专利名称：：一种排石胶囊的制备方法
技术领域：
：本发明涉及天然药物领域，具体涉及一种排石胶囊的制备方法。技术背景"排石颗粒"是上世纪70年代，由南京同仁堂制药厂(申请人前身)在《太平惠明和剂局方》"八正散"的基础上，结合临床病情特点精心筛选研究设计出的排石处方来。排石颗粒处方原收载于江苏省质量标准88年版的排石冲剂，现收载于中国药典2005年版。选用下列中药材连钱草、车前子(盐水炒)、木通、徐长卿、石韦、忍冬藤、滑石、瞿麦、苘麻子和甘草，通过用水煎煮，浓縮成浸膏，再将浸膏与药用辅料混合制成颗粒剂，每袋装20g(每g颗粒含生药2.7g)，患者一次服用l袋，一日3次。相当于每日服用生药量为162g。由于原制剂开发上市较早，提取制备工艺较简单，质控方法较落后，服用剂量较大，冲剂服用不便而且味道不适，给患者带来了很多不便。
发明内容本发明运用现代提取、分离、纯化以及制剂技术，在将药材提取后再制成胶囊，如果按与颗粒剂同样的生药量162g计，则本发明的胶囊患者服用剂量小，每日3次，每次服4粒，方便了患者服用；药理毒理试验结果显示，本品毒副作用较少，另外，胶囊剂生产、储运、携带方便，经研究，所选工艺可行。本发明的制备方法如下a、连钱草用乙醇提取、浓縮，过D101大孔树脂，乙醇洗脱，浓缩得浸膏；b、徐长卿用水蒸气蒸馏，蒸馏液冷却，得丹皮酚结晶，药渣备用；丹皮酚溶于乙醇中，再加入到P-环糊精的水溶液中，搅拌，冷藏，抽滤，烘干，得白色干燥粉末；c、木通、忍冬藤、石韦、瞿麦、苘麻子、车前子、滑石、甘草及徐长卿药渣加水煎煮，滤过，滤液浓缩，得浸膏；d、将a、c两部分浸膏合并，千燥得药粉，再与b步骤的干燥粉末混匀，加入药用辅料制成胶囊。优选的配方中各中药材的重量比连钱草40-60车前子5-10木通5-10徐长卿5-10石韦5-10忍冬藤10-18滑石10-18瞿麦5-10苘麻子5-10甘草10-18。上述中c步骤在滤液浓縮后进一步包括将浓缩的滤液加入乙醇，静置，过滤，滤液减压回收乙醇，进一步浓縮，得浸膏。其中乙醇的浓度优选5080%，本发明中乙醇的浓度均为重量百分比。上述a步骤中提取用的乙醇浓度优选40-80°/o。上述&步骤中洗脱用的乙醇浓度优选95%。上述b步骤中e-环糊精的量优选丹皮酚重量的5~15倍。更优选10倍。上述药用辅料优选自填充剂、崩解剂、稀释剂、粘合剂、润滑剂中的一种或几种。更优选的药用辅料是淀粉和硬脂酸镁。以干燥药粉重量计，淀粉和硬脂酸镁的重量优选分别占30%、0.5%。在排石颗粒的配方中，连钱草为方中君药，且用量占处方量的1/3之多，针对其利尿排石、抗炎的药理作用，主要含黄酮和以熊果酸为代表的三萜酸类成分，以脂溶性为主，因此，原水提取工艺利用率低，我们以乙醇提取代替原工艺的水提,且在此基础上用大孔树脂纯化，以降低其出膏率。下面是提取连钱草的几个因素的选择试验一、提取用乙醇浓度选择下表中试验号l、2、3分别代表用45%、60%、75%的乙醇提取后浸膏中各成分的含量表l正交试验的验证试验结果试验号总黄酮含量(mg/g生药)出固率(%)三萜酸(mg/g生药)19.5811.065.67528.9511.875.49039.3511.385.545平均9.2911.445.570验证试验结果说明，用40%~80%乙醇提取工艺基本稳定。结合预实验结果,考虑到连钱草处方量大且出膏率高的特点，我们拟选用大孔树脂精制工艺。二、树脂类型选择的试验分别称取处理好的不同型号树脂(预先用布氏漏斗抽滤至干)10g,装柱。取连钱草样品溶液(0.5g/ml)30ml上样，静置2h，用0.5ml/min流速过柱，反复上样两次，用水洗脱，收集水洗液700ml至无色，继用95%乙醇洗脱，收集洗脱液700ml，分别将洗脱液浓縮至100ml。以总黄酮、总三萜为指标考察不同树脂的比吸附量，比洗脱量。比吸附量为单位质量干树脂所吸附指标成分的总和，计算公式为A=(M±-M残-M水)/M,比洗脱量为吸附达饱和后，用一定浓度的乙醇洗脱至终点，单位质量干树脂洗脱成分的总和，计算公式为E:M^M，实验结果如下表2总黄酮测定结果树脂型号比吸附量(mg/g)比洗脱量(mg/g)洗脱率％AB-8型D101型DH201型DH301型4.374.394.564.464.094.294.234.0693.4297.7792.1790.99表3三萜酸测定结果树脂型号比吸附量(mg/g)比洗脱量(mg/g)洗脱率％AB-8型4.433.6181.51D101型4,173,5184.10DH201型4.283.4380.10DH301型4.753.6276.17结合各指标的测定结果，优选D101大孔树脂。三、洗脱溶媒的选择分别取十份D101大孔树脂约30g，装柱(2.5cmX18cm，预测柱体积为40ml)，用水洗至无醇味，取上述供试品溶液40ml(0.5g生药/ml)分别上样，静置过夜，用水洗脱至无色,每根柱用不同浓度的乙醇10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、95°/。分别洗脱，收集洗脱液500ml，测定其总黄酮及总三萜酸的含量，实验结果如下表。表4不同部位洗脱液总黄酮的测定结果总黄酮量(mg)洗脱率(％)原液179.561水43.84110%14.35310,58%20%23.49017.31%30%49.10636.18鄉78.48157.8350%110.95981.7660%124,3291.6070%129.33695.3080%132.0397.2895%134.0498.76表5不同部位洗脱液总三萜酸的测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>结果表明，三萜酸成分95%乙醇洗脱部位洗脱率可达80.99%，黄酮类成分约98%可被95%乙醇洗脱，收集95%洗脱液，因此最优选的洗脱用乙醇浓度是95%。徐长卿含有1%丹皮酚，具有显著的镇痛作用，根据丹皮酚挥发性大、熔点低、水溶性差的特点，为提高制剂的提取利用率以及为保证制剂的稳定性，本发明单独用水蒸气提取并采用包合技术提高其稳定性。考虑到其非挥发性成分活性不明确，故将其药渣合并其它药味水煎，以确保疗效。木通、石韦、忍冬藤、苘麻子、车前子、瞿麦、甘草等味根据原工艺及文献报道水煎剂利尿作用明显，故采用水提。考虑到水提物中含杂质多，优选在水提后采用醇沉，以分离纯化。不同的乙醇浓度醇沉后结果不同，见表表6木通等除杂工艺的研究结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表6可见最优选的醇沉浓度为70%乙醇。采用本发明制备方法得到的药物粉末平均每克相当于35克生药，远远高于现有技术中每克相当于2.7克生药。这对制备成制剂及方便患者服用具有积极所用。因此通过添加简单的辅料一、预防给药大鼠肾结石模型试验取清洁级雄性SD大鼠60只，于清洁级环境中适应性饲养1周后随机均分为6组，每组10只，分别为正常对照组、模型对照组、阳性药(排石颗茅立，即原剂型)对照组、本发明排石胶囊大、中、小剂量组(即表7表10中的大剂量组、中剂量组、小剂量组)。除正常对照组每天灌胃给予蒸馏水10ml/kg外，其余5组大鼠参照文献的方法开始造模(每天均用含1%乙二醇的冷开水作为饮用水，另用2y。氯化铵按2ml/只灌胃)，同时阳性药对照组、排石胶囊大、中、小剂量组分别按56、56、28、14g生药/kg的剂量灌胃给药(其中排石胶囊大剂量约相当于拟临床人用量的20倍)，模型对照组灌胃给予蒸馏水，各组动物给药容量均为10ml/kg。连续造模且灌胃给药4周。实验结束前ld用代谢笼分别收集各大鼠24h空腹尿液，测定24h排尿量及24h尿钙(Ca2+)分泌量(甲基百里香酚蓝比色法测定)，且每组各解剖2只大鼠(解剖采血并分离血清)，发现模型成功且有一定的药效作用。末次给药lh后，大鼠眼眶静脉丛采血2ml，3600rpm离心10min后取上层血清用于生化测定二乙酰-肟比色法测血清尿素氮(BUN)水平、除蛋白法测肌酐(Crea)水平。大鼠颈椎脱臼处死后取两侧肾称重，计算肾脏的脏器系数。每只大鼠取右肾10%甲醛溶液固定，用于肾组织病理学检查；左肾超低温(-65'C)保存，用于测定肾组织总钙(Ca2+)含量。模型对照组大鼠在饮用乙二醇加氯化铵溶液后，l周后相继出现食欲减退、精神萎靡、毛发渐黄而乱、活动减少，比同时间的正常对照组大鼠体重明显减小(P〈0.050.01);给药组的大鼠的尿量明显增加，精神、饮食活动等好于对照组，但体重比同时间的模型对照组大鼠未见明显增加。解剖后肾脏的肉眼观察结果正常对照组大鼠的肾脏呈规则的弯月形，鲜红色或略带紫红色；模型组大鼠肾脏肿胀、发白或泛黄，其中7只肾盏内肉眼可见微结石，用手触摸肾组织有明显的细砂、摩擦感；给药组大鼠肾脏则多为红色，肿胀等情况较模型组轻。与模型对照组比较，大剂量组大鼠肾脏重量显著减轻，24h排尿量显著增加(P〈0.050.01);排石颗粒(原剂型)组大鼠的上述指标仅24h排尿量有显著增加(P<0.01)。结果见表7表10。表7防治给药对结石大鼠体重的影响(g，n=10,x±s)组另u给药前给药l周给药2周给药3周给药4周模型对照组200.6±8.5238.4±12.1251.9±12.4280.3±11.6294.3±19.0正常对照组200.5±8.7253.1±14.6*293.6±16,9*林347.8±25.0*林393.8±25.6*林原剂型对照組206.4±5.2245.9±13.6252.5±9.5288.8±25.1302.3±24.4大剂量组205.5±7.3244,1±13.6254.7±11.9289,8±22.3300.9±19.0中剂量组203.7±7.9248.2±10.7252.9±9.7293.4±23.3301.2±19.4小剂量组202.0±8.6243.4±9.5251.0±13.8288.6±17.0297.5±27.6注与模型对照组比较，*p<0.05;***p<0.001。表8防治给药对结石大鼠肾脏重量、24h排尿量的影响(n-10，x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注与模型对照组比较，*P<0.05;林p〈0.01;***p<0.001。表9排石胶囊防治给药对结石大鼠血清肌酐、钙含量及肾组织钙含量、24h尿钙分泌量的影响(r^10,^土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注与模型对照组比较，*P<0.05;林p<0.01;林*p<0.001。表io防治给药对结石大鼠肾组织病理学影响(<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>。由上可知，相同剂量的本发明的排石胶囊预防用药的作用优于原剂型对照组。二、大鼠肾结石模型治疗给药试验方法同一，只是在造模两周后给药，药物与剂量同一，结果见表11~13。_表11治疗给药对结石大鼠肾脏重量、脏器系数和24h尿量的影响(『10,x±s)剂量肾重量肾脏系数尿量组另lj(g/kg)(g)(g/100g)(mL/24h)模型对照组/3.612±0.5661.05±0.2231.29±8.66正常对照组/2.258±0.318*林0.56±0.08*林31.89±8.85原剂型对照组563.469±0.6000.94±0.1946.50±10.96林大剂量组562.697±0.374***0,72±0.09*林41.52±10.36*中剂量组283.138±0.5390.85±0.17*33.26±6,12小剂量组143.241±0.7560.89±0.2233.17±10.80注与模型对照组比较，*p<0.05;林p<0.01;木氺氺p<0.001。表12排石胶囊对结石大鼠血清尿素氮、肌酐、"含量及肾组织钙含量、24h尿钙分泌量的影响(n=10，^±s)BUNCrea血清Ca2'肾组织Ca"尿Ca"组别(mmol/L)(umol/L)(mmol/L)(ymol/g)(umol/24h)模型对照组6,8±2.4119.2±28.62.53±0,248.46±2.1341.85±16.04正常对照组2.9±1.2林*86.4±11,8林2.53±0.265.84±0.96林16.99土6.70林*原剂型对照组4.8±1.9116.7±27.52.50±0.356.72±1.27*39.38土14.26大剂量组4.8±1.9109.8±34.21.90±0.33***5.87±1.09**37.91±15.56中剂量组5.1±1.2102.9±20.62.00±0.41林7.56±1.5023.06±11.12林小剂量组6.1±2.6109.2±30.92.30±0.318.59±2.4937.19±15.29注与模型对照组比较，*p<0.05;林p〈0.01;沐林p〈0.001。表13排石胶囊对结石大鼠肾组织病理学影响(n40，x土s)剂量肾结石肾小管直径肾小管内坏死(g/kg)积分值(um)积分值模型对照组/3.9±1.191.77±30.701.4±0.5正常对照组/1.0±0.0***28.27±5.39林*1.0土0.0*原剂型对照组562.3±1.l林56.45±18.21林l.O土O.0*大剂量组561.6±0.7水水氺36.94±9.02*林l.O士O.0*中剂量组281.8土0.8林*60.63±27.59*1.1±0.3小剂量组142.6±1.3*風44±64.531.2±0.4注与模型对照组比较，*p<0.05;林p〈0.01;林*p<0.001。由上可知，相同剂量的本发明的排石胶囊治疗用药的作用优于原剂型对照组。具体实施方式实施例l药材按1000粒胶囊计连钱草5093g徐长卿764g滑石1274g甘草1274g制备方法连钱草加10倍量60%乙醇，回流提取3次，每次1小时，合并乙醇液，滤液减压回收乙醇，浓縮至每毫升含0.5g生药的浓缩液。将连钱草提取液加到已经前处理过的DIOI大孔树脂(每10克大孔树脂上样量为8克药材)，过柱流出液重复吸附2次，静置2小时，先用水洗脱，洗脱至水液近无色，再用10倍树脂体积量的95%的乙醇洗脱，洗脱至流出液无色为止，收集95%的洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度1.10,得浸膏。徐长卿加14倍量水，水蒸气蒸馏8倍量蒸馏液，蒸馏液冷藏24小时，过滤，得丹皮酚结晶，药渣备用。取丹皮酚10倍重量的P-环糊精加入15倍量的水使溶解，丹皮酚溶解于10倍量95%乙醇中再加入到e-环糊精的水溶液中,于5(TC时,搅拌2小时，冷藏24小时，抽滤，滤渣于50'C烘千，得白色干燥粉末。木通、忍冬藤、石韦、瞿麦、苘麻子、车前子、滑石、甘草及徐长卿药渣加8倍量的水，煎煮3次，每次1小时。合并煎煮液，滤过，滤液浓縮至相对密度1.15。加入乙醇，使含醇量达70%,静置24小时，过滤，滤液减压回收乙醇，进一歩浓缩至相对密度1.10，得浸膏。将各浸膏合并，混匀，喷雾千燥，得干燥药粉。车前子(盐水炒)764g木通764g石韦764g忍冬藤1274g瞿麦764g苘麻子764g将喷雾千燥药粉、乃-皮酚e-环糊精包合物，混匀，加入药粉量30%淀粉，再加入0.5%硬酯酸镁搅匀，干法制粒，装入胶囊，制成1000粒，即得。权利要求1、一种排石胶囊的制备方法，其特征是包括下列步骤a、连钱草用乙醇提取、浓缩，过D101大孔树脂，乙醇洗脱，浓缩得浸膏；b、徐长卿用水蒸气蒸馏，蒸馏液冷却，得丹皮酚结晶，药渣备用；丹皮酚溶于乙醇中，再加入到β-环糊精的水溶液中，搅拌，冷藏，抽滤，烘干，得白色干燥粉末；c、木通、忍冬藤、石韦、瞿麦、苘麻子、车前子、滑石、甘草及徐长卿药渣加水煎煮，滤过，滤液浓缩，得浸膏；d、将a、c两部分浸膏合并，干燥得药粉，再与b步骤的干燥粉末混匀，加入药用辅料制成胶囊。2、权利要求1的制备方法，其中各药材的重量份数比为连钱草40-60车前子5-10木通5-10徐长卿5-10石韦5-10忍冬藤10-18滑石10-18瞿麦5-10苘麻子5-10甘草10-18。3、权利要求l的制备方法，其中c步骤在滤液浓縮后进一步包括将浓縮的滤液加入乙醇，静置，过滤，滤液减压回收乙醇，进一步浓縮，得浸膏。4、权利要求3的制备方法，其中乙醇的浓度是50~80%，为重量百分比。5、权利要求l的制备方法，其中提取用的乙醇浓度是4080%，为重量百分比。6、权利要求l的制备方法，其中洗脱用的乙醇浓度是95%，为重量百分比。7、权利要求1的制备方法，其中e-环糊精的量是丹皮酚重量的515倍。8、权利要求l的制备方法，其中药用辅料选自填充剂、崩解剂、稀释剂、粘合剂、润滑剂中的一种或几种。9、权利要求l的制备方法，其中药用辅料是淀粉和硬脂酸镁。10、权利要求9的制备方法，以干燥药粉重量计，淀粉和硬脂酸镁的重量分别占30%、0.5%。全文摘要本发明涉及天然药物领域，具体涉及一种排石胶囊的制备方法。本发明的制备方法是将不同的中药材分别提取后再混合制成，如果按与颗粒剂同样的生药量计，则本发明制备方法所制备的胶囊患者服用剂量小，提高了患者服用顺应性；另外药理毒理试验结果显示，本品毒副作用较少，药效优于目前的颗粒剂。文档编号A61K36/68GK101219167SQ20081001871公开日2008年7月16日申请日期2008年1月22日优先权日2008年1月22日发明者周勤文,王秋霜,陈家进申请人:南京同仁堂药业有限责任公司