羧化不足/未羧化的骨钙蛋白提高β-细胞增殖、胰岛素分泌、胰岛素敏感性、葡萄糖耐量并...的制作方法

专利名称：羧化不足/未羧化的骨钙蛋白提高β-细胞增殖、胰岛素分泌、胰岛素敏感性、葡萄糖耐量并 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及(i)在动物中治疗或预防肥胖症的方法，包括对有此需要的动物施用治疗有效量的降低成骨细胞中γ-羧化酶表达或活性的药剂，与治疗前水平相比，所述治疗有效量足以引起体重增加减少、脂肪量减少或体重减轻；(ii)在动物中治疗或预防葡萄糖不耐受的方法，包括对有此需要的动物施用有效量的降低成骨细胞中γ-羧化酶表达或活性的药剂，与治疗前水平相比，所述治疗有效量足以提高葡萄糖耐量；或(iii)在动物中提高胰岛素敏感性的方法，包括对有此需要的动物施用治疗有效量的降低成骨细胞中γ-羧化酶表达或活性的药剂，与治疗前水平相比，所述治疗有效量足以提高葡萄糖敏感性。优选动物是人。在本发明的一个实施方案中，该药剂是分离的核酸，其选自cDNA、反义DNA、反义RNA和小干扰RNA，所述核酸与编码γ-羧化酶的基因或mRNA充分互补，以允许与该基因或mRNA特异性杂交，其中所述杂交阻止或降低成骨细胞中γ-羧化酶的表达。在本发明的另一实施方案中，核酸与磷酸基或其它靶向配体缀合，以便于被成骨细胞摄取。
在本文所述的方法中，应当理解“治疗”疾病不仅包括改善疾病或其症状，而且包括延缓疾病的发展或减轻疾病。
本发明还包括基因疗法用于治疗代谢综合征的用途，所述代谢综合征包括肥胖症、2型糖尿病、葡萄糖不耐受、动脉粥样硬化和1型糖尿病。这可如下实现根据本领域多种已知的方法，向载体中引入编码骨钙蛋白或其生物活性片段或变体的基因，并用该载体转染或感染来自患有该疾病或有高风险发生该疾病的患者的细胞。可通过离体或体内方法转染或感染细胞。
腺相关病毒(AAV)是最有希望用于基因疗法的载体之一，并且可用于本发明的方法中。基因转移和基因疗法的常规方法描述于例如Gene TherapyPrinciples and Applications，T.Blackenstein编辑，Springer Verlag，1999；Gene Therapy Protocols(Methods in MolecularMedicine)，P.D.Robbins编辑，Humana Press，1997；和Retro-vectors forHuman Gene Therapy，C.P.Hodgson编辑，Springer Verlag，1996中。AVV是用于人基因疗法的很有吸引力的载体体系，因为它对人是非致病性的，具有高整合率并且能够感染不分裂的细胞，从而使其可用于将基因递送进组织培养物和完整动物中的哺乳动物细胞。Muzyczka，Curr.Top.Microbiol.Immunol.，15897-129，1992。近期研究证明AAV是基因递送的有用载体。LaFace等，Viology，162483-486，1998；Zhou等，Exp.Hematol.(NY)，21928-933，1993；Flotte等，PNAS 9010613-10617，1993；和Walsh等，Blood 841492-1500，1994。重组AAV载体已被成功地用于体外和体内转导标记物基因(Kaplitt等，Nature Genetics，8148-154，1994；Lebkowski等，Mol.Cell.Biol.83988-3996，1988；Samulski等，J.Virol.，633822-3828，1989；Shelling，A.N.和Smith，M.G.，Gene Therapy，1165-169，1994；Yoder等，Blood，82suppl.1347A，1994；Zhou等，J.Exp.Med.，1791867-1875，1994；Hermonat，P.L.和Muzyczka，N.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.，816466-6470，1984；Tratschin等，Mol.Cell.Biol.，42072-2081，1984；McLaughlin等，J.Virol.，621963-1973，1988)以及涉及人疾病的基因(Flotte等，Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.，7349-356，1992；Luo等，Blood，82suppl.1，303A，1994；Ohi等，Gene，89L27914282，1990；Walsh等，PNAS 897257-7261，1992；Wei等，Gene Therapy，1261-268，1994)。
在某些其它的实施方案中，可使用逆转录病毒载体将目的基因(例如骨钙蛋白)转移进靶细胞内。逆转录病毒是指属于逆转录病毒科的病毒，包括肿瘤病毒、泡沫病毒(Russell，D.W.和Miller，A.D.，J.Virol.1996，70217-222；Wu，M.等，J.Virol.1999，734498-4501)和慢病毒(例如HIV-1(Naldini，L.等，Science 1996，272263-267；Poeschla，E.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1996，9311395-11399；Srinivasakumar，N.等，J.Virol.1997，715841-5848；Zufferey，R.，等Nat.Biotechnol.1997，15871-875；Kim，V.N.，等，J.Virol.1998，72811-816)和猫免疫缺陷病毒(Johnston，J.C.等，J.Virol.1999，734991-5000；Johnston，J.和Power，C，J.Virol.1999，732491-2498；Poeschla，E.M.等，Nat.Med.1998，4354-357))。利用逆转录病毒载体治疗多种疾病的大量基因疗法是本领域公知的(参阅如美国专利No.4,405,712和4,650,764；Friedmann，1989，Science，2441275-1281；Mulligan，1993，Science，260926-932，R.Crystal，1995，Science270404-410，和美国专利No.6,899,871，Kasahara，等，各自通过参考整体并入本文)。越来越多的这些方法目前被用于人类临床试验中(Morgan，R.，1993，BioPharm，6(l)32-35；也见The Development ofHuman Gene Therapy，Theodore Friedmann编辑，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.，1999.ISBN0-87969-528-5，其通过参考整体并入本文)。
可通过确定该方法是否减轻所治疾病的任何症状来监测本文所述治疗方法的效力。或者，可以监测血清羧化不足/未羧化骨钙蛋白(绝对值，或羧化不足/未羧化骨钙蛋白/总骨钙蛋白的比值)和/或血清脂连蛋白和/或血清胰岛素的水平，所述水平应当响应于治疗而提高。或者可通过监测受治受试者中的糖血来衡量效力。
诊断 本发明提供了诊断病症(例如与羧化不足/未羧化骨钙蛋白水平降低相关的病症)的方法和组合物。这类病症包括但不仅限于代谢综合征、葡萄糖不耐受、1型和2型糖尿病、动脉粥样硬化和肥胖症。
在本发明的一个具体的实施方案中，提供了诊断患者有发生葡萄糖不耐受或糖尿病之风险的方法，包括(i)测定取自该患者的生物样品中羧化不足/未羧化骨钙蛋白的患者水平，以及来自未患有葡萄糖不耐受或糖尿病的受试者生物样品中羧化不足/未羧化骨钙蛋白的对照水平，(ii)将患者水平与对照水平比较，和(iii)如果患者水平低于测试水平，则推断该患者有发生葡萄糖不耐受或糖尿病的风险。在本发明的一个实施方案中，糖尿病为1型或2型。
“生物样品”包括固体和体液样品。本发明的生物样品可包括组织，器官，细胞，细胞的蛋白质或膜提取物，血或生物流体如血、血清、腹水或脑流体(例如脑脊液)。
在本发明的另一个实施方案中，提供了诊断患者有发生葡萄糖不耐受或糖尿病之风险的方法，包括(i)测定取自该患者的生物样品中羧化不足/未羧化骨钙蛋白的患者水平；和(ii)将患者水平与标准水平比较；其中如果患者水平低于标准水平，则该患者有发生糖尿病的风险。在对人实施该方法的情况下，标准水平可以是先前已测定为对于无发生糖尿病风险的人而言是正常范围的羧化不足/未羧化骨钙蛋白水平。在一些优选的实施方案中，生物样品是血、血清、血浆、脑脊液、尿、细胞样品或组织样品。在本发明的一个实施方案中，糖尿病是1型或2型。
人中羧化不足/未羧化骨钙蛋白的“标准水平”包括以下值0.1ng/ml到10ng/ml，优选0.2ng/ml到7.5ng/ml，更优选0.5ng/ml到5ng/ml，进一步更优选1ng/ml到5ng/ml。人中羧化不足/未羧化骨钙蛋白的标准水平也可包括约0.1ng/ml、约0.5ng/ml、约1ng/ml、约2ng/ml、约3ng/ml、约4ng/ml、约5ng/ml、约6ng/ml、约7ng/ml或约10ng/ml。
在本发明的另一实施方案中，提供了诊断患者有发生葡萄糖不耐受或糖尿病之风险的方法，包括(i)测定取自该患者的生物样品中羧化不足/未羧化骨钙蛋白与总骨钙蛋白的比值；和(ii)将该比值与标准比值进行比较；其中，如果患者的比值低于标准比值，则该患者有发生葡萄糖不耐受或糖尿病的风险。在某些实施方案中，标准比值为5％-10％、10％-15％、15％-20％、20％-25％、25％-30％或30％-35％。在某些实施方案中，标准比值约为5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％。优选患者为人。在优选的实施方案中，生物样品为血、血清、血浆、脑脊液、尿、细胞样品或组织样品。在本发明的一个实施方案中，糖尿病为1型或2型。
本发明还提供了诊断患者具有发生动脉粥样硬化之风险的方法，包括(i)测定取自该患者的生物样品中羧化不足/未羧化骨钙蛋白的患者水平，以及取自未患动脉粥样硬化受试者的生物样品中羧化不足/未羧化骨钙蛋白的对照水平，(ii)将患者水平与对照水平比较，和(iii)如果患者水平低于测试水平，则推断该患者有发生动脉粥样硬化的风险。
在本发明的另一个实施方案中，提供了诊断患者具有发生动脉粥样硬化之风险的方法，包括(i)测定取自该患者的生物样品中羧化不足/未羧化骨钙蛋白的患者水平；和(ii)将患者水平与标准水平比较；其中如果患者水平低于标准水平，则该患者有发生动脉粥样硬化的风险。在对人实施该方法的情况下，标准水平可以是先前已测定为对于无发生动脉粥样硬化风险的人而言是正常范围的羧化不足/未羧化骨钙蛋白水平。在优选的实施方案中，生物样品是血、血清、血浆、脑脊液、尿、细胞样品或组织样品。优选患者是人。
在本发明的另一个实施方案中，提供了诊断患者具有发生动脉粥样硬化之风险的方法，包括(i)测定取自该患者的生物样品中羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与总骨钙蛋白的比值；和(ii)将该比值与标准比值比较；其中如果患者比值低于标准比值，则该患者有发生动脉粥样硬化的风险。在某些实施方案中，标准比值是5％-10％、10％-15％、15％-20％、20％-25％、25％-30％或30％-35％。在某些实施方案中，标准比值是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％。优选患者是人。在优选的实施方案中，生物样品是血、血清、血浆、脑脊液、尿、细胞样品或组织样品。
在本发明的另一个实施方案中，提供了诊断患者具有发生代谢综合征之风险的方法，包括(i)测定取自该患者的生物样品中羧化不足/未羧化骨钙蛋白的患者水平，以及取自未患代谢综合征受试者的生物样品中羧化不足/未羧化骨钙蛋白的对照水平，(ii)将患者水平与对照水平进行比较，和(iii)如果患者水平低于测试水平，则推断该患者有发生代谢综合征的风险。
在本发明的另一个实施方案中，提供了诊断患者具有发生代谢综合征之风险的方法，包括(i)测定取自该患者的生物样品中羧化不足/未羧化骨钙蛋白的患者水平；和(ii)将患者水平与标准水平进行比较；其中如果患者水平低于标准水平，则该患者有发生代谢综合征的风险。在对人实施该方法的情况下，标准水平可以是先前已测定为对无发生代谢综合征风险的人而言是正常范围的羧化不足/未羧化骨钙蛋白水平。在优选的实施方案中，生物样品是血、血清、血浆、脑脊液、尿、细胞样品或组织样品。优选患者是人。
在本发明的另一个实施方案中，提供了诊断患者具有发生代谢综合征之风险的方法，包括(i)测定来自患者的生物样品中羧化不足/未羧化骨钙蛋白与总骨钙蛋白的比值；和(ii)将该比值与标准比值进行比较；其中如果患者比值低于标准比值，则该患者有发生代谢综合征的风险。在某些实施方案中，标准比值是5％-10％、10％-15％、15％-20％、20％-25％、25％-30％或30％-35％。在某些实施方案中，标准比值是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％。优选患者是人。在优选的实施方案中，生物样品是血、血清、血浆、脑脊液、尿、细胞样品或组织样品。
在本发明的另一方面中，提供了诊断患者有发生肥胖症之风险的方法，包括(i)测定取自该患者的生物样品中羧化不足/未羧化骨钙蛋白的患者水平，以及取自未患肥胖症受试者的生物样品中羧化不足/未羧化骨钙蛋白的对照水平，(ii)将患者水平与对照水平进行比较，和(iii)如果患者水平低于测试水平，则推断该患者有发生肥胖症的风险。
在本发明的另一实施方案中，提供了诊断患者有发生肥胖症之风险的方法，包括(i)测定取自该患者的生物样品中羧化不足/未羧化骨钙蛋白的患者水平；和(ii)将患者水平与标准水平进行比较；其中如果患者水平低于标准水平，则该患者有发生肥胖症的风险。在对人实施该方法的情况下，标准水平可以是先前已被测定为对无发生肥胖症风险下的人而言是正常范围的羧化不足/未羧化骨钙蛋白水平。在优选的实施方案中，生物样品是血、血清、血浆、脑脊液、尿、细胞样品或组织样品。优选患者是人。
在本发明的另一实施方案中，提供了诊断患者有发生肥胖症之风险的方法，包括(i)测定来自患者的生物样品中羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与总骨钙蛋白的比值；和(ii)将该比值与标准比值进行比较；其中如果患者比值低于标准比值，则该患者有发生肥胖症的风险。在某些实施方案中，标准比值是5％-10％、10％-15％、15％-20％、20％-25％、25％-30％或30％-35％。在某些实施方案中，标准比值是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％。优选患者是人。在优选的实施方案中，生物样品是血、血清、血浆、脑脊液、尿、细胞样品或组织样品。
在本发明的另一实施方案中，提供了诊断患者具有发生选自葡萄糖不耐受、胰腺β-细胞增殖受损、胰岛素分泌受损和胰岛素敏感性受损之疾病的风险的方法，包括(i)测定取自该患者的生物样品中羧化不足/未羧化骨钙蛋白的患者水平，以及取自未患该疾病受试者的生物样品中羧化不足/未羧化骨钙蛋白的对照水平，(ii)将患者水平和对照水平进行比较，和(iii)如果患者水平低于测试水平，则推断该患者有发生该疾病的风险。
在本发明的另一个实施方案中，提供了诊断患者具有发生选自葡萄糖不耐受、胰腺β-细胞增殖受损、胰岛素分泌受损和胰岛素敏感性受损之疾病的风险的方法，包括(i)测定取自该患者的生物样品中羧化不足/未羧化骨钙蛋白的患者水平；和(ii)将患者水平与标准水平比较；其中如果患者水平低于标准水平，则该患者有发生选自葡萄糖不耐受、胰腺β-细胞增殖受损、胰岛素分泌受损和胰岛素敏感性受损之疾病的风险。在对人实施该方法的情况下，标准水平可以是先前已测定为对无发生下述疾病的风险下的人而言是正常范围的羧化不足/未羧化骨钙蛋白水平，所述疾病选自葡萄糖不耐受、受损的胰腺β-细胞增殖、受损的胰岛素分泌和受损的胰岛素敏感性。在优选的实施方案中，生物样品是血、血清、血浆、脑脊液、尿、细胞样品或组织样品。优选患者是人。
在本发明的另一个实施方案中，提供了诊断患者具有发生选自葡萄糖不耐受、胰腺β-细胞增殖受损、胰岛素分泌受损和胰岛素敏感性受损之疾病的风险的方法，包括(i)测定取自该患者的生物样品中羧化不足/未羧化骨钙蛋白与总骨钙蛋白的比值；和(ii)将该比值与标准比值进行比较；其中如果患者比值低于标准比值，则该患者有发生选自葡萄糖不耐受、胰腺β-细胞增殖受损、胰岛素分泌受损和胰岛素敏感性受损之疾病的风险。在某些实施方案中，标准比值是5％-10％、10％-15％、15％-20％、20％-25％、25％-30％或30％-35％。在某些实施方案中，标准比值是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％。优选患者是人。在优选的实施方案中，生物样品是血、血清、血浆、脑脊液、尿、细胞样品或组织样品。
除了测定羧化不足/未羧化骨钙蛋白水平以外，本发明还提供了用于诊断与脂连蛋白水平降低相关之病症的方法和组合物。这些病症包括但不仅限于代谢综合征、葡萄糖不耐受、1型和2型糖尿病、动脉粥样硬化和肥胖症。在本发明的一个具体的实施方案中，提供了诊断患者具有发生肥胖症之风险下的方法，包括(i)测定取自该患者的生物样品中脂连蛋白的患者水平，以及取自未患肥胖症受试者的生物样品中脂连蛋白的对照水平，(ii)将患者水平和对照水平进行比较，和(iii)如果患者水平低于测试水平，则推断该患者有发生肥胖症的风险。
在某些实施方案中，测量脂连蛋白和胰岛素二者的血清水平，如果患者中脂连蛋白和胰岛素的血清水平均低于未患病受试者中的水平，则该患者有发生疾病的风险。在另一实施方案中，测量患者的血清脂连蛋白和糖血指数，如果患者中的脂连蛋白血清水平低于未患病受试者中的水平并且患者还患有高糖血(high glycemia)，则该患者有发生疾病的风险。或者，可测量血清脂连蛋白和未羧化骨钙蛋白，或者可测量血清脂连蛋白、未羧化骨钙蛋白和胰岛素，并与对照进行比较，用于诊断代谢综合征、其组分或1型糖尿病。
如上文所公开的，在实施本发明的诊断方法时，生物样品选自血、血清、血浆、脑脊液、细胞样品或组织样品。在另一实施方案中，样品来自于人。
用于检测蛋白质表达水平的测定法是本领域技术人员公知的。这些测定包括例如基于抗体的免疫测定法。如本文所述使用抗体的方法尤其适用于下述细胞、组织和病症，所述细胞、组织和病症差异性表达骨钙蛋白、OST-PTP或γ-羧化酶，或者与本文中其他部分所讨论的病症有关。所述方法使用与目的蛋白及其片段或变体特异性结合的抗体。对治疗性应用而言，优选下述抗体，其识别OST-PTP并降低其与γ-羧化酶结合或使其脱磷酸化的能力。对诊断性用途而言，优选针对羧化不足/未羧化骨钙蛋白、γ-羧化酶、脂连蛋白和维生素K的抗体。即便抗体还结合与目的蛋白质不基本同源的其它蛋白质，也认为是选择性结合。这些其它蛋白质与目的蛋白的片段或结构域共有同源性。特定区域的保守性导致抗体通过同源序列结合两种蛋白质。在这种情况下，应当理解，结合目的蛋白质的抗体仍然是选择性的。然而在某些实施方案中，抗体不与除目的蛋白之外的蛋白质显著结合。
可通过诸如放射免疫测定、免疫放射测定和/或酶免疫测定的测定法来测定生物样品中的抗原(例如骨钙蛋白或其它目的蛋白)量。“放射免疫测定”是使用经标记(例如放射性标记)的抗原形式来检测和测量抗原浓度的技术。用于抗原的放射性标记的实例包括3H、14C和125I。如下测量样品(例如生物样品)中的抗原(例如骨钙蛋白)浓度使样品中的抗原与经(例如放射性)标记抗原竞争结合该抗原的抗体。为了确保经标记抗原和未标记抗原之间的竞争性结合，经标记抗原以足以饱和抗体结合位点的浓度存在。样品中抗原的浓度越高，与抗体结合的经标记抗原的浓度就越低。
在放射免疫测定中，为了测定与抗体结合的经标记抗原浓度，必须将抗原-抗体复合体与游离抗原分开。将抗原-抗体复合体与游离抗原分开的一种方法是用抗同种型抗血清沉淀抗原-抗体复合体。将抗原-抗体复合体与游离抗原分开的另一种方法是以用甲醛杀死的金黄色葡萄球菌(S.aureus)来沉淀抗原-抗体复合体。将抗原-抗体复合体与游离抗原分开的又一种方法是进行“固相放射免疫测定”，其中抗体与琼脂糖珠、聚苯乙烯孔、聚氯乙烯孔或微量滴定板孔连接(例如共价连接)。通过将结合抗体的经标记抗原浓度与基于已知抗原浓度样品的标准曲线进行比较，可以测定生物样品中的抗原浓度。
“免疫放射测定”(Immunoradiometric Assay，IRMA)是其中抗体试剂被放射性标记一种免疫测定法。IRMA需要通过诸如与蛋白质(例如兔血清白蛋白(RSA))缀合的技术产生多价抗原缀合物。所述多价抗原缀合物中每个分子必须含有至少2个抗原残基，并且抗原残基之间的距离必须足够远，以允许至少两个抗体与抗原结合。例如，在IRMA中，多价抗原缀合物可附着至固体表面(如塑料球)。向含有包被有多价抗原缀合物的球的试管中添加未标记“样品”抗原和针对抗原的放射性标记抗体。样品中的抗原与多价抗原缀合物竞争抗原-抗体结合位点。在孵育适当的时间后，洗涤去除未结合的反应物，并测定固相上放射性的量。结合的放射性抗体量与样品中的抗原浓度成反比。
最常见的酶免疫测定法是“酶联免疫吸附测定(ELISA)”。“酶联免疫吸附测定(ELISA)”是使用标记(例如与酶连接)形式的抗体来检测和测量抗原浓度的技术。在“夹心ELISA”中，抗体(例如骨钙蛋白抗体)与固相(例如微量滴定板)连接，并与含有抗原(例如骨钙蛋白)的生物样品接触。然后洗涤固相以去除未结合的抗原。然后将经标记(例如与酶连接)的抗体与已结合的抗原(如果存在的话)结合，形成抗体-抗原-抗体夹心。可与抗体连接的酶的实例为碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、萤光素酶、脲酶和β-半乳糖苷酶。与酶连接的抗体与底物反应，产生可以被测定的有色反应产物。
在“竞争性ELISA”中，将抗体与含有抗原(例如骨钙蛋白)的样品一起孵育。然后将抗原-抗体混合物与包被有抗原的固相(例如微量滴定板)接触。样品中存在的抗原越多，则可与固相结合的游离抗体就越少。然后向固相中添加经标记(例如与酶连接)的第二抗体，以测定与固相结合的第一抗体的量。
在“免疫组织化学测定法”中，测试组织切片中特定的蛋白质，这通过将该组织接触与被测蛋白质具有特异性的抗体来实现。然后通过多种方法中的任意方法使抗体显现，以确定蛋白质的存在与否和存在量。用于显现抗体的方法的实例为例如通过与该抗体连接的酶(例如萤光素酶、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶或β-半乳糖苷酶)，或化学方法(例如DAB/底物发色团)。
除了检测蛋白质表达水平以外，本发明的诊断测定法还可利用设计成检测RNA表达水平的方法。RNA表达水平可通过使用本领域技术人员公知的方法测定，包括例如使用Northern印迹、RT-PCR或原位杂交。
骨钙蛋白的羧化赋予对羟磷灰石的更高亲和力。通常，通过与羟磷灰石一起孵育并离心然后进行免疫测定来测量总骨钙蛋白。然后使用相同的免疫测定法测量上清液，其中含有未吸附至羟磷灰石的骨钙蛋白。该方法的结果可表述为绝对浓度，或者表述为羧化不足骨钙蛋白与羧化骨钙蛋白的比值。
另一方法使用单克隆抗体，所述抗体区分骨钙蛋白中所有或一些Glu/Gla残基的羧化状态。例如，GluOC4-5(TaKaRa目录号M171)与21和24位上带有(脱羧的)谷氨酸残基的人骨钙蛋白反应，而不与Gla型骨钙蛋白反应。
骨钙蛋白测量方法的综述见Lee等，2000，Ann.Clin.Biochem.37，432-446。
药物筛选和测定 提供了基于细胞和不基于细胞的药物筛选方法，以鉴定降低OST-PTP或γ-羧化酶之活性或表达或者提高羧化不足/未羧化骨钙蛋白之活性或表达水平的候选药剂。这些药剂可用于治疗或预防与能量代谢和OST-PTP信号转导途径相关的病症。这些病症包括代谢综合征、葡萄糖不耐受、1型或2型糖尿病、动脉粥样硬化或肥胖症。这些药剂可用于治疗下述病症，所述病症的特征是胰岛素产生降低、胰岛素敏感性降低和葡萄糖耐量降低或脂肪量增加。这些测定也可用于测定药剂在治疗或预防OST-PTP途径相关病症方面的有效性。
提供了不基于细胞的筛选方法来鉴定结合OST-PTP、γ-羧化酶或骨钙蛋白并因而调控所述蛋白质活性的化合物。
提供了鉴定或测定结合OST-PTP的药剂的筛选方法，所述方法包括以下步骤(i)提供包含OST-PTP或者其片段或变体的混合物，(ii)将所述混合物与药剂接触，(iii)确定该药剂是否与OST-PTP结合，和(iv)如果药剂与OST-PTP或其片段或变体结合，则对该药剂进行鉴定。该方法还可包括确定该药剂是否降低OST-PTP使γ-羧化酶脱磷酸之能力的步骤。
提供了鉴定或测定结合OST-PTP中磷酸酶1结构域的药剂的筛选方法，所述方法包括步骤(i)提供包含OST-PTP磷酸酶1结构域或者其片段或变体的混合物，(ii)将所述混合物与药剂接触，(iii)测定该药剂是否与OST-PTP磷酸酶1结构域结合，和(iv)如果该药剂与OST-PTP磷酸酶1结构域或其片段或变体结合，则对该药剂进行鉴定。该方法还可包括确定该药剂是否降低OST-PTP使γ-羧化酶脱磷酸之能力的步骤。
提供了鉴定或测定结合γ-羧化酶的药剂的筛选方法，所述方法包括步骤(i)提供包含γ-羧化酶或者其片段或变体的混合物，(ii)将该混合物与药剂接触，(iii)测定该药剂是否与γ-羧化酶结合，和(iv)如果该药剂与γ-羧化酶或其片段或变体结合，则对该药剂进行鉴定。该方法还可包括确定该药剂是否降低γ-羧化酶活性的步骤。
提供了鉴定或测定结合骨钙蛋白的药剂的筛选方法，所述方法包括步骤(i)提供包含骨钙蛋白或者其片段或变体的混合物，(ii)将所述混合物与药剂接触，(iii)测定该药剂是否与骨钙蛋白结合，和(iv)如果该药剂与骨钙蛋白或其片段或变体结合，则对该药剂进行鉴定。该方法还可包括确定该药剂是否提高骨钙蛋白活性的步骤。
可通过使用竞争性结合测定法来测定药剂的结合。竞争剂是已知与靶分子(即多种蛋白质之一)结合的结合部分，如抗体、肽、结合配偶体、配体等。在某些情况下，药剂与结合部分之间可能存在竞争性结合，结合部分取代了该药剂。
药剂可以是标记的。首先，向蛋白质中添加药剂或竞争剂之一种或二者均添加，直至时间足够允许结合(如果有结合的话)。可在有助于实现最佳活性的任何温度下进行孵育，通常在4℃和40℃之间。孵育时间针对最佳活性进行选择，但也可进行优化以便于进行快速高通量筛选。通常0.1至1小时就足够。通常去除或洗去过量的试剂。然后添加第二种组分，随后追踪经标记组分是否存在，以指示结合。
使用这些测定法，可首先添加竞争剂，然后添加药剂。对竞争剂的取代表明药剂与多种蛋白质之一发生了结合，因此能与其结合并可能调控其活性。在该实施方案中，可标记任一组分。因此，例如，如果标记竞争剂，则洗涤液中存在标记表示被药剂取代。或者如果标记药剂，则支持物上存在标记表示发生了取代。
在另一实例中，首先添加药剂、孵育并洗涤，然后添加竞争剂。竞争剂结合的缺失可能表示药剂以高亲和力与多种蛋白质之一结合。因此，如果标记药剂，则支持物上存在标记与缺乏竞争剂结合一起可表明该药剂能够结合多种蛋白质之一。
该方法可包括差异性筛选，以鉴定能调控多种蛋白质之一的活性的药剂。在这种情况下，该方法包括在第一样品中将蛋白质与竞争剂组合。第二样品包含药剂、蛋白质和竞争剂。药剂的添加在允许调控多种蛋白质之一的条件下进行。对两种样品测定竞争剂结合，两种样品之间结合的改变或差异表示存在能结合多种蛋白质之一并可能调控其活性的药剂。也就是说，如果竞争剂结合在第二样品中与第一样品不同，则该药剂能够结合多种蛋白质之一。
在测定中可使用阳性对照和阴性对照。优选所有对照和测试样品均至少一式三份进行，以获得有统计学意义的结果。所有样品的孵育均持续足以使药剂与蛋白质结合的时间。孵育后，将所有样品洗涤至不含非特异性结合的材料，并测定结合的(一般是经标记的)药剂量。例如，使用放射性标记时，可在闪烁计数器中计数样品，以测定已结合化合物的量。
筛选测定中可包含多种其它试剂。它们包括如可用于优化蛋白质-蛋白质结合和/或降低非特异性或背景相互作用的试剂，如盐、中性蛋白质(例如白蛋白)、去污剂等。也可使用以其它方式改善测定效率的试剂，如蛋白酶抑制剂、核酸酶抑制剂、抗微生物剂等。可以以提供必要结合的任何顺序添加组分混合物。
也可以不基于细胞来筛选调控多种蛋白质之一的活性的药剂。用于能调控多种蛋白质之一活性的药剂的方法包括以下步骤如上向多种蛋白质之一的样品中添加药剂，并测定所述多种蛋白质之一的生物活性改变。“调控多种蛋白质之一的活性”包括活性提高、活性降低，或者所存在活性类型或种类的改变。因此，药剂应当既与蛋白质结合(尽管这可能不是必需的)又改变其如本文定义的生物活性或生化活性。
因此，在一个实例中，该方法包括将蛋白质样品和药剂组合，并评价其对OST-PTP、γ-羧化酶或骨钙蛋白的影响。酶活性(特别是OST-PTP或γ-羧化酶活性)或本文中的语法等同的表述表示与酶相关的一种或多种生物活性。对OST-PTP而言，该活性优选地是使γ-羧化酶或胰岛素受体的脱磷酸；对γ-羧化酶而言，其为使骨钙蛋白羧化。筛选测定被设计成寻找这样的药剂，所述药剂在来自转化动物或细胞的生物样品中降低OST-PTP或者γ-羧化酶活性或提高羧化不足/未羧化骨钙蛋白和脂连蛋白水平。
具体地，提供了鉴定或测定降低OST-PTP活性的筛选方法，所述方法包括以下步骤(a)提供包含OST-PTP或者其片段或变体的对照和测试混合物，(b)将所述混合物与活性剂接触，(c)测定测试混合物和对照中OST-PTP的活性水平，和(d)如果测试混合物中的OST-PTP活性水平低于对照中的水平，则选择该生物活性剂。
提供了鉴定或测定降低γ-羧化酶活性的筛选方法，所述方法包括以下步骤(a)提供包含γ-羧化酶或者其片段或变体的对照和测试混合物，(b)在允许生物活性剂结合γ-羧化酶或者其片段或变体的条件下，向测试混合物中添加生物活性剂，(c)测定测试混合物和对照中γ-羧化酶的活性水平，和(d)如果测试混合物中的γ-羧化酶活性水平低于对照中的水平，则选择该生物活性剂。
提供了用于筛选或测定药剂的基于细胞的筛选方法，所述药剂降低编码OST-PTP的Esp基因或编码γ-羧化酶的基因的表达水平。或者可使用药物筛选测定法来鉴定或测定提高骨钙蛋白基因表达水平的药剂。
本发明还提供鉴定使骨钙蛋白脱羧的药剂的筛选方法，所述方法包括以下步骤(a)提供包含羧化骨钙蛋白的对照和测试混合物，(b)向测试混合物中添加药剂，(c)测定测试混合物和对照中的羧化骨钙蛋白水平，和(d)如果测试混合物中羧化骨钙蛋白水平低于对照中的活性，则选择该药剂。
提供了鉴定或测定药剂的基于细胞的方法，所述药剂降低OST-PTP基因的表达，所述方法包括步骤(a)测定细胞中OST-PTP的第一表达水平，(b)在与测试药剂接触后测定OST-PTP的第二表达水平；和(c)将第一表达水平与第二表达水平进行比较，其中如果第一表达水平高于第二表达水平，则鉴定出了能够降低OST-PTP表达的药剂。可通过测量所产生的OST-PTP mRNA量或所产生的OST-PTP蛋白量来测定OST-PTP基因的表达水平。
提供了鉴定或测定下述药剂的基于细胞的方法，所述药剂降低γ-羧化酶基因表达，所述方法包括步骤(a)测定细胞中γ-羧化酶的第一表达水平，(b)在与测试药剂接触后测定γ-羧化酶的第二表达水平；和(c)将第一表达水平与第二表达水平进行比较，其中如果第一表达水平高于第二表达水平，则鉴定出了能够降低γ-羧化酶表达的药剂。可通过测量所产生的γ-羧化酶mRNA量或所产生的γ-羧化酶蛋白量来测定γ-羧化酶基因的表达水平。
提供了鉴定或测定下述药剂的基于细胞的方法，所述药剂提高骨钙蛋白基因表达，所述方法包括步骤(a)测定细胞中骨钙蛋白的第一表达水平，(b)在与测试药剂接触后测定骨钙蛋白的第二表达水平；和(c)将第一表达水平与第二表达水平进行比较，其中如果第一表达水平低于第二表达水平，则鉴定出了能够提高骨钙蛋白表达的药剂。可通过测量所产生的骨钙蛋白mRNA量或所产生的骨钙蛋白蛋白量来测定骨钙蛋白基因的表达水平。
可利用报告基因来筛选能够调控基因表达的药剂。在这些测定中，产生含有基因构建体的细胞，所述构建体中报告基因的表达被置于天然目的基因(即OST-PTP、γ-羧化酶或骨钙蛋白基因)的天然基因表达调节元件的控制下。报告基因包括但不仅限于CAT、LacZ、萤光素酶或GFP。
提供了筛选或测定下述药剂的基于细胞的方法，所述药剂降低OST-PTP基因的表达，所述方法包括以下步骤(a)测定细胞中报告基因的第一表达水平，其中所述报告基因的表达处于天然OST-PTP基因表达调节元件控制下，(b)在与测试药剂接触后测定报告基因的第二表达水平；和(c)将第一表达水平与第二表达水平进行比较，其中如果第一表达水平高于第二表达水平，则鉴定出了能够降低报告基因表达的药剂。
提供了筛选或测定下述药剂的基于细胞的方法，所述药剂降低γ-羧化酶基因的表达，所述方法包括以下步骤(a)测定细胞中报告基因的第一表达水平，其中所述报告基因的表达处于天然γ-羧化酶基因表达调节元件控制下，(b)在与测试药剂接触后测定报告基因的第二表达水平；和(c)将第一表达水平与第二表达水平进行比较，其中如果第一表达水平高于第二表达水平，则鉴定出了能够降低γ-羧化酶基因表达的药剂。
提供了筛选或测定下述药剂的基于细胞的方法，所述药剂提高骨钙蛋白基因的表达，所述方法包括以下步骤(a)测定细胞中报告基因的第一表达水平，其中所述报告基因的表达处于天然骨钙蛋白基因表达调节元件控制下，(b)在与测试药剂接触后测定报告基因的第二表达水平；和(c)将第一表达水平与第二表达水平进行比较，其中如果第一表达水平低于第二表达水平，则鉴定出了能够提高骨钙蛋白基因表达的药剂。
提供了用于筛选降低OST-PTP或γ-羧化酶活性的药剂的基于细胞的筛选测定法。
具体地，提供了筛选下述药剂的基于细胞的方法，所述药剂降低OST-PTP活性，所述方法包括以下步骤(a)测定表达OST-PTP磷酸酶1结构域的第一细胞中的第一活性水平，(b)将表达OST-PTP磷酸酶1结构域的第二细胞与药剂接触，(c)测定表达OST-PTP磷酸酶1结构域的第二细胞中的第二活性水平；和(d)将第一活性水平与第二活性水平进行比较，其中如果第一活性水平高于第二活性水平，则该药剂降低OST-PTP活性。可通过测量γ-羧化酶的活性水平来测定OST-PTP的活性水平。可通过测量骨钙蛋白羧基化水平来测定OST-PTP的活性水平。
提供了筛选或测定降低下述药剂的基于细胞的方法，所述药剂降低γ-羧化酶活性，所述方法包括以下步骤(a)测定表达γ-羧化酶的第一细胞中的第一活性水平，(b)将表达γ-羧化酶的第二细胞与药剂接触，(c)测定表达γ-羧化酶的第二细胞中的第二活性水平；和(d)将第一活性水平与第二活性水平进行比较，其中如果第一活性水平高于第二活性水平，则该药剂降低γ-羧化酶活性。测量γ-羧化酶活性的测定法是本领域技术人员已知的(见例如Hubbard等，(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 866893-6897；Rehemtulla等，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 904611-4615)。
γ-羧化酶催化骨钙蛋白中特定的谷氨酸残基发生翻译后修饰，形成γ-羧基谷氨酸。在本发明的一个实施方案中，通过测量骨钙蛋白的羧化水平来测定γ-羧化酶活性或脱羧酶活性水平。
提供了筛选下述药剂的基于细胞的方法，所述药剂使骨钙蛋白脱羧，所述方法包括步骤(a)测定表达骨钙蛋白的第一细胞中羧化骨钙蛋白的第一水平，(b)将表达羧化骨钙蛋白的第二细胞与药剂接触，(c)测定羧化骨钙蛋白的第二水平，和(d)将羧化骨钙蛋白的第一水平与羧化骨钙蛋白的第二水平进行比较，其中如果羧化骨钙蛋白的第一水平高于第二水平，则该药剂使骨钙蛋白脱羧。
待用于筛选或测定方法的细胞包括天然表达OST-PTP、γ-羧化酶或骨钙蛋白的细胞；经遗传修饰而表达(或过表达)OST-PTP、OST-PTP的磷酸酶1结构域、γ-羧化酶或骨钙蛋白的细胞，以及来自本发明的转基因动物的细胞。这些细胞包括过表达OST-PTP或γ-羧化酶的转化成骨细胞。
提供了测试药剂在提高脂肪细胞中脂连蛋白表达方面的有效性的方法，包括(a)将成骨细胞和脂肪细胞共培养，(b)将成骨细胞与候选药剂接触，(c)测定该候选药剂是否将脂连蛋白或者其片段或变体的表达或分泌水平提高至高于对照共培养物中测量的对照水平，所述对照共培养物中成骨细胞不与候选药剂接触，和(d)如果该候选药剂将脂连蛋白表达或分泌水平提高至高于对照水平，则选择该候选药剂作为在脂肪细胞中提高脂连蛋白表达或分泌的药剂。
提供了测试药剂在提高胰腺β-细胞中胰岛素表达或分泌方面的有效性的方法，包括(a)将成骨细胞和胰腺β-细胞共培养，(b)将成骨细胞与候选药剂接触，(c)测定该候选药剂是否将胰岛素表达或分泌水平提高至高于对照共培养物中测量的胰岛素表达的对照水平，所述对照共培养物中成骨细胞不与候选药剂接触，和(d)如果该候选药剂将胰岛素表达或分泌水平提高至高于对照水平，则选择该候选药剂作为在胰腺β-细胞中提高胰岛素表达或分泌的药剂。
提供了测定候选药剂在动物中治疗或预防代谢综合征或与代谢综合征相关表型方面之能力的方法，所述表型选自1型或2型糖尿病的素因(predisposition)、葡萄糖不耐受、胰岛素产生降低、胰岛素敏感性降低、葡萄糖耐量降低、动脉粥样硬化和脂肪量提高，所述方法包括(a)提供测试动物和对照动物，(b)对测试动物施用候选药剂，(c)将测试动物中的羧化不足/未羧化骨钙蛋白水平与对照动物中的羧化不足/未羧化骨钙蛋白水平进行比较，和(d)如果测试动物中的羧化不足/未羧化骨钙蛋白水平高于对照动物中的羧化不足/未羧化骨钙蛋白水平，则选择该候选药剂。在本发明的一个具体的实施方案中，测量成骨细胞中羧化不足/未羧化骨钙蛋白水平。
在一个实例中，测量成骨细胞中羧化不足/未羧化骨钙蛋白的水平。候选药剂可与有利于被成骨细胞摄取的磷酸基结合。
提供了测定候选药剂在动物中治疗或预防代谢综合征或与代谢综合征相关表型方面之能力的方法，所述表型选自2型糖尿病的素因、葡萄糖不耐受、胰岛素产生降低、胰岛素敏感性降低、葡萄糖耐量降低、动脉粥样硬化和脂肪量提高，所述方法包括(a)提供第一动物和第二动物，(b)对所述第一动物施用候选药剂，(c)将步骤(b)中给予候选药剂的第一动物中的OST-PTP表达或活性水平与步骤(a)中未施用所述候选药剂的第二动物中的OST-PTP水平进行比较；其中选择降低OST-PTP表达或活性水平的候选药剂作为有效治疗代谢综合征或与之相关表型的药剂。
可测量成骨细胞中的OST-PTP表达或活性水平。另外，候选药剂可与有利于被成骨细胞摄取的磷酸基结合。
提供了测定候选药剂在动物中治疗或预防代谢综合征或与代谢综合征相关表型方面之能力的方法，所述表型选自1型或2型糖尿病的素因、葡萄糖不耐受、胰岛素产生降低、胰岛素敏感性降低、葡萄糖耐量降低、动脉粥样硬化和脂肪量提高，所述方法包括(a)提供第一动物和第二动物，(b)对所述第一动物施用候选药剂，(c)将步骤(b)中给予候选药剂的第一动物中骨钙蛋白的表达或活性或分泌水平与步骤(a)中未施用所述候选药剂的第二动物中骨钙蛋白的表达或活性水平进行比较；其中选择提高骨钙蛋白或其片段或变体的表达或活性或分泌的候选药剂作为有效治疗代谢综合征或与之相关表型的药剂。
提供了测定候选药剂在动物中治疗或预防代谢综合征或与代谢综合征相关表型方面之能力的方法，所述表型选自1型或2型糖尿病的素因、葡萄糖不耐受、胰岛素产生降低、胰岛素敏感性降低、葡萄糖耐量降低、动脉粥样硬化和脂肪量提高，所述方法包括(a)提供第一动物和第二动物，(b)对所述第一动物施用候选药剂，(c)将步骤(b)中给予候选药剂的第一动物中脂连蛋白的或其片段或变体表达或分泌水平与步骤(a)中未施用所述候选药剂的第二动物中脂连蛋白的表达或分泌水平进行比较；其中选择提高脂连蛋白或其片段或变体的表达或分泌水平的候选药剂作为有效治疗代谢综合征或与之相关表型的药剂。在这样的方法中，在脂肪细胞或血清中测量脂连蛋白的表达或分泌水平。
提供了筛选候选药剂在骨钙蛋白缺陷型小鼠中治疗或预防代谢综合征之能力的方法，其中所述骨钙蛋白缺陷型小鼠与野生型小鼠相比显示出选自以下的表型骨钙蛋白表达降低、1型或2型糖尿病素因、胰岛素分泌降低、动脉粥样硬化、胰岛素敏感性降低、脂连蛋白或者其片段或变体的表达或分泌降低、葡萄糖耐量降低和脂肪量提高，所述方法包括(a)提供第一和第二骨钙蛋白缺陷型小鼠，它们均与所述骨钙蛋白缺陷型小鼠来自于相同的品系；(b)对所述第一骨钙蛋白缺陷型小鼠施用候选药剂，(c)将步骤(b)中给予候选药剂的第一骨钙蛋白缺陷型小鼠的表型与步骤(a)中未施用所述候选药剂的所述第二骨钙蛋白缺陷型小鼠的表型进行比较；其中选择降低或改善该表型的候选药剂作为有效治疗代谢综合征的药剂。
提供了筛选候选药剂在脂连蛋白缺陷型小鼠中治疗或预防代谢综合征之能力的方法，其中所述脂连蛋白缺陷型小鼠与野生型小鼠相比显示出选自以下的表型1型或2型糖尿病素因、胰岛素分泌降低、胰岛素敏感性降低、动脉粥样硬化、葡萄糖耐量降低和脂肪量提高，所述方法包括(a)提供第一和第二脂连蛋白缺陷型小鼠，其均来自于相同的品系；(b)对所述第一脂连蛋白缺陷型小鼠施用候选药剂，(c)将步骤(b)中给予候选药剂的第一脂连蛋白缺陷型小鼠的表型与步骤(a)中未施用所述候选药剂的所述第二脂连蛋白缺陷型小鼠的表型进行比较；其中选择降低或改善该表型的候选药剂作为有效治疗代谢综合征的药剂。
提供了在怀疑降低成骨细胞中OST-PTP活性或表达的药剂中筛选用于治疗或预防下述疾病的治疗剂的方法，所述疾病选自代谢综合征、I或II型糖尿病、胰岛素分泌降低、胰岛素敏感性降低、葡萄糖耐量降低、脂肪量提高和动脉粥样硬化，所述方法包括a)获得在成骨细胞中选择性过表达OST-PTP的对照转基因小鼠，和来自与对照相同品系的第二转基因小鼠，b)对第一小鼠使用安慰剂，对第二小鼠使用治疗剂，c)测定来自第一和第二小鼠的成骨细胞样品中的OST-PTP活性水平，d)将第一小鼠中测定的OST-PTP活性水平与第二小鼠中的水平进行比较，和e)如果第一小鼠中的水平高于第二小鼠中的水平，则推断该药剂可用作治疗或预防该疾病的治疗化合物。
提供了在怀疑降低成骨细胞中γ-羧化酶活性或表达的药剂中筛选用于治疗或预防下述疾病的治疗剂的方法，所述疾病选自代谢综合征、I或II型糖尿病、胰岛素分泌降低、胰岛素敏感性降低、葡萄糖耐量降低、脂肪量提高和动脉粥样硬化，所述方法包括a)获得在成骨细胞中选择性过表达γ-羧化酶的对照转基因小鼠，和来自与对照相同品系的第二转基因小鼠，b)在允许治疗化合物发挥作用的相同条件下，对第一小鼠使用安慰剂，对第二小鼠使用治疗化合物，c)测定来自第一和第二小鼠的成骨细胞样品中γ-羧化酶活性水平，d)将第一小鼠中测定的γ-羧化酶活性水平与第二小鼠中的水平进行比较，e)如果第一小鼠中的水平高于第二小鼠中的水平，则推断该生物活性剂可用作降低成骨细胞中γ-羧化酶活性的治疗化合物。所述生物活性剂可以是酶抑制剂。
提供了筛选可能具有治疗或预防下述疾病的治疗用途的药剂的方法，所述疾病选自代谢综合征、I或II型糖尿病、胰岛素分泌降低、胰岛素敏感性降低、葡萄糖耐量降低、脂肪量提高和动脉粥样硬化，所述方法包括(a)提供患有该疾病的动物，(b)测定取自该动物的处理前生物样品中的羧化不足/未羧化骨钙蛋白量，(c)在允许药剂发挥作用的条件下对测试动物施用生物活性剂，(d)测定取自该动物的处理后生物样品中的羧化不足/未羧化骨钙蛋白量，和(e)如果与处理前样品相比，该生物活性剂提高处理后生物样品中羧化不足/未羧化骨钙蛋白的量，则推断该药剂具有该治疗用途。
提供了筛选可能具有治疗或预防下述疾病的治疗用途的生物活性剂的方法，所述疾病选自代谢综合征、I或II型糖尿病、胰岛素分泌降低、胰岛素敏感性降低、葡萄糖耐量降低、脂肪量提高和动脉粥样硬化，所述方法包括(a)提供患有该疾病的动物，(b)测定取自该动物的处理前生物样品中脂连蛋白的量，(c)在允许活性剂发挥作用的条件下对测试动物施用生物活性剂，(d)测定取自该动物的处理后生物样品中脂连蛋白的量，和(e)如果与处理前样品相比，该生物活性剂提高处理后生物样品中脂连蛋白的量，则推断该药剂具有该治疗用途。
本文中使用术语“药剂”或“外源化合物”包括能够直接或间接改变多种蛋白质(OST-PTP、γ-羧化酶、骨钙蛋白)之一的生物活性的任何分子，例如蛋白质、寡肽、小有机分子、多糖、多核苷酸、脂质等，或其混合物。一些药剂可用于治疗。一般以不同的药剂浓度同时测试多种测定混合物，以获得对多种浓度的不同应答。通常，这些浓度之一用作阴性对照，即处于零浓度或低于检测水平。
筛选中使用的药剂包括大量化学品类型，尽管它们通常是有机分子，优选地是具有下述分子量的小有机化合物，所述分子量高于100并低于约2,500道尔顿，优选低于约500道尔顿。药剂包含与蛋白质发生结构相互作用(尤其是氢键键合)所需的官能团，并通常包含至少胺、羰基、羟基或羧基，优选地至少两个所述化学官能团。药剂经常包含环状碳结构或杂环结构和/或芳香族或多芳香族结构，所述结构被一个或多个上述官能团取代。药剂还存在于生物分子中，包括肽、糖、脂肪酸、类固醇、嘌呤、嘧啶、其衍生物、结构类似物或其组合。尤其优选的是肽。
可从大量来源获得高纯度小有机配体和肽激动剂的文库，所述配体和激动剂具有已充分证明的药理学活性。一个实例是含有1,866种药物样化合物(小的，中度疏水性)的NCI多样性集合。另一个实例是已知生物活性剂(467种化合物)的化学及细胞生物学研究所(Institute of Chemistryand Cell Biology，ICCB；由Harvard Medical School维护)集合，其包含许多扩展的柔性化合物。ICCB文库的一些其它实例是Chem BridgeDiverSet E(16,320种化合物)；Bionet 1(4,800种化合物)；CEREP(4,800种化合物)；Maybridge 1(8,800种化合物)；Maybridge 2(704种化合物)；Maybridge HitFinder(14,379种化合物)；Peakdale 1(2,816种化合物)；Peakdale 2(352种化合物)；ChemDiv Combilab and International(28,864种化合物)；Mixed Commercial Plate 1(352种化合物)；MixedCommercial Plate 2(320种化合物)；Mixed Commercial Plate 3(251种化合物)；Mixed Commercial Plate 4(331种化合物)；ChemBridgeMicroformat(50,000种化合物)；Commercial Diversity Set1(5,056compounds)。其它NCI集合为Structural Diversity Set，第2版(1,900种化合物)；Mechanistic Diversity Set(879种化合物)；Open Collection 1(90,000种化合物)；Open Collection 2(10,240种化合物)；KnownBioactives CollectionsNINDS Custom Collection(1,040种化合物)；ICCBBioactives 1(489种化合物)；SpecPlus Collection(960种化合物)；ICCBDiscretes Collections。以下的ICCB化合物各自收集自ICCB、哈佛和其它合作机构的化学家ICCB1(190种化合物)；ICCB2(352种化合物)；ICCB3(352种化合物)；ICCB4(352种化合物)。天然产物提取物NCIMarine Extracts(352孔)；有机级—NCI植物和真菌提取物(1,408孔)；菲律宾植物提取物1(200孔)；ICCB-ICG Diversity Oriented Synthesis(DOS)Collections；DDS1(DOS Diversity Set)(9600孔)。化合物文库也可得自商业供应商，如ActiMol、Albany Molecular、Bachem、Sigma-Aldrich、TimTec等。
可对筛选中鉴定出的已知药剂和新药剂进一步进行定向的或随机的化学修饰，如酰化、烷基化、酯化、酰胺化(amidification)，以产生结构类似物。
筛选、设计或修饰化合物时，要考虑的其它因素包括Lipinski的五规则(不多于5个氢键供体(OH和NH基团)；不多于10个氢键受体(特别是N和O)；分子量在500g/mol以下；分配系数log P低于5)和Veber准则，它们是制药领域所公认的，并涉及使分子更像药物或更不像药物的特性和结构特征。
药剂可以是蛋白质。本文上下文中“蛋白质”表示至少两个共价连接的氨基酸，包括蛋白质、多肽、寡肽和肽。蛋白质可由天然氨基酸和肽键构成，或着由合成的拟肽结构(peptidomimetic structures)构成。因此本文使用“氨基酸”或“肽残基”指天然氨基酸以及合成氨基酸。例如，高苯丙氨酸(homo-phenylalanine)、瓜氨酸和正亮氨酸(noreleucine)被认为是用于本发明目的的氨基酸。“氨基酸”还包括亚氨基酸残基如脯氨酸和羟脯氨酸。侧链可以是(R)或(S)构型。在一个优选的实施方案中，氨基酸为(S)或L-构型。如果使用非天然侧链，则可使用非氨基酸取代基，例如用于防止或延缓体内降解。
药剂可以是天然蛋白质或天然蛋白质的片段或变体。因此，可使用例如含有蛋白质的细胞提取物，或蛋白质细胞提取物的随机或定向消化物。藉此，可制造原核蛋白质和真核蛋白质的文库，用于针对多种蛋白质之一进行筛选。可使用细菌、真菌、病毒和哺乳动物蛋白质的文库，优选后者，特别优选人蛋白质。
药剂可以是从约5个到约30个氨基酸的肽，优选从约5个到约20个氨基酸，尤其优选从约7个到约15个氨基酸。肽可以是如上文所述的天然蛋白质消化物、随机肽、或“偏向(biased)”随机肽。“随机化”或本文中在语法上等同的表述表示各个核酸和肽基本上分别由随机的核苷酸和氨基酸组成。因为通常这些随机肽(或核酸，在下文讨论)是化学合成的，所以它们可在任何位置上掺入任何核苷酸或氨基酸。合成方法可被设计成产生随机化的蛋白质或核酸，以允许形成在该序列全长上所有或大部分可能的组合，从而形成随机化药剂生物活性蛋白质药剂的文库。
文库可以是完全随机化的，在任何位置上都没有序列偏好，也不保持恒定。文库可以是偏向的。也就是说，序列中的一些位置保持不变，或选自数目有限的可能性。例如，核苷酸或氨基酸残基在确定的类别内(例如疏水氨基酸、亲水残基、立体偏向(或小或大)残基中)进行随机化，以倾向于产生用于交联的半胱氨酸，用于SH-3结构域的脯氨酸，用于磷酸化位点等的丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸或组氨酸等，或针对嘌呤等。
药剂可以是分离的核酸，优选反义、siRNA或cDNA，其与编码目的蛋白的基因或其mRNA结合，以分别阻断基因表达或mRNA翻译。“核酸”或“寡核苷酸”或本文中的语法等同表述表示共价连接在一起的至少两个核苷酸。这些核酸通常含有磷酸二酯键，尽管在一些情况下(如下文所述)包括可具有其他主链的核酸类似物，其包含例如磷酰胺(Beaucage等，Tetrahedron 49)10)1925(1993)及其参考文献；Letsinger，J.Org.Chem.353800(1970)；Sprinzl等，Eur.J.Biochem.81579(1977)；Letsinger等，Nucl.Acids Res.143487(1986)；Sawai等，Chem.Lett.805(1984)，Letsinger等，J.Am.Chem.Soc.1104470(1988)；以及Pauwels等，Chemica Scripta 2614191986))、硫代磷酸酯(Mag等，Nucleic Acids Res.191437(1991)；和美国专利No.5,644,048)、二硫代磷酸酯(Briu等，J.Am.Chem.Soc.1112321(1989))、O-甲基亚磷酰胺键(O-methylphophoroamidite)(见Eckstein，Oligonucleotides andAnaloguesA Practical Approach，Oxford University Press)和肽核酸主链和键(见Egholm，J.Am.Chem.Soc.1141895(1992)；Meier等，Chem.Int.Ed.Engl.311008(1992)；Nielsen，Nature，365566(1993)；Carlsson等，Nature 380207(1996)，均通过参考并入本文)。
其它类似物核酸包括具有正电主链(Denpcy等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 926097(1995))；非离子主链(美国专利号Nos.5,386,023、5,637,684、5,602,240、5,216,141和4,469,863；Kiedrowshi等，Angew.Chem.Intl.Ed.English 30423(1991)；Letsinger等，J.Am.Chem.Soc.1104470(1988)；Letsinger等，Nucleoside & Nucleoside 131597(1994)；第2和3章，ASCSymposium Series 580，″Carbohydrate Modifications in AntisenseResearch″，Y.S.Sanghui和P.Dan Cook编辑；Mesmaeker等，Bioorganic& Medicinal Chem.Lett.4395(1994)；Jeffs等，J.Biomolecular NMR3417(1994)；Tetrahedron Lett.37743(1996))和非核糖主链(包括美国专利No.5,235,033和5,034,506，和第6和7章，ASC Symposium Series 580，″Carbohydrate Modifications in antisense Research″，Y.S.Sanghui和P.Can Cook编辑中所述)的类似物核酸。含有一个或多个碳环糖的核酸也包括在核酸的定义中(见Jenkins等，Chem.Soc.Rev.(1995)pp 169-176)。多种核酸类似物描述于Rawls，C & E News Jun.2，1997第35页。所有这些参考文献明确地通过参考并入本文。可对核糖-磷酸主链进行这些修饰以有利于加入其他部分(如标记)，或提高这些分子在生理环境中的稳定性和半衰期。另外，可以制造天然酸与类似物的混合物。或者，可以制造不同核酸类似物的混合物，和天然核酸与类似物的混合物。如所述，核酸可以是单链或双链的，或同时含有双链或单链的部分。核酸可以是DNA(基因组和cDNA)、RNA或杂交体，其中所述核酸含有脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸的任何组合以及碱基的任何组合，所述碱基包括尿嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘌呤、肌苷、黄嘌呤、次黄嘌呤、异胞嘧啶(isocytosine)、异鸟嘌呤(isoguanine)等。
如上文针对蛋白质所一般描述的，核酸药剂可以是天然核酸、随机核酸、或“偏向的”随机核酸。例如，可如上文针对蛋白质所述那样使用原核或真核基因组的消化物。
药剂可得自组合化学品文库，大量所述文库可在文献中获得。“组合化学品文库”在本文中表示以确定或随机的方式(通常通过化学合成)产生的不同化合物的集合。通过组合混合可合成数百万种化合物。
可以以多种方式完成药剂与多种蛋白质之一结合的测定。在一个优选的实施方案中，将药剂标记，并直接测定结合。例如，这可如下完成将多种蛋白质之一的全部或部分附着于固体支持物上，添加经标记的药剂(例如包含荧光标记的药剂)、洗去过量的试剂，并测定该标记是否存在于固体支持物上。可使用本领域已知的多种封闭和洗涤步骤。
“标记的”在本文中表示用提供可检测信号的标记直接或间接地标记药剂，所述标签例如放射性同位素(如3H、14C、32P、33P、35S或125I)、荧光或化学发光化合物(如异硫氰酸荧光素、罗丹明或萤光素)、酶(如碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或辣根过氧化物酶)、抗体、颗粒如磁性颗粒，或特异性结合分子等。特异性结合分子包括结合对，如生物素和链霉亲和素、地高辛和抗地高辛等。对特异性结合成员而言，其互补成员通常应当根据如上文所列的已知步骤用提供检测的分子进行标记。标记可直接或间接地提供可检测的信号。可以仅标记一种组分。或者，可用不同的标记来标记多于一种组分。
序列表 下文列出与本申请相关的全部核酸和氨基酸序列表。可使用本领域已知和本文所述的常规方法(包括敲入和敲除小鼠)，产生过表达或低表达任何所列核酸(Esp、骨钙蛋白、脂连蛋白、γ-羧化酶、载脂蛋白E的cDNA)的转基因小鼠和从它们分离而来的细胞(特别是成骨细胞和脂肪细胞)。在某些情况下，将核酸插入宿主生物的基因组中，所述核酸与启动子和调节元件(内源或异源的)有效连接并处于其控制下，所述启动子和调节元件会导致所述生物过表达该核酸基因或mRNA。带有待扩增基因的转染载体中所包含内源/异源启动子的一个实例是α1(I)胶原。许多这样的启动子是本领域已知的。可以用带有人Esp或人骨钙蛋白cDNA(或其片段或变体)的载体转染人成骨细胞，所述cDNA与引起被转染的人成骨细胞过表达骨钙蛋白(或其片段或变体)的已知启动子和调节元件有效连接。本文公开了过表达骨钙蛋白(或其片段或变体)、OST-PTP或γ-羧化酶的转基因小鼠和小鼠细胞，和转染的人细胞。本文还公开了缺失骨钙蛋白、Esp、γ-羧化酶和脂连蛋白的一个或全部两个等位基因的双重突变体小鼠，以及双重突变体的多种组合。本文还公开了带有编码蛋白质的cDNA或mRNA的载体，用于插入靶动物或细胞的基因组中。这些载体可任选地包含与cDNA或mRNA有效连接的启动子和调节元件。“有效连接”表示启动子和调节元件与cDNA或mRNA以使得该cDNA或mRNA的表达在该启动子和调节元件的控制之下的方式连接。
可产生分别与编码OST-PTP或γ-羧化酶的基因和mRNA特异性杂交的反义和小干扰RNA，用于降低OST-PTP和γ-羧化酶的表达，从而在动物中治疗或预防代谢综合征或其组分或1型糖尿病。小鼠(OST-PTP，Ptprv)cDNA的序列在SEQ ID NO18中公开。(OST-PTP，Ptprv)蛋白质的氨基酸序列在SEQ ID NO19中公开。该cDNA会与OST-PTP的mRNA杂交并由此干扰其翻译。降低OST-PTP表达会提高羧化不足/未羧化的骨钙蛋白。小鼠γ-羧化酶的cDNA示于SEQ ID NO12，其氨基酸序列为SEQED NO13。该cDNA会与γ-羧化酶的mRNA杂交并由此干扰其翻译，并且是一个优选的实施方案。人γ-羧化酶的cDNA示于SEQ ID NO10，其氨基酸序列为SEQ ID NO11。人γ-羧化酶cDN可用于治疗，以降低γ-羧化酶表达，从而治疗或预防代谢综合征及其组分和1型或2型糖尿病。
实施例 在本文中通过上述实验和以下的实施例来阐述本发明，它们不应被理解为限制。本申请通篇中引用的所有参考文献、未决专利申请和公开专利的内容通过参考明确地并入本文。本领域技术人员会理解，本发明可以许多不同形式实施，并且不应被理解为仅限于本文公开的实施方案。相反，提供这些实施方案用于将本公开内容完全传达给本领域的技术人员。鉴于前述说明书中存在的教导，本发明所属领域的技术人员会明白本发明的许多修改和其它实施方案。尽管使用了一些特定的术语，但是除非另有说明，否则它们均以本领域中的含义使用。
材料和方法 Esp-nLacZ小鼠是指Esp缺陷型小鼠模型，其中该动物的所有细胞中OST-PTP的一个(+/-)或两个(-/-)等位基因已被失活。nLacZ(或LacZ)小鼠通过靶向的OST-PTP等位基因与转基因的同源重组来产生，所述转基因具有编码核定位LacZ盒的序列，其同源重组进OST-PTP等位基因的外显子6中，以使该转基因与OST-PTP基因框内融合，并且该转基因的表达与OST-PTP等位基因的天然基因表达调节序列有效连接。Esp KI(敲入)＝Esp nLacZ(-/-)小鼠。
使用靶向载体产生Esp-nLacZ小鼠，所述靶向载体被设计成向外显子6中插入核定位的LacZ(nLacZ)盒，使得LacZ与OST-PTP序列框内融合(Dacquin等，2004；Ducy等，1996)。使用小鼠cDNA片段从小鼠基因组文库(129ola品系)分离跨越整个小鼠Ptprv基因的基因组克隆(Lee等，[1996])。构建靶向载体，其包含HPRT次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶小基因选择盒、内部核糖体进入位点(Mountford等，1994)以及含有与LacZ基因融合的SV40核定位序列(nLacZ)的报告基因。向其中克隆进与来自基因5′端的4.4kb同源性序列和来自基因3′端的1.9kb同源性序列。使用标准技术(Joyner，1999)在E14Tg2A饲养细胞(feeder)非依赖性胚胎干(ES)细胞(Hooper等，1987)中进行基因打靶。如先前所述(Thompson等，1989)将经打靶的ES细胞在HAT(10μM次黄嘌呤、9μM氨基蝶呤、20μM胸苷)选择培养基中进行选择。组织培养基是补充了10％胎牛血清(FCS)、0.1mM 2-巯基乙醇、1mM丙酮酸钠和约103U/ml白血病抑制因子的GMEM(Glasgow Modified Eagles Media；Gibco)。使用Gene Pulser(Bio-Rad)，在800V和3μFD下，在800微升磷酸盐缓冲液(PBS)中用20微克经NotI线性化的载体DNA对总计5×106个细胞进行电穿孔，并铺板在明胶包裹的10cm组织培养板上。48小时后，将细胞转移至HAT选择培养基中。使用与靶向载体中整合位点5′和3′同源性序列以外的区域互补的放射性标记cDNA片段，通过Southern杂交鉴定经打靶的ES细胞克隆，并通过使用LacZ探针检验单拷贝整合。向C57BL/6胚泡中注射经打靶的ES细胞，随后将其转移进代孕母体中。将嵌合体雄性与MF1品系雌性交配，并使用来自灰色后代的尾尖DNA的Southern印迹分析或聚合酶链式反应(PCR)来鉴定杂合体动物。将突变与MF1品系杂交五代，以提供用于随后分析的杂合体小鼠。该突变导致缺失大部分OST-PTP胞外结构域、其跨膜和胞内结构域(1)。这种突变体等位基因被称作Esp nLacZ突变体等位基因或Esp KI(敲入)突变体基因。在Esp nLacZ突变体小鼠中，该动物所有细胞中OST-PTP的一个(+/-)或全部两个(-/-)等位基因被失活，从而干扰OST-PTP表达。
“Esp osb突变体小鼠”是Esp缺陷型小鼠模型，其中仅从该动物的成骨细胞中缺失或敲除了一个(+/-)或两个(-/-)OST-PTP等位基因，从而选择性地阻断成骨细胞中的OST-PTP合成。这不应与缺乏一个或全部两个瘦素等位基因的ob突变体混淆。Esp osb小鼠在一个或两个内源OST-PTP等位基因中带有破坏，其中在一个(+/-)或两个(-/-)OST-PTP等位基因中编码OST-PTP等位基因磷酸酶结构域的外显子24到35已被缺失并替换成侧翼为loxP位点(floxed)的新霉素抗性基因。
将内含子23和35中带有LoxP位点以及侧翼为loxP位点的新霉素抗性盒的靶向载体电穿孔进ES细胞中。将经打靶的ES细胞注射进129Sv/EV胚泡细胞中，产生带有侧翼为loxP位点之等位基因(Espflox)的嵌合小鼠。将Espflox/+小鼠与a1(I)胶原-Cre小鼠杂交，产生Espob-/+小鼠，并将其后代互交获得Espob-/-小鼠。可将带有侧翼为loxP位点之Esp等位基因的小鼠与在任何目的启动子控制下表达重组酶的转基因小鼠交配，以在该启动子具有活性的细胞中特异性失活Esp基因。在Espob中，仅在成骨细胞中失活OST-PTP的一个(/-)或全部两个(-/-)等位基因，从而仅在这些细胞中干扰OST-PTP的表达。分子分析显示，重组在成骨细胞的Esp基因座上高频率发生，但是在任何其它组织或细胞类型(包括睾丸、脂肪细胞或胰腺β-细胞)中则不然(

图1C和1D)。Northern印迹分析证实这是无效等位基因，而使用Southern印迹杂交证明了成骨细胞中Esp切除的效力(图1C)。定量RT-PCR和Western分析在Espob-/-小鼠的骨中分别未能检测到Esp mRNA或OST-PTP蛋白，而Esp mRNA和OST-PTP蛋白质在Esposb-/-小鼠的睾丸中都存在(图1D)。这些数据表明实现了成骨细胞特异性Esp失活。
本文使用的“Esp缺陷型小鼠”表示任何这两种转基因小鼠品系其中骨睾丸蛋白质酪氨酸磷酸酶OST-PTP(由Esp基因编码)的两个等位基因像Esposb-/-小鼠那样均被缺失(敲除)，或像Esp-nLacz-/-小鼠那样均被破坏或(敲入)。
图22显示了产生Esposb-/-小鼠方法的某些细节和Esp-/-动物中正常的骨形成。图23关于将1月龄WT与Esp-/-小鼠在多种代谢和生理参数方面进行比较Esp-/-小鼠中C-肽的血清水平(A)；血清胰高血糖素水平(左)和胰腺中胰高血糖素含量(右)(B)；和IGF-1(C)、PYY(D)和胰淀素(E)的血清水平；(F)10周龄WT和Esp-/-小鼠中通过质子磁共振波谱(1H-MRS)计算的肌肉量相对于体重的比值；(G)10周龄WT和Esp-/-小鼠的质子1H-MRS的代表性图像；(H)1月龄和3月龄Esp-/-和WT小鼠的每日食物摄入；(I和J)1月龄Esp-/-和WT小鼠中TNF-α(左)和IL-6(右)通过实时PCR进行的表达水平比较(I)和血清水平(J)的比较；和(K)1月龄Esp-/-和WT小鼠中血清瘦素(左)和抵抗素(右)的水平。在所有图中，数据表示实验的均值±SD。＊，P＜0.01(t检验)。
图24显示GTG对VMH核破坏的解剖学情况。图25显示共培养测定期间不存在细胞转分化。图26显示骨钙蛋白表达是骨特异性的。18.5dpc胚胎的胰腺中骨钙蛋白和Esp表达的原位杂交分析显示，这两个基因均不在胰腺中表达。使用胰岛素表达作为阳性对照。使用邻近切片的苏木精-伊红染色来评价组织完整性。从1月龄WT小鼠中收集的成骨细胞、脂肪细胞和胰岛中骨钙蛋白表达的实时PCR分析显示，骨钙蛋白在脂肪细胞和胰岛中不表达。
产生胶原α1(I)-PTP和胶原α1(I)-PTPED转基因小鼠。产生下述转基因小鼠，其过表达全长Esp cDNA(α1(I)胶原-OST-PTP)，或过表达仅编码OST-PTP胞外结构域(在本文中也称作可溶结构域)的截短形式的该cDNA(α1(I)胶原-OST-PTPEC小鼠)。所述胞外结构域在本文中也称作可溶结构域(SD)。这些cDNA基因处于α1(I)胶原的成骨细胞特异性调节元件的控制下，以产生体内在成骨细胞中过表达ESP(OST-PTP)或OST-PTP胞外结构域的小鼠。
在1月龄时，α1(I)胶原-Esp转基因小鼠显示在禁食后和喂饲后血清葡萄糖均提高、喂饲后胰岛素血清水平降低，和能量消耗降低。相应地，葡萄糖耐量测试(GTT)显示α1(I)胶原-Esp小鼠是葡萄糖不耐受的，而胰岛素耐量测试(ITT)确定它们是胰岛素抗性的(图4)。总之，该转基因小鼠的表型是在Esp-缺陷型小鼠中所观察到表型的镜像(相反)。另外，该EspcDNA全转录本转基因纠正了Esp-缺陷型糖尿病抗性小鼠中的所有代谢异常。转基因小鼠过表达全长Esp cDNA(α1(I)胶原-Esp)，或过表达仅编码OST-PTP胞外结构域(在本文中称作可溶结构域)的截短形式的该cDNA(α1(I)胶原-Esp EC小鼠)。
产生ApoE-PTP、ApoE-PTPSD(也称作ApoE-PTPED)转基因小鼠。将全长小鼠Esp cDNA或编码胞外结构域(ED)的1到1111位氨基酸的Esp小鼠cDNA片段克隆进载体中，所述载体使用ApoE基因的启动子指导肝特异性表达。与OST-PTP的全cDNA转录本的表达相反，表达仅编码OST-PTP胞外结构域的截短形式该cDNA的载脂蛋白E-OST-PTPEC转基因小鼠与野生型小鼠是不可区分的。这些实验进一步证明了OST-PTP通过其细胞内磷酸酶结构域调节能量代谢。
产生骨钙蛋白缺陷型(也称作Ocn-/-或Bgp-/-)小鼠。“骨钙蛋白缺陷型小鼠”指其中两个骨钙蛋白等位基因均被缺失的品系。在本文所述的骨钙蛋白缺陷型转基因小鼠中，编码成熟蛋白的骨钙蛋白基因1(OG1)外显子4和整个骨钙蛋白基因2(OG2)序列被缺失，而留下了骨钙蛋白相关基因(osteocalcin-related gene，ORG)。正确的打靶导致整个成熟的骨钙蛋白编码序列被替换为pGKNeo选择盒。
先前报道了骨钙蛋白-/-小鼠的产生(Ducy等，1996)。编码成熟蛋白的骨钙蛋白基因1(OG1)外显子4和整个骨钙蛋白基因2(OG2)序列被缺失，而留下了骨钙蛋白相关基因(ORG)。正确的打靶导致整个成熟的骨钙蛋白编码序列被替换为pGKNeo选择盒。这些小鼠的分析在图5-7和表1中报道。
产生脂连蛋白缺陷型小鼠和Ocn+/-；脂连蛋白+/-小鼠。根据先前描述的策略(Maeda等，2002)产生脂连蛋白缺陷型小鼠，其中脂连蛋白基因的一个(+/-)或全部两个(-/-)等位基因的外显子2和3被缺失。然后将脂连蛋白/-或-/-与Ocn-/-或+/-小鼠杂交，产生脂连蛋白+/-；Ocn+/-小鼠。这些小鼠的分析在图6中报道。
产生SAP-脂连蛋白转基因小鼠。可产生过表达脂连蛋白的转基因小鼠。这样的转基因小鼠的基因组中带有编码脂连蛋白的异源cDNA，其处于小鼠血清淀粉样蛋白(serum amyloid protein，SAP)基因的调节元件的控制下，这相对于野生型效果产生选自以下的效果脂连蛋白的产生、分泌和活性提高。在一些情况下，cDNA由SEQ ID NO8定义。用于产生这样的小鼠的构建体包括下述构建体，所述构建体包含处于血清淀粉样蛋白启动子控制下的脂连蛋白cDNA，该构建体称作pSAP-Adipo。可从这些转基因动物中分离细胞，包括脂肪细胞。
为了产生过表达脂连蛋白的小鼠，将脂连蛋白的小鼠cDNA亚克隆进含有人SAP启动子和兔β-珠蛋白非编码外显子/内含子的盒的上游(图28)。在每种性别的3月龄WT和脂连蛋白转基因幼仔和小鼠中测量脂肪垫重量(图28D)。评价WT和Sap-脂连蛋白转基因小鼠中的食物摄入和能量消耗，以确定是否在Esp缺陷型小鼠中观察到的能量消耗提高仅仅是因为其脂连蛋白血清水平提高。还证实了提高的血清脂连蛋白水平不会影响食欲。为此，使用代谢笼和设备。在WT和Sap-脂连蛋白转基因小鼠中于出生时、2、4、8和16周龄时测量血清葡萄糖水平。在成年小鼠中，这在禁食后和喂饲后进行。在相同的样品中，测量血清胰岛素和脂连蛋白水平(图28C和28E)。在成年小鼠的血清中测量血清瘦素水平。通过胰岛素耐量测试评价胰岛素敏感性(图28F)使小鼠禁食6小时，腹膜内注射胰岛素(0.2U/kg体重)，并如所述指定的时间测量葡萄糖水平(Mauvais-Jarvis等，2002)。ITT数据表示为初始血糖浓度的百分比。通过在葡萄糖腹膜内注射后进行的葡萄糖耐量测试以及葡萄糖刺激的胰岛素分泌二者来测定胰岛素分泌。在腹膜内注射2g/kg葡萄糖后0、2、5、15和30分钟获取血样用于GSIS，0、15、30、60和120分钟获取血样用于GTT。使用自动化葡萄糖检测仪测定全血葡萄糖值。组织学分析。我们观察到，尽管Esp缺陷型小鼠更大，但是其中存在的脂肪细胞比WT小鼠更少，提示它们不能释放脂肪。可在1月和2月龄WT和Sap-脂连蛋白转基因小鼠中进行相同的分析。为了证实大脂肪细胞尺寸揭示了它们不能够释放脂肪，可使WT、Esp缺陷型和Sap-脂连蛋白的1月龄小鼠禁食16到24小时，并测量游离脂肪酸(FFA)的血清水平。预计在Esp缺陷型和Sap-脂连蛋白小鼠中FFA水平不会像在WT小鼠中那样提高。
产生Sap-胰岛素转基因小鼠。本文中公开了一种转基因小鼠，其基因组带有编码全长小鼠胰岛素的cDNA，所述cDNA处于小鼠血清淀粉样蛋白(SAP)基因启动子和调节元件的控制下，其相对于野生型产生包括提高胰岛素表达和分泌在内的效果。
为了产生过表达胰岛素的小鼠，将小鼠胰岛素cDNA亚克隆进含有人SAP启动子和兔β-珠蛋白非编码外显子/内含子的盒的上游。使用相同的代谢/分子测试组分析这些转基因小鼠，包括用于研究Sap-脂连蛋白转基因小鼠的测试组。这些研究展示在图29中。
底物捕获。如下制备用于底物捕获实验的质粒将编码第一磷酸酶结构域(1116-1412位氨基酸)的大鼠OST-PTP序列克隆进编码GST(谷胱甘肽S-转移酶)的pGEX 4T3(Amersham)的BamHI位点。使用该构建体(GST-PTP)通过定点诱变产生Asp1316Ala GST-PTP DA，其为导致酶-底物相互作用稳定化的催化性突变体。在已知介导这类磷酸酶的脱磷酸功能的磷酸酶1结构域中产生突变。与野生型GST-PTP相比，GST-PTPD1316A突变体具有降低的磷酸酶活性，但是具有提高的底物结合能力。因此，其与野生型蛋白相比能够更好地保留(即“捕获”)底物。表达突变体OST-PTPD1316A的细胞会捕获作为OST-PTP通常靶标的任何底物，但是该突变体酶不能使底物脱磷酸。因此，其保持在底物上而不释放底物。然后通过离心将各实验条件的蛋白质复合体离心下来，洗涤4次并通过western印迹进行分析。
对底物捕获实验而言，在裂解缓冲液(50mM Tris-HCl，pH 7.5、5mM EDTA、150mM NaCl、1％Triton、0.1％CHAPS、5mM碘乙酸、10mM磷酸钠、10mM NaF)中裂解细胞。将细胞裂解物与GST、GST-PTPWT(GST与OST-PTP磷酸酶结构域I的融合物)或GST-PTPD1316A(磷酸酶结构域I的Asp的捕获突变体)孵育。将重组蛋白与琼脂糖珠在4℃下结合1小时(胰岛素受体捕获)或在4℃下结合2小时(γ-羧化酶底物捕获)。将沉淀物收集、用裂解缓冲液洗涤4次并用SDS-PAGE分离，随后进行western印迹。使用兔抗胰岛素受体抗体(Santa-Cruz，C-19)检测胰岛素受体(InsR)，并通过小鼠抗-GST抗体(Santa-Cruz)检测GST。使用兔抗γ-羧化酶抗体检测γ-羧化酶。
OST-PTP的底物是胰岛素受体和γ-羧化酶。为了确定OST-PTP是否通过γ-羧化酶发挥作用，我们在原代成骨细胞中进行底物捕获实验。在补充有抗坏血酸(100μg/ml)和β-磷酸甘油(5mM)的αMEM/10％胎牛血清(FBS)中将分化的原代成骨细胞(d10)培养10天。然后在仅补充了1％FBS的相同培养基中使其饥饿24小时，并用不可逆的蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂过钒酸盐(pervanadate)(100μM)和20％FBS处理30分钟。将细胞裂解物在4℃下与GST、GST-PTPWT或GST-PTPD1316A孵育2小时。还上样不同量的细胞提取物作为对照。
过表达全长或截短的OST-PTP的转化细胞。使用表达经flag标记的全长OST-PTP或者仅含有其胞外结构域(OST-PTPEC)的经flag标记的截短OST-PTP的真核表达载体，在用这些经flag标记的载体转染的ROS(兔成骨细胞)17/2.8成骨细胞中进行DNA永久转染实验，并在COS7细胞中进行实验作为阴性对照。选择并分离染色体中整合了两个基因(经flag标记的全长OST-PTP或仅含有其胞外结构域的经flag标记的截短OST-PTP)中每一个的细胞克隆后，分别使用细胞裂解物的RT-PCR和Western印迹分析来证实基因被转录并产生了蛋白质。然后在无血清培养基中过夜培养细胞。分离用空载体转染或用编码全长或截短的Esp cDNA的载体转染的细胞的上清液，并使用市售的抗-Flag抗体进行Western分析。
用于产生骨钙蛋白的细菌表达载体。我们产生了用于GST标记的小鼠骨钙蛋白、GST标记的人骨钙蛋白、GST标记的小鼠和人骨钙蛋白突变体和GST标记的小鼠和人骨钙蛋白截短突变体的原核表达载体。
膳食和GTG诱导的肥胖症和2型糖尿病。对膳食诱导的肥胖症而言，用正常膳食或45％脂肪、35％碳水化合物和20％蛋白质的“西方”膳食之一，将雄性和雌性的6周龄WT和骨钙蛋白缺陷型小鼠(每组n＝10)喂饲4、6、8或12周。对GTG诱导的肥胖症而言，用0.5mg/kg GTG注射雄性和雌性4周龄WT和骨钙蛋白缺陷型小鼠(每组n＝10)并在12周龄时处死。在两种实验中，均如下分析WT和突变体小鼠。体格检查在实验开始时和之后每周测量每只小鼠的总体重，直至处死。食物摄入评价该参数尤其为了证实GTG病变诱导了食物摄入的提高。为此，使用代谢笼和设备。代谢研究在禁食过夜后和喂饲后测量血清葡萄糖和胰岛素水平。还测量每只小鼠中的血清脂连蛋白和瘦素水平。通过在葡萄糖腹膜内注射后进行的葡萄糖耐量测试(GTT)和/或葡萄糖刺激的胰岛素分泌测试(GSIS)来测定胰岛素分泌。在腹膜内注射2g/kg葡萄糖后0、2、5、15和30分钟获取血样，或在0、15、30、60和120分钟后获取血样用于GTT。使用自动化葡萄糖检测仪测定全血葡萄糖值。分子分析测量各个实验结束时肝细胞、脂肪细胞和成肌细胞中多种胰岛素敏感性标志物的表达。
共培养成骨细胞和脂肪细胞，以研究骨钙蛋白对脂连蛋白表达/分泌的调节。对成骨细胞和脂肪细胞进行共培养测定，以分析脂连蛋白表达的改变。在该测定法中，我们将来自WT、Esp缺陷型或骨钙蛋白缺陷型小鼠的成骨细胞与取自任意这些相同小鼠的原代脂肪细胞一起使用。作为阴性对照，我们将各种基因型的小鼠胚胎成纤维细胞与脂肪细胞共培养。根据在过去十二年实验室中常规使用的标准方案，制备成骨细胞和成纤维细胞(Ducy和Karsenty 1995，其通过参考并入本文)，视同已在本文中完全公开)。在开始实验前36小时，将成骨细胞或成纤维细胞以70％的汇合接种在αMEM 10％胎牛血清(FBS)上。添加脂肪细胞前，更换培养基，将FBS浓度降低至1％。第二天早晨加入脂肪细胞0、2、4、8或12小时。在实验结束时，通过离心培养基收集作为贴壁细胞存在的脂肪细胞。使用脂肪细胞提取RNA，并通过实时PCR测量脂连蛋白和可能的由脂肪细胞产生的其它激素(包括瘦素)的表达。使用培养基测量骨钙蛋白、脂连蛋白、胰岛素和其它脂肪因子(adipokine)的水平。
共培养成骨细胞和β-细胞，以研究骨钙蛋白对胰岛素表达/分泌的调节。进行成骨细胞和胰腺β-细胞的共培养测定，以分析胰岛素表达的改变。来自WT、Esp缺陷型或骨钙蛋白缺陷型的小鼠与来自任何这些相同小鼠的胰腺β-细胞一起使用。作为阴性对照，将各基因型的小鼠胚胎成纤维细胞与脂肪细胞共培养。根据在过去十二年实验室中常规使用的标准方案，制备成骨细胞和成纤维细胞。(Ducy和Karsenty 1995，通过参考并入本文，视同已在本文中完全公开)。在开始实验前36小时，将成骨细胞或成纤维细胞以70％的汇合接种在αMEM 10％胎牛血清(FBS)上。添加β-细胞前，更换培养基，将FBS浓度降低至1％。在第二天早晨添加β-细胞0、2、4、8或12小时。在实验结束时，通过离心培养基收集作为贴壁细胞存在的β-细胞。使用β-细胞提取RNA，并通过实时PCR测量胰岛素和其它β-细胞所产生激素的表达，以及已知调节胰岛素表达和细胞增殖之分子的表达。使用培养基测量骨钙蛋白、脂连蛋白、胰岛素和其它细胞因子水平。
代谢研究。对葡萄糖耐量测试(GTT)而言，在过夜禁食后腹膜内(IP)注射葡萄糖(2g/kg体重)，并使用血糖试纸和Accu-Check血糖测定仪(Roche)在指定的时间监测血糖。对葡萄糖刺激的胰岛素分泌的测试(GSIS)而言，在过夜禁食后腹膜内注射葡萄糖(3g/kg BW)；从尾部收集血清并如所述测量胰岛素(Mauvais-Jarvis等，2000)。对胰岛素耐量测试(ITT)而言，使小鼠禁食六小时，腹膜内注射胰岛素(0.2U/kg BW)并如所述在指定的时间测量血糖水平(Mauvais-Jarvis等，2002)。ITT数据表示为初始血糖浓度的百分比。在禁食过夜后腹膜内注射金硫葡萄糖(600mg/kg BW，USP)，3个月后处死小鼠用于分析。腹膜内注射链唑霉素(150mg/ml单次注射，Sigma)，之后每2天如上所述测量血糖。8天后分离胰腺，如先前所述测量胰岛素含量(Mauvais-Jarvis等，2000)。使用代谢笼测量食物摄入，其为每日的食物重量改变。使用与热量计(Columbus Instrument)相连的代谢笼测量能量消耗。在2天期间记录热值(Kcal/Hr)并针对每个小鼠BW进行报告。
实验室测量。在喂饲和禁食状态下通过对经异氟烷麻醉的小鼠进行心脏穿刺来收集血。使用比色测定法测量游离脂肪酸(Wako Chemicals)和甘油三酯(Sigma)的血清水平。通过ELISA定量胰岛素(Crystal Chem Inc.试剂盒)、脂连蛋白(Linco试剂盒)、瘦素(Crystal Chem Inc.试剂盒)和抵抗素(Linco试剂盒)的血清水平，通过IRMA(Immunotopics试剂盒)测量骨钙蛋白水平。没有IRA、IRMA或ELISA被设计成区分小鼠中羧化的骨钙蛋白与羧化不足的骨钙蛋白。现有的试剂盒测量总骨钙蛋白，但不能特异性识别羧化不足的骨钙蛋白。因此，使用羟磷灰石(HA)树脂分离这两种形式。羧化形式是惟一结合HA的形式。
分离小鼠胰岛和脂肪细胞。使用Histopaque梯度(1077，Sigma)分离胰岛。简言之，在通向十二指肠的入口处夹紧总胆管后，向管内注射M199培养基(GIBCO)中的1mg/ml胶原酶P(Sigma)。手术取出肿胀的胰腺并在37℃下孵育17分钟。通过吸打分散经消化的胰腺并用相同的培养基洗涤两次。将组织悬液滤过Spectra-筛(400μm)后，将经消化的组织重悬于Histopaque中并用M199培养基覆盖。然后将样品在1,700g离心20分钟，并从界面处收集胰岛。用冷的M199培养基将回收的材料洗涤两次，重悬于M199/1％NCS或αMEM/1％FBS(GIBCO)培养基中，并在37℃下于5％CO2中培养。
通过胶原酶消化从附睾脂肪垫中分离原代脂肪细胞。简言之，以lmg/ml胶原酶P在KRP缓冲液(20mM HEPES、120mM NaCl、6mM KCl、1.2mM MgSO4、1mM CaCl2、0.6mM Na2HPO4、0.4mM NaH2PO4、2.5mMD-葡萄糖、2％BSA，pH 7.4)中于37℃下将剪碎的脂肪组织消化1小时。用KRP缓冲液将分离的细胞洗涤两次，之后在αMEM/1％FBS中于37℃下5％CO2中培养。
细胞培养实验。如先前所述(Ducy等，2000a)从5日龄幼仔的颅盖中制备原代成骨细胞，并在100μg/ml抗坏血酸和5mM β-磷酸甘油存在下于αMEM/10％FBS中培养5天。通过胶原酶消化(0.5mg/ml)分离皮肤成纤维细胞，并在αMEM/10％FBS中培养。添加原代胰岛(或脂肪细胞)前二十四小时，将成骨细胞(或成纤维细胞)置于αMEM/1％FBS中。对华法林处理而言，将ROS 17/2.8成骨细胞维持在DMEM/F12/10％FBS中，直至在与脂肪细胞共培养前48小时补充DMEM/F12/1％FBS中的50μM华法林或赋形剂。在存在或不存在(1μm)培养小室(culture insert)(Falcon)共培养4小时后收集胰岛(或脂肪细胞)，用于使用TRIZOL(Invitrogen)分离RNA。
基因表达分析。所有的基因表达分析均使用实时PCR进行。用Superscript III试剂盒(Invitrogen)将经DNAse I-处理的总RNA转化为cDNA。使用带有ROX的Taq SYBR Green Supermix(Biorad)在MX3000仪器(Stratagene)上进行实时PCR；使用β-肌动蛋白扩增作为每种样品的内参。所有的引物均来自SuperArray。
骨钙蛋白/羟磷灰石(HA)结合测定。向HA悬浆中添加来自1月龄小鼠、肥胖症患者的血清或来自经华法林处理的成骨细胞培养物的上清液，达到25mg浆/ml的终浓度。15分钟(小鼠血清、上清液)或30分钟(人血清)后，通过离心沉淀HA珠，并用0.5M磷酸钠盐缓冲液，pH 8.0洗脱与HA结合的骨钙蛋白。通过IRMA测量洗脱液和原始样品中存在的骨钙蛋白。数值表示与HA结合的骨钙蛋白相对于初始骨钙蛋白含量的百分比。Hauschka，P.V.，等，Physiol Review 69，990-1047(1989)。
统计学分析。除了在图2B和5F中显示均值±标准误以外，结果均作为均值±标准差给出。使用未配对的、双因素Student’s t检验或ANOVA检验之后是事后检验进行统计学分析。除非另有说明，否则认为p值＜0.05是显著的，并且在所有图中用星号标明。
重组的骨钙蛋白。由细菌产生重组的骨钙蛋白，并根据标准步骤在谷胱甘肽珠子上纯化。然后使用凝血酶消化从GST亚基上切下骨钙蛋白。使用亲和柱去除凝血酶污染。通过SDS-PAGE定性评价产物的纯度。细菌不具有γ-羧化酶基因。因此，在细菌中产生的重组骨钙蛋白总是在所有三个位点上均完全羧化不足。可以用本领域已知的许多方式(包括化学合成)产生骨钙蛋白，因为可在化学合成时将其制成无γ-羧化。
人类研究。该研究纳入了一组肥胖症和非肥胖症白人女性，她们参与了在Center of Research on Human Nutrition，Hotel-Dieu Hospital，Paris，France(PHRC方案N°A0R076)进行的临床研究。该研究由EthicsCommittees of Hotel-Dieu(Paris)批准。所有的受试者均给出知情同意。受试者在研究日之前体重至少稳定3个月。在早晨(上午8:00)在空腹状态下评价临床和生化参数。
组织学测定。将肝的冷冻切片冷冻包埋(cryoembedded)，以5μm切片并用油红O染色。将脂肪和胰腺组织在10％中性甲醛中固定过夜，包埋在石蜡中，并以5μm切片。用苏木精和伊红(H&E)染色组织切片。使用兔抗胰岛素(SantaCruz，1∶100)和小鼠抗-Ki67(Vector，1∶100)抗体和ABCElite试剂盒(Vector)进行免疫组织化学测定。如所述(Takeda等，2002)进行下丘脑组织学测定。为了评价细胞大小或数量，使用40×物镜在装有CCD照相机(SONY)的Leica显微镜上分析5到10个切片(各距离50微米)。使用Osteomeasure软件加工图像。β-细胞面积代表胰岛素免疫染色阳性的表面除以总胰腺表面积。β-细胞量被计算为β-细胞面积乘以胰腺重量。每个条件至少分析3只小鼠。将胫前肌(Tibia anterior muscle)在4％PFA/2％戊二醛/0.1M二甲胂酸钠ph 7.3中固定，在1％四氧化锇中后固定，并包埋于环氧树脂(Epon)中。将超薄切片在4％水性乙酸双氧铀中染色，在Reynolds′柠檬酸铅中染色2分钟，并用JEOL 2000FX检查。对每只小鼠数字化十张电子显微图，并使用ImageJ软件分析每个可清楚区分的线粒体的面积。在每种基因型的4只小鼠中测量15到25个个体线粒体。
结果 Esp-/-小鼠模型的产生和围产期致死。为了研究OST-PTP，以经典方式(Esp-nLacZ)(Dacquin等，2004)和成骨细胞特异性方式(Espob-/-)破坏Esp使用LoxP/Cre重组酶技术缺失编码磷酸酶结构域的外显子24到35(图22A)。将带有侧翼为LoxP的Esp等位基因的小鼠与α1(1)胶原-Cre小鼠(Dacquin等，2002)杂交，产生成骨细胞特异性Esp缺陷型小鼠(Espob-/-)(图22B)。Southern印迹分析显示，重组以高频率发生于成骨细胞中Esp基因座上(图1C)。相应地，Esp表达在Espob-/-成骨细胞中被降低几乎90％，而在Esp表达的另一部位——睾丸中未受影响(图1D)。在脂肪细胞或胰腺β-细胞中未能检测到Esp表达(数据未显示)。这些数据确定了已实现Esp的成骨细胞特异性失活。为了清楚起见，研究Esp-nLacZ和Espob-/-小鼠时均称为Esp-/-小鼠。
在断乳时分析时，129Sv/EV或C57BL/6遗传背景的Esp-/-小鼠的互交仅产生约25％的Esp-/-小鼠(图1F)。为了确定这种明显的早期出生后致死现象是否是由于骨骼发育延迟，将新生野生型(WT)和Esp-/-幼仔的骨骼制备物染色。未检测到可解释该致死现象的骨形成异常(图22D-22F)。进行实验来确定是否Esp-/-幼仔致死现象是由于母体效应(可能为体液异常)。如果是这种情况，则由纯合突变体母体所生出的突变体幼仔会比杂合母体所生出的幼仔死亡率更高。这正是所观察到的情况。然而，Esp+/-母体所生出的Esp-/-幼仔的致死率从未达到在断乳前死亡的由Esp-/-母体所生出的Esp-/-幼仔的15％至35％(图1F)。这些数据表明，Esp-/-幼仔的致死现象部分地由母体效应引起。
Esp-/-小鼠中提高的β-细胞增殖和胰岛素分泌。为了确定导致Esp-/-小鼠围产期致死现象的母体效应是否由体液异常引起，在乳摄食之前测量新生幼仔中的代谢参数。无论遗传背景、性别和进行的缺失类型如何，Esp-/-幼仔仅显示一种异常血糖水平降低3倍(图1G)。在一些突变体幼仔中，血糖水平甚至过低而检测不到。虽然严重程度较低，但是在喂饲后的1月龄和3月龄Esp-/-小鼠中也观察到血糖水平的显著降低(图1G)。这种低血糖由新生、1月龄和3月龄喂饲后的Esp-/-小鼠中显著的高胰岛素血症得到解释(图1H)。另一方面，胰高血糖素(由胰腺β-细胞分泌的激素)的表达是正常的(图23B)，从而表明Esp突变特异地影响β-细胞。
为了更肯定地确定Esp-/-小鼠中存在胰岛素分泌的提高，在1月和3月龄时进行腹膜内(IP)葡萄糖刺激的胰岛素分泌测试(GSIS)。这些测定显示，OST-PTP的缺少增强了胰岛素分泌(图1H和1L)。为了评价这种胰岛素分泌的提高如何影响去除葡萄糖负荷的能力，在过夜禁食后IP注射葡萄糖(2g/kg体重)后进行葡萄糖耐量测试(GTT)。这些测试显示，与WT小鼠相比，1月龄和3月龄的Esp-/-小鼠具有显著更高的葡萄糖耐量(图1J)。
组织学和免疫化学分析显示了Esp-/-胰腺中胰岛素含量、胰岛数量、胰岛尺寸和总β-细胞量的提高(图1K和1L)。TUNEL测定检测不到任何异常的细胞凋亡，在5日龄幼仔(P5)和1月龄小鼠中进行的Ki67免疫染色显示，Esp-/-小鼠中β-细胞增殖提高60％到300％(图1M)。这些数据证明成骨细胞中表达的OST-PTP影响调节β-细胞增殖的途径。
Esp-/-小鼠中提高的胰岛素敏感性。为了确定Esp-/-小鼠中增强的葡萄糖负荷处理能力是由于胰岛素敏感性提高，进行了胰岛素耐量测试(ITT)。与WT小鼠相比，在1月龄和3月龄Esp-/-小鼠中胰岛素敏感性(通过IP注射胰岛素后血糖水平的降低来定义)均显著提高(图2A)。因此，与WT小鼠相比，Esp-/-中脂肪(PPARα，PPARγ)、肝(Foxa2，PPARα)和骨骼肌(Pgc-lα，Nrf-1，Mcad)中胰岛素敏感性分子标志物的表达也显著提高。Esp-/-肝中Pepck表达降低表明在该器官中糖异生被抑制(图2E)。推测由于这些分子事件，Esp-/-小鼠中的能量消耗提高(图2G)。在所有分析中，杂合Esp+/-小鼠表现与其WT同窝仔(littermates)相同。
实验数据显示，Esp(OST-PTP)失活引起与胰岛素分泌和敏感性提高相关的低血糖，这在新生幼仔中可能是致死的。在Esp-nLacZ-/-和Espob-/-小鼠中以相同程度观察到这些异常，这确定了是在成骨细胞中表达而不在任何其它细胞或组织中表达的Esp基因导致了这种代谢表型。
1月龄和3月龄Esp-/-小鼠显示另一种表型异常；它们的脂肪垫比其WT同窝仔显著更轻(图2F)。与WT小鼠相比，在Esp-/-中血清甘油三酯水平也更低(图2H)。因为Esp不在脂肪中表达，而且在Esp-/-小鼠中食物摄入是正常的(图23H)，所以这种脂肪量下降是由于胰岛素敏感性提高。尽管在Esp-/-中存在的脂肪细胞比WT小鼠中更少(WT，93.2±10.7×103个脂肪细胞/脂肪垫(n＝5)；Esp-/-，37±5.1×103个脂肪细胞/脂肪垫(n＝3))，但是它们更大(图2I)。为了了解这种表型，研究了多种分子标志物的表达。在Esp-/-和WT脂肪细胞中，C/EBPα、Srebplc、脂肪酸合酶(FAS)和脂蛋白脂酶(LPL)表达相似，显示脂肪形成、脂肪生成、和脂肪摄取未被该突变显著影响(图2J)。相反，胰岛素敏感性的分子标志物(PPARγ和脂肪氧化PPARα的调节因子)表达提高，因此解释了胰岛素敏感性增强而无脂肪积累。另外，与WT脂肪细胞相比，Esp-/-中两种抗脂解蛋白质围脂滴蛋白和甘油三酯脂酶(TGL)的表达显著降低(图2J)，表明在Esp-/-小鼠中脂解作用被抑制。因此，在Esp-/-小鼠中，禁食过夜后游离脂肪酸的血清水平没有像在其WT同窝仔中一样提高(图2K)。提高的胰岛素敏感性和脂肪氧化与脂肪细胞释放脂肪被抑制相组合，协同作用产生在Esp-/-小鼠中观察到的具有大脂肪细胞的低肥胖表型。这些结果与Esp缺陷型小鼠中胰岛素分泌的提高相一致，因为胰岛素是脂解作用的有效抑制剂。
Esp-/-小鼠中提高的脂连蛋白表达。进行了实验以确定对于在Esp-/-小鼠中观察到的胰岛素敏感性提高而言是否存在体液基础。抵抗素(介导胰岛素抗性的一种脂肪因子)的表达和血清水平基本上未受Esp缺失的影响。对瘦素而言也是如此，瘦素是一种胰岛素致敏激素(insulin-sensitizinghormone)(Friedman和Halaas，1998；Steppan等，2001)(图2L和23K)。后一观察结果与Esp-/-小鼠中食物摄入正常的事实一致(图23H)。相反，脂连蛋白(能够增强对胰岛素敏感性的一种脂肪因子(Yamauchi等，2001))的表达和血清水平在出生时、1月龄和3月龄的Esp-/-小鼠中分别提高三倍和两倍，无论其性别和遗传背景如何(图2L和23M)。相应地，观察到在Esp-/-小鼠中脂连蛋白靶基因如脂酰-CoA氧化酶、PPARcc和Ucp2的表达提高(图2N)(Kadowaki和Yamauchi，2005)。这种脂连蛋白表达和血清水平的提高提供了解释在Esp-/-小鼠中观察到的胰岛素敏感性提高的一种机制。
总之，Esp失活在外周组织中导致由β-细胞增殖提高、胰岛素分泌增强和胰岛素敏感性提高造成的低血糖，以及肥胖度(adiposity)降低。在Esp-nLacZ-/-和Espob-/-小鼠中均观察到这些异常，这证明骨骼通过成骨细胞参与葡萄糖内稳态的调节。
Esp-/-小鼠被保护免于发生肥胖症和葡萄糖不耐受。特征为胰岛素分泌和敏感性提高的Esp-/-小鼠带来了这样的前景这些突变体小鼠可被保护免于发生肥胖症和糖尿病。Esp-nLacZ-/-和Espob-/-显示相同的代谢和分子异常。在一些实验中，只测试了一种或另一种模型，因此为清楚起见，我们在这种情况下表示为Esp-/-。
首先，在1月龄小鼠中注射金硫葡萄糖(GTG)，从而在腹内侧下丘脑中诱导特定的病变(Brecher等，1965)。如所预计地，GTG在WT和Esp-/小鼠中均诱导腹内侧下丘脑损伤(图24)和饮食过量(图3A)。在注射后3个月进行分析时，经GTG处理的WT小鼠是肥胖的，并且其脂肪垫质量和血清甘油三酯水平显著提高。GTT和ITT分析显示葡萄糖不耐受和胰岛素抗性也提高了(图3E-3F)。相反，经GTG处理的Esp-/-小鼠不肥胖，具有与经PBS处理的WT小鼠相似的脂肪垫质量和血清甘油三酯水平，并且它们没有显示葡萄糖不耐受或胰岛素不敏感的迹象(图3E-3F)。
接着，用高脂肪膳食(HFD)(58％脂肪千卡)将1月龄的WT和Esp缺陷型小鼠喂饲六周。发现在六周结束时，Esp-nLacZ-/-小鼠中体重显著低于WT小鼠(图3G-3I)。葡萄糖耐量测试(GTT)证明，喂饲HFD六周后，Esp-nLacZ-/-小鼠保持对葡萄糖的正常耐量，并且通过ITT测定的胰岛素敏感性保持正常。相反，在喂饲高脂肪膳食(HFD)的WT小鼠中这些参数改变了。
测定了胰岛素敏感性的提高是否会保护Esp-/-小鼠免于发生胰腺β-细胞衰竭。为此，对小鼠注射链脲佐菌素(STZ)，从而引发如2型糖尿病中观察到的β-细胞细胞中的氧化应激和细胞死亡(Le May等，2006)。在两种基因型中STZ处理均可观地降低胰腺胰岛素含量和胰岛素血清水平(图3J和3K)。STZ注射后八天，7只经STZ处理的WT小鼠中3只死亡，并且所有存活的小鼠具有高于500mg/dl的血清葡萄糖水平(图3L和3M)。另一方面，这期间只有一只经STZ处理的Esp-/-小鼠死亡，并且存活小鼠的血葡萄糖水平不超过250mg/dl。与经STZ处理的WT小鼠不同，在经STZ注射的Esp-/-小鼠尿中未能检测到葡萄糖(图3N)。因为经STZ处理的WT和Esp-/-小鼠都有胰岛中胰岛素含量的大幅降低，所以经STZ处理的Esp-/-小鼠中无明显糖尿病表型，这显示其胰岛素敏感性的提高不依赖于其胰岛素分泌提高。这些结果确定，在小鼠中发生肥胖症和葡萄糖不耐受需要Esp的功能(OST-PTP)。
Esp影响成骨细胞所分泌分子的生物活性。下一个问题是Esp如何能够通过其在成骨细胞中的表达来调节胰岛素分泌和敏感性。基于细胞的测定法未能提供OST-PTP胞外结构域可以独立于磷酸酶结构域而被切割和分泌或表达的证据。因此，用表达全长的flag标记OST-PTP或仅表达flag标记的胞外结构域的载体来转染通常不表达Esp的COS细胞。使用本领域公知的标准磷酸钙方法转染细胞。在实验结束时，收集上清液，裂解细胞，并对上清液和细胞裂解物都检测OST-PTP的存在。然后使用细胞裂解物或细胞上清液进行Western印迹分析。在细胞裂解物中检测到重组的全长或截短蛋白质，但在上清液中则没有，显示OST-PTP胞外结构域通常不被细胞分泌。制备针对OST-PTP胞外结构域的抗体，从而能够进行这些实验；本发明的某些实施方案涉及这种抗体和结合OST-PTP胞外结构域的其它抗体。OST-PTP胞外结构域可被抗体接近，因为其不被隔离在细胞膜内。也存在针对OST跨膜结构域的抗体。这两种抗体均为多克隆抗体，并可施用给动物以抑制OST-PTP，从而提高骨钙蛋白活性，这进而提高脂连蛋白产生并从脂肪细胞中分泌出来，这又进而提高胰岛素的产生和敏感性。当然，同样可使用单克隆抗体。
为了进一步研究OST-PTP功能，产生并分析了在成骨细胞中表达全长OST-PTP或仅表达其胞外结构域的转基因小鼠。制备在成骨细胞中选择性过表达全长Esp cDNA的转基因小鼠(α1(I)-OST-PTP小鼠)，其在喂饲状态下显示降低的β-细胞增殖、更低的β-细胞量、低胰岛素血症，并且应答于葡萄糖的胰岛素分泌受损(图4A-C)。它们还显示更低的脂连蛋白血清浓度(图4B)。因此，采取常规食物的α1(I)-OST-PTP小鼠发生高血糖症、葡萄糖不耐受和胰岛素抗性(图4B、4D和4E)。仅在过表达全长OST-PTP的转基因小鼠中观察到该表型(在Esp-/-小鼠中所观察到的表型的镜像)的这一事实显示，影响葡萄糖内稳态需要OST-PTP的磷酸酶活性。另外，这些小鼠在成骨细胞中过表达Esp的事实进一步支持下述结论OST-PTP调节成骨细胞所产生分泌性分子的生物活性，这些分子进一步调节葡萄糖内稳态。相反，仅表达OST-PTP胞外结构域的α1(I)胶原-Espsd小鼠不具有任何类型的能量代谢异常。这些结果与已充分描述的OST-PTP磷酸酶结构域是活性结构域的这一事实结合在一起，显示了OST-PTP通过其磷酸酶结构域而不是胞外结构域来调节胰岛素分泌和脂连蛋白表达，并且进一步证实了OST-PTP通过其在成骨细胞中表达而作用于能量代谢的调节。
还产生了载脂蛋白E-OST-PTPEC转基因小鼠，其表达OST-PTP胞外结构域并将其释放进大循环中。使用载脂蛋白E启动子指导肝细胞中的Esp表达，从而导致OST-PTP胞外结构域释放进入大循环。这些转基因小鼠与野生型小鼠不可区分，进一步证实OST-PTP通过其细胞内磷酸酶结构域及其在成骨细胞中的表达来调节能量代谢。
为了进一步证实成骨细胞能分泌作用于胰腺β-细胞细胞和脂肪细胞的因子，将成骨细胞(其为贴壁细胞)与胰岛或脂肪细胞(其为非贴壁细胞)共培养。将已分化WT成骨细胞与分离自WT小鼠的胰岛共培养将胰岛中的胰岛素表达提高40％(图4F)。与Esp-/-小鼠中观察到的胰岛素分泌提高完全一致，Esp-/-成骨细胞进一步增强了胰岛素表达(图4F)。还将成骨细胞或成纤维细胞与脂肪细胞共培养。WT成骨细胞而不是成纤维细胞提高脂连蛋白的表达，并且Esp-/-成骨细胞在增强脂连蛋白表达方面的效力是WT成骨细胞的两倍(图4G)。在该测定法中，脂连蛋白是唯一表达受到影响的脂肪因子(图4G)。使用与Esp-/-胰岛或脂肪细胞共培养的WT成骨细胞的对照实验在胰岛素和脂连蛋白表达方面显示出与使用WT胰岛或脂肪细胞时观察到的相同的提高(图4H)。
为了确定成骨细胞通过释放分泌性分子来影响胰岛素和脂连蛋白表达，进行额外的实验。首先，将成骨细胞与胰岛或脂肪细胞共培养，使用滤器防止细胞-细胞接触。其次，在原代成骨细胞培养物上清液存在下共培养胰岛和脂肪细胞。在两种情况下均观察到胰岛素和脂连蛋白的显著提高(图4I和4J)。总之，这些数据表明，成骨细胞所表达的Esp调节了影响β-细胞和脂肪细胞中胰岛素和脂连蛋白表达的分泌性分子的表达或活性。
骨钙蛋白是成骨细胞产生的提高增殖、胰岛素分泌和胰岛素敏感性的分泌性分子。为了鉴定成骨细胞所分泌的调节葡萄糖内稳态的分子，在缺失骨钙蛋白(存在于血清中的成骨细胞特异性分泌性分子)的突变体小鼠品系中分析能量代谢参数。在较早的研究中，观察到oc-/-小鼠在产生后是异常肥胖的。Ducy等Nature 1996，其通过参考并入本文。当时没有解释为何这些动物如此肥胖，因此这些小鼠的肥胖症方面被观察到，但未公开。制备了纯合(Oc-/-)和杂合(Oc+/-)的品系。
骨钙蛋白是由成骨细胞生产的主要非胶原蛋白质之一，也是成骨细胞特异性分子。与许多分泌性蛋白质(包括肽激素)一样，骨钙蛋白作为前-原-骨钙蛋白产生，并在被分泌前在胞质中发生切割和翻译后修饰。另外，骨钙蛋白属于gla蛋白家族，其中一些谷氨酸残基被γ-羧化酶羧化形成gla残基。因此，骨钙蛋白的另一名称是骨gla蛋白(BGP)。Gla残基赋予gla蛋白质对矿物离子的高亲和力。
骨钙蛋白-/-小鼠具有比WT小鼠更高的血糖和更低的胰岛素血浆水平(图5A和5B)。与能量消耗一样，在骨钙蛋白-/-小鼠中通过GSIS、GTT和ITT分析的胰岛素分泌和敏感性以及葡萄糖耐量都是降低的(图5C-5E和5G)。相应地，在骨骼肌和肝中，参与胰岛素作用的基因表达被降低，而Pepck表达被提高(图5H)。在骨钙蛋白-/-小鼠中，胰岛大小和数量、β-细胞量、胰腺胰岛素含量和胰岛素免疫反应性均显著提高(图5I)。在P5幼仔和3月龄的骨钙蛋白-/-胰腺中，通过Ki67免疫染色测量的β-细胞增殖降低两倍(图5I)。与这种β-细胞增殖、胰岛素分泌和敏感性的显著降低相伴随的是脂肪垫质量、脂肪细胞数(WT，93.2±10.7×103个脂肪细胞/脂肪垫(n＝5)；骨钙蛋白-/-，125.6±10.6×103个脂肪细胞/脂肪垫(n＝3))和血清甘油三酯水平的提高(图5J和5K)。脂连蛋白表达和血清水平在骨钙蛋白-/-中显著低于WT小鼠，特别是考虑到它们提高的脂肪垫质量，而其它脂肪因子的表达未受影响(图5L和5M)。骨钙蛋白-/-小鼠中脂连蛋白作用的分子靶标的表达降低(图5N)。然而，骨钙蛋白+/-小鼠与WT同窝仔是不可区分的(数据未显示)。小鼠脂连蛋白的cDNA序列是SEQ IDNO8；也可以通过氨基酸SEQ ID NO9来表示。人脂连蛋白的cDNA序列是SEQ ID NO6，也可以通过氨基酸SEQ ID NO7来表示。
为了证明骨钙蛋白是成骨细胞分泌的影响胰岛素和脂连蛋白表达的分子，进行了其它共培养实验。与WT成骨细胞不同，骨钙蛋白-/-成骨细胞未能分别增强胰岛和脂肪细胞中胰岛素和脂连蛋白的表达(图5O和5P)。在相反的实验中，骨钙蛋白在COS细胞中的强制性表达(forcedexpression)允许这些细胞提高胰岛中的胰岛素表达和脂肪细胞中的脂连蛋白表达(图5Q)。将不表达骨钙蛋白的WT未成熟成骨细胞(Ducy等，2000b)与胰岛或脂肪细胞共培养。这些细胞未能诱导胰岛素表达或脂连蛋白表达(图5R)。总之，这些数据提供了遗传和细胞证据，表明骨钙蛋白是分化成骨细胞分泌的调节胰岛素和脂连蛋白表达的分子。
骨钙蛋白通过脂连蛋白调节胰岛素敏感性。为了确定胰岛素和脂连蛋白是否均彼此独立地促进了骨钙蛋白-/-小鼠的代谢表型，研究了两个相关的问题。首先，骨钙蛋白调节脂连蛋白表达是否独立于其对胰岛素分泌的作用，以及如果是的话，骨钙蛋白-/-小鼠中观察到的脂连蛋白表达降低是否解释了胰岛素敏感性的降低？如果两种假设都是正确的，则复合杂合子骨钙蛋白+/-；脂连蛋白+/-小鼠应当比WT同窝仔具有更低的脂连蛋白表达，并应当显示与骨钙蛋白-/-或脂连蛋白-/-小鼠中观察到的相似的胰岛素敏感性降低(Maeda等，2002)。某些实施方案涉及这些杂合的转基因品系。
如图6A-D中所示，在骨钙蛋白+/-；脂连蛋白+/-小鼠中，胰岛素敏感性显著降低，而通过GSIS测试测定的血糖水平、胰岛素血清水平和胰岛素分泌保持在正常范围内。与WT或单杂合子小鼠相比，骨钙蛋白+/-；脂连蛋白+/-小鼠中脂连蛋白血清水平也显著降低(图6E)。这些观察结果与下述观点是一致的骨钙蛋白至少部分通过调节脂连蛋白表达和分泌来调节胰岛素敏感性。
为了显示在Esp缺陷型小鼠中观察到的胰岛素敏感性提高和脂肪重量降低是由于脂连蛋白表达的提高，产生了血清脂连蛋白水平提高为两倍的Sap-脂连蛋白转基因小鼠，这与在Esp缺陷型小鼠中观察到的提高相似。Sap-脂连蛋白转基因小鼠还显示低脂肪垫重量、高能量消耗的表型，以及与在Esp缺陷型小鼠中现象相似的胰岛素敏感性提高的代谢和分子证据(图22)。该结果显示，脂连蛋白表达的提高是Esp缺陷型小鼠中胰岛素产生和敏感性提高的主要的可识别原因。本发明的某些实施方案因此涉及转染有脂连蛋白基因的人细胞，所述基因在导致细胞过表达脂连蛋白的启动子控制之下。
OST-PTP通过间接影响骨钙蛋白的羧化来调节其生物活性。骨钙蛋白-/-小鼠的代谢表型是在Esp-/-小鼠中所观察到表型的镜像，这提示在后者中获得了骨钙蛋白活性。为了进一步证明Esp缺陷型小鼠(OST-PTP-/-)是获得骨钙蛋白活性的模型，通过向Esp缺陷型转基因小鼠中引入额外的突变来制备双重突变体，特别是将其制备为骨钙蛋白+/-。
推测可通过降低骨钙蛋白表达逆转Esp-/-小鼠的代谢异常。这正是所观察到的缺乏一个骨钙蛋白等位基因的Esp-/-小鼠显示其所有代谢异常如血糖、胰岛素和脂连蛋白的血清水平、葡萄糖耐量、胰岛素分泌和敏感性均显著逆转(图7A-F)。Ki67染色显示这些突变体小鼠中β-细胞增殖也被降低(图7G)。
事实上，Esp-/-；Ocn+/-小鼠与未缺失任何骨钙蛋白的Esp-/-小鼠相比显示胰岛素合成和敏感性的降低，显示使Esp-/-小鼠中与WT小鼠相比的所有代谢异常均完全纠正/正常化。该实验在遗传上确定了，OST-PTP和骨钙蛋白在同一信号级联中，并且Espob-/-小鼠表型是获得骨钙蛋白活性的模型。换言之，在Espob-/-小鼠中观察到的代谢表型是由于骨钙蛋白活性的提高。
因为Esp-/-小鼠中骨钙蛋白表达和血清水平是正常的，所以排除了骨钙蛋白对OST-PTP表达的调节(图20)。相反，Esp-/-小鼠显示血清羧化骨钙蛋白与总骨钙蛋白的比值降低(图7H)。羧化骨钙蛋白比羧化不足的骨钙蛋白对羟磷灰石(HA)具有更高的亲和力(Hauschka等，1989；Price，1989)。使用下述测定法，其中羧化骨钙蛋白以能够结合羟磷灰石(HA)的总骨钙蛋白的％来衡量。该测定显示与wt小鼠相比，在Esp-/-小鼠中该值降低20％。在存在等量的总骨钙蛋白时，这表示与WT相比Esp-/-小鼠中羧化不足的骨钙蛋白提高20％。
该实验提示，OST-PTP通过调节骨钙蛋白的γ-羧化程度来影响骨钙蛋白功能，并且调节葡萄糖内稳态的是羧化不足的骨钙蛋白形式。为了确定情况是否如此，进行两种额外的实验。在共培养测定之前和期间，用γ-羧化抑制剂华法林(Bergner，2005)处理WT原代成骨细胞。该处理导致与HA结合的骨钙蛋白百分比显著降低，表明如所预计地，这些成骨细胞分泌更少的羧化骨钙蛋白(图7I)。然而，尽管比WT成骨细胞分泌更少的骨钙蛋白(+赋形剂，10ng/ml；+华法林，2ng/ml)(Hauschka等，1989)，但是华法林处理的成骨细胞与赋形剂处理的成骨细胞相比，将脂连蛋白表达水平诱导至显著更高的程度(图7J)。其次，在基于细胞的测定中使用了羧化的骨钙蛋白和由细菌生产的未羧化小鼠骨钙蛋白。羧化的骨钙蛋白未能诱导脂连蛋白表达，而细菌生产的骨钙蛋白则能够(图7K)。同样，羧化不足的骨钙蛋白诱导胰岛素表达以及细胞周期蛋白D1(β-细胞增殖的分子标志物(Kushner等，2005))的表达(图7L)。最后，我们研究了患有高胰岛素血症但未患糖尿病的人肥胖患者(图7M)。在这些患者中，未羧化的骨钙蛋白量显著提高，但是骨钙蛋白血清水平未受影响(图7M-O)。这些数据一起表明，OST-PTP通过增强骨钙蛋白羧化程度而影响其生物活性。
OST-PTP影响参与羧化过程的酶。任何细胞类型每种功能中的一个强制性事件(mandatory event)是胞内蛋白质被蛋白激酶磷酸化和/或被蛋白质磷酸酶脱磷酸化的能力。具体地，酪氨酸残基的磷酸化占总细胞磷酸氨基酸含量的0.1％；因此，蛋白质酪氨酸磷酸酶(protein tyrosinephosphatease，PTP)是极为重要的细胞内蛋白质(23)。
蛋白质酪氨酸磷酸酶可大致分为四类经典的受体样PTP，其具有有时被切割的胞外结构域(RPTP)；OST-PTP是一种受体样PTP。其它种类包括经典的非受体PTP、双特异性PTP和低分子量PTP(24)。人基因组中存在约20种RPTP。主要位于质膜中的RPTP可参与细胞之间的功能、细胞-细胞粘附和激素信号转导。然而，仍有关于它们生物学情况的两个问题未被解答。一个是确定它们磷酸酶活性底物的身份，另一个是鉴定它们的配体。
结果提示，OST-PTP能够使存在于成骨细胞中的特定底物脱磷酸化，从而提高该底物的表达和/或活性。然后该底物可被成骨细胞释放，并对胰腺β-细胞和脂肪细胞传递信号，从而影响胰岛素分泌和敏感性。尽管就生理学而言骨钙蛋白是OST-PTP逻辑上的靶标候选者，但是骨钙蛋白不被磷酸化。因此排除其作为直接靶标。
为了阐明OST-PTP可能怎样影响骨钙蛋白活性，我们研究它是否调节骨钙蛋白的γ-羧化，所述γ-羧化是该分子已知的主要翻译后修饰(Hauschka等，1989)。该翻译后修饰在啮齿动物和人中均发生；Poser等分析了人骨钙蛋白的一级结构，并报道人骨钙蛋白是17位为谷氨酸的Glu7骨钙蛋白(本文中称作“Oc-glu”，)与17位为γ-羧基谷氨酸的Gla7骨钙蛋白(本文中称作“BGP”，也称作骨Gla蛋白)的混合物[PoSer，J.W.等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.，255，8685-8691(1980)]。Gla残基通常赋予蛋白质对矿物离子的高亲和力。然而，功能丧失和获得实验未能体内鉴定骨钙蛋白在细胞外基质矿化中的功能(Ducy等，1996；Murshed等，2004)。
OST-PTP底物包括胰岛素受体和γ-羧化酶。计算机检索揭示，γ-羧化酶(也称为维生素K依赖性γ-谷氨酰基羧化酶)具有PTP共有位点。该酶催化底物蛋白质(如骨钙蛋白)中的谷氨酸转化成γ-羧基谷氨酸。为了确定OST-PTP是否作用于γ-羧化酶，在COS细胞、Ros17/2.8成骨细胞和分化的原代成骨细胞中进行底物捕获实验。将d10骨衍生的细胞在补充有抗坏血酸(100μg/ml)和β-甘油磷酸酯(5mM)的αMEM/10％胎牛血清(FBS)中培养10天。然后在仅补充了1％FBS的αMEM培养基中使其饥饿24小时，并用不可逆的蛋白质-酪氨酸磷酸酶抑制剂过钒酸盐(100mM)和20％FBS处理30分钟。将细胞裂解物在4℃下与GST、GST-PTPWT或GST-PTPD1316A中任一种孵育2小时。还上样不同量的总细胞提取物作为对照。
图9中的结果显示，突变体酶GST-PTPD1316A捕获γ-羧化酶，从而证明γ-羧化酶是OST-PTP的底物。然而，这不表示γ-羧化酶是OST-PTP的唯一底物。GST泳道中不存在结合，因为没有转染PTP。这是对照，以显示如果有捕获的话，也不是由于任何GST融合蛋白中的GST部分。使用GST-PTPWT时也不存在捕获，因为这种形式使底物γ-羧化酶脱磷酸化，随后所述底物γ-羧化酶被释放。在具有突变体GST-PTPD1316A的泳道中清楚地看到一个条带，因为突变为OST-PTP磷酸酶活性带来缺陷，这允许底物与酶不可逆结合并被酶保留。
这些结果显示，γ-羧化酶是成骨细胞中OST-PTP的底物。这使得能够阐明OST-PTP调节骨钙蛋白生物活性的生物化学途径的一部分OST-PTP使γ-羧化酶脱磷酸化，从而将其活化。活化的γ-羧化酶进而引起羧化的骨钙蛋白提高。在OST-PTP-缺陷型小鼠中脱磷酸化的活性γ-羧化酶更少，这导致分泌更多羧化不足的骨钙蛋白。这解释了OST-PTP缺陷型小鼠为什么具有提高的羧化不足骨钙蛋白水平，这一提高自身引起了对代谢综合征和糖尿病的抗性。
使用相同的底物捕获测定法，还发现在成骨细胞中表达的胰岛素受体是OST-PTP的底物(图8)。该底物捕获实验的结果显示突变的OST-PTP(GST-PTP DA)与COS细胞(左上图)和ROS 17/2.8成骨细胞(右上图)中表达的胰岛素受体(InsR)相互作用(第三泳道)。相反，WT OST-PTP(GST-PTP WT)不与胰岛素受体相互作用(第二泳道)。使用相同量的GST融合蛋白进行底物捕获。
人患者数据。图7O显示患有高胰岛素血症但未患糖尿病的人肥胖患者与正常患者相比具有显著提高的羧化不足骨钙蛋白水平(高约30％)，尽管骨钙蛋白血清水平(7M)大致相同。这显示在小鼠和人中，骨钙蛋白的羧化水平影响其生物活性。图7O还显示肥胖的非糖尿病患者与肥胖且患有糖尿病的患者相比羧化不足的骨钙蛋白提高。在来自不服药的正常患者、肥胖的非糖尿病患者和肥胖的糖尿病患者的血清中，测量羧化的骨钙蛋白与总骨钙蛋白的比值。
进行体内实验，其中监测羧化不足的骨钙蛋白对糖血的作用。用3种不同量的小鼠重组羧化不足骨钙蛋白或安慰剂(PBS)对野生型小鼠皮下输注28天(0.3、1和3ng/小时)。与输注安慰剂的对照动物相比，所有三种羧化不足的骨钙蛋白剂量均在28天的时间中降低体内糖血(图10)。
在另一个体内实验中，研究未羧化的骨钙蛋白对葡萄糖耐量的作用。用0.3或3ng/小时剂量的重组未羧化的骨钙蛋白或PBS对野生型小鼠皮下输注14天，之后接受单次葡萄糖注射。之后在指定的时间测量血糖。结果显示葡萄糖注射后120分钟的时间中，未羧化的骨钙蛋白剂量均提高葡萄糖耐量高于对照水平(图11)。
还检查了未羧化的骨钙蛋白对胰岛素敏感性的作用。用0.3或3ng/小时剂量的重组骨钙蛋白或PBS对野生型小鼠皮下输注18天，之后接受单次胰岛素注射。之后在注射后0-120分钟中的指定时间测量血糖。结果显示两种剂量的未羧化的骨钙蛋白均提高胰岛素敏感性(图12)。
在另一个体内实验中，监测未羧化的骨钙蛋白对体重和脂肪垫质量的作用(图13)。以0.3、1或3ng/小时对野生型小鼠皮下输注PBS或未羧化的骨钙蛋白28天。结果显示未羧化的骨钙蛋白轻微降低体重，最高的剂量最有效。(图13)28天后测量的性腺脂肪垫质量被3ng/小时未羧化的骨钙蛋白处理降低约18％。该时间中其它剂量未显著降低脂肪垫量。
研究了未羧化的骨钙蛋白对GTG诱导的肥胖症的作用(图14)。对野生型小鼠注射金硫葡萄糖(GTG)以诱导饮食过多和肥胖症，或注射赋形剂。两周后，对其植入皮下渗透泵，所述渗透泵输注1ng/hr重组未羧化骨钙蛋白或PBS，持续28天。在检验的第一时间点(7天)时两种剂量的未羧化骨钙蛋白均显著降低了体重增加，并且在整个28天周期中均保持低于对照。在28天中，未羧化的骨钙蛋白处理将体重减少约15％。
未羧化骨钙蛋白的片段是有生物活性的。进行实验以测试在体外刺激小鼠脂肪细胞分泌脂连蛋白时，截短的骨钙蛋白是否与全长未羧化骨钙蛋白同样有效。用重组的全长骨钙蛋白(1-46)或截短形式(1-36)(C端前10个氨基酸缺失)或赋形剂将野生型脂肪细胞处理4小时。然后通过实时PCR定量脂连蛋白表达。结果显示，全长的未羧化骨钙蛋白产生约1.5倍的提高，未羧化骨钙蛋白的1-36片段产生约1.8倍的提高(图15)。因此，生物活性不需要全长分子；至少可从小鼠骨钙蛋白分子的C端缺失多达10个氨基酸，而对脂肪细胞和β-细胞达到相同的生物效应。本发明的某些实施方案涉及其中C端前10个氨基酸被缺失的骨钙蛋白，优选人骨钙蛋白，优选羧化不足的骨钙蛋白。
骨钙蛋白的一级序列在物种间高度保守，并且是人体中十种最大量的蛋白质之一(图21)，提示其功能在进化中被保留。重要的是，保守性特征包括17、21和24位上三个Gla残基，Cys23和Cys29之间的二硫键，并且大部分物种在9位上含有羟脯氨酸。骨钙蛋白的N-端与该分子的其它部分相比显示最高的序列变异。人和小鼠骨钙蛋白的高保守程度强调了小鼠在健康和疾病两种状态下作为用于人的动物模型的相关性，并确认了我们对骨钙蛋白用于治疗或预防代谢综合征或其任何组分和1型糖尿病的治疗和诊断用途的主张。
维生素K和他汀类提高骨钙蛋白。维生素K是γ-羧化所需要的。华法林和其它

衍生物阻断维生素K依赖性γ-羧化，从而提高活性羧化不足骨钙蛋白的水平。这与下述数据一致，所述数据显示与经赋形剂处理的成骨细胞相比，经华法林处理的成骨细胞产生提高的羧化不足骨钙蛋白水平(图7I)。还已显示，与无维生素K治疗的对照相比，用维生素K治疗骨质疏松患者4周导致羧化不足骨钙蛋白的百分比均值显著降低85％。维生素D单独或与维生素K一起施用时不具有显著的作用。Takahashi等，Clinical Endocrinology(2001)54，291-224。还见Sugiyama，T.，J Bone Miner Metabolism(2001)19，146-159。该观察结果提示，华法林或另一种

衍生物可用于阻断维生素K依赖性γ-羧化，并提高患者中羧化不足的骨钙蛋白水平，目标是治疗/预防代谢病症。
以商品名

出售的华法林作为口服抗凝血剂使用，其抑制凝固因子的合成，从而预防血块形成。然而，

可引起出血和皮肤坏死(坏疽)。许多药物(包括处方药和非处方药(OTC))能够影响

的抗凝血作用。一些药物可增强

的作用并引起过度的血稀释(blood thinning)和危及生命的出血。这些药物的少量实例包括阿司匹林、

醇、布洛芬

西米替丁

氧雄龙(oxandrolone)

某些维生素和抗生素。
其它人显示，治疗四周后他汀

(人中20mg/天辛伐他汀)显著提高骨钙蛋白的血清水平(p值小于0.05)，尽管羧化不足的骨钙蛋白与完整的骨钙蛋白无法区分。Chan，M.H.，等，J Clin Endocrinology andMetabolism(2001)Vol 86(9)，4556-59。尽管没有他汀类提高羧化不足的骨钙蛋白水平的实验证据，但是骨钙蛋白总体表达的显著提高能导致γ-羧化酶活性饱和，并且导致不能羧化所有产生的骨钙蛋白。因此，他汀类可间接提高血中释放的羧化不足骨钙蛋白的量。另外，将他汀类与阻断γ-羧化的药物(如华法林(其阻断维生素K))或者OST-PTP和γ-羧化酶的抑制剂一起施用能够共同作用，提高血清未羧化骨钙蛋白并具有治疗作用。他汀类和维生素K抑制剂可在单个制剂或独立的制剂中施用。
因此，本发明的某些方面涉及维生素K抑制剂和他汀类用于提高血清中羧化不足的骨钙蛋白水平的用途，以及它们在治疗代谢综合征及其多种组分中的治疗性用途。
交感神经系统正调节OST-PTP表达。发现交感神经系统(SNS)活性正调节成骨细胞中的Esp表达。事实上，图16显示，用β-肾上腺素能受体激动剂异丙肾上腺素刺激SNS信号转导在4小时中将Esp表达提高约80％，并且这种提高甚至在8小时时仍保持稳定。然而，提高的SNS活性未提高γ-羧化酶(ggcx)、vkor(参与维生素K再循环的酶，其对于ggcx活性是必需的)或骨钙蛋白的表达。该实验显示，SNS信号转导正调节成骨细胞中的Esp表达。因此，降低交感神经活性会导致Esp表达降低，进而导致羧化不足的活化形式骨钙蛋白提高。
使用具有低交感神经活性的ob/ob小鼠进行的体内实验证实了这一假说，并显示在瘦素(ob基因的产物)与骨钙蛋白之间存在遗传联锁。已经显示瘦素通过SNS向成骨细胞传递信号。因此，ob/ob小鼠是成骨细胞上降低的SNS信号转导的模型。ob/ob小鼠在发生任何其它代谢异常之前显示胰岛素的提高。该提高可能是由于SNS对成骨细胞的活性降低，因此会表达更少的OST-PTP并分泌更多有生物活性的羧化不足骨钙蛋白，导致提高的胰岛素表达。在具有多种基因型的1周龄小鼠中测量血清胰岛素水平WT小鼠、ob-/+小鼠(对肥胖症是半合子(hemizygous))、ob/ob小鼠、Bgp-/+(对骨钙蛋白是半合子)、BGP-/-小鼠和也是Bgp-/-的ob/ob小鼠(Ocn缺陷型)。选择1周龄小鼠是因为ob/ob小鼠在1周时尚未肥胖，并且它们除了具有高血清胰岛素水平以外在代谢上是相对正常的。结果显示，ob/ob小鼠事实上具有提高的血清胰岛素水平，但是如果ob/ob小鼠中Bgp基因(编码骨钙蛋白)的两个等位基因均被缺失，则其血清胰岛素水平回归正常。图17。该实验证明，在ob/ob小鼠中观察到的胰岛素提高依赖于骨钙蛋白。
上文所述结果一起表明施用降低SNS活性的β-阻断剂会降低Esp表达，从而提高羧化不足的骨钙蛋白水平。因此，它们可通过提高骨钙蛋白活性而用于预防/治疗代谢病症。β-阻断剂在临床上已长期使用，因此用于人类用途的安全量是确定的。常规实验可确定实现羧化不足骨钙蛋白血清水平提高所需施用的具体β-阻断剂的最适量。也可开发更优先靶向骨骼细胞的新的β-阻断剂，以更为特异地提高骨钙蛋白活性并降低副作用的风险。
表2 p≤0.05，Student’s t-检验，ND，未进行。
通过高血胰岛素-正常血糖钳分析3月龄的Esp-/-和Ocn-/-小鼠。
表3

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序列表
SEQ ID NO.1
人骨钙蛋白cDNA
cgcagccacc gagacaccat gagagccctc acactcctcg ccctattggc cctggccgca ctttgcatcg ctggccaggc
aggtgcgaag cccagcggtg cagagtccag caaaggtgca gcctttgtgt ccaagcagga gggcagcgag gtagtgaaga
gacccaggcg ctacctgtat caatggctgg gagccccagt cccctacccg gatcccctgg agcccaggag ggaggtgtgt
gagctcaatc cggactgtga cgagttggct gaccacatcg gctttcagga ggcctatcgg cgcttctacg gcccggtcta
gggtgtcgct ctgctggcct ggccggcaac cccagttctg ctcctctcca ggcacccttc tttcctcttc cccttgccct
tgccctgacc tcccagccct atggatgtgg ggtccccatc atcccagctg ctcccaaata aactccagaa gaggaatctg
aaaaaaaaaa aaaaaaaa
SEQ ID NO.2
人骨钙蛋白氨基酸序列
MRALTLLALL ALAALCIAGQ AGAKPSGAES SKGAAFVSKQ EGSEVVKRPR
RYLYQWLGAP VPYPDPLEPR REVCELNPDC DELADHIGFQ EAYRRFYGPV
SEQ ID NO.3
小鼠骨钙蛋白基因1cDNA
agaacagaca agtcccacac agcagcttgg cccagaccta gcagacacca tgaggaccat ctttctgctc actctgctga
ccctggctgc gctctgtctc tctgacctca cagatgccaa gcccagcggc cctgagtctg acaaagcctt catgtccaag
caggagggca ataaggtagt gaacagactc cggcgctacc ttggagcctc agtccccagc ccagatcccc tggagcccac
ccgggagcag tgtgagctta accctgcttg tgacgagcta tcagaccagt atggcttgaa gaccgcctac aaacgcatct
atggtatcac tatttaggac ctgtgctgcc ctaaagccaa actctggcag ctcggctttg gctgctctcc gggacttgat
cctccctgtc ctctctctct gccctgcaag tatggatgtc acagcagctc caaaataaag ttcagatgag gaagtgcaaa
aaaaaaaaaa aaaa
SEQ ID NO.4
小鼠骨钙蛋白基因2cDNA
gaacagacaa gtcccacaca gcagcttggt gcacacctag cagacaccat gaggaccctc tctctgctca ctctgctggc
cctggctgcg ctctgtctct ctgacctcac agatcccaag cccagcggcc ctgagtctga caaagccttc atgtccaagc
aggagggcaa taaggtagtg aacagactcc ggcgctacct tggagcctca gtccccagcc cagatcccct ggagcccacc
cgggagcagt gtgagcttaa ccctgcttgt gacgagctat cagaccagta tggcttgaag accgcctaca aacgcatcta
cggtatcact atttaggacc tgtgctgccc taaagccaaa ctctggcagc tcggctttgg ctgctctccg ggacttgatc
ctccctgtcc tctctctctg ccctgcaagt atggatgtca cagcagctcc aaaataaagt tcagatgagg
SEQ ID NO.5
小鼠骨钙蛋白基因1和2蛋白质氨基酸序列
MRTLSLLTLL ALAALCLSDL TDPKPSGPES DKAFMSKQEG NKVVNRLRRY
LGASVPSPDP LEPTREQCEL NPACDELSDQ YGLKTAYKRI YGITI
SEQ ID NO.6
人脂连蛋白cDNA
aggctgttga ggctgggcca tctcctcctc acttccattc tgactgcagt ctgtggttct gattccatac cagaggggct
caggatgctg ttgctgggag ctgttctact gctattagct ctgcccggtc atgaccagga aaccacgact caagggcccg
gagtcctgct tcccctgccc aagggggcct gcacaggttg gatggcgggc atcccagggc atccgggcca taatggggcc
ccaggccgtg atggcagaga tggcacccct ggtgagaagg gtgagaaagg agatccaggt cttattggtc ctaagggaga
catcggtgaa accggagtac ccggggctga aggtccccga ggctttccgg gaatccaagg caggaaagga gaacctggag
aaggtgccta tgtataccgc tcagcattca gtgtgggatt ggagacttac gttactatcc ccaacatgcc cattcgcttt
accaagatct tctacaatca gcaaaaccac tatgatggct ccactggtaa attccactgc aacattcctg ggctgtacta
ctttgcctac cacatcacag tctatatgaa ggatgtgaag gtcagcctct tcaagaagga caaggctatg ctcttcacct
atgatcagta ccaggaaaat aatgtggacc aggcctccgg ctctgtgctc ctgcatctgg aggtgggcga ccaagtctgg
ctccaggtgt atggggaagg agagcgtaat ggactctatg ctgataatga caatgactcc accttcacag gctttcttct
ctaccatgac accaactgat caccactaac tcagagcctc ctccaggcca aacagcccca aagtcaatta aaggctttca
gtacggttag gaagttgatt attatttagt tggaggcctt tagatattat tcattcattt actcattcat ttattcattc attcatcaag
taactttaaa aaaatcatat gctatgttcc cagtcctggg gagcttcaca aacatgacca gataactgac tagaaagaag
tagttgacag tgctattttg tgcccactgt ctctcctgat gctcatatca atcctataag gcacagggaa caagcattct
cctgttttta cagattgtat cctgaggctg agagagttaa gtgaatgtct aaggtcacac agtattaagt gacagtgcta
gaaatcaaac ccagagctgt ggactttgtt cactagactg tgccctttta tagaggtaca tgttctcttt ggagtgttgg
taggtgtctg tttcccacct cacctgagag ccattgaatt tgccttcctc atgaattaaa acctccccca agcagagctt
cctcagagaa agtggttcta tgatgaagtc ctgtcttgga aggactacta ctcaatggcc cctgcactac tctacttcct
cttacctatg tcccttctca tgcctttccc tccaacgggg aaagccaact ccatctctaa gtgctgaact catccctgtt
cctcaaggcc acctggccag gagcttctct gatgtgatat ccactttttt tttttttgag atggagtctc actctgtcac
ccaggctgga gtacagtgac acgacctcgg ctcactgcag cctccttctc ctgggtccaa gcaattattg tgcctcagcc
tcccgagtag ctgagacttc aggtgcattc caccacacat ggctaatttt tgtattttta gtagaaatgg ggtttcgtca
tgttggccag gctggtctcg aactcctggc ctaggtgatc cacccgcctc gacctcccaa agtgctggga ttacaggcat
gagccaccat gcccagtcga tatctcactt tttattttgc catggatgag agtcctgggt gtgaggaaca cctcccacca
ggctagaggc aactgcccag gaaggactgt gcttccgtca cctctaaatc ccttgcagat ccttgataaa tgcctcatga
agaccaatct cttgaatccc atatctaccc agaattaact ccattccagt ctctgcatgt aatcagtttt atccacagaa acattttcat
tttaggaaat ccctggtttt aagtatcaat ccttgttcag ctggacaata tgaatctttt ccactgaagt tagggatgac tgtgattttc
agaacacgtc cagaattttt catcaagaag gtagcttgag cctgaaatgc aaaacccatg gaggaattct gaagccattg
tctccttgag taccaacagg gtcagggaag actgggcctc ctgaatttat tattgttctt taagaattac aggttgaggt
agttgatggt ggtaaacatt ctctcaggag acaataactc cagtgatgtt cttcaaagat tttagcaaaa acagagtaaa
tagcattctc tatcaatata taaatttaaa aaactatctt tttgcttaca gttttaaatt ctgaacaatt ctctcttata tgtgtattgc
taatcattaa ggtattattt tttccacata taaagctttg tctttttgtt gttgttgttg tttttaagat ggagtttccc tctgttgcca
ggctagagtg cagtggcatg atctcggctt actgcaacct ttgcctccca ggttcaagcg attcttctgc ctcagcctcc
cgagtagctg ggaccacagg tgcctaccac catgccaggc taatttttgt atttttagta aagacagggt ttcaccatat
tggccaggct ggtctcgaac tcctgacctt gtgatctgcc cgcctccatt tttgttgtta ttttttgaga aagatagata
tgaggtttag agagggatga agaggtgaga gtaagccttg tgttagtcag aactctgtgt tgtgaatgtc attcacaaca
gaaaacccaa aatattatgc aaactactgt aagcaagaaa aataaaggaa aaatggaaac atttattcct ttgcataata
gaaattacca gagttgttct gtctttagat aaggtttgaa ccaaagctca aaacaatcaa gacccttttc tgtatgtcct
tctgttctgc cttccgcagt gtaggcttta ccctcaggtg ctacacagta tagttctagg gtttccctcc cgatatcaaa
aagactgtgg cctgcccagc tctcgtatcc ccaagccaca ccatctggct aaatggacat catgttttct ggtgatgccc
aaagaggaga gaggaagctc tctttcccag atgccccagc aagtgtaacc ttgcatctca ttgctctggc tgagttgtgt
gcctgtttct gaccaatcac tgagtcagga ggatgaaata ttcatattga cttaattgca gcttaagtta ggggtatgta
gaggtatttt ccctaaagca aaattgggac actgttatca gaaataggag agtggatgat agatgcaaaa taatacctgt
ccacaacaaa ctcttaatgc tgtgtttgag ctttcatgag tttcccagag agacatagct ggaaaattcc tattgatttt ctctaaaatt
tcaacaagta gctaaagtct ggctatgctc acagtctcac atctggttgg ggtgggctcc ttacagaaca cgctttcaca
gttaccctaa actctctggg gcagggttat tcctttgtgg aaccagaggc acagagagag tcaactgagg ccaaaagagg
cctgagagaa actgaggtca agatttcagg attaatggtc ctgtgatgct ttgaagtaca attgtggatt tgtccaattc
tctttagttc tgtcagcttt tgcttcatat attttagcgc tctattatta gatatataca tgtttagtat tatgtcttat tggtgcattt
actctcttat cattatgtaa tgtccttctt tatctgtgat aattttctgt gttctgaagt ctactttgtc taaaaataac atacgcactc
aacttccttt tctttcttcc ttcctttctt tcttccttcc tttctttctc tctctctctc tttccttcct tccttcctcc ttttctttct ctctctctct
ctctctcttt ttttgacaga ctctcgttct gtggccctgg ctggagttca gtggtgtgat cttggctcac tgctacctct
accatgagca attctcctgc ctcagcctcc caagtagctg gaactacagg ctcatgccac tgcgcccagc taatttttgt
atttttcgta gagacggggt ttcaccacat tcgtcaggtt ggtttcaaac tcctgacttt gtgatccacc cgcctcggcc
tcccaaagtg ctgggattac aggcatgagc catcacacct ggtcaacttt cttttgatta gtgtttttgt ggtatatctt tttccatcat
gttactttaa atatatctat attattgtat ttaaaatgtg tttcttacag actgcatgta gttgggtata atttttatcc agtctaaaaa
tatctgtctt ttaattggtg tttagacaat ttatatttaa taaaattgtt gaatttaaaa aaaaaaaaaa aa
SEQ ID NO.7
人脂连蛋白蛋白质氨基酸序列
MLLLGAVLLL LALPGHDQET TTQGPGVLLP LPKGACTGWM AGIPGHPGHN
GAPGRDGRDG TPGEKGEKGD PGLIGPKGDI GETGVPGAEG PRGFPGIQGR
KGEPGEGAYV YRSAFSVGLE TYVTIPNMPI RFTKIFYNQQ NHYDGSTGKF
HCNIPGLYYF AYHITVYMKD VKVSLFKKDK AMLFTYDQYQ ENNVDQASGS
VLLHLEVGDQ VWLQVYGEGE RNGLYADNDN DSTFTGFLLY HDTN
SEQ ID NO.8
小鼠脂连蛋白cDNA
TAAGCTGGGG TCTGCCTGTC CCCATGAGTA CCAGACTAAT GAGACCTGGC
CACTTTCTCC TCATTTCTGT CTGTACGATT GTCAGTGGAT CTGACGACAC
CAAAAGGGCT CAGGATGCTA CTGTTGCAAG CTCTCCTGTT CCTCTTAATC
CTGCCCAGTC ATGCCGAAGA TGACGTTACT ACAACTGAAG AGCTAGCTCC
TGCTTTGGTC CCTCCACCCA AGGGAACTTG TGCAGGTTGG ATGGCAGGCA
TCCCAGGACA TCCTGGCCAC AATGGCACAC CAGGCCGTGA TGGCAGAGAT
GGCACTCCTG GAGAGAAGGG AGAGAAAGGA GATGCAGGTC TTCTTGGTCC
TAAGGGTGAG ACAGGAGATG TTGGAATGAC AGGAGCTGAA GGGCCACGGG
GCTTCCCCGG AACCCCTGGC AGGAAAGGAG AGCCTGGAGA AGCCGCTTAT
GTGTATCGCT CAGCGTTCAG TGTGGGGCTG GAGACCCGCG TCACTGTTCC
CAATGTACCC ATTCGCTTTA CTAAGATCTT CTACAACCAA CAGAATCATT
ATGACGGCAG CACTGGCAAG TTCTACTGCA ACATTCCGGG ACTCTACTAC
TTCTCTTACC ACATCACGGT GTACATGAAA GATGTGAAGG TGAGCCTCTT
CAAGAAGGAC AAGGCCGTTC TCTTCACCTA CGACCAGTAT CAGGAAAAGA
ATGTGGACCA GGCCTCTGGC TCTGTGCTCC TCCATCTGGA GGTGGGAGAC
CAAGTCTGGC TCCAGGTGTA TGGGGATGGG GACCACAATG GACTCTATGC
AGATAACGTC AACGACTCTA CATTTACTGG CTTTCTTCTC TACCATGATA
CCAACTGACT GCAACTACCC ATAGCCCATA CACCAGGAGA ATCATGGAAC
AGTCGACACA CTTTCAGCTT AGTTTGAGAG ATTGATTTTA TTGCTTAGTT
TGAGAGTCCT GAGTATTATC CACACGTGTA CTCACTTGTT CATTAAACGA
CTTTATAAAA AATAATTTGT GTTCCTAGTC CAGAAAAAAA GGCACTCCCT
GGTCTCCACG ACTCTTACAT GGTAGCAATA ACAGAATGAA AATCACATTT
GGTATGGGGG CTTCACAATA TTCGCATGAC TGTCTGGAAG TAGACCATGC
TATTTTTCTG CTCACTGTAC ACAAATATTG TTCACATAAA CCCTATAATG
TAAATATGAA ATACAGTGAT TACTCTTCTC ACT
SEQ ID NO.9
小鼠脂连蛋白蛋白质氨基酸序列
MLLLQALLFL LILPSHAEDD VTTTEELAPA LVPPPKGTCA GWMAGIPGHP
GHNGTPGRDG RDGTPGEKGE KGDAGLLGPK GETGDVGMTG AEGPRGFPGT
PGRKGEPGEA AYMYRSAFSV GLETRVTVPN VPIRFTKIFY NQQNHYDGST
GKFYCNIPGL YYFSYHITVY MKDVKVSLFK KDKAVLFTYD QYQEKNVDQA
SGSVLLHLEV GDQVWLQVYG DGDHNGLYAD NVN STFTGF LLYHDTN
SEQ ID NO.10
人γ-谷氨酰羧化酶cDNA
gtgacccacc tgcctcctcc gcagagcaat ggcggtgtct gccgggtccg cgcggacctc gcccagctca gataaagtac
agaaagacaa ggctgaactg atctcagggc ccaggcagga cagccgaata gggaaactct tgggttttga gtggacagat
ttgtccagtt ggcggaggct ctgaatcgac caacggaccc tgcaagctta gctgtctttc gttttctttt tgggttcttg
atggtgctag acattcccca ggagcggggg ctcagctctc tggaccggaa gggctggatg tgtgccgctt ccccttgctg
gatgccctac gcccactgcc atgtatcttg tctacaccat catgtttctg ggggcactgg gcatgatgct taccggataa
gctgtgtgtt attcctgctg ccatactggt atgtgtttct cctggacaag acatcatgga acaaccactc ctatctgtat
gggttgttgg cctttcagct gatgcaaacc actactggtc tgtggacggt ctgctgaatg cccataggag gtgccccttt
ggaactatgc agtgctccgt ggccagatct tcattgtgta cttcattgcg ggtgtgaaaa agctggatgc agactgggtt
gaaggctatt ccatggaata tttgtcccgg cactggctct tcagtccctt caaactgctg ttgtctgagg agctgactag
cctgctggtc gtgcactggg gtgggctgct gcttgacctc tcagctggtt tcctgctctt ttttgatgtc tcaagatcca
ttggcctgtt ctttgtgtcc tacttccact gcatgaattc ccagcttttc agcattggta tgttctccta cgtcatgctg
gccagcagcc ctctcttctg ctcccctgag tggcctcgga agctggtgtc ctactgcccc cgaaggttgc aacaactgtt
gcccctcaag gcagcccctc agcccagtgt ttcctgtgtg tataagagga gccggggcaa aagtggccag aagccagggc
tgcgccatca gctgggagct gccttcaccc tgctctacct cctggagcag ctattcctgc cctattctca ttttctcacc
cagggctata acaactggac aaatgggctg tatggctatt cctgggacat gatggtgcac tcccgctccc accagcacgt
gaagatcacc taccgtgatg gccgcactgg cgaactgggc taccttaacc ctggggtatt tacacagagt cggcgatgga
aggatcatgc agacatgctg aagcaatatg ccacttgcct gagccgcctg cttcccaagt ataatgtcac tgagccccag
atctactttg atatttgggt ctccatcaat gaccgcttcc agcagaggat ttttgaccct cgtgtggaca tcgtgcaggc
cgcttggtca ccctttcagc gcacatcctg ggtgcaacca ctcttgatgg acctgtctcc ctggagggcc aagttacagg
aaatcaagag cagcctagac aaccacactg aggtggtctt cattgcagat ttccctggac tgcacttgga gaattttgtg
agtgaagacc tgggcaacac tagcatccag ctgctgcagg gggaagtgac tgtggagctt gtggcagaac agaagaacca
gactcttcga gagggagaaa aaatgcagtt gcctgctggt gagtaccata aggtgtatac gacatcacct agcccttctt
gctacatgta cgtctatgtc aacactacag agcttgcact ggagcaagac ctggcatatc tgcaagaatt aaaggaaaag
gtggagaatg gaagtgaaac agggcctcta cccccagagc tgcagcctct gttggaaggg gaagtaaaag ggggccctga
gccaacacct ctggttcaga cctttcttag acgccaacaa aggctccagg agattgaacg ccggcgaaat actcctttcc
atgagcgatt cttccgcttc ttgttgcgaa agctctatgt ctttcgccgc agcttcctga tgacttgtat ctcacttcga aatctgatat
taggccgtcc ttccctggag cagctggccc aggaggtgac ttatgcaaac ttgagaccct ttgaggcagt tggagaactg
aatccctcaa acacggattc ttcacattct aatcctcctg agtcaaatcc tgatcctgtc cactcagagt tctgaagggg
gccagatgtt gggtgcagat gtagaagcag ccagtcacag acccattcta tgcaatggac atttatttga aaaaaattct
caaaagtttt tttttttttt ttgggggggc ggggttctaa agctgttttt aactccgaga ttacaactta gaggaaccaa
ggaaataaag caaataagat ttaacaaccc aagattaaga ggccaggaag aggttagacg caatgtgaaa ctgtcctcct
aggataaggt ttaaagtggc tttttggggg ctgggtgccg tggctcacgc ctgtaatccc agcattttgg gaggctgagg
tgggcagatc acttgaggcc aggagttcga gaccagcctg gccaacatgg caaaacccct tctctactaa aaatacaaaa
attagccaga cgtggtggtg ggtgcctgta atccaactac ccaggaggct gaggcatgag aatcgcttgg gcccaggagg
tggaggttgc agtgagccga gatcgagcca ctgcactcct gggcaacaga gcaagacttc gtctcaaaat aaataaataa
agtggctctt ggggaaaagc aatttaatgt accacgatga atagctaact gttcccaagt gtttgctatg tgcaacacac
cgcgtgagca gtgttacctg cattattaca ttaggctgag aggtaaaata atttgcccga agacatacag ctagtgacga
atggactgat ggtttgaact taacgtctat ttgacttaag gtcctgcacc ctgccacttg taattttcag aatcactgat
aatctgaaat aatgcagctt aaaacatgtt ttcttaatta aaagtataaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa
SEQ ID NO.11
人γ-谷氨酰羧化酶蛋白质氨基酸序列
MAVSAGSART SPSSDKVQKD KAELISGPRQ DSRIGKLLGF EWTDLSSWRR
LVTLLNRPTD PASLAVFRFL FGFLMVLDIP QERGLSSLDR KYLDGLDVCR
FPLLDALRPL PLDWMYLVYT IMFLGALGMM LGLCYRISCV LFLLPYWYVF
LLDKTSWNNH SYLYGLLAFQ LTFMDANHYW SVDGLLNAHR RNAHVPLWNT
AVLRGQIFIV YFIAGVKKLD ADWVEGYSME YLSRHWLFSP FKLLLSEELT
SLLVVHWGGL LLDLSAGFLL FFDVSRSIGL FFVSYFHCMN SQLFSIGMFS
YVMLASSPLF CSPEWPRKLV SYCPRRLQQL LPLKAAPQPS VSCVYKRSRG
KSGQKPGLRH QLGAAFTLLY LLEQLFLPYS HFLTQGYNNW TNGLYGYSWD
MMVHSRSHQH VKITYRDGRT GELGYLNPGV FTQSRRWKDH ADMLKQYATQ
LSRLLPKYNV TEPQIYFDIW VSINDRFQQR IFDPRVDIVQ AAWSPFQRTS
WVQPLLMDLS PWRAKLQEIK SSLDNHTEVV FIADFPGLHL ENFVSEDLGN
TSIQLLQGEV TVELVAEQKN QTLREGEKMQ LPAGEYHKVY TTSPSPSCYM
YVYVNTTELA LEQDLAYLQE LKEKVENGSE TGPLPPELQP LLEGEVKGGP
EPTPLVQTFL RRQQRLQEIE RRRNTPFHER FFRFLLRKLY VFRRSFLMTC
ISLRNLILGR PSLEQLAQEV TYANLRPFEA VGELNPSNTD SSHSNPPESN
PDPVHSEF
SEQ ID NO.12
小鼠γ-谷氨酰羧化酶cDNA
agacagcaag tctaagtctg gaggttccac tgggtccgac ctggctgcag agaggctcac ctgtccctgc agtcatggct
gtgcaccgcg gctccgcact ggttgctccc gcctcagata aagtacagaa aaacaagtct gcacagacat caggactgaa
acagggcagc cgaatggaga aaattttagg gtttgaatgg acagatttat ctagctggca gagtgtcgtg accctgctta
acaaaccaac ggaccctgca aacctggctg tctttcgttt tctctttgct ttcttgatgc tgctggacat tccccaggaa
cgcggcctta gctccctgga ccgaaaatac ttggatgggc tggatgtgtg ccgtttcccc ttgctggatg ccttgcgccc
actgccactg gactggatgt atcttgtcta caccatcatg tttctggggg cactgggcat gatgctgggg ctatgctacc
ggctaagctg tgtgttattc ctgctaccgt actggtacgt gtttctcctg gacaagactt cgtggaacaa tcactcctat
ctgtatggtt tgttggcctt tcagttgaca ttcatggatg caaaccacta ctggtctgtg gatggcttgc tgaatgcccg
aaagaagaat gctcacgtgc ccctttggaa ctacacagtt ctgcgtggcc agatcttcat cgtgtacttc atcgcgggtg
tgaagaagct cgatgctgac tgggttgggg gctactccat ggagcacctg tcccggcact ggctcttcag tcccttcaag
ctggtgttgt cggaggagct gacaagcctg ctggtagtac actggtgtgg gcttctcctt gacctctcgg ctggcttcct
gctcttcttt gatgcctcca gacccgtcgg cctgttcttc gtgtcctact ttcactgcat gaactcgcag ctcttcagca
tcgggatgtt tccctatgtc atgctggcca gcagccctct cttctgctca gctgaatggc ctcggaagtt ggtagcccga
tgcccgaaaa ggctgcaaga gctgctgccc accaaagccg ctcctcggcc tagtgcttcc tgtgtgtata agaggtcccg
gggcaaagct ggcccgaagc ccgggctgcg ccaccagctg ggagccatct tcaccctgct ctacctccta gagcagctct
tcctgcccta ttcccacttc ctgacccagg gttacaataa ctggacaaat gggctgtatg gctattcctg ggacatgatg
gtgcactccc gctcccacca gcacgtaaag atcacctacc gcgacggcct cacgggcgag ctaggctacc ttaaccctgg
ggtattcaca cagagccggc gatggaagga tcatgcagac atgctgaagc aatatgccac ttgcctgagc ctcctgcttc
ccaagtacaa tgtcactgag ccccagatct actttgatat ttgggtctcc atcaatgacc gcttccagca gaggcttttt
gaccctcgtg tggacatcgt gcaggctgtc tggtccccct tccagcgcac accttgggtg cagccactct tgatggattt
atctccctgg aggaccaagt tacaggatat taagagcagt ctggacaacc acaccgaggt ggtcttcatt gcagatttcc
ctgggcttca cttggagaat tttgtgagtg aagacctggg caacactagc atccagctgc tgcagggaga agtcaccgtg
gaattggtgg cagaacagaa aaatcagact cttcaagaag gagagaaaat gcagttgcct gctggagagt accataaagt
ctatactgta tcatctagtc cttcctgcta catgtacgtc tatgtcaaca ctacagaggt cgcactggag caagacctgg
catatctgca agaattaaag gagaaggtgg agaacggaag tgaaacaggg cccctgcctc cagaacttca gcctcttttg
gaaggggaag taaaaggggg ccctgagcca acacctctgg tccaaacttt tctcagacga cagaggaagc tccaagaaat
tgaacgcagg cgaaatagcc ctttccatga gcgatttctc cgcttcgtgc tgcgaaagct ctacgtcttt cgacgcagct
tcctgatgac tcgaatttca ctccgaaacc tgctattagg ccgcccttcc ctagagcaac tagcccaaga ggtgacatat
gcaaacttgc gaccatttga accagttgat gagtcaagtg cttcaaacac agattcttca aatcacccgt cagagccaga
ttctgagcat gttcactctg agttctgagg gatgtacaga tgctctgtgc agatgtgggg gcagcctgtt ataggcttat
tgtctacgca aagaacatat ttttggagaa aaatgatatg ggacaggctt tcacagtaca gcccaggctg gcctcaaact
catggttggt ccctctgctt cagcctgttt tgtaattaca tagtatcacc aaacctagtt gcttttccct ttacattttt tccccttata
agttctttaa aattatagct tacatttttt cttttttctt tttttttttt ttgtattttt tctttgtcaa gacaggtctc tctctgtgta
gcactggctg tcctggaact cactctgtag tccaggctgg cctccaactc agaaattctc ctgcctctgc ctcccaagtg
ctgggattaa aggtgtgtgc caccacgccc cactgggctt ttagttttta tagacaagat ttctccatgt agaccagacc
agctctcctg agtgctgaaa ttaaaggcac gggacatcac tacctggctt tcttattaaa cttgttttag tggtctcaac aaaaa
SEQ ID NO.13
小鼠γ-谷氨酰羧化酶蛋白质氨基酸序列
MAVHRGSALV APASDKVQKN KSAQTSGLKQ GSRMEKILGF EWTDLSSWQS
VVTLLNKPTD PANLAVFRFL FAFLMLLDIP QERGLSSLDR KYLDGLDVCR
FPLLDALRPL PLDWMYLVYT IMFLGALGMM LGLCYRLSCV LFLLPYWYVF
LLDKTSWNNH SYLYGLLAFQ LTFMDANHYW SVDGLLNARK KNAHVPLWNY
TVLRGQIFIV YFIAGVKKLD ADWVGGYSME HLSRHWLFSP FKLVLSEELT
SLLVVHWCGL LLDLSAGFLL FFDASRPVGL FFVSYFHCMN SQLFSIGMFP
YVMLASSPLF CSAEWPRKLV ARCPKRLQEL LPTKAAPRPS ASCVYKRSRG
KAGPKPGLRH QLGAIFTLLY LLEQLFLPYS HFLTQGYNNW TNGLYGYSWD
MMVHSRSHQH VKITYRDGLT GELGYLNPGV FTQSRRWKDH ADMLKQYATC
LSLLLPKYNV TEPQIYFDIW VSINDRFQQR LFDPRVDIVQ AVWSPFQRTP
WVQPLLMDLS PWRTKLQDIK SSLDNHTEVV FIADFPGLHL ENFVSEDLGN
TSIQLLQGEV TVELVAEQKN QTLQEGEKMQ LPAGEYHKVY TVSSSPSCYM
YVYVNTTEVA LEQDLAYLQE LKEKVENGSE TGPLPPELQP LLEGEVKGGP
EPTPLVQTFL RRQRKLQEIE RRRNSPFHER FLRFVLRKLY VFRRSFLMTR
ISLRNLLLGR PSLEQLAQEV TYANLRPFEP VDESSASNTD SSNHPSEPDS EHVHSEF
SEQ ID NO.14
人ApoE cDNA
gggatccttg agtcctactc agccccagcg gaggtgaagg acgtccttcc ccaggagccg actggccaat cacaggcagg
aagatgaagg ttctgtgggc tgcgttgctg gtcacattcc tggcaggatg ccaggccaag gtggagcaag cggtggagac
agagccggag cccgagctgc gccagcagac cgagtggcag agcggccagc gctgggaact ggcactgggt cgcttttggg
attacctgcg ctgggtgcag acactgtctg agcaggtgca ggaggagctg ctcagctccc aggtcaccca ggaactgagg
gcgctgatgg acgagaccat gaaggagttg aaggcctaca aatcggaact ggaggaacaa ctgaccccgg tggcggagga
gacgcgggca cggctgtcca aggagctgca ggcggcgcag gcccggctgg gcgcggacat ggaggacgtg
tgcggccgcc tggtgcagta ccgcggcgag gtgcaggcca tgctcggcca gagcaccgag gagctgcggg tgcgcctcgc
ctcccacctg cgcaagctgc gtaagcggct cctccgcgat gccgatgacc tgcagaagcg cctggcagtg taccaggccg
gggcccgcga gggcgccgag cgcggcctca gcgccatccg cgagcgcctg gggcccctgg tggaacaggg
ccgcgtgcgg gccgccactg tgggctccct ggccggccag ccgctacagg agcgggccca ggcctggggc
gagcggctgc gcgcgcggat ggaggagatg ggcagccgga cccgcgaccg cctggacgag gtgaaggagc
aggtggcgga ggtgcgcgcc aagctggagg agcaggccca gcagatacgc ctgcaggccg aggccttcca
ggcccgcctc aagagctggt tcgagcccct ggtggaagac atgcagcgcc agtgggccgg gctggtggag aaggtgcagg
ctgccgtggg caccagcgcc gcccctgtgc ccagcgacaa tcactgaacg ccgaagcctg cagccatgcg accccacgcc
accccgtgcc tcctgcctcc gcgcagcctg cagcgggaga ccctgtcccc gccccagccg tcctcctggg gtggacccta
gtttaataaa gattcaccaa gtttcacgca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa
SEQ ID NO.15
人ApoE蛋白质氨基酸序列
MKVLWAALLV TFLAGCQAKV EQAVETEPEP ELRQQTEWQS GQRWELALGR
FWDYLRWVQT LSEQVQEELL SSQVTQELRA LMDETMKELK AYKSELEEQL
TPVAEETRAR LSKELQAAQA RLGADMEDVC GRLVQYRGEV QAMLGQSTEE
LRVRLASHLR KLRKRLLRDA DDLQKRLAVY QAGAREGAER GLSAIRERLG
PLVEQGRVRA ATVGSLAGQP LQERAQAWGE RLRARMEEMG SRTRDRLDEV
KEQVAEVRAK LEEQAQQIRL QAEAFQARLK SWFEPLVEDM QRQWAGLVEK
VQAAVGTSAA PVPSDNH
SEQ ID NO.16
小鼠ApoE cDNA
ggacttgttt cggaaggagc tgactggcca atcacaattg cgaagatgaa ggctctgtgg gccgtgctgt tggtcacatt
gctgacagga tgcctagccg agggagagcc ggaggtgaca gatcagctcg agtggcaaag caaccaaccc tgggagcagg
ccctgaaccg cttctgggat tacctgcgct gggtgcagac gctgtctgac caggtccagg aagagctgca gagctcccaa
gtcacacaag aactgacggc actgatggag gacactatga cggaagtaaa ggcttacaaa aaggagctgg aggaacagct
gggtccagtg gcggaggaga cacgggccag gctgggcaaa gaggtgcagg cggcacaggc ccgactcgga
gccgacatgg aggatctacg caaccgactc gggcagtacc gcaacgaggt gcacaccatg ctgggccaga gcacagagga
gatacgggcg cggctctcca cacacctgcg caagatgcgc aagcgcttga tgcgggatgc cgatgatctg cagaagcgcc
tagctgtgta caaggcaggg gcacgcgagg gcgccgagcg cggtgtgagt gccatccgtg agcgcctggg gcctctggtg
gagcaaggtc gccagcgcac tgccaaccta ggcgctgggg ccgcccagcc tctgcgcgat cgcgcccagg cttttggtga
ccgcatccga aggaagtggg caaccaggcc cgtgaccgcc tagaggaggt gcgtgagcac atggaggagg tgcgctccaa
gatggaggaa cagacccagc aaatacgcct gcaggcggag atcttccagg cccgcctcaa gggctggttc gagccaatag
tggaagacat gcatcgccag tgggcaaacc tgatggagaa gatacaggcc tctgtggcta ccaaccccat catcacccca
gtggcccagg agaatcaatg agtatccttc tcctgtcctg caacaacatc catatccagc caggtggccc tgtctcaagc
acctctctgg ccctctggtg gcccttgctt aataaagatt ctccgagcaa aaaaaaaaaa aaaa
SEQ ID NO.17
小鼠ApoE蛋白质氨基酸序列
MKALWAVLLV TLLTGCLAEG EPEVTDQLEW QSNQPWEQAL NRFWDYLRWV
QTLSDQVQEE LQSSQVTQEL TALMEDTMTE VKAYKKELEE QLGPVAEETR
ARLGKEVQAA QARLGADMED LRNRLGQYRN EVHTMLGQST EEIRARLSTH
LRKMRKRLMR DADDLQKRLA VYKAGAREGA ERGVSAIRER LGPLVEQGRQ
RTANLGAGAA QPLRDRAQAF GDRIRGRLEE VGNQARDRLE EVREHMEEVR
SKMEEQTQQI RLQAEIFQAR LKGWFEPIVE DMHRQWANLM EKIQASVATN
PIITPVAQEN Q
SEQ ID NO.18
小鼠Esp(OST-PTP，Ptprv)cDNA
ggctgtggga gagcagaaga ggagctggaa gagcagccta caacagctgt cgggagggac cagggctagt tcacacttgg
aagctgggat gccaggaccg gccctcctgc ctctctcggt ctccatcggc ctcctggtca gctcactcca cactgagacg
attctgaagt aagatgctcc tggctcctca cagactctgc tacaagagac agagtgaagt gtccccaggg ctcagagcct
ttgactctgc tccttccctt cccacggctg agttggcaca ggagcacctg ggtgagctgc accagactta agaagatgag
gcccctgatt ctgttagctg ccctcctctg gctccaggac tctttggccc aggaagatgt atgctcatcc ttggatggga
gcccagacag gcagggtgga ggtccacctc tgagtgtgaa cgtcagcagc cgcggaaagc ctaccagcct gtttctgagc
tgggtagctg cagagccagg tggatttgac tatgccctct gcctcagggc tatgaacttg tcgggttttc cagaagggca
acagctccaa gctcatacca acgagtccag ctttgagttc catggcctgg tgccagggag tcgctaccag ctggaactga
ctgtcctaag accctgttgg cagaatgtca caattaccct cactgctcga actgccccta cagtggtccg tggactgcaa
ctgcatagca ctgggagccc agccagcctg gaagcctcat ggagcgatgc ctctggggat caagacagct atcaacttct
cctctaccac ccggaatccc acactctggc atgtaatgtc tctgtgtccc ctgacaccct gtcttacaat tttggtgacc
tcttgccagg tagtcagtat gtcttggagg ttatcacctg ggctggcagt ctccatgcga agactagcat cctccaatgg
acagagcctg tccctcctga tcacctaaca ctgcgtgcct tgggtaccag tagcctgcaa gccttctgga acagctctga
aggggccacc tggtttcacc tgatacttac agacctccta gagggtacca acctgaccaa agtggtcaga caaggcatct
caacccacac cttccttcgc ctgtctccgg gtacacctta ccagctgaag atctgtgctg ctgctgggcc ccaccagatt
tggggaccca atgccactga gtggacctat ccctcttacc catctgacct ggtgctgacc cccttatgga atgagctctg
ggcaagctgg aaggcagggc agggagcccg ggatggctat gtactgaagt taagtgggcc agtggagaat acaactactc
tgggtcctga ggagtgcaac gctgtcttcc cagggcccct gcctccagga cactacactt tggggctgag ggttctagct
ggaccttatg atgcctgggt agagggcagt atctggctgg ctgaatctgc tgctcgtccc atggaggtcc ctggtgccag
actgtggcta gaaggactgg aagctactaa gcaacctggg agacgggcgc tgctctattc tgttgatgcc ccaggcctcc
tagggaacat ctctgtgtct tctggtgcca ctcatgtcac cttctgtggc ttggtacccg gagcgcacta cagggtggac
attgcctcat ccatgggaga catcactcag agcctcacag gctacacaag tcccctgcca ccacagtctc tggagatcat
cagccggaac agcccatctg acctgactat cggttgggct ccagcaccag ggcagatgga aggttataag gtcacctggc
atcaggatgg cagccagagg tcacctggcg accttgttga cttgggccct gacatttcga gcctgactct gaaatctctg
gtacctggtt cctgctacac cgtgtcagca tgggcctggt ctgggaacct cagctctgac tctcagaaga ttcacagttg
cacccgtccc gctcctccca ccaacctgag cctgggcttt gcccaccagc ctgcaacact gagggcttcc tggtgtcacc
caccgggtgg cagggatgcc tttcagttac ggctttacag gctgaggccc ctgacactgg aaagtgagaa gatcctatcc
caggaggccc agaacttctc ctgggcccag ctgcctgcag gctatgaatt ccaggtacag ctgtctacct tgtgggggtc
ggaggagagc ggcagtgcca acaccacagg ctggacaccc ccctcagctc ctacattggt aaatgtgacc agtgaagccc
ccacccagct ccacgtatcc tgggtccacg ctgctgggga ccggagcagc taccaagtga ccctatacca ggagagcact
cggacagcca ccagcattgt ggggcccaag gcagacagca caagcttttg gggtttgact cctggcacta agtacaaggt
ggaagccatc tcctgggctg ggccccttta cactgcagca gccaacgttt ctgcttggac ctacccactc acacccaatg
agctgctcgc ctctatgcag gcaggcagtg ctgtggttaa cctggcctgg cccagtggtc ccttggggca agggacatgc
catgcccaac tctcagatgc tggacacctt tcatgggagc aaccgctgtc gctaggccaa gacctcctca tgctaaggaa
tcttatacca ggacatacgg tttcattgtc tgtgaagtgt cgggcaggac cactccaggc ctccactcac cccctggtgc
tgtctgtaga gcctggccct gtggaagatg tgttctgtca acctgaggcc acctacctgt ccctgaactg gacgatgcct
actggagatg tggctgtctg tctggtggag gtagagcagc tggtgccagg agggagcgct cattttgtct tccaggtcaa
cacctcggag gatgcacttc tgctgcccaa cttgacgccc accacttctt accgccttag cctcactgtg ctgggtggga
atcgccagtg gagccgggcg gttaccctgg tgtgcactac ttctgctgag gtttggcacc ccccagagct agctgaggcc
ccccaggtgg agctggggac agggatgggt gtgacagtca cacgtggcat gtttggtaaa gatgacgggc agatccagtg
gtatggcata attgccacca tcaacatgac actggcccag ccttcccagg aagccatcaa ccacacatgg tatgaccact
actatagagg acatgactcc tacctggctc tcctgttccc aaaccccttc tacccagagc cttgggctgt gccaagatcc
tggacagtac ctgtgggtac agaggactgt gacaacaccc aggagatatg caatgggcat ctcaagccag gcttccagta
taggttcagc attgcagcct ttagtaggct cagctctcca gagaccatcc tggccttctc cgccttctca gagcctcagg
ctagcatctc tctggtggcc atgcccctga cagttatgat ggggactgtg gtgggctgca tcatcattgt gtgtgcagtg
ctatgcttgt tgtgccggcg gcgcctgaag ggaccaaggt cagagaagaa tggcttttcc caggagttga tgccttacaa
cctgtggcgg acccatcggc ccatccccag ccatagcttc cggcagagct atgaggccaa gagtgcacgt gcacaccagg
ccttcttcca ggaatttgag gagctgaagg aggtgggcaa ggaccagccc agactagagg ctgagcatcc tgccaacatc
accaagaacc ggtacccaca cgtgctacct tatgaccact ccagggtcag gctgacccag ctatcaggag agcctcattc
tgactacatc aatgccaact tcatcccagg ctatagccac ccacaggaga tcattgccac ccaggggcct ctcaaaaaga
cggtcgagga cttctggcgg ttggtgtggg agcagcaagt ccacgtgatc atcatgctaa ctgtgggcat ggagaatggg
cgggtactgt gtgagcacta ctggccagtc aactccacgc ctgtcaccca cggtcacatc accacccacc tcctggcaga
ggaatctgag gacgagtgga ccaggaggga attccagctg cagcacggtg cagagcaaaa acagaggcgc gtgaagcagc
tgcagttcac gacctggcca gaccacagtg tccccgaggc tcccagctct ctgctcgctt ttgtggaact ggtgcaggag
gaggtgaagg caactcaggg caaggggccc atcctggtgc attgcagtgc gggtgtgggc aggacaggca cctttgtggc
tctcttaccg gctgttcgac aactagagga agaacaggtg gtcgatgtgt tcaacactgt gtacatactc cggctgcacc
ggcccctcat gatccagacc ttgagtcaat acatcttcct gcacagctgc ctgctgaaca agattctgga agggccctct
gacgcctcag actccggccc catccctgtg atgaattttg cacaagcttg tgccaagagg gcagccaatg ccaatgccgg
tttcttgaag gagtacaggc tcctgaagca ggccatcaag gatgagactg gctctctgct gccctctcct gactataatc
agaacagcat cgcctcctgt catcattctc aggagcagtt ggccctggtg gaggagagcc ctgctgataa catgctggca
gcctcgctct tccctggtgg gccgtctggt cgcgaccatg tggtgctgac tggctcggcc ggaccaaagg aactctggga
aatggtgtgg gaacatggcg cctatgtgct tgtctccctg ggtctgcctg ataccaagga gaagccacaa gacatctggc
caatggagat gcagcctatt gtcacagaca tggtgacagt gcacagagtg gctgagagca acacagctgg ctggcccagt
accctcatca gagttataca tggggacagt gggacggaaa ggcaggttca atgcctgcag tttccacact gcgagactgg
gagtgagctc ccagctaaca ccctactgac cttccttgat gctgtgggcc agtgctgctc ccggggcaat agcaagaagc
cagggaccct gctcagtcac tccagcaagg tcacaaacca gctgagcacc ttcttggcta tggaacagct gctacagcaa
gcagggaccg agcgcacagt ggatgtcttc agtgtggccc tgaagcagac acaggcctgt ggccttaaga ccccaacgct
ggagcagtat atctacctct acaactgtct gaacagcgca ttgaggaaca ggctgccccg agctaggaag tgaccttgcc
ctgctaggca tcacgttcca gcaatccacc caggcctggc ttccccagga gaacagatct attcggcctc acgctgtcaa
agggcagagt ctgggaataa agggtaaatc tcgag
SEQ ID NO.19
小鼠Esp(OST-PTP，Ptprv)蛋白质氨基酸序列
MRPLILLAAL LWLQDSLAQE DVCSSLDGSP DROGGGPPLS VNVSSRGKPT
SLFLSWVAAE PGGFDYALCL RAMNLSGFPE GOOLOAHTNE SSFEFHGLVP
GSRYOLELTV LRPCWQNVTI TLTARTAPTV VRGLOLHSTG SPASLEASWS
DASGDQDSYQ LLLYHPESHT LACNVSVSPD TLSYNFGDLL PGSOYVLEVI
TWAGSLHAKT SILOWTEPVP PDHLTLRALG TSSLOAFWNS SEGATWFHLI
LTDLLEGTNL TKVVRQGIST HTFLRLSPGT PYOLKICAAA GPHQIWGPNA
TEWTYPSYPS DLVLTPLWNE LWASWKAGOG ARDGYVLKLS GPVENTTTLG
PEECNAVFPG PLPPGHYTLG LRVLAGPYDA WVEGSIWLAE SAARPMEVPG
ARLWLEGLEA TKOPGRRALL YSVDAPGLLG NISVSSGATH VTFCGLVPGA
HYRVDIASSM GDITQSLTGY TSPLPPOSLE IISRNSPSDL TIGWAPAPGO
MEGYKVTWHQ DGSQRSPGDL VDLGPDISSL TLKSLVPGSC YTVSAWAWSG
NLSSDSOKIH SCTRPAPPTN LSLGFAHOPA TLRASWCHPP GGRDAFOLRL
YRLRPLTLES EKILSOEAQN FSWAOLPAGY EFOVOLSTLW GSEESGSANT
TGWTPPSAPT LVNVTSEAPT QLHVSWVHAA GDRSSYOVTL YOESTRTATS
IVGPKADSTS FWGLTPGTKY KVEAISWAGP LYTAAANVSA WTYPLTPNEL
LASMOAGSAV VNLAWPSGPL GOGTCHAQLS DAGHLSWEOP LSLGODLLML
RNLIPGHTVS LSVKCRAGPL QASTHPLVLS VEPGPVEDVF COPEATYLSL
NWTMPTGDVA VCLVEVEQLV PGGSAHFVFO VNTSEDALLL PNLTPTTSYR
LSLTVLGGNR QWSRAVTLVC TTSAEVWHPP ELAEAPOVEL GTGMGVTVTR
GMFGKDDGQI QWYGIIATIN MTLAOPSQEA INHTWYDHYY RGHDSYLALL
FPNPFYPEPW AVPRSWTVPV GTEDCDNTOE ICNGHLKPGF OYRFSIAAFS
RLSSPETILA FSAFSEPOAS ISLVAMPLTV MMGTVVGCII IVCAVLCLLC
RRRLKGPRSE KNGFSOELMP YNLWRTHRPI PSHSFROSYE AKSARAHOAF
FQEFEELKEV GKDOPRLEAE HPANITKNRY PHVLPYDHSR VRLTOLSGEP
HSDYINANFI PGYSHPOEII ATQGPLKKTV EDFWRLVWEQ QVHVIIMLTV
GMENGRVLCE HYWPVNSTPV THGHITTHLL AEESEDEWTR REFOLOHGAE
QKQRRVKQLQ FTTWPDHSVP EAPSSLLAFV ELVOEEVKAT OGKGPILVHC
SAGVGRTGTF VALLPAVRQL EEEOVVDVFN TVYILRLHRP LMIQTLSOYI
FLHSCLLNKI LEGPSDASDS GPIPVMNFAO ACAKRAANAN AGFLKEYRLL
KQAIKDETGS LLPSPDYNQN SIASCHHSOE QLALVEESPA DNMLAASLFP
GGPSGRDHVV LTGSAGPKEL WEMVWEHGAY VLVSLGLPDT KEKPODIWPM
EMQPIVTDMV TVHRVAESNT AGWPSTLIRV IHGDSGTERO VOCLOFPHCE
TGSELPANTL LTFLDAVGQC CSRGNSKKPG TLLSHSSKVT NOLSTFLAME
QLLQOAGTER TVDVFSVALK OTQACGLKTP TLEOYIYLYN CLNSALRNRL PRARK
SEQ ID NO.20
大肠杆菌β-半乳糖苷酶cDNA
accatgatta cggattcact ggccgtcgtt ttacaacgtc gtgactggga aaaccctggc gttacccaac ttaatcgcct
tgcagcacat ccccctttcg ccagctggcg taatagcgaa gaggcccgca ccgatcgccc ttcccaacag ttgcgcagcc
tgaatggcga atggcgcttt gcctggtttc cggcaccaga agcggtgccg gaaagctggc tggagtgcga tcttcctgag
gccgatactg tcgtcgtccc ctcaaactgg cagatgcacg gttacgatgc gcccatctac accaacgtaa cctatcccat
tacggtcaat ccgccgtttg ttcccacgga gaatccgacg ggttgttact cgctcacatt taatgttgat gaaagctggc
tacaggaagg ccagacgcga attatttttg atggcgttaa ctcggcgttt catctgtggt gcaacgggcg ctgggtcggt
tacggccagg acagtcgttt gccgtctgaa tttgacctga gcgcattttt acgcgccgga gaaaaccgcc tcgcggtgat
ggtgctgcgt tggagtgacg gcagttatct ggaagatcag gatatgtggc ggatgagcgg cattttccgt gacgtctcgt
tgctgcataa accgactaca caaatcagcg atttccatgt tgccactcgc tttaatgatg atttcagccg cgctgtactg
gaggctgaag ttcagatgtg cggcgagttg cgtgactacc tacgggtaac agtttcttta tggcagggtg aaacgcaggt
cgccagcggc accgcgcctt tcggcggtga aattatcgat gagcgtggtg gttatgccga tcgcgtcaca ctacgtctga
acgtcgaaaa cccgaaactg tggagcgccg aaatcccgaa tctctatcgt gcggtggttg aactgcacac cgccgacggc
acgctgattg aagcagaagc ctgcgatgtc ggtttccgcg aggtgcggat tgaaaatggt ctgctgctgc tgaacggcaa
gccgttgctg attcgaggcg ttaaccgtca cgagcatcat cctctgcatg gtcaggtcat ggatgagcag acgatggtgc
aggatatcct gctgatgaag cagaacaact ttaacgccgt gcgctgttcg cattatccga accatccgct gtggtacacg
ctgtgcgacc gctacggcct gtatgtggtg gatgaagcca atattgaaac ccacggcatg gtgccaatga atcgtctgac
cgatgatccg cgctggctac cggcgatgag cgaacgcgta acgcgaatgg tgcagcgcga tcgtaatcac ccgagtgtga
tcatctggtc gctggggaat gaatcaggcc acggcgctaa tcacgacgcg ctgtatcgct ggatcaaatc tgtcgatcct
tcccgcccgg tgcagtatga aggcggcgga gccgacacca cggccaccga tattatttgc ccgatgtacg cgcgcgtgga
tgaagaccag cccttcccgg ctgtgccgaa atggtccatc aaaaaatggc tttcgctacc tggagagacg cgcccgctga
tcctttgcga atacgcccac gcgatgggta acagtcttgg cggtttcgct aaatactggc aggcgtttcg tcagtatccc
cgtttacagg gcggcttcgt ctgggactgg gtggatcagt cgctgattaa atatgatgaa aacggcaacc cgtggtcggc
ttacggcggt gattttggcg atacgccgaa cgatcgccag ttctgtatga acggtctggt ctttgccgac cgcacgccgc
atccagcgct gacggaagca aaacaccagc agcagttttt ccagttccgt ttatccgggc aaaccatcga agtgaccagc
gaatacctgt tccgtcatag cgataacgag ctcctgcact ggatggtggc gctggatggt aagccgctgg caagcggtga
agtgcctctg gatgtcgctc cacaaggtaa acagttgatt gaactgcctg aactaccgca gccggagagc gccgggcaac
tctggctcac agtacgcgta gtgcaaccga acgcgaccgc atggtcagaa gccgggcaca tcagcgcctg gcagcagtgg
cgtctggcgg aaaacctcag tgtgacgctc cccgccgcgt cccacgccat cccgcatctg accaccagcg aaatggattt
ttgcatcgag ctgggtaata agcgttggca atttaaccgc cagtcaggct ttctttcaca gatgtggatt ggcgataaaa
aacaactgct gacgccgctg cgcgatcagt tcacccgtgc accgctggat aacgacattg gcgtaagtga agcgacccgc
attgacccta acgcctgggt cgaacgctgg aaggcggcgg gccattacca ggccgaagca gcgttgttgc agtgcacggc
agatacactt gctgatgcgg tgctgattac gaccgctcac gcgtggcagc atcaggggaa aaccttattt atcagccgga
aaacctaccg gattgatggt agtggtcaaa tggcgattac cgttgatgtt gaagtggcga gcgatacacc gcatccggcg
cggattggcc tgaactgcca gctggcgcag gtagcagagc gggtaaactg gctcggatta gggccgcaag aaaactatcc
cgaccgcctt actgccgcct gttttgaccg ctgggatctg ccattgtcag acatgtatac cccgtacgtc ttcccgagcg
aaaacggtct gcgctgcggg acgcgcgaat tgaattatgg cccacaccag tggcgcggcg acttccagtt caacatcagc
cgctacagtc aacagcaact gatggaaacc agccatcgcc atctgctgca cgcggaagaa ggcacatggc tgaatatcga
cggtttccat atggggattg gtggcgacga ctcctggagc ccgtcagtat cggcggaatt ccagctgagc gccggtcgct
accattacca gttggtctgg tgtcaaaaat aataataa
SEQ ID NO.21
大肠杆菌β-半乳糖苷酶蛋白质氨基酸序列
TMITDSLAVV LQRRDWENPG VTQLNRLAAH PPFASWRNSE EARTDRPSQQ
LRSLNGEWRF AWFPAPEAVP ESWLECDLPE ADTVVVPSNW QMHGYDAPIY
TNVTYPITVN PPFVPTENPT GCYSLTFNVD ESWLQEGQTR IIFDGVNSAF
HLWCNGRWVG YGQDSRLPSE FDLSAFLRAG ENRLAVMVLR WSDGSYLEDQ
DMWRMSGIFR DVSLLHKPTT QISDFHVATR FNDDFSRAVL EAEVQMCGEL
RDYLRVTVSL WQGETQVASG TAPFGGEIID ERGGYADRVT LRLNVENPKL
WSAEIPNLYR AVVELHTADG TLIEAEACDV GFREVRIENG LLLLNGKPLL
IRGVNRHEHH PLHGQVMDEQ TMVQDILLMK QNNFNAVRCS HYPNHPLWYT
LCDRYGLYVV DEANIETHGM VPMNRLTDDP RWLPAMSERV TRMVQRDRNH
PSVIIWSLGN ESGHGANHDA LYRWIKSVDP SRPVQYEGGG ADTTATDIIC
PMYARVDEDQ PFPAVPKWSI KKWLSLPGET RPLILCEYAH AMGNSLGGFA
KYWQAFRQYP RLQGGFVWDW VDQSLIKYDE NGNPWSAYGG DFGDTPNDRQ
FCMNGLVFAD RTPHPALTEA KHQQQFFQFR LSGQTIEVTS EYLFRHSDNE
LLHWMVALDG KPLASGEVPL DVAPQGKQLI ELPELPQPES AGQLWLTVRV
VQPNATAWSE AGHISAWQQW RLAENLSVTL PAASHAIPHL TTSEMDFCIE
LGNKRWQFNR QSGFLSQMWI GDKKQLLTPL RDQFTRAPLD NDIGVSEATR
IDPNAWVERW KAAGHYQAEA ALLQCTADTL ADAVLITTAH AWQHQGKTLF
ISRKTYRIDG SGQMAITVDV EVASDTPHPA RIGLNCQLAQ VAERVNWLGL
GPQENYPDRL TAACFDRWDL PLSDMYTPYV FPSENGLRCG TRELNYGPHQ
WRGDFQFNIS RYSQQQLMET SHRHLLHAEE GTWLNIDGFH MGIGGDDSWS
PSVSAEFQLS AGRYHYQLVW CQK
SEQ ID NO.22
成熟人骨钙蛋白氨基酸序列
YLYQWLGAPV PYPDPLEPRR EVCELNPDCD ELADHIGFQE AYRRFYGPV
SEQ ID NO.23
人骨钙蛋白变体氨基酸序列
YLYQWLGAPV PYPDPLX1PRR X2VCX3LNPDCD ELADHIGFQE AYRRFYGPV
序列表
<110>The Trustees of Columbia University In The City of New York
Karsenty，Gerard
Ducy，Patricia
<120>羧化不足的骨钙蛋白提高β-细胞增殖、胰岛素分泌、胰岛素敏感性、葡萄糖耐量并减少脂肪量
<130>13533/50576-1
<140>未转让
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<170>PatentIn version 3.3
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<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(19)..(318)
<400>1
cgcagccacc gagacacc atg aga gcc ctc aca ctc ctc gcc cta ttg gcc51
Met Arg Ala Leu Thr Leu Leu Ala Leu Leu Ala
1 5 10
ctg gcc gca ctt tgc atc gct ggc cag gca ggt gcg aag ccc agc ggt99
Leu Ala Ala Leu Cys Ile Ala Gly Gln Ala Gly Ala Lys Pro Ser Gly
15 20 25
gca gag tcc agc aaa ggt gca gcc ttt gtg tcc aag cag gag ggc agc147
Ala Glu Ser Ser Lys Gly Ala Ala Phe Val Ser Lys Gln Glu Gly Ser
30 35 40
gag gta gtg aag aga ccc agg cgc tac ctg tat caa tgg ctg gga gcc195
Glu Val Val Lys Arg Pro Arg Arg Tyr Leu Tyr Gln Trp Leu Gly Ala
45 50 55
cca gtc ccc tac ccg gat ccc ctg gag ccc agg agg gag gtg tgt gag243
Pro Val Pro Tyr Pro Asp Pro Leu Glu Pro Arg Arg Glu Val Cys Glu
60 65 70 75
ctc aat ccg gac tgt gac gag ttg gct gac cac atc ggc ttt cag gag291
Leu Asn Pro Asp Cys Asp Glu Leu Ala Asp His Ile Gly Phe Gln Glu
80 85 90
gcc tat cgg cgc ttc tac ggc ccg gtc tagggtgtcg ctctgctggc 338
Ala Tyr Arg Arg Phe Tyr Gly Pro Val
95 100
ctggccggca accccagttc tgctcctctc caggcaccct tctttcctct tccccttgcc 398
cttgccctga cctcccagcc ctatggatgt ggggtcccca tcatcccagc tgctcccaaa 458
taaactccag aagaggaatc tgaaaaaaaa aaaaaaaaaa498
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<212>PRT
<213>人
<400>2
Met Arg Ala Leu Thr Leu Leu Ala Leu Leu Ala Leu Ala Ala Leu Cys
1 5 10 15
Ile Ala Gly Gln Ala Gly Ala Lys Pro Ser Gly Ala Glu Ser Ser Lys
20 25 30
Gly Ala Ala Phe Val Ser Lys Gln Glu Gly Ser Glu Val Val Lys Arg
35 40 45
Pro Arg Arg Tyr Leu Tyr Gln Trp Leu Gly Ala Pro Val Pro Tyr Pro
50 55 60
Asp Pro Leu Glu Pro Arg Arg Glu Val Cys Glu Leu Asn Pro Asp Cys
65 70 75 80
Asp Glu Leu Ala Asp His Ile Gly Phe Gln Glu Ala Tyr Arg Arg Phe
85 90 95
Tyr Gly Pro Val
100
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<212>DNA
<213>小鼠
<400>3
agaacagaca agtcccacac agcagcttgg cccagaccta gcagacacca tgaggaccat60
ctttctgctc actctgctga ccctggctgc gctctgtctc tctgacctca cagatgccaa120
gcccagcggc cctgagtctg acaaagcctt catgtccaag caggagggca ataaggtagt180
gaacagactc cggcgctacc ttggagcctc agtccccagc ccagatcccc tggagcccac240
ccgggagcag tgtgagctta accctgcttg tgacgagcta tcagaccagt atggcttgaa300
gaccgcctac aaacgcatct atggtatcac tatttaggac ctgtgctgcc ctaaagccaa360
actctggcag ctcggctttg gctgctctcc gggacttgat cctccctgtc ctctctctct420
gccctgcaag tatggatgtc acagcagctc caaaataaag ttcagatgag gaagtgcaaa480
aaaaaaaaaa aaaa 494
<210>4
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<212>DNA
<213>小鼠
<220>
<221>CDS
<222>(49)..(333)
<400>4
gaacagacaa gtcccacaca gcagcttggt gcacacctag cagacacc atg agg acc57
Met Arg Thr
1
ctc tct ctg ctc act ctg ctg gcc ctg gct gcg ctc tgt ctc tct gac105
Leu Ser Leu Leu Thr Leu Leu Ala Leu Ala Ala Leu Cys Leu Ser Asp
5 10 15
ctc aca gat ccc aag ccc agc ggc cct gag tct gac aaa gcc ttc atg153
Leu Thr Asp Pro Lys Pro Ser Gly Pro Glu Ser Asp Lys Ala Phe Met
20 25 30 35
tcc aag cag gag ggc aat aag gta gtg aac aga ctc cgg cgc tac ctt201
Ser Lys Gln Glu Gly Asn Lys Val Val Asn Arg Leu Arg Arg Tyr Leu
40 45 50
gga gcc tca gtc ccc agc cca gat ccc ctg gag ccc acc cgg gag cag249
Gly Ala Ser Val Pro Ser Pro Asp Pro Leu Glu Pro Thr Arg Glu Gln
55 60 65
tgt gag ctt aac cct gct tgt gac gag cta tca gac cag tat ggc ttg297
Cys Glu Leu Asn Pro Ala Cys Asp Glu Leu Ser Asp Gln Tyr Gly Leu
70 75 80
aag acc gcc tac aaa cgc atc tac ggt atc act atttaggacctgt 343
Lys Thr Ala Tyr Lys Arg Ile Tyr Gly Ile Thr Ile
85 90 95
gctgccctaa agccaaactctggcagctcg gctttggctg ctctccggga cttgatcctc 403
cctgtcctctctctctgccc tgcaagtatg gatgtcacag cagctccaaa ataaagttca 463
gatgagg470
<210>5
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<212>PRT
<213>小鼠
<400>5
Met Arg Thr Leu Ser Leu Leu Thr Leu Leu Ala Leu Ala Ala Leu Cys
1 5 10 15
Leu Ser Asp Leu Thr Asp Pro Lys Pro Ser Gly Pro Glu Ser Asp Lys
20 25 30
Ala Phe Met Ser Lys Gln Glu Gly Asn Lys Val Val Asn Arg Leu Arg
35 40 45
Arg Tyr Leu Gly Ala Ser Val Pro Ser Pro Asp Pro Leu Glu Pro Thr
50 55 60
Arg Glu Gln Cys Glu Leu Asn Pro Ala Cys Asp Glu Leu Ser Asp Gln
65 70 75 80
Tyr Gly Leu Lys Thr Ala Tyr Lys Arg Ile Tyr Gly Ile Thr Ile
85 90 95
<210>6
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<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(85)..(816)
<400>6
aggctgttga ggctgggcca tctcctcctc acttccattc tgactgcagt ctgtggttct60
gattccatac cagaggggct cagg atg ctg ttg ctg gga gct gtt cta ctg 111
Met Leu Leu Leu Gly Ala Val Leu Leu
1 5
cta tta gct ctg ccc ggt cat gac cag gaa acc acg act caa ggg ccc 159
Leu Leu Ala Leu Pro Gly His Asp Gln Glu Thr Thr Thr Gln Gly Pro
10 15 20 25
gga gtc ctg ctt ccc ctg ccc aag ggg gcc tgc aca ggt tgg atg gcg 207
Gly Val Leu Leu Pro Leu Pro Lys Gly Ala Cys Thr Gly Trp Met Ala
30 35 40
ggc atc cca ggg cat ccg ggc cat aat ggg gcc cca ggc cgt gat ggc 255
Gly Ile Pro Gly His Pro Gly His Asn Gly Ala Pro Gly Arg Asp Gly
45 50 55
aga gat ggc acc cct ggt gag aag ggt gag aaa gga gat cca ggt ctt 303
Arg Asp Gly Thr Pro Gly Glu Lys Gly Glu Lys Gly Asp Pro Gly Leu
60 65 70
att ggt cct aag gga gac atc ggt gaa acc gga gta ccc ggg gct gaa351
Ile Gly Pro Lys Gly Asp Ile Gly Glu Thr Gly Val Pro Gly Ala Glu
75 80 85
ggt ccc cga ggc ttt ccg gga atc caa ggc agg aaa gga gaa cct gga399
Gly Pro Arg Gly Phe Pro Gly Ile Gln Gly Arg Lys Gly Glu Pro Gly
90 95 100 105
gaa ggt gcc tat gta tac cgc tca gca ttc agt gtg gga ttg gag act447
Glu Gly Ala Tyr Val Tyr Arg Ser Ala Phe Ser Val Gly Leu Glu Thr
110 115 120
tac gtt act atc ccc aac atg ccc att cgc ttt acc aag atc ttc tac495
Tyr Val Thr Ile Pro Asn Met Pro Ile Arg Phe Thr Lys Ile Phe Tyr
125 130 135
aat cag caa aac cac tat gat ggc tcc act ggt aaa ttc cac tgc aac543
Asn Gln Gln Asn His Tyr Asp Gly Ser Thr Gly Lys Phe His Cys Asn
140 145 150
att cct ggg ctg tac tac ttt gcc tac cac atc aca gtc tat atg aag591
Ile Pro Gly Leu Tyr Tyr Phe Ala Tyr His Ile Thr Val Tyr Met Lys
155 160 165
gat gtg aag gtc agc ctc ttc aag aag gac aag gct atg ctc ttc acc639
Asp Val Lys Val Ser Leu Phe Lys Lys Asp Lys Ala Met Leu Phe Thr
170 175 180 185
tat gat cag tac cag gaa aat aat gtg gac cag gcc tcc ggc tct gtg687
Tyr Asp Gln Tyr Gln Glu Asn Asn Val Asp Gln Ala Ser Gly Ser Val
190 195 200
ctc ctg cat ctg gag gtg ggc gac caa gtc tgg ctc cag gtg tat ggg735
Leu Leu His Leu Glu Val Gly Asp Gln Val Trp Leu Gln Val Tyr Gly
205 210 215
gaa gga gag cgt aat gga ctc tat gct gat aat gac aat gac tcc acc783
Glu Gly Glu Arg Asn Gly Leu Tyr Ala Asp Asn Asp Asn Asp Ser Thr
220 225 230
ttc aca ggc ttt ctt ctc tac cat gac acc aac tgatcaccac taactcagag 836
Phe Thr Gly Phe Leu Leu Tyr His Asp Thr Asn
235 240
cctcctccag gccaaacagc cccaaagtca attaaaggct ttcagtacgg ttaggaagtt896
gattattatt tagttggagg cctttagata ttattcattc atttactcat tcatttattc956
attcattcat caagtaactt taaaaaaatc atatgctatg ttcccagtcc tggggagctt1016
cacaaacatg accagataac tgactagaaa gaagtagttg acagtgctat tttgtgccca1076
ctgtctctcc tgatgctcat atcaatccta taaggcacag ggaacaagca ttctcctgtt1136
tttacagatt gtatcctgag gctgagagag ttaagtgaat gtctaaggtc acacagtatt1196
aagtgacagt gctagaaatc aaacccagag ctgtggactt tgttcactag actgtgccct1256
tttatagaggtacatgttct ctttggagtg ttggtaggtg tctgtttccc acctcacctg1316
agagccattg aatttgcctt cctcatgaat taaaacctcc cccaagcaga gcttcctcag1376
agaaagtggt tctatgatga agtcctgtct tggaaggact actactcaat ggcccctgca1436
ctactctact tcctcttacc tatgtccctt ctcatgcctt tccctccaac ggggaaagcc1496
aactccatct ctaagtgctg aactcatccc tgttcctcaa ggccacctgg ccaggagctt1556
ctctgatgtg atatccactt tttttttttt tgagatggag tctcactctg tcacccaggc1616
tggagtacag tgacacgacc tcggctcact gcagcctcct tctcctgggt ccaagcaatt1676
attgtgcctc agcctcccga gtagctgaga cttcaggtgc attccaccac acatggctaa1736
tttttgtatt tttagtagaa atggggtttc gtcatgttgg ccaggctggt ctcgaactcc1796
tggcctaggt gatccacccg cctcgacctc ccaaagtgct gggattacag gcatgagcca1856
ccatgcccag tcgatatctc actttttatt ttgccatgga tgagagtcct gggtgtgagg1916
aacacctccc accaggctag aggcaactgc ccaggaagga ctgtgcttcc gtcacctcta1976
aatcccttgc agatccttga taaatgcctc atgaagacca atctcttgaa tcccatatct2036
acccagaatt aactccattc cagtctctgc atgtaatcag ttttatccac agaaacattt2096
tcattttagg aaatccctgg ttttaagtat caatccttgt tcagctggac aatatgaatc2156
ttttccactg aagttaggga tgactgtgat tttcagaaca cgtccagaat ttttcatcaa2216
gaaggtagct tgagcctgaa atgcaaaacc catggaggaa ttctgaagcc attgtctcct2276
tgagtaccaa cagggtcagg gaagactggg cctcctgaat ttattattgt tctttaagaa2336
ttacaggttg aggtagttga tggtggtaaa cattctctca ggagacaata actccagtga2396
tgttcttcaa agattttagc aaaaacagag taaatagcat tctctatcaa tatataaatt2456
taaaaaacta tctttttgct tacagtttta aattctgaac aattctctct tatatgtgta2516
ttgctaatca ttaaggtatt attttttcca catataaagc tttgtctttt tgttgttgtt2576
gttgttttta agatggagtt tccctctgtt gccaggctag agtgcagtgg catgatctcg2636
gcttactgca acctttgcct cccaggttca agcgattctt ctgcctcagc ctcccgagta2696
gctgggacca caggtgccta ccaccatgcc aggctaattt ttgtattttt agtaaagaca2756
gggtttcacc atattggcca ggctggtctc gaactcctga ccttgtgatc tgcccgcctc2816
catttttgtt gttatttttt gagaaagata gatatgaggt ttagagaggg atgaagaggt2876
gagagtaagc cttgtgttag tcagaactct gtgttgtgaa tgtcattcac aacagaaaac2936
ccaaaatatt atgcaaacta ctgtaagcaa gaaaaataaa ggaaaaatgg aaacatttat2996
tcctttgcat aatagaaatt accagagttg ttctgtcttt agataaggtt tgaaccaaag3056
ctcaaaacaa tcaagaccct tttctgtatg tccttctgtt ctgccttccg cagtgtaggc3116
tttaccctca ggtgctacac agtatagttc tagggtttcc ctcccgatat caaaaagact3176
gtggcctgcc cagctctcgt atccccaagc cacaccatct ggctaaatgg acatcatgtt3236
ttctggtgat gcccaaagag gagagaggaa gctctctttc ccagatgccc cagcaagtgt3296
aaccttgcat ctcattgctc tggctgagtt gtgtgcctgt ttctgaccaa tcactgagtc3356
aggaggatga aatattcata ttgacttaat tgcagcttaa gttaggggta tgtagaggta3416
ttttccctaa agcaaaattg ggacactgtt atcagaaata ggagagtgga tgatagatgc3476
aaaataatac ctgtccacaa caaactctta atgctgtgtt tgagctttca tgagtttccc3536
agagagacat agctggaaaa ttcctattga ttttctctaa aatttcaaca agtagctaaa3596
gtctggctat gctcacagtc tcacatctgg ttggggtggg ctccttacag aacacgcttt3656
cacagttacc ctaaactctc tggggcaggg ttattccttt gtggaaccag aggcacagag3716
agagtcaact gaggccaaaa gaggcctgag agaaactgag gtcaagattt caggattaat3776
ggtcctgtga tgctttgaag tacaattgtg gatttgtcca attctcttta gttctgtcag3836
cttttgcttc atatatttta gcgctctatt attagatata tacatgttta gtattatgtc3896
ttattggtgc atttactctc ttatcattat gtaatgtcct tctttatctg tgataatttt3956
ctgtgttctg aagtctactt tgtctaaaaa taacatacgc actcaacttc cttttctttc4016
ttccttcctt tctttcttcc ttcctttctt tctctctctc tctctttcct tccttccttc4076
ctccttttct ttctctctct ctctctctct ctttttttga cagactctcg ttctgtggcc4136
ctggctggag ttcagtggtg tgatcttggc tcactgctac ctctaccatg agcaattctc4196
ctgcctcagc ctcccaagta gctggaacta caggctcatg ccactgcgcc cagctaattt4256
ttgtattttt cgtagagacg gggtttcacc acattcgtca ggttggtttc aaactcctga4316
ctttgtgatc cacccgcctc ggcctcccaa agtgctggga ttacaggcat gagccatcac4376
acctggtcaa ctttcttttg attagtgttt ttgtggtata tctttttcca tcatgttact4436
ttaaatatat ctatattatt gtatttaaaa tgtgtttctt acagactgca tgtagttggg4496
tataattttt atccagtcta aaaatatctg tcttttaatt ggtgtttaga caatttatat4556
ttaataaaat tgttgaattt aaaaaaaaaa aaaaaa 4592
<210>7
<211>244
<212>PRT
<213>人
<400>7
MetLeu Leu Leu Gly Ala Val Leu Leu Leu Leu Ala Leu Pro Gly His
1 5 10 15
Asp Gln Glu Thr Thr Thr Gln Gly Pro Gly Val Leu Leu Pro Leu Pro
20 25 30
Lys Gly Ala Cys Thr Gly Trp Met Ala GlyIle Pro Gly His Pro Gly
35 40 45
His Asn Gly Ala Pro Gly Arg Asp Gly Arg Asp Gly Thr Pro Gly Glu
50 55 60
Lys Gly Glu Lys Gly Asp Pro Gly Leu Ile Gly Pro Lys Gly Asp Ile
65 70 75 80
Gly Glu Thr Gly Val Pro Gly Ala Glu Gly Pro Arg Gly Phe Pro Gly
85 90 95
Ile Gln Gly Arg Lys Gly Glu Pro Gly Glu Gly Ala Tyr Val Tyr Arg
100 105 110
Ser Ala Phe Ser Val Gly Leu Glu Thr Tyr Val Thr Ile Pro Asn Met
115 120 125
Pro Ile Arg Phe Thr Lys Ile Phe Tyr Asn Gln Gln Asn His Tyr Asp
130 135 140
Gly Ser Thr Gly Lys Phe His Cys Asn Ile Pro Gly Leu Tyr Tyr Phe
145 150 155 160
Ala Tyr His Ile Thr Val Tyr Met Lys Asp Val Lys Val Ser Leu Phe
165 170 175
Lys Lys Asp Lys Ala Met Leu Phe Thr Tyr Asp Gln Tyr Gln Glu Asn
180 185 190
Asn Val Asp Gln Ala Ser Gly Ser Val Leu Leu His Leu Glu Val Gly
195 200 205
Asp Gln Val Trp Leu Gln Val Tyr Gly Glu Gly Glu Arg Asn Gly Leu
210 215 220
Tyr Ala Asp Asn Asp Asn Asp Ser Thr Phe Thr Gly Phe Leu Leu Tyr
225 230 235 240
His Asp Thr Asn
<210>8
<211>1233
<212>DNA
<213>小鼠
<220>
<221>CDS
<222>(115)..(855)
<400>8
taagctgggg tctgcctgtc cccatgagta ccagactaat gagacctggc cactttctcc 60
tcatttctgt ctgtacgatt gtcagtggat ctgacgacac caaaagggct cagg atg117
Met
1
cta ctg ttg caa gct ctc ctg ttc ctc tta atc ctg ccc agt cat gcc165
Leu Leu Leu Gln Ala Leu Leu Phe Leu Leu Ile Leu Pro Ser His Ala
5 10 15
gaa gat gac gtt act aca act gaa gag cta gct cct gct ttg gtc cct213
Glu Asp Asp Val Thr Thr Thr Glu Glu Leu Ala Pro Ala Leu Val Pro
20 25 30
cca ccc aag gga act tgt gca ggt tgg atg gca ggc atc cca gga cat261
Pro Pro Lys Gly Thr Cys Ala Gly Trp Met Ala Gly Ile Pro Gly His
35 40 45
cct ggc cac aat ggc aca cca ggc cgt gat ggc aga gat ggc act cct309
Pro Gly His Asn Gly Thr Pro Gly Arg Asp Gly Arg Asp Gly Thr Pro
50 55 60 65
gga gag aag gga gag aaa gga gat gca ggt ctt ctt ggt cct aag ggt357
Gly Glu Lys Gly Glu Lys Gly Asp Ala Gly Leu Leu Gly Pro Lys Gly
70 75 80
gag aca gga gat gtt gga atg aca gga gct gaa ggg cca cgg ggc ttc405
Glu Thr Gly Asp Val Gly Met Thr Gly Ala Glu Gly Pro Arg Gly Phe
85 90 95
ccc gga acc cct ggc agg aaa gga gag cct gga gaa gcc gct tat gtg453
Pro Gly Thr Pro Gly Arg Lys Gly Glu Pro Gly Glu Ala Ala Tyr Val
100 105 110
tat cgc tca gcg ttc agt gtg ggg ctg gag acc cgc gtc act gtt ccc501
Tyr Arg Ser Ala Phe Ser Val Gly Leu Glu Thr Arg Val Thr Val Pro
115 120 125
aat gta ccc att cgc ttt act aag atc ttc tac aac caa cag aat cat549
Asn Val Pro Ile Arg Phe Thr Lys Ile Phe Tyr Asn Gln Gln Asn His
130 135 140 145
tat gac ggc agc act ggc aag ttc tac tgc aac att ccg gga ctc tac597
Tyr Asp Gly Ser Thr Gly Lys Phe Tyr Cys Asn Ile Pro Gly Leu Tyr
150 155 160
tac ttc tct tac cac atc acg gtg tac atg aaa gat gtg aag gtg agc645
Tyr Phe Ser Tyr His Ile Thr Val Tyr Met Lys Asp Val Lys Val Ser
165 170 175
ctc ttc aag aag gac aag gcc gtt ctc ttc acc tac gac cag tat cag693
Leu Phe Lys Lys Asp Lys Ala Val Leu Phe Thr Tyr Asp Gln Tyr Gln
180 185 190
gaa aag aat gtg gac cag gcc tct ggc tct gtg ctc ctc cat ctg gag741
Glu Lys Asn Val Asp Gln Ala Ser Gly Ser Val Leu Leu His Leu Glu
195 200 205
gtg gga gac caa gtc tgg ctc cag gtg tat ggg gat ggg gac cac aat789
Val Gly Asp Gln Val Trp Leu Gln Val Tyr Gly Asp Gly Asp His Asn
210 215 220 225
gga ctc tat gca gat aac gtc aac gac tct aca ttt act ggc ttt ctt837
Gly Leu Tyr Ala Asp Asn Val Asn Asp Ser Thr Phe Thr Gly Phe Leu
230 235 240
ctc tac cat gat acc aac tgactgcaac tacccatagc ccatacacca 885
Leu Tyr His Asp Thr Asn
245
ggagaatcat ggaacagtcg acacactttc agcttagttt gagagattga ttttattgct 945
tagtttgaga gtcctgagta ttatccacac gtgtactcac ttgttcatta aacgacttta 1005
taaaaaataa tttgtgttcc tagtccagaa aaaaaggcac tccctggtct ccacgactct 1065
tacatggtag caataacaga atgaaaatca catttggtat gggggcttca caatattcgc 1125
atgactgtct ggaagtagac catgctattt ttctgctcac tgtacacaaa tattgttcac 1185
ataaacccta taatgtaaat atgaaataca gtgattactc ttctcact 1233
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<212>PRT
<213>小鼠
<400>9
Met Leu Leu Leu Gln Ala Leu Leu Phe Leu Leu Ile Leu Pro Ser His
1 5 10 15
Ala Glu Asp Asp Val Thr Thr Thr Glu Glu Leu Ala Pro Ala Leu Val
20 25 30
Pro Pro Pro Lys Gly Thr Cys Ala Gly Trp Met Ala Gly Ile Pro Gly
35 40 45
His Pro Gly His Asn Gly Thr Pro Gly Arg Asp Gly Arg Asp Gly Thr
50 55 60
Pro Gly Glu Lys Gly Glu Lys Gly Asp Ala Gly Leu Leu Gly Pro Lys
65 70 75 80
Gly Glu Thr Gly Asp Val Gly Met Thr Gly Ala Glu Gly Pro Arg Gly
85 90 95
Phe Pro Gly Thr Pro Gly Arg Lys Gly Glu Pro Gly Glu Ala Ala Tyr
100 105 110
Val Tyr Arg Ser Ala Phe Ser Val Gly Leu Glu Thr Arg Val Thr Val
115 120 125
Pro Asn Val Pro Ile Arg Phe Thr Lys Ile Phe Tyr Asn Gln Gln Asn
130 135 140
His Tyr Asp Gly Ser Thr Gly Lys Phe Tyr Cys Asn Ile Pro Gly Leu
145 150 155 160
Tyr Tyr Phe Ser Tyr His Ile Thr Val Tyr Met Lys Asp Val Lys Val
165 170 175
Ser Leu Phe Lys Lys Asp Lys Ala Val Leu Phe Thr Tyr Asp Gln Tyr
180 185 190
Gln Glu Lys Asn Val Asp Gln Ala Ser Gly Ser Val Leu Leu His Leu
195 200 205
Glu Val Gly Asp Gln Val Trp Leu Gln Val Tyr Gly Asp Gly Asp His
210 215 220
Asn Gly Leu Tyr Ala Asp Asn Val Asn Asp Ser Thr Phe Thr Gly Phe
225 230 235 240
Leu Leu Tyr His Asp Thr Asn
245
<210>10
<211>3236
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(29)..(2302)
<400>10
gtgacccacc tgcctcctcc gcagagca atg gcg gtg tct gcc ggg tcc gcg52
Met Ala Val Ser Ala Gly Ser Ala
1 5
cgg acc tcg ccc agc tca gat aaa gta cag aaa gac aag gct gaa ctg 100
Arg Thr Ser Pro Ser Ser Asp Lys Val Gln Lys Asp Lys Ala Glu Leu
10 15 20
atc tca ggg ccc agg cag gac agc cga ata ggg aaa ctc ttg ggt ttt148
Ile Ser Gly Pro Arg Gln Asp Ser Arg Ile Gly Lys Leu Leu Gly Phe
25 30 35 40
gag tgg aca gat ttg tcc agt tgg cgg agg ctg gtg acc ctg ctg aat196
Glu Trp Thr Asp Leu Ser Ser Trp Arg Arg Leu Val Thr Leu Leu Asn
45 50 55
cga cca acg gac cct gca agc tta gct gtc ttt cgt ttt ctt ttt ggg244
Arg Pro Thr Asp Pro Ala Ser Leu Ala Val Phe Arg Phe Leu Phe Gly
60 65 70
ttc ttg atg gtg cta gac att ccc cag gag cgg ggg ctc agc tct ctg292
Phe Leu Met Val Leu Asp Ile Pro Gln Glu Arg Gly Leu Ser Ser Leu
75 80 85
gac cgg aaa tac ctt gat ggg ctg gat gtg tgc cgc ttc ccc ttg ctg340
Asp Arg Lys Tyr Leu Asp Gly Leu Asp Val Cys Arg Phe Pro Leu Leu
90 95 100
gat gcc cta cgc cca ctg cca ctt gac tgg atg tat ctt gtc tac acc388
Asp Ala Leu Arg Pro Leu Pro Leu Asp Trp Met Tyr Leu Val Tyr Thr
105 110 115 120
atc atg ttt ctg ggg gca ctg ggc atg atg ctg ggc ctg tgc tac cgg436
Ile Met Phe Leu Gly Ala Leu Gly Met Met Leu Gly Leu Cys Tyr Arg
125 130 135
ata agc tgt gtg tta ttc ctg ctg cca tac tgg tat gtg ttt ctc ctg484
Ile Ser Cys Val Leu Phe Leu Leu Pro Tyr Trp Tyr Val Phe Leu Leu
140 145 150
gac aag aca tca tgg aac aac cac tcc tat ctg tat ggg ttg ttg gcc532
Asp Lys Thr Ser Trp Asn Asn His Ser Tyr Leu Tyr Gly Leu Leu Ala
155 160 165
ttt cag cta aca ttc atg gat gca aac cac tac tgg tct gtg gac ggt580
Phe Gln Leu Thr Phe Met Asp Ala Asn His Tyr Trp Ser Val Asp Gly
170 175 180
ctg ctg aat gcc cat agg agg aat gcc cac gtg ccc ctt tgg aac tat628
Leu Leu Asn Ala His Arg Arg Asn Ala His Val Pro Leu Trp Asn Tyr
185 190 195 200
gca gtg ctc cgt ggc cag atc ttc att gtg tac ttc att gcg ggt gtg676
Ala Val Leu Arg Gly Gln Ile Phe Ile Val Tyr Phe Ile Ala Gly Val
205 210 215
aaa aag ctg gat gca gac tgg gtt gaa ggc tat tcc atg gaa tat ttg724
Lys Lys Leu Asp Ala Asp Trp Val Glu Gly Tyr Ser Met Glu Tyr Leu
220 225 230
tcc cgg cac tgg ctc ttc agt ccc ttc aaa ctg ctg ttg tct gag gag772
Ser Arg His Trp Leu Phe Ser Pro Phe Lys Leu Leu Leu Ser Glu Glu
235 240 245
ctg act agc ctg ctg gtc gtg cac tgg ggt ggg ctg ctg ctt gac ctc820
Leu Thr Ser Leu Leu Val Val His Trp Gly Gly Leu Leu Leu Asp Leu
250 255 260
tca gct ggt ttc ctg ctc ttt ttt gat gtc tca aga tcc att ggc ctg868
Ser Ala Gly Phe Leu Leu Phe Phe Asp Val Ser Arg Ser Ile Gly Leu
265 270 275 280
ttc ttt gtg tcc tac ttc cac tgc atg aat tcc cag ctt ttc agc att916
Phe Phe Val Ser Tyr Phe His Cys Met Asn Ser Gln Leu Phe Ser Ile
285 290 295
ggt atg ttc tcc tac gtc atg ctg gcc agc agc cct ctc ttc tgc tcc964
Gly Met Phe Ser Tyr Val Met Leu Ala Ser Ser Pro Leu Phe Cys Ser
300 305 310
cct gag tgg cct cgg aag ctg gtg tcc tac tgc ccc cga agg ttg caa1012
Pro Glu Trp Pro Arg Lys Leu Val Ser Tyr Cys Pro Arg Arg Leu Gln
315 320 325
caa ctg ttg ccc ctc aag gca gcc cct cag ccc agt gtt tcc tgt gtg1060
Gln Leu Leu Pro Leu Lys Ala Ala Pro Gln Pro Ser Val Ser Cys Val
330 335 340
tat aag agg agc cgg ggc aaa agt ggc cag aag cca ggg ctg cgc cat1108
Tyr Lys Arg Ser Arg Gly Lys Ser Gly Gln Lys Pro Gly Leu Arg His
345 350 355 360
cag ctg gga gct gcc ttc acc ctg ctc tac ctc ctg gag cag cta ttc1156
Gln Leu Gly Ala Ala Phe Thr Leu Leu Tyr Leu Leu Glu Gln Leu Phe
365 370 375
ctg ccc tat tct cat ttt ctc acc cag ggc tat aac aac tgg aca aat1204
Leu Pro Tyr Ser His Phe Leu Thr Gln Gly Tyr Asn Asn Trp Thr Asn
380 385 390
ggg ctg tat ggc tat tcc tgg gac atg atg gtg cac tcc cgc tcc cac1252
Gly Leu Tyr Gly Tyr Ser Trp Asp Met Met Val His Ser Arg Ser His
395 400 405
cag cac gtg aag atc acc tac cgt gat ggc cgc act ggc gaa ctg ggc1300
Gln His Val Lys Ile Thr Tyr Arg Asp Gly Arg Thr Gly Glu Leu Gly
410 415 420
tac ctt aac cct ggg gta ttt aca cag agt cgg cga tgg aag gat cat1348
Tyr Leu Asn Pro Gly Val Phe Thr Gln Ser Arg Arg Trp Lys Asp His
425 430 435 440
gca gac atg ctg aag caa tat gcc act tgc ctg agc cgc ctg ctt ccc1396
Ala Asp Met Leu Lys Gln Tyr Ala Thr Cys Leu Ser Arg Leu Leu Pro
445 450 455
aag tat aat gtc act gag ccc cag atc tac ttt gat att tgg gtc tcc1444
Lys Tyr Asn Val Thr Glu Pro Gln Ile Tyr Phe Asp Ile Trp Val Ser
460 465 470
atc aat gac cgc ttc cag cag agg att ttt gac cct cgt gtg gac atc1492
Ile Asn Asp Arg Phe Gln Gln Arg Ile Phe Asp Pro Arg Val Asp Ile
475 480 485
gtg cag gcc gct tgg tca ccc ttt cag cgc aca tcc tgg gtg caa cca1540
Val Gln Ala Ala Trp Ser Pro Phe Gln Arg Thr Ser Trp Val Gln Pro
490 495 500
ctc ttg atg gac ctg tct ccc tgg agg gcc aag tta cag gaa atc aag1588
Leu Leu Met Asp Leu Ser Pro Trp Arg Ala Lys Leu Gln Glu Ile Lys
505 510 515 520
agc agc cta gac aac cac act gag gtg gtc ttc att gca gat ttc cct1636
Ser Ser Leu Asp Asn His Thr Glu Val Val Phe Ile Ala Asp Phe Pro
525 530 535
gga ctg cac ttg gag aat ttt gtg agt gaa gac ctg ggc aac act agc1684
Gly Leu His Leu Glu Asn Phe Val Ser Glu Asp Leu Gly Asn Thr Ser
540 545 550
atc cag ctg ctg cag ggg gaa gtg act gtg gag ctt gtg gca gaa cag1732
Ile Gln Leu Leu Gln Gly Glu Val Thr Val Glu Leu Val Ala Glu Gln
555 560 565
aag aac cag act ctt cga gag gga gaa aaa atg cag ttg cct gct ggt1780
Lys Asn Gln Thr Leu Arg Glu Gly Glu Lys Met Gln Leu Pro Ala Gly
570 575 580
gag tac cat aag gtg tat acg aca tca cct agc cct tct tgc tac atg1828
Glu Tyr His Lys Val Tyr Thr Thr Ser Pro Ser Pro Ser Cys Tyr Met
585 590 595 600
tac gtc tat gtc aac act aca gag ctt gca ctg gag caa gac ctg gca1876
Tyr Val Tyr Val Asn Thr Thr Glu Leu Ala Leu Glu Gln Asp Leu Ala
605 610 615
tat ctg caa gaa tta aag gaa aag gtg gag aat gga agt gaa aca ggg1924
Tyr Leu Gln Glu Leu Lys Glu Lys Val Glu Asn Gly Ser Glu Thr Gly
620 625 630
cct cta ccc cca gag ctg cag cct ctg ttg gaa ggg gaa gta aaa ggg1972
Pro Leu Pro Pro Glu Leu Gln Pro Leu Leu Glu Gly Glu Val Lys Gly
635 640 645
ggc cct gag cca aca cct ctg gtt cag acc ttt ctt aga cgc caa caa2020
Gly Pro Glu Pro Thr Pro Leu Val Gln Thr Phe Leu Arg Arg Gln Gln
650 655 660
agg ctc cag gag att gaa cgc cgg cga aat act cct ttc cat gag cga2068
Arg Leu Gln Glu Ile Glu Arg Arg Arg Asn Thr Pro Phe His Glu Arg
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ttc ttc cgc ttc ttg ttg cga aag ctc tat gtc ttt cgc cgc agc ttc2116
Phe Phe Arg Phe Leu Leu Arg Lys Leu Tyr Val Phe Arg Arg Ser Phe
685 690 695
ctg atg act tgt atc tca ctt cga aat ctg ata tta ggc cgt cct tcc2164
Leu Met Thr Cys Ile Ser Leu Arg Asn Leu Ile Leu Gly Arg Pro Ser
700 705 710
ctg gag cag ctg gcc cag gag gtg act tat gca aac ttg aga ccc ttt2212
Leu Glu Gln Leu Ala Gln Glu Val Thr Tyr Ala Asn Leu Arg Pro Phe
715 720 725
gag gca gtt gga gaa ctg aat ccc tca aac acg gat tct tca cat tct2260
Glu Ala Val Gly Glu Leu Asn Pro Ser Asn Thr Asp Ser Ser His Ser
730 735 740
aat cct cct gag tca aat cct gat cct gtc cac tca gag ttc2302
Asn Pro Pro Glu Ser Asn Pro Asp Pro Val His Ser Glu Phe
745 750 755
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caatggacat ttatttgaaa aaaattctca aaagtttttt tttttttttt gggggggcgg2422
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gtcctcctag gataaggttt aaagtggctt tttgggggct gggtgccgtg gctcacgcct2602
gtaatcccag cattttggga ggctgaggtg ggcagatcac ttgaggccag gagttcgaga2662
ccagcctggc caacatggca aaaccccttc tctactaaaa atacaaaaat tagccagacg2722
tggtggtggg tgcctgtaat ccaactaccc aggaggctga ggcatgagaa tcgcttgggc2782
ccaggaggtg gaggttgcag tgagccgaga tcgagccact gcactcctgg gcaacagagc2842
aagacttcgt ctcaaaataa ataaataaag tggctcttgg ggaaaagcaa tttaatgtac2902
cacgatgaat agctaactgt tcccaagtgt ttgctatgtg caacacaccg cgtgagcagt2962
gttacctgca ttattacatt aggctgagag gtaaaataat ttgcccgaag acatacagct3022
agtgacgaat ggactgatgg tttgaactta acgtctattt gacttaaggt cctgcaccct3082
gccacttgta attttcagaa tcactgataa tctgaaataa tgcagcttaa aacatgtttt3142
cttaattaaa agtataaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa3202
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<210>11
<211>758
<212>PRT
<213>人
<400>11
Met Ala Val Ser Ala Gly Ser Ala Arg Thr Ser Pro Ser Ser Asp Lys
1 5 10 15
Val Gln Lys Asp Lys Ala Glu Leu Ile Ser Gly Pro Arg Gln Asp Ser
20 25 30
Arg Ile Gly Lys Leu Leu Gly Phe Glu Trp Thr Asp Leu Ser Ser Trp
35 40 45
Arg Arg Leu Val Thr Leu Leu Asn Arg Pro Thr Asp Pro Ala Ser Leu
50 55 60
Ala Val Phe Arg Phe Leu Phe Gly Phe Leu Met Val Leu Asp Ile Pro
65 70 75 80
Gln Glu Arg Gly Leu Ser Ser Leu Asp Arg Lys Tyr Leu Asp Gly Leu
85 90 95
Asp Val Cys Arg Phe Pro Leu Leu Asp Ala Leu Arg Pro Leu Pro Leu
100 105 110
Asp Trp Met Tyr Leu Val Tyr Thr Ile Met Phe Leu Gly Ala Leu Gly
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Met Met Leu Gly Leu Cys Tyr Arg Ile Ser Cys Val Leu Phe Leu Leu
130 135 140
Pro Tyr Trp Tyr Val Phe Leu Leu Asp Lys Thr Ser Trp Asn Asn His
145 150 155 160
Ser Tyr Leu Tyr Gly Leu Leu Ala Phe Gln Leu Thr Phe Met Asp Ala
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Asn His Tyr Trp Ser Val Asp Gly Leu Leu Asn Ala His Arg Arg Asn
180 185 190
Ala His Val Pro Leu Trp Asn Tyr Ala Val Leu Arg Gly Gln Ile Phe
195 200 205
Ile Val Tyr Phe Ile Ala Gly Val Lys Lys Leu Asp Ala Asp Trp Val
210 215 220
Glu Gly Tyr Ser Met Glu Tyr Leu Ser Arg His Trp Leu Phe Ser Pro
225 230 235 240
Phe Lys Leu Leu Leu Ser Glu Glu Leu Thr Ser Leu Leu Val Val His
245 250 255
Trp Gly Gly Leu Leu Leu Asp Leu Ser Ala Gly Phe Leu Leu Phe Phe
260 265 270
Asp Val Ser Arg Ser Ile Gly Leu Phe Phe Val Ser Tyr Phe His Cys
275 280 285
Met Asn Ser Gln Leu Phe Ser Ile Gly Met Phe Ser Tyr Val Met Leu
290 295 300
Ala Ser Ser Pro Leu Phe Cys Ser Pro Glu Trp Pro Arg Lys Leu Val
305 310 315 320
Ser Tyr Cys Pro Arg Arg Leu Gln Gln Leu Leu Pro Leu Lys Ala Ala
325 330 335
Pro Gln Pro Ser Val Ser Cys Val Tyr Lys Arg Ser Arg Gly Lys Ser
340 345 350
Gly Gln Lys Pro Gly Leu Arg His Gln Leu Gly Ala Ala Phe Thr Leu
355 360 365
Leu Tyr Leu Leu Glu Gln Leu Phe Leu Pro Tyr Ser His Phe Leu Thr
370 375 380
Gln Gly Tyr Asn Asn Trp Thr Asn Gly Leu Tyr Gly Tyr Ser Trp Asp
385 390 395 400
Met Met Val His Ser Arg Ser His Gln His Val Lys Ile Thr Tyr Arg
405 410 415
Asp Gly Arg Thr Gly Glu Leu Gly Tyr Leu Asn Pro Gly Val Phe Thr
420 425 430
Gln Ser Arg Arg Trp Lys Asp His Ala Asp Met Leu Lys Gln Tyr Ala
435 440 445
Thr Cys Leu Ser Arg Leu Leu Pro Lys Tyr Asn Val Thr Glu Pro Gln
450 455 460
Ile Tyr Phe Asp Ile Trp Val Ser Ile Asn Asp Arg Phe Gln Gln Arg
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Ile Phe Asp Pro Arg Val Asp Ile Val Gln Ala Ala Trp Ser Pro Phe
485 490 495
Gln Arg Thr Ser Trp Val Gln Pro Leu Leu Met Asp Leu Ser Pro Trp
500 505 510
Arg Ala Lys Leu Gln Glu Ile Lys Ser Ser Leu Asp Asn His Thr Glu
515 520 525
Val Val Phe Ile Ala Asp Phe Pro Gly Leu His Leu Glu Asn Phe Val
530 535 540
Ser Glu Asp Leu Gly Asn Thr Ser Ile Gln Leu Leu Gln Gly Glu Val
545 550 555 560
Thr Val Glu Leu Val Ala Glu Gln Lys Asn Gln Thr Leu Arg Glu Gly
565 570 575
Glu Lys Met Gln Leu Pro Ala Gly Glu Tyr His Lys Val Tyr Thr Thr
580 585 590
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595 600 605
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Leu Leu Glu Gly Glu Val Lys Gly Gly Pro Glu Pro Thr Pro Leu Val
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Asn Leu Ile Leu Gly Arg Pro Ser Leu Glu Gln Leu Ala Gln Glu Val
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725 730 735
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<212>DNA
<213>小鼠
<220>
<221>CDS
<222>(75)..(2345)
<400>12
agacagcaag tctaagtctg gaggttccac tgggtccgac ctggctgcag agaggctcac 60
ctgtccctgc agtc atg gct gtg cac cgc ggc tcc gca ctg gtt gct ccc110
Met Ala Val His Arg Gly Ser Ala Leu Val Ala Pro
1 5 10
gcc tca gat aaa gta cag aaa aac aag tct gca cag aca tca gga ctg158
Ala Ser Asp Lys Val Gln Lys Asn Lys Ser Ala Gln Thr Ser Gly Leu
15 20 25
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Lys Gln Gly Ser Arg Met Glu Lys Ile Leu Gly Phe Glu Trp Thr Asp
30 35 40
tta tct agc tgg cag agt gtc gtg acc ctg ctt aac aaa cca acg gac254
Leu Ser Ser Trp Gln Ser Val Val Thr Leu Leu Asn Lys Pro Thr Asp
45 50 55 60
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Pro Ala Asn Leu Ala Val Phe Arg Phe Leu Phe Ala Phe Leu Met Leu
65 70 75
ctg gac att ccc cag gaa cgc ggc ctt agc tcc ctg gac cga aaa tac350
Leu Asp Ile Pro Gln Glu Arg Gly Leu Ser Ser Leu Asp Arg Lys Tyr
80 85 90
ttg gat ggg ctg gat gtg tgc cgt ttc ccc ttg ctg gat gcc ttg cgc398
Leu Asp Gly Leu Asp Val Cys Arg Phe Pro Leu Leu Asp Ala Leu Arg
95 100 105
cca ctg cca ctg gac tgg atg tat ctt gtc tac acc atc atg ttt ctg446
Pro Leu Pro Leu Asp Trp Met Tyr Leu Val Tyr Thr Ile Met Phe Leu
110 115 120
ggg gca ctg ggc atg atg ctg ggg cta tgc tac cgg cta agc tgt gtg494
Gly Ala Leu Gly Met Met Leu Gly Leu Cys Tyr Arg Leu Ser Cys Val
125 130 135 140
tta ttc ctg cta ccg tac tgg tac gtg ttt ctc ctg gac aag act tcg542
Leu Phe Leu Leu Pro Tyr Trp Tyr Val Phe Leu Leu Asp Lys Thr Ser
145 150 155
tgg aac aat cac tcc tat ctg tat ggt ttg ttg gcc ttt cag ttg aca590
Trp Asn Asn His Ser Tyr Leu Tyr Gly Leu Leu Ala Phe Gln Leu Thr
160 165 170
ttc atg gat gca aac cac tac tgg tct gtg gat ggc ttg ctg aat gcc638
Phe Met Asp Ala Asn His Tyr Trp Ser Val Asp Gly Leu Leu Asn Ala
175 180 185
cga aag aag aat gct cac gtg ccc ctt tgg aac tac aca gtt ctg cgt686
Arg Lys Lys Asn Ala His Val Pro Leu Trp Asn Tyr Thr Val Leu Arg
190 195 200
ggc cag atc ttc atc gtg tac ttc atc gcg ggt gtg aag aag ctc gat734
Gly Gln Ile Phe Ile Val Tyr Phe Ile Ala Gly Val Lys Lys Leu Asp
205 210 215 220
gct gac tgg gtt ggg ggc tac tcc atg gag cac ctg tcc cgg cac tgg782
Ala Asp Trp Val Gly Gly Tyr Ser Met Glu His Leu Ser Arg His Trp
225 230 235
ctc ttc agt ccc ttc aag ctg gtg ttg tcg gag gag ctg aca agc ctg830
Leu Phe Ser Pro Phe Lys Leu Val Leu Ser Glu Glu Leu Thr Ser Leu
240 245 250
ctg gta gta cac tgg tgt ggg ctt ctc ctt gac ctc tcg gct ggc ttc878
Leu Val Val His Trp Cys Gly Leu Leu Leu Asp Leu Ser Ala Gly Phe
255 260 265
ctg ctc ttc ttt gat gcc tcc aga ccc gtc ggc ctg ttc ttc gtg tcc926
Leu Leu Phe Phe Asp Ala Ser Arg Pro Val Gly Leu Phe Phe Val Ser
270 275 280
tac ttt cac tgc atg aac tcg cag ctc ttc agc atc ggg atg ttt ccc974
Tyr Phe His Cys Met Asn Ser Gln Leu Phe Ser Ile Gly Met Phe Pro
285 290 295 300
tat gtc atg ctg gcc agc agc cct ctc ttc tgc tca gct gaa tgg cct1022
Tyr Val Met Leu Ala Ser Ser Pro Leu Phe Cys Ser Ala Glu Trp Pro
305 310 315
cgg aag ttg gta gcc cga tgc ccg aaa agg ctg caa gag ctg ctg ccc1070
Arg Lys Leu Val Ala Arg Cys Pro Lys Arg Leu Gln Glu Leu Leu Pro
320 325 330
acc aaa gcc gct cct cgg cct agt gct tcc tgt gtg tat aag agg tcc1118
Thr Lys Ala Ala Pro Arg Pro Ser Ala Ser Cys Val Tyr Lys Arg Ser
335 340 345
cgg ggc aaa gct ggc ccg aag ccc ggg ctg cgc cac cag ctg gga gcc1166
Arg Gly Lys Ala Gly Pro Lys Pro Gly Leu Arg His Gln Leu Gly Ala
350 355 360
atc ttc acc ctg ctc tac ctc cta gag cag ctc ttc ctg ccc tat tcc1214
Ile Phe Thr Leu Leu Tyr Leu Leu Glu Gln Leu Phe Leu Pro Tyr Ser
365 370 375 380
cac ttc ctg acc cag ggt tac aat aac tgg aca aat ggg ctg tat ggc1262
His Phe Leu Thr Gln Gly Tyr Asn Asn Trp Thr Asn Gly Leu Tyr Gly
385 390 395
tat tcc tgg gac atg atg gtg cac tcc cgc tcc cac cag cac gta aag1310
Tyr Ser Trp Asp Met Met Val His Ser Arg Ser His Gln His Val Lys
400 405 410
atc acc tac cgc gac ggc ctc acg ggc gag cta ggc tac ctt aac cct1358
Ile Thr Tyr Arg Asp Gly Leu Thr Gly Glu Leu Gly Tyr Leu Asn Pro
415 420 425
ggg gta ttc aca cag agc cgg cga tgg aag gat cat gca gac atg ctg1406
Gly Val Phe Thr Gln Ser Arg Arg Trp Lys Asp His Ala Asp Met Leu
430 435 440
aag caa tat gcc act tgc ctg agc ctc ctg ctt ccc aag tac aat gtc1454
Lys Gln Tyr Ala Thr Cys Leu Ser Leu Leu Leu Pro Lys Tyr Asn Val
445 450 455 460
act gag ccc cag atc tac ttt gat att tgg gtc tcc atc aat gac cgc1502
Thr Glu Pro Gln Ile Tyr Phe Asp Ile Trp Val Ser Ile Asn Asp Arg
465 470 475
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Phe Gln Gln Arg Leu Phe Asp Pro Arg Val Asp Ile Val Gln Ala Val
480 485 490
tgg tcc ccc ttc cag cgc aca cct tgg gtg cag cca ctc ttg atg gat1598
Trp Ser Pro Phe Gln Arg Thr Pro Trp Val Gln Pro Leu Leu Met Asp
495 500 505
tta tct ccc tgg agg acc aag tta cag gat att aag agc agt ctg gac1646
Leu Ser Pro Trp Arg Thr Lys Leu Gln Asp Ile Lys Ser Ser Leu Asp
510 515 520
aac cac acc gag gtg gtc ttc att gca gat ttc cct ggg ctt cac ttg1694
Asn His Thr Glu Val Val Phe Ile Ala Asp Phe Pro Gly Leu His Leu
525 530 535 540
gag aat ttt gtg agt gaa gac ctg ggc aac act agc atc cag ctg ctg1742
Glu Asn Phe Val Ser Glu Asp Leu Gly Asn Thr Ser Ile Gln Leu Leu
545 550 555
cag gga gaa gtc acc gtg gaa ttg gtg gca gaa cag aaa aat cag act1790
Gln Gly Glu Val Thr Val Glu Leu Val Ala Glu Gln Lys Asn Gln Thr
560 565 570
ctt caa gaa gga gag aaa atg cag ttg cct gct gga gag tac cat aaa1838
Leu Gln Glu Gly Glu Lys Met Gln Leu Pro Ala Gly Glu Tyr His Lys
575 580 585
gtc tat act gta tca tct agt cct tcc tgc tac atg tac gtc tat gtc1886
Val Tyr Thr Val Ser Ser Ser Pro Ser Cys Tyr Met Tyr Val Tyr Val
590 595 600
aac act aca gag gtc gca ctg gag caa gac ctg gca tat ctg caa gaa1934
Asn Thr Thr Glu Val Ala Leu Glu Gln Asp Leu Ala Tyr Leu Gln Glu
605 610 615 620
tta aag gag aag gtg gag aac gga agt gaa aca ggg ccc ctg cct cca1982
Leu Lys Glu Lys Val Glu Asn Gly Ser Glu Thr Gly Pro Leu Pro Pro
625 630 635
gaa ctt cag cct ctt ttg gaa ggg gaa gta aaa ggg ggc cct gag cca2030
Glu Leu Gln Pro Leu Leu Glu Gly Glu Val Lys Gly Gly Pro Glu Pro
640 645 650
aca cct ctg gtc caa act ttt ctc aga cga cag agg aag ctc caa gaa2078
Thr Pro Leu Val Gln Thr Phe Leu Arg Arg Gln Arg Lys Leu Gln Glu
655 660 665
att gaa cgc agg cga aat agc cct ttc cat gag cga ttt ctc cgc ttc2126
Ile Glu Arg Arg Arg Asn Ser Pro Phe His Glu Arg Phe Leu Arg Phe
670 675 680
gtg ctg cga aag ctc tac gtc ttt cga cgc agc ttc ctg atg act cga2174
Val Leu Arg Lys Leu Tyr Val Phe Arg Arg Ser Phe Leu Met Thr Arg
685 690 695 700
att tca ctc cga aac ctg cta tta ggc cgc cct tcc cta gag caa cta2222
Ile Ser Leu Arg Asn Leu Leu Leu Gly Arg Pro Ser Leu Glu Gln Leu
705 710 715
gcc caa gag gtg aca tat gca aac ttg cga cca ttt gaa cca gtt gat2270
Ala Gln Glu Val Thr Tyr Ala Asn Leu Arg Pro Phe Glu Pro Val Asp
720 725 730
gag tca agt gct tca aac aca gat tct tca aat cac ccg tca gag cca2318
Glu Ser Ser Ala Ser Asn Thr Asp Ser Ser Asn His Pro Ser Glu Pro
735 740 745
gat tct gag cat gtt cac tct gag ttc tgagggatgt acagatgctc 2365
Asp Ser Glu His Val His Ser Glu Phe
750 755
tgtgcagatg tgggggcagc ctgttatagg cttattgtct acgcaaagaa catatttttg 2425
gagaaaaatg atatgggaca ggctttcaca gtacagccca ggctggcctc aaactcatgg 2485
ttggtccctc tgcttcagcc tgttttgtaa ttacatagta tcaccaaacc tagttgcttt 2545
tccctttaca ttttttcccc ttataagttc tttaaaatta tagcttacat tttttctttt 2605
ttcttttttt tttttttgta ttttttcttt gtcaagacag gtctctctct gtgtagcact 2665
ggctgtcctg gaactcactc tgtagtccag gctggcctcc aactcagaaa ttctcctgcc 2725
tctgcctccc aagtgctggg attaaaggtg tgtgccacca cgccccactg ggcttttagt 2785
ttttatagac aagatttctc catgtagacc agaccagctc tcctgagtgc tgaaattaaa 2845
ggcacgggac atcactacct ggctttctta ttaaacttgt tttagtggtc tcaacaaaaa 2905
<210>13
<211>757
<212>PRT
<213>小鼠
<400>13
Met Ala Val His Arg Gly Ser Ala Leu Val Ala Pro Ala Ser Asp Lys
1 5 10 15
Val Gln Lys Asn Lys Ser Ala Gln Thr Ser Gly Leu Lys Gln Gly Ser
20 25 30
Arg Met Glu Lys Ile Leu Gly Phe Glu Trp Thr Asp Leu Ser Ser Trp
35 40 45
Gln Ser Val Val Thr Leu Leu Asn Lys Pro Thr Asp Pro Ala Asn Leu
50 55 60
Ala Val Phe Arg Phe Leu Phe Ala Phe Leu Met Leu Leu Asp Ile Pro
65 70 75 80
Gln Glu Arg Gly Leu Ser Ser Leu Asp Arg Lys Tyr Leu Asp Gly Leu
85 90 95
Asp Val Cys Arg Phe Pro Leu Leu Asp Ala Leu Arg Pro Leu Pro Leu
100 105 110
Asp Trp Met Tyr Leu Val Tyr Thr Ile Met Phe Leu Gly Ala Leu Gly
115 120 125
Met Met Leu Gly Leu Cys Tyr Arg Leu Ser Cys Val Leu Phe Leu Leu
130 135 140
Pro Tyr Trp Tyr Val Phe Leu Leu Asp Lys Thr Ser Trp Asn Asn His
145 150 155 160
Ser Tyr Leu Tyr Gly Leu Leu Ala Phe Gln Leu Thr Phe Met Asp Ala
165 170 175
Asn His Tyr Trp Ser Val Asp Gly Leu Leu Asn Ala Arg Lys Lys Asn
180 185 190
Ala His Val Pro Leu Trp Asn Tyr Thr Val Leu Arg Gly Gln Ile Phe
195 200 205
Ile Val Tyr Phe Ile Ala Gly Val Lys Lys Leu Asp Ala Asp Trp Val
210 215 220
Gly Gly Tyr Ser Met Glu His Leu Ser Arg His Trp Leu Phe Ser Pro
225 230 235 240
Phe Lys Leu Val Leu Ser Glu Glu Leu Thr Ser Leu Leu Val Val His
245 250 255
Trp Cys Gly Leu Leu Leu Asp Leu Ser Ala Gly Phe Leu Leu Phe Phe
260 265 270
Asp Ala Ser Arg Pro Val Gly Leu Phe Phe Val Ser Tyr Phe His Cys
275 280 285
Met Asn Ser Gln Leu Phe Ser Ile Gly Met Phe Pro Tyr Val Met Leu
290 295 300
Ala Ser Ser Pro Leu Phe Cys Ser Ala Glu Trp Pro Arg Lys Leu Val
305 310 315 320
Ala Arg Cys Pro Lys Arg Leu Gln Glu Leu Leu Pro Thr Lys Ala Ala
325 330 335
Pro Arg Pro Ser Ala Ser Cys Val Tyr Lys Arg Ser Arg Gly Lys Ala
340 345 350
Gly Pro Lys Pro Gly Leu Arg His Gln Leu Gly Ala Ile Phe Thr Leu
355 360 365
Leu Tyr Leu Leu Glu Gln Leu Phe Leu Pro Tyr Ser His Phe Leu Thr
370 375 380
Gln Gly Tyr Asn Asn Trp Thr Asn Gly Leu Tyr Gly Tyr Ser Trp Asp
385 390 395 400
Met Met Val His Ser Arg Ser His Gln His Val Lys Ile Thr Tyr Arg
405 410 415
Asp Gly Leu Thr Gly Glu Leu Gly Tyr Leu Asn Pro Gly Val Phe Thr
420 425 430
Gln Ser Arg Arg Trp Lys Asp His Ala Asp Met Leu Lys Gln Tyr Ala
435 440 445
Thr Cys Leu Ser Leu Leu Leu Pro Lys Tyr Asn Val Thr Glu Pro Gln
450 455 460
Ile Tyr Phe Asp Ile Trp Val Ser Ile Asn Asp Arg Phe Gln Gln Arg
465 470 475 480
Leu Phe Asp Pro Arg Val Asp Ile Val Gln Ala Val Trp Ser Pro Phe
485 490 495
Gln Arg Thr Pro Trp Val Gln Pro Leu Leu Met Asp Leu Ser Pro Trp
500 505 510
Arg Thr Lys Leu Gln Asp Ile Lys Ser Ser Leu Asp Asn His Thr Glu
515 520 525
Val Val Phe Ile Ala Asp Phe Pro Gly Leu His Leu Glu Asn Phe Val
530 535 540
Ser Glu Asp Leu Gly Asn Thr Ser Ile Gln Leu Leu Gln Gly Glu Val
545 550 555 560
Thr Val Glu Leu Val Ala Glu Gln Lys Asn Gln Thr Leu Gln Glu Gly
565 570 575
Glu Lys Met Gln Leu Pro Ala Gly Glu Tyr His Lys Val Tyr Thr Val
580 585 590
Ser Ser Ser Pro Ser Cys Tyr Met Tyr Val Tyr Val Asn Thr Thr Glu
595 600 605
Val Ala Leu Glu Gln Asp Leu Ala Tyr Leu Gln Glu Leu Lys Glu Lys
610 615 620
Val Glu Asn Gly Ser Glu Thr Gly Pro Leu Pro Pro Glu Leu Gln Pro
625 630 635 640
Leu Leu Glu Gly Glu Val Lys Gly Gly Pro Glu Pro Thr Pro Leu Val
645 650 655
Gln Thr Phe Leu Arg Arg Gln Arg Lys Leu Gln Glu Ile Glu Arg Arg
660 665 670
Arg Asn Ser Pro Phe His Glu Arg Phe Leu Arg Phe Val Leu Arg Lys
675 680 685
Leu Tyr Val Phe Arg Arg Ser Phe Leu Met Thr Arg Ile Ser Leu Arg
690 695 700
Asn Leu Leu Leu Gly Arg Pro Ser Leu Glu Gln Leu Ala Gln Glu Val
705 710 715 720
Thr Tyr Ala Asn Leu Arg Pro Phe Glu Pro Val Asp Glu Ser Ser Ala
725 730 735
Ser Asn Thr Asp Ser Ser Asn His Pro Ser Glu Pro Asp Ser Glu His
740 745 750
Val His Ser Glu Phe
755
<210>14
<211>1223
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(84)..(1034)
<400>14
gggatccttg agtcctactc agccccagcg gaggtgaagg acgtccttcc ccaggagccg60
actggccaat cacaggcagg aag atg aag gtt ctg tgg gct gcg ttg ctg gtc 113
Met Lys Val Leu Trp Ala Ala Leu Leu Val
1 5 10
aca ttc ctg gca gga tgc cag gcc aag gtg gag caa gcg gtg gag aca161
Thr Phe Leu Ala Gly Cys Gln Ala Lys Val Glu Gln Ala Val Glu Thr
15 20 25
gag ccg gag ccc gag ctg cgc cag cag acc gag tgg cag agc ggc cag209
Glu Pro Glu Pro Glu Leu Arg Gln Gln Thr Glu Trp Gln Ser Gly Gln
30 35 40
cgc tgg gaa ctg gca ctg ggt cgc ttt tgg gat tac ctg cgc tgg gtg257
Arg Trp Glu Leu Ala Leu Gly Arg Phe Trp Asp Tyr Leu Arg Trp Val
45 50 55
cag aca ctg tct gag cag gtg cag gag gag ctg ctc agc tcc cag gtc305
Gln Thr Leu Ser Glu Gln Val Gln Glu Glu Leu Leu Ser Ser Gln Val
60 65 70
acc cag gaa ctg agg gcg ctg atg gac gag acc atg aag gag ttg aag353
Thr Gln Glu Leu Arg Ala Leu Met Asp Glu Thr Met Lys Glu Leu Lys
75 80 85 90
gcc tac aaa tcg gaa ctg gag gaa caa ctg acc ccg gtg gcg gag gag401
Ala Tyr Lys Ser Glu Leu Glu Glu Gln Leu Thr Pro Val Ala Glu Glu
95 100 105
acg cgg gca cgg ctg tcc aag gag ctg cag gcg gcg cag gcc cgg ctg449
Thr Arg Ala Arg Leu Ser Lys Glu Leu Gln Ala Ala Gln Ala Arg Leu
110 115 120
ggc gcg gac atg gag gac gtg tgc ggc cgc ctg gtg cag tac cgc ggc497
Gly Ala Asp Met Glu Asp Val Cys Gly Arg Leu Val Gln Tyr Arg Gly
125 130 135
gag gtg cag gcc atg ctc ggc cag agc acc gag gag ctg cgg gtg cgc545
Glu Val Gln Ala Met Leu Gly Gln Ser Thr Glu Glu Leu Arg Val Arg
140 145 150
ctc gcc tcc cac ctg cgc aag ctg cgt aag cgg ctc ctc cgc gat gcc593
Leu Ala Ser His Leu Arg Lys Leu Arg Lys Arg Leu Leu Arg Asp Ala
155 160 165 170
gat gac ctg cag aag cgc ctg gca gtg tac cag gcc ggg gcc cgc gag641
Asp Asp Leu Gln Lys Arg Leu Ala Val Tyr Gln Ala Gly Ala Arg Glu
175 180 185
ggc gcc gag cgc ggc ctc agc gcc atc cgc gag cgc ctg ggg ccc ctg689
Gly Ala Glu Arg Gly Leu Ser Ala Ile Arg Glu Arg Leu Gly Pro Leu
190 195 200
gtg gaa cag ggc cgc gtg cgg gcc gcc act gtg ggc tcc ctg gcc ggc737
Val Glu Gln Gly Arg Val Arg Ala Ala Thr Val Gly Ser Leu Ala Gly
205 210 215
cag ccg cta cag gag cgg gcc cag gcc tgg ggc gag cgg ctg cgc gcg785
Gln Pro Leu Gln Glu Arg Ala Gln Ala Trp Gly Glu Arg Leu Arg Ala
220 225 230
cgg atg gag gag atg ggc agc cgg acc cgc gac cgc ctg gac gag gtg833
Arg Met Glu Glu Met Gly Ser Arg Thr Arg Asp Arg Leu Asp Glu Val
235 240 245 250
aag gag cag gtg gcg gag gtg cgc gcc aag ctg gag gag cag gcc cag881
Lys Glu Gln Val Ala Glu Val Arg Ala Lys Leu Glu Glu Gln Ala Gln
255 260 265
cag ata cgc ctg cag gcc gag gcc ttc cag gcc cgc ctc aag agc tgg929
Gln Ile Arg Leu Gln Ala Glu Ala Phe Gln Ala Arg Leu Lys Ser Trp
270 275 280
ttc gag ccc ctg gtg gaa gac atg cag cgc cag tgg gcc ggg ctg gtg977
Phe Glu Pro Leu Val Glu Asp Met Gln Arg Gln Trp Ala Gly Leu Val
285 290 295
gag aag gtg cag gct gcc gtg ggc acc agc gcc gcc cct gtg ccc agc1025
Glu Lys Val Gln Ala Ala Val Gly Thr Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser
300 305 310
gac aat cac tgaacgccga agcctgcagc catgcgaccc cacgccaccc1074
Asp Asn His
315
cgtgcctcct gcctccgcgc agcctgcagc gggagaccct gtccccgccc cagccgtcct 1134
cctggggtgg accctagttt aataaagatt caccaagttt cacgcaaaaa aaaaaaaaaa 1194
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa1223
<210>15
<211>317
<212>PRT
<213>人
<400>15
Met Lys Val Leu Trp Ala Ala Leu Leu Val Thr Phe Leu Ala Gly Cys
1 5 10 15
Gln Ala Lys Val Glu Gln Ala Val Glu Thr Glu Pro Glu Pro Glu Leu
20 25 30
Arg Gln Gln Thr Glu Trp Gln Ser Gly Gln Arg Trp Glu Leu Ala Leu
35 40 45
Gly Arg Phe Trp Asp Tyr Leu Arg Trp Val Gln Thr Leu Ser Glu Gln
50 55 60
Val Gln Glu Glu Leu Leu Ser Ser Gln Val Thr Gln Glu Leu Arg Ala
65 70 75 80
Leu Met Asp Glu Thr Met Lys Glu Leu Lys Ala Tyr Lys Ser Glu Leu
85 90 95
Glu Glu Gln Leu Thr Pro Val Ala Glu Glu Thr Arg Ala Arg Leu Ser
100 105 110
Lys Glu Leu Gln Ala Ala Gln Ala Arg Leu Gly Ala Asp Met Glu Asp
115 120 125
Val Cys Gly Arg Leu Val Gln Tyr Arg Gly Glu Val Gln Ala Met Leu
130 135 140
Gly Gln Ser Thr Glu Glu Leu Arg Val Arg Leu Ala Ser His Leu Arg
145 150 155 160
Lys Leu Arg Lys Arg Leu Leu Arg Asp Ala Asp Asp Leu Gln Lys Arg
165 170 175
Leu Ala Val Tyr Gln Ala Gly Ala Arg Glu Gly Ala Glu Arg Gly Leu
180 185 190
Ser Ala Ile Arg Glu Arg Leu Gly Pro Leu Val Glu Gln Gly Arg Val
195 200 205
Arg Ala Ala Thr Val Gly Ser Leu Ala Gly Gln Pro Leu Gln Glu Arg
210 215 220
Ala Gln Ala Trp Gly Glu Arg Leu Arg Ala Arg Met Glu Glu Met Gly
225 230 235 240
Ser Arg Thr Arg Asp Arg Leu Asp Glu Val Lys Glu Gln Val Ala Glu
245 250 255
Val Arg Ala Lys Leu Glu Glu Gln Ala Gln Gln Ile Arg Leu Gln Ala
260 265 270
Glu Ala Phe Gln Ala Arg Leu Lys Ser Trp Phe Glu Pro Leu Val Glu
275 280 285
Asp Met Gln Arg Gln Trp Ala Gly Leu Val Glu Lys Val Gln Ala Ala
290 295 300
Val Gly Thr Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser Asp Asn His
305 310 315
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<212>DNA
<213>小鼠
<220>
<221>CDS
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<400>16
ggacttgttt cggaaggagc tgactggcca atcacaattg cgaag atg aag gct ctg 57
Met Lys Ala Leu
1
tgg gcc gtg ctg ttg gtc aca ttg ctg aca gga tgc cta gcc gag gga105
Trp Ala Val Leu Leu Val Thr Leu Leu Thr Gly Cys Leu Ala Glu Gly
5 10 15 20
gag ccg gag gtg aca gat cag ctc gag tgg caa agc aac caa ccc tgg153
Glu Pro Glu Val Thr Asp Gln Leu Glu Trp Gln Ser Asn Gln Pro Trp
25 30 35
gag cag gcc ctg aac cgc ttc tgg gat tac ctg cgc tgg gtg cag acg201
Glu Gln Ala Leu Asn Arg Phe Trp Asp Tyr Leu Arg Trp Val Gln Thr
40 45 50
ctg tct gac cag gtc cag gaa gag ctg cag agc tcc caa gtc aca caa249
Leu Ser Asp Gln Val Gln Glu Glu Leu Gln Ser Ser Gln Val Thr Gln
55 60 65
gaa ctg acg gca ctg atg gag gac act atg acg gaa gta aag gct tac297
Glu Leu Thr Ala Leu Met Glu Asp Thr Met Thr Glu Val Lys Ala Tyr
70 75 80
aaa aag gag ctg gag gaa cag ctg ggt cca gtg gcg gag gag aca cgg345
Lys Lys Glu Leu Glu Glu Gln Leu Gly Pro Val Ala Glu Glu Thr Arg
85 90 95 100
gcc agg ctg ggc aaa gag gtg cag gcg gca cag gcc cga ctc gga gcc393
Ala Arg Leu Gly Lys Glu Val Gln Ala Ala Gln Ala Arg Leu Gly Ala
105 110 115
gac atg gag gat cta cgc aac cga ctc ggg cag tac cgc aac gag gtg441
Asp Met Glu Asp Leu Arg Asn Arg Leu Gly Gln Tyr Arg Asn Glu Val
120 125 130
cac acc atg ctg ggc cag agc aca gag gag ata cgg gcg cgg ctc tcc489
His Thr Met Leu Gly Gln Ser Thr Glu Glu Ile Arg Ala Arg Leu Ser
135 140 145
aca cac ctg cgc aag atg cgc aag cgc ttg atg cgg gat gcc gat gat537
Thr His Leu Arg Lys Met Arg Lys Arg Leu Met Arg Asp Ala Asp Asp
150 155 160
ctg cag aag cgc cta gct gtg tac aag gca ggg gca cgc gag ggc gcc585
Leu Gln Lys Arg Leu Ala Val Tyr Lys Ala Gly Ala Arg Glu Gly Ala
165 170 175 180
gag cgc ggt gtg agt gcc atc cgt gag cgc ctg ggg cct ctg gtg gag633
Glu Arg Gly Val Ser Ala Ile Arg Glu Arg Leu Gly Pro Leu Val Glu
185 190 195
caa ggt cgc cag cgc act gcc aac cta ggc gct ggg gcc gcc cag cct681
Gln Gly Arg Gln Arg Thr Ala Asn Leu Gly Ala Gly Ala Ala Gln Pro
200 205 210
ctg cgc gat cgc gcc cag gct ttt ggt gac cgc atc cga ggg cgg ctg729
Leu Arg Asp Arg Ala Gln Ala Phe Gly Asp Arg Ile Arg Gly Arg Leu
215 220 225
gag gaa gtg ggc aac cag gcc cgt gac cgc cta gag gag gtg cgt gag777
Glu Glu Val Gly Asn Gln Ala Arg Asp Arg Leu Glu Glu Val Arg Glu
230 235 240
cac atg gag gag gtg cgc tcc aag atg gag gaa cag acc cag caa ata825
His Met Glu Glu Val Arg Ser Lys Met Glu Glu Gln Thr Gln Gln Ile
245 250 255 260
cgc ctg cag gcg gag atc ttc cag gcc cgc ctc aag ggc tgg ttc gag873
Arg Leu Gln Ala Glu Ile Phe Gln Ala Arg Leu Lys Gly Trp Phe Glu
265 270 275
cca ata gtg gaa gac atg cat cgc cag tgg gca aac ctg atg gag aag921
Pro Ile Val Glu Asp Met His Arg Gln Trp Ala Asn Leu Met Glu Lys
280 285 290
ata cag gcc tct gtg gct acc aac ccc atc atc acc cca gtg gcc cag969
Ile Gln Ala Ser Val Ala Thr Asn Pro Ile Ile Thr Pro Val Ala Gln
295 300 305
gag aatcaa tgagtatcct tctcctgtcc tgcaacaaca tccatatcca 1018
Glu Asn Gln
310
gccaggtggc cctgtctcaa gcacctctct ggccctctgg tggcccttgc ttaataaaga 1078
ttctccgagc aaaaaaaaaa aaaaaa 1104
<210>17
<211>311
<212>PRT
<213>小鼠
<400>17
Met Lys Ala Leu Trp Ala Val Leu Leu Val Thr Leu Leu Thr Gly Cys
1 5 10 15
Leu Ala Glu Gly Glu Pro Glu Val Thr Asp Gln Leu Glu Trp Gln Ser
20 25 30
Asn Gln Pro Trp Glu Gln Ala Leu Asn Arg Phe Trp Asp Tyr Leu Arg
35 40 45
Trp Val Gln Thr Leu Ser Asp Gln Val Gln Glu Glu Leu Gln Ser Ser
50 55 60
Gln Val Thr Gln Glu Leu Thr Ala Leu Met Glu Asp Thr Met Thr Glu
65 70 75 80
Val Lys Ala Tyr Lys Lys Glu Leu Glu Glu Gln Leu Gly Pro Val Ala
85 90 95
Glu Glu Thr Arg Ala Arg Leu Gly Lys Glu Val Gln Ala Ala Gln Ala
100 105 110
Arg Leu Gly Ala Asp Met Glu Asp Leu Arg Asn Arg Leu Gly Gln Tyr
115 120 125
Arg Asn Glu Val His Thr Met Leu Gly Gln Ser Thr Glu Glu Ile Arg
130 135 140
Ala Arg Leu Ser Thr His Leu Arg Lys Met Arg Lys Arg Leu Met Arg
145 150 155 160
Asp Ala Asp Asp Leu Gln Lys Arg Leu Ala Val Tyr Lys Ala Gly Ala
165 170 175
Arg Glu Gly Ala Glu Arg Gly Val Ser Ala Ile Arg Glu Arg Leu Gly
180 185 190
Pro Leu Val Glu Gln Gly Arg Gln Arg Thr Ala Asn Leu Gly Ala Gly
195 200 205
Ala Ala Gln Pro Leu Arg Asp Arg Ala Gln Ala Phe Gly Asp Arg Ile
210 215 220
Arg Gly Arg Leu Glu Glu Val Gly Asn Gln Ala Arg Asp Arg Leu Glu
225 230 235 240
Glu Val Arg Glu His Met Glu Glu Val Arg Ser Lys Met Glu Glu Gln
245 250 255
Thr Gln Gln Ile Arg Leu Gln Ala Glu Ile Phe Gln Ala Arg Leu Lys
260 265 270
Gly Trp Phe Glu Pro Ile Val Glu Asp Met His Arg Gln Trp Ala Asn
275 280 285
Leu Met Glu Lys Ile Gln Ala Ser Val Ala Thr Asn Pro Ile Ile Thr
290 295 300
Pro Val Ala Gln Glu Asn Gln
305 310
<210>18
<2ll>5555
<212>DNA
<213>小鼠
<220>
<221>CDS
<222>(316)..(5430)
<400>18
ggctgtggga gagcagaaga ggagctggaa gagcagccta caacagctgt cgggagggac60
cagggctagt tcacacttgg aagctgggat gccaggaccg gccctcctgc ctctctcggt120
ctccatcggc ctcctggtca gctcactcca cactgagacg attctgaagt aagatgctcc180
tggctcctca cagactctgc tacaagagac agagtgaagt gtccccaggg ctcagagcct240
ttgactctgc tccttccctt cccacggctg agttggcaca ggagcacctg ggtgagctgc300
accagactta agaag atg agg ccc ctg att ctg tta gct gcc ctc ctc tgg 351
Met Arg Pro Leu Ile Leu Leu Ala Ala Leu Leu Trp
1 5 10
ctc cag gac tct ttg gcc cag gaa gat gta tgc tca tcc ttg gat ggg 399
Leu Gln Asp Ser Leu Ala Gln Glu Asp Val Cys Ser Ser Leu Asp Gly
15 20 25
agc cca gac agg cag ggt gga ggt cca cct ctg agt gtg aac gtc agc 447
Ser Pro Asp Arg Gln Gly Gly Gly Pro Pro Leu Ser Val Asn Val Ser
30 35 40
agc cgc gga aag cct acc agc ctg ttt ctg agc tgg gta gct gca gag 495
Ser Arg Gly Lys Pro Thr Ser Leu Phe Leu Ser Trp Val Ala Ala Glu
45 50 55 60
cca ggt gga ttt gac tat gcc ctc tgc ctc agg gct atg aac ttg tcg 543
Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Ala Leu Cys Leu Arg Ala Met Asn Leu Ser
65 70 75
ggt ttt cca gaa ggg caa cag ctc caa gct cat acc aac gag tcc agc 591
Gly Phe Pro Glu Gly Gln Gln Leu Gln Ala His Thr Asn Glu Ser Ser
80 85 90
ttt gag ttc cat ggc ctg gtg cca ggg agt cgc tac cag ctg gaa ctg 639
Phe Glu Phe His Gly Leu Val Pro Gly Ser Arg Tyr Gln Leu Glu Leu
95 100 105
act gtc cta aga ccc tgt tgg cag aat gtc aca att acc ctc act gct 687
Thr Val Leu Arg Pro Cys Trp Gln Asn Val Thr Ile Thr Leu Thr Ala
110 115 120
cga act gcc cct aca gtg gtc cgt gga ctg caa ctg cat agc act ggg 735
Arg Thr Ala Pro Thr Val Val Arg Gly Leu Gln Leu His Ser Thr Gly
125 130 135 140
agc cca gcc agc ctg gaa gcc tca tgg agc gat gcc tct ggg gat caa 783
Ser Pro Ala Ser Leu Glu Ala Ser Trp Ser Asp Ala Ser Gly Asp Gln
145 150 155
gac agc tat caa ctt ctc ctc tac cac ccg gaa tcc cac act ctg gca 831
Asp Ser Tyr Gln Leu Leu Leu Tyr His Pro Glu Ser His Thr Leu Ala
160 165 170
tgt aat gtc tct gtg tcc cct gac acc ctg tct tac aat ttt ggt gac879
Cys Asn Val Ser Val Ser Pro Asp Thr Leu Ser Tyr Asn Phe Gly Asp
175 180 185
ctc ttg cca ggt agt cag tat gtc ttg gag gtt atc acc tgg gct ggc927
Leu Leu Pro Gly Ser Gln Tyr Val Leu Glu Val Ile Thr Trp Ala Gly
190 195 200
agt ctc cat gcg aag act agc atc ctc caa tgg aca gag cct gtc cct975
Ser Leu His Ala Lys Thr Ser Ile Leu Gln Trp Thr Glu Pro Val Pro
205 210 215 220
cct gat cac cta aca ctg cgt gcc ttg ggt acc agt agc ctg caa gcc1023
Pro Asp His Leu Thr Leu Arg Ala Leu Gly Thr Ser Ser Leu Gln Ala
225 230 235
ttc tgg aac agc tct gaa ggg gcc acc tgg ttt cac ctg ata ctt aca1071
Phe Trp Asn Ser Ser Glu Gly Ala Thr Trp Phe His Leu Ile Leu Thr
240 245 250
gac ctc cta gag ggt acc aac ctg acc aaa gtg gtc aga caa ggc atc1119
Asp Leu Leu Glu Gly Thr Asn Leu Thr Lys Val Val Arg Gln Gly Ile
255 260 265
tca acc cac acc ttc ctt cgc ctg tct ccg ggt aca cct tac cag ctg1167
Ser Thr His Thr Phe Leu Arg Leu Ser Pro Gly Thr Pro Tyr Gln Leu
270 275 280
aag atc tgt gct gct gct ggg ccc cac cag att tgg gga ccc aat gcc1215
Lys Ile Cys Ala Ala Ala Gly Pro His Gln Ile Trp Gly Pro Asn Ala
285 290 295 300
act gag tgg acc tat ccc tct tac cca tct gac ctg gtg ctg acc ccc1263
Thr Glu Trp Thr Tyr Pro Ser Tyr Pro Ser Asp Leu Val Leu Thr Pro
305 310 315
tta tgg aat gag ctc tgg gca agc tgg aag gca ggg cag gga gcc cgg1311
Leu Trp Asn Glu Leu Trp Ala Ser Trp Lys Ala Gly Gln Gly Ala Arg
320 325 330
gat ggc tat gta ctg aag tta agt ggg cca gtg gag aat aca act act1359
Asp Gly Tyr Val Leu Lys Leu Ser Gly Pro Val Glu Asn Thr Thr Thr
335 340 345
ctg ggt cct gag gag tgc aac gct gtc ttc cca ggg ccc ctg cct cca1407
Leu Gly Pro Glu Glu Cys Asn Ala Val Phe Pro Gly Pro Leu Pro Pro
350 355 360
gga cac tac act ttg ggg ctg agg gtt cta gct gga cct tat gat gcc1455
Gly His Tyr Thr Leu Gly Leu Arg Val Leu Ala Gly Pro Tyr Asp Ala
365 370 375 380
tgg gta gag ggc agt atc tgg ctg gct gaa tct gct gct cgt ccc atg1503
Trp Val Glu Gly Ser Ile Trp Leu Ala Glu Ser Ala Ala Arg Pro Met
385 390 395
gag gtc cct ggt gcc aga ctg tgg cta gaa gga ctg gaa gct act aag1551
Glu Val Pro Gly Ala Arg Leu Trp Leu Glu Gly Leu Glu Ala Thr Lys
400 405 410
caa cct ggg aga cgg gcg ctg ctc tat tct gtt gat gcc cca ggc ctc1599
Gln Pro Gly Arg Arg Ala Leu Leu Tyr Ser Val Asp Ala Pro Gly Leu
415 420 425
cta ggg aac atc tct gtg tct tct ggt gcc act cat gtc acc ttc tgt1647
Leu Gly Asn Ile Ser Val Ser Ser Gly Ala Thr His Val Thr Phe Cys
430 435 440
ggc ttg gta ccc gga gcg cac tac agg gtg gac att gcc tca tcc atg1695
Gly Leu Val Pro Gly Ala His Tyr Arg Val Asp Ile Ala Ser Ser Met
445 450 455 460
gga gac atc act cag agc ctc aca ggc tac aca agt ccc ctg cca cca1743
Gly Asp Ile Thr Gln Ser Leu Thr Gly Tyr Thr Ser Pro Leu Pro Pro
465 470 475
cag tct ctg gag atc atc agc cgg aac agc cca tct gac ctg act atc1791
Gln Ser Leu Glu Ile Ile Ser Arg Asn Ser Pro Ser Asp Leu Thr Ile
480 485 490
ggt tgg gct cca gca cca ggg cag atg gaa ggt tat aag gtc acc tgg1839
Gly Trp Ala Pro Ala Pro Gly Gln Met Glu Gly Tyr Lys Val Thr Trp
495 500 505
cat cag gat ggc agc cag agg tca cct ggc gac ctt gtt gac ttg ggc1887
His Gln Asp Gly Ser Gln Arg Ser Pro Gly Asp Leu Val Asp Leu Gly
510 515 520
cct gac att tcg agc ctg act ctg aaa tct ctg gta cct ggt tcc tgc1935
Pro Asp Ile Ser Ser Leu Thr Leu Lys Ser Leu Val Pro Gly Ser Cys
525 530 535 540
tac acc gtg tca gca tgg gcc tgg tct ggg aac ctc agc tct gac tct1983
Tyr Thr Val Ser Ala Trp Ala Trp Ser Gly Asn Leu Ser Ser Asp Ser
545 550 555
cag aag att cac agt tgc acc cgt ccc gct cct ccc acc aac ctg agc2031
Gln Lys Ile His Ser Cys Thr Arg Pro Ala Pro Pro Thr Asn Leu Ser
560 565 570
ctg ggc ttt gcc cac cag cct gca aca ctg agg gct tcc tgg tgt cac2079
Leu Gly Phe Ala His Gln Pro Ala Thr Leu Arg Ala Ser Trp Cys His
575 580 585
cca ccg ggt ggc agg gat gcc ttt cag tta cgg ctt tac agg ctg agg2127
Pro Pro Gly Gly Arg Asp Ala Phe Gln Leu Arg Leu Tyr Arg Leu Arg
590 595 600
ccc ctg aca ctg gaa agt gag aag atc cta tcc cag gag gcc cag aac2175
Pro Leu Thr Leu Glu Ser Glu Lys Ile Leu Ser Gln Glu Ala Gln Asn
605 610 615 620
ttc tcc tgg gcc cag ctg cct gca ggc tat gaa ttc cag gta cag ctg2223
Phe Ser Trp Ala Gln Leu Pro Ala Gly Tyr Glu Phe Gln Val Gln Leu
625 630 635
tct acc ttg tgg ggg tcg gag gag agc ggc agt gcc aac acc aca ggc2271
Ser Thr Leu Trp Gly Ser Glu Glu Ser Gly Ser Ala Asn Thr Thr Gly
640 645 650
tgg aca ccc ccc tca gct cct aca ttg gta aat gtg acc agt gaa gcc2319
Trp Thr Pro Pro Ser Ala Pro Thr Leu Val Asn Val Thr Ser Glu Ala
655 660 665
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Pro Thr Gln Leu His Val Ser Trp Val His Ala Ala Gly Asp Arg Ser
670 675 680
agc tac caa gtg acc cta tac cag gag agc act cgg aca gcc acc agc2415
Ser Tyr Gln Val Thr Leu Tyr Gln Glu Ser Thr Arg Thr Ala Thr Ser
685 690 695 700
att gtg ggg ccc aag gca gac agc aca agc ttt tgg ggt ttg act cct2463
Ile Val Gly Pro Lys Ala Asp Ser Thr Ser Phe Trp Gly Leu Thr Pro
705 710 715
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Gly Thr Lys Tyr Lys Val Glu Ala Ile Ser Trp Ala Gly Pro Leu Tyr
720 725 730
act gca gca gcc aac gtt tct gct tgg acc tac cca ctc aca ccc aat2559
Thr Ala Ala Ala Asn Val Ser Ala Trp Thr Tyr Pro Leu Thr Pro Asn
735 740 745
gag ctg ctc gcc tct atg cag gca ggc agt gct gtg gtt aac ctg gcc2607
Glu Leu Leu Ala Ser Met Gln Ala Gly Ser Ala Val Val Asn Leu Ala
750 755 760
tgg ccc agt ggt ccc ttg ggg caa ggg aca tgc cat gcc caa ctc tca2655
Trp Pro Ser Gly Pro Leu Gly Gln Gly Thr Cys His Ala Gln Leu Ser
765 770 775 780
gat gct gga cac ctt tca tgg gag caa ccg ctg tcg cta ggc caa gac2703
Asp Ala Gly His Leu Ser Trp Glu Gln Pro Leu Ser Leu Gly Gln Asp
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ctc ctc atg cta agg aat ctt ata cca gga cat acg gtt tca ttg tct2751
Leu Leu Met Leu Arg Asn Leu Ile Pro Gly His Thr Val Ser Leu Ser
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gtg aag tgt cgg gca gga cca ctc cag gcc tcc act cac ccc ctg gtg2799
Val Lys Cys Arg Ala Gly Pro Leu Gln Ala Ser Thr His Pro Leu Val
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ctg tct gta gag cct ggc cct gtg gaa gat gtg ttc tgt caa cct gag2847
Leu Ser Val Glu Pro Gly Pro Val Glu Asp Val Phe Cys Gln Pro Glu
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gcc acc tac ctg tcc ctg aac tgg acg atg cct act gga gat gtg gct2895
Ala Thr Tyr Leu Ser Leu Asn Trp Thr Met Pro Thr Gly Asp Val Ala
845 850 855 860
gtc tgt ctg gtg gag gta gag cag ctg gtg cca gga ggg agc gct cat2943
Val Cys Leu Val Glu Val Glu Gln Leu Val Pro Gly Gly Ser Ala His
865 870 875
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Phe Val Phe Gln Val Asn Thr Ser Glu Asp Ala Leu Leu Leu Pro Asn
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gag gtt tgg cac ccc cca gag cta gct gag gcc ccc cag gtg gag ctg3135
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925 930 935 940
ggg aca ggg atg ggt gtg aca gtc aca cgt ggc atg ttt ggt aaa gat3183
Gly Thr Gly Met Gly Val Thr Val Thr Arg Gly Met Phe Gly Lys Asp
945 950 955
gac ggg cag atc cag tgg tat ggc ata att gcc acc atc aac atg aca3231
Asp Gly Gln Ile Gln Trp Tyr Gly Ile Ile Ala Thr Ile Asn Met Thr
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ttc tac cca gag cct tgg gct gtg cca aga tcc tgg aca gta cct3372
Phe Tyr Pro Glu Pro Trp Ala Val Pro Arg Ser Trp Thr Val Pro
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gtg ggt aca gag gac tgt gac aac acc cag gag ata tgc aat ggg3417
Val Gly Thr Glu Asp Cys Asp Asn Thr Gln Glu Ile Cys Asn Gly
102010251030
cat ctc aag cca ggc ttc cag tat agg ttc agc att gca gcc ttt3462
His Leu Lys Pro Gly Phe Gln Tyr Arg Phe Ser Ile Ala Ala Phe
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agt agg ctc agc tct cca gag acc atc ctg gcc ttc tcc gcc ttc3507
Ser Arg Leu Ser Ser Pro Glu Thr Ile Leu Ala Phe Ser Ala Phe
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tca gag cct cag gct agc atc tct ctg gtg gcc atg ccc ctg aca3552
Ser Glu Pro Gln Ala Ser Ile Ser Leu Val Ala Met Pro Leu Thr
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gtt atg atg ggg act gtg gtg ggc tgc atc atc att gtg tgt gca3597
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gtg cta tgc ttg ttg tgc cgg cgg cgc ctg aag gga cca aggtca3642
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cgg acc cat cgg ccc atc ccc agc cat agc ttc cgg cag agc tat3732
Arg Thr His Arg Pro Ile Pro Ser His Ser Phe Arg Gln Ser Tyr
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gag gcc aag agt gca cgt gca cac cag gcc ttc ttc cag gaa ttt3777
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gag gag ctg aag gag gtg ggc aag gac cag ccc aga cta gag gct3822
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Asn Ala Gly Phe Leu Lys Glu Tyr Arg Leu Leu Lys Gln Ala Ile
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cca acg ctg gag cag tat atc tac ctc tac aac tgt ctg aac agc 5397
Pro Thr Leu Glu Gln Tyr Ile Tyr Leu Tyr Asn Cys Leu Asn Ser
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Ala Leu Arg Asn Arg Leu Pro Arg Ala Arg Lys
169517001705
ctgctaggca tcacgttcca gcaatccacc caggcctggc ttccccagga gaacagatct5500
attcggcctc acgctgtcaa agggcagagt ctgggaataa agggtaaatc tcgag 5555
<210>19
<211>1705
<212>PRT
<213>小鼠
<400>19
Met Arg Pro Leu Ile Leu Leu Ala Ala Leu Leu Trp Leu Gln Asp Ser
1 5 10 15
Leu Ala Gln Glu Asp Val Cys Ser Ser Leu Asp Gly Ser Pro Asp Arg
20 25 30
Gln Gly Gly Gly Pro Pro Leu Ser Val Asn Val Ser Ser Arg Gly Lys
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Pro Thr Ser Leu Phe Leu Ser Trp Val Ala Ala Glu Pro Gly Gly Phe
50 55 60
Asp Tyr Ala Leu Cys Leu Arg Ala Met Asn Leu Ser Gly Phe Pro Glu
65 70 75 80
Gly Gln Gln Leu Gln Ala His Thr Asn Glu Ser Ser Phe Glu Phe His
85 90 95
Gly Leu Val Pro Gly Ser Arg Tyr Gln Leu Glu Leu Thr Val Leu Arg
100 105 110
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115 120 125
Thr Val Val Arg Gly Leu Gln Leu His Ser Thr Gly Ser Pro Ala Ser
130 135 140
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145 150 155 160
Leu Leu Leu Tyr His Pro Glu Ser His Thr Leu Ala Cys Asn Val Ser
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Ser Gln Tyr Val Leu Glu Val Ile Thr Trp Ala Gly Ser Leu His Ala
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210 215 220
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225 230 235 240
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260 265 270
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Ala Arg Leu Trp Leu Glu Gly Leu Glu Ala Thr Lys Gln Pro Gly Arg
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435 440 445
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450 455 460
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485 490 495
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500 505 510
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530 535 540
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Pro Met Glu Met Gln Pro Ile Val Thr Asp Met Val Thr Val His
155015551560
Arg Val Ala Glu Ser Asn Thr Ala Gly Trp Pro Ser Thr Leu Ile
156515701575
Arg Val Ile His Gly Asp Ser Gly Thr Glu Arg Gln Val Gln Cys
158015851590
Leu Gln Phe Pro His Cys Glu Thr Gly Ser Glu Leu Pro Ala Asn
159516001605
Thr Leu Leu Thr Phe Leu Asp Ala Val Gly Gln Cys Cys Ser Arg
161016151620
Gly Asn Ser Lys Lys Pro Gly Thr Leu Leu Ser His Ser Ser Lys
162516301635
Val Thr Asn Gln Leu Ser Thr Phe Leu Ala Met Glu Gln Leu Leu
164016451650
Gln Gln Ala Gly Thr Glu Arg Thr Val Asp Val Phe Ser Val Ala
165516601665
Leu Lys Gln Thr Gln Ala Cys Gly Leu Lys Thr Pro Thr Leu Glu
167016751680
Gln Tyr Ile Tyr Leu Tyr Asn Cys Leu Asn Ser Ala Leu Arg Asn
168516901695
Arg Leu Pro Arg Ala Arg Lys
17001705
<210>20
<211>3078
<212>DNA
<213>大肠杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(3078)
<400>20
acc atg att acg gat tca ctg gcc gtc gtt tta caa cgt cgt gac tgg48
Thr Met Ile Thr Asp Ser Leu Ala Val Val Leu Gln Arg Arg Asp Trp
1 5 10 15
gaa aac cct ggc gtt acc caa ctt aat cgc ctt gca gca cat ccc cct96
Glu Asn Pro Gly Val Thr Gln Leu Asn Arg Leu Ala Ala His Pro Pro
20 25 30
ttc gcc agc tgg cgt aat agc gaa gag gcc cgc acc gat cgc cct tcc144
Phe Ala Ser Trp Arg Asn Ser Glu Glu Ala Arg Thr Asp Arg Pro Ser
35 40 45
cas cag ttg cgc agc ctg aat ggc gaa tgg cgc ttt gcc tgg ttt ccg192
Gln Gln Leu Arg Ser Leu Asn Gly Glu Trp Arg Phe Ala Trp Phe Pro
50 55 60
gca cca gaa gcg gtg ccg gaa agc tgg ctg gag tgc gat ctt cct gag240
Ala Pro Glu Ala Val Pro Glu Ser Trp Leu Glu Cys Asp Leu Pro Glu
65 70 75 80
gcc gat act gtc gtc gtc ccc tca aac tgg cag atg cac ggt tac gat288
Ala Asp Thr Val Val Val Pro Ser Asn Trp Gln Met His Gly Tyr Asp
85 90 95
gcg ccc atc tac acc aac gta acc tat ccc att acg gtc aat cog ccg336
Ala Pro Ile Tyr Thr Asn Val Thr Tyr Pro Ile Thr Val Asn Pro Pro
100 105 110
ttt gtt ccc acg gag aat ccg acg ggt tgt tac tcg ctc aca ttt aat384
Phe Val Pro Thr Glu Asn Pro Thr Gly Cys Tyr Ser Leu Thr Phe Asn
115 120 125
gtt gat gaa agc tgg cta cag gaa ggc cag acg cga att att ttt gat432
Val Asp Glu Ser Trp Leu Gln Glu Gly Gln Thr Arg Ile Ile Phe Asp
130 135 140
ggc gtt aac tcg gcg ttt cat ctg tgg tgc aac ggg cgc tgg gtc ggt480
Gly Val Asn Ser Ala Phe His Leu Trp Cys Asn Gly Arg Trp Val Gly
145 150 155 160
tac ggc cag gac agt cgt ttg ccg tct gaa ttt gac ctg agc gca ttt528
Tyr Gly Gln Asp Ser Arg Leu Pro Ser Glu Phe Asp Leu Ser Ala Phe
165 170 175
tta cgc gcc gga gaa aac cgc ctc gcg gtg atg gtg ctg cgt tgg agt576
Leu Arg Ala Gly Glu Asn Arg Leu Ala Val Met Val Leu Arg Trp Ser
180 185 190
gac ggc agt tat ctg gaa gat cag gat atg tgg cgg atg agc ggc att624
Asp Gly Ser Tyr Leu Glu Asp Gln Asp Met Trp Arg Met Ser Gly Ile
195 200 205
ttc cgt gac gtc tcg ttg ctg cat aaa ccg act acs caa atc agc gat672
Phe Arg Asp Val Ser Leu Leu His Lys Pro Thr Thr Gln Ile Ser Asp
210 215 220
ttc cat gtt gcc act cgc ttt aat gat gat ttc agc cgc gct gta ctg720
Phe His Val Ala Thr Arg Phe Asn Asp Asp Phe Ser Arg Ala Val Leu
225 230 235 240
gag gct gaa gtt cag atg tgc ggc gag ttg cgt gac tac cta cgg gta768
Glu Ala Glu Val Gln Met Cys Gly Glu Leu Arg Asp Tyr Leu Arg Val
245 250 255
aca gtt tct tta tgg cag ggt gaa acg cag gtc gcc agc ggc acc gcg816
Thr Val Ser Leu Trp Gln Gly Glu Thr Gln Val Ala Ser Gly Thr Ala
260 265 270
cct ttc ggc ggt gaa att atc gat gag cgt ggt ggt tat gcc gat cgc864
Pro Phe Gly Gly Glu Ile Ile Asp Glu Arg Gly Gly Tyr Ala Asp Arg
275 280 285
gtc aca cta cgt ctg aac gtc gaa aac ccg aaa ctg tgg agc gcc gaa912
Val Thr Leu Arg Leu Asn Val Glu Asn Pro Lys Leu Trp Ser Ala Glu
290 295 300
atc ccg aat ctc tat cgt gcg gtg gtt gaa ctg cac acc gcc gac ggc960
Ile Pro Asn Leu Tyr Arg Ala Val Val Glu Leu His Thr Ala Asp Gly
305 310 315 320
acg ctg att gaa gca gaa gcc tgc gat gtc ggt ttc cgc gag gtg cgg1008
Thr Leu Ile Glu Ala Glu Ala Cys Asp Val Gly Phe Arg Glu Val Arg
325 330 335
att gaa aat ggt ctg ctg ctg ctg aac ggc aag ccg ttg ctg att cga1056
Ile Glu Asn Gly Leu Leu Leu Leu Asn Gly Lys Pro Leu Leu Ile Arg
340 345 350
ggc gtt aac cgt cac gag cat cat cct ctg cat ggt cag gtc atg gat1104
Gly Val Asn Arg His Glu His His Pro Leu His Gly Gln Val Met Asp
355 360 365
gag cag acg atg gtg cag gat atc ctg ctg atg aag cag aac aac ttt1152
Glu Gln Thr Met Val Gln Asp Ile Leu Leu Met Lys Gln Asn Asn Phe
370 375 380
aac gcc gtg cgc tgt tcg cat tat ccg aac cat ccg ctg tgg tac acg1200
Asn Ala Val Arg Cys Ser His Tyr Pro Asn His Pro Leu Trp Tyr Thr
385 390 395 400
ctg tgc gac cgc tac ggc ctg tat gtg gtg gat gaa gcc aat att gaa1248
Leu Cys Asp Arg Tyr Gly Leu Tyr Val Val Asp Glu Ala Asn Ile Glu
405 410 415
acc cac ggc atg gtg cca atg aat cgt ctg acc gat gat ccg cgc tgg1296
Thr His Gly Met Val Pro Met Asn Arg Leu Thr Asp Asp Pro Arg Trp
420 425 430
cta ccg gcg atg agc gaa cgc gta acg cga atg gtg cag cgc gat cgt1344
Leu Pro Ala Met Ser Glu Arg Val Thr Arg Met Val Gln Arg Asp Arg
435 440 445
aat cac ccg agt gtg atc atc tgg tcg ctg ggg aat gaa tca ggc cac1392
Asn His Pro Ser Val Ile Ile Trp Ser Leu Gly Asn Glu Ser Gly His
450 455 460
ggc gct aat cac gac gcg ctg tat cgc tgg atc aaa tct gtc gat cct1440
Gly Ala Asn His Asp Ala Leu Tyr Arg Trp Ile Lys Ser Val Asp Pro
465 470 475 480
tcc cgc ccg gtg cag tat gaa ggc ggc gga gcc gac acc acg gcc acc1488
Ser Arg Pro Val Gln Tyr Glu Gly Gly Gly Ala Asp Thr Thr Ala Thr
485 490 495
gat att att tgc ccg atg tac gcg cgc gtg gat gaa gac cag ccc ttc1536
Asp Ile Ile Cys Pro Met Tyr Ala Arg Val Asp Glu Asp Gln Pro Phe
500 505 510
ccg gct gtg ccg aaa tgg tcc atc aaa aaa tgg ctt tcg cta cct gga1584
Pro Ala Val Pro Lys Trp Ser Ile Lys Lys Trp Leu Ser Leu Pro Gly
515 520 525
gag acg cgc ccg ctg atc ctt tgc gaa tac gcc cac gcg atg ggt aac1632
Glu Thr Arg Pro Leu Ile Leu Cys Glu Tyr Ala His Ala Met Gly Asn
530 535 540
agt ctt ggc ggt ttc gct aaa tac tgg cag gcg ttt cgt cag tat ccc1680
Ser Leu Gly Gly Phe Ala Lys Tyr Trp Gln Ala Phe Arg Gln Tyr Pro
545 550 555 560
cgt tta cag ggc ggc ttc gtc tgg gac tgg gtg gat cag tcg ctg att1728
Arg Leu Gln Gly Gly Phe Val Trp Asp Trp Val Asp Gln Ser Leu Ile
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aaa tat gat gaa aac ggc aac ccg tgg tcg gct tac ggc ggt gat ttt1776
Lys Tyr Asp Glu Asn Gly Asn Pro Trp Ser Ala Tyr Gly Gly Asp Phe
580 585 590
ggc gat acg ccg aac gat cgc cag ttc tgt atg aac ggt ctg gtc ttt1824
Gly Asp Thr Pro Asn Asp Arg Gln Phe Cys Met Asn Gly Leu Val Phe
595 600 605
gcc gac cgc acg ccg cat cca gcg ctg acg gaa gca aaa cac cag cag1872
Ala Asp Arg Thr Pro His Pro Ala Leu Thr Glu Ala Lys His Gln Gln
610 615 620
cag ttt ttc cag ttc cgt tta tcc ggg caa acc atc gaa gtg acc agc1920
Gln Phe Phe Gln Phe Arg Leu Ser Gly Gln Thr Ile Glu Val Thr Ser
625 630 635 640
gaa tac ctg ttc cgt cat agc gat aac gag ctc ctg cac tgg atg gtg1968
Glu Tyr Leu Phe Arg His Ser Asp Asn Glu Leu Leu His Trp Met Val
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gcg ctg gat ggt aag ccg ctg gca agc ggt gaa gtg cct ctg gat gtc2016
Ala Leu Asp Gly Lys Pro Leu Ala Ser Gly Glu Val Pro Leu Asp Val
660 665 670
gct cca caa ggt aaa cag ttg att gaa ctg cct gaa cta ccg cag ccg2064
Ala Pro Gln Gly Lys Gln Leu Ile Glu Leu Pro Glu Leu Pro Gln Pro
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gag agc gcc ggg caa ctc tgg ctc aca gta cgc gta gtg caa ccg aac2112
Glu Ser Ala Gly Gln Leu Trp Leu Thr Val Arg Val Val Gln Pro Asn
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gcg acc gca tgg tca gaa gcc ggg cac atc agc gcc tgg cag cag tgg2160
Ala Thr Ala Trp Ser Glu Ala Gly His Ile Ser Ala Trp Gln Gln Trp
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cgt ctg gcg gaa aac ctc agt gtg acg ctc ccc gcc gcg tcc cac gcc2208
Arg Leu Ala Glu Asn Leu Ser Val Thr Leu Pro Ala Ala Ser His Ala
725 730 735
atc ccg cat ctg acc acc agc gaa atg gat ttt tgc atc gag ctg ggt2256
Ile Pro His Leu Thr Thr Ser Glu Met Asp Phe Cys Ile Glu Leu Gly
740 745 750
aat aag cgt tgg caa ttt aac cgc cag tca ggc ttt ctt tca cag atg2304
Asn Lys Arg Trp Gln Phe Asn Arg Gln Ser Gly Phe Leu Ser Gln Met
755 760 765
tgg att ggc gat aaa aaa caa ctg ctg acg ccg ctg cgc gat cag ttc2352
Trp Ile Gly Asp Lys Lys Gln Leu Leu Thr Pro Leu Arg Asp Gln Phe
770 775 780
acc cgt gca ccg ctg gat aac gac att ggc gta agt gaa gcg acc cgc2400
Thr Arg Ala Pro Leu Asp Asn Asp Ile Gly Val Ser Glu Ala Thr Arg
785 790 795 800
att gac cct aac gcc tgg gtc gaa cgc tgg aag gcg gcg ggc cat tac2448
Ile Asp Pro Asn Ala Trp Val Glu Arg Trp Lys Ala Ala Gly His Tyr
805 810 815
cag gcc gaa gca gcg ttg ttg cag tgc acg gca gat aca ctt gct gat2496
Gln Ala Glu Ala Ala Leu Leu Gln Cys Thr Ala Asp Thr Leu Ala Asp
820 825 830
gcg gtg ctg att acg acc gct cac gcg tgg cag cat cag ggg aaa acc2544
Ala Val Leu Ile Thr Thr Ala His Ala Trp Gln His Gln Gly Lys Thr
835 840 845
tta ttt atc agc cgg aaa acc tac cgg att gat ggt agt ggt caa atg2592
Leu Phe Ile Ser Arg Lys Thr Tyr Arg Ile Asp Gly Ser Gly Gln Met
850 855 860
gcg att acc gtt gat gtt gaa gtg gcg agc gat aca ccg cat ccg gcg2640
Ala Ile Thr Val Asp Val Glu Val Ala Ser Asp Thr Pro His Pro Ala
865 870 875 880
cgg att ggc ctg aac tgc cag ctg gcg cag gta gca gag cgg gta aac2688
Arg Ile Gly Leu Asn Cys Gln Leu Ala Gln Val Ala Glu Arg Val Asn
885 890 895
tgg ctc gga tta ggg ccg caa gaa aac tat ccc gac cgc ctt act gcc2736
Trp Leu Gly Leu Gly Pro Gln Glu Asn Tyr Pro Asp Arg Leu Thr Ala
900 905 910
gcc tgt ttt gac cgc tgg gat ctg cca ttg tca gac atg tat acc ccg2784
Ala Cys Phe Asp Arg Trp Asp Leu Pro Leu Ser Asp Met Tyr Thr Pro
915 920 925
tac gtc ttc ccg agc gaa aac ggt ctg cgc tgc ggg acg cgc gaa ttg2832
Tyr Val Phe Pro Ser Glu Asn Gly Leu Arg Cys Gly Thr Arg Glu Leu
930 935 940
aat tat ggc cca cac cag tgg cgc ggc gac ttc cag ttc aac atc agc2880
Asn Tyr Gly Pro His Gln Trp Arg Gly Asp Phe Gln Phe Asn Ile Ser
945 950 955 960
cgc tac agt caa cag caa ctg atg gaa acc agc cat cgc cat ctg ctg2928
Arg Tyr Ser Gln Gln Gln Leu Met Glu Thr Ser His Arg His Leu Leu
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cac gcg gaa gaa ggc aca tgg ctg aat atc gac ggt ttc cat atg ggg2976
His Ala Glu Glu Gly Thr Trp Leu Asn Ile Asp Gly Phe His Met Gly
980 985 990
att ggt ggc gac gac tcc tgg agc ccg tca gta tcg gcg gaa ttc cag3024
Ile Gly Gly Asp Asp Ser Trp Ser Pro Ser Val Ser Ala Glu Phe Gln
995 10001005
ctg agc gcc ggt cgc tac cat tac cag ttg gtc tgg tgt caa aaa3069
Leu Ser Ala Gly Arg Tyr His Tyr Gln Leu Val Trp Cys Gln Lys
101010151020
taataataa 3078
<210>21
<211>1023
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>21
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1 5 10 15
Glu Asn Pro Gly Val Thr Gln Leu Asn Arg Leu Ala Ala His Pro Pro
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Phe Ala Ser Trp Arg Asn Ser Glu Glu Ala Arg Thr Asp Arg Pro Ser
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Gln Gln Leu Arg Ser Leu Asn Gly Glu Trp Arg Phe Ala Trp Phe Pro
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65 70 75 80
Ala Asp Thr Val Val Val Pro Ser Asn Trp Gln Met His Gly Tyr Asp
85 90 95
Ala Pro Ile Tyr Thr Asn Val Thr Tyr Pro Ile Thr Val Asn Pro Pro
100 105 110
Phe Val Pro Thr Glu Asn Pro Thr Gly Cys Tyr Ser Leu Thr Phe Asn
115 120 125
Val Asp Glu Ser Trp Leu Gln Glu Gly Gln Thr Arg Ile Ile Phe Asp
130 135 140
Gly Val Asn Ser Ala Phe His Leu Trp Cys Asn Gly Arg Trp Val Gly
145 150 155 160
Tyr Gly Gln Asp Ser Arg Leu Pro Ser Glu Phe Asp Leu Ser Ala Phe
165 170 175
Leu Arg Ala Gly Glu Asn Arg Leu Ala Val Met Val Leu Arg Trp Ser
180 185 190
Asp Gly Ser Tyr Leu Glu Asp Gln Asp Met Trp Arg Met Ser Gly Ile
195 200 205
Phe Arg Asp Val Ser Leu Leu His Lys Pro Thr Thr Gln Ile Ser Asp
210 215 220
Phe His Val Ala Thr Arg Phe Asn Asp Asp Phe Ser Arg Ala Val Leu
225 230 235 240
Glu Ala Glu Val Gln Met Cys Gly Glu Leu Arg Asp Tyr Leu Arg Val
245 250 255
Thr Val Ser Leu Trp Gln Gly Glu Thr Gln Val Ala Ser Gly Thr Ala
260 265 270
Pro Phe Gly Gly Glu Ile Ile Asp Glu Arg Gly Gly Tyr Ala Asp Arg
275 280 285
Val Thr Leu Arg Leu Asn Val Glu Asn Pro Lys Leu Trp Ser Ala Glu
290 295 300
Ile Pro Asn Leu Tyr Arg Ala Val Val Glu Leu His Thr Ala Asp Gly
305 310 315 320
Thr Leu Ile Glu Ala Glu Ala Cys Asp Val Gly Phe Arg Glu Val Arg
325 330 335
Ile Glu Asn Gly Leu Leu Leu Leu Asn Gly Lys Pro Leu Leu Ile Arg
340 345 350
Gly Val Asn Arg His Glu His His Pro Leu His Gly Gln Val Met Asp
355 360 365
Glu Gln Thr Met Val Gln Asp Ile Leu Leu Met Lys Gln Asn Asn Phe
370 375 380
Asn Ala Val Arg Cys Ser His Tyr Pro Asn His Pro Leu Trp Tyr Thr
385 390 395 400
Leu Cys Asp Arg Tyr Gly Leu Tyr Val Val Asp Glu Ala Asn Ile Glu
405 410 415
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420 425 430
Leu Pro Ala Met Ser Glu Arg Val Thr Arg Met Val Gln Arg Asp Arg
435 440 445
Asn His Pro Ser Val Ile Ile Trp Ser Leu Gly Asn Glu Ser Gly His
450 455 460
Gly Ala Asn His Asp Ala Leu Tyr Arg Trp Ile Lys Ser Val Asp Pro
465 470 475 480
Ser Arg Pro Val Gln Tyr Glu Gly Gly Gly Ala Asp Thr Thr Ala Thr
485 490 495
Asp Ile Ile Cys Pro Met Tyr Ala Arg Val Asp Glu Asp Gln Pro Phe
500 505 510
Pro Ala Val Pro Lys Trp Ser Ile Lys Lys Trp Leu Ser Leu Pro Gly
515 520 525
Glu Thr Arg Pro Leu Ile Leu Cys Glu Tyr Ala His Ala Met Gly Asn
530 535 540
Ser Leu Gly Gly Phe Ala Lys Tyr Trp Gln Ala Phe Arg Gln Tyr Pro
545 550 555 560
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565 570 575
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580 585 590
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595 600 605
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Gln Phe Phe Gln Phe Arg Leu Ser Gly Gln Thr Ile Glu Val Thr Ser
625 630 635 640
Glu Tyr Leu Phe Arg His Ser Asp Asn Glu Leu Leu His Trp Met Val
645 650 655
Ala Leu Asp Gly Lys Pro Leu Ala Ser Gly Glu Val Pro Leu Asp Val
660 665 670
Ala Pro Gln Gly Lys Gln Leu Ile Glu Leu Pro Glu Leu Pro Gln Pro
675 680 685
Glu Ser Ala Gly Gln Leu Trp Leu Thr Val Arg Val Val Gln Pro Asn
690 695 700
Ala Thr Ala Trp Ser Glu Ala Gly His Ile Ser Ala Trp Gln Gln Trp
705 710 715 720
Arg Leu Ala Glu Asn Leu Ser Val Thr Leu Pro Ala Ala Ser His Ala
725 730 735
Ile Pro His Leu Thr Thr Ser Glu Met Asp Phe Cys Ile Glu Leu Gly
740 745 750
Asn Lys Arg Trp Gln Phe Asn Arg Gln Ser Gly Phe Leu Ser Gln Met
755 760 765
Trp Ile Gly Asp Lys Lys Gln Leu Leu Thr Pro Leu Arg Asp Gln Phe
770 775 780
Thr Arg Ala Pro Leu Asp Asn Asp Ile Gly Val Ser Glu Ala Thr Arg
785 790 795 800
Ile Asp Pro Asn Ala Trp Val Glu Arg Trp Lys Ala Ala Gly His Tyr
805 810 815
Gln Ala Glu Ala Ala Leu Leu Gln Cys Thr Ala Asp Thr Leu Ala Asp
820 825 830
Ala Val Leu Ile Thr Thr Ala His Ala Trp Gln His Gln Gly Lys Thr
835 840 845
Leu Phe Ile Ser Arg Lys Thr Tyr Arg Ile Asp Gly Ser Gly Gln Met
850 855 860
Ala Ile Thr Val Asp Val Glu Val Ala Ser Asp Thr Pro His Pro Ala
865 870 875 880
Arg Ile Gly Leu Asn Cys Gln Leu Ala Gln Val Ala Glu Arg Val Asn
885 890 895
Trp Leu Gly Leu Gly Pro Gln Glu Asn Tyr Pro Asp Arg Leu Thr Ala
900 905 910
Ala Cys Phe Asp Arg Trp Asp Leu Pro Leu Ser Asp Met Tyr Thr Pro
915 920 925
Tyr Val Phe Pro Ser Glu Asn Gly Leu Arg Cys Gly Thr Arg Glu Leu
930 935 940
Asn Tyr Gly Pro His Gln Trp Arg Gly Asp Phe Gln Phe Asn Ile Ser
945 950 955 960
Arg Tyr Ser Gln Gln Gln Leu Met Glu Thr Ser His Arg His Leu Leu
965 970 975
His Ala Glu Glu Gly Thr Trp Leu Asn Ile Asp Gly Phe His Met Gly
980 985 990
Ile Gly Gly Asp Asp Ser Trp Ser Pro Ser Val Ser Ala Glu Phe Gln
995 10001005
Leu Ser Ala Gly Arg Tyr His Tyr Gln Leu Val Trp Cys Gln Lys
101010151020
<210>22
<211>49
<212>PRT
<213>人
<400>22
Tyr Leu Tyr Gln Trp Leu Gly Ala Pro Val Pro Tyr Pro Asp Pro Leu
1 5 10 15
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20 25 30
Ala Asp His Ile Gly Phe Gln Glu Ala Tyr Arg Arg Phe Tyr Gly Pro
35 40 45
Val
<210>23
<211>49
<212>PRT
<213>人
<220>
<221>VARIANT
<222>(17)..(17)
<223>如果17、21和24位的Xaa均未Glu，则Glu17不羧化，或者<50％的Glu21是羧化的，和/或<50％的Glu24是羧化的，或者17、21和24位以外的1至7个位置与所指明的氨基酸不同
<220>
<221>VARIANT
<222>(21)..(21)
<223>如果17、21和24位的Xaa均未Glu，则Glu17不羧化，或者<50％的Glu21是羧化的，和/或<50％的Glu24是羧化的，或者17、21和24位以外的1至7个位置与所指明的氨基酸不同
<220>
<221>VARIANT
<222>(24)..(24)
<223>如果17、21和24位的Xaa均未Glu，则Glu17不羧化，或者<50％的Glu21是羧化的，和/或<50％的Glu24是羧化的，或者17、21和24位以外的1至7个位置与所指明的氨基酸不同
<400>23
Tyr Leu Tyr Gln Trp Leu Gly Ala Pro Val Pro Tyr Pro Asp Pro Leu
1 5 10 15
Xaa Pro Arg Arg Xaa Val Cys Xaa Leu Asn Pro Asp Cys Asp Glu Leu
20 25 30
Ala Asp His Ile Gly Phe Gln Glu Ala Tyr Arg Arg Phe Tyr Gly Pro
35 40 45
Val
<210>24
<211>5136
<212>DNA
<213>褐家鼠
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(5136)
<400>24
atg agg ccc ctg att ctg tta gct gcc ctc ctc tgg ctc cag ggc ttt48
Met Arg Pro Leu Ile Leu Leu Ala Ala Leu Leu Trp Leu Gln Gly Phe
1 5 10 15
ttg gcc gag gac gac gca tgc tca tcc ttg gaa ggg agc cca gac agg96
Leu Ala Glu Asp Asp Ala Cys Ser Ser Leu Glu Gly Ser Pro Asp Arg
20 25 30
cag ggt gga ggt cca ctt ctg agt gtg aac gtc agt agc cat gga aag144
Gln Gly Gly Gly Pro Leu Leu Ser Val Asn Val Ser Ser His Gly Lys
35 40 45
tct acc agc ctg ttt ctg agc tgg gta gct gca gag ctg ggc gga ttt192
Ser Thr Ser Leu Phe Leu Ser Trp Val Ala Ala Glu Leu Gly Gly Phe
50 55 60
gac tat gcc ctc agc ctc agg agt gtg aac tcc tca ggt tct cca gaa240
Asp Tyr Ala Leu Ser Leu Arg Ser Val Asn Ser Ser Gly Ser Pro Glu
65 70 75 80
ggg caa cag ctc cag gct cac aca aat gag tcc ggc ttt gag ttc cat288
Gly Gln Gln Leu Gln Ala His Thr Asn Glu Ser Gly Phe Glu Phe His
85 90 95
ggc ctg gtg cca ggg agt cgc tac cag cta aaa ctg act gtc cta aga336
Gly Leu Val Pro Gly Ser Arg Tyr Gln Leu Lys Leu Thr Val Leu Arg
100 105 110
ccc tgt tgg cag aat gtc aca att acc ctc act gcc cga act gcc ccg384
Pro Cys Trp Gln Asn Val Thr Ile Thr Leu Thr Ala Arg Thr Ala Pro
115 120 125
aca gtg gtc cgt gga ctg cag ctg cat agc gct ggg agc cca gcc agg432
Thr Val Val Arg Gly Leu Gln Leu His Ser Ala Gly Ser Pro Ala Arg
130 135 140
ctg gaa gcc tcg tgg agt gat gcc cct gga gat caa gac agc tac caa480
Leu Glu Ala Ser Trp ser Asp Ala Pro Gly Asp Gln Asp Ser Tyr Gln
145 150 155 160
ctt ctc ctc tac cac ctg gaa tcc caa act ctg gca tgc aat gtc tct528
Leu Leu Leu Tyr His Leu Glu Ser Gln Thr Leu Ala Cys Asn Val Ser
165 170 175
gtg tcc cct gac acc ctg tct tac agt ttt ggc gac ctt ttg cca ggt576
Val Ser Pro Asp Thr Leu Ser Tyr Ser Phe Gly Asp Leu Leu Pro Gly
180 185 190
act cag tat gtc ttg gag gtt atc acc tgg gct ggc agt ctc cat gcg624
Thr Gln Tyr Val Leu Glu Val Ile Thr Trp Ala Gly Ser Leu His Ala
195 200 205
aag act agt atc ctc cag tgg aca gag cct gtc cct cct gat cac cta672
Lys Thr Ser Ile Leu Gln Trp Thr Glu Pro Val Pro Pro Asp His Leu
210 215 220
gca cta cgt gcc ttg ggt acc agt agc ctg caa gcc ttc tgg aac agc720
Ala Leu Arg Ala Leu Gly Thr Ser Ser Leu Gln Ala Phe Trp Asn Ser
225 230 235 240
tct gaa ggg gcc acc tcg ttt cac ctg atg ctc aca gac ctc ctc ggg768
Ser Glu Gly Ala Thr Ser Phe His Leu Met Leu Thr Asp Leu Leu Gly
245 250 255
ggc acc aac acg act gcg gtg atc aga caa ggg gtc tcg acc cac acc816
Gly Thr Asn Thr Thr Ala Val Ile Arg Gln Gly Val Ser Thr His Thr
260 265 270
ttt ctt cac cta tct ccg ggt aca cct cat gag ctg aag att tgt gct864
Phe Leu His Leu Ser Pro Gly Thr Pro His Glu Leu Lys Ile Cys Ala
275 280 285
tct gct ggg ccc cac cag atc tgg gga ccc agt gcc acc gag tgg acc912
Ser Ala Gly Pro His Gln Ile Trp Gly Pro Ser Ala Thr Glu Trp Thr
290 295 300
tat ccc tct tac cca tct gac ctg gtg ctg act ccc tta cgg aat gag960
Tyr Pro Ser Tyr Pro Ser Asp Leu Val Leu Thr Pro Leu Arg Asn Glu
305 310 315 320
ctc tgg gcc agc tgg aag gca ggg ctg gga gcc cgg gac ggc tat gta1008
Leu Trp Ala Ser Trp Lys Ala Gly Leu Gly Ala Arg Asp Gly Tyr Val
325 330 335
ctg aag tta agt ggg cca atg gag agt acg tct acc ctg ggc ccg gaa1056
Leu Lys Leu Ser Gly Pro Met Glu Ser Thr Ser Thr Leu Gly Pro Glu
340 345 350
gag tgc aat gca gtc ttc cca ggg ccc ctg cct ccg gga cac tac act1104
Glu Cys Asn Ala Val Phe Pro Gly Pro Leu Pro Pro Gly His Tyr Thr
355 360 365
ttg cag ctg aag gtt cta gct gga cct tat gat gcc tgg gtg gag ggc1152
Leu Gln Leu Lys Val Leu Ala Gly Pro Tyr Asp Ala Trp Val Glu Gly
370 375 380
agt acc tgg ctg gct gaa tct gct gcc ctt ccc agg gag gtc cct ggt1200
Ser Thr Trp Leu Ala Glu Ser Ala Ala Leu Pro Arg Glu Val Pro Gly
385 390 395 400
gcc aga ctg tgg cta gat gga ctg gaa gct tcc aag cag cct ggg aga1248
Ala Arg Leu Trp Leu Asp Gly Leu Glu Ala Ser Lys Gln Pro Gly Arg
405 410 415
cgg gcg cta ctc tat tct gac gat gcc cca ggc tcc cta ggg aac atc1296
Arg Ala Leu Leu Tyr Ser Asp Asp Ala Pro Gly Ser Leu Gly Asn Ile
420 425 430
tct gtg ccc tct ggt gcc act cac gtc att ttc tgt ggc ctg gta cct1344
Ser Val Pro Ser Gly Ala Thr His Val Ile Phe Cys Gly Leu Val Pro
435 440 445
gga gcc cac tat agg gtg gac att gcc tca tcc acg ggg gac atc tct1392
Gly Ala His Tyr Arg Val Asp Ile Ala Ser Ser Thr Gly Asp Ile Ser
450 455 460
cag agc atc tca ggc tat aca agt ccc ctg cca ccg cag tca ctg gag1440
Gln Ser Ile Ser Gly Tyr Thr Ser Pro Leu Pro Pro Gln Ser Leu Glu
465 470 475 480
gtc atc agc agg agc agc cca tct gac ctg act att gct tgg ggt cca1488
Val Ile Ser Arg Ser Ser Pro Ser Asp Leu Thr Ile Ala Trp Gly Pro
485 490 495
gca cca ggg cag ctg gaa ggt tat aag gtt acc tgg cat cag gat ggc1536
Ala Pro Gly Gln Leu Glu Gly Tyr Lys Val Thr Trp His Gln Asp Gly
500 505 510
agc cag agg tct cct ggc gac ctt gtt gac ttg ggc cct gac act ttg1584
Ser Gln Arg Ser Pro Gly Asp Leu Val Asp Leu Gly Pro Asp Thr Leu
515 520 525
agc ctg act ctg aaa tct ctg gta ccc ggc tcc tgc tac acc gtg tca1632
Ser Leu Thr Leu Lys Ser Leu Val Pro Gly Ser Cys Tyr Thr Val Ser
530 535 540
gca tgg gcc tgg gcc ggg aac ctc gac tct gac tct cag aag att cac1680
Ala Trp Ala Trp Ala Gly Asn Leu Asp Ser Asp Ser Gln Lys Ile His
545 550 555 560
agc tgc acc cgc ccc gct cct ccc acc aac ctg agt ctg ggc ttt gcc1728
Ser Cys Thr Arg Pro Ala Pro Pro Thr Asn Leu Ser Leu Gly Phe Ala
565 570 575
cac cag cct gcg gca ctg aag gct tcc tgg tat cac cca ccg ggt ggc1776
His Gln Pro Ala Ala Leu Lys Ala Ser Trp Tyr His Pro Pro Gly Gly
580 585 590
agg gat gcc ttt cac tta cgg ctt tac agg ctg agg cct ctg aca ctg1824
Arg Asp Ala Phe His Leu Arg Leu Tyr Arg Leu Arg Pro Leu Thr Leu
595 600 605
gaa agt gag aag gtc cta cct cgg gag gcc cag aac ttc tcc tgg gcc1872
Glu Ser Glu Lys Val Leu Pro Arg Glu Ala Gln Asn Phe Ser Trp Ala
610 615 620
cag ctg act gca ggc tgt gag ttc cag gta cag ctg tct acc ttg tgg1920
Gln Leu Thr Ala Gly Cys Glu Phe Gln Val Gln Leu Ser Thr Leu Trp
625 630 635 640
ggg tct gag aga agc agc agt gcc aac gcc aca ggc tgg aca ccc cct1968
Gly Ser Glu Arg Ser Ser Ser Ala Asn Ala Thr Gly Trp Thr Pro Pro
645 650 655
tca gct cct aca ctg gta aac gtg acc agc gat gct cct acc cag ctc2016
Ser Ala Pro Thr Leu Val Asn Val Thr Ser Asp Ala Pro Thr Gln Leu
660 665 670
caa gta tcc tgg gcc cac gtt cct ggg ggc cgg agc cgc tac caa gtg2064
Gln Val Ser Trp Ala His Val Pro Gly Gly Arg Ser Arg Tyr Gln Val
675 680 685
acc cta tac cag gag agt acc cgg aca gcc acc agc atc atg ggg ccc2112
Thr Leu Tyr Gln Glu Ser Thr Arg Thr Ala Thr Ser Ile Met Gly Pro
690 695 700
aag gaa gat ggc acg agc ttt ttg ggt ttg act cct ggc act aag tac2160
Lys Glu Asp Gly Thr Ser Phe Leu Gly Leu Thr Pro Gly Thr Lys Tyr
705 710 715 720
aag gtg gaa gtc atc tcc tgg gct ggg ccc ctc tac act gca gca gcc2208
Lys Val Glu Val Ile Ser Trp Ala Gly Pro Leu Tyr Thr Ala Ala Ala
725 730 735
aac gtt tct gcc tgg acc tac cca ctc ata ccc aat gag ctg ctc gtg2256
Asn Val Ser Ala Trp Thr Tyr Pro Leu Ile Pro Asn Glu Leu Leu Val
740 745 750
tca atg cag gca ggc agt gct gtg gtt aac ctg gcc tgg ccc agt ggt2304
Ser Met Gln Ala Gly Ser Ala Val Val Asn Leu Ala Trp Pro Ser Gly
755 760 765
ccc ctg ggg caa ggg gca tgc cac gcc caa ctc tca gat gct gga cac2352
Pro Leu Gly Gln Gly Ala Cys His Ala Gln Leu Ser Asp Ala Gly His
770 775 780
ctc tca tgg gag caa ccc ctg aaa cta ggc caa gag ctc ttc atg cta2400
Leu Ser Trp Glu Gln Pro Leu Lys Leu Gly Gln Glu Leu Phe Met Leu
785 790 795 800
agg gat ctc aca cca gga cat acc atc tcg atg tca gtg agg tgt cgg2448
Arg Asp Leu Thr Pro Gly His Thr Ile Ser Met Ser Val Arg Cys Arg
805 810 815
gca ggg ccg ctc cag gcc tct acg cac ctt gtg gtg ctg tct gtg gag2496
Ala Gly Pro Leu Gln Ala Ser Thr His Leu Val Val Leu Ser Val Glu
820 825 830
cct ggc cct gtg gaa gat gtg ctc tgt cat cca gag gcc acc tac ctg2544
Pro Gly Pro Val Glu Asp Val Leu Cys His Pro Glu Ala Thr Tyr Leu
835 840 845
gcc ctg aac tgg acg atg cct gct gga gac gtg gat gtc tgt ctg gtg2592
Ala Leu Asn Trp Thr Met Pro Ala Gly Asp Val Asp Val Cys Leu Val
850 855 860
gtg gta gag cgg ctg gtg ccg gga ggg ggc act cat ttt gtc ttc cag2640
Val Val Glu Arg Leu Val Pro Gly Gly Gly Thr His Phe Val Phe Gln
865 870 875 880
gtc aac acc tca ggg gat gct ctt ctg ttg ccc aac ttg atg ccc acc2688
Val Asn Thr Ser Gly Asp Ala Leu Lau Leu Pro Asn Leu Met Pro Thr
885 890 895
act tct tac cgc ctt agc ctc acc gtt ctg ggc agg aat agt cgg tgg2736
Thr Ser Tyr Arg Leu Ser Leu Thr Val Leu Gly Arg Asn Ser Arg Trp
900 905 910
agc cgg gcg gtt tcc ctg gtg tgc agt act tct gct gag gct tgg cac2784
Ser Arg Ala Val Ser Leu Val Cys Ser Thr Ser Ala Glu Ala Trp His
915 920 925
ccc cca gag cta gct gag ccc ccc cag gtg gag ctg ggg aca ggg atg2832
Pro Pro Glu Leu Ala Glu Pro Pro Gln Val Glu Leu Gly Thr Gly Met
930 935 940
ggt gtg aca gtc atg cgt ggc atg ttt ggt aaa gat gac ggg cag atc2880
Gly Val Thr Val Met Arg Gly Met Phe Gly Lys Asp Asp Gly Gln Ile
945 950 955 960
cag tgg tat ggc ata att gcc acc atc aac atg acg ctg gcc cag cct2928
Gln Trp Tyr Gly Ile Ile Ala Thr Ile Asn Met Thr Leu Ala Gln Pro
965 970 975
tcc cgg gaa gcc atc aat tac aca tgg tat gac cac tac tat aga gga2976
Ser Arg Glu Ala Ile Asn Tyr Thr Trp Tyr Asp His Tyr Tyr Arg Gly
980 985 990
tgt gag tcc ttc ctg gct ctc ctg ttc cca aac ccc ttc tac cca gag3024
Cys Glu Ser Phe Leu Ala Leu Leu Phe Pro Asn Pro Phe Tyr Pro Glu
995 10001005
cct tgg gct ggg cca aga tcc tgg aca gta cct gtg ggt act gag3069
Pro Trp Ala Gly Pro Arg Ser Trp Thr Val Pro Val Gly Thr Glu
101010151020
gac tgt gac aac acc caa gag ata tgc aat ggg cgt ctc aag tca3114
Asp Cys Asp Asn Thr Gln Glu Ile Cys Asn Gly Arg Leu Lys Ser
102510301035
ggc ttc cag tat agg ttc agc gtt gtg gcc ttt agt agg ctc aac3159
Gly Phe Gln Tyr Arg Phe Ser Val Val Ala Phe Ser Arg Leu Asn
104010451050
act cca gag acc atc ctc gcc ttc tcg gcc ttc tca gag ccc cgg3204
Thr Pro Glu Thr Ile Leu Ala Phe Ser Ala Phe Ser Glu Pro Arg
105510601065
gcc agc atc tct ctg gcg atc att ccc ctg aca gtt atg ctg ggg3249
Ala Ser Ile Ser Leu Ala Ile Ile Pro Leu Thr Val Met Leu Gly
107010751080
gct gtg gtg ggc agc att gtc att gtg tgt gca gtg cta tgc ttg3294
Ala Val Val Gly Ser Ile Val Ile Val Cys Ala Val Leu Cys Leu
108510901095
ctc cgc tgg cgg tgc ctg aag gga cca aga tca gag aag gat ggc3339
Leu Arg Trp Arg Cys Leu Lys Gly Pro Arg Ser Glu Lys Asp Gly
110011051110
ttt tcc aag gag ctg atg cct tac aac ctg tgg cgg acc cat cgg3384
Phe Ser Lys Glu Leu Met Pro Tyr Asn Leu Trp Arg Thr His Arg
111511201125
cct atc ccc atc cat agc ttc cgg cag agc tat gag gcc aag agc3429
Pro Ile Pro Ile His Ser Phe Arg Gln Ser Tyr Glu Ala Lys Ser
113011351140
gca cat gca cac cag acc ttc ttc cag gaa ttt gag gag ttg aag3474
Ala His Ala His Gln Thr Phe Phe Gln Glu Phe Glu Glu Leu Lys
114511501155
gag gta ggc aag gac cag ccc cga cta gag gct gag cat ccg gac3519
Glu Val Gly Lys Asp Gln Pro Arg Leu Glu Ala Glu His Pro Asp
116011651170
aac atc atc aag aac cgg tac cca cac gtg ctg ccc tat gac cac3564
Asn Ile Ile Lys Asn Arg Tyr Pro His Val Leu Pro Tyr Asp His
117511801185
tcc agg gtc agg ctg acc cag cta cca gga gag cct cat tct gac3609
Ser Arg Val Arg Leu Thr Gln Leu Pro Gly Glu Pro His Ser Asp
119011951200
tac atc aat gcc aac ttc atc cca ggc tat agc cac aca cag gag3654
Tyr Ile Asn Ala Asn Phe Ile Pro Gly Tyr Ser His Thr Gln Glu
120512101215
atc att gcc acc cag ggg cct ctc aaa aag acg cta gag gac ttc3699
Ile Ile Ala Thr Gln Gly Pro Leu Lys Lys Thr Leu Glu Asp Phe
122012251230
tgg cgg ttg gta tgg gag cag caa gtc cac gtg atc atc atg ctg3744
Trp Arg Leu Val Trp Glu Gln Gln Val His Val Ile Ile Met Leu
123512401245
act gtg ggc atg gag aac ggg cgg gta ctg tgt gag cac tac tgg3789
Thr Val Gly Met Glu Asn Gly Arg Val Leu Cys Glu His Tyr Trp
125012551260
cca gcc aac tcc acg cct gtt act cac ggt cac atc acc atc cac3834
Pro Ala Asn Ser Thr Pro Val Thr His Gly His Ile Thr Ile His
126512701275
ctc ctg gca gag gag cct gag gat gag tgg acc agg agg gaa ttc3879
Leu Leu Ala Glu Glu Pro Glu Asp Glu Trp Thr Arg Arg Glu Phe
128012851290
cag ctg cag cac ggt acc gag caa aaa cag agg cga gtg aag cag3924
Gln Leu Gln His Gly Thr Glu Gln Lys Gln Arg Arg Val Lys Gln
129513001305
ctg cag ttc acta cc tgg cca gac cac agt gtc ccg gag gct ccc3969
Leu Gln Phe Thr Thr Trp Pro Asp His Ser Val Pro Glu Ala Pro
131013151320
agc tct ctg ctc gct ttt gta gaa ctg gta cag gag cag gtg cag4014
Ser Ser Leu Leu Ala Phe Val Glu Leu Val Gln Glu Gln Val Gln
132513301335
gcc act cag ggc aag gga ccc atc ctg gtg cat tgc agt gct ggc4059
Ala Thr Gln Gly Lys Gly Pro Ile Leu Val His Cys Ser Ala Gly
134013451350
gtg ggg agg aca ggc acc ttt gtg gct ctc ttg cgg cta ctg cga4104
Val Gly Arg Thr Gly Thr Phe Val Ala Leu Leu Arg Leu Leu Arg
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caa cta gag gaa gag aag gtg gcc gat gtg ttc aac act gtg tac4149
Gln Leu Glu Glu Glu Lys Val Ala Asp Val Phe Asn Thr Val Tyr
137013751380
ata ctc cgg ttg cac cgg ccc ctc atg atc cag acc ctg agt caa4194
Ile Leu Arg Leu His Arg Pro Leu Met Ile Gln Thr Leu Ser Gln
138513901395
tac atc ttc ctg cac agt tgc ctg ctg aac aag att ctg gaa ggg4239
Tyr Ile Phe Leu His Ser Cys Leu Leu Asn Lys Ile Leu Glu Gly
140014051410
ccc cct gac agc tcc gac tcc ggc ccc atc tct gtg atg gat ttt4284
Pro Pro Asp Ser Ser Asp Ser Gly Pro Ile Ser Val Met Asp Phe
141514201425
gca cag gct tgt gcc aag agg gca gcc aac gcc aat gct ggt ttc4329
Ala Gln Ala Cys Ala Lys Arg Ala Ala Asn Ala Asn Ala Gly Phe
143014351440
ttg aag gag tac aag ctc ctg aag cag gcc atc aag gat ggg act4374
Leu Lys Glu Tyr Lys Leu Leu Lys Gln Ala Ile Lys Asp Gly Thr
144514501455
ggc tct ctg ctg ccc cct cct gac tac aat cag aac agc att gtc4419
Gly Ser Leu Leu Pro Pro Pro Asp Tyr Asn Gln Asn Ser Ile Val
146014651470
tcc cgt cgt cat tct cag gag cag ttc gcc ctg gtg gag gag tgc4464
Ser Arg Arg His Ser Gln Glu Gln Phe Ala Leu Val Glu Glu Cys
147514801485
cct gag gat agc atg ctg gaa gcc tca ctc ttc cct ggt ggt ccg4509
Pro Glu Asp Ser Met Leu Glu Ala Ser Leu Phe Pro Gly Gly Pro
149014951500
tct ggt tgt gat cat gtg gtg ctg act ggc tca gcc gga cca aag4554
Ser Gly Cys Asp His Val Val Leu Thr Gly Ser Ala Gly Pro Lys
150515101515
gaa ctc tgg gaa atg gtg tgg gag cat gat gcc cat gtg ctc gtc4599
Glu Leu Trp Glu Met Val Trp Glu His Asp Ala His Val Leu Val
152015251530
tcc ctg ggc ctg cct gat acc aag gag aag cca cca gac atc tgg4644
Ser Leu Gly Leu Pro Asp Thr Lys Glu Lys Pro Pro Asp Ile Trp
153515401545
cca gtg gag atg cag cct att gtc aca gac atg gtg aca gtg cac4689
Pro Val Glu Met Gln Pro Ile Val Thr Asp Met Val Thr Val His
155015551560
aga gtg tct gag agc aac aca aca act ggc tgg ccc agc acc ctc4734
Arg Val Ser Glu Ser Asn Thr Thr Thr Gly Trp Pro Ser Thr Leu
156515701575
ttc aga gtc ata cac ggg gag agt gga aag gaa agg cag gtt caa4779
Phe Arg Val Ile His Gly Glu Ser Gly Lys Glu Arg Gln Val Gln
158015851590
tgc ctg caa ttt cca tgc tct gag tct ggg tgt gag ctc cca gct4824
Cys Leu Gln Phe Pro Cys Ser Glu Ser Gly Cys Glu Leu Pro Ala
159516001605
aac acc cta ctg acc ttc ctt gat gct gtg ggc cag tgc tgc ttc4869
Asn Thr Leu Leu Thr Phe Leu Asp Ala Val Gly Gln Cys Cys Phe
161016151620
cgg ggc aag agc aag aag cca ggg acc ctg ctc agc cac tcc agc4914
Arg Gly Lys Ser Lys Lys Pro Gly Thr Leu Leu Ser His Ser Ser
162516301635
aaa aac aca aac cag ctg ggc acc ttc ttg gct atg gaa cag ctg4959
Lys Asn Thr Asn Gln Leu Gly Thr Phe Leu Ala Met Glu Gln Leu
164016451650
tta cag caa gca ggg aca gag cgc aca gtg gac gtc ttc aat gtg5004
Leu Gln Gln Ala Gly Thr Glu Arg Thr Val Asp Val Phe Asn Val
165516601665
gcc ctg aag cag tca cag gcc tgc ggc ctt atg acc cca aca ctg5049
Ala Leu Lys Gln Ser Gln Ala Cys Gly Leu Met Thr Pro Thr Leu
167016751680
gag cag tat atc tac ctc tac aac tgt ctg aac agc gca ctg ctg5094
Glu Gln Tyr Ile Tyr Leu Tyr Asn Cys Leu Asn Ser Ala Leu Leu
168516901695
aac ggg ctg ccc aga gct ggg aag tgg cct gcg ccc tgc tag5136
Asn Gly Leu Pro Arg Ala Gly Lys Trp Pro Ala Pro Cys
170017051710
<210>25
<211>1711
<212>PRT
<213>褐家鼠
<400>25
Met Arg Pro Leu Ile Leu Leu Ala Ala Leu Leu Trp Leu Gln Gly Phe
1 5 10 15
Leu Ala Glu Asp Asp Ala Cys Ser Ser Leu Glu Gly Ser Pro Asp Arg
20 25 30
Gln Gly Gly Gly Pro Leu Leu Ser Val Asn Val Ser Ser His Gly Lys
35 40 45
Ser Thr Ser Leu Phe Leu Ser Trp Val Ala Ala Glu Leu Gly Gly Phe
50 55 60
Asp Tyr Ala Leu Ser Leu Arg Ser Val Asn Ser Ser Gly Ser Pro Glu
65 70 75 80
Gly Gln Gln Leu Gln Ala His Thr Asn Glu Ser Gly Phe Glu Phe His
85 90 95
Gly Leu Val Pro Gly Ser Arg Tyr Gln Leu Lys Leu Thr Val Leu Arg
100 105 110
Pro Cys Trp Gln Asn Val Thr Ile Thr Leu Thr Ala Arg Thr Ala Pro
115 120 125
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130 135 140
Leu Glu Ala Ser Trp Ser Asp Ala Pro Gly Asp Gln Asp Ser Tyr Gln
145 150 155 160
Leu Leu Leu Tyr His Leu Glu Ser Gln Thr Leu Ala Cys Asn Val Ser
165 170 175
Val Ser Pro Asp Thr Leu Ser Tyr Ser Phe Gly Asp Leu Leu Pro Gly
180 185 190
Thr Gln Tyr Val Leu Glu Val Ile Thr Trp Ala Gly Ser Leu His Ala
195 200 205
Lys Thr Ser Ile Leu Gln Trp Thr Glu Pro Val Pro Pro Asp His Leu
210 215 220
Ala Leu Arg Ala Leu Gly Thr Ser Ser Leu Gln Ala Phe Trp Asn Ser
225 230 235 240
Ser Glu Gly Ala Thr Ser Phe His Leu Met Leu Thr Asp Leu Leu Gly
245 250 255
Gly Thr Asn Thr Thr Ala Val Ile Arg Gln Gly Val Ser Thr His Thr
260 265 270
Phe Leu His L6u Ser Pro Gly Thr Pro His Glu Leu Lys Ile Cys Ala
275 280 285
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Tyr Pro Ser Tyr Pro Ser Asp Leu Val Leu Thr Pro Leu Arg Asn Glu
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Leu Trp Ala Ser Trp Lys Ala Gly Leu Gly Ala Arg Asp Gly Tyr Val
325 330 335
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355 360 365
Leu Gln Leu Lys Val Leu Ala Gly Pro Tyr Asp Ala Trp Val Glu Gly
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Ala Arg Leu Trp Leu Asp Gly Leu Glu Ala Ser Lys Gln Pro Gly Arg
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Arg Ala Leu Leu Tyr Ser Asp Asp Ala Pro Gly Ser Leu Gly Asn Ile
420 425 430
Ser Val Pro Ser Gly Ala Thr His Val Ile Phe Cys Gly Leu Val Pro
435 440 445
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485 490 495
Ala Pro Gly Gln Leu Glu Gly Tyr Lys Val Thr Trp His Gln Asp Gly
500 505 510
Ser Gln Arg Ser Pro Gly Asp Leu Val Asp Leu Gly Pro Asp Thr Leu
515 520 525
Ser Leu Thr Leu Lys Ser Leu Val Pro Gly Ser Cys Tyr Thr Val Ser
530 535 540
Ala Trp Ala Trp Ala Gly Asn Leu Asp Ser Asp Ser Gln Lys Ile His
545 550 555 560
Ser Cys Thr Arg Pro Ala Pro Pro Thr Asn Leu Ser Leu Gly Phe Ala
56 5570 575
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580 585 590
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595 600 605
Glu Ser Glu Lys Val Leu Pro Arg Glu Ala Gln Asn Phe Ser Trp Ala
610 615 620
Gln Leu Thr Ala Gly Cys Glu Phe Gln Val Gln Leu Ser Thr Leu Trp
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Gly Ser Glu Arg Ser Ser Ser Ala Asn Ala Thr Gly Trp Thr Pro Pro
645 650 655
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660 665 670
Gln Val Ser Trp Ala His Val Pro Gly Gly Arg Ser Arg Tyr Gln Val
675 680 685
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705 710 715 720
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725 730 735
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740 745 750
Ser Met Gln Ala Gly Ser Ala Val Val Asn Leu Ala Trp Pro Ser Gly
755 760 765
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770 775 780
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785 790 795 800
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915 920 925
Pro Pro Glu Leu Ala Glu Pro Pro Gln Val Glu Leu Gly Thr Gly Met
930 935 940
Gly Val Thr Val Met Arg Gly Met Phe Gly Lys Asp Asp Gly Gln Ile
945 950 955 960
Gln Trp Tyr Gly Ile Ile Ala Thr Ile Asn Met Thr Leu Ala Gln Pro
965 970 975
Ser Arg Glu Ala Ile Asn Tyr Thr Trp Tyr Asp His Tyr Tyr Arg Gly
980 985 990
Cys Glu Ser Phe Leu Ala Leu Leu Phe Pro Asn Pro Phe Tyr Pro Glu
995 10001005
Pro Trp Ala Gly Pro Arg Ser Trp Thr Val Pro Val Gly Thr Glu
101010151020
Asp Cys Asp Asn Thr Gln Glu Ile Cys Asn Gly Arg Leu Lys Ser
102510301035
Gly Phe Gln Tyr Arg Phe Ser Val Val Ala Phe Ser Arg Leu Asn
104010451050
Thr Pro Glu Thr Ile Leu Ala Phe Ser Ala Phe Ser Glu Pro Arg
105510601065
Ala Ser Ile Ser Leu Ala Ile Ile Pro Leu Thr Val Met Leu Gly
107010751080
Ala Val Val Gly Ser Ile Val Ile Val Cys Ala Val Leu Cys Leu
108510901095
Leu Arg Trp Arg Cys Leu Lys Gly Pro Arg Ser Glu Lys Asp Gly
110011051110
Phe Ser Lys Glu Leu Met Pro Tyr Asn Leu Trp Arg Thr His Arg
111511201125
Pro Ile Pro Ile His Ser Phe Arg Gln Ser Tyr Glu Ala Lys Ser
113011351140
Ala His Ala His Gln Thr Phe Phe Gln Glu Phe Glu Glu Leu Lys
114511501155
Glu Val Gly Lys Asp Gln Pro Arg Leu Glu Ala Glu His Pro Asp
116011651170
Asn Ile Ile Lys Asn Arg Tyr Pro His Val Leu Pro Tyr Asp His
117511801185
Ser Arg Val Arg Leu Thr Gln Leu Pro Gly Glu Pro His Ser Asp
119011951200
Tyr Ile Asn Ala Asn Phe Ile Pro Gly Tyr Ser His Thr Gln Glu
120512101215
Ile Ile Ala Thr Gln Gly Pro Leu Lys Lys Thr Leu Glu Asp Phe
122012251230
Trp Arg Leu Val Trp Glu Gln Gln Val His Val Ile Ile Met Leu
123512401245
Thr Val Gly Met Glu Asn Gly Arg Val Leu Cys Glu His Tyr Trp
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Gly Ser Leu Leu Pro Pro Pro Asp Tyr Asn Gln Asn Ser Ile Val
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Asn Gly Leu Pro Arg Ala Gly Lys Trp Pro Ala Pro Cys
170017051710
权利要求
1.用于在哺乳动物中治疗或预防糖尿病的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
2.权利要求1的方法，其中所述糖尿病为1型糖尿病。
3.权利要求1的方法，其中所述糖尿病为2型糖尿病。
4.权利要求1到3羧化不足的方法，其中所述未羧化/羧化不足的骨钙蛋白以有效产生下述效果的量施用，所述效果选自葡萄糖耐量提高、胰岛素产生提高、胰岛素敏感性提高、胰腺β-细胞增殖提高以及脂连蛋白血清水平提高。
5.用于在哺乳动物中治疗或预防血管病症的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
6.权利要求5的方法，其中所述血管病症是动脉粥样硬化。
7.权利要求5或6的方法，其中所述未羧化/羧化不足的骨钙蛋白以有效产生下述效果的量施用，所述效果选自氧化磷脂减少、动脉粥样硬化斑块消退、炎性蛋白的生物合成减少、血浆胆固醇减少、血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖和数量减少，以及动脉斑块的厚度减小。
8.用于治疗或预防肥胖症的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
9.权利要求8的方法，其中所述未羧化/羧化不足的骨钙蛋白以有效产生下述效果的量施用，所述效果选自葡萄糖耐量提高、胰岛素产生提高、胰岛素敏感性提高、胰腺β-细胞增殖提高，以及脂连蛋白血清水平提高。
10.用于治疗或预防葡萄糖不耐受的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
11.用于治疗或预防代谢综合征的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
12.权利要求10或11的方法，其中所述未羧化/羧化不足的骨钙蛋白以有效产生下述效果的量施用，所述效果选自葡萄糖耐量提高、胰岛素产生提高、胰岛素敏感性提高、胰腺β-细胞增殖提高，以及脂连蛋白血清水平提高。
13.权利要求1到12中任一项的方法，其中所述哺乳动物是人。
14.权利要求1到12中任一项的方法，其中所述未羧化/羧化不足的骨钙蛋白与用于预防骨丢失的药剂组合施用。
15.权利要求1到12中任一项的方法，其中所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白中对应于成熟人骨钙蛋白17、21和24位的位置上的至少一个谷氨酸未被羧化。
16.权利要求1到12中任一项的方法，其中所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白中对应于成熟人骨钙蛋白17、21和24位的位置上的所有三个谷氨酸均未被羧化。
17.权利要求1到12中任一项的方法，其中所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白是羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的制备物，其中该制备物中对应于成熟人骨钙蛋白17、21和24位的位置上的全部Glu残基中多于约20％未被羧化。
18.权利要求1到12中任一项的方法，其中将所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白以最高序列同源性进行比对时，该羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白共有至少80％的氨基酸序列同一性。
19.权利要求1到12中任一项的方法，其中将所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白以最高序列同源性进行比对时，该羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白共有至少85％的氨基酸序列同一性。
20.权利要求1到12中任一项的方法，其中将所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白以最高序列同源性进行比对时，羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白共有至少90％的氨基酸序列同一性。
21.权利要求1到12中任一项的方法，其中所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白是选自以下的多肽
(a)包含缺失C端最后10个氨基酸的成熟人骨钙蛋白的片段；
(b)包含缺失N端前10个氨基酸的成熟人骨钙蛋白的片段；
(c)包含SEQ ID NO2中62-90位氨基酸的片段；
(d)包含成熟人骨钙蛋白中1-36位氨基酸的片段；和
(e)上述的变体。
22.羧化不足/未羧化的骨钙蛋白在制备用于治疗性或预防性治疗选自以下的病症的药物中的用途糖尿病、血管病症和肥胖症、葡萄糖不耐受和代谢综合征。
23.根据权利要求22的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述糖尿病是1型糖尿病。
24.根据权利要求22的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述糖尿病是2型糖尿病。
25.根据权利要求22的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述病症是肥胖症。
26.根据权利要求22的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述病症是糖尿病，且所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白产生选自以下的效果葡萄糖耐量提高、胰岛素产生提高、胰岛素敏感性提高、胰腺β-细胞增殖提高，以及脂连蛋白血清水平提高。
27.根据权利要求22的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述病症是血管病症。
28.根据权利要求27的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述血管病症是动脉粥样硬化。
29.根据权利要求27的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白产生选自以下的效果氧化磷脂减少、动脉粥样硬化斑块消退、炎性蛋白的生物合成减少、血浆胆固醇减少、血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖和数量减少，以及动脉斑块的厚度减小。
30.根据权利要求22的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述糖尿病是葡萄糖不耐受。
31.根据权利要求22的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述糖尿病是代谢综合征。
32.根据权利要求30或31的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白产生选自以下的效果葡萄糖耐量提高、胰岛素产生提高、胰岛素敏感性提高、胰腺β-细胞增殖提高，以及脂连蛋白血清水平提高。
33.根据权利要求22到32中任一项的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其与用于预防骨丢失的药剂相组合。
34.根据权利要求22到32中任一项的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白中对应于成熟人骨钙蛋白17、21和24位的位置上的至少一个谷氨酸未被羧化。
35.根据权利要求22到32中任一项的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白中对应于成熟人骨钙蛋白17、21和24位的位置上的所有三个谷氨酸均未被羧化。
36.根据权利要求22到32中任一项的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中羧化不足/未羧化的骨钙蛋白是羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的制备物，其中该制备物中对应于成熟人骨钙蛋白17、21和24位位置上的全部Glu残基中多于约20％未被羧化。
37.根据权利要求22到32中任一项的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中将所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白以最高序列同源性进行比对时，该羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白共有至少80％的氨基酸序列同一性。
38.根据权利要求22到32中任一项的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中将所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白以最高序列同源性进行比对时，该羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白共有至少85％的氨基酸序列同一性。
39.根据权利要求22到32中任一项的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中将所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白以最高序列同源性进行比对时，该羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白共有至少90％的氨基酸序列同一性。
40.根据权利要求22到32中任一项的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中与羧化的骨钙蛋白相比，所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与羟基磷灰石的结合降低。
41.根据权利要求22到32中任一项的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白是选自以下的多肽
(a)包含缺失C端最后10个氨基酸的成熟人骨钙蛋白的片段；
(b)包含缺失N端前10个氨基酸的成熟人骨钙蛋白的片段；
(c)包含SEQ ID NO2中62-90位氨基酸的片段；
(d)包含成熟人骨钙蛋白1-36位氨基酸的片段；和
(e)上述的变体。
42.羧化不足/未羧化的骨钙蛋白在治疗病症中的用途，所述病症选自糖尿病、血管病症和肥胖症、葡萄糖不耐受和代谢综合征。
43.根据权利要求42的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述糖尿病是1型糖尿病。
44.根据权利要求42的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述糖尿病是2型糖尿病。
45.根据权利要求42的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述病症是肥胖症。
46.根据权利要求42的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述病症是糖尿病，且所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白产生选自以下的效果葡萄糖耐量提高、胰岛素产生提高、胰岛素敏感性提高、胰腺β-细胞增殖提高，以及脂连蛋白血清水平提高。
47.根据权利要求42的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述病症是血管病症。
48.根据权利要求47的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述血管病症是动脉粥样硬化。
49.根据权利要求47的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白产生选自以下的效果氧化磷脂减少、动脉粥样硬化斑块消退、炎性蛋白的生物合成减少、血浆胆固醇减少、血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖和数量减少，以及动脉斑块的厚度减小。
50.根据权利要求42的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述糖尿病是葡萄糖不耐受。
51.根据权利要求42的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述糖尿病是代谢综合征。
52.根据权利要求50或51的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白产生选自以下的效果葡萄糖耐量提高、胰岛素产生提高、胰岛素敏感性提高、胰腺β-细胞增殖提高，以及脂连蛋白血清水平提高。
53.根据权利要求42到52中任一项的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其与用于预防骨丢失的药剂相组合。
54.根据权利要求42到52中任一项的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白中对应于成熟人骨钙蛋白17、21和24位的位置上的至少一个谷氨酸未被羧化。
55.根据权利要求42到52中任一项的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白中对应于成熟人骨钙蛋白17、21和24位的位置上的所有三个谷氨酸均未被羧化。
56.根据权利要求42到52中任一项的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中羧化不足/未羧化的骨钙蛋白是羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的制备物，其中该制备物中对应于成熟人骨钙蛋白17、21和24位的位置上的全部Glu残基中多于约20％未被羧化。
57.根据权利要求42到52中任一项的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中将所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白以最高序列同源性进行比对时，羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白共有至少80％的氨基酸序列同一性。
58.根据权利要求42到52中任一项的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中将所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白以最高序列同源性进行比对时，该羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白共有至少85％的氨基酸序列同一性。
59.根据权利要求42到52中任一项的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中将所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白以最高序列同源性进行比对时，该羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白共有至少90％的氨基酸序列同一性。
60.根据权利要求42到52中任一项的羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白是选自以下的多肽
(a)包含缺失C端最后10个氨基酸的成熟人骨钙蛋白的片段；
(b)包含缺失N端前10个氨基酸的成熟人骨钙蛋白的片段；
(c)包含SEQ ID NO2中62-90位氨基酸的片段；
(d)包含成熟人骨钙蛋白中1-36位氨基酸的片段；和
(e)上述的变体。
61.诊断有发生与能量代谢和OST-PTP信号转导途径相关疾病风险之患者的方法，所述方法包括(i)测定来自该患者的生物样品中羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与总骨钙蛋白的比值；和(ii)将该比值与标准比值进行比较；其中，如果患者的比值低于标准比值，则该患者有发生与OST-PTP信号转导途径相关之疾病的风险。
62.权利要求61的方法，其中与OST-PTP信号转导途径相关的疾病选自代谢综合征、葡萄糖不耐受、1型糖尿病、2型糖尿病、动脉粥样硬化和肥胖症。
63.权利要求61或62任一项的方法，其中与OST-PTP信号转导相关之疾病的特征是胰岛素产生降低、胰岛素敏感性降低、葡萄糖耐量降低和/或脂肪量提高。
64.权利要求61-63中任一项的方法，其中所述生物样品是血。
65.权利要求61-63中任一项的方法，其中所述标准比值选自5％-10％、10％-15％、15％-20％、20％-25％、25％-30％和30％-35％。
66.用于在哺乳动物中治疗或预防糖尿病的药物组合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
67.权利要求66的药物组合物，其中所述糖尿病是1型糖尿病。
68.权利要求66的药物组合物，其中所述糖尿病是2型糖尿病。
69.权利要求66到68的药物组合物，其中所述未羧化/羧化不足的骨钙蛋白的量是有效产生下述效果的量，所述效果选自葡萄糖耐量提高、胰岛素产生提高、胰岛素敏感性提高、胰腺β-细胞增殖提高，以及脂连蛋白血清水平提高。
70.用于在哺乳动物中治疗或预防血管病症的药物组合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
71.权利要求70的药物组合物，其中所述血管病症是动脉粥样硬化。
72.权利要求70或71的药物组合物，其中所述未羧化/羧化不足的骨钙蛋白量是有效产生下述效果的量，所述效果选自氧化磷脂减少、动脉粥样硬化斑块消退、炎性蛋白的生物合成减少、血浆胆固醇减少、血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖和数量减少，以及动脉斑块的厚度减小。
73.用于治疗或预防肥胖症的药物组合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
74.权利要求73的药物组合物，其中所述未羧化/羧化不足的骨钙蛋白的量是有效产生下述效果的量，所述效果选自葡萄糖耐量提高、胰岛素产生提高、胰岛素敏感性提高、胰腺β-细胞增殖提高，以及脂连蛋白血清水平提高。
75.用于治疗或预防葡萄糖不耐受的药物组合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
76.用于治疗或预防代谢综合征的药物组合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
77.权利要求75或76的药物组合物，其中所述未羧化/羧化不足的骨钙蛋白的量是有效产生下述效果的量，所述效果选自葡萄糖耐量提高、胰岛素产生提高、胰岛素敏感性提高、胰腺β-细胞增殖提高，以及脂连蛋白血清水平提高。
78.权利要求66到77中任一项的药物组合物，其中所述哺乳动物是人。
79.权利要求66到77中任一项的药物组合物，其中所述未羧化/羧化不足的骨钙蛋白与用于预防骨丢失的药剂相组合。
80.权利要求66到77中任一项的药物组合物，其中所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白中对应于成熟人骨钙蛋白17、21和24位的位置上的至少一个谷氨酸未被羧化。
81.权利要求66到77中任一项的药物组合物，其中所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白中对应于成熟人骨钙蛋白17、21和24位的位置上的所有三个谷氨酸均未被羧化。
82.根据权利要求66到77中任一项的药物组合物，其中所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白是羧化不足/未羧化的骨钙蛋白的制备物，其中该制备物中对应于成熟人骨钙蛋白17、21和24位的位置上的全部Glu残基中多于约20％未被羧化。
83.根据权利要求66到77中任一项的药物组合物，其中将所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白以最高序列同源性进行比对时，该羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白共有至少80％的氨基酸序列同一性。
84.根据权利要求66到77中任一项的药物组合物，其中将所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白以最高序列同源性进行比对时，该羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白共有至少85％的氨基酸序列同一性。
85.根据权利要求66到77中任一项的药物组合物，其中将所述羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白针对最高序列同源性进行比对时，该羧化不足/未羧化的骨钙蛋白与成熟人骨钙蛋白共有至少90％的氨基酸序列同一性。
86.权利要求66到77中任一项的药物组合物，其中羧化不足/未羧化的骨钙蛋白是选自以下的多肽
(a)包含缺失C端最后10个氨基酸之成熟人骨钙蛋白的片段；
(b)包含缺失N端前10个氨基酸之成熟人骨钙蛋白的片段；
(c)包含SEQ ID NO2中62-90位氨基酸的片段；
(d)包含成熟人骨钙蛋白中1-36位氨基酸的片段；和
(e)上述的变体。
87.用于在哺乳动物中治疗或预防与能量代谢相关之病症的方法，包括施用选自以下的组合物未羧化/羧化不足的骨钙蛋白、降低OST-PTP磷酸化酶活性的药剂、降低γ-羧化酶活性的药剂、增加未羧化/羧化不足的骨钙蛋白的药剂，以及使骨钙蛋白脱羧的药剂。
88.根据权利要求66的方法，其中与能量代谢相关的病症选自代谢综合征、葡萄糖耐量、糖尿病、血管疾病和肥胖症。
89.权利要求65到88的方法，其中所述组合物以产生下述效果的量施用，所述效果选自葡萄糖耐量提高、胰岛素产生提高、胰岛素敏感性提高、胰腺β-细胞增殖提高、脂连蛋白血清水平提高、氧化磷脂减少、动脉粥样硬化斑块消退、炎性蛋白的生物合成减少、血浆胆固醇减少、血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖和数量减少，以及动脉斑块的厚度减小。
90.用于在哺乳动物中提高胰岛素敏感性的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
91.用于在哺乳动物中提高胰岛素产生的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
92.用于在哺乳动物中提高葡萄糖耐量的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
93.用于在哺乳动物中提高胰腺β-细胞增殖的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
94.用于在哺乳动物中提高脂连蛋白血清水平的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
95.权利要求66到94中任一项的方法，其中所述哺乳动物是人。
96.选自未羧化/羧化不足的骨钙蛋白、降低OST-PTP磷酸化酶活性的药剂、降低γ-羧化酶活性的药剂、增加未羧化/羧化不足的骨钙蛋白的药剂以及使骨钙蛋白脱羧之药剂的药剂用于制备在哺乳动物中治疗或预防与能量代谢相关之病症的药物的用途。
97.根据权利要求96的药剂的用途，其中所述与能量代谢相关的病症选自代谢综合征、葡萄糖耐量、糖尿病、血管疾病和肥胖症。
98.根据权利要求96到97的药剂的用途，其中所述药剂以产生下述效果的量施用，所述效果选自葡萄糖耐量提高、胰岛素产生提高、胰岛素敏感性提高、胰腺β-细胞增殖提高、脂连蛋白血清水平提高、氧化磷脂减少、动脉粥样硬化斑块消退、炎性蛋白的生物合成减少、血浆胆固醇减少、血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖和数量减少，以及动脉斑块的厚度减小。
99.有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白用于制备在哺乳动物中提高胰岛素敏感性的药物的用途。
100.有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白用于制备在哺乳动物中提高胰岛素产生的药物的用途。
101.有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白用于制备在哺乳动物中提高葡萄糖耐量的药物的用途。
102.有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白用于制备在哺乳动物中提高胰腺β-细胞增殖的药物的用途。
103.有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白用于制备在哺乳动物中提高脂连蛋白血清水平的药物的用途。
104.根据权利要求96到103中任一项的用途，其中所述哺乳动物是人。
105.选自未羧化/羧化不足的骨钙蛋白、降低OST-PTP磷酸化酶活性的药剂、降低γ-羧化酶活性的药剂、增加未羧化/羧化不足的骨钙蛋白的药剂以及使骨钙蛋白脱羧之药剂的药剂作为在哺乳动物中治疗或预防能量代谢相关病症的药物的用途。
106.根据权利要求105的药剂的用途，其中所述与能量代谢相关的病症选自代谢综合征、葡萄糖耐量、糖尿病、血管疾病和肥胖症。
107.根据权利要求104到105的药剂的用途，其中所述药剂以产生下述效果的量施用，所述效果选自葡萄糖耐量提高、胰岛素产生提高、胰岛素敏感性提高、胰腺β-细胞增殖提高、脂连蛋白血清水平提高、氧化磷脂减少、动脉粥样硬化斑块消退、炎性蛋白的生物合成减少、血浆胆固醇减少、血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖和数量减少，以及动脉斑块的厚度减小。
108.有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白作为在哺乳动物中提高胰岛素敏感性的药物的用途。
109.有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白作为在哺乳动物中提高胰岛素生产的药物的用途。
110.有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白作为在哺乳动物中提高葡萄糖耐量的药物的用途。
111.有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白作为在哺乳动物中提高胰腺β-细胞增殖的药物的用途。
112.有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白作为在哺乳动物中提高脂连蛋白血清水平的药物的用途。
113.根据权利要求105到112中任一项的用途，其中所述哺乳动物是人。
114.用于在哺乳动物中治疗或预防能量代谢相关之病症的药物组合物，包含选自以下的组合物未羧化/羧化不足的骨钙蛋白、降低OST-PTP磷酸化酶活性的药剂、降低γ-羧化酶活性的药剂、增加未羧化/羧化不足的骨钙蛋白的药剂，以及使骨钙蛋白脱羧的药剂。
115.根据权利要求114的药物组合物，其中所述与能量代谢相关的病症选自代谢综合征、葡萄糖耐量、糖尿病、血管疾病和肥胖症。
116.权利要求114到115的药物组合物，其中该药剂的量是产生下述效果的量，所述效果选自葡萄糖耐量提高、胰岛素产生提高、胰岛素敏感性提高、胰腺β-细胞增殖提高、脂连蛋白血清水平提高、氧化磷脂减少、动脉粥样硬化斑块消退、炎性蛋白的生物合成减少、血浆胆固醇减少、血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖和数量减少，以及动脉斑块的厚度减小。
117.用于在哺乳动物中提高胰岛素敏感性的药物组合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
118.用于在哺乳动物中提高胰岛素产生的药物组合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
119.用于在哺乳动物中提高葡萄糖耐量的药物组合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
120.用于在哺乳动物中提高胰腺β-细胞增殖的药物组合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
121.用于在哺乳动物中提高脂连蛋白血清水平的药物组合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨钙蛋白。
122.权利要求114到121中任一项的方法，其中所述哺乳动物是人。
全文摘要
本发明涉及用于治疗和诊断能量代谢及OST-PTP信号转导途径(包括γ-羧化酶、骨钙蛋白和脂连蛋白)相关病症的方法和组合物。这些病症包括但不仅限于代谢综合征、葡萄糖不耐受、1型和2型糖尿病、动脉粥样硬化和肥胖症。
文档编号A61K38/00GK101610780SQ200780042023
公开日2009年12月23日 申请日期2007年9月13日 优先权日2006年9月13日
发明者杰拉尔德·卡尔桑蒂, 帕特里夏·F·迪西 申请人:纽约市哥伦比亚大学托管会