专利名称：罗莫肽注射液及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种用于化疗或放疗引起的白细胞减少的罗莫肽注射液及其制 备方法。
背景技术：
恶性肿瘤已经成为威胁人类健康和生命的严重疾病之一。据统计，全世界
每年新诊断癌症患者1000余万人、患者总数4000万人、死亡710万人，与感 染和心脑血管病列致死率前三位。我国恶性肿瘤平均每年发病200万人、死亡 160万人，占全国平均每年总死亡人数的18.63%,在城巿地区居各类死因之首。 抗肿瘤药和免疫调节剂位于国内医院用药销售额第五位(占13.44%)。化疗和 放疗是抗癌治疗的重要手段并已取得了显著疗效，但是因其毒副作用大，如抑 制骨髓造血系统引起白细胞和血小板减少伴有感染和出血的危险，妨碍了其使 用，更多的病人因肿瘤及其治疗使免疫功能下降，造成恶性循环危及生命。
罗莫肽属于胞壁酰二肽类免疫增强剂，是分枝杆菌细胞壁骨架(如胞必佳) 的免疫活性成分，它能通过激活单核巨噬细胞系统产生造血调控因子，具有同 时升高白细胞和血小板的特点，在临床上主要用于抗癌治疗(化疗或放疗)产生 的继发性骨髓抑制，促进外周血白细胞和血小板数目的增加，可防止病人感染、 减少化疗剂量、缩短化疗的疗程间隔，从而有效地改善化疗效果，与重组细胞 因子类药物相比，具有同时促进白细胞和血小板生成、恢复免疫功能、分子小 结构单一、可以大量合成、纯度高、质量稳定容易控制、疗效较高毒性低、生 物污染少等特点。罗莫肽同时促进白细胞和血小板生成，对于大剂量化疗也是 有效的，如有的文献就是用罗莫肽治疗大剂量卡铂化疗后的白细胞和血小板减 少取得了较好疗效。在曰本肿瘤病人在放化疗开始的同时就普遍使用罗莫肽，已经成为常规用药，使病人在整个治疗期间比较稳定，耐受性好。
罗莫肽由日本Shiba等首先合成，其化学结构为N2-(N-乙酰胞壁酰-L-丙氨 酰-D-异谷氨酰胺)-N 6-硬脂酰-L-赖氨酸，相当于五肽，分子式为C43H78N6013, 分子量为887.12。其化学性质稳定，能够促进正常及骨髓损伤模型动物(如照射 造成的豚鼠、狗或小鼠模型以及环磷酰胺或卡铂造成的小鼠或猴)的造血作用， 升高白细胞数尤其是中性粒细胞和单核细胞数，同时增强其吞噬、趋化和分泌 活性氧等功能，也使豚鼠、狗和猴的血小板数显著增加；对动物的神经肌肉、 呼吸和心血管功能无显著影响，也没有致突变和致畸胎作用。日本第一制药公 司开发成功，于1991年被批准上巿，其制剂注射用冻干粉针剂商品名为Nopia， 主要用于化疗或放疗肿瘤病人，促进白细胞数和血小板数迅速恢复到正常水平。
但由于罗莫肽理化性质较为特殊，在水溶液中几乎不溶解，而且水溶液中 含有极其微量的罗莫肽后非常容易转化成凝胶体系，因此目前曰本上巿的剂型 为注射用冻干粉针，但该制剂注射时必须使用特殊的溶酶先行溶解，溶解过程 很长，而且获得的罗莫肽注射液外观并不能完全呈澄明状态，带有一定的乳光， 到目前为止还没有个人和机构将上述问题加以解决。目前日本上巿的罗莫肽注 射用冻干粉针其临床使用需要用特殊的溶剂进行复溶,复溶时间长给使用带来 不便，溶解后有乳光且易引起二次污染，因此使用临床上能接受的合适的注射 用溶酶制成稳定、澄明的罗莫肽注射液具有重要意义。本发明现已解决这些问 题。
发明内容
本发明提供了 一种最适合临床应用的罗莫肽注射液。 为实现发明目的，本发明釆用以下技术方案
罗莫肽注射液，该注射液包含有效量的作为活性成分的罗莫肽，与罗莫冻干粉针一致。
所述注射液为无菌注射液。
所述注射液还包含溶剂、pH调节剂和缓冲溶剂。
所述的溶剂为有机溶剂。如乙醇、甘油、1，2-丙二醇、低分子量聚乙二 醇或它们的混合物。优选乙醇。在实验过程中我们惊讶地发现罗莫肽先用少量 乙醇或含有乙醇的混合物溶解罗莫肽后，再将该溶液溶解在合适的水溶液体系 中，即能完全解决发明背景中所表述的所有问题，除甲醇外，我们尚未发现可 以替代乙醇的溶剂，但甲醇有毒性，不能用作注射液的溶剂。
所述缓冲液亦为溶剂。如醋酸-醋酸钠缓冲液、枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液、 乳酸-乳酸钠缓冲液、酒石酸-酒石酸钠缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、 磷酸氢二钾-磷酸二氢钾缓冲液、碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液。优选磷酸氢二钠-磷 酸二氢钠缓冲液。
所述pH调节剂为有机酸或无机酸。pH调节剂选自不同浓度的无机酸或有机 酸，如盐酸、乳酸、枸橼酸、丙酸、甲酸、碳酸、盐酸、酒石酸、偏磷酸、硫 酸、硝酸、硼酸、丁酸、依地酸、山梨酸、水杨酸、月桂酸、苯甲酸。
所述pH调节剂为有机碱或无机碱。pH调节剂选自不同浓度的有机碱或无机 碱，如氢氧化钠、氢氧化钾、氨水、乙二胺、二乙胺、三乙醇胺、三乙胺。
所述pH调节剂为饱和盐溶液。如磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、 磷酸氢二钾、碳酸钠、碳酸氢钠、醋酸钠、醋酸钾、酒石酸钠、酒石酸钾、枸 橼酸钠、枸橼酸钾。
所述溶剂的用量为总体积的5%~50%,优选10%。
所述溶剂缓冲液的用量为总体积的50%~95%。 所述溶液的pH值为6. 5 ~ 8.0。本发明的另一个目的是提供一种罗莫肽注射液的制备方法，该方法包括如 下步骤
(1) 缓冲液的配制；
(2) 溶解罗莫肽、加缓冲液、调pH值、除热原；
(3) 分装。
本发明的优点是与注射粉针相比，注射液无需溶解，解决了包装和运输 成本；所获得的注射液溶液完全呈澄明状态，而现行日本的制剂用特殊溶酶溶 解后带有一定的乳光，因此本发明制剂使用更方便、安全，且避免了二次污染 的可能，可以节约时间，提高医护人员的工作效率。
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明并不受这些实施例 的限制。
具体实施例方式
实施例l:制备罗莫肽注射液 制剂配方
罗莫肽 0.20g 乙醇 100ml 磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液 .加至1000ml 制成 1000支
(1) 缓冲液的配制分别称取无水磷酸氢二钠8.31g, 二水磷酸二氢钠 2.24g，加水至1000ml，加0.2% (g/v)活性炭，搅拌均匀，静置15分钟，滤 过除炭，溶液备用。
(2) 将罗莫肽按处方比例溶于乙醇中，然后加入磷酸氢二钠-磷酸二氢钠 缓冲液，加热至45。C，搅拌30分钟，调节pH值至6.5-8.0,然后用超滤器除热原，滤液用0，22jum微孔滤膜过滤除菌，测定溶液中罗莫肽的含量，确定准 确装量，分装，充入氮气后封口。 实施例2:制备罗莫肽注射液 制剂配方
罗莫肽 0.20g 1，2-丙二醇 50ml
乙i
磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液
50ml
加至1000ml
制成 1000支
(1) 缓冲液的配制分别称取无水磷酸氢二钠8. 31g，磷酸二氢钾1.95g， 加水至lOO(kl,加0.2% (g/v)活性炭，搅拌均匀，静置15分钟，滤过除炭， 溶液备用。
(2) 将罗莫肽按处方比例溶于乙醇和1，2-丙二醇的混合溶剂中，然后加入 磷酸盐缓冲液，加热至45'C，搅拌30分钟，调节pH值至6.5-8.0,然后用超 滤器除热原，滤液用0.22nm微孔滤膜过滤除菌，测定溶液中罗莫肽的含量， 确定准确装量，分装，充入氮气后封口。
实施例3:制备罗莫肽注射液
制剂配方:
罗莫肽 乙醇
醋酸-醋酸钠缓冲液
0. 20g
200ml 加至1000ml
制成 1000支
(1)缓冲液的配制分别称取醋酸钠6. 8g,醋酸适量，加水至1000ml，使其PH为6. 5-8. 0,加O. 2% (g/v)活性炭，搅拌均匀，静置15分钟，滤过 除炭，溶液备用。
(2)将罗莫肽按处方比例溶于乙醇中，然后加入醋酸-醋酸钠缓冲液，加 热至45'C，搅拌30分钟，调节pH值至6.5 8. 0,然后用超滤器除热原，滤液 用0.22Mm微孔滤膜过滤除菌，测定溶液中罗莫肽的含量，确定准确装量，分 装，充入氮气后封口。 实施例4:制备罗莫肽注射液 制剂配方
罗莫肽 0.20g 聚乙二醇200 100ml 乙醇 100ml 醋酸-醋酸钠缓冲液 加至1000ral
制成 1000支
(1) 缓冲液的配制分别称取醋酸钠6. 8g,醋酸适量，加水至1000ml, 使其pH为6. 5-8. 0，加0.2% (g/v)活性炭，搅拌均匀，静置15分钟，滤过 除炭，溶液备用。
(2) 将罗莫肽按处方比例溶于乙醇和聚乙二醇200的混合溶剂中，然后加 入醋酸-醋酸钠缓冲液，加热至45'C，搅拌30分钟，调节pH值至6. 5~8. 0， 然后用截流分子量5000的超滤器除热原，滤液用0.22/im微孔滤膜过滤除菌，
测定溶液中罗莫肽的含量，确定准确装量，分装，充入氮气后封口。 实施例5:罗莫肽注射液稳定性试验 一、放置条件
将罗莫肽溶液分别置60。C、 40°C、 30°C、 25°C、 COOLX光照条件下放置10天，于第5、 IO天取样测定。
二、 检测方法
1. 外观目测
2. 有关物质:HPLC法.
仪器曰本岛津高效液相色谱仪 色谱柱018柱(150mm x 4. 6mm, 5pm)
流动相甲醇_乙腈-0. 02mol/L乙酸铵缓冲液(用冰醋酸调pH4. 8 ) =18: 60: 22
检测波长220nm
测定法取本品样品溶液作为供试品溶液；精密量取供试品溶液lml，用流 动相稀释至100ml，摇勻，作为对照溶液。精密量取对照溶液20yl注入液相色 谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高为满量程的15%，再量取供试品溶液 20yl注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的3倍，计算有关物质。
3. 含量
色谱条件同有关物质
测定法取本品样品溶液作为供试品溶液；另精密称取罗莫肽对照品适量， 用流动相溶解并稀释制成每亳升含200 ng的溶液作为对照品溶液，分别量取20
jal注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法，以峰面积计算含量。
三、 检测结果
表l:高温试验结果 . 1￥ il ^F1 含量(％)~
^ 无色澄明液体 ^71
5天 无色澄明液体 67.810天无色澄明液体31. 2
40。C5天 IO天无色澄明液体 无色澄明液体98. 6 95. 3
30。C5天 10天无色澄明液体 无色澄明液体98.5 96.9
25。C5天 IO天无色澄明液体 无色澄明液体99. 2 99. 4
表2:光照试验结果时间外观有关物质(％)含量(°/ )
o天无色澄明液体4. 3699. 3
5天无色澄明液体4. 3399. 1
10天无色澄明液体4. 3899. 2
结果6(TC条件下放置10天，样品外观无明显变化，有关物质明显增加，含 量明显下降；40。C条件下条件下放置10天，样品外观无明显变化，有关物质 略有增加含量没有发生明显变化；30。C条件下放置10天，样品外观无明显变 化，有关物质略有增加，含量略有下降；25'C条件下放置10天，样品各项检 测指标均无明显变化，与0天一致。说明本品对高温不稳定，应在阴凉处密封 保存，且在制备过程中也应避免长时间45。C以上的高温。
10
权利要求
1、罗莫肽注射液，包含有效量的作为活性成分的罗莫肽、溶剂、pH调节剂和缓冲溶剂。
2、 根据权利要求l所述的罗莫肽注射液，其特征在于所述的溶剂选自含有 乙醇或含有乙醇与甘油、1,2-丙二醇、低分子量聚乙二醇的混合物。
3、 根据权利要求2所述的罗莫肽注射液，其特征在于所述的溶剂优选乙醇。
4、 根据权利要求l所述的罗莫肽注射液，其特征在于所述溶剂的用量为总 体积的5%~50%。
5、 根据权利要求4所述的罗莫肽注射液，其特征在于所述溶剂的用量优选10%。
6、 根据权利要求l所述的罗莫肽注射液，其特征在于所述的缓冲溶剂选自 醋酸-醋酸钠缓冲液、枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液、乳酸-乳酸钠缓冲液、酒石酸-酒石酸钠缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、磷酸氢二钾-磷酸二氢钾缓 冲液、碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液。
7、 根据权利要求4所述的罗莫肽注射液，其特征在于所述的缓冲溶剂优选磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液。
8、 根据权利要求1所述的罗莫肽注射液，其特征在于所述溶液的PH值为 6. 5 ~ 8.0。
9、 根据权利要求1所述的罗莫肽注射液的制备方法，该方法包括如下步骤:(1) 缓冲液的配制；(2) 溶解罗莫肽、加缓冲液、调pH值、除热原；(3) 分装。
全文摘要
本发明提供一种罗莫肽注射液，包含有效量的作为活性成分的罗莫肽、溶剂、pH调节剂和缓冲溶剂。上述罗莫肽注射液的制备方法是将处方量的罗莫肽置适宜的容器内，加入处方量的溶剂溶解，然后加缓冲液至总量，水浴，搅拌溶解，然后用超滤器除热原、微孔滤膜过滤除菌，分装，封口。
文档编号A61K38/08GK101549146SQ20081010333
公开日2009年10月7日 申请日期2008年4月3日 优先权日2008年4月3日
发明者浩 丁, 温守明, 陈小平 申请人:北京嘉事联博医药科技有限公司