专利名称：：含丹参酚酸a的药物组合物、其制备方法、用途及含有该组合物的冻干粉针剂及水针剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及到一种药物组合物及其用途，该组合物含有一定比例的丹参酚酸A弱碱性钠或钾盐，还涉及该组合物的制备方法，以及含有该药物组合物的冻干粉针、水针剂。
背景技术：
：丹参酚酸A(SalvianolicacidA)为中医常用活血化瘀药丹参SalviamiltiorrhizaBge中存在的酚酸类化合物，天然含量约为0.01%0.08%之间，最早为北京药物所黎莲娘教授首先在丹参中发现LiLNetal.SalvianolicacidA,anewdepsidefromrootsofSalviamiltiorrhiga,PlantaMedica,1984;50:227随后，黎莲娘教授等发现丹参中的水溶性酚酸类化合物具有抗血栓，改善血液循环，抗氧化损伤，改善学习记忆等重要生物活性，为丹参中比早期发现的醌式二萜类化合物(以丹参酮IIA为代表)更为重要的，更能代表丹参活血化瘀作用的一类天然产物。中国医学科学院药物研究所，中草药现代研究，P498~522，北京医科大学，中国协和医科大学联合出版社1996。医科院药物所的研究工作表明丹参总酚酸中含量最高的为丹参酚酸B，抗凝和抗氧化活性最强的为丹参酚酸A。随后，医科院药物所经多年研发，成功开发中药一类新药丹参酚酸B，用于心脑血管疾病并转让天津天士力集团生产。另外，中科院上海药物所朱大元教授发现丹参中酚酸类化合物主要以镁盐形式存在，并成功开发二类中药丹参总酚酸B及其冻干粉针，转让给上海绿谷药业生产，绿谷的产品主要以丹参酚酸B镁盐为主，色谱归一化含量超过90%，产品第一年上市已超过4000万销售额。丹参酚酸A活性高于丹参酚酸B，而且分子量较丹参酚酸B分子量小224.16左右，故更容易透膜进入细胞，予期应有更好的口服生物利用度和血脑屏障透过率，是较丹参酚酸B更有治疗潜力的化合物。高纯度的丹参酸A的水溶性小于5mg/ml，不能直接用于注射给药，且丹参酚酸A为目前已知最强的抗氧化剂，其制剂稳定性为十分困难的问题，其注射水针剂的稳定性更难以解决。因此获得稳定的、可溶于水的丹参酚酸A制剂是解决丹参酚酸A临床使用局限的关键问题。
发明内容本发明的目的在于提供一种在水溶液中稳定性强、溶解度高、不易被氧化、能耐受低温、高温的丹参酚酸A组合物。本发明的另一目的在于提供上述丹参酚酸A组合物制备方法。本发明的再一目的是提供一种稳定性好、均匀度高、符合药品复水性要求的冻干组合物。本发明的再一目的是提供一种能耐受高温灭菌、澄明度好、可以常温保存两年以上、符合注射液要求的丹参酚酸A注射液。本发明的再一目的是提供含有丹参酚酸A药物组合物的冻干粉针剂和水针剂的制备方法。本发明的再一目的是提供含有丹参酚酸A药物组合物用于制备治疗心脑血管疾病药物的用途。实现发明目的的技术方案是这样解决的把碱性钠、钾盐溶于水中，把丹参酚酸A溶于或分散于水或乙醇中，把两种溶液混合，充分搅拌使其反应完全，至溶液澄清，常规冻干或减压蒸干，即得。或在澄清溶液中直接加入抗氧剂、螯合剂和赋形剂中的一种或几种，然后通过一般制备工艺制成冻干粉针剂或水针剂。碱性钠或钾盐是指枸橼酸钠(钾)、磷酸氢二钠(钾)、苯甲酸钠(钾)、琥珀酸钠(钾)、对氨基水杨酸钠(钾)、对羟基苯甲酸钠(钾)、邻、对、间苯甲酸钠(钾)、邻、对、间-羟苯甲酸钠(钾)等碱性钠或钾盐中的一种或几种。丹参酚酸A和碱性钠或钾盐的摩尔比为1:0.3-10.0。抗氧化剂为亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、硫代硫酸氢钠或维生素C中的一种或几种，其用量为临床可接受的常规用量，即为注射液的0.05-0.2%(w/v)。螯合剂为乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠或乙二胺四乙酸二钠钙中的一种或几种其用量为临床可接受的常规用量，即为注射液的0.001-1.0%(w/v)。赋形剂为甘露醇、山梨醇、氯化钠、葡萄糖、果糖，蔗糖、木糖醇、乳糖中的一种或几种。较之已有技术，本发明所述的丹参酚酸A组合物较丹参酚酸A本身水溶性大提高，水溶液稳定，低温不析出，能耐受高温灭菌，已经满足药用要求。所制得的冻干粉针及水针剂放置稳定，可满足临床的使用需求。使用时，本发明所制备的冻干组合物内加入氯化钠注射液或葡萄糖注射液可快速溶解，水针组合物稳定性好，故可结合氯化钠注射液或葡萄糖注射液一起使用。该组合物大鼠心脏缺血/再灌注损伤及脑缺血均有较好的保护作用，提示可用于缺血性心脑血管疾病的治疗。实施例中的丹参酚酸A均由山东靶点药物研究有限公司工业色谱研究室自中药丹参中分离获得，高效液相外标法测定其含量为98.5%。具体实施例方式实施例一取丹参酚酸A5.0g(O.Olmol)溶解于250ml乙醇中，取枸橼酸钠0.9803g(0.0033mol)溶于100ml注射用水中，将两种溶液混合，继续搅拌30min直至反应完全。冻干即得。实施例二称取依实施例一制得的丹参酚酸A组合物5.98g溶于300ml注射用水中，继续搅拌使完全溶解。再加入4.0g甘露醇、0.6g亚硫酸氢钠、0.6g乙二胺四乙酸二钠朽，搅拌溶解，加入0.35g的针用活性炭常温搅拌30min，过滤，定溶至400ml，分装，装量为每瓶含25mg丹参酚酸A，于-503(TC冷冻干燥，加盖，封口，包装，即得冻干粉针。实施例三、取丹参酚酸A5.0g(0.01mol)分散于250ml注射用水中，取磷酸氢二钠0.7099g(0.005mol)溶于100ml注射用水中，将两种溶液混合，继续搅拌30min直至反应完全。再加入4.0g乳糖、0.6g亚硫酸氢钠，搅拌溶解，加入0.35g的针用活性炭常温搅拌30min，过滤，定溶至400ml，分装，装量为每瓶含25mg丹参酚酸A，于-5030。C冷冻干燥，加盖，封口，包装，即得。实施例四取丹参酚酸A5.0g(O.Olmol)分散于250ml注射用水中，取苯甲酸钠1.411g(O.Olmol)溶于100ml注射用水中，将两种溶液混合，继续搅拌30min直至反应完全。再加入4.0g乳糖、0.6g亚硫酸氢钠、乙二胺四乙酸二钠0.6g，搅拌溶解，加入0.35g的针用活性炭常温搅拌30min，过滤，定溶至400ml，分装，装量为每瓶含25mg丹参酚酸A，于-503(TC冷冻干燥，加盖，封口，包装，即得。实施例五取丹参酚酸A5.0g(0.01mol)溶于30ml药用乙醇中，再加入220ml注射用水，搅拌均匀，取枸橼酸钾L071g(0.0033mol)溶于100ml注射用水中，将两种溶液混合，继续搅拌30min直至反应完全。再加入4.0g甘露醇，搅拌溶解，加入0.35g的针用活性炭常温搅拌30min，过滤，定溶至400ml，分装，装量为每瓶含25mg丹参酚酸A，于-503(TC冷冻干燥，加盖，封口，包装，即得。实施例六取丹参酚酸A5.0g(0.01mol)溶于30ml药用乙醇中，再加入220ml注射用水，搅拌均匀，取苯甲酸钠1.411g(O.Olmol)溶于100ml注射用水中，将两种溶液混合，继续搅拌30min直至反应完全。再加入4.0g葡萄糖，搅拌溶解，加入0.35g的针用活性炭常温搅拌30min，过滤，定溶至400ml，分装，装量为每瓶含25mg丹参酚酸A，于-5030'C冷冻干燥，加盖，封口，包装，即得。实施例七取丹参酚酸A5.0g(O.Olmol)分散于250ml注射用水中，取枸橼酸钠0.9803gC0.0033mo1)溶于100ml注射用水中，将两种溶液混合，继续搅拌30min直至反应完全。再加入0.6g亚硫酸氢钠和0.6g乙二胺四乙酸二钠钙，搅拌溶解，加入0.35g的针用活性炭常温搅拌30min，过滤，定溶至400ml，充氮分装，装量为每支含25mg丹参酚酸A，灭菌，加盖，封口，包装，即得。实施例八取丹参酚酸A5.0g(O.Olmol)溶于100ml药用乙醇中，再加入150ml注射用水，搅拌均匀，取磷酸氢二钠0.7099g(0.005mol)溶于100ml注射用水中，将两种溶液混合，继续搅拌30min直至反应完全。再加入0.6g亚硫酸氢钠和0.6g乙二胺四乙酸二钠钙，搅拌溶解，加入0.35g的针用活性炭常温搅拌30min，过滤，定溶至400ml，充氮分装，装量为每支含25mg丹参酚酸A，灭菌，加盖，封口，包装，即得。实施例九取丹参酚酸A5.0g(O.Olmol)溶于100ml药用乙醇中，再加入150ml注射用水，搅拌均匀，取苯甲酸钠1.411g(O.Olmol)溶于100ml注射用水中，将两种溶液混合，继续搅拌30min直至反应完全。再加入0.6g亚硫酸氢钠和0.6g乙二胺四乙酸二钠f丐，搅拌溶解，加入0.35g的针用活性炭常温搅拌30min，过滤，定溶至400ml，充氮分装，装量为每支含25mg丹参酚酸A，灭菌，加盖，封口，包装，即得。实施例十取丹参酚酸A5.0g(O.Olmol)溶于100ml乙醇中，再加入150ml注射用水，搅拌均匀，取枸橼酸钾1.071g(0.0033mol)溶于100ml注射用水中，将两种溶液混合，继续搅拌30min直至反应完全。再加入0.6g亚硫酸氢钠，搅拌溶解，加入0.35g的针用活性炭常温搅拌30min，过滤，定溶至400ml，充氮分装，装量为每支含25mg丹参酚酸A，灭菌，加盖，封口，包装，即得。实施例"l"*一取丹参酚酸A5.0g(O.Olmol)溶于50ml乙醇中，再加入200ml注射用水，搅拌均匀，取苯甲酸钠1.411g(O.Olmol)溶于100ml注射用水中，将两种溶液混合，继续搅拌30min直至反应完全。再加入0.6g亚硫酸氢钠，搅拌溶解，加入0.35g的针用活性炭常温搅拌30min，过滤，定溶至400ml，充氮分装，装量为每支含25mg丹参酚酸A，灭菌，加盖，封口，包装，即得。试验例1本试验例考察了丹参酚酸A及丹参酚酸A组合物(按实施例l制备)溶解度按中国药典(2005版)一部凡例中关于溶解度的试验法操作。分别称取研成细粉的丹参酚酸A及丹参酚酸A组合物，置于25ml25±2^的水溶液中，每隔5分钟强有力振摇30秒钟，观察30分钟内的溶解情况，如无目视可见的溶质颗粒时，即视为完全溶解。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>结论丹参酚酸A在水溶液中的溶解度小于5mg/ml，丹参酚酸A组合物在水溶液中的溶解度大于100mg/ml。试验例2本试验例考察了丹酚酸A组合物对心脏缺血/再灌注损伤的保护作用。按大鼠离体心脏法。缺氧再灌注组先通N2缺氧45分钟，后恢复正常灌流30分钟，与正常组比较，心肌丙二醛(MDA)含量增高，超氧化物歧化酶(SOD)活性下降。分别于灌流液中加丹酚酸A组合物(含丹酚酸A20umol/L，40umol/L)，然后进行缺氧再灌，则表现为心肌MDA含量较缺氧再灌注明显减少，对SOD活性亦有所改善。说明丹酚酸A组合物对心脏缺氧再灌注损伤有保护作用。丹酚酸A组合物对大鼠离体心脏缺氧再灌注时心肌丙二酸含量及超氧化物歧化酶活性的影响组别nSOD(U/mg蛋白)MDA(nmol/g心湿重)正常对照组835.4±1.7230±23缺氧再灌组830.6±2.6*390±55**丹酚酸A组合物(20umol/L)831.3±3.7289±19##丹酚酸A组合物(20扁1/L)833.1±2.5#265±46##注与正常对照比'P<0.05,''P<0.01;与缺氧再灌比"P<0.05，"P〈0.01;试验例3丹酚酸A组合物对大鼠局部脑缺血损伤的影响。1.分组与实验方法Wistar大鼠随机分为(l)假手术组(等容量溶剂)，(2)模型对照组(等容量溶剂)，(3)丹酚酸A组(6mg/kg，iv)，(4)丹酚酸A组合物低剂量组(以丹酚酸A计，3mg/kg，iv);(5)丹酚酸A组合物中剂量组(以丹酚酸A计，6mg/kg，iv);(6)丹酚酸A组合物高剂量组(以丹酚酸A计，12mg/kg，iv)。每组10只。禁食12小时后，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分离右侧颈总动脉，夹闭颈内、颈总动脉，颈外动脉近心端及远心端结扎，中间剪断。将颈外动脉游离端拉至与颈内动脉成一条直线，将栓线(选用直径0.24111111尼龙线，长度5.0cm)由颈外动脉插入至颅内，遇轻微阻力时停止，插入深度约为2cm。结扎颈外动脉开口，并打开颈总动脉动脉夹，消毒缝合伤口，造成左侧大脑中动脉缺血模型；假手术组仅进行右侧颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉的分离(以上实验均在23'C25X:进行)。术后各组动物静脉注射相应药物。24小时后按文献刘小光，徐理纳，一种能评价溶栓和抗溶栓的大鼠脑中动脉模型，药学学报，1995，30:662所述方法及标准观察并记录大鼠的行为障碍(A)提鼠尾观察前肢屈曲情况，如双前肢对称伸向地面，计为0分，如手术对侧前肢出现腕屈曲计为1分，肘屈曲计为2分，肩内旋计为3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩内旋者，计为4分。(B)将动物置于平地面上，分别推双肩向对侧移动，检査阻力。如双侧阻力对等且有力，计为O分，如向手术对侧推动时阻力下降者，根据下降程度不同分为轻、中、重三度，分别计为l，2和3分。(C)将动物双前肢置一金属网上，观察双前肢的肌张力。双前肢肌张力对等且有力者计为O分。同样根据手术对侧肌张力下降程度不同计为l，2和3分。(D)动物有不停地向一侧转圈者，计为1分。根据标准评分，满分为11分，分数越高，表示动物行为障碍越严重。行为评分后处死大鼠，取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，冠状切成5片，脑片用红四氮唑(TTC)染色，正常组织经染色后呈红色，梗塞组织呈白色，染色后照相，用中国航空航天大学病理图像分析软件求梗塞面积比。并测脑皮层MDA含量。数据用亍士s表示，以组间/检验进行统计学处理。2.结果如表所示，缺血24小时后，大鼠表Sa出明显的行为障碍，大鼠脑组织也出现明显的灶状缺血区，达到全脑的25%左右；给予不同剂量的丹酚酸A组合的，动物行为障碍有不同程度的减轻，大鼠脑缺血区也有明显好转，且呈剂量依赖性。与丹酚酸A组相比有显著性差异。详见下表。丹酚酸A组合物对大鼠局部脑缺血损伤的影响(n=10，7±s)组别行为障碍缺血面积(％)MDA(nmol/g湿重)假手术组模型对照组丹酚酸A组3mg/kg丹酚酸A组合物组6mg/kg___12mg/kg_____注与模型对照组比较'P〈0.05，"P<0.01，与丹酚酸A组比较，〈0.05，##P<0.01。003.55±1.129.02±1.6424.09±4.428.79±1.058.91±1.2423.11±2.705.29士0.14'7.33士3.08'20.67士2.66'4.68±0.34*5.79±1.28**#16.11±3.58**#3.27±0.19"#4.45±1.27**##10.12±3.67**##2.28±0.10**##权利要求1、一种含有丹参酚酸A及碱性钠或钾盐的组合物，其特征在于丹参酚酸A与碱性钠或钾盐的摩尔比为1∶0.3-10.0。2、根据权利要求1中所述的组合物，其特征在于碱性钠或钾盐选自以下的一种或几种，枸橼酸钠(钾)、磷酸氢二钠(钾)、苯甲酸钠(钾)、琥珀酸钠(钾)、对氨基水杨酸钠(钾)、对羟基苯甲酸钠(钾)、邻、对、间苯甲酸钠(钾)、邻、对、间-羟苯甲酸钠(钾)。3、如权利要求1中所述的组合物的制备工艺，其特征在于取丹参酚酸A溶于或分散于水或乙醇中，取碱性钠或钾盐的一种或几种溶于水中，将两种溶液混合，充分搅拌使它们完全澄清，常规冻干或减压蒸干，即得。4、一种冻干粉针剂、水针剂，其特征在于含有治疗剂量的如权利要求1所述的组合物及适量的抗氧化剂、螯合剂、赋形剂。5、如权利要求4所述的抗氧化剂，为亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、硫代硫酸氢钠或维生素C中的一种或几种。6、如权利要求4所述的螯合剂，是乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠或乙二胺四乙酸二钠钙中的一种或几种。7、如权利要求4所述的赋形剂，是甘露醇、山梨醇、氯化钠、葡萄糖、果糖，蔗糖、木糖醇、乳糖中的一种或几种。8、如权利要求4所述的冻干粉针、水针剂的制备方法，其特征在于包括下列步骤1)称量丹参酚酸A与碱性钠、钾盐的组合物溶于适量水中；或直接取丹参酚酸A分散于水中，取碱性钠、钾盐溶于水中，将二者混合，充分搅拌使澄清；2)加入适量的抗氧化剂、螯合剂、赋形剂中的一种或几种；3)过滤、分装；4)灭菌后得水针剂，或冻干后得冻干粉针。9、如权利要求1所述的组合物在制备治疗缺血性心、脑血管疾病药物中的用途。全文摘要本发明涉及一种含有丹参酚酸A的药物组合物、其用途及制备方法及含有该组合物的冻干粉针剂、水针剂。该药用组合物的制备方法如下取丹参酚酸A溶于或分散于水或乙醇中，取碱性钠、钾盐的一种或几种溶于水中，将两种溶液混合，充分搅拌使它们完全澄清，常规冻干或减压蒸干，即得，或直接将上述水溶液中加入药用辅料制成冻干粉针剂或水针剂。本发明提供的丹酚酸A组合物在水溶液中稳定性强、溶解度高、不易被氧化；制备方法工艺性好、操作简单，生产成本低，可用于制备治闻缺血性心、脑血管疾病的药物。含丹酚酸A组合物的冻干粉针、水针稳定性好、均匀度高、符合药品要求。文档编号A61K31/21GK101596182SQ200810016680公开日2009年12月9日申请日期2008年6月5日优先权日2008年6月5日发明者珂刘,刘军锋,猛陈,马玲君申请人:山东靶点药物研究有限公司