专利名称：：一种保肝活性成分组合物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种具有保肝、降酶、防止肝纤维化功能的中药活性成分组合物，以及该组合物的制备工艺和用途，属于中药新药
技术领域：
。技术背景我国是肝炎的高发病区，据统计，我国慢性肝炎病毒携带者数量已超过1.3亿，慢性乙肝病人约3000万。慢性肝炎患者若没有及时治疗或病情未能及时控制就有可能转化为肝纤维化，肝纤维化如不能得到有效治疗和控制，甚至可发展为肝硬化、肝癌。肝纤维化在中医属血痹症的范畴，20世纪70年代，开展中医防治肝硬化及抗肝纤维化的研究，迄今的研究已表明，中医药在抗肝纤维化治疗中具有明显的优势，其多环节、多层次及多耙点的综合药理学作用可能是其优势所在。开展中药预防和治疗肝纤维化已成为临床药物研究的一大热点，尤其是中药复方的研究。目前市场上可供临床选用预防和治疗慢性肝炎引起的肝纤维化或早期肝硬化的药物很少，而且大都疗效不确切且毒副作用较大。丹参系唇形科植物丹参(SalviamiltiorrhizaBge.)的干燥根及根茎，含有丹酚酸、丹参素、丹参酮等多种活性成分，具有活血化瘀、安神宁心、排脓止痛的功效，临床常用于治疗冠心病、心绞痛等各种血瘀或血行不畅病症。今年来的大量药理试验研究表明，丹参对多种肝脏疾病，包括急、慢性肝炎、脂肪肝、肝纤维化、肝腹水等有明显疗效。丹参具有良好的护肝降酶、软縮肝脾、改善血清蛋白含量，抗炎，提高免疫功能，促进纤维吸收，对慢性肝炎转化为肝硬化起延缓与阻断作用。丹酚酸是从丹参中提取水溶性成分物质，研究表明不但可抑制肝纤维组织的增生，而且可促进已形成的肝内胶原纤维降解和重吸收。■胡黄连(PicrorhizascrophulariifloraPennell.)是一味常用中药，为清虚热的要药，主治湿热泻痢、黄疸、小儿疳积等症，主产于我国西藏、云南等地。而胡黄连的同属植物印度胡黄连(PicrorhizakurrooaRoyleexBenth.)在印度民间主要用于治疗肝炎和尿路感染，文献(Gupta,P.P.,Picroliv.DrugsoftheFuture,2001，26(1):25-31.)表明印度产胡黄连标准提取物"Picroliv."毒性低，无致突变性，对各种试验性肝损伤均有较理想的保护作用。文献(吉文亮，张朝晖.中草药，1998,29(1)54-56)显示胡黄连苦苷II有相当强的保肝利胆活性。公开号CN1788732,CN1778308分别公开了胡黄连苷I、II在乙型肝炎药无中的用途。但这些都只是单位药成分使用。丹参与胡黄连两味药联合应用于保肝作用方面的研究，还未见相关报道。
发明内容本发明经过科研人员的大量药理试验，从众多中药组合中率选出丹参和胡黄连的组合，初步药理试验研究表明丹参和胡黄连联合使用，在降酶、防止肝硬化方面有协同作用，其作用强于同工艺条件下单用丹参或胡黄连。本发明的一个目的在于提供一种在降酶、防止肝硬化方面具有协同作用的活性成分组合物丹参和胡黄连。本发明中胡黄连和丹参的重量配比为1:10-10:1，优选地胡黄连和丹参的重量配比为1:4-4:1。本发明中丹参和胡黄连的重量配份数可以为胡黄连15重量份，丹参2IO重量份，优选地可以为胡黄连3重量份，丹参5重量份。本发明中的活性成分丹参和胡黄连还可以分别以含丹酚酸的提取物和含胡黄连苷I、II的提取物代替。本发明的另一目的是提供一种提取制备本发明活性成分的方法。本发明的还一目的在于提供本发明组合物在制备具有保肝、降酶、防止肝纤维硬化功能药品中的应用。制备本发明组合物活性成分的工艺为按重量配比称取药材，用水或含水有机溶剂提取，过滤，滤液减压浓縮，至除去其中有机溶剂，浓縮液预装有填料的色谱柱，先用低于15%的含水有机溶剂洗脱至无糖、洗脱液颜色变淡，弃此部分洗脱液，改用25%~80%的含水有机溶剂洗脱，收集此部分洗脱液，减压浓縮，干燥，即得活性成分。活性称分加入制药上可接受的药用辅料，按常规制药方法，制成制剂。本发明中，所述的含水有机溶剂是指含水甲醇、含水乙醇、含水丙醇、含水丙酮中的任一种或两种以上的组合；所述的色谱柱预装填料是指大孔树脂、聚酰胺、葡聚糖凝胶、反相硅胶、MCI-GEL-CHP-20P中的任一种。本发明中，提取所用的溶剂优选为水或含水乙醇；填料优选为大孔吸附树脂，更优选为非极性或弱极性的大孔树脂；洗脱填料所用的含水有机溶剂优选为含水乙醇。具体地，本发明活性成分的制备工艺为按重量比称取药材，以812倍量的水提取25次，每次11.5小时，过滤，合并滤液，滤液浓縮至相对密度为1.01.2之间，将浓縮液上已处理好的大孔吸附树脂柱，树脂先用低于15%的乙醇洗脱，至无糖洗脱液颜色变淡，改用25%~80%的乙醇洗脱3~10个柱体积，收集此部分洗脱液合并，浓縮，干燥即得活性成分提取物，活性成分加入制药上可接受的药用辅料，按常规制药方法，制成所需制剂。具体地，本发明活性成分的制备工艺还可以为按重量比称取药材，以812倍量的含水乙醇回流提取25次，每次11.5小时，过滤，合并滤液，滤液减压浓縮至除去残留有机溶剂，将浓縮液上已处理好的大孔吸附树脂柱，树脂先用低于15%的乙醇洗脱，至无糖洗脱液颜色变淡，改用25%~80%的乙醇洗脱3~10个柱体积，收集此部分洗脱液合并，浓縮，干燥即得活性成分提取物，活性成分加入制药上可接受的药用辅料，按常规制药方法，制成所需制剂。本发明中，所指的提取可以是煎煮提取、回流提取、浸泡提取、渗漉提取等。本发明中，提取所用的含水有机溶剂优选为有机溶剂溶度低于50%，当为含水乙醇时，所用的提取溶剂乙醇优选为溶度低于50%的乙醇。本发明上述提取方法并不是唯一的，只是一种非限制性的举例。提取次数可以是14次，提取时间可以是0.53小时，所用的提取的乙醇的浓度也可以是其它的浓度，干燥法可以是真空干燥，也可以是喷雾干燥，还可以是冷冻干燥。含由本发明活性成分的制剂，主要是指口服制剂，可以是口服固体制剂，也可以是口服液体制剂，如硬胶囊、软胶囊、素片、包衣片、颗粒剂、滴丸、糖浆、口服液等。本发明所用的药剂学上的辅料，包括粘合剂(可以是聚维酮、淀粉浆、纤维素等)、崩解剂(可以是干燥淀粉、羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素、聚乙烯比咯垸酮等)、润滑剂(可以是滑石粉、硬脂酸、硬脂酸钙镁、硬脂酸钙等)、矫味剂(可以是蔗糖、阿司巴甜、甜菊素、果糖等)、稳定剂(可以是对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯等)、稀释剂(可以是淀粉、糊精、糖粉、乳糖等)、润湿剂(可以是水或乙醇)、助流剂(可以是微粉硅胶)、赋形剂(可以是糖类衍生物如乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇；淀粉类衍生物如玉米淀粉、土豆淀粉、糊精或羧甲基淀粉；纤维素衍生物如结晶纤维、羟丙基纤维、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钙；硅酸盐衍生物如硅酸镁铝；磷酸盐衍生物如磷酸钙；硫酸盐衍生物如硫酸钙；碳酸盐衍生物如碳酸钙；阿拉伯胶；右旋糖苷)。图1为复方与单一组分对四氯化碳小鼠肝损伤模型血液天冬氨酸转氨酶含量的影响图图2为本发明不同配比对四氯化碳小鼠肝损伤模型血液天冬氨酸转氨酶含量的影响具体实施例一、组合物制剂制备方法最佳实施例下列实施例旨在进一步举例描述本发明的实用性，而不是以任何方式限制本发明。实施例1称取胡黄连300g，丹参500g，粉碎，合并，加入8L30X的乙醇，回流提取3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，60'C减压浓縮，至无醇，相对密度为1.2左右，上HP—20大孔吸附树脂柱，先用15%的乙醇洗至糖反应(Molish反应呈阴性)，弃15%乙醇洗脱液，改用50%的乙醇洗脱约IOL，合并醇洗液，60。C减压浓縮，真空干燥，粉碎，即得本发明活性成分提取物。往活性中加入制药上可接受的药用辅料，按常规制药方法，制成口服制剂。实施例2称取胡黄连300g，丹参600g，10倍量水煎煮提取3次，每次1小时，过滤，合并水煎煮提取液，水煎液减压浓缩至相对密度为1.05，上已处理好的NKA-9型大孔吸附树脂，先用10%的乙醇洗脱至无糖、洗脱液颜色变淡，去10°/。的乙醇洗脱液，改用30°/。的乙醇洗脱10个柱体积，收集30%的乙醇洗脱液，合并，减压浓縮，真空干燥，粉碎，得活性成分提取物，往活性中加入制药上可接受的药用辅料，按常规制药方法，制成口服颗粒剂。实施例3称取胡黄连2000g，丹参6000g，12倍量、IO倍量、10倍量水煎煮提取3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，滤液减压浓縮至相对密度约为1.20，浓縮液上已处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱，树脂先以5%的乙醇洗脱至洗脱液颜色变淡，无糖，弃5%乙醇洗脱液，改用40%的乙醇洗脱5个柱体积，收集40%的乙醇洗脱液部分，合并，减压浓縮，喷雾干燥，得活性成分提取物，往活性成分中加入制药上可接受的药用辅料，按常规制药方法，压制成素片。实施例4称取胡黄连400g，丹参100g，粉碎，合并，加入8L20X的甲醇，回流提取3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，6(TC减压浓縮，至无醇，相对密度为l.l左右，上D-lOl大孔吸附树脂柱，先用3%的乙醇洗至糖反应(Molish反应呈阴性)，弃3%乙醇洗脱液，改用45%的乙醇洗脱约6个柱体积，合并醇洗液，6(TC减压浓縮，真空干燥，粉碎，即得本发明活性成分提取物。往活性中加入制药上可接受的药用辅料，按常规制药方法，制成口服胶囊剂。实施例5称取胡黄连200g，丹参200g，粉碎，合并，加入10L15X的丙酮，回流提取3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，6(TC减压浓縮，至无醇，相对密度为1.2左右，上HP-20大孔吸附树脂柱，先用水洗至无糖反应(Molish反应呈阴性)，弃水洗脱液，改用55%的乙醇洗脱约3个柱体积，合并醇洗液，6(TC减压浓縮，真空千燥，粉碎，即得本发明活性成分提取物。往活性中加入制药上可接受的药用辅料，按常规制药方法，制成口服滴丸剂。实施例6称取胡黄连100g，丹参600g，粉碎，合并，加入8L30M的丙醇，回流提取3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，6(TC减压浓縮，至无醇，相对密度为1.2左右，上HP—20大孔吸附树脂柱，先用15%的乙醇洗至无糖反应(Molish反应呈阴性)，弃15%乙醇洗脱液，改用60%的乙醇洗脱约IOL，合并醇洗液，6(TC减压浓縮，真空干燥，粉碎，即得本发明活性成分提取物。往活性中加入制药上可接受的药用辅料，按常规制药方法，制成口服包衣片剂。实施例7称取胡黄连300g，丹参100g，12倍量、10倍量、10倍量水煎煮提取3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，滤液减压浓縮至相对密度约为1.20，浓縮液上己处理好的Sephadex-LH20柱，树脂先以5%的乙醇洗脱至洗脱液颜色变淡，无糖，弃5%乙醇洗脱液，改用60%的乙醇洗脱5个柱体积，收集60%的乙醇洗脱液部分，合并，减压浓縮，喷雾干燥，得活性成分提取物，往活性成分中加入制药上可接受的药用辅料，按常规制药方法，压制成素片。实施例8称取胡黄连400g，丹参100g，粉碎，合并，加入8L40%的乙醇，60。C浸泡提取3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，6(TC减压浓縮，至无醇，相对密度为1.1左右，上聚酰胺吸附树脂柱，先用10。/。的乙醇洗至糖反应(Molish反应呈阴性)，弃10%乙醇洗脱液，改用45%的乙醇洗脱约6个柱体积，合并醇洗液，6(TC减压浓縮，真空干燥，粉碎，即得本发明活性成分提取物。往活性中加入制药上可接受的药用辅料，按常规制药方法，制成口服胶囊剂。实施例9称取胡黄连1000g，丹参100g，粉碎，合并，加入8L50X的丙酮，渗漉提取至渗漉液颜色变淡，合并渗漉液，6(TC减压浓縮，至无丙酮味，相对密度为1.2左右，上MCI-GEL-CHP-20P柱，先用10%的乙醇洗至洗脱液颜色变淡，弃10%乙醇洗脱液，改用80%的乙醇洗脱约8个柱体积，合并醇洗液，6(TC减压浓縮，真空干燥，粉碎，即得本发明活性成分提取物。往活性中加入制药上可接受的药用辅料，按常规制药方法，制成口服胶囊剂。实施例10称取胡黄连100g，丹参1000g，粉碎，合并，加入8L50X的丙醇，室温浸泡提取三次，每次12小时，合并浸提液，60。C减压浓縮，至无醇，相对密度为1.2左右，上反相硅胶柱，先用10%的甲醇洗至洗脱液颜色变淡，弃10%甲醇洗脱液，改用60%的甲醇洗脱约8个柱体积，合并醇洗液，6(TC减压浓縮，真空干燥，粉碎，即得本发明活性成分提取物。往活性中加入制药上可接受的药用辅料，按常规制药方法，制成口服片剂。二、本发明药理实施例以下以实施例2工艺所得活性成分为药效学实验活性成分对其有益效果进行评价，需要指出的是，实施例2工艺仅仅是一种非限制型的举例，而不是在于限制本发明所得的活性成分只能通过实施例2方式制备得到。1、复方与单一组分的药效学比较(对四氯化碳小鼠肝损伤模型实验)受试药PSA丹参提取物、PSB复方提取物(丹参与胡黄连的重量比2:1)、PSC胡黄连提取物，同工艺提取；本次试验设计剂量为19.5mg/kg，2次/日。从结果中可以看出阳性药物联苯双酯和药物PSB具有比较明显降低四氯化碳小鼠肝损伤模型中血液中谷丙转移酶(ALT)的作用，结果见图1，与模型组相比，*P<0.05，**P<0,01。2、丹参与胡黄连不同配比药效学研究为了筛选最佳配比的药物，我们制备了5个不同的配比，分别为A、B、C、D和E。为了更为客观的比较各个配比的药效作用，我们在选用四氯化碳致肝损伤模型的基础上再选用免疫性损伤模型来评价药物的药效作用。受试药胡黄连、丹参A3:1、B2:1、C1:3、D1:2、E1:1，小鼠拟用剂量19.5mg/kg，2次/天；大鼠拟用剂量13.5mg/kg，2次/天。2.1对四氯化碳小鼠模型血液谷丙转移酶含量的影响实验结果(图2)显示药物C、D、E能比较显著降低小鼠血液中谷丙转移酵的活性，与模型组相比，有显著性差异，即对四氯化碳对小鼠的肝损伤由较强的保护作用，其中D效果优于其他药物组,与模型组相比，**P<0.01，***P<0.001。2.2对猪血清免疫肝纤维化大鼠胶原酶活性的影响结果(表2)显示药物C、D、E能显著增加小鼠肝脏胶原酶活性，而肝脏胶原活性的升高有助于降低肝胶原蛋白的含量，减少胶原沉积。肝胶原蛋白的含量与理论相似，模型组肝内胶原大量沉积，各用药组和秋水仙碱组较之均有不同程度减少，其中提取物D效果好于其他各组。表2对猪血清免疫肝纤维化大鼠胶原酶活性和肝胶原蛋白的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>*与模型组比较p<0.05，"与模型组比较p<0.013、本发明复方(丹参与胡黄连重量比为2:1)对CC14所致肝损伤的保护作用(1).动物SD大鼠70只，体重(200士20g)，购于北京大学医学院试验动物中心。(2).药品本发明提取物、依本发明方法所得的丹参提取物、胡黄连提取物(由北京星昊嘉宇医药有限公司中药室提供)(3).试验分组阴性对照组(正常组)大鼠10只，每三天皮下注射等剂量生理盐水，持续80天。60只大鼠于试验第一天起在背部皮下注射50XCC14植物油溶液，0.2mL/100g体重，每3天一次，持续80天。从第二个月开始，将造模成功的60只大鼠随机分为6组阳性对照组(模型组)正常喂饲至试验结束；治疗组分为丹参组(灌胃给药合2.5g生药/天)，胡黄连组(灌胃给药合1.5g/天)、本发明高、中、低剂量组(分别灌胃给药合"丹参+胡黄连"5g+2.5g、2.5g+1.2g、1.23g+0.6g生药/天)，自第2个月开始灌胃给药，每日1次，至试验结束。(4)血清生化指标的检査、肝组织脂质过氧化水平及肝羟脯氨酸含量测定丙氨酸转氨酶(ALT)，天冬氨酸转氨酶(AST)，赖氏法，按试剂盒说明书进行；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)的测定均按试剂盒说明书进行。(5)组织学检查取肝脏左叶相同部位，置10%中性甲醛固定24-48小时后常规制片，Mallory染色。表l本发明组合物对CCW所致肝损伤大鼠ALT、AST、MDA、SOD、Hyp的影响(；土s)剂量XTfX^TMDA^55Hyp(g/kg)CU/L)(U/L)_(nmol/L)_(u/L)—1/L)><0.05，PO.Ol，与模型组相比。试验结果由表1可知，模型组中血清AST、ALT较正常组明显升高，各治疗组的值也较正常组高，但与模型组相比，有所下降，其中本发明中剂量组、高剂量组较模型组相比，ALT、AST水平下降有显著性(P<0.05，PO.Ol)，本发明中剂量组和高剂量组较单独使用丹参或胡黄连相比，联合使用的血清ALT、AST<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>常型参正模丹水平较单独使用低，在降低血清转氨酶方面，两药联合使用具有协同作用。与正常组相比，模型组的肝羟脯氨酸明显升高，大剂量组与正常组差异无显著性，其余各治疗组较正常组均显著升高，但各治疗组较模型组相比，均显著降低，本发明中剂量和高剂量组也明显低于单独用丹参组或胡黄连组。肝组织中的MDA、SOD水平，模型组SOD水平明显低于正常组，MDA水平高于正常组；各治疗组SOD水平也较正常组要低，但与模型组相比，SOD水平均要明显升高，差异具有显著性；各治疗组MDA水平也较正常组高，高剂量组与正常组差异无显著性，但与模型组相比，各治疗组要明显低于模型组，均具有显著性。从上述结果可知，本发明联合使用丹参和胡黄连，对由CC14诱导的肝损伤，在降低血清转氨酶、肝羟脯氨酸水平、MDA含量及升高SOD含量方面具有协同作用(较单独用药相比)。Mallory染色切片光镜下，正常组肝脏结构正常，肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列，未见明显病变。模型组肝脏病变严重，可见小叶中心大量肝细胞坏死明显，部分肝细胞脂肪变性肿胀，汇管区可见炎性细胞浸润。治疗组肝小叶内以肝细胞脂肪变性为主要表现，仅可见少量肝细胞坏死。本发明大剂量治疗组病变不明显。权利要求1、一种用于保肝降酶的活性成分组合物，其特征在于该组合物由胡黄连和丹参组成。2、如权利要求1所述的保肝降酶的活性成分组合物，其特征在于所述的胡黄连和丹参的重量配比为1:10-10:1。3、如权利要求2所述的保肝降酶的活性成分组合物，其特征在于所述的胡黄连与所述的丹参的重量比为1:4-4:1。4、如权利要求1所述的保肝降酶的活性成分组合物，其特征在于所述的胡黄连和丹参可以分别由含胡黄连苷提取物和含丹酚酸的提取物代替。5、一种制备如权利要求1、2或3所述的保肝降酶的活性成分组合物的方法，其特征在于包括如下过程按重量配比称取药材，用水或含水有机溶剂提取，过滤，滤液减压浓缩，至除去其中有机溶剂，浓縮液预装有填料的色谱柱，先用低于15%的含水有机溶剂洗脱至无糖、洗脱液颜色变淡，弃此部分洗脱液，改用25%80%的含水有机溶剂洗脱，收集此部分洗脱液，减压浓縮，干燥，即得活性成分。活性称分加入制药上可接受的药用辅料，按常规制药方法，制成制剂。6、如权利要求5所述的方法，其特征是所述的含水有机溶剂是指含水乙醇、含水甲醇、含水丙醇、含水丙酮中的任一种；所述的色谱柱中预装的填料为大孔树脂、聚酰胺、葡聚糖凝胶、反相硅胶、MCI-GEL-CHP-20P中的任一种。7、如权利要求5所述的方法，其中提取所用的溶剂优选水，填料优选大孔吸附树脂，洗脱填料所用的含水有机溶剂优选含水乙醇，具体制备方法为按重量比称取药材，以812倍量的水提取2~5次，每次11.5小时，过滤，合并滤液，滤液浓縮至相对密度为1.0~1.2之间，将浓缩液上已处理好的大孔吸附树脂柱，树脂先用低于15%的乙醇洗脱，至无糖、洗脱液颜色变淡，改用25%~80%的乙醇洗脱310个柱体积，收集此部分洗脱液合并，浓縮，干燥即得活性成分提取物，活性成分加入制药上可接受的药用辅料，按常规制药方法，制成所需制剂。8、如权利要求5所述的方法，其中提取所用的含水有机溶剂优选含水乙醇，填料优选大孔吸附树脂，洗脱填料所用的含水有机溶剂优选含水乙醇，其制备方法为按重量比称取药材，以8~12倍量的含水乙醇提取25次，每次11.5小时，过滤，合并滤液，滤液浓縮至除去残留乙醇，将浓縮液上己处理好的大孔吸附树脂柱，树脂先用低于15%的乙醇洗脱，至无糖洗脱液颜色变淡，改用25%80%的乙醇洗脱3~10个柱体积，收集此部分洗脱液合并，浓縮，干燥即得活性成分提取物，活性成分加入制药上可接受的药用辅料，按常规制药方法，制成所需制剂。9、如权利要求5、7或8所述的制备保肝降酶活性成分组合物的方法，其特征在于所述的制剂为口服给药制剂。10、根据权利要求1、2、3或4所述的活性成分组合物在制备具有保肝、降酶、抗肝纤维化功能的药物中的应用。全文摘要本发明设计一种具有保肝降酶作用的药物，该药物是由丹参和胡黄连两味药组成，经水或醇提后，过大孔树脂柱，得组合物活性组分，加入制药上可接受的药用辅剂，采用常规的制药方法，制成各种制剂。本发明组合物具有保肝、降酶、防止肝纤维化的作用。文档编号A61K31/7042GK101284071SQ200810007829公开日2008年10月15日申请日期2008年2月25日优先权日2007年2月27日发明者张树祥,顺郭申请人:北京星昊嘉宇医药科技有限公司