熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷在制备升高白细胞和/或血小板药物中的应用的制作方法

专利名称：：熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷在制备升高白细胞和/或血小板药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明属于药物
技术领域：
。具体地说，是涉及熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷在制备升高白细胞和/或血小板药物中的应用。
背景技术：
：白细胞具有吞噬能力，能消灭外来的病原菌，保卫身体的健康，所以人们将它誉为身体的卫士。正常人血液循环中的白细胞为400010000/立方毫米。白细胞中最重要的是具有防卫功能的中性粒细胞，占总数的50-70%。一般而言，白细胞减少最常见最主要的是指粒细胞减少。当白细胞总数低于4000/立方毫米时，此时肌体抵抗力低下，极其容易引起细菌感染，严重时威胁生命。血小板是血液中的有形成分之一，人血液中血小板的数量变化很大，正常值为1530万个/微升。血小板具有止血功能、吞噬病毒、细菌和其他颗粒物的功能，并能营养和支持毛细血管内皮细胞，使毛细血管的脆性减少。如果血小板数量显著减少或功能有障碍，将会导致出血倾向。白细胞和/或血小板减少症是临床常见的病症，包括原发性、并发性和继发性。除先天性的白细胞和/或血小板减少症外，引起的病因是多方面的。疾病、药物、放射线、感染、毒素、化学物质、手术治疗、环境因素等都有可能造成白细胞和/或血小板的减少。引起白细胞和/或血小板减少症的疾病包括造血系统疾病、免疫系统疾病、感染性疾病、系统性红斑狼疮、过敏性休克、血小板减少性紫癜等。骨髓增生异常，再生障碍性贫血症都可能伴发白细胞和/或血小板减少症。而骨髓移植、肝肾移植也直接导致白细胞和/或血小板的减少。特别对于癌症病人来说，放化疗常会造成骨髓造血的抑制，表现出外周白细胞和血小板明显降低。目前治疗各类白细胞和/或血小板减少症的药物还不多。基因工程产品粒细胞集落刺激因子GCSF、粒细胞巨噬集落刺激因子GMCSF升高白细胞的作用比较显著，中药地榆升白片也得到了广泛应用，但西药有显著疗效的药物则比较少见，所以在临床上，对能治疗白细胞和/或血小板减少症疗效明确、服用方便、易于质量控制、合成易得的西药还有广泛的需求。五环三萜类化合物是天然分布的三萜类化合物中的一种，被发现具有广泛的生理活性。熊果酸(英文名ursolicacid)以及齐墩果酸(oleanolicacid)就是其中最有代表性的化合物，在植物界中广泛存在，可以大量获得。齐墩果酸被用于肝病的治疗药物已经有多年的历史。两者除了对肝脏具有有益作用，还被报道了其他的多种活性；Lin等人在文章Effectsofoleanolicacidandursolicacidoninhibitingtumorgrowthandenhancingtherecoveryofhematopoieticsystempostirradiationinmice(Cancerletter7-13，111，1997)中研究了熊果酸、齐墩果酸对抑制肿瘤细胞生长的作用，并发现对放疗模型引起的小鼠白细胞减少症状，熊果酸、齐墩果酸在25，50，100mg/kg剂量组腹腔给药时，具有升高白细胞的作用，而且高剂量给药组比较明显，其中熊果酸作用强于齐墩果酸。曰本专利JP7048260也公开了熊果酸具有升高红细胞、血小板的作用。中国专利CN03135776公开了一类从中药地榆中分离得到，主要由19-羟基熊果酸(又名坡模醇酸，英文名pomolicadd)为苷元的三萜皂苷具有升高白细胞和/或血小板的显著作用，由于中药地榆中存在系列结构类似、极性相近的此类皂苷，且含量有限，批量分离纯化出有效单体供药用有一定的困难，加上坡模醇酸或其苷本身在天然产物中的分布不多，因此从分离提取的角度不容易大量获取；而从合成的角度而言，从容易获得的熊果酸原料出发，19-羟基不容易简便地转化得到，因而对其开发使用存在一定的局限。迄今为止，尚未见到熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷在制备升高白细胞和/或血小板药物的应用报道。本发明创造性地利用在天然产物中广泛分布且价廉易得的熊果酸、齐墩果酸为原料，通过结构修饰引入了亲水基团，即单糖或寡糖基，发现所得到的皂苷在改善母核水溶性的同时，药理实验证明具有显著升高白细胞和/或血小板活性作用。与中药地榆中分离得到的坡模醇酸皂苷相比，不仅药理活性较强，还具有合成易得、适合工业生产、成本低廉等优势。
发明内容本发明的技术方案是提供了通式(I)的熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷或其药学上可接受的盐或酯在制备升高白细胞和/或血小板药物中的用途，通式(I)为其中，Rl为氢、葡萄糖基，阿拉伯糖基，鼠李糖基，半乳糖基，木糖基，核糖基，来苏糖基、甘露糖基、阿洛糖基、阿卓糖基、古洛糖基、果糖基、山梨糖基、鸡纳糖基、夫糖基、阿洛酮糖基、2-氨基葡糖基、半乳糖醛酸基、葡萄糖醛酸基，或由这些单糖2-5个组成的寡糖基；R2为氢，葡萄糖基，阿拉伯糖基，鼠李糖基，半乳糖基，木糖基，核糖基，来苏糖基、甘露糖基、阿洛糖基、阿卓糖基、古洛糖基、果糖基、山梨糖基、鸡纳糖基、夫糖基、阿洛酮糖基、2-氨基葡糖基、半乳糖醛酸基、葡萄糖醛酸基，或由这些单糖2-5个组成的寡糖基；且R1、R2不同时为氢。R3为CH"R4为H时为熊果酸皂苷，见通式(II):进一步地，通式II中，Gl、G2代表相同的单糖或寡糖时，称为双糖基化熊果酸皂苷。Gl、G2为氢或者单糖或寡糖，且G1不同于G2时，称为非双糖基化熊果酸皂苷。其中，所述的糖基为葡萄糖基、阿拉伯糖基、鼠李糖基、半乳糖基、木糖基、葡萄糖醛酸基，或由这些单糖2-5个组成的寡糖基。进一步地，通式II中双糖基化熊果酸皂苷选自3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯、3-0-(a-L-吡喃鼠李糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃鼠李糖)酯、3-0-(0-0-吡喃葡萄糖)熊果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯。进一步地，通式II中非双糖基化熊果酸皂苷选自3_0-(e-D-吡喃半乳糖)熊果酸、3一0(a-L-吡喃鼠李糖)熊果酸、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸、3-0-(e-D-吡喃葡萄糖)熊果酸、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖滩果酸-28-0(P-纤维素二糖)酯、熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯。更进一步地，通式II中熊果酸皂苷优选自3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸及其钠盐、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯、3-0(p-0-吡喃葡萄糖)熊果酸-28-0-(3-D-吡喃葡萄糖)酯。更进一步地，通式II中化合物进一步优选自3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯。本发明还提供了上述通式II熊果酸皂苷在制备升高白细胞和血小板药物中的用途。通式(I)所述的熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷的用途，其中，R3为H、R4为CH3时，为齐墩果酸皂苷，见通式III:III其中，G3、G4代表氢、葡萄糖基、阿拉伯糖基、鼠李糖基、半乳糖基、木糖基、葡萄糖醛酸基，或由这些单糖2-5个组成的寡糖基，且G3、G4不同时为氢。进一步地，通式(III)中化合物选自3-0-(P-D-吡喃葡萄糖醛酸)齐墩果酸、3-0-(P-D-吡喃木糖)齐墩果酸、3-0-(a-L-吡喃半乳糖)齐墩果酸、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)齐墩果酸及其钠盐、3-0-(e-D-吡喃葡萄糖)齐墩果酸及其钠盐、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)齐墩果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯、3-0-(3-D-吡喃葡萄糖)齐墩果酸-28-0-(e-D-吡喃葡萄糖)酯、齐墩果酸-28-0-(P-龙胆二糖)酯、齐墩果酸-28-0-(3-D-吡喃葡萄糖)酯。更进一步地，通式m中化合物选自3-0(a-L-吡喃阿拉伯糖)齐墩果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯、3-0-(P-D-吡喃葡萄糖)齐墩果酸-28-0-(3-D-吡喃葡萄糖)酯。本发明还提供了上述通式III齐墩果酸皂苷在制备升高血小板药物中的用途。其中，所述的升高白细胞和/或血小板药物应用于哺乳动物原发性、并发性或继发性白细胞和/或血小板减少症的防治。还可将升高白细胞和/或血小板药物单独或合并使用于防治感染性疾病。其中，所述的白细胞和/或血小板减少症是由疾病、药物、放射线、感染、毒素、化学物质、手术治疗、环境因素引起。其中，引起白细胞和/或血小板减少症的疾病包括造血系统疾病、免疫系统疾病、感染性疾病、系统性红斑狼疮、过敏性休克、血小板减少性紫癜以及癌症病人放化疗。本发明提供了一种具有升高人白细胞和/或血小板作用的药物组合物，它是由通式(1)、(11)、(III)所述的化合物的任意一种，或其药学上可接受的盐、盐的水合物、溶剂化物、酯以及前体药物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或载体制备成的药剂。进一步地，所述的药剂是片剂、胶囊、丸剂、注射剂、缓释制剂、控释制剂以及各种微粒给药系统。根据体内代谢的一般规律，以及药物化学领域的技术人员所能理解的常识，通式i-in中的化合物可以通过酯键连接衍生，而通式i-m中具有酸、碱根的化合物还可被制备成药学上可被接受的盐。这些药学上可以接受的盐、盐的水合物、溶剂化物或者酯，特别是在体内可代谢成上述通式i-m中化合物在用于制备升高白细胞和/或血小板药物中的应用时也被本专利所覆盖。以及含有通式i-m中的任一一种化合物的中药、植物药及其有效部位在用于制备升高白细胞和/或血小板药物中的应用时也被本专利所覆盖。更进一步地，包含如通式i-in中的任一化合物以及药学上可接受的盐、盐的水合物、溶剂化物、酯以及前体药物、含有通式i-m中的任一一种化合物的中药、植物药及其有效部位与药学上可接受的载体组成的药物组合物，该药用组合物可以是片剂、胶囊、丸剂、注射剂、缓释制剂、控释制剂以及各种微粒给药系统，在用于制备升高白细胞和/或血小板药物中的应用时也被本专利所覆盖。具体实施方式下面用实施例进一步说明本专利，但这并不意味着对本发明的限制。本发明采用的合成原料熊果酸、齐墩果酸均为市售商品。实施例1:3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯的制备熊果酸lg(2.2mmol)在20ml干燥CH2C12溶液中，N2气氛下，与阿拉伯糖糖基化给体2，3，4-三-0-苯甲酰基-e-L-吡喃阿拉伯糖基三氯乙酰亚胺酯3.4g(5.7mmol，2.6叫)(该化合物合成方法参考J.Org.Chem.1999,64,7265-7266)，粉末状4埃分子筛1.5g混合后,于-10。C滴加三氟甲磺酸三甲基硅醇酯TMSOTf(0.03ml，0.15eq)，反应逐渐升温到室温，搅拌过夜，加入少量Et3N(0.3ml)淬灭反应，过滤，滤液浓縮后，硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯体系(4/1一2/1)洗脱，得到双糖基化中间体1.47g(l.lmmo1)，将其溶解于甲醇/二氯甲烷(2/l，30ml)并加入378mgNaOMe(7mmoI,6.4eq)，室温反应4小时，酸性树脂DowexlT中和后，过滤浓縮，硅胶柱层析(氯仿/甲醇10/1-6/1)得到白色粉末0.61g，总收率为39%。[a]^-十29.0(C0.72，MeOH)IR(KBr)cm":3330,2958,1724,1068，926,852!HNMR(600MHz，CD3OD):Sppm5.40(d，J=5.8Hz，lH，H-r),5.28(t,lH，H-12)，4.30(d,J=6.8Hz，lH,H-l')，3.81-3.90(m，4H),3.67-3.71(m，2H),3.51-3.60(m,4H)，3.15(dd,J=ll,8，4.4Hz,lH，H-3)，2.29(d，J=11.6Hz，lH，H画18),1.13，1.06，0.98,0.86，0.84(seach,3Heach,MeX5)，0.97(3H,d,J=4.0Hz)，0.91(3H,d,J=6.4Hz)，0.79(d，J=ll,6Hz，lH，H-5)13CNMR(150MHz,CD3OD):Sppm176,5(C-28),137.9(C-13),125.9(C-12)，105.7(C-r)，94.4(C画r)，89.3(C-3)，72.9，72.2,71.4，69.9，68.1,67.0,64.9(d),55.6，52.7，48.2,48.0，41.9,39.6,39.0,38.8(d),38.6，36.5,36.2,32.9，30.3,27.9,27.2，25.7，23.7，23.0，22.6，20.1，17,9,16.5，16.2，15.6，14.7ESI-MS(m/z):743.3[M+Na〗+实施例2:3-0-(a-L-吡喃鼠李糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃鼠李糖)酯的制备类似实施例l的方法，2，3，4-三-苯甲酰基-e-L-吡喃鼠李糖基三氯乙酰亚胺酯为糖基化给体，可得到3-0(a-L-吡喃鼠李糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃鼠李糖)酯。[a]2D°=-11.8(C0.17,DMF)!HNMR(600MHz，d5-pyridine):Sppm6.75(1H,s),5.46(1H，m),5.32(1H，s),4.56-4,57(2H,m)，4.52(1H,dd,J=9.12，3.2Hz),4.47(1H，dd,J=8.9,3.2Hz),4.38(1H,t，J=9.3Hz)，4.29-4.34(3H,m),3.17(H,dd，J=11.8，4.44Hz),2.44(1H,d，J=11.3Hz)，1.81(1H,m),L70(3H，d,J=6Hz),L67(3H,d，J=6Hz)，U7(3H,s),1.08(1H，m),0.93(3H，s)，0.92(6H，s)，0.90(3H,d，J=6.4Hz)，0.88(3H,d，J=6.4Hz)，0.87(3H,s)，0'70(1H,d,J=11.7Hz)"CNMR(150MHz,CD3OD):Sppm175.6(C-28)，138.1(C-13)，126.1(C-12),103.0(C-1')，93.6(C-r)，89.0(C-3),72.7，72.0，71.2,71.1(d),71.0，70.0，68.5，55.3,53.1，48.5,48.2,41.9,40.0,39.5,39.0,38.6，38.4，36.7，36.5，33,0，30.2，27.6，27.4，25.2，23.8，23.0，22.7，20.0，18.0，16.8,16.4,16.1，15.6，14.6ESI-MS(m/z):771[M+Na]+实施例3:3-0-(3-0』比喃葡萄銜熊果酸-28-0-(e-D-吡喃葡萄糖)酯的制备类似实施例1的方法，糖基化给体为2，3，4，6-四-0-苯甲酰-a-D-葡萄糖基三氯乙酰亚胺酯，可得到3-0-(P-0-吡喃葡萄糖)熊果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯。[a〗2D°=+21.7(C1.02，MeOH)IR(KBr)cm":3417，2925，1727,1672，1456，1377,1226，1075，1027，896，831iHNMR(600MHz,CD3OD):5ppm5.33(d,J=8.3Hz，lH，H-l")，5.24(t,1H,H-12),4.31(d，J=7.8Hz，lH，H-r),3.77-3.84(m,2H)，3.65誦3.68(m，2H),3.28—3.39(m,7H)，3.16画3.18(m，2H),2.22(d，J=11.2Hz，1H，H-18),1.12,1.05,0.96,0.84，0.83(seach，3Heach,MeX5)，0.88(d,J=6.4Hz,3H)，0.78(d，J=l1.6Hz，lH,H-5)13CNMR(150MHz,CD3OD):Sppm176.5(C-28)，137.7(C-13)，125.9(C-12),105.3(C画1')，94.3(C-1"),89.4(C-3)，77.2，76.9(d),76.3，74,3，72.5，70.3,69.8,61.4，61.1,55.7，52.8，48,7,48.0,41.9,39.6,39.0,38.9,38.8,38.6,36.4,36.1,32.9,30.3,27.9,27.2，25.7,23.9，23.0,22,6,20.1,17.9，16.5，16.2,15.7，14,8ESI國MS(m/z):803[M+Na]+实施例4:熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯的制备将熊果酸(195mg,0.43mmo1)与2，3，4-三-0-苯甲酰基-L-吡喃阿拉伯糖溴苷(316mg,1.4eq)混合于CH2C12〃_K(1/1，10ml)体系中，加入K2C03(151mg，2.5叫)及Bu4NBr(56mg,0.4eq)，加热回流至反应完全，加入20ml012(:12，分出水相，有机相用水及盐水洗涤，干燥，旋千，残余物直接用于下步反应。将上述中间体溶于CH2CyMeOH(5ml,1/1)体系中，与甲醇钠(130mg,2.5mmo1)室温反应过夜，加入水淬灭后，用乙酸乙酯萃取多次，有机相合并后水洗，干燥后，旋干上硅胶柱，CHCVMeOH体系洗脱得到200mg白色粉末。收率79%。[《=+43.0(C0.97，MeOH)!HNMR(600固z，CD3OD):Sppm5.38(lH，d，J=5.8Hz)，5.26(lH,t，J=3.6Hz),3.85-3.88(2H，m)，3.64國3.69(2H，m),3.54-3.56(lH,m),3.14(lH，dd，J=11.6,4.5Hz),2,26(lH，d，J=11.0Hz)，Ul(3H,s)，0.97(3H，s)，0.96(3H，d，J=5.9Hz)，0.95(3H,s)，0.88(3H，d，J-6.5Hz)，0.82(3H,s),0.77(3H，s),0.74(lH,d，J=11.8Hz)13CNMR(150MHz，CD3OD):Sppml76,5,137.9,125.8,94.4，78.3,72.2，69,9，67.0，64.9,55.4，52.7，48.4，41.9，39.6,39.0,38.8,38.7，38.4,36.7,36.2，33.0,30.3,29.2,27.9，27.4，26.5，23.7，23.0,22.6，20.1,18.1，16.5，16.2,15.0,14.7ESI掘(m/z):611.0[M+Na]+实施例5:3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸及其钠盐的制备熊果酸(lg,2.2mmo1),K2C03(0.6g)，氯节0.3ml，混合于10mlDMF中，10(fC加热反应直到原料反应完全，冷却后过滤，滤饼用DMF洗涤，合并有机相后，将其到入100ml水中，过滤得到白色粗品，硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯体系洗脱得到熊果酸苄酯1.09g(2.0mmo1)。将上述干燥过的中间体，糖基给体2，3，4-三-0-苯甲酰基-P-L-卩比喃阿拉伯糖基三氯乙酰亚胺酯1.7g(2.8mmol，1.4叫)，粉状分子筛lg,混合于15ml干燥CH2Cl2中，&气氛，于-10°<:滴加三氟甲磺酸三甲基硅醇酯丁1^80丁"78111,0.4311111101),丁0:跟踪节酯原料，反应完成后，加入Et3N淬灭，过滤，滤液浓縮后硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯体系洗脱，得到糖基化中间体3-0-(2，3，4-三-0-苯甲酰基会L-吡喃阿拉伯糖)-熊果酸苄酯1.65g(1.67mmo1)。将其溶解于15ml甲醇/CH2Cl2(l/2)中，0.1g5。/oPd/C催化下，常压氢化过夜，过滤浓縮，硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯体系洗脱可得3-0-(2，3，4-三-0-苯甲酰基-cc-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸1.26g(1.4mmo1)。将其溶解于25mlMeOH/CH2C12(2/1),加入NaOMe(35mg，0.65mmo1),室温反应过夜，用稀醋酸溶液中和反应液，浓縮后，硅胶柱层析，氯仿/甲醇体系洗脱，得到3-O-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸0.737g(1.25mmo1)，四步反应总收率57%。[a]，=+41.9(C0.43,DMF)iHNMR(600MHz，CD3OD):Sppm5.22(lH，t，J=3.6Hz,H-12),4.27(lH，d,J=6.7Hz,H-r)，3.82(lH，dd,J=12.2,3.4Hz),3.79-3.80(m，lH),3.49-3,58(3H,m)，3.14(lH,dd,J=11.4，4.14Hz，H-3),2.19(lH，d，J=ll,0Hz，H-18)，l.l卿，s)，1.04(3H，s)，0.96(3H，s)，0.84(3H，s)，0.84(3H，s),0.87(3H，d,J二6.5Hz)，0.78(lH，d，J=11.2Hz，H-5)13CNMR(150MHz，CD3OD):Sppml75.0,139.6,126.9，107.1，90.7,74.3，72.8，69.5:66.4,57.0，54.4，48.0，42.2,40.8，40.4，40.2，39.9,38.1，37.8，34.3，31.8,29.2,28.6，27.0，25.3,24.4,24.1,21.6,19.3,17.8，17.7,17.0，16.1ESI-MS(m/z):611.0[M+Na〗+将30mg3-O-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸溶解于甲醇/氯仿(4ml，3/1)，加入5mg甲醇钠，室温搅拌30min,过滤析出的白色固体，甲醇洗涤，干燥得到3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸钠盐。实施例6:3-0-(e-D-吡喃葡萄糖)熊果酸及其钠盐的制备以熊果酸为起始原料，以2，3，4，6-四-0-苯甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖基三氯乙酰亚胺酯为糖基化给体，四步反应可得到3-0-(e-D-吡喃葡萄糖)熊果酸。[a〗2o。=+27.0(C0.2，DMF)'HNMR(600丽z，CD3OD):Sppm5.22(t,lH,H-12)，4.32(d，J=7.8Hz,lH，H-l')，3.83(dd,J=11.8，2,2Hz,lH,H-6'-l),3.67(dd，J=12,5.2Hz，1H,H画6'-2)，3.17-3.35(m，5H),2.20(d，J=11.4，lH，H-18)，Ul(3H，s),1.06(3H,s)，0.97(6H,sMeX2)，0.90(3H，d，J=5.8Hz)，0.85(6H，s)，0.78(d,J=12.4Hz,lH，H-5)l3CNMR(150MHz，CD3OD):5ppm178.9(C-28)，137.0(013)，126.2(C-12),103.8(C-1')，88.0(C-3)，75.4，74.8，72.8，68.8，59.9，54.2，51.5,46.7，45.0，40.4，37.9，37.5,37.2，37.0,35.2，34.9,31.4，28.9，27.8,26.3,25.7,24.2，22.5，21.5，21.2,18.7，16.4，14.9，14.8，14.1,13.1ESI-MS(m/z):641.5[M+Na]+其钠盐制备方法同实施例5。实施例7:3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(e-D-吡喃葡萄糖)酯的制备熊果酸为原料，类似得到实施例4的方法，得到中间体熊果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯，再以2，3，4-三-0-苯甲酰基-e-L-吡喃阿拉伯糖基三氯乙酰亚胺酯为二次糖基化给体，类似的糖基化条件，并用NaOMe脱保护得到3-0(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯。'HNMR(600MHz,CD3OD):5ppm5.36(d，J=8.2Hz，lH，H-l")，5.26(t,lH,H-12)，4.29(d，J=6.7Hz，lH，H-r),3.80-3.86(m，3H),3.69(dd,J=12,4,6Hz,lH，H-6'-l)，3.57-3.58(m,lH,H-6'-2)，3.32-3.43(m,4H)，3.15(dd，J=11.6，2.4Hz,lH),2.24(d,J=11.2Hz，lH，H-18)，U3(3H，s)，1.06(3H,s),0.99(6H,s),0.91(d,J=6.3Hz,3H)，0.86(3H，s),0.85(3H，s)，0,79(d,J=11.7Hz,lH,H-5)"C画R(150顧z，CD3OD):5ppm176.5(C-28)，137.7(C-13),125.9(C-12)，105.7(C-l')，94.3(C画r),89.3(C-3)，77.2，76.9，72.9,72.5,71.4,69.8，68.1，64.9,61.1，55.6,52.8，48.2，41.9,39.6，39.0,38.9，38.8，38.6,36.5,36.1,32.9,30.3,29.3，27.9,27.2,25.7，23.9，23.0，22.6，20.1，17.9,16.5，16.2,15.6,14.7ESI-MS(m/z):773.4[M+Na]+。与从地榆中分离得到活性最高的化合物3-0-(01丄-吡喃阿拉伯糖)-19-羟基-熊果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯相比，本实施例中的化合物最接近，只少一个19位羟基。但是本实施例中的化合物合成方法可如上描述，以熊果酸为原料，易工业化的方法简便获得。而地榆中的该化合物，由于19-羟基-熊果酸原料不容易得到，而从熊果酸出发合成又不容易，所以该化合物的合成有一定难度，加上直接从天然产物中大量分离得到也有一定局限，所以一定程度上限制了其在医药中的应用。本发明的创造性之一也就是提供了更易得到的系列化合物，可以从廉价易得的熊果酸、齐墩果酸出发合成，同时活性也得到增强，因此可以在医药中得到大量应用。实施例8:3-0-(a-L-吡喃阿拉伯銜熊果酸-28-0-(3-纤维素二糖)酯的制备类似方法可得。[a]^=+30.8(C0.9,MeOH)iHNMR(600MHz,CD3OD):3ppm5.36(lH，d，J=8.3Hz),5.24(1H，t)，4.43(lH，d，J=7.9Hz)，4.28(lH,d,J=6.7Hz)，3.21-3.89(16H,m),3.13(lH,dd，J=11.4,4.1Hz),2.22(lH，d，J=11.4Hz)，1.11(3H,s),1.04(3H，s),0.96(6H,s)，0.89(3H，d，J=6.4Hz)，0.84(3H，s)，0.83(3H,d.J=6.9Hz)，0.78(lH,d,J=l1.2Hz)ESI-MS(m/z):912[M]+实施例9:3-0-(a-L-吡喃鼠李銜熊果酸的制备用类似实施例5的方法，2，3，4-三-0-苯甲酰基-P-L-批喃鼠李糖基三氯乙酰亚胺酯为糖基化给体，糖基化后脱保护基，可得到3-0-(a-L-吡喃鼠李糖)熊果酸。|a]，=+5.7(C0.74，MeOH)iHNMR(600固z，drpyridine):Sppm5.48(1H，m)，5.32(1H,s),4.55(1H，t，J=1.6Hz)，4.46(1H,dd,J=10.4,3.4Hz),4,26画4,34(2H，m),3.17(1H,dd,J=11.8,4.4Hz)，2.62(1H,d，J=11.4Hz)，2.31(1H，dt,J=13.4,4.4Hz),2.12(1H，dt,J=4.0,12.6Hz),1.87-2.15(6H,m)，L66(3H，d,J=5.8Hz),L56(1H，m),L24(s,3H)，L02(3H，s)，L00(3H，d,J=6.4Hz),0.96(3H，d,J=6.4Hz)，0.93(3H，s)，0.83(3H，s)，0.79(3H，s),0.72(1H,d,J=l1.6Hz)13CNMR(150MHz,d5-pyridine):Sppml80.2，138.2，125.5,103.0，89.0,72.7,71.2,71.1，68.5，55.3，53.0，48.2,48.0,47.2，41.9,39.4，39.0,38.6,38.4,36.7，36.5，32.9，30.4，27.8，27.4,25.2，23.9,23.0,22.7，20.2,18.0,16.4(d),16.2，15.6,14.6ESI-MS(m/z):1203[2M-1]+,601[M-1]+实施例10:3-0-(0-D-吡喃半乳銜熊果酸的制备类似实施例5的方法，2，3，4，6-四-0-苯甲酰基-a-D-吡喃半乳糖基三氯乙酰亚胺酯为糖基化给体，糖基化后脱保护基，可得到3-0-(0-D-吡喃半乳糖)熊果酸。[a]2D°=+13.8(C0.8,MeOH)1HNMR(600MHz,d5-pyridine):Sppm5.48(1H,t,J=3.2Hz)，4.93(1H，d，J=6.6Hz)，4.57(1H，d,J=3.2Hz)，4.43画4.48(3H,m),4.16(1H，dd，J=9.6，3.4Hz)，4.11(1H，t，J=6.2Hz)，3.41(1H,dd，J=11.8,4.4Hz)，2.62(1H,d，J=11.6Hz)，2.20-2.32(2H，m),2.12(1H,m)，L57(1H,t，J=8.0Hz),L31(3H，s),L26(3H，s)，L01(3H,s),L00(3H，d,J=5.8Hz)，0.96(3H,d,J=5.2Hz)，0.96(3H,s),0.85(3H，s)，0.80(1H，d，J=11.8Hz)ESI-MS(m/z):641[M+Na]+实施例ll:3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)齐墩果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯的制备类似实施例l的方法，2，3，4-三-0-苯甲酰基-e-L-吡喃阿拉伯糖基三氯乙酰亚胺酯为糖基化给体，糖基化反应后用甲醇钠脱保护可得。[《=+35.5(C0.71，MeOH)!HNMR(600MHz，CD3OD):5ppm5.41(1H,d，J=5.7Hz，H-l"),5.27(1H，t，H曙12)，4.27(1H，d，J=6.7Hz)，3.79-3.90(4H，m)，3,66-3.70(2H,m),3.55-3.58(2H，m)，3.49-3.52(2H,m)，3.13(1H，dd,H画3),2.00-2.06(lH,m，H-18)，1,15，1.04，0.95，0.94，0.900.83，0.79(each3H，s，MeX7)ESI誦MS(m/z):743.5[M+Na]+实施例12:3-0-(3-D-吡喃葡萄糖)齐墩果酸-28-0-(P-D-B比喃葡萄糖)酯的制备2，3，4，6-四-0-苯甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖基三氯乙酰亚胺酯为糖基化给体，类似实施例1可得。!HNMR(600MHz，CD3OD):5ppm5.37(d,J=8.1Hz，lH,H-l")，5.25(m,lH，H-12),4.31(d，J=7.86Hz，lH，H-l')，3.17陽3.84(13H，m)，2.85(1H,m)，1.16，1.05,0.95,0.93,0.89,0.84，0.80(seach,3Heach，MeX7)ESI-MS(m/z):803[M+Na]+实施例13:3-0-(P-D-吡喃葡萄銜齐墩果酸的制备类似实施例5。^丽R(600丽z，CD3OD):5ppm5.26(1H,t，J=3.6Hz),4.34(1H,d，J=7.9Hz),3.86(1H，dd，J=11.8，2.3Hz)，3.68(1H,dd,J=l1.8，5.3Hz),3.19-3.37(5H，m),2.88(1H，m)，1.18，1.08,0.98，0.97,0.92，0.88,0.86(each3H，s),0.81(1H，d,J=11.6Hz)13CNMR(150MHz,CD3OD):5ppm181.5(C-28)，144.1(C13)，122.0(C12)，105.3(C，1)，89.4(C3)，76.9画70.3(C，4，C，5，C，3，C'2)，61.4(C6)，55.7(C5)，48.2(C9)，47.2(C19)，46.5(C17)，46.1(C18)，41.5(C14)，39.2(C8)，38.8(C1)，38.4(C4)，36.5(C10),33.7(C21)，32,7(C29)，32.6(C7)，32.2(C22)，30.4(C20)，27.5(C23)，27.2(C15)，25.6，25.0(C27，C25)，23.1(C-30)，22.8(C11)，22.7(CI6)，18.0(C6)，16.4(C26)，15.6(C24)，14.5(C25)其钠盐制备方法同前。实施例14:3-0-(e-D-吡喃半乳糖)齐墩果酸的制备类似实施例5。^NMR(600画z，d6-DMSO):5ppm12.00(brs,lH)，5.16(s，lH,H12)，4.71(d,J=4.7Hz，lH)，4.60(d，J=5.5Hz，lH),4.50(t,J=5.8Hz,lH)，4.29(d,J=4.4Hz,lH)，4.10(d,J=7.3Hz，IH)，3.6(t,J=3.7Hz，lH，H4)，3.54-3.50(m，lH)，3.39画3.42(m，1H)，3.23隱3.29(m，3H)，3.02(dd，J=4.7，11.4Hz,1H,H3)，2.80(dd，J=3.3,13.6Hz，lH，H18)，1.89-1.93(m,1H)，1.80-1.77(m,3H)，1.09(s,3H)，0.98(S,3H)，0.87(S，9H)，0.75(s，3H),0.71(s，3H)13CNMR(150MHz，d6-DMSO):Sppm178.6(C28),143.8(C13)，12L5(C12)，106.0(C'1)，87.8(C3),74.8-68.0(C,4,C，5,C'2，C'3),60.3(C，6)，54.9(C5)，47.0(C9),45.7(C19)，45.2(C17)，41.2(C18),40.8(C14)，38.8(C8),38.7(C1),38.1(C4),36.3(C10),33.3(C21)，32.8(C29),32.3(C7)，32.1(C22)，30.4(C20),27.6(C23)，27.1(C15)，25.6(C27),25.5(C25)，23.3(C30)，22.9(C11),22.6(C16),17.7(C6),16.8(C26),16.4(C24)，15.1(C25)实施例15:3-0-(e-D-吡喃木糖)齐墩果酸的制备以2，3，4-三-0-苯甲酰基-a-D-吡喃木糖基三氯乙酰亚胺酯为糖基化给体，类似实施例5，得到3-0-(P-D-吡喃木糖)齐墩果酸。'HNMR(600MHz，d6-DMSO):5ppm12.00(brs，1H,COOH)，5.16(brs，1H，H12)，4.89-4.91(m，3H)，4.1l(d，J=7.8Hz，1H，H1)，3.63(dd，J=5.0，ll.OHz，1H)，3.21-3.26(m，1H)，2.92曙3.07(m，4H)，2.73(dd，J=3.7，13.7Hz，1H)，1.89画1.93(m，1H)，1.79(brd，J=8.7Hz，2H)，1.09(s，3H)，0.97(s，3H),0.87(s，6H)，0.85(s,3H)，0.75(s，3H)，0.71(s，3H)13CNMR(150MHz，d6-DMSO):Sppm178.6(C28)，143.8(C13)，121.5(C12)，106.2(C，1)，87.6(C3)，76.7(C，3),73.7(C，2)，69.6(C，4),65.5(C，5),54.9(C5)，46.9(C9),45.7(C19),45.4(C17)，41.3(C18)，40.8(C14)，38.8(C8)，38.7(C1)，37.9(C4)，36.3(C10)，33.3(C21),32.8(C29),32.3(C7),32.1(C22),30.3(C20),27.4(C23),27.2(C15),25.7(C27),25.5(C2)，23,4(C30),22.9(C11),22.6(C16),17.7(C6),16.8(C26)，16,4(C24)，15.0(C25)实施例16:3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)齐墩果酸的制备类似实施例5。iHNMR(600MHz,d6國DMSO):5ppml2.01(s，1H,COOH)，5.15(t，J=3.6Hz，1H，H12)，4.81(d,J=4.7Hz，1H)，4.52(d,J=5.9Hz,1H),4.47(d，风4Hz，IH)，4.11(d，J=6.2Hz,lH，Hl),3.64(dd，J=3.3，12.5Hz,1H)，3.58(brs，IH)，3.33-3.34(m，3H),3.00(dd，J=4.4，11.4Hz，1H，H3)，2.74(dd，J=5.4，13.6Hz,1H)，1.88-1.93(m，1H),1.79(dd，J=3.3，8.4Hz，2H,Hll)，1.09(s，3H，H-27),0.96(s,3H,H23),0.87(s，9H),0.75(s，3H)，0.71(s，3H)13CNMR(150MHz，de-DMSO):Sppm178.6(C28),143.8(C13)，121.5(C12)，105.8(C1),87.6(C3),72.7，70.9,67.6，65.1，54.9,46.9，45.7，45.4，41.3，40.8，38.8，38.7，38.0，36.3，33.3，32,8，32.3，32.0,30.4，27.6,27.2,25.7,25.5,23.4,22.9，22.6，17.7，16,8,16.4，15.1其钠盐制备方法同前。实施例13、14、15、16中化合物图谱数据与文献(中国海洋大学学报，2005,35(4):635-640)—致。实施例17:齐墩果酸-28-0-(e-D-吡喃葡萄糖)酯的制备以2，3，4，6-四-0-苯甲酰基-ct-D-吡喃葡萄糖溴苷、齐墩果酸为原料，类似实施例4的相转移法糖苷化后，甲醇钠脱保护可得。m.p.180-183°C，[a]^=+22(C0.2，pyridine)IR(KBr)cm":3435，2933,2862，1695,1461,1386，1181,1030，996,762HNMR(600MHz，d5-pyridine):Sppm6.19(1H，d,J=8Hz，H，-l),5.35(1H,brs,H12)'1.18，1.17,1.13,1.06，0.91，0.90，0.86(21H,s，7Me)13CNMR:5ppml76.9,144.7，123.4，92.3,79.8，79.4,78.6，74.6，71.6，62.7,56.3，48.7，47.5,46.7,42.3，40.4，40.0,39.5，37.9，34.5,33.6,33.0，31.3，30,5，29.3,28.8，28.6，26.6，24.3，23.9,24.3，24.2，23.9，18.0，17.0,16.1ESI掘(m/z):641[M+Na]+实施例18:齐墩果酸-28-0-(e-龙胆二糖)酯的制备用全乙酰化龙胆二糖溴苷，齐墩果酸为原料，类似实施例4的相转移法糖苷化后,甲醇钠脱保护可得。m.p.248-250°C'HNMR(600MHz，CD3OD):5ppm5.41(lH，d,J=7,8Hz,H，l)，5.32(1H,d，H12),4.41(lH,d，J=8.7Hz，H"-l)，4.18(1H，d，J=11.6Hz)，3.91(1H,d，J=13.6Hz)，3.83(1H，dd,J=6,5.5Hz)，3.73(1H，dd，J=5.5，5.5Hz),1.22,1.03,1.01，1.00，0.97,0.87,0.84(21H,s，7XMe)实施例19:-D-吡喃葡萄糖醛酸)齐墩果酸的制备类似实施例5的反应条件，糖基化后并脱保护基后可得。1HNMR(600MHz,d5-pyridine):Sppm5.65(lH,brs，H12)，4.82(1H，d，J=7Hz，H，-l)，1.33，1.32，1.29，1.04，0.99，0.98，0.79(21H，s，7XMe)ESI-MS(m/z):655[M+Na]+以下通过药效学试验进一步证明本发明的有益效果。将实施例中化合物作了骨髓单核细胞增殖增加率体外实验，并对实施例中部分化合物进行了小鼠升高白细胞和/或血小板的体内实验，对比了从中药地榆中分离出来的一个单体皂苷3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)-19-羟基-熊果酸-28-0-(3-0-吡喃葡萄糖)酯以及熊果酸、齐墩果酸的药效，其结果证明了本发明的有益效果。试验例l对体外培养的小鼠骨髓单核细胞的促进增殖的作用取昆明种小鼠15—20只(购自河南郑州大学实验动物中心)，雌雄兼用脱颈椎处死，分离两侧股骨，剪去股骨头，用无血清RPMI1640(Gibco公司)反复冲洗骨髓，收集含骨髓细胞的冲洗液，用吸管反复吹打以使细胞分散，静置片刻后吸取上清，100g离心3min，收集细胞沉淀，加入培养基重悬并定容至5mL，将此细胞悬液加到有5mL小鼠淋巴细胞分离液的离心管上层，400g离心30min，采集中间交界面乳白色的骨髓单核细胞(BMMNC)层，以无血清RPMI1640培养基洗涤三次，得骨髓单核细胞悬液，计数后按40万/孔接种于96孔板中，加入不同浓度的阳性药物rhG-CSF(重组粒细胞集落刺激因子子，山东齐鲁制药有限公司)或待测样品，同时设立不加药的空白对照组，置37。C、5。/o的C02孵箱中培养5天，以常规SRB(Sigma)法测定细胞增殖情况，SRB染色后，测定490nm处的OD值。计算药物处理后的细胞增殖增加率(细胞增殖增加率=实验组-空白对照组/空白对照组*100%)，实验结果见表一。表一样品编号及其对体外培养的小鼠骨髓单核细胞增殖增加率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>结果和讨论如表一所示，本发明样品G-1G-19的增殖增加率比熊果酸、齐墩果酸的增殖增加率高10%以上，差异显著。地榆中分离得到的G-22为中国专利CN03135776公开的化合物中活性最强的化合物，样品G-8和G-22结构极其类似，G-8只少了19位羟基。从上表的结果可以提示，本发明以熊果酸、齐墩果酸为苷元的皂苷相对于坡模醇酸为苷元的皂苷不仅具有合成易得的优势，同时活性也得到了增强。从上述数据也可以看出，对于熊果酸皂苷G-1、G-3、G-6、G-8，齐墩果酸皂苷G-ll、G-12增殖增加率数值相对较高，所以进一步优选上述几种化合物，并采用体内实验的方法进行研究。进一步地，对本发明中涉及到的化合物进行了体内实验，采用环磷酰胺致小鼠白细胞减少症动物模型。实验方法概述如下取健康昆明种小鼠，$^各半，每组18只，筛选体重为18-22g小鼠按体重随机分组。各实验组给予不同药物，阴性对照组、模型对照组给予同体积的生理盐水，阳性对照药皮下注射粒细胞集落刺激因子40ug/kg(注射容积0.1ml/10g)。除阴性对照组外，其它给药组给药三天后腹腔注射环磷酰胺(CY)100mg/kg，每天一次，连续三天造成小鼠白细胞减少，于末次腹腔注射环磷酰胺后一天、三天和/或五天眼眶后静脉丛取一滴(20ul)测其血象(即造模后一天、三天和/或五天)，检测了解白细胞及血小板情况。(注；期间各给药组均不间断给药)。于末次腹腔注射环磷酰胺后五天(即造模后五天)处死小鼠，对血象指标中白细胞(WBC)、血小板(PLT)进行记数。试验例2熊果酸皂苷对环磷酰胺致小鼠白细胞减少症动物模型白细胞(WBC)的影响本次实验主要研究熊果酸皂苷G-1、G-6、G-8升白作用，比较了苷元熊果酸、齐墩果酸以及专利已公开化合物G-22的药效。结果如下表二表二熊果酸皂苷对CY致小鼠白细胞减少症动物模型白细胞的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>注与模型对照组组间比较，*P<0.05，**P<0.01，A为具有很好的趋势，与G-22组间比较,女P〈0.05，女女P〈0.01。从上表可以看出，本发明提供的熊果酸皂苷G-1、G-6、G-8在0.8mg/kg剂量下，相对于已经公开了的G-22升高白细胞具有显著差异，特别在造模后第三天。而苷元G-20、G-21在此剂量下无明显升高白细胞作用。试验例3熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷对环磷酰胺致小鼠白细胞减少症动物模型白细胞以及血小板的影响本次实验目的是，研究相对于专利己公开化合物G-22，熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷G-1、G-3、G-ll、G-12的升血小板作用，同时也观察齐墩果酸皂苷G-ll、G-12是否具有升白作用。实验方法同上，结果如下表表三熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷对CY致小鼠白细胞减少症动物模型白细胞的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>注与模型对照组组间比较，*P<0.05，**P<0.01;表四熊果酸、齐墩果酸皂苷对CY致小鼠白细胞减少症动物模型血.<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>注与模型对照组组间比较，*P<0.05，**P<0.01，A为具有很好的趋势，与G-22组间比较，女P<0.05，★★<().01。从试验3的结果表三、表四可以看出，熊果酸皂苷G-1升高白细胞和血小板作用明显。熊果酸皂苷G-1、G-3相对于G-22在第五天具有升高血小板的显著差异。齐墩果酸皂苷G-ll、G-12在造模后一天升高白细胞作用明显，具有一定的升白作用。第一、五天升血小板作用明显，第五天相对于G-22也有显著差异。阳性药G-CSF没有升高血小板的明显作用。试验例4为进一步地说明本发明，以6°Co-Y射线造模，比较了G-l与G-22对放疗引起白细胞减少症小鼠白细胞的作用。具体操作及其结果如下给药方案见下表表五药物给药方案动物组别受试物药物浓度(mg/ml)给药体积(ml/kg)给药剂量(mg/kg)给药途径给药吋间(天)正常对照组0.9%生理盐水/20/i.g21模型组0.9%生理盐水/20/i-g21小鼠G-lG-10.04200.80i.g21G-22G-220.04200.80i.g21阳性(G-CSF)G-CSF4iig/ml1040ug/kgs.c照射后5天实验方法及结果取昆明种小鼠，雌雄各半，随机分为6组，每组1718只。尾静脉取血定正常血象(白细胞、红细胞、血小板和血红蛋白)，根据体重及血象结果进行调整。按表五所示药物和剂量ig给药，正常对照组和模型组给予等容积生理盐水，每天1次，连续给药7天后测定照射前血象。除正常对照组外其余各组小鼠进行总剂量为3.0Gy的6"Co-Y射线全身照射一次，制备小鼠白细胞减少症模型，继续给药14天，G-CSF组于照射当日起连续皮下注射给药5天，并于照射后3、7和14天分别取血测定血象。具体结果见下表表六受试药物对，o-Y射线致白细胞减少症小鼠WBC的影响(107L)组别剂量只数检测时间点(mg/kg)(只)正常给药l周照射3天照射7天照射14天止常组模型组/178.51±1.8810.08±2.8910.71±3.6312.30±3.6711.35±3.92/188.47±2.3710.03±2.322.48±0.97A厶3.45±1.13AA5.06±1.08厶AG-l0.80178.96土1.589.21±2.162.06±0.754.59±1.52**6.37±1.54林G-220.80178,56±2.439.50±3.172.21±0.924.08±1.505.44±1.13G-CSF40ug188.64±2.019.89±3.303.71±1.ll林4.56±1.17林7.01±1,52林(与正常组相比，△△为P〈0.01，A为P〈0.05;与模型组相比，林为P〈0.01，*为P〈0.05。)由表六可见模型组小鼠照射后3天、7天和14天的外周血WBC均明显降低，与正常组比较差异显著；G-l组灌胃后，可明显升高白细胞减少症小鼠白细胞数，在照射后7天和14天与模型组相比有显著差异，G-22无明显作用。试验例5溶血性比较待测样品用溶媒DMSO/生理盐水(1:4)溶解配置成40，80，120，160，200ug/ml受试浓度梯度。从家兔心脏取血25ml，放入含玻璃珠的三角烧瓶中轻轻振摇IO分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液。将血移入刻度离心管，加入生理盐水约10倍量，摇匀，2000rpm离心5分钟，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水按上述方法洗涤，共4次，至上清液呈无色透明为止。将所得红细胞用生理盐水配成10%的混悬液，供试验用。在2.5ml受试样品、溶媒(空白对照)或蒸馏水(阳性对照)中加入10%红细胞悬液250Pl，混匀后，立即置37。C恒温箱中进行温育；1小时后取出，3000rpm离心5分钟，取上清夜在分光光度计540nm处比色测定OD值。溶血度(溶血率)=(样品吸光度-空白对照吸光度)X100%+(阳性对照吸光度-空白对照吸光度)；数据处理采用SPSS13.0统计软件，以药物浓度为自变量x，溶血度为因变量y进行线性回归，得出线性回归方程；再根据方程计算出导致溶血度为50%的药物浓度，即HD50。以PO.05为有统计学显著性。表七G系列样品回归方程及HDi清况表<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>从上表可以看出，G-l具有最大的HD5Q，表明在几个样品中最不容易引起溶血，所以得到进一步优选。通过上述药理实验证明，本发明化合物具有显著升高白细胞和/或血小板活性作用，与中药地榆中分离得到的坡模醇酸皂苷相比，药理活性均较强，且有显著差异，尤其是双糖基化熊果酸皂苷Gl药效最佳。从溶血性实验可知双糖基化熊果酸皂苷G1在本发明化合物中具有最大的HD50值，安全性好；综合药效与安全性试验，双糖基化熊果酸皂苷G1为本发明化合物中最佳选择。本发明药物组合物的制备片剂成分数量(mg/片)G-l5淀粉50微晶纤维素40硬脂酸镁2羧甲基纤维素钠5按照以上配比，将G-1与淀粉、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠混匀，用水润湿，制颗粒，干燥，整粒，加入硬脂酸镁，混匀后压片可得。注射剂称取50毫克G-12，用适量无水乙醇溶解，加入l克聚氧乙烯蓖麻油酸酯，使其完全溶解，加葡萄糖注射液稀释至100ml，加入0.05%注射用活性炭80度保温15分钟，垂熔玻璃以及微孔滤膜过滤，滤液分装成2ml针剂。每单位制剂含lmgG-12。胶囊取10gG-6，微晶纤维素400g，充分混匀后，罐装1号胶囊2000粒。每单位制剂含5mgG國6。权利要求1、通式(I)的熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷或其药学上可接受的盐或酯在制备升高白细胞和/或血小板药物中的用途，其特征在于通式(I)为其中，R1为氢、葡萄糖基、阿拉伯糖基、鼠李糖基、半乳糖基、木糖基、核糖基、来苏糖基、甘露糖基、阿洛糖基、阿卓糖基、古洛糖基、果糖基、山梨糖基、鸡纳糖基、夫糖基、阿洛酮糖基、2-氨基葡糖基、半乳糖醛酸基、葡萄糖醛酸基，或由这些单糖2-5个组成的寡糖基；R2为氢，葡萄糖基、阿拉伯糖基、鼠李糖基、半乳糖基、木糖基、核糖基、来苏糖基、甘露糖基、阿洛糖基、阿卓糖基、古洛糖基、果糖基、山梨糖基、鸡纳糖基、夫糖基、阿洛酮糖基、2-氨基葡糖基、半乳糖醛酸基、葡萄糖醛酸基，或由这些单糖2-5个组成的寡糖基；且R1、R2不同时为氢；R3为CH3、R4为H时为熊果酸皂苷；R3为H、R4为CH3时为齐墩果酸皂苷。2、根据权利要求1所述的熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷的用途，其特征在于R3为CH3、R4为H，为熊果酸皂苷，见通式II:II其中，Gl、G2为H、单糖或寡糖，且G1、G2不同时为H;所述的单糖或寡糖的糖基为葡萄糖基、阿拉伯糖基、鼠李糖基、半乳糖基、木糖基、葡萄糖醛酸基，或由这些单糖2-5个组成的寡糖基。3、根据权利要求2所述的熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷的用途，其特征在于Gl、G2为相同的单糖或寡糖，所述化合物为3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯、3-0-(a-L-吡喃鼠李糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃鼠李糖)酯、3-0-(P-D-吡喃葡萄糖)熊果酸-28-CKP-D-吡喃葡萄糖)酯。4、根据权利要求2所述的熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷的用途，其特征在于，Gl、G2为不相同的基团，通式II中化合物选自3-0-(0-D-吡喃半乳糖)熊果酸、3-0-(a-L-吡喃鼠李糖)熊果酸、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸、3-0-(P-D-吡喃葡萄糖)熊果酸及其钠盐、3-0(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(e-纤维素二糖)酯、熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯。5、根据权利要求3或4所述的熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷的用途，其特征在于，通式II中化合物为3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯、3-CKa-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸及其钠盐、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯、3-0-(0。-吡喃葡萄糖)熊果酸-28-0-(3-D-吡喃葡萄糖)酯。6、根据权利要求5所述的熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷的用途，其特征在于，通式II中化合物为3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯。7、根据权利要求1所述的熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷的用途，其特征在于R3为H、R4为CH3时，为齐墩果酸皂苷，见通式III:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>III其中G3、G4为氢、葡萄糖基、阿拉伯糖基、鼠李糖基、半乳糖基、木糖基、葡萄糖醛酸基，或由这些单糖2-5个组成的寡糖基，且G3、G4不同时为氢。8、根据权利要求7所述的熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷的用途，其特征在于，通式III中化合物为3-0-(P-D-吡喃葡萄糖醛酸)齐墩果酸、3-0-(0-D-吡喃木糖)齐墩果酸、3-0-(a-L-吡喃半乳糖)齐墩果酸、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯銜齐墩果酸及其钠盐、3-0-(e-D-吡喃葡萄糖)齐墩果酸及其钠盐、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)齐墩果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯、3-0-(P-D-吡喃葡萄糖)齐墩果酸-28-0-(3-D-吡喃葡萄糖)酯、齐墩果酸-28-0-(P-龙胆二糖)酯、齐墩果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯。9、根据权利要求8所述的熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷的用途，其特征在于，齐墩果酸皂苷为3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)齐墩果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯、3-0-(P-D-吡喃葡萄糖)齐墩果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯。10、一种具有升高人白细胞和/或血小板作用的药物组合物，其特征在于是由如权利要求l-9任一项所述的化合物的任意一种，或其药学上可接受的盐、盐的水合物、溶剂化物、酯以及前体药物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或载体制备成的药剂。11、根据权利要求10所述药物组合物，其特征在于，所述的药剂是片剂、胶囊、丸剂、注射剂、缓释制剂、控释制剂或微粒给药系统。全文摘要本发明提供了通式I的熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷在制备升高白细胞和/或血小板药物中的应用。本发明还提供了含有该化合物的药物组合物。本发明利用在天然产物中广泛分布且价廉易得的熊果酸、齐墩果酸为原料，通过结构修饰引入了单糖或寡糖基，药理实验证明具有显著的升高白细胞和/或血小板活性。文档编号A61K31/7028GK101224215SQ20081000274公开日2008年7月23日申请日期2008年1月16日优先权日2007年1月16日发明者刘军剑,伟占,周美荣,姬建新,兵广,彭向阳,晏菊芳,李伯刚,秦东光,董光新,振黄,瑜黄,龚晓霞申请人:成都地奥九泓制药厂