专利名称：：玉叶清火胶囊的质量控制方法
技术领域：
：本发明属于中药的质量控制、具体涉及玉叶清火胶囊的质量控制方法。
背景技术：
：玉叶清火胶囊为玉叶清火片的改剂型产品。原片剂处方收载于《中成药地方标准上升国家标准》(眼科耳鼻喉科皮肤科分册)144页，标准代号为WS-11093(ZD-1093)-2002，具有清热解毒，消肿止痛功效，用于喉痹，暴喑，急性咽喉炎属于风热证者。在临床上应用多年，取得比较令人满意的疗效。玉叶清火胶囊处方与片剂相同，由中药材玉叶金花400g、穿心莲300g、栀子100g、墨旱莲150g、倒扣草100g按以下工艺制成穿心莲100g与栀子粉碎成细粉，剩余穿心莲与其余玉叶金花等三味加水煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.301.33(5(TC)的稠膏，加入上述细粉和淀粉60g，混匀，干燥，粉碎成细粉，制成颗粒，干燥，加滑石粉适量，混匀，装入胶囊，制成1000粒。处方中玉叶金花为茜草科植物玉叶金花MussaendapubescensAit.f.的干燥茎和根，穿心莲为爵床科植物穿心莲Andrographispaniculata(Burm.f.)Nees的干燥地上部分，栀子为茜草科植物栀子GardeniajasminoodesEllis的干燥成熟果实，墨旱莲为菊科植物鳢肠EcliptaprostrataL.的干燥地上部分，倒扣草为苋科植物倒扣草AchyranthesasperaL.的干燥全草。玉叶清火胶囊提取工艺与玉叶清火片一致，但制剂工艺和辅料不同，故需对其质量控制方法进行研究，制定确实可行的方法保证产品质量和临床疗效。原片剂质量标准[鉴别]项下有玉叶金花、穿心莲、栀子、墨旱莲薄层色谱鉴别，原片剂质量标准采用高效液相色谱法测定穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量。但经研究发现，该质量控制方法还存在一些问题有待解决含量测定中供试品提取方法无法有效去除杂质，导致测定峰受杂质干扰、分离度差；鉴别项目较多，导致检测成本增加、周期较长等。
发明内容本发明要解决的技术问题是提供一种含测分离度好、鉴别方法简化、可操作性强的玉叶清火胶囊的质量控制方法，进而保证产品质量和临床疗效。本发明以如下技术方案解决上述技术问题玉叶清火胶囊的质量控制方法包括以下步骤中的一种或多种1.用薄层色谱法对药物中的玉叶金花和栀子进行定性鉴别取本品内容物3g，研细，加乙醇或甲醇2050ml，加热回流或超声处理O.51.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣用水1525ml微热使溶解，滤过，加在Dnn型大孔树脂柱(内径l3cm，柱高1525cm)上，用水50150ml洗脱，再用20%95%(体积%，以下同)乙醇50150ml洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇或乙醇l3ml使溶解，作为供试品溶液。另取玉叶金花对照药材4g，加水50150ml，煎煮2060分钟，滤过，滤液浓縮至l3ml，加无水乙醇或甲醇3060ml，搅匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇或乙醇l3ml使溶解，作为玉叶金花对照药材溶液。再取梔子对照药材lg，加乙醇或甲醇2050ml，加热回流或超声处理O.5l小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇或甲醇l3ml使溶解，作为栀子对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各l2ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以三氯甲垸-甲醇-水(1013:46:12)1(TC以下放置分层的下层液为展开剂，展开1220cm，取出，晾干，喷以1%香草醛乙醇溶液-10%硫酸乙醇溶液(1:1)的混合液(临用新配)或10%硫酸乙醇或2%香草醛硫酸溶液，在110土5'C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与玉叶金花对照药材和栀子对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。2.用薄层色谱法对药物中的墨旱莲进行定性鉴别取本品内容物6g,研细，加甲醇或乙醇3050ml，超声处理或加热回流0.51.5小时，滤过，滤液浓縮至约lml,加中性氧化铝14g，置水浴上拌匀，干燥，加在中性氧化铝柱C100200目，38g，内径lcm)上，用甲醇或乙醇3080ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇或乙醇l3ml使溶解，滤过，作为供试品溶液。另取墨旱莲对照药材3g,加甲醇或乙醇2060ml，超声处理或加热回流0.51.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇或乙醇l3ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液6yl、对照药材溶液3n1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸丁酯(57.5:0.51)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。3.用高效液相色谱法测定该药物中穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅院键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(5060:4050)为流动相；检测波长为225nm土2nm。理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，分别加甲醇或流动相制成每lml含穿心莲内酯30ixg、脱水穿心莲内酯60ug的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品20粒的内容物，精密称定，混匀，研细，取约l3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇或乙醇3080ml，称定重量，浸泡212小时，超声处理3060分钟，放冷，再称定重量，用甲醇或乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液1030ml，置中性氧化铝柱C100200目，2.57.5g，内径lcm)上，用甲醇或乙醇2040ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇或乙醇至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各52(Hd，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每粒含穿心莲以穿心莲内酯(C20H3()O5)和脱水穿心莲内酯(C2()H2804)的总量计，不得少于1.0mg。优选的技术方案包括下列步骤中的一种或多种1.用薄层色谱法对药物中的玉叶金花和栀子进行定性鉴别取本品内容物3g，研细，加乙醇50ml，加热回流l小时，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml微热使溶解，滤过，加在D,。,型大孔树脂柱(内径lcm,柱高18cm)上，用水100ml洗脱，再用30W乙醇100ml洗脱，收集30%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取玉叶金花对照药材4g，加水100ml，煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，加无水乙醇50ml，搅匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为玉叶金花对照药材溶液。再取栀子对照药材lg，加乙醇40ml，加热回流l小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为栀子对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各l2iU，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13:6:2)10°。以下放置分层的下层液为展开剂，展开17cm,取出，晾干，喷以1%香草醛乙醇溶液-10%硫酸乙醇溶液(1:1)的混合液(临用新配)，在105。C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与玉叶金花对照药材和栀子对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。2.用薄层色谱法对药物中的墨旱莲进行定性鉴别取本品内容物6g，研细，加乙醇50ml，加热回流l小时，滤过，滤液浓縮至约lml，加中性氧化铝3g，置水浴上拌匀，干燥，加在中性氧化铝柱(100200目，5g，内径lcm)上，用乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，滤过，作为供试品溶液。另取墨旱莲对照药材3g，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液6ul、对照药材溶液3ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸丁酯(7.5:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。3.用高效液相色谱法测定该药物中穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(55:45)为流动相；检测波长为225nm。理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每lml含穿心莲内酯30ug、脱水穿心莲内酯60iig的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品20粒的内容物，精密称定，混匀，研细，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸泡2小时，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液20ml，置中性氧化铝柱(100200目，5g，内径lcm)上，用甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。领IJ定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10nl，注入液相色谱仪，测定，即得。本发明的玉叶清火胶囊质量控制方法，通过大量试验对比，采用分离度更高的含测方法，将玉叶金花和栀子鉴别同时进行，简化了鉴别方法，并改善了墨旱莲薄层色谱鉴别的效果，从而更有效地保证产品质量。图1是含量测定供试品提取方法一含测图谱。图2是含量测定供试品提取方法二含测图谱。具体实施例方式本发明的质量控制方法是经过大量的筛选得到的最佳方案，以下试验研究为本发明的优选过程。一、玉叶金花和栀子的薄层色谱鉴别供试品溶液的制备方法比较方法一取本品内容物5g，加无水乙醇50ml，静置30分钟，加热回流l小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，加在中性氧化铝柱(内径lcm，长10cm)上，用甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(10:7:1.5:1.5)的上层液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加无水乙醇lml溶解，作为供试品溶液。同法分别制备玉叶金花阴性样品溶液和栀子阴性样品溶液。方法二取本品内容物5g，加甲醇50ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为供试品溶液。同法分别制备玉叶金花阴性样品溶液和栀子阴性样品溶液。方法三取本品内容物5g，加无水乙醇40ml，加热回流l小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。方法四取本品内容物3g，研细，加乙醇50ml，超声处理l小时，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml微热使溶解，滤过，加在D训型大孔树脂柱(内径lcm，柱高18cm)上，用水100ral洗脱，再用3(m乙醇100ml洗脱，收集30%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。同法分别制备玉叶金花阴性样品溶液和栀子阴性样品溶液。方法五取本品内容物3g，研细，加甲醇50ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml微热使溶解，滤过，加在Dun型大孔树脂柱(内径lcm，柱高20cm)上，用水100ml洗脱，再用4(^乙醇100ml洗脱，收集40%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。同法分别制备玉叶金花阴性样品溶液和栀子阴性样品溶液。方法六取本品内容物3g，研细，加乙醇50ml，加热回流l小时，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml微热使溶解，滤过，加在D则型大孔树脂柱(内径lcm，柱高18cm)上，用水100ml洗脱，再用30%乙醇100ml洗脱，收集30%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。同法分别制备玉叶金花阴性样品溶液和栀子阴性样品溶液。将上述六种方法进行对比，结果方法一六中，供试品和对照药材、对照品色谱均有对应斑点，阴性对照无对应斑点，但方法一、二、三色谱中玉叶金花有杂质干扰，方法四六均可，考虑环保问题，优选四和六。曾试用硅胶G板、硅胶GF254板、聚酰胺板，分离效果均不如硅胶H板，故不采用。展开系统曾比较(1)石油醚3060。C)-乙酸乙酯-甲酸-水(18:2:1:1)的上层液(2)二氯甲垸-甲醇-水(13:6:2)(3)三氯甲垸-甲醇(3:1)(4)三氯甲烷-甲醇-水(10:6:1)10。C以下放置分层的下层液(5)三氯甲烷-甲醇-水(13:4:l)l(TC以下放置分层的下层液(6)三氯甲垸-甲醇-水(13:6:2)10。C以下放置分层的下层液，结果(1)、(2)、(3)斑点不圆整，分离效果差，(4)、(5)、(6)展开效果均可，但以(6)最好，比移值适中，薄层分离好，斑点清晰。经研究发现正常展距下玉叶金花的斑点与杂质无法分离，而展开1220cm斑点分离效果较好，其中展距为17cm时展开效果最好。检视方法对比了碘熏、10%硫酸乙醇液、2%香草醛硫酸液、3%三氯化铁乙醇液、醋酐-硫酸(9:1)、1%香草醛乙醇溶液-10%硫酸乙醇溶液(1:1)的混合液(临用新配)等显色剂及紫外光灯365nm下检视等多种方法，10%硫酸乙醇液、2%香草醛硫酸液、1%香草醛乙醇溶液-10%硫酸乙醇溶液(1:1)的混合液(临用新配)均能鉴别出该斑点，1%香草醛乙醇溶液-10%硫酸乙醇溶液(1:1)的混合液(临用新配)显色颜色更鲜艳。该方法在鉴别玉叶金花的同时鉴别栀子，分离效果好，斑点清晰，节省了检测时间。二、墨旱莲的薄层色谱鉴别供试品溶液的制备方法比较方法一取本品内容物5g，加乙醇50ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为供试品溶液。同法制备墨旱莲的阴性样品溶液。方法二取本品5内容物g，加乙醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为供试品溶液。同法制备墨旱莲的阴性样品溶液。方法三取本品内容物5g，加甲醇50ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为供试品溶液。同法制备墨旱莲的阴性样品溶液。方法四取本品内容物6g，研细，加无水乙醇50ml，加热回流l小时，滤过，滤液加在中性氧化铝柱C100200目，18g,内径lcm)上，用无水乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，滤过，作为供试品溶液。同法制备墨旱莲的阴性样品溶液。方法五取本品内容物6g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约lml，加中性氧化铝3g，置水浴上拌匀，干燥，加在中性氧化铝柱U00200目，5g,内径lcm)上，用甲醇50m欣脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，滤过，作为供试品溶液。同法制备墨旱莲的阴性样品溶液。方法六取本品内容物6g，研细，加乙醇50ml，加热回流l小时，滤过，滤液浓縮至约lml，加中性氧化铝3g，置水浴上拌匀，干燥，加在中性氧化铝柱C100200目，5g，内径lcin)上,用乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，滤过，作为供试品溶液。同法制备墨旱莲的阴性样品溶液。将上述六种方法进行对比，结果方法一六中，供试品和对照药材、对照品色谱均有对应斑点，阴性对照无对应斑点，但方法一、二色谱中墨旱莲主斑点有杂质干扰，方法三中斑点不够清晰，方法四六效果相当，但方法六较方法四经济，较方法五环保。展开系统曾比较(1)石油醚(3060'C)-乙酸乙酯-甲酸-水(18:2丄1)的上层液(2)二氯甲烷-丙酮-甲醇(15:2:3)(3)正己烷-乙酸丁酯(7.5:1)(4)环己烷-乙酸丁酯(5:0.5)(5)环己烷-乙酸丁酯(7.5:1)。结果系统(1)比移值太小，系统(2)斑点分离效果差，系统(3)、(4)展开效果系统亦不如(5)。三、穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的的含量测定方法研究1仪器与试药仪器日本岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪。对照品穿心莲内酯化学对照品(含量测定用，批号110797-200307)，脱水穿心莲内酯化学对照品(含量测定用，批号0854-200204)，试剂甲醇(色谱纯)，水(自制双蒸水)。样品玉叶清火胶囊，200411012供试品溶液制备方法选择方法一取本品内容物约1.5g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸泡2小时，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液20ml，置中性氧化铝柱(100200目，5g,内径lcm)上，用甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。方法二取本品内容物约1.5g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸渍30分钟，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的，滤过，即得。结果方法二杂质多，干扰大，易污染色谱柱，含量测定准确度受影响；而方法一杂质少，分离效果佳，可有效保证含测准确度，进而保证产品质量。具体见附图1和附图2。3中性氧化铝上柱用量的考査考察了中性氧化铝上柱的用量(2.58、5g、7.5g)，结果中性氧化铝的用量为2.5g时，穿心莲内酯分离较差，而用量为5g和7.5g均能很好地分离，且相对峰面积差别不大。为节约试剂，中性氧化铝的最佳用量为5g。4超声时间考察固定浸泡时间为l小时，考察超声时间IO、20、30、40、60分钟，结果IO、20分钟回收率不好，30、40、60分钟相对峰面积差别不大。从节省时间考虑，超声时间30分钟比较好。5浸泡时间考察固定超声时间为30分钟，考察浸泡时间0.5、1、2小时及过夜(12小时)，结果0.5、l小时回收率不好，2小时及12小时相对峰面积差别不大。从节省时间考虑，浸泡时间2小时比较好。6测定波长的选择分别精密吸取两种对照品溶液各10ul，注入液相色谱仪，绘制光谱图，结果穿心莲内酯在199.09nm、225.15nm，脱水穿心莲内酯在199.44nm、251.89nm有吸收峰，在199nm测定时干扰较大，在252nm处穿心莲内酯吸收较小，而在225nm处测定，无干扰，且脱水穿心莲内酯亦有较好的吸收。因此选择225nm为测定波长。7色谱条件以十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(55:45)为流动相；检测波长为225nm土2nm。理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于3000。流动相比较U)甲醇-水(55:45);(2)甲醇-水(50:50);(3)甲醇-水(60:40);(4)甲醇-水(53:47);(5)甲醇-水(62:38);(6)甲醇陽水(48:52)。结果流动相(l)-(4)均可分离穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯，以(1)为最优，(5)(6)分离效果不佳或峰形不佳。8阴性样品溶液的测定取不含穿心莲的阴性样品约1.58,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸泡2小时，超声处理(功率260W，频率50kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液20ml，置中性氧化铝柱(100200目，5g,内径lcm)上，用甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。吸取阴性样品溶液10W,注入液相色谱仪，结果在穿心莲的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的位置处无相应色谱峰，表明对样品测定无干扰。9线性关系考察9.1穿心莲内酯线性关系考察精密称取穿心莲内酯对照品10.21mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀,精密量取lml、2ml、3ml、5ml、8ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得，按上述色谱条件，分别进样10ul，测定，以峰面积积分值A对穿心莲内酯进样量C(yg)进行回归分析，得回归方程A=2.24X106C-2.21X104,r=0.9999。表明穿心莲内酯进样量在0.10210.8168lig范围内线性关系良好，并且直线通过原点，可用单点外标法进行测定和计算，线性关系数据与标准曲线见表l。表1穿心莲内酯线性关系考察数据<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>精密称取脱水穿心莲内酯对照品10.33mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取lml、2ml、3ml、5ml、8ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得，按上述色谱条件，分别进样10yl，测定，以峰面积积分值A对脱水穿心莲内酯进样量C(ug)进行回归分析，得回归方程A=1.33X106C-2.19X104,r=0.9999。表明脱水穿心莲内酯进样量在0.20661.6528yg范围内线性关系良好，并且直线通过原点，可用单点外标法进行测定和计算，线性关系数据与标准曲线见表2。表2脱水穿心莲内酯线性关系考察数据进样量峰面积积分值￥^<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>10精密度试验分别精密吸取穿心莲内酯对照品溶液(30.63yg/ml)及脱水穿心莲内酯对照品溶液(61.98yg/ml),按上述色谱条件，依法测定，重复进样5次，计算峰面积A的相对标准偏差，结果见表3，表明精密度好。表3精密度试验<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>11稳定性试验取供试品溶液(批号20041101)，分别在放置O、2、4、6、8、24、48、72h时，依法测定峰面积A，计算R内及日间相对标准偏差，结果见表4、表5，表明供试品溶液在72h内稳定性好。表4日内稳定性试验<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>12重复性试验取同一样品(批号20041101)，按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液，依法测定，计算含量及相对标准偏差，结果见表5，表明方法重复性较好。表5方法重复性试验<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>总和(mg/粒)1.6331.6641.6591.6461.6631.6201.6481.1013加样回收率试验精密称取已测知含量的样品(批号20041101，含量穿心莲内酯2.356mg/g、脱水穿心莲内酯2.994mg/g)0.75g，精密加入混合对照品溶液(穿心莲内酯0.3004mg/ml、脱水穿心莲内酯0.5032mg/ml:精密称取穿心莲内酯对照品15.02mg,脱水穿心莲内酯对照品25.16mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度)5ml,精密加入甲醇45ml，按样品测定项下操作，依法测定，计算回收率，结果见表6、表7，表明方法回收率较好。表6穿心莲内酯加样回收率试验<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表7脱水穿心莲内酯加样回收率试验<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>上述步骤并不需要按照先后顺序进行，而且同时还可以进行常规检测和穿心莲的薄层色谱鉴别，如性状，该成品性状为硬胶囊，内容物为黄棕色至黄褐色的颗粒；味苦。此外，该成品还应符合中国药典2005年版一部附录VID胶囊剂项下有关的各项规定。实施例l:1.用薄层色谱法对药物中的玉叶金花和栀子进行定性鉴别取本品内容物3g，研细，加乙醇50ml，加热回流i.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣用水15ml微热使溶解，滤过，加在D101型大孔树脂柱(内径lcm，柱高15cm)上，用水50ml洗脱，再用2(m乙醇50ml洗脱，收集20%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取玉叶金花对照药材4g，加水50ml，煎煮20分钟，滤过，滤液浓缩至lml，加无水乙醇30ml，搅匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为玉叶金花对照药材溶液。再取栀子对照药材lg,加乙醇20ml，加热回流l小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为栀子对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各l2ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(10:4:1)10'C以下放置分层的下层液为展开剂，展开20cm，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105'C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与玉叶金花对照药材和栀子对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。2.用薄层色谱法对药物中的墨旱莲进行定性鉴别取本品内容物6g，研细，加甲醇30ml,加热回流1.5小时，滤过，滤液浓縮至约lml，加中性氧化铝lg，置水浴上拌匀，干燥，加在中性氧化铝柱C100200目，3g，内径lcm)上，用甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，滤过，作为供试品溶液。另取墨旱莲对照药材3g，加甲醇20ml，超声处理0.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液6u1、对照药材溶液3u1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸丁酯(5:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365mn)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。3.用高效液相色谱法测定该药物中穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(50:50)为流动相；检测波长为223mn。理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，分别加甲醇或流动相制成每lml含穿心莲内酯30ixg、脱水穿心莲内酯60yg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品20粒的内容物，精密称定，混匀，研细，取约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇30ml，称定重量，浸泡12小时，超声处理60分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液30ml，置中性氧化铝柱(100200目，2.5g，内径lcm)上，用乙醇20ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇或乙醇至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20^U,注入液相色谱仪，测定，即得。实施例2:1.用薄层色谱法对药物中的玉叶金花和栀子进行定性鉴别取本品内容物3g，研细，加乙醇50ml，加热回流l小时，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml微热使溶解，滤过，加在Dun型大孔树脂柱(内径lcm，柱高18cm)上，用水100ml洗脱，再用3(^乙醇100ml洗脱，收集30%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取玉叶金花对照药材4g,加水100ml，煎煮30分钟，滤过，滤液浓縮至2ml，加无水乙醇50ml，搅匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为玉叶金花对照药材溶液。再取栀子对照药材lg，加乙醇40ml，加热回流l小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为栀子对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各l2u1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13:6:2)l(rC以下放置分层的下层液为展开剂，展开17cm，取出，晾干,喷以1%香草醛乙醇溶液-10%硫酸乙醇溶液(1:1)的混合液(临用新配)，在105。C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与玉叶金花对照药材和栀子对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。2.用薄层色谱法对药物中墨旱莲进行定性鉴别取本品内容物6g,研细，加乙醇50ml，加热回流l小时，滤过，滤液浓縮至约lml，加中性氧化铝3g，置水浴上拌匀，千燥，加在中性氧化铝柱C100200目，5g，内径lcm)上，用乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，滤过，作为供试品溶液。另取墨旱莲对照药材3g，加乙醇50ml，加热回流l小时，滤过，滤液蒸千，残渣加乙醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液6ul、对照药材溶液3"1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸丁酯(7.5:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365ran)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。3.用高效液相色谱法测定该药物中穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(55:45)为流动相；检测波长为225nm。理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每lml含穿心莲内酯30wg、脱水穿心莲内酯60!ig的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品20粒的内容物，精密称定，混匀，研细，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸泡2小时，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液20ml，置中性氧化铝柱(100200目，5g，内径lcm)上，用甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10nl，注入液相色谱仪，测定，即得。实施例3:1.用薄层色谱法对药物中的玉叶金花和栀子进行定性鉴别取本品内容物3g，研细，加甲醇30ml，超声处理0.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣用水25ml微热使溶解，滤过，加在D101型大孔树脂柱(内径3cm，柱高25cm)上，用水150ml洗脱，再用95。/。乙醇150ml洗脱，收集95%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加乙醇3ml使溶解，作为供试品溶液。另取玉叶金花对照药材4g，加水150ml，煎煮60分钟，滤过，滤液浓縮至3ml，加甲醇60ml，搅匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为玉叶金花对照药材溶液。再取栀子对照药材lg，加甲醇50ml，超声处理0.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为栀子对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各l2ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以三氯甲垸-甲醇-水(11:5:1.5)10。C以下放置分层的下层液为展开剂，展开20cm，取出，晾干，喷以2%香草醛硫酸溶液，在11(TC加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与玉叶金花对照药材和栀子对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。2.用薄层色谱法对药物中的墨旱莲进行定性鉴别取本品内容物6g,研细，加乙醇40ml，超声处理0.5小时，滤过，滤液浓縮至约lml，加中性氧化铝4g，置水浴上拌匀，干燥，加在中性氧化铝柱(100200目，8g，内径lcm)上，用乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇3ml使溶解，滤过，作为供试品溶液。另取墨旱莲对照药材3g，加乙醇60ml，加热回流1.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇3ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液6ul、对照药材溶液3ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸丁酯(6:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。3.用高效液相色谱法测定该药物中穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量色谱条件与系统适用性试验以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(60:40)为流动相；检测波长为227nm。理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，分别加甲醇或流动相制成每lml含穿心莲内酯30ng、脱水穿心莲内酯60ug的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品20粒的内容物，精密称定，混匀，研细，取约3g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇80ml，称定重量，浸泡3小时，超声处理40分钟，放冷，再称定重量,用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10ml，置中性氧化铝柱(100200目，7.5g，内径lcm)上，用甲醇40ral洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5^U，注入液相色谱仪，测定，即得。权利要求1.一种玉叶清火胶囊的质量控制方法，其特征是用薄层色谱法对药物中的玉叶金花和栀子作以下定性鉴别取本品内容物3g，研细，加乙醇或甲醇20～50ml，加热回流或超声处理0.5～1.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣用水15～25ml微热使溶解，滤过，加在内径1～3cm、柱高15～25cm的D101型大孔树脂柱上，用水50～150ml洗脱，再用体积％为20％～95％的乙醇50～150ml洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇或乙醇1～3ml使溶解，作为供试品溶液；另取玉叶金花对照药材4g，加水50～150ml，煎煮20～60分钟，滤过，滤液浓缩至1～3ml，加无水乙醇或甲醇30～60ml，搅匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇或乙醇1～3ml使溶解，作为玉叶金花对照药材溶液；再取栀子对照药材1g，加乙醇或甲醇20～50ml，加热回流或超声处理0.5～1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇或甲醇1～3ml使溶解，作为栀子对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录ⅥB规定的薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水为10～13:4～6:1～210℃以下放置分层的下层液为展开剂，展开12～20cm，取出，晾干，喷以临用新配的l％香草醛乙醇溶液-10％硫酸乙醇溶液为11的混合液或10％硫酸乙醇或2％香草醛硫酸溶液，在110±5℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与玉叶金花对照药材和栀子对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。2.如权利要求l所述的玉叶清火胶囊的质量控制方法，其特征是用薄层色谱法对药物中的墨旱莲进行定性鉴别取本品内容物6g，研细，加甲醇或乙醇3050ml，超声处理或加热回流0.51.5小时，滤过，滤液浓縮至约lml，加中性氧化铝l4g，置水浴上拌匀，干燥，加在100200目、38g、内径lcm的中性氧化铝柱上，用甲醇或乙醇3080ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇或乙醇l3ml使溶解，滤过，作为供试品溶液；另取墨旱莲对照药材3g，加甲醇或乙醇2060ml，超声处理或加热回流0.51.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇或乙醇l3ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB的薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液6ul、对照药材溶液3iU，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸丁酯为57.5:0.51为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。3.如权利要求1或2所述的玉叶清火胶囊的质量控制方法，其特征是用高效液相色谱法测定该药物中穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量色谱条件与系统适用性试验以十八浣基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为5060:4050为流动相；检测波长为225nm士2nm;理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，分别加甲醇或流动相制成每lml含穿心莲内酯30ug、脱水穿心莲内酯60ug的溶液；供试品溶液的制备取本品20粒的内容物，精密称定，混匀，研细，取约l3g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇或乙醇3080ml，称定重量，浸泡212小时，超声处理3060分钟，放冷，再称定重量，用甲醇或乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液1030ml，置100200目、2.57.5g、内径lcm的中性氧化铝柱上，用甲醇或乙醇2040ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇或乙醇至刻度，摇匀；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各520nl，注入液相色谱仪，测定；本品每粒含穿心莲以穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的总量计，不得少于1.0mg。4.如权利要求l所述的玉叶清火胶囊的质量控制方法，其特征是用薄层色谱法对药物中的玉叶金花和栀子进行定性鉴别取本品内容物3g，研细，加乙醇50ml，加热回流l小时，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml微热使溶解，滤过，加在内径lcm、柱高18cm的D则型大孔树脂柱上，用水100ml洗脱，再用3(^乙醇100ml洗脱，收集30%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取玉叶金花对照药材4g,加水100ml，煎煮30分钟，滤过，滤液浓縮至2ml，加无水乙醇50ml，搅匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为玉叶金花对照药材溶液；再取栀子对照药材lg，加乙醇40ml，加热回流l小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为栀子对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB规定的薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各12"1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水为13:6:2IO'C以下放置分层的下层液为展开剂，展开17cm,取出，晾干，喷以临用新配的1%香草醛乙醇溶液-10%硫酸乙醇溶液为1:1的混合液，在105'C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与玉叶金花对照药材和栀子对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。5.如权利要求2所述的玉叶清火胶囊的质量控制方法，其特征是用薄层色谱法对药物中的墨旱莲进行定性鉴别取本品内容物6g，研细，加乙醇50ml，加热回流l小时，滤过，滤液浓縮至约lml，加中性氧化铝3g,置水浴上拌匀，干燥，加在100200目、5g、内径lcm的中性氧化铝柱上，用乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，滤过，作为供试品溶液；另取墨旱莲对照药材3g,加乙醇50ml，加热回流l小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB规定的薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液6ul、对照药材溶液3ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸丁酯为7.5:1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。6.如权利要求3所述的玉叶清火胶囊的质量控制方法，其特征是用高效液相色谱法测定该药物中穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量色谱条件与系统适用性试验以十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为55:45为流动相；检测波长为225nm;理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每lml含穿心莲内酯30wg、脱水穿心莲内酯60ug的溶液；供试品溶液的制备取本品20粒的内容物，精密称定，混匀，研细，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸泡2小时，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液20ml，置100200目、5g、内径lcm的中性氧化铝柱上，用甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10nl，注入液相色谱仪，测定；本品每粒含穿心莲以穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的总量计，不得少于1.0mg。全文摘要本发明提供了一种玉叶清火胶囊的质量控制方法，对玉叶金花和栀子同时进行薄层色谱鉴别，对墨旱莲进行薄层色谱鉴别和对穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯进行含量测定。本发明玉叶清火胶囊的质量控制方法，是一种环保、含测方法分离度好，鉴别方法简化，可操作性强的质量控制方法。文档编号A61K36/744GK101363819SQ200810073410公开日2009年2月11日申请日期2008年1月8日优先权日2008年1月8日发明者唐弟光,品李,霞梁,梁山丹,莫少红,蒙华英,陈晓军申请人:广西博科药业有限公司