有助于治疗癌症的方法、组合物和制品的制作方法

专利名称：：有助于治疗癌症的方法、组合物和制品的制作方法
技术领域：
：本发明涉及通过施用内皮素激动剂和化学治疗剂有助于治疗癌症(包括实体瘤)的方法、组合物和制品。
背景技术：
：尽管对肿瘤细胞分子生物学的理解逐渐增加并可获得更大量的潜在治疗剂，但是癌症(包括实体瘤)的成功治疗仍然是未解决的医学目标。例如，乳腺癌发病率在过去IO年间大量增加，并且是美国40-49岁妇女死亡的单一主导原因。癌症治疗中的一个问题是，大范围的潜在化学治疗剂的有效剂量由于其对正常组织非选择性的、高毒性的作用而受到限制。结果，许多患者经受化学疗法的副作用而不能获得治疗的益处。例如化学治疗剂紫杉醇(paditaxd)抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡。然而，紫杉醇的临床效用被其剂量限制性毒性(doselimitingtoxicity)妨碍，所述毒性包括超敏感性、中性粒细胞减少症和外周神经病。因此，存在开发更特异和更低毒性的癌症疗法的需要。化学治疗剂到肿瘤的定向递送可具有增强化学治疗剂益处同时最小化其全身性毒效应的优点。这类定向递送也可用于降低需要的化学治疗剂剂量，从而有效地降低这些药剂的不可接受的不良作用。达到化学治疗剂定向递送的一种可能途径是利用肿瘤脉管系统的独特特征。尺寸比数毫米更大的肿瘤需要持久的营养供应，并因此发育了其自身的血管床和血流。Folkman，CancerRes,46:467(1986)。没有来自这些发育中的血管的持久营养时，肿瘤会变得含氧量低并随后死亡。从预成的血管中募集新脉管系统被称作"血管发生"。在血管发生期间，肿瘤血管与正常的脉管系统显著不同地发育，并具有不同的特性。单层上皮细胞是首先快速形成的肿瘤血管。这些新形成的肿瘤血管不具有平滑肌层或神经分布。肿瘤还掺有具有所有自动调节功能的成熟的血管。Mattsson"a/.，TumorBloodCirculation,CRCPress,BocaRaton,pg.129(1979);Reinhold，TumorBloodCirculation,CRCPress,BocaRaton，pg.115(1979);Warren,TumorBloodCirculation,CRCPress,BocaRaton，pg.26(1979)。血管紧张性(血管膨胀或收缩的程度)被许多内源性因素如H+、K+、Ca2+、p02、pC02和一氧化氮(NO)以及其他调节物质如内皮素(ET-l)控帝lj。Secombe&g/"Landes，Austin,pg.40(1994);Luscher"a/"Theendothelium:modulatorofcardiovascularfunction,CRCPress,BocaRaton,pg.61(1990)。ET-1显著有助于调节血管紧张性(Yanagisawa""/.,Nature,332:411(1988))，并且研究人员已经证实实体瘤(包括乳腺癌)中ET1和ETs受体表达的提高。Alanen"a/.,Histopathology,36:161(2000);Nelson"a/.，CancerRes,56:663(1996);Karda/.,BiochemBiophysResCommun216:514(1995);Pagotto"a/.,JClinInvest,96:2017(1995);Yamashita"a/.，CancerRes，52:4046(1992);Yamashita"a/"ResCommunChemPatholPharmacol,74:363(1991)。另外，ETB受体的刺激通过肿瘤血管舒张引起对肿瘤供血的增加。本发明通过使用ETB受体激动剂利用该事实选择性地增加流向肿瘤的血流量，以增强化学治疗剂的定向递送。
发明内容本发明涉及施用内皮素激动剂和化学治疗剂以帮助治疗癌症，包括实体瘤。具体地，肿瘤具有独特的脉管系统，其包含增加量的ETb受体，所述受体结合时导致血管舒张。因为ETB受体是血管舒张剂，所以与化学治疗剂组合的ETB受体激动剂适用于治疗实体瘤，如在乳腺癌中发现的实体瘤。ETB受体激动剂可更有效地将化学治疗剂递送至肿瘤，导致增强的治疗。特别地，根据本发明的一个实施方案包含有助于治疗癌症的方法，该方法包括施用ETB激动剂和化学治疗剂。在根据本发明的多个实施方案中，ETB激动剂和化学治疗剂可基本上同时施用或先后施用(化学治疗剂在ETB激动剂之前被施用，或ETB激动剂在化学治疗剂之前被施用)。在根据本发明的某些实施方案中，当ETB激动剂和化学治疗剂基本上同时被施用时，它们可作为单一组合物被施用。根据本发明的另一个实施方案包括包含化学治疗剂、ETB激动剂和任选的赋形剂的组合物。根据本发明的另一个实施方案包括含有组合物和指导信息的制品，所述组合物包含ETB激动剂，所述指导信息指示将组合物与化学治疗剂一起施用，以治疗实体瘤。根据本发明的制品可进一步包含一种或多种化学治疗剂。当根据本发明的制品包含一种或多种化学治疗剂时，ETB激动剂和化学治疗剂可以是同一组合物的部分，也可以作为独立的组合物提供，或两种情况兼有。可以用根据本发明的方法、组合物和制品治疗的癌症可包括实体瘤，包括但不限于卵巢肿瘤、结肠肿瘤、卡波西肉瘤(Kaposi'ssarcoma)、乳腺肿瘤、黑色素瘤、前列腺肿瘤、脑脊膜瘤、肝肿瘤、乳腺分叶状瘤(breastphyllodetumor)及其组合。依照本发明的方法、组合物或制品使用的内皮素B激动剂能够选择性地提高对实体瘤的供血，从而提高化学治疗剂到实体瘤的递送。能够依照本发明使用的内皮素B激动剂可包括，但不限于以下一种或多种ET-l,ET隱2，ET-3,BQ3020,IRL1620(N-suc-[Glu9,Ala11,15]ET-l(8-21》、角蝰毒素6(sarafotoxin)56c、[Alal,3,11,15]ET-1及其组合。化学治疗剂可包括，但不限于下述一种或多种阿霉素(adriamycin)、喜树碱(camptothecin)、卡钼(carboplatin)、顺钼(cisplatin)、柔红霉素(daunorubicin)、多柔比星(doxorubicin)、a千扰素、/3干扰素、7干扰素、白介素2、伊立替康(irinotecan)、多西紫杉醇(docetaxel)、紫杉醇、拓扑替康(topotecan)、5-氟尿嘧啶及其组合。根据本发明的具体方法、组合物或制品包括作为ETV激动剂的IRL1620，和选自以下的化学治疗剂紫杉醇、多柔比星、5-氟尿嘧啶及其组合。图1显示IRL1620在肿瘤灌注(perfusion)中对紫杉醇诱导的改变的影响；图2A-2E显示ET-1对无癌大鼠和患乳腺肿瘤大鼠全身性血流动力学的影响；图3A-3B显示ET-1在无癌大鼠和患乳腺肿瘤大鼠的乳腺组织中对血流量和局部血管阻力的影响；图4A-4C显示ET-1在无癌大鼠和患乳腺肿瘤大鼠的乳腺组织中对灌注、移动血细胞浓度(CMBC)和血细胞流速的影响；图5A-5C显示BQ788在无癌和患乳腺肿瘤大鼠的乳腺组织中，对ET-l诱导的血液灌注、CMBC和血细胞流速改变的影响；图6显示通过HPLC测定的载体或IRL1620在正常大鼠和患肿瘤大鼠中对紫杉醇的血浆药代动力学的影响；图7和8显示通过液体闪烁计数测定的载体或IRL1620对[3司-紫杉醇的血浆药代动力学的影响；图9A和9B显示通过激光多普勒血流仪测量的IRL1620对乳腺肿瘤灌注的影响；图10显示IRU620施用对患有乳腺肿瘤的大鼠的肿瘤和主要器官中[3司-紫杉醇浓度的时间依赖性影响；图ll显示与治疗开始时相比，患乳腺肿瘤的大鼠体重差异百分比；图12显示IRL1620施用对患乳腺肿瘤大鼠肿瘤体积的影响；图13显示患乳腺肿瘤的大鼠中IRL1620施用对肿瘤发展、停滞和消退的影响；图14A和14B显示通过激光多普勒血流仪测量的不同剂量的IRL1620对前列腺肿瘤灌注的影响(14A)，和施用IRL1620后前列腺肿瘤灌注与基线相比的百分比改变(14B);图15显示IRL1620对患前列腺肿瘤大鼠的肿瘤和其他主要器官中["C]-多柔比星(DOX)浓度的影响；图16显示施用IRL1620和DOX后患有前列腺肿瘤的大鼠的体重(16A);肿瘤体积(16B);和肿瘤重量(16C);图17显示施用IRL1620和5-氟尿嘧啶(5-FU)后患有前列腺肿瘤的大鼠的体重(17A);肿瘤体积(17B);和肿瘤重量(17C);图18A和18B显示通过激光多普勒血流仪(18A)测量的IRL1620对黑色素瘤灌注的影响，和施用IRL1620后黑色素瘤灌注与基线相比的百分比改变(18B);图19显示IRL1620对患有黑色素瘤的大鼠的肿瘤和其他主要器官中[3司-紫杉醇浓度的影响；图20显示多种浓度的IRL1620(使用或不使用辐射)对肿瘤体积随时间的影响。为了比较的目的，也显示了盐水和辐射和无处理对肿瘤体积的影响。发明详述I.定义指导信息本文使用的术语"指导信息"将表示伴随着药物产品的材料，其提供了如何施用该产品的描述，以及允许医生、药剂师和患者关于产品的用途做出有见识的决定所需的安全性和效力数据。该指导信息一般被称作药物产品的"标签"。指导信息可以以许多形式出现，包括但不限于含有关于药物产品的信息的纸插入物，C.D.Rom或网站地址。前药本文使用的术语"前药"将表示下述化合物，其在体内例如通过水解快速转化为本发明中有用的化合物。前药的彻底讨论在HigUChi"a/.，ProdrugsasNovelDeliverySystems,Vol.14，oftheA.C.S.D.SymposiumSeries禾口Roche(ed.)，BioreversibleCarriersinDrugDesign,AmericanPharmaceuticalAssociationandPergamonPress,1987中提供。治疗，或有助于治疗本文中使用术语"治疗"和"有助于治疗"将表示预防癌症、延迟癌症的发展或生长、縮小或消除癌症，所述癌症包括实体瘤。因此，这些术语适当时包括医学治疗和/或预防性治疗二者。基本同时本文使用术语"基本同时"将表示同时施用两种药物制剂(即ETB激动剂和化学治疗剂)。根据该定义，"同时"将被理解为包括精确地同时以及在约IO分钟范围内。大部分化学治疗剂具有细胞毒性，该细胞毒性旨在破坏癌细胞，但是在该过程中造成对身体正常生理学系统的可观损伤。因此，将化学治疗剂选择性地递送至实体瘤从而帮助避免癌症治疗的这些负作用会是非常有利的。肿瘤血管的血管结构与正常血管的结构不同。Carmeliet&Jain，Nature,407:249(2000)。因此，肿瘤的血管反应性与正常组织不同。例如，一氧化氮供体、烟酰胺和缓激肽激动剂的施用调控流向肿瘤的血流量。Jordan"flZ.,IntJRadiatOncolBiolPhys,48:565(2000);Fukumura"fl/"AmJPathol，150:713(1997);Hirstaa/.,BrJRadiol,67:795(1994)。内皮素(Endothelin)是一种血管活性物质，其调控血流量并且以比正常乳腺组织更高的浓度存在于乳腺癌组织中(具体地，与正常乳腺组织中约0.12pg/mg相比，内皮素可以以约12pg/mg的量存在于乳腺癌组织中)。Kojima"a/.,SurgOncol，4(6):309(1995);Kurbel"a/.,MedHypotheses,52(4):329(1999);Patel"a/"MolCellEndocrinol,126(2):143(1997);Yamashita"a/"CancerRes,52(14):4046(1992);YamashitaWa/"ResCommunChemPatholPharmacol,74(3):363(1991)。内皮素是具有21个氨基酸的环肽的家族，其在哺乳动物中包含三种异型体(isoform):ET-l、ET-2禾HET-3。Inoue"a/.,ProcNatlAcadSciUSA86:2863(1989);Yanagisawaa/.,Nature,332:411(1988)。内皮素通过与两种不同的细胞表面受体ETa和ETB结合发挥其作用。ETB受体以相等的亲和力结合三种肽异型体。相反，ETA受体以比其他异型体更高的亲和力结合ET-1。两种受体均属于G蛋白偶联受体系统，并介导来自多种刺激的生物应答，所述刺激包括生长因子、血管活性多肽、神经递质和激素。Masaki,JCardiovascPharmacol,35:S3(2000);Gulati,Preface.AdvDrugDelivRev,40:129(2000);Gulati"a/"AmJPhysiol,273:H827(1997);Levin,NEnglJMed，333:356(1995)。本发明的焦点ETb受体既存在于内皮細胞(ECs)中又存在于血管平滑肌细胞(VSMCs)中，并且与正常乳腺组织相比在乳腺癌组织(包括人中的侵入性乳腺癌组织以及导管和小叶乳腺癌组织)中水平较高。Wulfmg"a/.，OncolRep,11:791(2004);Wulfmgaa/.，ClinCancerRes，9:4125(2003);Alanene"/.，Histopathology,36(2):161(2000)。内皮素作用于ETb受体，产生血管膨胀并增加流向乳腺肿瘤组织的血流量。作用于EC的ETb受体通过释放诸如前列环素和一氧化氮的因子导致血管舒张。deNuccia/.，ProcNatlAcadSciUSA,85:9797(1988)。因为ET-1通过刺激ETB受体导致流向肿瘤的血流量增加，所以ETB受体激动剂可被用于选择性地提高流向肿瘤的供血，从而提高定向递送和导致的化学治疗剂效力。ETB受体已在例如但不限于卵巢癌、成肌纤维细胞、卡波西肉瘤肿瘤和瘤内导管、乳腺癌和黑色素瘤中被发现。Bagnato"/.,AmJPathol，158:841(2001);Alanen"a/.，Histopathology，36(2):161(2000);Bagnato"a/.,CancerRes，59:720(1999);Kikuchi"a/"BiochemBiophysResComm,219:734(1996)。因此，与化学治疗剂组合的ETB受体激动剂的施用可被用于帮助治疗实体瘤，包括但不限于卵巢癌、结肠癌、卡波西肉瘤、卵巢癌和黑色素瘤。根据本发明有用的ETB激动剂包括，但不限于ET-l、ET-2、ET-3、BQ3020、IRL1620(N-suc-[Glu9,Ala1U5]ET-l(8-21》、角蝰毒素56c、[Ala1'3，"'15]ET-1及其组合。[Ala1'3，u'15]ET-1是ET-1的一种线性类似物，其中二硫键通过Ala对Cys残基的取代被去除。Saeki""/.,BiochemBiophysResCommun,179:286(1991)。BQ3020和IRL1620是ET-1的截短的线性合成类似物，并且是最广泛使用的选择性合成激动剂。IRL1620是线性ET-10类似物，其结构基于ET-1的羧基端，并対ETb受体具有120,000倍的选择性。Okada&Nishikibe,CardiovascDrugRev,20:53(2002);Douglas""/.，BrJPharmacol,114:1529(1995)。IRL1620是一种高度选择性和有效的EIV激动剂，有证据报道其对ETB1受体亚型的选择性优先于ETB2亚型。Brooks"a/.,JCardiovascPharmacol,26Suppl3:S322(1995)。适用于本发明的化学治疗剂包括，例如但不限于垸化剂、抗代谢物、激素及其拮抗剂、放射性同位素、抗体，以及天然产物及其组合。例如，ETB激动剂可与抗体(如多柔比星和其他蒽环类似物)、氮芥(例如但不限于环磷酰胺)、嘧啶类似物(例如但不限于5-氟尿嘧啶)、顺铂、羟基脲，及其天然和合成的衍生物等等一起被施用。作为另一个例子，在混合性肿瘤(如乳腺腺癌，其中该肿瘤包括绒促性素依赖性和非绒促性素依赖性细胞，)的情况下，ETB激动剂能够与亮丙瑞林(leuprolide)或戈舍瑞林(goserelin，LH-RH的合成肽类似物)一起(但不仅限于此)被施用。可根据本发明使用的化学治疗剂的其他非限制性例子包括阿霉素、喜树碱、卡钼、顺铂、柔红霉素、多柔比星、干扰素(仏/5和/或7)、白介素2、伊立替康、多西紫杉醇、紫杉醇、拓扑替康及其治疗有效的类似物和衍生物。在本发明的一个实施方案中，内皮素激动剂与化学治疗剂一起被用于帮助治疗实体瘤。在该方法中，内皮素激动剂(特别是ETV激动剂)增加流向肿瘤的血流量，所述肿瘤中富含ETb受体。因此，ETB激动剂为化学治疗剂提供了更具选择性的靶标，并改进该药剂的化学治疗作用。在本文中推论但不依赖于内皮素激动剂刺激ETB受体使肿瘤血管膨胀，从而增加血流量和由此导致的化学治疗剂到肿瘤的递送。由内皮素激动剂引起的增加的肿瘤血液灌注也提高了组织的氧合作用。改进的氧合作用可增强化学治疗剂的治疗功能。内皮素还可具有促有丝分裂特性。一起被施用时，内皮素的促有丝分裂功能可帮助提高化学治疗剂的功能。内皮素激动剂的促有丝分裂作用可通过改善化学治疗剂进入分裂细胞中的整合并从而提高其效力，来提高化学治疗剂的功能。化学疗法常被称为癌症治疗中手术的佐剂。辅助治疗中化学疗法的目标是当原发性肿瘤被控制时，降低复发的风险并增强无疾病生存率(disease-freesurvival)。化学疗法通常在疾病是迁移性时被用作癌症的治疗佐剂。因此ETB激动剂尤其适合在手术前或手术后与化学疗法一起用于实体瘤的治疗。乳腺肿瘤模型实施例1.IRL1620和紫杉醇对乳腺肿瘤灌注的影响进行以下的研究检査正常大鼠和患乳腺肿瘤大鼠中ET-1的全身性血流动力学和局部线路作用。一种广泛研究的乳腺肿瘤模型是化学诱导的大鼠乳房致癌作用模型。vanZwieten，Theratasanimalmodelinbreastcancerresearch.MartinusNijhoffPublishers,Boston,pg.206(1984);Dao"g/.，JNatlCancerInst,71:201(1983);Russow"/.,JNatlCancerInst,61:1439(1978);Huggins"a/.,Science,137(1962);Huggins"a/"Proc歸AcadSciUSA，45:1294(1959)。大鼠中化学诱导的乳房肿瘤发生是与人癌症最密切相似的模型。Russo"a/.,LabInvest,62:244(1990)。就组织结构而言，大鼠的乳腺可与人类妇女的乳腺相比。其由间质(stroma)和覆盖输送管(duct)和腺泡(alveoli)的上皮组成，所述间质是支撑该器官的结缔组织。这两种区室在胚胎发育和整个成年期期间都在连续的相互作用中。因此，选择该本生的(autochthonous)实验模型作为前述研究中的模型，因为其最与人癌症最紧密相似。同前。化学诱导的大鼠乳房致癌作用典型地通过施用7,12-二甲苯(a)蒽(DMBA)或N-甲基亚硝脲(MNU)达成。RogersWa/.,Chemicallyinducedmammaryglandtumorsinrats:modulationbydietaryfat.AlanR.Liss,Inc.,NewYork255(1996)。由DMBA或MNU诱导的肿瘤具有不同的形态学特征。具体地，由MNU诱导的肿瘤更多位于乳腺并且更不可能转移。Macejovaa/.,EndocrRegul，35:53(2001)。因此，通常选择MNU用于大鼠中特异的乳腺肿瘤诱导。这些乳腺肿瘤可以是良性的纤维腺瘤和乳头状瘤，或它们可以是恶性的。vanZwieten，MartinusNijhoffPublishers,Boston,pg.206(1984)。大鼠具有六对乳腺，一对在颈区，两对在胸部，一对在腹部，两对在腹股沟区。同前AstwoodWa/.,AmJAnat,61(1937)。用MNU处理的未交配雌性大鼠在胸部产生比腹部更多的肿瘤。RussoWa/.,LabInvest,57:112(1987)。使用重量为180-200克的雌性SpragueDawley大鼠(HarlanCo.,Madison，Wis.)。所有的动物在温度(23士1。C)、湿度(50±10%)和人工光(0600-1800hr)受控的房间内居住，每笼三只。对动物无限制地提供食物和水。在动物对环境适应至少4天后进行实验。N-甲基亚硝脲(MNU)购自AshStevensInc.(Detroit,Mich)。IRL1620和内皮素-l(ET-l)得自AmericanPeptideCompanyInc.(Sunnyvale,Calif)。ET匿l溶于0.1%白蛋白中。将画U(50mg/kg)或盐水(1ml/kg)腹膜内(i.p.)注射给雌性SpragueDawley大鼠。肿瘤直径达到约2-4cm时进行血流实验。在血流实验中，用乌拉坦(urethane，1.5g/kg，i.p.)(SigmaChemicals,St.Louis,Mo.)麻醉大鼠，并对左股静脉插管(PE50管，ClayAdams,Parsip纖y,N.J.)用于药物施用。将动物分为以下几组第I组正常大鼠(N-4)中盐水+紫杉醇(紫杉醇；3mg/kg;施用盐水后15分钟)；第II组正常大鼠(N-4)中IRL1620(3nmol/kg)+紫杉醇(3mg/kg;施用IRL1620后15分钟)；第III组患肿瘤大鼠(N-4)中盐水+紫杉醇(3mg/kg;施用盐水后15分钟)；禾口第IV组患肿瘤大鼠(N-4)中IRL1620(3nmol/kg)+紫杉醇(3mg/kg;施用IRL1620后15分钟)。使用激光多普勒血流仪测量流向大鼠乳腺的血液灌注。见Songe/"/.,IntJRadiatOncolBiolPhys,18:903(1990);Song"a/"IntJRadiatOncolBiolPhys，17:1041(1989)。在该步骤中，将动物乳头周围剃毛，并将乳腺周围的皮肤切开。将标准模型光纤探针固定在乳房动脉中并与PerifluxPF2b4000激光多普勒血流仪(PerimedKB,Stockholm,Sweden)相连。时间常数设为1.5秒，带宽设定为4KHz。使用方差分析(ANOVA)分析数据，之后进行邓肯检验(Duncan'stest)。p<0.05的水平被认为是显著的。在施用盐水或IRL1620和紫杉醇后流向正常大鼠乳腺组织的血流中未观察到改变。在IRL1620注射后(36.3%,pO.05)与IRL1620后施用紫杉醇后(51.9%,pO.0.5)之间观察到显著差异(见图1)。该研究因此证明IRL1620能够提供癌症治疗(包括施用化学治疗剂)的重要佐剂。实施例2.ET-1灌注对正常大鼠和患肿瘤大鼠的全身性血流动力学和流向乳房组织的血流的影响在研究前三个月通过腹膜内注射进行MNU和盐水处理。处理后四周开始对大鼠有规律地触诊。一旦肿瘤直径达到约4-8mm，开始实验。用乌拉坦(1.5g/kg，腹膜内)(SigmaChemicals,St.Louis，Mo.)将大鼠麻醉。将所有的手术区域剃毛并用醇拭子清洁。对左股静脉插管(PE50管,ClayAdams，Parsipanny,N丄)用于药物施用。对左股动脉插管(PE50管)并用于在微球研究中使用抽吸泵(Model22,HarvardApparatus,SouthNatick，Mass.)抽取参考血样。对右股动脉插管(PE50管)并与GouldP23ID压强传感器连接，用于通过7PI前置放大器在GrassP7D多道生理记录仪(GrassInstrumentCo.,Quincy，Mass.，USA)上记录血压。通过由血压信号触发的7P4BGrass速度记录仪(GmssInstrumentCo.,Quincy,Mass.)记录心率(HR)。暴露右颈动脉并将PE50管通过颈总动脉引入左心室中。通过使用StathamP23DC压强传感器(GrassInstrumentCo.,Quincy，Mass.)在Grass多道生理记录仪上记录压强来证实左心室中插管的存在。当插管达到左心室时，舒张压降至零。为了维持血p02、pC02和pH恒定并避免呼吸对血压和HR的影响，通过插入与啮齿动物呼吸机(Model683，HarvardApparatusInc.,SouthNatick,Mass.)相连的气管内插管使动物保持恒定速率的人工呼吸。最初将大鼠分为两组，各接受以下的一种处理第I组在用盐水处理的大鼠(正常大鼠)(N-6)中ET-1(50ng/kg/min)灌注30分钟；和第II组在用MNU处理的大鼠(50mg/kg，腹膜内；肿瘤大鼠)(N二6)14中ET-1(50ng/kg/min)灌注30分钟。在基线处、开始ET-1(50ng/kg/min)灌注后30、60和120分钟时测定全身性血流动力学和局部循环参数。因为ET-1灌注进行了30分钟，所以30分钟的数据显示ET-1的作用，而60分钟和120分钟的数据指出ET-1作用的持续时间。使用文献描述的步骤测定全身性血流动力学和局部血循环。见Gulati"JLabClinMed，126:559(1995);Gulatida/.，LifeSci.,55:827(1994);Sharmaaa/.,ArtifCellsBloodSubstitImmobilBiotechnol，22:593(1994)。在各测量中，将0.2ml盐水中用46Sc(钪)、113Sn(锡)、141Ce(铈)或95Nb(铌)(NewEnglandNuclearCorporation,Boston,Mass.,USA)标记的约100，000个微球(直径15ilpm)的充分混合的悬浮液注射进左心室，并用0.3ml盐水在15秒的周期中冲洗。为了计算血流量，以0.5ml/min的速率通过右股动脉抽取动脉血。从微球注射前5-10秒开始抽血90秒。使用激光多普勒血流仪测量流向大鼠乳腺的血液灌注。见Songe/"/.,IntJRadiatOncolBiolPhys,18:903(1990);Song"a/.,IntJRadiatOncolBiolPhys,17:1041(1989)。将动物乳头周围剃毛。将乳腺周围的皮肤切开约6cm宽和约4cm长的皮瓣(lambeau)。将标准模型光纤探针置于皮瓣表面，并通过双面胶带固定在组织上。该皮瓣被置于金属支架上并粘住以防移动，然后与PerifluxPF2b4000激光多普勒血流仪(PerimedKB,Stockholm,Sweden)相连。时间常数设为1.5秒，带宽设定为4KHz。使用方差分析来分析数据，之后进行邓肯检验(Duncan'stest)。p<0.05的水平被认为是显著的。在实验结束时用超剂量的戊巴比妥钠处死动物。将所有的组织和器官切开、称重并置于管中。在PackardMinaxiAuto-Gamma5000型7计数器(PackardInstrumentsCo.,DownersGrove,III.)中计数标准样、血样和组织样品中的放射性，用预置窗分辨同位素能量。计算以下的参数(l)心输出量(CO)((注射的放射性X动脉血的抽取速率)/样品动脉血中的放射性)，(2)搏出量(SV)(CO/HR)，(3)总外周阻力(TPR)(平均动脉压(MAP)/CO)，(4)局部血流量((组织中的放射性X动脉血的抽取速率)/样品动脉血中的放射性)，和(5)局部血管阻力(MAP/局部血流量)。使用文献中描述的计算机程序计算数据。SaxenaWa/.，ComputProgramsBiomed，12:63(1980)。正常(盐水处理的)大鼠中基线全身性血流动力学参数为MAP:111.1±4.8mmHg;CO:268.6±17.6ml/min;SV:0.87±0.06ml;TPR:419.6±.24.37mmHg.min/ml;和HR:312.5士20.2搏动/min。在正常大鼠中，在ET-1灌输后30分钟(14.5%;pO.05)时观察到MAP的显著提高，120分钟(17.8%;pO.05)时观察到MAP的降低。120分钟时TPR提高(49.2%;p<0.05)。在ET-1灌输后60分钟和120分钟CO下降(分别为22.9%和42.5%;p<0.05)。灌输后60分钟和120分钟SV下降(分别为20.9%和36%;p<0.05)。未观察到HR的显著改变(图2A-2E)。患肿瘤(经MNU处理的)大鼠中的基线全身性血流动力学参数与正常大鼠中相似。在患肿瘤大鼠中ET-1灌输后30分钟(19.1%;pO.05)和60分钟(15.3%;pO.05)时观察到MAP的显著提高。施用ET-1后30分钟(73.9%;p<0.05)、60分钟(39.7%;pO.05)和120分钟(71.4%;p〈0.05)TPR提高。30、60和120分钟CO降低(分别为29.4%、16.7%和36.1%;p<0.05)。30、60和120分钟时SV显著降低(分别为31.1°/。、17.9%和32.1%;p<0.05)。未观察到HR改变(图2A-2E)。在施用ET-1后，对正常盐水处理的大鼠而言未观察到显著的流向乳腺组织血流量的改变或血管阻力的改变。在患肿瘤的(MNU处理的)大鼠乳腺组织与正常(经盐水处理)的大鼠之间观察到血流量和局部血管阻力的显著差异。在施用ET-1后60分钟，观察到与正常大鼠相比流向患肿瘤大鼠乳腺组织的血流量的显著提高(153%;p<0.05)。在施用ET-1后基线时(102%;pO.05)和60分钟时(147%;p<0,05)，患肿瘤的大鼠中血管阻力与正常大鼠相比显著不同(图3A-3B)。图4A-4C显示患肿瘤大鼠和正常大鼠的乳腺组织中灌注、移动血细胞浓度(CMBC)和红细胞流速(RBC)的改变。ET-1施用后正常大鼠的乳腺组织中血液灌注未显著改变。ET-1施用后30分钟时与正常大鼠相比，患肿瘤大鼠的乳腺组织中灌注显著提高(176。/。;p0.05)。在患肿瘤大鼠中，灌注的该提高在ET-1施用后60和120分钟时恢复至基线。与正常大鼠相比，患肿瘤大鼠中CMBC在ET-1施用后60分钟时显著提高(54。/。;p0.05)。施用ET-1后120分钟，CMBC恢复至基线。与正常大鼠相比，ET-1施用后30分钟时RBC流速显著提高(252%;p<0.05)。ET-1施用后两小时(120分钟)时，患肿瘤大鼠中的RBC流速恢复至基线(图4A-4C)。另一个研究评价ETB受体对正常大鼠和患乳腺肿瘤的大鼠全身性血流动力学和流向乳腺组织的血流量的由ET-1诱导的改变的作用。BQ788(即1^-顺式-2,6-二甲基哌啶基羰基丄-7-甲基-亮氨酰-0-1-甲氧基羰基色氨酰基-D-Nle)是一种特异的ETb受体拮抗剤，其以1.2nM的1(35()值抑制与ETB受体的结合。因此，BQ788被用于测定ETs受体在乳腺肿瘤中ET-1诱导的血管舒张中的作用。该研究使用先前研究中所述的方法，不同之处是将动物分为以下几组第I组在正常的经盐水处理的大鼠(N-5)中用BQ788(AmericanPeptideCompanyInc.(Sunnyvale,Calif)以0.5pmol/kg溶于盐水中)灌输20分钟，随后用ET-l(50ng/kg/min)灌输30分钟；和第II组在患肿瘤的经MNU处理的大鼠(50mg/kg,腹膜内)(N二5)中用BQ788(0.5pmol/kg)灌输20分钟，随后用ET-1(50ng/kg/min)灌输30分钟。图5A-5C显示BQ788分别在患肿瘤的大鼠和正常大鼠中对ET-1诱导的血液灌注、CMBC和RBC流速改变的影响。在BQ788施用或ET-1灌注后正常大鼠的乳腺组织中血液灌注未显著改变。然而，在用BQ177预处理的大鼠中，ET-1灌输后30分钟(25.25.+-.5.7%;PO.05)和60分钟(25.17.+-.2.8%;PO.05)时，患肿瘤大鼠的乳腺肿瘤组织中灌注显著降低。用BQ788预处理减弱了患肿瘤大鼠中ET-1诱导的灌注提高。在BQ788预处理的大鼠中，ET-1施用后患肿瘤的大鼠和正常大鼠乳腺组织之间未观察到差异。该结果提示ET-1引发的致血管舒张(vasodilatory)应答是通过ETB受体介导的。患肿瘤大鼠中的基线CMBC比正常大鼠的乳腺组织基线CMBC显著17更高(42.4%;P<0.05)。然而，在BQ788灌输后，患肿瘤大鼠和正常大鼠的CMBC之间未观察到差异。另外，两组之间未观察到RBC流速差异(图5A画5C)。以上测试显示了ET-1对经盐水处理的和经MNU处理的患肿瘤大鼠的全身性血流动力学和流向乳腺组织的血流量的影响。已知ET-1通过促进VEGF的生产来刺激血管发生。研究显示ET-1在许多癌症组织如乳腺癌(Yamashitaa/.,ResCommunChemPatholPharmacol,74:363(1991))、乳腺分叶状瘤(Yamashita"a/.,CancerRes，52:4046(1992))、前列腺癌(Nelson"a/.,CancerRes,56:663(1996》、肝癌(Kar"a/.,BiochemBiophysResCommun216:514(1995))和一些脑脊膜瘤(Pagotto"a/.，JClinInvest,96:2017(1995))中被提高。以上测试证明乳腺肿瘤中ET-1诱导的血管应答的改变。这些测试中使用的方法是研究全身性血流动力学和局部血循环的被广泛接受的放射性微球技术。Gulati"a/.,AmJPhysiol,273:H827(1997);Gulati"a/"CritCareMed，24:137(1996);Gulati"JLabClinMed，126:559(1995);GulatiWa/.，LifeSci,55:827(1994)。实施例3.IRL1620对紫杉醇药代动力学的影响改变身体中血流量血流动力学可显著地影响治疗性成分的药代动力学，并且已知紫杉醇具有复杂的药代动力学特性。参见例如SparreboomWfl/.，CancerRes56:2112(1996a);Gianni"a/.，JNatlCancerInst87:1169(1995b);Sonnichsen&Relling，ClinPha腿cokinet27:256(1994);HuizingWa/"JClinOncol11:2127(1993);BrownWa/"JClinOncol9:1261(1991);Longnecker^a/"CancerTreatRep71:53(1987);WiemikWa/.,CancerRes47:2486(1987b)。因此理解IRL1620对紫杉醇血浆药代动力学的影响是重要的。因此进行前述研究测定选择性的ETb受体激幼剤IRL1620是否改变患乳腺肿瘤的大鼠中紫杉醇的药代动力学。该研究使用48天龄(120-140g)的未交配雌性SpragueDawley大鼠(HarlanCo.,Madison，WI)。抵达后所有的动物在具有受控的温度(23士1。C)、湿度(50±10%)和人工光(0600-1800hr)的房间内居住，每笼三只。对动物无限制地提供食物和水。仅在动物对环境适应至少4天后开始实验。IRL1620购自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)。紫杉醇(6mg/mL溶液)购自BenVenueLaboratoriesInc.(BedfordOH)。氯胺酮和赛拉嗪购自PhoenixScientific,Inc.(St.Joseph,MO)。[3司-紫杉醇(ImCi,6.4Ci/mmol,比活)购自MoravekBiochemicals(MoravekBiochemicals，CA)。乌拉坦购自SigmaAldrich(SigmaChemicals,St.Louis,MO)。N-甲基-n-亚硝基脲(MNU)以50mg/kg的剂量腹膜内施用，并对大鼠每周触诊两次。一旦肿瘤达到约75-100mm3，则进行药代动力学研究。HPLC-UV研究。通过单次腹膜内注射乌拉坦(1.5mg/kg)(SigmaChemicals,StLods，MO)将大鼠麻醉。将右股区剃毛并用手术消毒剂和醇清洁。暴露右股动脉和静脉并用无菌的PE-50管插管。将颈部剃毛并用手术消毒剂和醇清洁。在颈区周围制造适中切口，插入导管并与啮齿动物呼吸机(Model683,HarvardApparatusInc.,SouthNatick，MA)连接。所有的手术在无菌条件下进行。对伤口应用新孢霉素抗生素霜剂(Pfizer，MorrisPlains,NJ)预防感染。在药物施用前给予45分钟的恢复周期。使用正常(盐水处理的)和患肿瘤(MNU处理的)大鼠。在施用IRL1620(3nmol/kg)或载体(盐水3mL/kg)后15分钟时静脉注射紫杉醇(3mg/kg)。在IRL1620施用前收集血以提供基线值。在紫杉醇施用后基线时、5、30分钟和2、6和10小时时在肝素化的注射器中从大鼠抽取0.5mK血。离心样品，收集血浆并储存于-8(TC直至分析。使用HPLC系统针对紫杉醇分析血浆样品。简言之，将血浆融化并与50内标N-环己基苯甲酰胺(3mM，较低标准曲线，禾B30mM，较高标准曲线)和3mL乙基醚(FisherScientific,Chicago,IL)在13X100的玻璃培养管中混合。使用往复振荡器将混合物摇动5分钟，然后在4"下以3000rpm离心5分钟。将得到的上清液移至13X100硼硅玻璃培养管中，并在加热的水浴(37。C)中在氮流下蒸发。用200^L流动相A(50%去离子水，50%乙腈)重溶残液。将重溶材料的100nL(较低标准曲线和在IV施用后收集的样品)等分试样注射进4mmNovaPak20X3.9mmC18前置柱中，随后是NovaPak150X3.9mmCI8柱(WatersAssociates,Milford，MA)，使用与设定在227nm处的Waters2487吸光度检测器连接的Waters2695分离模块。线性梯度从以1mL/min的流速被泵出的100%流动相A开始。然后从10到11分钟将流动相A减少至70%，从11到16分钟将流动相A维持在70%,从而在下一次注射前去除从柱中缓慢洗脱的材料。随后，从16到17分钟将流动相A增加至100%，并将100%流动相A维持三分钟，提供20分钟的总运行时间。紫杉醇的血浆浓度从紫杉醇峰面积与N-环己基苯甲酰胺峰面积的比例计算，使用最小二乘法线性回归并通过1/x加权。通过变异系数测量的一天内和数天之间的变异性为<10%。比较了正常大鼠和患肿瘤大鼠的血桨浓度模式。液体闪烁计数研究。通过单次腹膜内注射氯胺酮(100mg/kg)和赛拉嗪(2mg/kg)的组合将大鼠麻醉。将颈部剃毛并用手术消毒剂和醇清洁。暴露右颈动脉并用无菌的PE50管插管。在颈区周围制造正中切口，并用PE50管对左颈动脉插管用于取血样。将导管皮下穿过并在颈底部露出，然后使用手术钉闭合切口。Buehler"a/.,FreeRadicBiolMed37:124(2004)。用钓鱼线将开放的管闭合。所有的手术在无菌条件下进行。对伤口应用新孢霉素抗生素霜剂(Pfizer，MorrisPlains,NJ)防止伤口感染。在药物施用之前给予45分钟的恢复周期。对患肿瘤的动物以3nmol/kg的剂量静脉施用IRL1620。将卩H]-紫杉醇(160pCi/kg)与未标记的紫杉醇混合。在载体或IRL1620施用后15分钟静脉施用紫杉醇。在载体或IRL1620施用之前收集血浆以提供基线值。在基线处、1、5、15和30分钟和1、2、4、6、8、12和24小时处在肝素化的注射器中从大鼠抽取约0.2mL血。对样品离心，血浆被分离并储存于-8(TC直至分析。使用BeckmanCoulter液体闪烁计数器(LS6500型)测量血浆样品中[3司-紫杉醇的浓度。简言之，将血浆融化并与20mL液体闪烁混合物混合。对样品计数并使用下式将计数从"dpm"单位转化为"fmol/mL":fmol/mL=dpm值X衰变因子X2.2x1(T12/1(T12X以mL计的样品体积转化为fmol/mL后，使用fH]-紫杉醇比未标记的紫杉醇的比例计算总紫杉醇的药代动力学。在WinNonlinPro4.1(PharsightCorp,Mt.View,CA)中进行，使用非区室(non-compartmental)分析和区室分析二者测定血浆紫杉醇药代动力学参数。在非区室分析中，使用梯形法则(trapezoidalrule)估计直到最后可测量浓度(Clast)的曲线下面积(AUCO-。)，并通过用Clast除以log-线性血浆浓度对时间曲线末端斜率(A)的负值外推至无穷大。还计算了以下的参数平均滞留时间(MRTiv)被计算为入的倒数，全身清除率(CL)被计算为剂量与AUC0-^的比例，表观体积分布(apparentvolumedistribution)被计算为CL和A的比例。血浆半衰期被计算为0.693(自然对数2)和MRTiv的乘积。在区室分析中，一系列非线性区室模型针对血浆浓度对时间曲线数据被拟合。具体地，比较了一区室、两区室和三区室模型。测试了基于均一(Uniform)数据和预测数据的加权。模型的最终选择基于诊断绘图(观察到的与预测到的相比和残差绘图)、AkaikeInformationCriteria(AIC)和SchwartzCriteria(SC)。具有较低AIC和SC标准的模型被认为是最终的模型。通过单通道ANOVA，随后通过针对HPLC-UV研究的Duncan's检验和通过针对液体闪烁研究的t检验分析数据。p<0.05被认为是显著的。在这些药理学应答研究中测量的主要输出是血浆中紫杉醇浓度的差异。在正常或患肿瘤大鼠中，紫杉醇的药代动力学模式不受IRL1620施用(图6和7)的影响。血浆药代动力学模式的HPLC分析与放射性紫杉醇分布的更广泛模式相似。图7指出用载体处理的和用IRL1620处理的患肿瘤大鼠中，紫杉醇放射性的药代动力学模式。药代动力学模式通过非区室的方法和区室方法分析。在非区室分析中，针对载体+紫杉醇组计算的AUC为9433.53±1465.00ng*h/mL并与IRL1620处理的肿瘤大鼠类似(p〉0.05)。消除半衰期被计算为0.14±0.08小时。作为剂量/AUC计算的清除率被估计为0.56±0.07L/h/kg。发现作为清除率/Kel计算的分布体积是10.11±4.17L/kg。总之，并在下表中可看出，IRL1620不影响紫杉醇的药代动力学模式。21<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>从血浆样品中的dpm计数计算紫杉醇的血浆浓度。三区室模型最好地描述了紫杉醇的药代动力学。图8描绘了对载体处理的和IRL1620处理的大鼠而言，观察到的与预测的药代动力学绘图对比。载体处理的大鼠中紫杉醇的AUC为9.42±3.18pg-h/mL。稳态分布体积(Vss)为10.31±4.54L/Kg。清除率被估计为0.69±0.17L/h/Kg。o;t1/2、]St1/2、0^/2分别为0.03±0.01小时、1.0±0.32小时和25.87+17.81小时。平均滞留时间为27.92±19.84小时。从下表中可以看出，在IRL1620处理组中评估的这些参数并未显著区别于载体处理组中的参数。组<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>在该研究中，三区室模型最好地描述了紫杉醇的血浆药代动力学。该模型提出紫杉醇被分布于多种器官，无论器官中的血液灌注是高、中还是低。IRL1620施用未改变紫杉醇的分布。对用载体和IRL1620处理的组而言，通过3区室模型产生的血浆药代动力学参数展示了相似的清除率、分布体积和吸收、分布和消除半衰期。然而，IRL1620提高肿瘤血液灌注和月中瘤紫杉醇浓度。Raida/.,AmericanAssociationofPharmaceuticalScientists,PharmaceuticsandDrugDeliveryConference.Philadelphia,PA(2004);Rai&Gulati，CancerChemotherPharmacol,51:21(2003)。因此，IRL1620选择性地提高肿瘤灌注而不会显著地改变紫杉醇的药代动力学模式。这些研究证明IRL1620的使用不影响紫杉醇的药代动力学。药代动力学研究通常被认为是化合物安全性研究的代替品。因此，这些结果也提出紫杉醇的安全性不因为IRL1620的施用而改变。因此，IRL1620可被用于促进紫杉醇效力并允许适当的剂量调整以使其严重毒性最小化。实施例4.IRL1620的剂量应答作用、IRL1620对主要器官和肿瘤组织中"H1-紫杉醇分布的影响和IRL1620对紫杉醇对肿瘤状态的效力的影响本实施例中描述的实验被设计为进一步评价(a)ETB受体激动剂IRL1620对正常和患肿瘤大鼠乳腺灌注的剂量应答作用，(b)IRL1620对主要器官和肿瘤组织中[3印-紫杉醇的生物分布的影响，和(c)在MNU-诱导的患肿瘤大鼠中，IRL1620对紫杉醇对肿瘤状态的效力的影响。未交配雌性SpragueDawley大鼠(HarlanCompany,Madison,WI)在40天龄时购买，并且每笼两只在23±1°C并维持在12小时光/12小时暗时间表下的温度受控室内居住。它们无限制接受水和标准啮齿动物膳食。IRL1620得自SigmaChemicalCo.(St.Louis，MO)。[3印画紫杉醇购自MoravekBiochemicals(Brea,CA)。紫杉醇(6mg/ml溶液)购自BenVenueLaboratoriesInc.(Bedford,OH)。氯胺酮和赛拉嗪购自PhoenixScientific,Inc.(St.Joseph,MO)。组织增溶剂(TS-2)购自RPICorp.(Chicago,IL)。在48天龄后，每只动物接受50mg/kg剂量的N-甲基亚硝基脲(MNU,AshStevens,Detroit,MI)的单次腹膜内注射。将MNU溶于3%乙酸中并在0.9。/。NaCl中稀释(终浓度12.5mg/ml)，制备后30分钟内施用。该处理在致癌剂处理后约100天在大鼠中诱导接近100%的乳腺癌发病率。Mehta,EurJCancer,36:1275(2000)。通过手工乳腺触诊监测肿瘤外观和定位，并用数字测径器测量肿瘤表面。选择具有500-800mm3体积肿瘤的大鼠用于研究。灌注研究。使用前述PerifluxPF2b4000激光多普勒血流仪(Perimed,Stockholm,Sweden)测量流向大鼠乳腺组织和肿瘤的灌注。简言之，使用氯胺酮(IOOmg/kg)和赛拉嗪(2mg/kg)作为组合的单次腹膜内注射将大鼠麻醉。将乳头周围剃毛，并将动物置于加热毯(37。C)上以最小化温度变化。23将乳腺周围的皮肤切开约6mm宽和约4mm长的皮瓣。在暴露组织的表面上应用标准模型光纤探针(MP3流量探针，MoorsInstruments,Devon,England)。然后将其与PerifluxPF2b4000激光多普勒血流仪连接。时间常数设定为1.5秒，带宽设定为4kHz。该方法测量激光(通量)中的多普勒频移，其由红细胞数和流速决定，并与给定体积的组织中的总血流量成比例。使用Polyview软件获得通量值。在施用盐水或IRL1620之前获得15分钟的稳定记录基线。对动物施用1、3或9nmol/kg的IRL1620并记录灌注3小时。每个剂量被施用给至少4个动物。发现IRL1620施用对肿瘤灌注的影响是短暂的和剂量相关的(图9A)。在施用3nmol/kgIRL1620后30分钟观察到从肿瘤灌注基线起244.0%的最大提高0><0.001)。发现与基线以及盐水处理的大鼠相比，灌注的提高在15、30和60分钟是显著的。(图9A和9B)。1和9nmol/kgIRL1620的施用仅产生与基线灌注和盐水处理的大鼠相比微小的乳腺肿瘤灌注提高。分别在1和9nmol/kgIRL1620后120分钟和30分钟记录到灌注的最大提高(60.9和63.3%)。然而，发现在9nmol/kglRL1620处理的动物中，与盐水处理的大鼠相比灌注的提高在15、30和60分钟是显著的(图9A)。对患肿瘤的大鼠施用盐水不产生与基线相比血灌注的任何显著改变(图9A)。在正常雌性大鼠中，盐水或l、3或9nmol/kgIRL1620的施用不产生任何乳腺灌注的显著改变(数据未显示)。这些结果显示3nmol/kg或9nmol/kgIRL1620的施用产生与基线和载体处理的大鼠相比肿瘤灌注的提高。尽管1、3和9nmol/kgIRL1620均稍微提高肿瘤灌注，但是3nmol/kg剂量产生最大的影响。生物分布研究。在如前所述的肿瘤形成后，使用氯胺酮(100mg/kg)和赛拉嗪(2mg/kg)作为组合的腹膜内注射将大鼠麻醉。记录大鼠的体重、肿瘤定位和肿瘤体积。然后将动物随机分组，以通过尾静脉(tailvein)接受终体积0.2mL的盐水或IRL1620(3nmol/kg)。然后在IRL1620后15、120和240分钟时来自每组的大鼠接受1.0ml终体积的[3印紫杉醇(40pCi/大鼠，在50:50的CremophorEL和乙醇中)。每个时间点研究六只大鼠，总计使用36只大鼠。施用[3司紫杉醇后3小时将动物处死。测定肿瘤组织、肾、肝、肺和脾中[3司紫杉醇的浓度。具体地，将肿瘤和器官切成小片。将约500mg组织或肿瘤置于独立的含组织增溶剂(6ml)的管中，并在50。C水浴中孵育。在组织或肿瘤溶解后将管从水浴中取出，并添加1.2ml的10%冰醋酸。将管的内容物等分为3管，向每管中添加15ml液体闪烁混合物(SafetySolve,RPICorp,Chicago,IL)并保持过夜以便平衡。使用液体闪烁计数器(BeckmanCoulter,LS6500)计数管中的放射性。与盐水处理的大鼠相比，经IRL1620(3nmol/kg)处理的大鼠的肿瘤中[3司紫杉醇的浓度显著提高。在IRL1620施用后15分钟，施用紫杉醇的动物组中观察到最大作用。IRL1620施用后15、120和240分钟时分别施用紫杉醇时，观察到肿瘤紫杉醇浓度277.1%、151.9%和34.7%的提高(图10)。与对照动物相比，IRL1620施用不显著改变紫杉醇在肝、肺、肾和脾中的积累(图10)。效力研究。将患肿瘤的(MNU-介导的)动物随机分为七组(12只大鼠/组)第I组一盐水；第II组一IRL1620(3nmol/kg);第III组一CremophorEL:乙醇；第IV组一载体(盐水)十紫杉醇(lmg/kg);第V组一载体(盐水)十紫杉醇(5mg/kg);第VI组一IRL1620(3nmol/kg)+紫杉醇(1mg/kg);禾口第VII组一IRL1620(3nmol/kg)+紫杉醇(5mg/kg)。给药时间表是每三天一次，共计5齐lj。每隔两天监测体重、肿瘤大小和位置，在最后一次给药后总计监测30天。使用以下的标准评分发展与治疗开始时相比，以面积计肿瘤生长了比40%更多；停滞在治疗的整个过程中，肿瘤与其最初面积相比波动不超过40%;部分消退与其最初面积相比肿瘤消退了多于40%;完全消失肿瘤不再是可触及的或可测量的；肿瘤多样性治疗期间新肿瘤的出现；和30天的观察时间。最后(第5次)给药后30天处死动物。使用方差分析和随后的Dmican，s测试分析数据。PO.05的水平被认为是显著的。25体重。图11中给出了从基线(处理前)到最后给药后30天，动物体重的百分比差异。在盐水处理的对照大鼠中，实验结束时与基线体重相比的体重增加百分比为7.2±1.7%。在用载体+紫杉醇(lmg/kg)、载体+紫杉醇(5mg/kg)、IRL1620+紫杉醇1mg/kg禾卩IRL1620+紫杉醇5mg/kg处理的动物组中，分别存在5.1土3.6、9.4±2.4、14.3±3.1和13.1±1.8%的体重增加(图11)。与基线相比，发现施用CremophorEL:乙醇和IRL1620的动物体重的增加百分比<10%(数据未显示)。肿瘤体积。在处理开始时多个组中的肿瘤体积是相似的，并且彼此无显著差异(图12)。对照大鼠的肿瘤体积以快速和可变的速率增加。肿瘤生长的巨大变异性可归因于本生型生长的肿瘤的随机生长模式。在30天观察周期结束时，对照肿瘤具有2693.4±790.9mm3的肿瘤体积。IRL1620处理的大鼠具有类似的发育模式，最终肿瘤体积为2560.5±844.4mm3。CremophorEL:乙醇处理也导致类似的生长模式，最终肿瘤体积为2338±1329mm3。因此，IRL1620和cremophorEl:乙醇自身对MNU-诱导的乳腺肿瘤生长不具有显著的影响(数据未显示)。载体+紫杉醇(1mg/kg)处理的大鼠显示显著降低的肿瘤大小(1960.8±611.9mm3)生长。与对照大鼠相比时，载体+紫杉醇(5mg/kg)组显示更大的肿瘤体积(1682.7±497.3mm3)减小。IRL1620+紫杉醇(1mg/kg)处理的大鼠也显示肿瘤大小(1707.2±621.1mm"的减小。然而，在用IRL1620+紫杉醇(5mg/kg)处理的动物组中观察到最低的平均肿瘤大小(730.1士219.4mm3)。与施用盐水+紫杉醇(5mg/kg)的大鼠相比，每隔两天用IRL1620然后用5mg/kg紫杉醇共计5次给药显著(pO.05)减小了肿瘤体积(图12)。当与用IRL1620或cremophorEL:乙醇任一处理的大鼠相比，还发现在IRL1620+紫杉醇(5mg/kg)组中肿瘤体积也更小(数据未显示)。肿瘤多样性。在30天的观察周期结束时，所有处理组中的动物产生了额外的肿瘤。用盐水、crem叩horEL:乙醇和IRL1620处理的动物中，额外肿瘤出现分别存在58.4%、57.1%和60.8%的增加。在施用载体+紫杉醇(分别为1和5mg/kg)的动物中，发现新肿瘤发生率为78.3%和41%。然而，在IRL1620+紫杉醇(分别为1和5mg/kg)中，发现额外肿瘤的百分比为69.2%和44.8%(数据未显示)。肿瘤发展。如前文所述计算发展的、保持停滞的、消退的或消失的肿瘤百分比。在盐水处理的组中73.5%的肿瘤发展了超过最初肿瘤大小的40%。IRL1620(82.7%)和cremophorEL:乙醇(80.4。/。)处理的组具有超过最初肿瘤大小40%的相似的肿瘤发展百分比。在载体+紫杉醇(5mg/kg)组(71.4%)、载体+紫杉醇(1mg/kg)组(61.P/。)和IRL1620+紫杉醇(1mg/kg)组(69%)中，更低百分比的肿瘤发展。但是，在IRL1620+紫杉醇(5mg/kg)组中看到最低的百分比(40%)(图13)。肿瘤停滞。盐水处理的组中16.9%的肿瘤维持停滞，在30天的终点时未生长超出40%的范围。其他对照组显示轻微更低百分比的肿瘤维持停滞IRL1620(13.7%)、cremophorEL:乙醇(15.2。/0)。载体+紫杉醇(1mg/kg)(22.2%)和载体+紫杉醇(5mg/kg)(19.5%)处理的大鼠显示更高百分比的肿瘤维持停滞。IRL1620+紫杉醇(1mg/kg)(23.8%)处理的大鼠和IRL1620+紫杉醇(5mg/kg)处理的大鼠显示最大百分比的肿瘤维持停滞(26.6y。)(图13)。肿瘤消退。与对照动物相比，5mg/kg紫杉醇处理前施用IRU620显著地降低肿瘤的发展。盐水处理的大鼠显示与最初肿瘤体积相比9.2°/。的肿瘤消退。CremophorEL:乙醇(4.3%)、IRL1620(3.4%)和载体+紫杉醇(1mg/kg)(9.5%)处理的大鼠在肿瘤大小消退百分比中与对照组无显著不同。在第5次给药结束时，与对照大鼠相比，IRL1620+紫杉醇(5mg/kg)处理的大鼠和载体+紫杉醇(5mg/kg)处理的大鼠中肿瘤分别消退76.1±10.5和45.9土11.5%。在用IRL1620+紫杉醇(5mg/kg)和载体+紫杉醇(5mg/kg)处理的动物中，分别存在80.2±6.9%(p<0.05)和33.8士19.4%的消退(图13)。IRL1620+紫杉醇(1mg/kg)和载体+紫杉醇(1mg/kg)组中的肿瘤消退率分别为47.1±15.4和37.7±16.2%。IRL1620后15分钟施用紫杉醇(5mg/kg)产生与盐水后15分钟施用紫杉醇(5mg/kg)相比显著更大的肿瘤消退。在任何时间点，cremophorEl:乙醇和IRL1620处理的组在其肿瘤消退上与对照大鼠相比无显著差异(数据未显示)。肿瘤减轻。仅在两组中观察到完全消失(其中肿瘤完全消失)-页IRL1620+紫杉醇(1mg/kg)(2.3%)和IRL1620+紫杉醇(5mg/kg)(15%)处理的大鼠(图13)。这些效力研究的结果指出，与施用紫杉醇的经盐水处理的大鼠相比，IRL1620的施用显著提高紫杉醇诱导的肿瘤体积减小。在5mg/kg剂量的紫杉醇中观察到的增强的治疗益处维持到最后一次给药后30天。这表明肿瘤体积没有复发，且IRL1620在增强紫杉醇效力中的作用一直维持稳定到研究结束时。然而，盐水处理之后用紫杉醇(l和5mg/kg)不产生肿瘤生长的这类显著改变。另外，在用IRL1620和随后用紫杉醇(5mg/kg)处理的大鼠组中，肿瘤多样性被降低。因此，在紫杉醇(5mg/kg)之前施用IRL1620对紫杉醇效力具有显著的影响。这通过肿瘤负荷、肿瘤消退百分比、未受影响的体重和多样性的降低阐明。另外，在用IRL1620和随后用紫杉醇(l和5mg/kg)处理的动物组中，与任何其他组相比，分别存在最初肿瘤2.3%和15%的完全消失。来自乳腺肿瘤模型的这些实施例中描述的实验清楚地显示ETB受体激动剂IRL1620显著地提高肿瘤血流量。IRL1620的施用产生肿瘤血流量的提高，而对照健康组织中的灌注未被改变。肿瘤灌注的提高持续3小时。在提高的灌注窗口期间施用[3司紫杉醇显著地仅增加肿瘤组织但不增加其他器官中的[3司紫杉醇浓度。另外，该实施例中所述的实验结果提供了施用IRL1620可刺激紫杉醇的抗肿瘤效力的证据。与对照大鼠相比，每隔两天用紫杉醇(5mg/kg)处理总计5次给药的大鼠中存在60.0%的肿瘤体积减小。然而，当在紫杉醇最后给药后一个月记录时，与对照大鼠相比，在IRL1620施用后15分钟施用紫杉醇将肿瘤体积减小268.9%。与单独用紫杉醇处理的大鼠相比，施用了IRL1620的大鼠中存在130.4%的肿瘤体积减小。存在下述可能性提高的肿瘤灌注可能提高养分的可利用度，这可能有助于肿瘤生长。这些结果显示与盐水处理的大鼠相比，用IRL1620处理的大鼠的肿瘤体积和肿瘤多样性不存在显著的提高，表明单独的IRL1620不对肿瘤体积和多样性产生任何影响。前列腺肿瘤模型28实施例5.IRL1620对前列腺肿瘤灌注、生物分布和多柔比星与5-氟尿嘧啶效力的影响在证实了IRL1620能够增强紫杉醇在乳腺肿瘤模型中的效力后，还检查了其在前列腺肿瘤模型中的作用。特定地，检查了IRL1620是否能够增强多柔比星(DOX)和5-氟尿嘧啶(5-FU)在前列腺癌肿瘤模型中的抗癌作用。选择体重为100-120克的五周龄Copenhagen患前列腺肿瘤大鼠(Harlan,Indianapolis,IN)用于所述前列腺肿瘤模型研究中。动物设施被置于受控的温度(23±1。C)、湿度(50±10%)和12小时光/暗人工光照时间表(L0600-1800h)中。使大鼠每笼三只居住并无限制地给予食物和水。在兽医检査和开始实验之前允许大鼠对环境适应至少一周。所有的操作和动物护理根据AnimalCareCommitteeoftheUniversityofIllinoisatChicago建立的f旨南进行。动物设施根据FederalRegulations保养并由AmericanAssociationforAccreditationofLaboratoryAnimalCare认可。IRL1620购自AmericanPeptide(Sunnyvale,CA)。["C]多柔比星盐酸化物(["C]阿霉素)购自GEHealthcare(Buckinghamshire,UK)。氯胺酮和赛拉嗪购自PhoenixScientific,Inc.(St.Joseph,MO)。组织增溶剂(TS-2)得自RPICorp.(Chicago,IL)。使用得自ATCC(Manassas，VA)的JHU-4(MAT-LyLu)细胞在雄性Copenhagen大鼠中诱导前列腺肿瘤。见Gaddipati"a/.,JExpTherOncol,4(3):203-12(2004)，其通过参考并入本文。细胞在补充有胎牛血清(10%)的RPMI1640培养基中，于含5%<:02的37°<:下潮湿培养箱中培养。从颈的背侧剃除毛发，并通过皮下(s.c.)注射用100)Lll磷酸盐缓冲盐水中的10000JHU-4(MAT-LyLu)细胞接种动物。通过手动触诊监测肿瘤的出现和位置，并用数字测径器测量肿瘤直径。当肿瘤大小达到约200mm3时开始实验步骤。灌注研究。使用氯胺酮(100mg/kg)和赛拉嗪(2mg/kg)作为组合的腹膜内注射将大鼠麻醉。将肿瘤区域周围剃毛，并将动物置于加热毯(37。C)上以最小化温度变化。将肿瘤组织周围的皮肤切开约3mm宽和约3mm29长，以暴露肿瘤。在暴露的肿瘤表面上应用与PerifluxPF2b4000激光多普勒血流仪连接的标准模型光纤探针(MP3流量探针，MoorsInstruments,Devon,England)。时间常数设定为1.5秒，带宽设定为4kHz。该方法测量激光(通量)中的多普勒频移，其由红细胞数和流速决定，并与给定体积的组织中的总血流量成比例。使用Polyview软件获得通量值。在施用盐水或IRL1620之前获得15分钟的稳定记录基线。通过尾静脉对动物施用总体积0.2ml的IRL1620(1、3或6nmol/kg)并记录灌注3小时。如从图14A和14B中可以看出，盐水或1nmol/kgIRL1620的施用在患肿瘤的大鼠中不产生任何显著的肿瘤血灌注改变。3nmol/kg或6nmol/kg的施用分别引起与基线相比102.8%和79.12%的肿瘤血灌注最大提高。与基线和盐水处理的大鼠相比时，灌注的该提高在15、30和60分钟是显著的(p〈0.005)。因此，适当剂量的IRL1620短暂地提高前列腺癌动物模型中肿瘤血灌注。生物分布研究。将患肿瘤的大鼠随机分组(N-6/组)以通过尾静脉接受终体积为0.2ml的盐水或IRL1620(1、3或6nmol/kg)。然后在盐水或IRL1620施用后15分钟，来自每组的大鼠通过静脉注射接受终体积1.0ml的["C]多柔比星(lmCi/rat)。检查肿瘤、心、脑、肾、肝、肺、骨髓、前列腺、骨骼肌和脾中["C]多柔比星的浓度。具体地，将肿瘤和器官切成小片。将来自两条腿的股骨分离并称重，其中使用含组织增溶剂的注射器将骨髓冲掉。将约500mg组织或肿瘤置于独立的含组织增溶剂(6ml)的管中，并在约5(TC的水浴中孵育。在组织或肿瘤溶解后将管从水浴中取出，并添加1.2ml的10%冰醋酸。然后将管的内容物等分为3管，向每管中添加15ml液体闪烁混合物(SafetySolve,RPICorp,Chicago,IL)并保持过夜以便平衡。使用液体闪烁计数器(BeckmanCoulter,LS6500)计数管中的放射性。如从图15中可以看出，1nmol/kgIRL1620的施用不对肿瘤或其他组织中["C]多柔比星的摄取产生任何显著的改变。然而在接受3nmd/kgIRL1620(115.85%提高；p<O.Ol)或6nmol/kgIRL1620(80.02%提高；p<0.05)的那些大鼠中，肿瘤中「C]多柔比星的浓度与盐水处理的大鼠相比显著提高。与对照动物相比，没有一种剂量的IRL1620对心、脑、肾、肝、肺、骨髓、前列腺、骨骼肌或脾中["c]多柔比星的积累产生显著提高。因此，IRL1620能够选择性地提高化学治疗剂到肿瘤组织的递送。效力研究IRL1620对多柔比星O)OXV效力的影响在该研究中，IRL1620(N-琥珀酰-[Glu9,Alall,15]内皮素片段8-21)得自AmericanPeptides(Sunnyvale,CA)。多柔比星盐酸化物(阿霉素，2mg/ml溶液)购自BenVenueLaboratoriesInc.(Bedford,OH)。5-氟尿嘧啶(50mg/ml)购自CadliaPharmaceuticals(Ahmedabad,India)。氯胺酮和赛拉嗪购自PhoenixScientific,Inc.(St.Joseph,MO)。如前所述在五周龄雄性Copenhagen大鼠(Harlan，Indianapolis,IN)中诱导前列腺肿瘤。肿瘤大小达到约200mm3时开始实验步骤。将患肿瘤的动物随机分为六组(8只大鼠/组)。第I组盐水；第II组IRL1620(3nmol/kg);第III组载体(盐水)+DOX(2.5mg/kg);第IV组载体(盐水)+DOX(5mg/kg);第V组IRL1620(3nmol/kg)+DOX(2.5mg/kg);和第VI组IRL1620(3nmol/kg)+DOX(5mg/kg)。在盐水中将DOX稀释至1.0ml的终体积并在盐水或IRL1620施用后15分钟通过尾静脉注射。给药时间表是每隔两天一次，总计4次给药。每隔两天监测体重和肿瘤大小，直到最后一次给药后12天。最后(第4次)给药后12天处死动物。将肿瘤分离并称重，并观察组织的大体转移。将组织和肿瘤在10%缓冲的甲醛溶液中防腐用于组织病理学分析。体重。在用盐水或IRL1620单独处理的大鼠组中存在体重的增加。实验开始时单独的盐水或IRL1620动物的体重分别是152±6.97和148.8±2.52g，在研究的第19天其分别增加至178.8±4.7和175.72±2.35g。接受盐水和DOX或IRL1620和DOX的大鼠显示体重的减轻。第13天，在用盐水+DOX(5mg/kg)和IRL1620+DOX(5mg/kg)处理的大鼠组中，体重的最大减轻分别为-8.46±3.88和-10.03±2.12。然而，在施用DOX的任何组之间，在任何时间点，未观察到与处理开始时相比显著的体重减轻(图16A)。肿瘤体积。盐水或IRL1620处理的大鼠的肿瘤体积快速增加，并且由于巨大的肿瘤负荷在第19天将这些组中的所有大鼠处死。所有其他组在第22天被处死。处死时盐水或IRL1620处理的大鼠分别具有10166±957和11033±873mm3的肿瘤体积。盐水+DOX(2.511^/]^)和盐水+DOX(5mg/kg)处理的大鼠的肿瘤体积分别为9102±1442和4204±299mm3。IRL1620+DOX(2.5mg/kg)处理的大鼠记录到了5544±845mm3的肿瘤体积。在用IRL1620+DOX(5mg/kg)处理的组中观察到最小的肿瘤体积(1965±332mm3)。与盐水+DOX(5mg/kg)处理的大鼠相比，用IRL1620十DOX(5mg/kg)处理的大鼠中肿瘤体积的减小在第10、13、16、19和22天是显著的(图16B)。肿瘤重量。盐水、IRL1620和盐水+DOX(2.5mg/kg)处理的大鼠处死后具有相似的肿瘤重量(分别为19.14±1.8、20.77±1.64和17.14±2.42g)。在第22天被处死后，用盐水+DOX(5mg/kg);IRL1620+DOX(2.5mg/kg)和IRL1620+DOX(5mg/kg)处理的大鼠的肿瘤重量分别被降低至7.19±0.56、10.44士1.42和3.31土1.64g。盐水+DOX(5mg/kg)和IRL1620+DOX(5mg/kg)处理的大鼠(p<0.005)之间存在肿瘤重量的显著差异。这些研究证明IRL1620显著提高DOX的抗癌效力(图16C)。效力研究IRL1620对5-氟尿嘧啶(5-FU〗效力的影响在随访研究中进行相同的步骤，不同之处是将患肿瘤的大鼠随机分为以下六组(6只大鼠/组)以检查IRL1620对5-FU效力的影响第I组-盐水；第II组—IRL1620(3nmol/kg);第III组-载体(盐水)+5-FU(25mg/kg);第IV组-载体(盐水)+5-FU(50mg/kg);第V组-IRL1620(3nmol/kg)+5-FU(25mg/kg);禾口第VI组—IRL1620(3nmol/kg)+5-FU(50mg/kg)。将5-FU在盐水中稀释至1.0ml的终体积并在盐水或IRL1620施用后3215分钟通过尾静脉注射。给药时间表和步骤与上述DOX研究相同。体重。实验开始时盐水或IRL1620动物的体重分别是172±4.87和176.9±6.19g，在第16天其分别增加至200.3±2.57和202.2±7.28g。第16天盐水或IRL1620动物的体重增加与实验开始时的差异百分比分别为16.17±1.64和14.19土1.66。其他组中大鼠的体重在处理开始时相似，并且对盐水+5-FU(25mg/kg)、盐水+5-FU(50mg/kg)、IRL1620+5-FU(25mg/kg)和IRL1620+5-FU(50mg/kg)而言分别为170.38士2.61、174.6±3.45、174.7士5.78和179.45±2.53g。然而，其间体重降低以下的量盐水+5画FU(25mg/kg):-5.46±3.39;盐水+5-FU(50mg/kg):-10.97±2.18;IRL1620+5-FU(25mg/kg):-8.27±2.31:禾口IRL1620+50mg/kg:-11.20±2,41(图17A)。肿瘤体积。盐水或IRL1620处理的大鼠具有快速的肿瘤体积发展，并且由于巨大的肿瘤负荷在第16天将这些组中的所有大鼠处死。施用盐水+5-FU(25mg/kg)和IRL1620+5-FU(25mg/kg)的大鼠肿瘤大小不存在显著差异。然而，与盐水+FU(50mg/kg)处理的大鼠相比，在第13、16、19和22天，用IRL1620+5-FU(50mg/kg)处理的大鼠的肿瘤体积存在一致的显著减小(图17B)。肿瘤重量。在第16天处死后，施用盐水或IRL1620的大鼠肿瘤重量不存在显著的差异(重量分别为17.92±2.01和19.50±2.37g)。与盐水+5-FU(25mg/kg)处理的动物相比，用IRL1620+5-FU(25mg/kg)处理的大鼠肿瘤重量存在38.18%的降低。另外，IRL1620+5-FU(50mg/kg)和盐水+5-FU(50mg/kg)处理的大鼠(p〈O.Ol)之间存在167.19%的肿瘤重量差异(图17C)。这些结果证实IRL1620显著地提高5-FU在减小肿瘤体积和肿瘤重量中的效力。这些研究共同证明，IRL1620在前列腺癌的动物模型中有效地增强肿瘤血灌注、提高化学治疗剂到肿瘤的递送并增强化学治疗剂的效力。黑色素瘤模型实施例6.IRL1620对肿瘤灌注和紫杉醇生物分布的影响在所述黑色素瘤模型研究中使用雄性裸鼠。所有的操作和动物护理根进行。动物设施保持在控制的温度(23±1。C)、湿度(50±10%)和人工光照(L0600-1800h)下。动物设施根据FederalRegulations保养并由AmericanIRL1620(N-琥珀酰-[Glu9，Alall,15]内皮素片段8-21)得自SigmaChemicalCo.(St.Louis,MO)。[3印紫杉醇购自购自MoravekBiochemicals(Brea,CA)。紫杉醇(6mg/ml溶液)购自BenVenueLaboratoriesInc.(Bedford,OH)。氯胺酮和赛拉嗪购自购自PhoenixScientific,Inc.(St.Joseph,MO)。组织增溶剂(TS-2)得自RPICorp.(Chicago,IL)。该研究使用细胞系接种的移植的黑色素瘤模型。用一百万人黑色素瘤细胞(UISO-MEL-2)皮下接种小鼠。选择具有约200-400mm3肿瘤体积的小鼠用于研究。灌注研究。使用氯胺酮(100mg/kg)和赛拉嗪(2mg/kg)作为组合的腹膜内注射将小鼠(N-4/组)麻醉。将动物置于加热毯(37。C)上以最小化温度变化。在肿瘤周围的皮肤上制造10mm长的切口。在暴露的肿瘤表面上应用与PerifluxPF2b4000激光多普勒血流仪连接的标准模型光纤探针(MP3流量探针，MoorsInstruments,Devon,England)。时间常数设定为1.5秒，带宽设定为4kHz。使用Polyview软件获得通量值。在通过尾静脉施用盐水或IRL1620(3nmol/kg)之前获得15分钟的稳定记录基线，并记录灌注3小时。盐水的施用不对黑色素瘤小鼠的肿瘤血灌注产生任何显著改变。在IRL1620施用后30、60、90、120和150分钟分别观察到与基线相比154.4%、189.0%、198.1%、172.8%和94.07.12%的肿瘤灌注提高。因此，与盐水处理的对照相比，IRL1620显著地提高黑色素瘤小鼠中的肿瘤血灌注。该作用是短暂的，持续约2小时(图18A和18B)。生物分布研究。使用氯胺酮(150mg/kg)和赛拉嗪(2mg/kg)作为组合的腹膜内注射将小鼠麻醉。然后将动物随机分组(N-4/组)，以通过尾静脉接受终体积0.1mL的盐水或IRL1620(3nmol/kg)。然后在盐水或IRL162034施用后15分钟时，来自每组的小鼠也静脉内接受了l.Oml终体积的、被稀释至20:80[3司紫杉醇盐水浓度的[3司紫杉醇(10mCi/小鼠，在50:50的CremophorEL和乙醇中)。施用["H]紫杉醇后3小时将动物处死。测定肿瘤、心、肾、月干、肺和脾中阳潔杉醇的浓度。将肿瘤和器官切成小片。将500mg组织或肿瘤置于独立的含组织增溶剂(6ml)的管中，并在50'C水浴中孵育。在组织或肿瘤溶解后将管从水浴中取出，并添加1.2ml的10%冰醋酸。将管的内容物等分为3管，向每管中添加15ml液体闪烁混合物(SafetySolve,RPICorp，Chicago,IL)并保持过夜以便平衡。使用液体闪烁计数器(BeckmanCoulter,LS6500)计数管中的放射性。如图19中所示，与盐水处理的小鼠相比，在IRL1620处理的小鼠中肿瘤[3司紫杉醇浓度显著提高。在[SH]紫杉醇施用前15分钟注射了盐水和IRL1620的动物中，肿瘤[3印紫杉醇浓度分别为40.77和274.28nmol/g组织。与载体处理的小鼠相比，用IRL1620处理的动物中肿瘤[311]紫杉醇存在572.99%的提高。然而，与盐水处理的动物相比，IRL1620施用不对[311]紫杉醇在心、肾、肝、肺或脾中的累积产生显著增加。因此，IRL1620能够显著地增强紫杉醇到肿瘤组织的吸收和递送，而不影响其到其他器官的递送。总之，IRL1620可被用作肿瘤选择性的血管舒张剂，并可被用于选择性地提高化学治疗剂的递送和效力。目前的研究清楚地证明通过采取该治疗策略，可在肿瘤组织中达到多倍的更高药物浓度。最后，根据本发明也已提出ETA受体拮抗剂改善肿瘤血流量(Sonveaux"fl/.，CancerRes,64:3209(2004))并可被用于增强抗癌药到肿瘤的递送。含有本发明活性成分的药物组合物适用于施用给人或其它哺乳动物。典型地，所述药物组合物是无菌的，并不含有施用时会引起有害反应的有毒的、致癌的或致突变的化合物。该药物组合物的施用可在实体瘤发生之前、之中或之后进行。本发明的方法可使用如上所述的活性成分或其生理学可接受的盐、衍生物、前药或溶剂化物完成。活性成分可作为纯化合物施用，或作为含任一种或所有成分的药学组合物施用。药学组合物包括下述组合物，其中以达到其期望目的的有效数量施用活性成分。更特别地，"治疗有效量"是指有效预防实体瘤发生、使其消退、延缓其发展或减小其尺寸的量。治疗有效量的确定在本领域技术人员的能力内，特别是考虑到本文所提供的详细公开内容。"治疗有效剂量"是指引起达到所期望效果的活性成分用量。这类活性成分的毒性和治疗效力可在细胞培养或实验动物中通过标准药学操作确定，例如确定LD5Q(群体50%致死的剂量)和ED5Q(群体50%治疗有效的剂量)。有毒效应和治疗效应之间的剂量比例为治疗指数，其被表示为LDso禾口EDso之间的比例。高治疗指数是优选的。获得的数据可用于阐明用于人的剂量范围。活性成分的剂量优选位于包括几乎没有毒性或没有毒性的ED5o的循环浓度范围内。剂量可在该范围内根据所使用的剂型和所使用的施用途径改变。精确的配方和剂量由个体医生考虑患者的条件决定。给药量和间隔可被单独调整，以提供足够维持治疗或预防效果的活性成分水平。所施用的药学组合物的用量可取决于被治疗的患者、患者的体重、痛苦的严重性、施用的方式和开处方的医生的判断。活性成分可单独施用，或与根据预期的施用途径和标准药学实践选择的药学载体混合施用。因此，可以使用一种或多种生理学可接受载体(包括赋形剂和辅料)以常规方式配制用于本发明用途的药学组合物，所述载体是便于将活性成分加工为可药学使用的制剂的。当施用治疗有效量的活性成分时，组合物可以是无热原的、肠胃外可接受的水性溶液。这类具有合适的pH、等渗性、稳定性等的肠胃外可接受溶液的配制属于本领域技术人员水平之内。用于静脉注射的优选的组合物典型地会含有等渗载体，尽管该特征不是必需的。对兽医用途而言，活性成分作为合适的可接受配方根据正常兽医实践施用。兽医师可容易地确定最适合特定动物的给药方案。可对实施方案进行多种改变和修饰，而不偏离本发明的范围和精神使用，所述改变和修饰可按照不同于本文特定描述的方式来实践。上述描述旨在用于说明而非限制。本发明的范围仅由权利要求书确定。本文已使用的术语和表达作为术语的描述而非限制使用，并且在这类术语和表达的使用中不意欲排除所示和所述特征的等同或其部分，承认多种修饰可能在本发明所要求的范围内。另外，本发明任何实施方案的任意一种或多种特征可以与本发明任意其它实施方案的任意一种或多种特征组合，而不偏离本发明的范围。除非另有说明，用于说明书和权利要求书中的表达成分用量、性质(如分子量)、反应条件等的所有数字等应理解为在所有情况下由术语"约"修饰。因此，除非指出反例，以下说明书和附加的权利要求书中公开的数量参数是近似值，其可根据本发明想要获得的所需性质而变化。至少，并不企图限制将等同原则应用于权利要求书的范围，每个数量参数至少应按照经报导的有效数字的位数并通过应用常规约数技术解释。尽管公开本发明广大范围的数量范围和参数为约数，但特定实施例中公开的数量值则是尽可能精确地报导的。然而，任何数量值固有地包含误差，这是从它们各自检测测量中发现的标准差必然地产生的。除非在本文另有说明或同上下文明显抵触，描述本发明的上下文中(特别是在以下的权利要求书上下文中)使用的术语"一个"("a"，"an")和"这个"("the")和类似的指代被解释为包括单数和复数。对本文数值范围的叙述仅意图用作为引用落入该范围的每个单独的值的速记方法(shorthandmethod)。除非本文另有说明，每个单独的值都被并入说明书，就像其被单独地并入本文一样。除非在本文另有说明或与上下文明显抵触，本文所述的所有方法可以以任何合适的顺序进行。本文所提供的任何和所有实例或举例文字(例如"例如")的使用仅意欲用来更好地阐述本发明，而非对本发明所要求保护的范围设定限制。说明书中没有提及的文字应被解释为指代实施本发明必需的任何不要求保护的元素。本文公开的备选元素或实施方案的分组不应解释为限制。各组成员可被单独提到或要求保护，或与本文发现的组的其它成员或其它元素任意组合。应当理解，由于便利和/或专利的原因，一组的一个或多个成员可以被包括进一组中或从该组删除。当任何这类包括或删除发生时，本申请文件被认为含有经改写的组，以满足对权利要求书中所用的所有马库什组的字37面支持。本文描述了根据本发明的某些实施方案，包括本发明的发明人已知的实现本发明的最佳模式。当然，本领域常规技术人员阅读上述描述后会明白这些实施方案的变更。本发明人预期熟练的技术人员能适当地采用这类变更，且本发明人意欲使得本发明以与本文特定描述不同的方式应用。因此，至少可适用的法律允许，本发明包括附加的权利要求书中所述的主体内容的所有修饰和等价物。另外，除非本文另有说明或与上下文明显抵触，在其所有可能变化中，上述元件的任何组合由本发明所包括。另外，在本申请文件中，引用了大量专利和印刷出版物作为参考文献。上述各参考文献和印刷出版物通过引用其整体并入本文。最后，应理解本文公开的本发明的实施方案仅用于阐述本发明的原则。其它可使用的修饰也在本发明的范围内。因此，通过示例而非限制的方式，可根据本文的教导利用本发明的备选形式。因此，本发明并非被限制为如精确地所示和所述的。权利要求1.有助于治疗癌症的方法，包括施用内皮素B(ETB)激动剂和化学治疗剂。2.根据权利要求1的方法，其中所述癌症是实体瘤。3.根据权利要求2的方法，其中所述实体瘤选自卵巢肿瘤、结肠肿瘤、卡波西肉瘤、乳腺肿瘤、黑色素瘤、前列腺肿瘤、脑脊膜瘤、肝肿瘤、乳腺分叶状瘤及其组合。4.根据权利要求1的方法，其中所述ETV激动剂选自ET-1、ET-2、ET-3、BQ3020、IRL1620(N舊-[Glu9,Ala11,15]ET-l(8-21))、角蝰毒素56c、[Ala"3'"'i5]ET-l及其组合。5.根据权利要求1的方法，其中所述化学治疗剂选自阿霉素、喜树碱、卡钼、顺铂、柔红霉素、多柔比星、a干扰素、/5干扰素、7千扰素、白介素2、伊立替康、多西紫杉醇、紫杉醇、拓扑替康、5-氟尿嘧啶及其组合。6.根据权利要求2的方法，其中所述ETB激动剂选择性地提高对所述实体瘤的供血。7.根据权利要求6的方法，其中对所述肿瘤的供血的所述提高提高了所述化学治疗剂至所述实体瘤的递送。8.根据权利要求1的方法，其中所述ETB激动剂和所述化学治疗剂基本上同时被施用。9.根据权利要求8的方法，其中所述ETB激动剂和所述化学治疗剂作为单一组合物被施用。10.根据权利要求1的方法，其中所述ETB激动剂和所述化学治疗剂被先后施用。11.根据权利要求10的方法，其中所述化学治疗剂在所述ETb激劫剤之前被施用，或所述ETB激动剂在所述化学治疗剂之前被施用。12.包含化学治疗剂、ETB激动剂和任选的赋形剂的组合物。13.包含组合物和指导信息的制品，所述组合物含有ETB激动剂，所述指导信息指示将所述组合物与化学治疗剂一起施用以治疗实体瘤。14.根据权利要求13的制品，其还包含所述化学治疗剂。15.根据权利要求14的制品，其中所述ETB激动剂和所述化学治疗剂是同一组合物的部分、作为独立的组合物提供或两种情况兼有。16.根据权利要求14的制品，其中所述ETB激动剂选自ET-1、ET-2、ET-3、BQ3020、IRL1620(N儒-[Glu9,Ala1U5]ET-l(8-21))、角蝰毒素56c、[Ala1'3'u'15]ET-1及其组合。17.根据权利要求14的制品，其中所述ETB激动剂是IRL1620。18.根据权利要求14的制品，其中所述化学治疗剂选自阿霉素、喜树碱、卡铂、顺铂、柔红霉素、多柔比星、a干扰素、^干扰素、7干扰素、白介素2、伊立替康、多西紫杉醇、紫杉醇、拓扑替康、5-氟尿嘧啶及其组合。19.根据权利要求14的制品，其中所述化学治疗剂是紫杉醇。20.根据权利要求14的制品，其中所述ETb激幼剤是IRL1620且所述化学治疗剂选自紫杉醇、多柔比星、5-氟尿嘧啶及其组合。全文摘要本发明公开了有助于治疗癌症(包括实体瘤)的方法、组合物和制品。该方法、组合物和制品可利用内皮素B(ET_B)激动剂增强化学治疗剂的递送和得到的效力。文档编号A61K31/337GK101522186SQ200780028808公开日2009年9月2日申请日期2007年7月20日优先权日2006年8月2日发明者古鲁·雷迪,路吉·莱纳兹,阿尼尔·古拉蒂申请人:光谱医药公司;伊利诺伊大学评议会