专利名称：：从连香树植物中提取的活性成分及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种从连香树植物中提取的活性成分及其应用，属生物医药
技术领域：
。
背景技术：
：蜡样芽孢杆菌(fec/W^ce化^)属于芽孢杆菌科，芽孢杆菌属，是需氧性、有运动性、能产生芽孢的革兰氏阳性菌。该菌在自然界分布极广，存在于土壤、水、尘埃及淀粉制品和乳制品等食品中。其生命过程中能以孢子体形式存在，具有耐高温、耐盐碱、耐挤压、词料加工对其损伤小等特性。研究表明，该菌能产生多种毒性物质，如肠毒素、溶血毒素等，由其引起的食物中毒涉及的食品种类很多，发生食物中毒潜在危险性大，这种由广泛存在的细菌引起的人的疾病受到关注。迄今己发现的抗生素主要来源于植物和微生物，其中许多已广泛用于治疗各种微生物感染性疾病。近年来由于病原菌的耐药性，原有的医用抗菌素在减退，因此不断开发新的抗生素受到重视。连香树科(Cercidiphyllaceae)植物是第三纪的孑遗植物，分布于中国和円本。连香树科植物木材纹理直，结构细，可供建筑、制作家具等用；树皮及叶含鞣质，可提制栲胶；新叶带紫色，秋季叶变黄色或红色，可作园林观赏树种。连香树(a^cW*/y;//Mw乂印om'c"wSieb.etZucc.)属连香树科植物，原产地中国，主要作为绿化观赏树种。经文献检索，未见有关连香树具有抗蜡样芽孢杆菌活性的公开报道。
发明内容本发明的目的是从植物产生的代谢产物中，筛选出对人体病原细菌蜡样芽孢杆菌(^j"7^scerei/s)具有强烈抑制作用的活性成分，作为制备抑制人体病原细菌蜡样芽孢杆菌制剂的应用。本发明是这样实现的1、活性成分的制备本发明的活性成分经如下步骤得到a.将连香树的枝或叶用水洗干净后放入烘箱，在6(TC温度下烘烤12小时；b.将烘烤后的连香树枝或叶切碎，分别放入三角瓶内，用100%甲醇浸泡，在45。C的水浴锅上提取，第一次浸泡提取的时间为2小时，第二次浸泡提取的时间为4小时，第三次浸泡提取的时间为8小时；c.将三次浸提的提取液合并后，在6(TC温度下浓縮后得浸膏；d.将浸膏用甲醇溶解，制备成浓度为10mg/ml的活性成分；或在8CTC水浴加热1小时后，用甲醇溶解，制备成浓度为10mg/ml的活性成分。2、制备试验用的病原细菌蜡样芽孢杆菌将蜡样芽孢杆菌接种于LB液体培养基(牛肉膏3克，蛋白胨10克，氯化钠5克，自来水1000ml，pH7.0-7.2)中，于37。C，180rpm培养24小时备用。做活性时将LB培养基(牛肉膏3克，蛋白胨10克，氯化钠5克，琼脂18克，自来水1000ml，pH7.0-7.2)倒入9cm的平板中，待培养基凝固后，取200Pl蜡样芽孢杆菌菌液用涂布棒均匀涂布在培养基表面制成病原菌平板。3、试验方法纸片扩散法在无菌操作台上用微量注射器将样品注入纸片(做四个剂量，1.5mg/disc,lmg/disc，0.5mg/disc，0.lmg/disc)，用电吹风将纸片吹干待溶剂挥发后，置于涂布过蜡样芽孢杆菌的LB平板上，37"培养24小时后，观察抑菌结果，测量抑菌圈的大小(含纸片的直径O.7cm)。同时在纸片上加入提取过程中使用过的溶剂甲醇作为对照，并做空白纸片对照。整个实验重复3次，取3次试验结果的平均值。将试验获得的活性浸膏在8(TC水浴加热1小时后，用甲醇溶解制备成浓度为10mg/ml的活性成分，用同样的方法做抑菌试验。本发明的活性提取物对人体病原菌蜡样芽孢杆菌具有较强的抑制作用，可作为制备抑制人体病原细菌蜡样芽孢杆菌制剂的应用，可开发为新的医用抗生素。具体实施例方式本实施例所用的连香树植物，采自中国科学院昆明植物研究所植物园内。实施例一连香树的枝用水洗干净后后放入烘箱，在6(TC温度下烘烤12小时。将10克烘干后的枝切碎，放入三角瓶内，用100ml100%甲醇浸泡，在45。C的水浴锅上提取。第一次浸泡提取的时间为2小时，第二次和第三次的浸泡提取时间分别为4小时和8小时。将三次浸提的提取液合并后，在60。C温度下浓縮得0.521克浸膏。该浸膏用甲醇溶解，制备成浓度为10mg/ml，用于做活性测定。同时做对照，结果见表l。表1连香树枝的提取物对蜡样芽孢杆菌的抑菌作用<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>结果表明本发明提取的活性成分对人体病原细菌蜡样芽孢杆菌有明显的抑菌活性，提取物在lmg时就出现强的抑菌活性，抑菌圈的大小为1.2cm，0.1mg时也出现抑菌活性，但活性较弱，抑菌圈的大小为0.8cm。实施例二基本同实施例一，不同之处是所用的材料为连香树的叶。10克叶提取得到1.234克浸膏，用甲醇溶解，制备成浓度为10mg/ml，用于做活性测定。同时做对照，结果见表2。表2连香树叶的提取物对蜡样芽孢杆菌的抑菌作用<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>与枝的提取物相比，叶的提取物的量较大，抑菌活性较枝的提取物弱些。但叶的提取物的抑菌活性也具有明显的抑菌作用，1.5mg时抑菌圈的大小为1.2cm。实施例三基本同实施例一，不同之处是提取的浸膏在8(TC水浴加热1小时后，用甲醇溶解，制备成浓度为10mg/ml做活性。同时做对照，结果见表3。表3连香树枝的提取物经高温处理后对蜡样芽孢杆菌的抑菌作用<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>一没有抑菌圈出现结果表明，经过高温处理后的样品与未经高温处理的样品具有同样的抑菌活性，说明该活性成分对热稳定。权利要求1、一种从连香树植物中提取的活性成分，其特征在于该活性成分经如下步骤得到a.将连香树的枝或叶用水洗干净后放入烘箱，在60℃温度下烘烤12小时；b.将烘烤后的连香树枝或叶切碎，分别放入三角瓶内，用100％甲醇浸泡，在45℃的水浴锅上提取，第一次浸泡提取的时间为2小时，第二次浸泡提取的时间为4小时，第三次浸泡提取的时间为8小时；c.将三次浸提的提取液合并后，在60℃温度下浓缩后得浸膏；d.将浸膏用甲醇溶解，制备成浓度为10mg/ml的活性成分；或在80℃水浴加热1小时后，用甲醇溶解，制备成浓度为10mg/ml的活性成分。2、权利要求1所述从连香树植物中提取的活性成分的应用，其特征在于该活性成分作为制备抑制人体病原细菌蜡样芽孢杆菌制剂的应用。全文摘要本发明涉及一种从连香树植物中提取的活性成分及其应用，属生物医药
技术领域：
。该活性成分经如下步骤得到a.将连香树的枝或叶用水洗干净后放入烘箱，在60℃温度下烘烤12小时；b.将烘烤后的连香树枝或叶切碎，分别放入三角瓶内，用100％甲醇浸泡，在45℃的水浴锅上提取，第一次浸泡提取的时间为2小时，第二次浸泡提取的时间为4小时，第三次浸泡提取的时间为8小时；c.将三次浸提的提取液合并后，在60℃温度下浓缩后得浸膏；d.将浸膏用甲醇溶解，制备成浓度为10mg/ml的活性成分；或在80℃水浴加热1小时后，用甲醇溶解，制备成浓度为10mg/ml的活性成分。本发明提取的活性成分，作为制备抑制人体病原细菌蜡样芽孢杆菌制剂的应用，可开发为新的医用抗生素。文档编号A61K36/185GK101385747SQ200810058980公开日2009年3月18日申请日期2008年9月27日优先权日2008年9月27日发明者刘芳芳,张克勤,李国红申请人:云南大学