联物，其中所述抗体包含含有氨基酸序列SEQIDNO:24的重链可变区和含有氨基酸序列SEQIDNO:29的轻链可变区。92.权利要求89的免疫偶联物，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQIDNO:25具有至少90%序列同一性的重链可变区和与氨基酸序列SEQIDNO:30具有至少90%序列同一性的轻链可变区。93.权利要求92的免疫偶联物，其中所述抗体包含含有氨基酸序列SEQIDNO:25的重链可变区和含有氨基酸序列SEQIDNO:30的轻链可变区。94.一种药用组合物，其包含权利要求47、75、77、80、82、86、88、91、或93任一项的免疫偶联物和药物学可接受载体。95.—种治疗细胞增殖性病症的方法，包括给个体施用有效量的权利要求94的药用组合物。96.权利要求95的方法，其中所述细胞增殖性病症选自卵巢癌、子宫癌、脑肿瘤、和维尔姆斯氏肿瘤。97.权利要求95的方法，其中所述细胞增殖性病症与TAT226在细胞表面上的表达升高有关。98.—种抑制细胞增殖的方法，包括将细胞在容许所述免疫偶联物结合TAT226的条件下暴露于权利要求47、75、77、80、82、86、88、91、或壬一项的免疫偶联物。99.权利要求98的方法，其中所述细胞是肿瘤细胞。100.权利要求99的方法，其中所述肿瘤细胞是卵巢肿瘤细胞、子宫肿瘤细胞、脑肿瘤细胞、或维尔姆斯氏肿瘤细胞。101.权利要求99的方法，其中所述细胞是异种移植物。102.权利要求98的方法，其中所述暴露发生于体外。103.权利要求98的方法，其中所述暴露发生于体内。104.权利要求47、75、77、80、82、86、88、91、或93任一项的免疫偶联物在制备用于治疗细胞增殖性病症的药物中的用途。105.权利要求104的用途，其中所述细胞增殖性病症选自卵巢癌、子宫癌、脑肿瘤、和维尔姆斯氏肿瘤。106.权利要求104的用途，其中所述细胞增殖性病症与TAT226在细胞表面上的表达升高有关。全文摘要本发明提供了抗TAT226抗体及其免疫偶联物。本发明还提供了使用抗TAT226抗体及其免疫偶联物的方法。文档编号A61P35/00GK101437852SQ200780016741公开日2009年5月20日申请日期2007年3月16日优先权日2006年3月17日发明者雁吴,坂中千惠,梁伟庆申请人:健泰科生物技术公司