结合cxcr7表位的抗体的制作方法

专利名称：：结合cxcr7表位的抗体的制作方法结合CXCR7表位的抗体相关专利申请的交叉引用本申请要求于2006年10月8日提交的美国临时专利申请第60/852,745号的优先权权益，其通过引用并入本文。
背景技术：
：趋化因子组成小细胞因子的家族，所述小细胞因子尤其在炎症中产生并调节白细胞募集、活化和增殖(Baggiolini，M.#v(,A/v./mm朋o/.55:97-179(1994);Springer，T.A.,尺ev.尸/yw'o/.57:827-872(1995);以及Schall，T.J.和K.B.Bacon,Cmr(9p/"./mmimo/.6:865-873(1994))。趋化因子能选择性诱导血液的有形成份(除红细胞以外)的趋化性，所述有形成份包括白细胞如嗜中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞和淋巴细胞(包括T细胞和B细胞)。除剌激趋化性之外，其他变化可被反应细胞中的趋化因子选择性诱导，所述变化包括与白细胞活化、生长和增殖相关的细胞形状变化、胞内游离钙离子(C^+)浓度短暂升高、颗粒胞吐、整联蛋白(integrin)上调、生物活性脂质(如白三烯类)形成、细胞因子表达以及呼吸爆发。因此，趋化因子是炎症反应的早期引发剂，导致炎症介质释放、对感染或炎症部位的趋化性和外渗。趋化因子的两个亚族被命名为CXC和CC趋化因子，以四个保守半胱氨酸残基中前两个的排列为特征来区分，所述前两个残基被一个氨基酸分隔(如在CXC趋化因子SDF-1、IL-8、IP-IO、MIG、PF4、ENA-78、GCP-2、GROcuGRO卩、GROy、NAP-2、NAP-4、I-TAC中)或为相邻的残基(如在CC趋化因子MIP-la、MIP-1卩、RANTES、MCP-l、MCP-2、MCP-3、1-309中)。大多数cxc趋化因子吸引嗜中性白细胞。例如，cxc趋化因子白介素8(IL-8)、血小板因子4(PF4)和嗜中性粒细胞活化肽2(NAP-2)是嗜中性粒细胞的有效化学吸引剂和活化剂。命名为MIG(Y干扰素诱导的单核因子)和IP-10(干扰素-Y可诱导的10kDa蛋白质)的CXC趋化因子在诱导活化外周血淋巴细胞的趋化性中特别有活性。CC趋化因子一般具有较低的选择性并且可吸引多种白细胞类型，包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、T淋巴细胞、粒细胞和自然杀伤细胞。CC趋化因子如人单核细胞趋化蛋白l-3(MCP-l、MCP-2和MCP-3)、RANTES(调节活化、正常T细胞表达和分泌)和巨噬细胞炎症蛋白la和f3(MIP-la和MIP-lp)已经被鉴定为单核细胞或淋巴细胞的化学吸引剂和活化剂，但似乎不是嗜中性粒细胞的化学吸引剂。CC和CXC趋化因子通过属于七个跨膜G蛋白偶联受体的超家族的受体起作用(Murphy'P.M.'泡謂co/細52:145-176(2000))。此G蛋白偶联受体家族包括一大组包含7个跨膜区的整合膜蛋白。这些受体可与G蛋白偶联，所述G蛋白是异三聚调节蛋白，能结合GTP并例如通过胞内介质的产生介导来自偶联受体的信号转导。此外，趋化因子受体可不依赖于G蛋白偶联而起作用。例如，主要在红细胞上表达的Duffy受体是一种混杂性趋化因子结合受体，其被认为起趋化因子作用，从循环环境中去除趋化因子。一般来说，趋化因子和趋化因子受体相互作用倾向于混杂，因为一个趋化因子可结合很多个趋化因子受体，而相反单个趋化因子受体可与数个趋化因子相互作用。趋化因子受体信号转导和配体选择性的很多方面以前未被了解。例如，有许多孤儿受体的功能以前还未被确定。例如，尽管早期认为RDC1是血管活性肠肽(VIP)的受体，但是直到最近才认为它是孤儿受体，因为它的内源性配体还未被鉴定。参见，例如Cook#X,F五肪丄e败300(2):149-152(1992)。最近，更名为CXCR7的RDC1被确定与趋化因子SDF-1和I-TAC两者结合。参见，例如PCT/US04Z34807和美国专利申请第10/698,541、10/912,638和11/050,345号，它们中的每个全部内容都通过引用并入本文。发明概述本发明提供了与CXCR7表位结合的抗体。在一些实施方案中，本发明提供了与以下结合的抗体由FSDISWPC(SEQIDNO:12)组成的多肽；或由SWPCNSSDCIVV(SEQIDNO:15)组成的多肽；或如本文所述的其他CXCR7表位。在一些实施方案中，所述抗体与可检测标记连接。在一些实施方案中，所述抗体为单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗体为人源化抗体。在一些实施方案中，所述抗体与由FSDISWPC(SEQIDNO:12)组成的多肽结合。在一些实施方案中，所述抗体与由SWPCNSSDCIVV(SEQIDNO:15)组成的多肽结合。在一些实施方案中f斤述抗体与SDF-l竞争结合CXCR7。本发明还提供了包括药学上可接受的赋形剂和抗体的药物组合物，所述抗体与以下结合由FSDISWPC(SEQIDNO:12)组成的多肽；或由SWPCNSSDCIVV(SEQIDNO:15)组成的多肽；或如本文所述的其他CXCR7表位。在一些实施方案中，所述抗体为单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗体为人源化抗体。在一些实施方案中，所述抗体与由FSDISWPC(SEQIDNO:12)组成的多肽结合。在一些实施方案中，所述抗体与由SWPCNSSDCIVV(SEQIDNO:15)组成的多肽结合。本发明还提供了在生物样品中检测表达CXCR7的细胞的方法。在一些实施方案中，所述方法包括将所述生物样品与抗体接触并检测所述抗体的存在，其中所述抗体与以下结合由FSDISWPC(SEQIDNO:12)组成的多肽；或由SWPCNSSDCIVV(SEQIDNO:15)组成的多肽；或如本文所述的其他CXCR7表位。本发明还提供了治疗、预防或改善疾病的方法(fortreating,preventingoramelioratingadisease),所述方法包括对有相应需要的个体施用抗体，其中所述抗体与以下结合由FSDISWPC(SEQIDNO:12)组成的多肽；或由SWPCNSSDCIVV(SEQIDNO:15)组成的多肽；或如本文所述的其他CXCR7表位。.本发明还提供了抑制癌细胞增殖的方法。在一些实施方案中，所述方法包括对有相应需要的个体施用抗体，其中所述抗体与以下结合由FSDISWPC(SEQIDNO:12)组成的多肽；或由SWPCNSSDCIVV(SEQIDNO:15)组成的多肽；或如本文所述的其他CXCR7表位。本发明还提供了抑制血管生成或血管化的方法。在一些实施方案中，所述方法包括对有相应需要的个体施用抗体，其中所述抗体与以下结合由FSDISWPC(SEQIDNQ:12)组成的多肽；或由SWPCNSSDCIVV(SEQIDNO:15)组成的多肽；或如本文所述的其他CXCR7表位。在一些实施方案中，所述个体患有或易患关节炎。在一些实施方案中，所述个体患有癌症。本发明还提供了鉴定CXCR7的调节剂的方法。在一些实施方案中，所述方法包括(a)将测试剂(testagent)与包含CXCR7的片段(例如含有SEQIDNO:30的不超过250个连续氨基酸)的多肽接触，且其中所述多肽包括最小表位FSDISWP(SEQIDNO:39)或WPCNSSDCIV(SEQIDNO:40)或多肽FSDISWPC(SEQIDNO:12)或SWPCNSSDCIVV(SEQIDNO:15);以及(b)选择与所述多肽结合的剂，其中所述测试剂与所述多肽的结合指示所述测试剂是CXCR7活性的调节剂。在一些实施方案中，所述选择步骤包括测量所述测试剂与SDF-1或I-TAC竞争结合所述多肽的能力。在一些实施方案中，所述多肽含有SEQIDNO:30的不超过50个连续氨基酸。在一些实施方案中，本发明的抗体与由SEQIDNO:2、8、9、11、12、14、15、16、17中的任一个或如本文所公开的其他形式组成的多肽结合。在一些实施方案中，本发明的抗体不包括在Balbanian等人,.说'o/og/c.CAew280(42):35760-35766(2005)中所公开的抗RDCl抗体(如抗体"9C4)。在一些实施方案中，与本文所述表位结合的抗体不包括抗体11G8或6E10和/或不包括在图1中展示的可变区或在PCT/US06/15492中所述的其他抗CXCR7抗体。在一些实施方案中，所述抗体不包括在SEQIDNO:23、SEQIDNO:25、SEQIDNO:27或SEQIDNO:29中展示的可变区的互补决定区(CDR)。附图简述图1描述了本发明的抗体(分别来自SEQIDNO:23、25、27和29的SEQIDNO:31-34)的一些互补决定区(CDR)的一些实施方案。图2说明了肽对11G8染色435-CXCR7细胞的抑制结果。图3说明了抗体11G8和6E10(分别是SEQIDNO:l-7、2、8-10、35-38、11、2、12-17、12、18、19、16、20和21)的肽竞争实验的概述。定义本文命名为"CXCR7(也称为"CCX-CKR2)的"RDC1是指假定七个跨膜结构域的G蛋白偶联受体(GPCR)。参见，例如Burns等人，J￡xpMet/.203(9):2201-13(2006)。CXCR7犬直向同源物(ortholog)最初在1991年得以鉴定。参见，Z^w/等人244:569-572(1989)。犬序列在Libert等人，/Vwc.Wev.18(7):1917(1990)中描述。小鼠序列在例如Heesen等人，/m;m,朋gew幼'c547:364-370(1998)中描述。人序列在例如Sreedharan等人，尸rac.Mz//.^cac/.USA88:4986-4990(1991)中描述，此文献错误地将该蛋白描述成血管活性肠肽的受体。"CXCR7包括SEQIDNO:30以及作为SEQIDNO:30的保守性修饰变体的序列。参见，例如PCT/US04/34807。CXCR7的片段是上文列出的序列中的一个或其保守修饰变体的，至少5个、有时至少IO、20、50、100、200、300个或最多300个连续氨基酸的片段。与特定多肽"结合"的抗体是指与所述多肽竞争结合CXCR7(例如SEQIDNO:30)的抗体，如在细胞上表达并由FACS测量的。"受治疗者"或"个体"是指包括人、非人灵长类、小鼠、大鼠、犬或其他哺乳动物的动物。"化学治疗剂"是指当其对个体施用时足以引起癌性细胞生长的抑制、延缓或阻碍或者足以在癌性细胞中产生细胞毒性效应的剂。"抗体"是指包括来自特异性结合并识别抗原的免疫球蛋白基因或其片段的构架区的多肽。已识别的免疫球蛋白基因包括k、X、a、Y、5、s和)i恒定区基因，以及许多个免疫球蛋白可变区基因。轻链分为k或X。重链分为Y、P、a、5或￡,它们分别依次定义免疫球蛋白类IgG、IgM、1gA、IgD和IgE。天然存在的免疫球蛋白具有常用的核结构，其中两个相同的轻链(约24kD)和两个相同的重链(约55或70kD)形成四聚体。每个链的氨基端部分称为可变(V)区且可不同于每个链剩余部分的更保守的恒定(C)区。在轻链的可变区内是称为J区的C端部分。在重链的可变区内，除了J区之外还有D区。免疫球蛋白的大多数氨基酸序列变化限定于直接涉及抗原结合的被称为高变区或互补决定区(CDR)的V区的三个单独位置。从氨基端开始，这些区分别命名为CDR1、CDR2和CDR3。更保守的构架区(FR)将CDR固定在应有的位置上。从氨基端开始，这些区分别命名为FR1、FR2、FR3和FR4。CDR与FR区的位置和编号系统已被例如Kabat等人(Kabat等人，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest(免疫学关注的蛋白序列)，第5版，美国健康和人类服务部，美国政府印刷局(1991))所定义。示例性的免疫球蛋白(抗体)结构单位包括四聚体。每个四聚体由相同的两对多肽链组成，每对具有一个"轻"链(约25kDa)和一个"重"链(约50-70kDa)。每个链的N端定义主要对抗原识别负责的约100至110个或更多个氨基酸的可变区。术语可变轻链(V。和可变重链(VH)分别是指这些轻链和重链。例如，抗体以完整的免疫球蛋白或以通过用各种肽酶消化产生的许多具有显著特征的大量片段而存在。因此，例如胃蛋白酶在铰链区的二硫键下消化抗体以产生F(ab)，2—Fab的二聚体，其本身是经二硫键连接于VH-CH,的轻链。F(ab)'2可在温和条件下被还原以使铰链区的二硫键断裂，因而使F(ab)，2二聚体转化成Fab，单体。Fab，单体实质上是具有部分铰链区的Fab(参见FUNDAMENTALlMMUNOLOGY(基础免疫学)(Paul编，第3版，1993)。尽管各种抗体片段根据完整抗体的消化来定义，但是技术人员应理解，这些片段可用化学方法或通过使用重组DNA方法学来从头合成。因此，本文所用的术语抗体还包括通过修饰完整抗体所产生的抗体片段或使用重组DNA方法学从头合成的那些抗体片段(例如单链Fv)或使用噬菌体展示文库所鉴定的那些抗体片段(参见，例如McCafferty等人，vVa/wrc348:552-554(1990))。对于单克隆或多克隆抗体的制备，可使用本领域中已知的任何技术(参见，例如Kohler禾卩Milstein,TVa^re256:495-497(1975);Kozbor等人，/w聽冊/ogvr。勿4:72(1983);Cole等人，MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy(单克隆抗体和癌症治疗)第77-96页(1985))。"单克隆"抗体是指来源于单一克隆的抗体。用于产生单链抗体的技术(美国专利第4,946,778号)可适于产生本发明多肽的抗体。同样，转基因小鼠或其他生物体如其他哺乳动物可用来表达人源化抗体。可选地，噬菌体展示技术可用来鉴定与所选抗原特异性结合的抗体和异聚(heteromeric)Fab片段(参见，例如McCafferty等人，Atowre348:552-554(1990);Marks等人，10:779-783(1992》。"嵌合抗体"是一种抗体分子，在所述抗体分子中(a)恒定区或其部分被改变、取代(replace)或交换(exchange)以使抗原结合位点(可变区)与不同或改变的类、效应功能和/或种类的恒定区、或对嵌合抗体赋予新特性的完全不同的分子如酶、毒素、激素、生长因子、药物等等连接；或(b)可变区或其部分被改变、取代或交换为具有不同或改变的抗原特异性的可变区。"人源化"抗体是保留非人类抗体的反应性而人中的免疫原性较小的抗体。这可例如通过保留非人CDR区并将抗体的剩余部分用其人类相应部分(counterpart)取代来实现。参见，例如Morrison等人，尸rac.Ato/.^cat/."&4,81:6851-6855(1984);Morrison和Oi，A/v./附w丽o/.，44:65-92(1988);Verhoeyen等人，Sc/e"ce,239:1534-1536(1988);Padlan，Mo/ec/mww",,28:489-498(1991);Padlan，ikfo/ec./mm朋.，31(3):169-217(1994)。术语"分离的"当应用于蛋白质时，表示所述蛋白质基本上不含其在自然状态中所伴随的其他细胞组分。优选它处于均质的状态，即使一些痕量杂质可存在。它可在干燥物或水性溶液中。纯度和均一性(homogeneity)通常使用分析化学技术如聚丙烯酰胺凝胶电泳法或高效液相色谱法来测定。为存在于制品中的主要物质的蛋白质是大致纯化的。术语"纯化的"表示蛋白质在电泳凝胶中基本上产生一条带。具体来说，它表示所述蛋白质至少85%纯、更优选至少95%纯、且最优选至少99%纯。短语与抗体"特异性地(或选择性地)结合"或"与特异性地(或选择性地)免疫反应"当涉及蛋白质、糖蛋白或肽时，是指为蛋白质和其他生物制品的异质群体(heterogeneouspopulation)(如细胞溶解产物)中蛋白质存在的决定因素的结合反应。因此，在指定的免疫测定条件下，特定的抗体以至少两倍背景与具体蛋白质结合并且基本上不以显著量与存在于样品中的其他蛋白质结合。通常特异性或选择性反应为至少两倍背景信号或噪音，且更通常多于10至100倍背景。术语"类肽物(peptidomimetic)"和"模拟物"是指大致具有与天然或非天然存在的多肽相同的结构和功能特性的合成化学化合物(例如与CXCR7结合的试剂)。肽类似物通常作为具有类似于模板肽性质的性质的非肽药物用于医药工业。这些类型的非肽化合物称为"肽模拟物"或"类肽物"(Fauchere，/Wv.i>wgA仏15:29(1986);Veber和FreidingerT7A^第392页(1985);和Evans等人</.AfedCAem.30:1229(1987)，所述文献通过引用并入本文)。结构上类似于治疗上有用的肽的肽模拟物可用来产生等价物或者使治疗或预防效果提高。一般来说，类肽物在结构上类似于如在所感兴趣的多肽中发现的范例多肽(即具有生物学或药理学活性的多肽)，但具有一个或多个任选地被下述键取代的肽键，所述键选自由例如-CH2NH-、-CH2S-、-ch2-ch2-、-chk:h-(順式和反式)、-coch2-、-<:!1(0印(:112-和-^280-组成的组。所述模拟物可完全由合成的、非天然的氨基酸类似物组成，或者是部分天然的肽氨基酸和部分非天然的氨基酸类似物的嵌合分子。所述模拟物还可并入任何量的天然氨基酸保守性置换，只要这些置换也不大致改变所述模拟物的结构和/或活性。例如，模拟物组合物在本发明的范围内，如果它能实现所感兴趣多肽的至少一种结合活性或酶活性。"配体"是指能与受体结合的剂，例如多肽或其他分子。"保守性修饰变体"应用于氨基酸和核酸序列。关于特定核酸序列，"保守性修饰变体"是指编码相同或基本上相同的氨基酸序列的那些核酸，或者在所述核酸不编码氨基酸序列的情形，指基本上相同的序列。因为遗传密码的简并性，许多个核酸序列将编码任何给定的蛋白质。例如，密码子gca、gcc、gcg和gcu均编码氨基酸丙氨酸。因此，在丙氨酸被密码子指定的每个位置，所述密码子可变成所述的对应密码子之一而不改变编码的多肽。这种核酸变化是"沉默变化"，它们是一类保守性修饰变化。编码多肽的本文的每个核酸序列还描述了核酸的每一种可能的沉默变化。技术人员应认识到，核酸中的每个密码子(除了通常是蛋氨酸的唯一密码子的aug和通常是色氨酸的唯一密码子的tgg之外)可经修饰产生功能上相同的分子。因此，编码多肽的核酸的每个沉默变化内含在每个所述序列中。关于氨基酸序列，本领域技术人员应认识到，如果改变导致氨基酸被化学上类似的氨基酸所置换，则在编码序列中改变、添加或缺失单个氨基酸或小百分比的氨基酸的对核酸、肽、多肽或蛋白序列的个别置换、缺失或添加是"保守性修饰变体"。提供功能上类似的氨基酸的保守性置换表在本领域中众所周知。这些保守性修饰变体是多态变体、种间同系物和本发明的等位基因以外的，并且不排除多态变体、种间同系物和本发明的等位基因。下述八个组各包含互相为保守性置换的氨基酸1)丙氨酸(A)、甘氨酸(G);2)门冬氨酸(D)、谷氨酸(E);3)门冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q);4)精氨酸(R)、赖氨酸(K);5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、蛋氨酸(M)、缬氨酸(V);6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W);7)丝氨酸(S)、苏氨酸OO;和8)半胱氨酸(C)、蛋氨酸(M)(参见，例如Creighton，PratoVw(1984))。"序列同一性的百分比"通过经比较窗比较两个最佳比对序列来确定，其中多核苷酸序列在比较窗中的部分与用于两个序列的最佳比对的参考序列(其不包括添加或缺失)相比可包括添加或缺失(即缺口)。百分比通过以下来计算确定两个序列中存在的相同的核酸碱基或氨基酸残基的位置数以得出匹配位置数，然后用所述匹配位置数除以比较窗中的位置总数并将结果乘以100以得出序列同一性的百分比。在两个或更多个核酸或多肽序列的上下文中的术语"相同的"或百分比"同一性"是指当经比较窗或使用下述序列比较算法中的一种或通过手动比对和视觉检查所测量的指定区内比较和比对最大对应性时，相同的或具有相同的氨基酸残基或核苷酸的特定百分比(即在特定区域内，例如本发明的完整多肽序列或本发明的多肽的胞外结构域的60%同一性、任选地65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%同一性)的两个或多个序列或子序列。然后这些序列被称为"大致相同的"。这种定义还指测试序列的互补序列。任选地，同一性在长度为至少约50个核苷酸的区域内、或更优选在长度为100至500个或1000个或更多个核苷酸的区域内存在。对于序列比较，通常一个序列起参考序列的作用，测试序列与所述参考序列比较。当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入到计算机中，如果必要则指定子序列坐标，并且指定序列算法程序参数。可使用默认程序参数，或者可指定替代参数。然后序列比较算法基于程序参数来计算测试序列相对于参考序列的百分比序列同一性。本文所用的"比较窗"包括选自由例如全长序列或从20至600个、约50至约200个、或约100至约150个氨基酸或核苷酸组成的组的任一个连续位置数的区段(其中在最佳比对两个序列后，序列可与具有相同连续位置数的参考序列进行比较)的参考。用于比较的序列比对方法在本领域中众所周知。用于比较的最佳序列比对可例如通过Smith和Waterman(1970)爿c/v.M3仇2:482c的局部同源性算法、通过Needleman和Wunsch(1970)/7kfo/.历o/.48:443的同源性比对算法、通过Pearson和Lipman(1988)尸rac.A^7.^cac/.WSL485:2444的相似性搜索方法、通过计算机化执行这些算法(WisconsinGenetics软件包中的GAP、BESTFIT、FASTA禾口TFASTA,GeneticsComputerGroup，575Science,Madison博士，WI)或者通过手动比对和视觉检查(参见，例如Ausubel等人，CwreWPratoco/s/Kfo/ecw/ar历o/ogy(分子生物学最新方案)(1995增补))来进行。适合于确定序列同一性和序列相似性百分比的算法的实例是BLAST和BLAST2.0算法，它们分别在Altschul等人(1977)Jc,'A25:3389-3402和Altschul等人(1990)JMo/.215:403-410中描述。用于进行BLAST分析的软件可通过美国国家生物技术信息中心(http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/)公开得到。这种算法包括首先通过鉴定查询序列中长度W的短字来鉴定高评分序列对(HSP),所述短字当与数据库序列中相等长度的字比对时匹配或满足某些正值阈值评分T。T被称为邻近字评分阈值(Altschul等人，同上)。这些初始的邻近字匹配字串(hit)用作启动搜索以发现包含它们的更长HSP的种子。然后沿着每个序列以两个方向延伸字匹配字串，直至不可增加累积比对评分。对于核苷酸序列，累积评分使用参数M(匹配残基对的奖励评分；总是X))和N(错配残基的惩罚评分；总是O)来计算。对于氨基酸序列，累积评分使用评分矩阵计算。当出现以下情况时，则字匹配字串在每个方向的延伸停止累积比对评分从其最大达到值减少X量；累积评分由于一个或多个负评分残基比对的累积而变为零或零以下；或者到达任一个序列的末端。BLAST算法参数W、T和X确定比对的敏感性和速度。BLASTN程序(对于核苷酸序列)默认使用字长(W)11、期望值(E)10、N^5、N^4和两链的比较。对于氨基酸序列，BLASTP程序默认使用字长3和期望值(E)IO和BLOSUM62评分矩阵(参见Henikoff和Henikoff(1989)尸rac.A^/.爿cad"&489:10915)比对(B)50、期望值(E)10、M=5、N二4和两链的比较。,BLAST算法还进行两个序列之间相似性的统计分析(参见，例如Karlin和Altschul(1993)尸rac.TVa".^a^.OX490:5873-5787)。BLAST算法所提供的一种相似性量度是最小总和概率CP(N))，其提供了两个核苷酸或氨基酸序列之间的匹配随机发生的概率的指示。例如，如果核酸与参考核酸的比较中的最小总和概率小于约0.2、更优选小于约0.01、且最优选小于约0.001时，则认为所述测试核酸与所述参考序列相似。如下所述，两个核酸序列或多肽大致相同的指示是第一核酸所编码的多肽与对抗第二核酸所编码的多肽而产生的抗体具有免疫交叉反应性。因此，例如，如果多肽与第二多肽只是通过保守性置换而不同，则所述两个肽通常大致相同。如下所述，两个核酸序列大致相同的另一个指示是两个分子或其互补序列在严格条件下互相杂交。两个核酸序列大致相同的又一个指示是可使用相同的引物来扩增序列。发明详述/,岸#本发明提供了与SDF-1与I-TAC趋化因子竞争CXCR7的结合的抗体的表位的鉴定。因此，本发明提供了结合涉及配体结合和/或信号转寻的CXCR7表位的抗体。此外，还提供了与表位结合的剂的筛选方法，作为用于鉴定用来通过CXCR7受体调节信号转导的拮抗剂和激动剂的方法。指定为11G8和6E10的抗体与SDF-1竞争对CXCR7的结合，因此对所述抗体结合的表位进行作图(mapped)。测试表1中所示的肽与抗体竞争结合的能力。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>SEQIDNO:2、11、12、14和18与抗体11G8竞争。SEQIDNO:2、8、9、15、16和17与抗体6E10竞争。确定抗体11G8的最小表位为FSDISWP(SEQIDNO:39),而抗体6E10的最小表位为WPCNSSDCIV(SEQIDNO:40)。//,錄柳齐沐本发明提供了与SEQIDNO:2、8、9、11、12、14、15、16、17中的任一个或如本文所述的其他表位结合的抗体。本发明提供了使用抗CXCR7的抗体治疗、诊断和预后涉及CXCR7的疾病和病症的试剂和方法。涉及CXCR7的疾病和病症下文示例更多，并且包括但不限于癌症、涉及过度或异常的血管生成的疾病和关节炎。在一些实施方案中，所述抗体是分离的。在一些实施方案中，所述抗体与CXCR7结合并与趋化因子SDF-1和I-TAC竞争结合CXCR7。CXCR7结合的竞争测定在例如PCT/US04/34807和美国专利公布第US2004/0170634和2005/0074826号中描述。抗体结合的竞争通过在肽的存在下与单独抗体相比抗体结合的减少来确定。竞争通过如FACS所测量的0.5个对数、优选1个对数、更优选2个对数或更高对数的转变(shift)来指不。在本发明的一些实施方案中，所述抗体与CXCR7结合但不与人外周血结合。例如，在一些实施方案中，本发明的抗体不与下述细胞的至少一种结合嗜碱性粒细胞、单核细胞、浆细胞样树突状细胞；8细胞或004+T细胞。CDR区与FR区的位置和编号系统以前已经例如由Kabat等人(Kabat等人，SequencesofProteinsoflmmLmologicalInterest(免疫学关注的蛋白序列)，第5版，美国健康和人类服务部，美国政府印刷局(1991))描述。CDR一般可使用NCBIIgBLAST算法来鉴定。本领域技术人员应认识到，不同的序列算法可提供CDR在特定抗体氨基酸序列中的位置的略微不同的描述。在一些情况下罩链CDR存在于氨基酸位置31-35(CDR1)、50-65(CDR2)和96-102(CDR3)。在一些情况下，轻链CDR存在于氨基酸位置24-34(CDRl)、50-56(CDR2)和89-97(CDR3)。在一些实施方案中，CDR如图1中所述表示。特定抗体与另一个抗体识别相同表位的能力通常通过一个抗体竞争性抑制第二抗体与抗原例如与CXCR7或其片段或其融合体的结合的能力来确定。许多竞争性结合测定中的任一种可用来测量两个抗体之间对同一抗原的竞争。示例性测定是Biacore测定。简要来说，在这些测定中，结合位点可通过测试相互作用物(如不同抗体)抑制另一个的结合的能力从结构上作图。以充分的浓度注射两份连续抗体样品可鉴定同一结合表位的竞争抗体对。在每次注射下所述抗体样品应该有可能达到有效的饱和。第二抗体注射的净结合显示结合表位分析。可用两个响应水平来描述由于表位不同造成的完全竞争相对非竞争结合的界限。第二抗体注射的结合响应相对于相同和不同结合表位的结合的相对量确定表位重叠的程度。抗体可识别线性或构象表位，因此当识别不同和远端的表位时，抗体可以是竞争性的。本领域已知的其他常规的免疫测定可用于本发明。例如，抗体可使用夹心ELISA测定通过其结合的表位加以区分。这通过使用捕获抗体将孔的表面涂层来进行。然后将亚饱和浓度的加标签(tagged)抗原加至所述捕获表面。这种蛋白将通过特异性抗体表位相互作用与抗体结合。在洗涤后，将已与可检测部分(例如HRP，而标记的抗体被定义为检测抗体)共价连接的第二抗体加至ELISA。如果这种抗体与捕获抗体识别相同的表位，那么该抗体将不能与靶蛋白结合，因为该特定表位不再可用于结合。然而如果这种第二抗体识别靶蛋白上的不同表位，那么它将能够结合，并且这种结合可通过使用有关底物定量活性的水平(因此定量结合的抗体)来检测。背景通过使用单一抗体作为捕获抗体和检测抗体来定义，而最大信号可通过用抗原特异性抗体捕获并用针对抗原上的标签的抗体进行检测来建立。通过使用背景和最大信号作为参考，可以以配对方式评价抗体从而确定表位特异性。使用上文所述的任一种测定，如果在第一抗体的存在时的第二抗体与抗原的结合下降至少30%，通常至少约40%、50%、60%或75%，且经常至少约90%,则认为第一抗体竞争性抑制第二抗体的结合。制备多克隆抗体的方法为技术人员所已知。多克隆抗体可例如通过免疫剂和佐剂(如需要)的一次或多次注射在哺乳动物中产生。典型地，所述免疫剂和/或佐剂通过多次皮下或腹膜内注射在哺乳动物中注射。所述免疫剂可包括核酸所编码的蛋白质或其片段或其融合蛋白。将所述免疫剂与已知在被免疫的哺乳动物中具有免疫原性的蛋白轭合可以是有用的。这种免疫原性蛋白的实例包括但不限于钥孔戚血蓝蛋白(keyholelimpethemocyanin)、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白和大豆胰蛋白酶抑制剂。可使用的佐剂的实例包括弗氏完全佐剂和MPL-TDM佐剂(单磷酰脂质A、合成型海藻糖双白喉菌酸酯(trehaiosedicorynomycolate))。免疫方案可由本领域技术人员来选择，而不需过多的实验。可选地，所述抗体可以是单克隆抗体。单克隆抗体可使用杂交瘤方法如由Koher和Milstein,Atowre256:495(1975)描述的那些方法来制备。在杂交瘤方法中，小鼠、仓鼠或其他适合的宿主动物通常用免疫剂免疫以引发产生或能产生与所述免疫剂特异性结合的抗体的淋巴细胞。可选地，所述淋巴细胞可被体外免疫。所述免疫剂通常包括CXCR7多肽或其片段或融合体。一般来说，如果想要人来源细胞，则使用外周血淋巴细胞("PBL")，或者如果想要非人哺乳动物来源，使用脾细胞或淋巴结细胞。然后使用适合的融合剂如聚乙二醇将所述淋巴细胞与永生细胞系融合以形成杂交瘤纟田胞(Goding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice(单克隆抗体原理和实践)，第59-103页(1986))。永生细胞系通常是转化的哺乳动物细胞，特别是啮齿类动物、牛和人来源的骨髓瘤细胞。通常使用大鼠或小鼠骨髓瘤细胞系。杂交瘤细胞可在包含抑制未融合的永生细胞的生长或存活的一种或多种物质的适合培养基中培养。例如，如果亲本细胞缺乏酶次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT或HPRT)，那么杂交瘤的培养基通常将包括次黄嘌呤、氨基喋呤和胸苷("HAT培养基")，这些物质防止HGPRT缺陷型细胞的生长。在一些实施方案中，本发明的抗体是与包含SEQIDNO:23和SEQIDNO:25或者SEQIDNO:27和SEQIDNO:29的抗体竞争结合CXCR7的嵌合抗体或人源化抗体。如上所述，抗体的人源化形式是嵌合的免疫球蛋白，其中人抗体的互补决定区(CDR)的残基被来自具有期望的特异性、亲和性和容量的非人物种(如小鼠、大鼠或兔)CDR的残基所取代。例如，SEQIDNO:23和SEQIDNO:25或者SEQIDNO:27和SEQIDNO:29的CDR可插入到人抗体的构架中。人抗体可使用本领域已知的各种技术来制备，所述技术包括噬菌体展示文库(Hoogenboom和Winter,乂Mo/.B/o/.227:381(1991);Marks等人，J.Afo/.S/o/.222:581(199]))。Cole等人和Boerner等人的技术也用于人单克隆抗体的制备(Cole等人，MonoclonalAntibodiesandCancerThempy(单克隆抗体和癌症治疗)，第77页(1985)和Boerner等人.，7/w/7m"o/.147(1):86-95(1991))。同样地，人抗体可通过将人免疫球蛋白位点引入到转基因动物(如内源性免疫球蛋白基因已部分或完全失活的小鼠)中而制得。攻击后，观察到人抗体产生，这在包括基因重排、装配和抗体谱的所有方面都非常类似于在人中所看到的。这种方法例如在美国专利第5,545,807;5,545,806;5,569,825;5,625,126;5,633,425;5,661,016号和下列科学出版物中描述Marks等人，S/o/Tfec/wo/ogv10:779-783(1992);Lonberg等人，Atowre368:856-859(1994);Morrison，Atowe368:812-13(1994);Fishwild等人，淑we肠,ec/mo/，14:845-51(1996);Neuberger，Ato,历她c/mo/ogy14:826(1996);Lonberg和Huszar，/"temTev.7m画朋/.13:65-93(1995)。在一些实施方案中，本发明的抗体是单链Fv(scFv)。scFv抗体的VH和Vl区(例如SEQIDNO:12和SEQIDNO:14或者SEQIDNO:16和SEQIDNO:18)包括折叠形成类似于在两链抗体中存在的抗原结合位点的单链。折叠后，非共价相互作用使单链抗体稳定。尽管一些抗体实施方案的Vh和VL区可直接连接在一起，但是技术人员应理解所述区域可被由一个或多个氨基酸组成的肽接头分开。肽接头及其用途在本领域中众所周知。参见,例如Huston等人,尸rac.脂'"cw/.Scz'.固8:5879(1988);Bird等人^c/ewe242:4236(1988);Glockshuber等人^/oc/ze脂'^729:1362(1990);美国专利第4,946,778号、美国专利第5,132,405号和Stemmer等人，历ofec/zm々w^14:256-265(1993)。一般来说，除了连接所述区域或在VH和V,j之间保持一些最小距离或其他空间关系之外，肽接头不具有任何特异性生物活性。然而，可选择肽接头的组成氨基酸来影响分子的一些特性如折叠、净电荷或疏水性。单链Fv(scFv)抗体任选地包括长度为不超过50个氨基酸、一般不超过40个氨基酸、优选不超过30个氨基酸、且更优选不超过20个氨基酸的肽接头。在一些实施方案中，所述肽接头是序列Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQIDNO:41)的多联体、优选2、3、4、5或6个这种序列的多联体。但是，应理解可在所述接头中进行一些氨基酸置换。例如，可用缬氨酸取代甘氨酸。已经描述了制备scFv抗体的方法。参见，Huse等人，&/ece246:1275-1281(1989);Ward等人，淑廳341:544-546(1989);和Vaughan等人，A^ww5/otec/2.14:309-314(1996)。简短来说，从免疫动物的B细胞中分离mRNA并制备cDNA。使用对免疫球蛋白的重链和轻链的可变区特异性的引物扩增cDNA。纯化PCR产物并连接核酸序列。如果需要接头肽，则在重链和轻链核酸序列之间插入编码所述肽的核酸序列。将编码scFv的核酸插入到载体中并在适合的宿主细胞中表达。与期望的抗原特异性结合的scFv通常经由噬菌体展示文库的淘选而发现。淘选可通过数种方法中的任二种来进行。淘选可使用在其表面上表达期望抗原的细胞或使用涂有期望抗原的固体表面而方便地进行。方便地，所述表面可以是磁珠。将未结合的噬菌体从固体表面洗掉并洗脱结合的噬菌体。找出具有最高亲和性的抗体由选择过程的效率决定并依赖于可筛选的克隆数目和用来进行筛选的严格性。通常地，更高的严格性对应于更具选择性的淘选。但是，如果条件过于严格，则噬菌体将不结合。在一轮淘选后，与CXCR7涂层的板或与在其表面上表达CXCR7细胞结合的噬菌体在大肠杆菌OE.co/0中增殖(expand)并经受另一轮淘选。以这种方式，在3轮淘选中实现很多倍的富集。因此，即使当每轮的富集低时，多轮淘选仍将导致罕见噬菌体和所含遗传物质的分离，所述遗传物质编码具有最高亲和性或在噬菌体上更好地表达的scFv。无论所选的淘选方法如何，由噬菌体展示所提供的基因型和表型之间的物理联系使测试cDNA文库、即使大的克隆文库的每个成员与抗原的结合成为可能。在一个实施方案中，所述抗体是双特异性抗体。双特异性抗体是对至少两种不同的抗原具有结合特异性或对同一抗原上的两个表位具有结合特异性的单克隆抗体(包括但不限于人或人源化抗体)。在一个实施方案中，一种结合特异性是针对CXCR7蛋白质，而另一种是针对另一种不同的癌症抗原。可选地，四聚体型技术可产生多价试剂。在一些实施方案中，所述抗体与效应部分轭合。所述效应部分可以是任何数目的分子(包括可检测的标记部分如放射性标记或荧光标记)，或者可以是治疗性部分。在其他实施方案中，所述治疗性部分是细胞毒剂。在此方法中，将所述细胞毒剂靶向癌组织或细胞使得患病细胞数下降，因此使与癌症相关的症状减轻。细胞毒剂有很多且是各种各样的，包括但不限于细胞毒性药物或毒素或这些毒素的活性片段。适合的毒素及其相应片段包括白喉A链、外毒素A链、蓖麻毒素A链、相思豆毒蛋白A链、麻风树毒蛋白、巴豆毒蛋白、酚霉素、依诺霉素、auristatin及类似毒素。细胞毒剂还包括通过将放射性同位素与本发明抗体轭合而制备的放射化学试剂。///兗度縱本发明的抗体可使用许多种公认的免疫结合测定中的任一种用来检测CXCR7或表达CXCR7的细胞(参见，例如美国专利4,366，241;4，376，110;4,517,288;和4,837,168)。对于一般免疫测定的综述，还参见MethodsinCellBiology(细胞生物学方法)，第37巻，Asai编，AcademicPress，Inc.NewYork(1993);Sw/c(://"^0〃附附丽0/0^><基础和临床免疫学)第7版，Stites和Terr编(1991)。因此，本发明提供了检测表达CXCR7的细胞的方法。在一种方法中，对受治疗者进行活组织检查并体外测试收集的组织。然后将所述组织或来自所述组织的细胞与本发明的抗CXCR7抗体接触。所形成的任何免疫复合物显示CXCR7蛋白质在活组织检查样品中存在。为了便于进行这种检测，可将抗体进行放射标记或使抗体与为可检测标记(如荧光标记)的效应分子偶联。在另一种方法中，所述细胞可使用成像系统在体内被检测。然后，确定标记的定位。可使用用于使诊断成像可视化的常规方法。例如，顺磁性同位素可用于MRI。抗体的内在化可能对延长生物体内的寿命超过细胞外结合所提供的寿命是重要的，所述细胞外结合通过与循环清除偶联的细胞外酶环境而易于清除。CXCR7蛋白质还可使用标准免疫测定法和本发明的抗体来检测。标准方法包括，例如放射免疫测定、夹心免疫测定(包括ELISA)、免疫荧光测定、蛋白质印迹、亲和色谱法(亲和配体与固相结合)以及以标记抗体原位检测。也可使用次级检测剂，例如山羊抗小鼠FITC。可应用技术的一般综述可在Harlow禾卩Lane，J"W60c/Ze5:爿Z^6orator_yMowwa/(抗体实验室手册)(1988)中发现。本发明提供了检测癌细胞的方法，其包括提供癌症预后或诊断的方法。CXCR7在迄今为止所测试的几乎每一种癌细胞中表达，而CXCR7的正常(非癌)表达似乎限于肾脏和一些脑细胞以及在胎肝的某些发育阶段中。参见，例如PCT/US04/34807和美国专利申请第10/698,541和10/912,638号。因此，CXCR7在细胞中、特别是在非胎儿细胞和/或肾脏或脑细胞以外细'胞'中的表达，表明癌细胞的可能存在。CXCR7在组织细胞或组织的血管内皮中的存在也表明癌症的存在。在一些情况下，使用本领域已知的其他方法来证实包含表达CXCR7的细胞的样品中癌细胞的存在。依照本发明的又一个方面，提供了用于选择患有或疑似患有癌症的受治疗者的疗程的方法。所述方法包括从受治疗者获得生物样品，将所述样品与特异性结合CXCR7的抗体或其结合抗原片段接触，检测抗体结合是否存在，以及选择适于所述受治疗者的癌症的疗程。在一些实施方案中，所述治疗是对所述受治疗者施用本发明的CXCR7抗体。本发明提供了诊断人疾病的方法，所述疾病包括但不限于癌症，例如癌、神经胶质瘤、间皮瘤、黑素瘤、淋巴瘤、白血病、腺癌、乳癌、卵巢癌、子宫颈癌、成胶质细胞瘤、白血病、淋巴瘤、前列腺癌和伯基特(Burkitt)淋巴瘤、头颈癌、结肠癌、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、肝胆管癌、胆嚢癌、小肠癌、直肠癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、阴茎癌、尿道癌、睾丸癌、子宫颈癌、阴道癌、子宫癌、卵巢癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、胰脏内分泌癌(pancreaticendocrinecancer)、类癌(carcinoidcancer)、骨癌、皮月夫癌、视网膜母纟田胞瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(其它癌症参见CANCER:PRINCIPLESANDPRACTICE(癌症理论与实践)(DeVita,V.T.等人编1997));以及脑和神经元机能障碍，如阿尔茨海默病和多发性硬化；肾机能障碍；类风湿性关节炎；心脏同种异体移植物排斥；动脉粥样硬化；哮喘；肾小球肾炎；接触性皮炎；炎性肠病；结肠炎；牛皮癣；再灌注损伤；以及本文所述的其他病症和疾病。CVOf7效谬伊浙Af魏,f菱沐谬伊微紹许多种不同的筛选方案可用于鉴定调节在细胞中、特别是哺乳动物细胞中、尤其在人细胞中CXCR7活性或功能的水平的剂。概括来说，筛选方法包括筛选多个剂(例如通过与CXCR7片段结合并防止本发明抗体与CXCR7片段结合或活化CXCR7)以鉴定与包括SEQIDNO:2、8、9、11、12、14、15、16、17任一或如本文所述的其他序列的多肽(包括含有这些序列的CXCR7的片段)相互作用的剂。在一些实施方案中，剂结合CXCR7的亲和性为至少约1.5、2、3、4、5、10、20、50、100、300、500或1000倍于所述剂对另一种蛋白质的亲和性。在一些实施方案中，包括本文所述的表位的CXCR7片段(以及任选地包括在N端和/或C端的更多非CXCR7氨基酸)不超过例如300、250、200、150、100、50、40、30、20或更少的氨基酸。在一些实施方案中，所述CXCR7片段是含有少于所有的全长CXCR7多肽的氨基酸的任何片段。l.趋化因子受体结合测定在一些实施方案中，CXCR7调节剂通过筛选与本发明抗体竞争结合CXCR7多肽或其片段的分子来鉴定。本领域技术人员应认识到有许多种进行竞争分析的方法。在一些实施方案中，含有CXCR7的样品与本发明的标记抗体(例如至少包括SEQIDNO:23、SEQIDNO:25、SEQIDNO:27和/或SEQIDNO:29的CDR的抗体)预温育，然后与潜在的竞争剂分子接触。在测试化合物的存在下，与CXCR7结合的抗体量的变化(例如减少)表明所述测试化合物是潜在的CXCR7调节剂。初步筛选可通过筛选能与CXCR7结合的剂来进行，因为如此鉴定的至少某些剂有可能是趋化因子受体调节剂。结合测定通常包括将CXCR7与一种或多种测试剂接触并给予足够的时间使所述蛋白和测试剂形成结合复合物。所形成的任何结合复合物可使用许多种成熟分析技术中的任一种来检测。蛋白结合测定包括但不限于免疫组织化学结合测定、流式细胞术、放射配体结合、铕标记的配体结合、生物素标记的配体结合或保持CXCR7构象的其他测定。这些测定中所用的趋化因子受体可被天然表达、克隆或合成。结合测定可用来鉴定激动剂或拮抗剂。例如通过将CXCR7与潜在的激动剂接触并测量CXCR7活性，有可能鉴定刺激CXCR7活性的那些分子。2.细胞和试剂本发明的筛选方法可以以体外测定或基于细胞的测定来进行。体外测定例如使用包括CXCR7的膜部分或全细胞来进行。基于细胞的测定可在表'达-CXCR7的任何细胞中进行。基于细胞的测定涉及含有CXCR7的全细胞或细胞部分以筛选剂的结合或所述剂对CXCR7活性的调节。根据本发明方法可用的示例性细胞类型包括，例如包括白细胞的任何哺乳动物细胞，如嗜中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞和淋巴细胞(如T细胞和B细胞)、白血病细胞、伯基特淋巴瘤细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、周细胞、成纤维细胞、心肌细胞、肌细胞、乳腺肿瘤细胞、卵巢癌细胞、子宫颈癌细胞、成胶质细胞瘤细胞、肝细胞、肾细胞和神经元细胞，以及真菌细胞(包括酵母)。细胞可以是原代细胞或肿瘤细胞或其他类型的永生细胞系。当然，CXCR7可在不表达内源型CXCR7或已经诱导表达的细胞中表达。在一些情况下，CXCR7片段以及蛋白融合体可用来筛选。当想要与CXCR7配体竞争结合的分子时，所用的CXCR7片段是能结合本发明抗体的片段。可选地，CXCR7的任何片段可用作鉴定结合CXCR7的分子的靶。CXCR7片段可包括CXCR7的任何片段，例如CXCR7的至少20、30、40、50个氨基酸至包含除了一个之外的所有其余氨基酸的蛋白。通常地，配体结合片段将包括CXCR7的跨膜区和Z或大部分或所有的胞外结构域。3.信号转导或粘附活性在一些实施方案中，由CXCR7活化触发的信号转导用来鉴定CXCR7调节剂。趋化因子受体的信号转导活性可用很多方法来确定。例如，信号转导是指由受体与天然存在的配体的结合(例如CXCR7结合SDF-1或I-TAC)引起的细胞功能或结构的变化，并可包括受体内在化、受体介导的信号转导(例如哺乳动物G蛋白的活化、细胞质游离钙浓度快速并短暂增加的诱导)、细胞响应功能(例如趋化性的刺激或炎症介质的释放)及类似信号转导。可选地，信号转导可通过检测趋化因子受体介导的细胞粘附来确定。趋化因子和趋化因子受体之间的相互作用可通过整联蛋白亲和性和亲合力的修饰导致快速粘附。参见，例如Laudanna,/mww"o/og/ca/7ev/em186:37-46(2002)。信号转导还可通过定性和定量地测定第二信使如环状AMP或肌醇磷酸来测量，以及也可监控磷酸化或脱磷酸化事件。参见，例如Premack等人.A^weAfe&d"e2:1174-1178(1996)和Bokoch，86:1649-1660(1995)。此外，也可监控CXCR7活化的其他下游事件以确定信号转导活性。下游事件包括由于趋化因子受体的刺激而发生的那些活性或表现。示例性的下游事件包括，例如变化的细胞状态(例如从正常细胞到癌细胞或从癌细胞到非癌细胞)。细胞响应包括细胞的粘附(例如到内皮细胞)。也可监控CXCR7调节剂对血管生成中牵涉的成熟信号转导级联(例如VEGF介导的信号转导)的效应。剂促进血管生成的能力可在例如如由Leung等人(1989)246:1306-1309讨论的鸡胚绒毛尿嚢膜中评价。另一种选择是用如由Rastinejad等人.(1989)Cell56:345-355讨论的大鼠角膜进行测定。其他测定在美国专利第5,840,693号中公开。还可应用卵巢血管生成模型(参见，例如Zimmerman，R.C.等人.(2003)J.C7/"./騰W.112:659-669;Zimmerman,R.C.等人.(2001)AZ/cwra化.紐62:15-25;和Hixenbaugh，E.A.等人.(1993)Aec.235:487-500)。其他筛选方法基于下述观察结果某些调节蛋白的表达受CXCR7的存在或活化而诱导。因此，这些蛋白的检测可用来间接确定CXCR7的活性。进行一系列ELISA研究来比较用CXCR7转染的细胞和未转染细胞的细胞培养基中各种分泌的蛋白的相对浓度。通过这些研究，确定了CXCR7诱导许多种不同调节蛋白的产生，所述调节蛋白包括生长因子、趋化因子、金属蛋白酶和金属蛋白酶抑制剂。因此，所提供的某些筛选方法包括确定测试剂是否通过CXCR7调节某些生长因子、趋化因子、金属蛋白酶和金属蛋白酶抑制剂的产生。在某些情况下，所述测定使用在发现使CXCR7诱导性蛋白的产生增加的限制血清条件下生长的细胞(或其提取物)进行。下列蛋白是检测的各种类别蛋白以及每种类别内的特定蛋白的实例(1)生长因子(例如GM-CSF);(2)趋化因子(例如RANTES、MCP-1);(3)细胞因子(例如IL-6);(4)金属蛋白酶(例如MMP3);和(5)金属蛋白酶抑制剂(例如TIMP-1)。期望还可检测到这些各种类别中的其他蛋白。这些具体蛋白可使用本领域已知的标准免疫检测法来检测。适于以高通量形式使用的一种方法例如是在多孔板中进行的ELISA。用于检测TIMP-1的ELISA试剂盒可得自DakoCytomation(产品代号EL513)。检测IL-6和MMP3的ELISA试剂盒可从RandDSystems获得。特异性结合上文所列出的蛋白质的抗体的供应商的更多例子在下文实施例中提供。作为酶的蛋白质如金属蛋白酶也可通过已知的酶测定来检测。在其他实施方案中，测试潜在的CCX-CK2调节剂调节细胞粘附的能力。肿瘤细胞粘附内皮细胞单层已被作为转移侵入的模型进行研究(参见，例如Blood和Zetter,肠v/z隱—.爿cto，1032，89-119(19卯)。这些内皮细胞单层模拟淋巴脉管系统并可用各种细胞因子和生长因子(例如TNFa和IL-l卩)剌激。可在静态粘附测定和在细胞处于流动条件下以模拟体内脉管系统的力的测定中评价表达CXCR7的细胞粘附这种单层的能力。此外，评价粘附的测定还可在体内进行(参见，例如vonAndrian，U.H.Mf'cra"Vrw/加.o".3(3):287-300(1996))。4,验证最初通过前述筛选方法中的任一种所鉴定的剂可被进一步测试以验证表观活性。优选地，这些研究用适合的动物模型来进行。这些方法的基本形式包括对用作人的疾病模型的动物施用在初始筛选时所鉴定的先导化合物，然后确定所述疾病(例如癌症、心肌梗塞、创伤愈合或与血管生成相关的其他疾病)是否实际上得到调节和/或所述疾病或病症是否得以改善。在验证研究中应用的动物模型通常是任何种类的哺乳动物。适合动物的具体实例包括但不限于灵长类、小鼠、大鼠和斑马鱼。.在一些实施方案中，关节炎动物模型用来筛选和Z或验证调节CXCR7的剂的治疗用途。示例性的关节炎动物模型包括，例如胶原诱导的关节炎(CIA)动物模型。仗与CXC77裙互絲娜CXCR7调节剂(例如拮抗剂或激动剂)可包括，例如抗体(包括单克隆、人源化或本领域已知的结合蛋白的其他类型)、小有机分子、siRNA、CXCR7多肽或其变体、趋化因子(包括但不限于SDF-1和/或I-TAC)、趋化因子模拟物、趋化因子多肽等等。、经测试为CXCR7调节剂的剂可以是任何小化学化合物或生物实体，如多肽、糖、核酸或脂质。可选地，调节剂可以是趋化因子或其他配体的遗传上改变的形式或类肽形式。通常地，测试化合物将是小化学分子和肽。实质上任何化学化合物可在本发明的测定中用作潜在的调节剂或配体，尽管通常应用可溶解于水性或有机(尤其是基于DMSO)溶液的化合物。这些测定被设计成通过使测定步骤自动化以及提供任何适宜来源的化合物到测定中而筛选大型化学文库，其通常平行运行(例如在机器人测定中在微量滴定板上以微量滴定形式)。应理解有很多化合物供应商，包括Sigma(St.Louis,MO)、Aldrich(St.Louis,MO)、Sigma層Aldrich(St.Louis,MO)、FlukaChemika-BiochemicaAnalytika(Buchs,Switzerland)及类似供应商。在一些实施方案中，所述剂具有少于1,500道尔顿、且在某些情况下少于1,000、800、600、500或400或300道尔顿的分子量。相对小尺寸的剂是所期望的，因为较小分子与具有较高分子量的剂相比，具有与良好药动学特征(包括口服吸收)相容的物化特性的可能性更高。例如，根据渗透性和溶解性不太可能成功用作药物的剂由Lipinski等人描述如下具有多于5个氢键供者(以OH和NH的总和表示)；具有大于500的分子量；具有大于5的LogP(或MLogP大于4.15);和/或具有多于10个氢键受者(以N和O的总和表示)。参见，例如Lipinski等人./WvZ>MgDe//ve/7A"23:3-25(1997)。作为生物运载体底物的化合物种类通常是所述原则的例外。在一个实施方案中，高通量筛选方法包括提供包含大量潜在的治疗化合物(潜在的调节剂或配体化合物)的组合化学文库或肽文库。然后将这些"组合化学文库"或"配体文库"在如本文所述的一种或多种测定中筛选以鉴定展示期望的特征活性的那些文库成员(特别是化学物类或子类)。因此经鉴定的化合物可用作常规的"先导化合物"或它们自身可用作潜在的或实际的治疗剂。组合化学文库是通过组合许多化学"结构单元"由化学合成或生物合成所产生的各种化学化合物的集合。例如，线性组合化学文库如多肽文库通过以给定化合物长度(即多肽化合物中的氨基酸数目)的每种可能方法组合一组化学结构单元(氨基酸)而形成。数百万化学化合物可通过化学结构单元的这种组合混合来合成。组合化学文库的制备和筛选为本领域技术人员众所周知。这些组合化学文库包括但不限于肽文库(参见，例如美国专利5,010,175、Furka,乂尸e-.37:487-493(199)和Houghton等人，Atowrc354:84-88(1991))。也可使用产生化学多样性文库的其他化学物。这些化学物包括但不限于拟肽(例如PCT公布号WO91/19735)、编码的肽(例如PCT公布WO93/20242)、随机生物低聚物(例如PCT公布号WO92/00091)、苯并二氮口类(例如美国专利第5,288,514号)、多样体(diversomer)如乙内酰脲类、苯并二氮口类和二肽(Hobbs等人，/Voc.AW.XcadOS^卯:6909-6913(1993))、插烯多肽(Hagihara等人，J.^^r.CZem.Soc.114:6568(1992))、具有葡萄糖骨架的非肽类肽物(Hirschmann等人，J.^werC/2，.114:9217-9218(1992))、类似有机合成的小化合物文库(Chen等人"CAew.Soc.116:2661(1994))、低聚氨基甲酸酯(Cho等人万c/e"ce261:1303(1993))、和/或肽基膦酸酯(Campbe11等人，/Org.CT^w.59:658(1994))、核酸文库(参见Ausubel、Berger禾BSambrook,所有同上)、肽核酸文库(参见，例如美国专利5,539,083)、抗体文库(参见，例如Vaughn等人,Atow所ofec/mo/ogy,14(3):309-314(1996)和PCT/US96/10287)、碳水化合物文库(参见，例如Liang等人，Sc/e"ce，274:1520-1522(1996)和美国专利5,593,853)、小有机分子文库(参见，例如benzodiazepines(苯并二氮口2类)，BaumC&EN,1月18日，第33页(1993);类异戊二烯，美国专利5,569,588;噻唑烷二酮(thiazolidinone)和间噻烷酮(metathiazanones)类，美国专利5,549,974;吡咯烷类，美国专利5，525，735和5,519,134;吗啉代化合物，美国专利5，506，337;苯并二氮口类，5,288,514及类似物)。用于制备组合文库的装置商业上可获得(参见，例如357MPS、390MPS，AdvancedChemTech,LouisvilleKY;Symphony，Rainin，Wobum，MA;433AAppliedBiosystems,FosterCity，CA;9050Plus，M川ipore，Bedford，MA)。此外，很多组合文库本身商业上可获得(参见，例如ComGenexJPrinceton凡J.;TriposJnc.,St.LouisAIO;3DPharmaceuticals，Exton，PA;MartekBiosciences，Columbia，MD等)。K舰、^梦主鄉C濃7效真游主欲方,本发明的抗体可体外、体内或离体("Ww)(即从身体中移除，经处理并回到身体)与表达CXCR7的细胞接触。本发明的抗体可直接施用到哺乳动物受治疗者以在体内调节趋化因子受体活性。在一些实施方案中，所述抗体与SDF1和/或I-TAC竞争结合CXCR7。在一些实施方案中，所述抗体不包括SEQIDNO:23禾口/或SEQIDNO:25、或者SEQIDNO:27和/或SEQIDNO:29。在一些实施方案中，CXCR7抗体被施用到患有癌症的受治疗者。在_些情况下，CXCR7调节剂被施用来治疗癌症，例如癌、神经胶质瘤、间皮瘤、黑素瘤、淋巴瘤、白血病、腺癌、乳癌、卵巢癌、子宫颈癌、成胶质细胞瘤、白血病、淋巴瘤、前列腺癌和伯基特淋巴瘤、头颈癌、结肠癌、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、肝胆管癌、胆嚢癌、小肠癌、直肠癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、阴茎癌、尿道癌、睾丸癌、子宫颈癌、阴道癌、子宫癌、卵巢癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、胰脏内分泌癌、类癌、骨癌、皮肤癌、视网膜母细胞瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(其它癌症参见CANCER:PRINCIPLESANDPRACTICE(癌症理论与实践)(DeVita，V.T.等人编1997));以及脑和神经元机能障碍如阿尔茨海默病和多发性硬化；肾机能障碍；类风湿性关节炎；30心脏同种异体移植物排斥；动脉粥样硬化；哮喘；肾小球肾炎；接触性皮炎；炎性肠病；结肠炎；牛皮癣；再灌注损伤；以及本文所述的其他病症和疾病。本发明还包括通过施用本发明抗体使任何有相应需要的受治疗者中的血管生成减少。例如，通过使CXCR7与本发明抗体接触而减少CXCR7活性，因此减少血管生成，这对抑制肿瘤、尤其是实体瘤的形成、生长和/或转移是有用的。与调节的CXCR7和血管生成有关的实施方案的描述在例如美国专利申请第11/050,345号中描述。涉及-不需要的或有问题的血管生成的其他病症包括类风湿性关节炎；牛皮癣；眼血管生成性疾病(ocularangiogenicdisease)如糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病变、黄斑变性、角膜移植物排斥、新生血管性青光眼、晶状体后纤维增生症、潮红；奥韦综合征(Osler-WebberSyndrome);心肌血管生成；斑块新生血管形成；毛细血管扩张；血友病性关节；血管纤维瘤；过度或异常剌激内皮细胞的疾病，包括肠粘连、克罗恩病(Crohn'sdisease),皮肤病(如牛皮癣、湿疹(excema)和硬皮病)、糖尿病、糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病变、与年龄有关的黄斑变性、动脉粥样硬化、硬皮病、创面肉芽(woundgranulation)和肥厚性癜痕即癜痕疙瘩，以及血管生成作为病理后果的疾病如猫抓病和溃疡(幽门螺杆菌(/^//^^^"/^/on))也可用本发明的抗体来治疗。血管生成抑制剂可用来预防或抑制粘连(尤其是腹膜内或骨盆粘连如开放手术或腹腔镜检查(laproscopic)手术后形成的那些腹膜内或骨盆粘连)和烧伤收缩(bumcontraction)。应使用血管生成抑制剂而有利治疗的其他病状包括预防移植后的癜痕化、肝硬变、急性呼吸窘迫综合征后的肺纤维化或其他新生肺纤维化、暂时修复体的植入(implantationoftemporaryprosthetics)以及脑与硬膜(dura)之间的手术后的粘连。子宫内膜异位、息肉病、心脏肥厚(hypertr叩hyy)以及肥胖症也可通过抑制血管生成来治疗。这些病症可包括其他类型正常组织的大小或生长的增加，如子宫肌瘤、前列腺肥大和淀粉样变性。本发明的抗体可预防性或治疗性地用于本文所述的任一种病症或疾病。用本发明的抗体减少CXCR7活性还可用于预防新生血管形成以有效治疗宿主的病症。因此，例如减少血管生成可用作血管病症(例如血管瘤和动脉粥样硬化斑块内的毛细血管增生)、肌病(例如心肌血管生成、心肌梗塞或平滑肌内的血管生成)、关节(例如关节炎、血友病性关节等)和与血管生成有关的其他病症的治疗的一部分。促进血管生成还可有助于加速各种生理过程和需要增加血管化的疾病如创伤、骨折和烧伤的愈合、炎性疾病、缺血性心脏病(ischericheart)和外周血管疾病的治疗。本发明的抗体还可用来增强创伤愈合。不期望将本发明限制在一种具体的作用机理，此作用机理可能是CXCR7的拮抗作用允许内源性配体替换结合至低亲和性受体，因此触发增强的创伤愈合。例如，SDF-1与CXCR7和CXCR4两者结合，但与CXCR4的结合具有较低的亲和性。同样地J-TAC与CXCR3结合的亲和性低于I-TAC与CXCR7结合的亲和性。通过防止这些配体与CXCR7的结合，CXCR7拮抗剂可允许这些配体与其他受体结合，因此增强创伤愈合。因此，增强创伤愈合的CXCR7拮抗作用可能由不同机理介导，而不是用激动剂刺激CXCR7活性来增强创伤愈合除治疗与新生血管化有关的病症和症状之外，血管生成的抑制可用来调节或防止与新生血管化有关的正常生理状况的发生。因此，例如本发明方法可用作控制生育。依据本发明，降低在卵巢或子宫内膜内的CXCR7活性可减少与排卵、胚胎植入、胎盘形成等有关的新生血管化。血管生成的抑制剂还有其他的治疗用途。例如，本发明的抗体可用于下述情况(a)脂肪组织消融与肥胖症的治疗。参见，例如Ko/om'w等人，A^&"MWc/"e10(6):625-632(2004);(b)先兆子痫(preclampsia)的治疗。参见，例如，Levine等人~/.J.iV/ec/.350(7):672-683(2004);Maynard等人，JC//"./"w"Ul(5):649-658(2003);和(c)心血管疾病的治疗。参见，例如March,等人，J尸/^w'o/.//ecrrtCz>c.尸/yw》/.287:H458-H463(2004);Rehman等人，C/rcw/a"o"109:1292-1298(2004)。F/.蘑席浙药欺逝^漱本发明的药物组合物可包括，例如本发明的抗体和药学上可接受的载体。药学上可接受的载体部分通过所施用的具体组合物以及通过施用所述组合物所用的具体方法来确定。因此，存在本发明药物组合物的多种适合的制剂(参见，例如iew/"gto":尸/2mvwace她'cfl/5Wewces(雷明顿药学)，第17版.1985))。适于施用的制剂包括水溶液和非水溶液、等渗无菌溶液(可包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和赋予制剂等渗的溶质)、以及水和非水无菌悬浮液(可包含悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂)。在本发明的实施中，组合物可例如口服、鼻、局部、静脉内、腹膜内、皮下或鞘内施用。化合物的制剂可在单位剂量或多剂量密封容器如安瓿和管形瓶中提供。溶液和悬浮液可由前述的这类无菌粉末、颗粒和片剂来制备。所述组合物可借助于例如用来递送胰岛素或对特定器官或肿瘤递送化疗的这类输注泵来施用。本发明的组合物可使用注射器或导管直接注射到肿瘤中或在原发性肿瘤切除之前或之后注射到其部位；或者在原发性肿瘤切除后全身注射。本发明的组合物可根据需要局部或区域施用。对于延长的局部施用，所述抗体可以注射到肿瘤部位的控制释放植入物施用。可选地，个体细胞用质粒离体转染以便于表达本发明的抗体，之后注射到肿瘤部位。对于皮肤病状的局部治疗，酶抗体可用软膏或凝胶施用到皮肤。在一些实施方案中，本发明的CXCR7抗体可与其他适合的治疗剂包括如化学治疗剂、放射等组合施用。用于组合治疗的适合剂的选择可根据常规药学原理由本领域普通技术人员来进行。治疗剂的组合可协同作用以实现各种病症如癌症、创伤、肾机能障碍、脑机能障碍或神经元机能障碍的治疗或预防。使用这种方法，我们能够用每种剂的较低剂量实现治疗效果，因此减少不良副作用的可能性。在本发明的背景下对患者所施用的剂量应足以在受治疗者中随时间引起有利的响应(例如减少肿瘤大小或肿瘤负荷)。任何患者的最佳剂量水平将取决于包括所用的特定调节剂的效力、患者的年龄、体重、身体活动和饮食的多种因素，取决于与其他药物的可能组合，以及取决于具体疾病的严重度。剂量大小还由在具体受治疗者中伴随具体化合物或载体的施用的任何不良副作用的存在、性质和程度来确定。在确定待施用的抗体的有效量时，医生可评价抗体的循环血浆水平、抗体毒性和抗抗体的抗体的产生。一般而言，对于典型的受治疗者，抗体的剂量当量从约1ng/kg到10mg/kg。对于施用而言，当就受治疗者的整体健康状况(massandoverallhealth)进行应用时，本发明的抗体可以以由抗体的LD-50和抗体在不同浓度的副作用确定的比率来施用。抗体被接受者免疫系统的清除也可影响待施用的适合剂量。施用可经由单剂量或分份剂量来完成。可施用包含本发明抗体的组合物，以用于治疗性或预防性治疗。在治疗性应用中，以足以治愈或至少部分阻碍疾病及其并发症例如减少肿瘤大小等的量将组合物施用到遭受疾病(例如癌症、关节炎或其他CXCR7相关的疾病或病症)的患者。足以实现这个的量被定义为"治疗有效剂量"。对这种用途有效的量取决于疾病的严重度和患者健康的一般状态。所述组合物的单次施用或多次施用可依赖于按照患者需要并耐受的剂量和频率来施用。无论如何，所述组合物应提供足够量的本发明的剂以有效地治疗患者。能够预防或延缓癌症在哺乳动物中的发展的调节剂的量被称为"预防有效剂量"。预防性治疗所需的具体剂量将取决于哺乳动物的医疗状况和病史、所预防的具体癌症以及其他因素如年龄、体重、性别、施用途径、效力等。这种预防性治疗可在例如以前患过癌症的哺乳动物中使用以预防癌症的复发，或在怀疑很可能发展癌症的哺乳动物中使用。本发明的抗体可单独供应或与一种或多种其他药物结合供应。可能的组合伴侣可包括，例如其它的抗血管生长因子和/或化学治疗剂(例如细胞毒剂)或放射、癌症疫苗、免疫调节剂、抗血管剂、信号转导抑制剂、抗增殖剂或细胞凋亡诱导剂。本发明的抗体可与下述结合使用阻断整联蛋白接合的抗体和肽、抑制金属蛋白酶的蛋白质和小分子(例如marmistat)、阻断内皮细胞内的磷酸化级联的剂(例如除莠霉素(herbamycin))、已知血管生成诱导剂的显性失活受体(dominantnegativereceptor)、针对血管生成诱导剂的抗体或阻断它们活性的其他化合物(例如苏拉明)、通过其他方式作用的其他化合物(例如类视黄醇、IL-4、干扰素等)。事实上，由于这些因素可通过不同机理调节血管生成，所以与其他血管生成剂组合使用本发明的抗体可能更有效地(并且可能协同地)抑制期望组织中的血管生成。抗血管生成剂如MMP-2(基质金属蛋白酶(matrix-metalloprotienase)2)抑制剂、MMP-9(基质金属蛋白酶9)抑制剂、和cox-n(环氧合酶n)抑制剂可用来与本发明抗体和本文所述的药物组合物结合使用。本发明的抗CXCR7抗体还可与下述剂一起使用信号转导抑制剂如可抑制EGFR(表皮生长因子受体)响应的剂，例如EGFR抗体、EGF抗体和为EGFR抑制剂的分子；VEGF(血管内皮生长因子)抑制剂如VEGF受体和可抑制VEGF的分子；和erbB2受体抑制剂如与erbB2受体结合的有机分子或抗体，例如HERCEPTINTM(Genentech，Inc.ofSouthSanFrancisco，Calif.，USA)。本发明的抗CXCR7抗体还可与包括促进血管生成和/或创伤愈合的药物的其他药物组合。本领域技术人员应理解，所述抗体可结合一种或多种医学外科上有用的物质或治疗剂，例如当组合物应用到需要血管生成的期望部位时可进一步增强血管生成响应、和/或加速和/或有利地改变愈合过程的那些物质或治疗剂。例如，为进一步促进血管生成、修复和/或组织生长，所述组合物可包含一些激素、生长因子或有丝分裂蛋白中的至少一种，例如成纤维细胞生长因子、血小板源生长因子、巨噬细胞源生长因子等。此外，所述组合物可包含抗微生物剂，例如抗生素如硫酸庆大霉素或红霉素。其他医学外科上有用的剂可包括抗炎药、镇痛药、麻醉剂、mbifacient、酶、抗组织胺类和染料。本发明的抗CXCR7抗体还可与包括用于治疗关节炎的药物的其他药物组合。这些剂的实例包括抗炎治疗剂。例如，糖皮质类固醇如泼尼松龙和甲淡尼龙是常用的抗炎药。非甾体类抗炎药(NSAID)也用来抑制炎症。NSAID抑制环氧合酶(COX)COX-l和COX-2，该酶对生成在炎症部位过量产生的前列腺素是重要的。此外，促炎细胞因子、肿瘤环死因子a(TNFcO与包括关节炎的多种炎症事件有关，并且抗TNFa治疗正在临床上应用。離舒,磨滞/或麻应雄,盆为了用于上文所述的诊断性、研究和治疗性应用，本发明还提供了试剂盒。在诊断性应用和研究应用中，这些试剂盒可包括下述的任一种或全部.测定试剂、缓冲剂和本发明的抗CXCR7抗体。治疗性产品可包括无菌盐水或另一种药学上可接受的乳剂和悬浮基质。此外，所述试剂盒可包括含有实施本发明方法的指导(即方案)的说明材料(instmctionalmaterial)。尽管所述说明材料通常包括书面或印刷的材料，但是它们并不限于这些。本发明包括能够存储这些说明书并将它们传递给最终用户的任何介质。这些介质包括但不限于电子存储介质(例如磁盘、磁带、盒式存储器(cartridge)、芯片)、光学介质(例如CDROM)及类似介质。这种介质可包括提供这些说明材料的网站地址。实施例众所周知，制备G蛋白偶联受体(GPCR)的抗体一直是困难的。我们使用了加拿大专利申请CA2350078中所概述的GenovacAGPE的方法。结合CXCR7的抗体通过用表达CXCR7(SEQIDNO:30)的cDNA接种小鼠来产生。简短而言，将CXCR7克隆到表达载体中并通过基因枪方法用所述载体接种小鼠。在适合的时间点，B细胞被分离，通过标准技术与骨髓瘤细胞融合，然后在体外培养物中选择融合的杂交瘤细胞。克隆培养物的上清液用于通过流式细胞术分析与用CXCR7稳定转染的细胞的结合。将阳性克隆扩增并使其经受更多轮的流式细胞术筛选。确定了单克隆抗体6E10和11G8与CXCR7结合。抗体6E10和11G8在不内源性产生CXCR7的转染细胞系上以及在内源性表达CXCR7的细胞如HeLa禾QMCF-7(ATCC，VA)上检测CXCR7。此外，所述抗体能识别CXCR7的小鼠同系物。例如，抗体6E10和11G8在小鼠乳腺肿瘤细胞系4T1和Lewis肺癌细胞(ATCC，Va)上检测CCX-CR2。抗体.6E10和11G8而不是同型对照在用CXCR7转染的HEK293细胞系上检测，但是不与用空载体转染的HEK293细胞或表达其他趋化因子受体(例如CXCR2)的HEK293细胞结合。所述抗体也被中和，如经放射性配体竞争结合测定所证实。抗体6E10和11G8两者都与SDF-1和I-TAC两者竞争结合小鼠和人CXCR7两者。抗体11G8通常所显示的趋化因子结合百分比抑制比抗体6E10的大。抗体6E0和1G8还在免疫组织化学(IHC)测定中在固定石蜡包埋的组织切片上识别CXCR7。在关于各种组织类型的实验中，用抗体6E10和11G8染色的IHC与用在各自组织上并入放射标记的SDF或I-TAC的结合测定所确定的表达模式相匹配。例如，CXCR7染色在E13胎儿小鼠的切片中、而不是在E17胎儿或成年小鼠的切片中发现。还在稳定表达人CXCR7的细胞的细胞离心物(cytospins)中观察到CXCR7染色。确定了重链与轻链可变区编码序列和预测的氨基酸序列。6E0的重链可变区包含于SEQIDNO:23(由SEQIDNO:22编码)中。6E10的轻链可变区包含于SEQIDNO:25(由SEQIDNO:24编码)中。11GS的重链可变区包含于SEQIDNO:27(由SEQIDNO:26编码)中。11G8的轻链可变区包含于SEQIDNO:29(由SEQIDNO:28编码)中。我们通过FACS已确定11G8和6E10抗体两者都识别在细胞表面上表达的CXCR7受体。这表示为沿着FACS图的X轴，荧光(florescent)信号(填充)相对于背景(明线)的增加(图2)。为了探询11G8和6E10与哪些氨基酸残基识别并结合將来源于CXCR7序列的许多短肽(0.5-5吗)用100(ilPBS中的任一种抗体(0.5-5pg)预温育。然后这种混合物在室温下与表达CXCR7的500,000个细胞温育15分钟。如果所述抗体识别由肽编码的序列，那么所述肽就有效地竞争抗体，远离与细胞相关的受体结合，从而导致隨后FACS图上荧光(florescence)的下降。如果所述序列不与任一种抗体相互作用，那么观察不到下降。这些读数在图2中示例，其中"无肽"表示不完全抗体染色，"肽2.2.1表示肽竞争，和"肽2.3.4表示没有肽竞争。通过此测定中肽序列的轻微变化，辨别出抗体识别所必需的最小肽序列。图3示例了与抗体11G8或6E10竞争的肽的概述。尽管为了清楚地理解，通过例证和实施例已经较详细地描述了本发明，但是依据本发明的教导，在不偏离所附权利要求的精神或范围下对其可作出一些改变和调整，这对本领域普通技术人员来说是容易明显的。在本说明书中所引用的所有出版物、数据库、Genbank序列、专利和专利申请通过引用并入本文，如同明确且独立地表明每个出版物、数据库、Genbank序列、专利和专利申请都通过引用并入。权利要求1.一种抗体，其与以下多肽结合由FSDISWPC(SEQIDNO12)组成的多肽；或由SWPCNSSDCIVV(SEQIDNO15)组成的多肽，其中所述抗体不包括SEQIDNO23、SEQIDNO25、SEQIDNO27或SEQIDNO29中所展示的可变区的互补决定区(CDR)。2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体与可检测标记连接。3.根据权利要求1所述的抗体，其为单克隆抗体。4.根据权利要求1所述的抗体，其为人源化抗体。5.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体与由FSDISWPC(SEQIDNO:12)组成的多肽结合。6.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体与由SWPCNSSDCIVV(SEQIDNO:15)组成的多肽结合。7.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体与SDF-1竞争结合CXCR7o8.—种药物组合物，其包括药学上可接受的赋形剂和根据权利要求1所述的抗体。9.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述抗体为单克隆抗体。10.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述抗体为人源化抗体。11.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述抗体与由FSDISWPC(SEQIDNO:12)组成的多肽结合。12.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述抗体与由SWPCNSSDCIVV(SEQIDNO:15)组成的多肽结合。13.—种在生物样品中检测表达CXCR7的细胞的方法^斤述方法包括将所述生物样品与根据权利要求1所述的抗体接触并检测所述抗体的存在。14.一种治疗、预防或改善疾病的方法，所述方法包括对有相应需要的个体施用根据权利要求1所述的抗体。15.根据权利要求14所述的方法，其中癌细胞在所述个体中的增殖在所述施用步骤后得以抑制。16.根据权利要求14所述的方法，其中血管生成或血管化在所述施用步骤后在所述个体中得以抑制。17.根据权利要求14所述的方法，其中所述个体患有或易患关节炎。18.根据权利要求14所述的方法，其中所述个体患有癌症。19.一种用于鉴定CXCR7的调节剂的方法，其包括(a)将测试剂与含有SEQIDNO:30的不超过250个连续氨基酸的多肽接触，且其中所述多肽包括FSDISWP(SEQIDNO:39)或WPCNSSDCIV(SEQIDNO:40)或FSDISWPC(SEQIDNO:12)或SWPCNSSDCIVV(SEQIDNO:15);以及(b)选择与所述多肽结合的剂，其中所述测试剂与所述多肽的结合指示所述测试剂是CXCR7活性的调节剂。20.根据权利要求19所述的方法，其中所述选择步骤包括测量所述测试剂与SDF-1或I-TAC竞争结合所述多肽的能力。21.根据权利要求19所述的方法，其中所述多肽含有SEQIDNO:30的不超过50个连续氨基酸。22.根据权利要求19所述的方法，其中所述多肽由FSDISWPC(SEQIDNO:12)或SWPCNSSDCIVV(SEQIDNO:15)组成。全文摘要描述了结合CXCR7表位的抗体以及鉴定CXCR7调节剂的方法。文档编号A61K39/395GK101528257SQ200780038960公开日2009年9月9日申请日期2007年10月12日优先权日2006年10月18日发明者B·普雷马克,M·彭弗德,Z·缪申请人:凯莫森特里克斯股份有限公司