专利名称：：一种猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒株及免疫原性物质和疫苗的制作方法
技术领域：
：本发明涉及动物疫病预防控制，尤其涉及一种猪繁殖与呼吸综合征病毒的人工致弱病毒株和包含这种病毒株的免疫原性物质及疫苗。
背景技术：
：猪繁殖与呼吸综合征(又称猪蓝耳病)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)引起的以母猪发热、流产，断奶前后的仔猪死亡率升高，不同年龄猪呼吸障碍等为临床特征的疾病。该病于1987年首先在北美发现，几乎同时，欧洲也报道了该病。目前，该病是严重影响世界养猪业发展的重要疾病之一。疫苗接种是预防该病最有效的方法，国内外已有商品化的猪繁殖与呼吸综合征疫苗。既有灭活疫苗，也有用弱毒株制备的活疫苗。但是，2006至2007年，我国二十多个省份发生了高致病性猪蓝耳病疫情，该病由变异的PRRSV引起，而现有PRRSV疫苗不能提供有效的保护，该病已成为当前危害我国养猪业的头号疫病。此前，申请人率先确诊了我国高致病性猪蓝耳病疫情，并研制了灭活疫苗。2006年夏季以来，我国多个省份的养猪场、农户爆发不明原因的猪"高热病"疫情，呈现高发病率和高病死率，给我国的养猪业造成了巨大的经济损失。申请人研究发现，猪"高热病"疫情的原发病因是高致病性猪蓝耳病病毒。申请人分离鉴定了该病毒，将其中一株代表性毒株命名为"猪繁殖与呼吸综合征病毒超强变异株(Nsp21594—1680变异株)NVDC-JXAl"(保藏编号CGMCCNo.1964)，并利用该毒株研制了灭活疫苗(专利公开号CN101045917A)，在我国应用达12亿头份。目前，申请人又通过人工驯化，获得了高致病性猪蓝耳病病毒的弱毒株，可用于制备免疫原性物质和疫苗。申请人将高致病性猪蓝耳病病毒NVDC-JXAl株，在Marc-145细胞系上经人工连续传代培养，病毒对实验猪的致病力显著降低，并保持了良好的免疫原性和遗传稳定性，命名为"猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1-R株"。申请人用人工驯化的JXA1-R株研制成功猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗，接种猪可产生针对猪繁殖与呼吸综合征病毒的免疫保护力，能抵御高致病性猪蓝耳病病毒NVDC-JXA1株(强毒)的攻击。制苗用的病毒株及其免疫原性物质是决定疫苗功效的核心成分，原有PRRSV毒株、免疫原性物质及疫苗，存在以下技术缺陷1、国内外普遍采用非高致病性猪蓝耳病病毒作为疫苗株，制备的免疫原性物质和配制成的疫苗，仅在一定程度上可以抵抗高致病性蓝耳病病毒的攻击，但不同厂家制品的保护效果存在差异，免疫效果不确实，未被国家批准用于防控当前流行的高致病性猪蓝耳病。2、申请人:此前用高致病性猪蓝耳病病毒NVDC-JXA1株制备免疫原性物质，配制成灭活疫苗，被国家指定用于全国高致病性猪蓝耳病的紧急防控，取得了显著成效，为控制疫情蔓延作出了重大贡献，但缺点在于(1)强毒株能引起发病，只能用于生产灭活的免疫原性物质和灭活疫苗，而不能直接给猪接种，也不能制成活疫苗；(2)用强毒株制备灭活的免疫原性物质及灭活疫苗，刺激机体产生细胞免疫反应的能力比活病毒差，免疫效力有待提高；(3)用强毒株生产免疫原性物质及疫苗，需要大量培养强毒，因此需要严格控制生产环境、防止强毒扩散；(4)配制灭活疫苗的成本远高于弱毒活疫苗。因此，采用人工驯化的"猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1-R株"，及来源于该毒株的免疫原性物质，研制成弱毒疫苗及活疫苗，有巨大的应用价值。
发明内容本发明所解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒株JXA1-R株，保藏信息如下分类命名猪繁殖与呼吸综合征病毒拉丁文学名尸orc/werepraiiwWvemy//r她/yv/rws，PRRSV保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)地址北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所保藏日期2008年4月29日保藏编号CGMCCNo.2467。其次，本发明提供保护猪免于发生猪繁殖与呼吸综合征、尤其是高致病性猪蓝耳病的免疫原性物质，该免疫原性物质来源于国内高致病性猪蓝耳病病毒的人工致弱病毒株JXA1-R株。本发明还提供一种保护猪免于发生高致病性猪蓝耳病的猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗(JXA1-R株)，其免疫效力优于原有的猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC-JXA1株)，其中包含猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1-R弱毒株。其中病毒含量10"TCIDs。/ml以上，病毒是活的。进一步的，该疫苗是以冻干的形式。该疫苗进一步包括药物上常用的辅料，进一步的该疫苗外观是粉红色疏松团块状。本申请还提供一种制备高致病性猪蓝耳病弱毒活疫苗的方法。本申请还涉及上述疫苗在制备给猪免疫以抵御高致病性猪蓝耳病病毒的药物中的应用。此外，本申请还涉及上述病毒或疫苗在治疗猪繁殖与呼吸综合征或高致病性猪蓝耳病的用途。本发明是通过以下技术途径实现的一、病毒株的获得与其特性测定本发明采用申请人从我国发病猪中分离到的高致病性猪蓝耳病病毒NVDC-JXA1株(保藏编号CGMCCNo.l964;已申请专利，公开号为CN101045917A)，在Marc-145细胞系上经人工连续传代培养，再通过有限稀释法分离纯化病毒克隆，然后进行本动物接种试验，评价病毒的致病性和免疫原性。从而获得人工致弱的病毒株，命名为"猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1-R株"。具体方法为1、传代培养选用生长良好的Marc-145细胞，1:4传代，待生长至单层，弃细胞生长液，每瓶按培养液量5%加入病毒液，37r吸附lh，加入维持液，继续培养。当细胞病变(CPE)达到70%以上时收获培养物，按相同方法继续传代培养至80代；2、病毒纯化将收获的病毒液进行有限稀释，接种已经长至单层的24孔细胞培养板，每天观察细胞病变，选取单细胞病变孔进行扩大培养，获得纯化的病毒克隆；3、致病性试验将各个代次的病毒分别接种实验猪，观察21天，记录猪的发病和死亡情况，以此评价病毒对猪的致病性；4、在给猪接种各个代次的病毒后第28天，用高致病性的NVDC-JXA1毒株攻毒，观察猪发病、死亡情况，判定各个代次毒株的免疫原性。致病性试验表明，JXA1-R株培养25代至80代之间，对猪致病力显著降低。猪在接种后观察28天，不出现临床症状，剖检组织器官无变化。因此，该病毒与亲本强毒NVDC-JXA1株相比，致病力显著降低，是人工致弱的病毒株。免疫原性试验表明，JXA1-R株培养至80代，仍具有良好的免疫原性。猪在接种后28天，可抵御强毒NVDC-JXA1株的攻击。同时，未接种JXA1-R株培养物的猪，则不能抵御高致病性猪蓝耳病病毒NVDC-JXA1株的攻击，全部发病。病毒返强试验表明，培养25代至80代之间的病毒，接种后在猪群中连续接触传代多次，不发生返强。因此病毒接种猪群后，不会重新演变为强毒而引起发病，安全性有保证。病毒的基因序列分析表明，病毒培养到80代，病毒基因及编码的氨基酸出现了特征性变化1、2580代次的病毒，与原代的NVDC-JXA1株及目前国内外已知其它PRRSV毒株相比，病毒基因编码的氨基酸出现下列6项变化(1)ORFla:686位氨基酸是Asp，(2)ORFla:782位氨基酸是Thr，(3)ORFla:987位氨基酸是Gly，(4)ORFla:1422位氨基酸是Leu，(5)ORFlb:844位氨基酸是His，(6)ORFlb:1033位氨基酸是Thr。(注氨基酸位点均以VR-2332毒株为基准。)2、第80代的病毒，与原代的NVDC-JXA1株及目前国内外已知其它PRRSV毒株相比，病毒基因的非编码区出现了特征性的插入序列在基因的13692至13703位核苷酸插入了TCGCACGGTCTC序歹U(核苷酸位点以NVDC-JXA1株为基准)。二、制备免疫原性物质免疫原性物质，在本申请中是指能够刺激动物免疫应答的任何类型生物制剂。为实现本发明的目的，免疫原性物质含有病毒本身或病毒的免疫原性组分。制备这种免疫原性物质，可以采用猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1-R弱毒株的任何一个代次的培养物或不同代次培养物的混合物，同时还可加入药剂学上可以接受的稀释剂(如生理盐水、缓冲液等)、赋形剂或免疫佐剂，通过常规方法制备。这些免疫原性物质，可用于配制疫苗，也可单独使用。三、配制弱毒活疫苗制苗用毒株为猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒株JXA1—R株(保藏编号为CGMCCNo.2467)，培养该病毒用的细胞为MARC-145细胞。细胞先在培养瓶或转瓶中大量培养，再将病毒接种到细胞单层，也可将病毒与细胞悬液混合后接种。接种后培养26天，期间观察细胞病变，并可辅以免疫荧光、PCR等其他检测病毒含量的方法，判断病毒已大量增殖后，收获病毒培养物，经离心或过滤除去细胞碎片，测定病毒液的TCIDso效价。将病毒液与保护剂及赋形剂混合均匀，分装在疫苗瓶中，冷冻干燥，封盖。在进行疫苗效力检验时，将疫苗接种实验猪，在免疫高峰期(免疫后1442天之间)，采用NVDC-JXA1强毒株攻击实验猪，并同时攻击对照(未接种疫苗的)组的猪，判定疫苗的免疫保护效力。四、疫苗使用方法该疫苗用于预防猪繁殖与呼吸综合征(包括高致病性猪蓝耳病)，当猪群或当地存在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染、或存在感染的风险时，给猪接种猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗(JXA1-R株)。接种方法是通过肌肉或皮下注射，可以接种任何年龄的健康猪。但母猪在怀孕2个月后至产前，不推荐使用。首次接种疫苗以后，间隔1周以上，可以加强免疫一次。种猪每年至少接种一次以上。下列实施方式仅用于举例说明本发明的目的，但不构成对本发明的限制。具体实施方式实施例1病毒传代培养和鉴定试验猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDCJXA1-R弱毒株(病毒含量105QTCID5()/ml以上)、Marc-145细胞株，均由中国动物疫病预防控制中心兽医诊断室提供。取生长良好的MARC-145细胞，用胰酶消化，接种于细胞瓶内，长成单层后倒去生长液，换以含5%毒种的细胞维持液，置37。C下培养2-3天，当70%的细胞出现病变时收获，置-4(TC冻融2次，离心后分装，然后进行鉴定。用RT-PCR方法，分段扩增NVDCJXA1-R弱毒株的基因组(不同代次培养物分别扩增)。将获得的基因扩增产物回收、纯化，连接到测序质粒载体中，测定病毒基因的核苷酸序列，并用计算机软件转化成病毒的氨基酸序列。用序列分析软件，将获得的氨基酸序列与已经发表的美洲型PRRSV标准株(VR-2332株)、国内分离的NVDC-JXA1株及目前己知国内外其它PRRSV毒株氨基酸序列进行比较，描述病毒氨基酸序列特征。试验结果1、病毒培养到25代至80代之间，病毒各基因编码的氨基酸出现特征性变化，见下表_不同培养代次病毒基编码的氨基酸之特征性变化JiORFlaORFlb编码区氨基酸位点68678298714228441033NVDC-JXA1GluAlaGluSerArgAla原代病毒25代AspThrGlyLeuHisThr30代AspThrGlyLeuHisThr35代AspThrGlyLeuHisThr40代AspThrGlyLeuHisThr45代AspThrGlyLeuHisThr49代AspThrGlyLeuHisThr60代AspThrGlyLeuHisThr70代AspThrGlyLeuHisThr80代AspThrGlyLeuHisThr培养25代至80代之间，病毒基因编码的氨基酸出现了特征性变化，与原代的NVDC-JXA1株、美洲型PRRSV标准株(VR-2332株)及目前国内外已知其它PRRSV毒株相比，出现下列变化(1)ORFla:686位氨基酸以Asp代替Glu/Lys,(2)ORFla:782位氨基酸以Thr代替Ala/Val，(3)ORFla:987位氨基酸以Gly代替Glu，(4)ORFla:1422位氨基酸以Leu代替Ser，(5)ORFlb:844位氨基酸以His代替Arg，(6)ORFlb:1033位氨基酸以Thr代替Ala。(注氨基酸位点均以VR-2332毒株为基准。)2、病毒培养至80代，病毒的ORFla、ORFlb编码的氨基酸序列分别见SEQIDN0:1、SEQIDN0:2。3、第80代病毒全基因的核苷酸序列见SEQIDNO:3，与原代的NVDC-JXA1株及目前国内外已知其它PRRSV毒株相比，病毒基因的非编码区出现了特征性的插入序列在基因的13692至13703位核苷酸插入了TCGCACGGTCTC序列(核苷酸位点以NVDC-JXA1株为基准)。核苷酸序列的比较结果如下1369213703JXA1CTACTGGCAATTTGAATGTTCAAGTATGTTGGGGAAGTGCTJXA1(80)CTACTGGCAATTTGAATGTTCGCACGGTCTCTCAAGTATGTTGGGGAAGTGCT实施例2不同代次病毒的致病性测定和免疫原性试验实验动物取4~6周龄二元或三元杂交猪，共计30头，用PRRS病毒RT-PCR试剂盒检测抗原和ELISA检测抗体均为阴性。随机分成5头猪/组，分别隔离饲养。致病性测定用25代、49代、60代、80代的PRRS病毒JXA1-R株培养物，各接种—组猪(5头猪)，每头肌肉注射2mL。剩余的5头猪(未接种)作为对照组。每日观察、记录猪的临床表现，直至接种后28天。免疫原性检验在免疫后第28天，对PRRS病毒JXA1-R株接种的猪共20头，以及对照组5头猪(未接种的)，均用l:IO稀释的检验用强毒(PRRS病毒NVDC-JXA1株第5代细胞培养物)颈部肌肉注射3mL攻毒。每日观察临床症状，攻毒21天后处死存活猪，观察大体剖检变化，统计发病数和死亡数。试验结果1、25代、49代、60代、80代的PRRS病毒JXA1-R株培养物，接种后观察28天，动物精神状态及食欲良好，体温正常，未见发病。2、强毒(PRRS病毒NVDC-JXA1株)攻毒后观察至21天，JXA1-R株25代、49代、60代、80代培养物接种过的猪全部健活；对照组5头猪全部发病，2/5死亡。说明4个代次的JXA1-R株，均能使猪对高致病性PRRS病毒NVDC-JXA1株产生良好的保护作用，详见结果汇总表。4个代次的PRRS病毒JXA1-R株动物试验结果汇总表<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>实施例3不同代次混合病毒的致病性测定和免疫原性试验实验动物取46周龄二元或二元杂交猪，共计40头，用PRRS病毒RT-PCR试剂盒检测抗原和ELISA检测抗体均为阴性。随机分成5头猪/组，分别隔离饲养。致病性测定用等比例混合的25+49代、25+65代、25+80代、49+80代、49+60代、60+80代、25+49+60+80代的PRRS病毒JXAl-R株培养物，各接种一组猪(5头猪)，每头肌肉注射2mL。剩余的5头猪(未接种)作为对照组。每日观察、记录猪的临床表现，直至接种后28天。免疫原性检验在免疫后第28天，对PRRS病毒JXA1-R株接种的猪共35头，以及对照组5头猪(未接种的)，均用l:IO稀释的检验用强毒(PRRS病毒NVDC-JXA1株第5代细胞培养物)颈部肌肉注射3mL攻毒。每日观察临床症状，攻毒21天后处死存活猪，观察大体剖检变化，统计发病数和死亡数。试验结果1、等比例混合的25+49代、25+65代、25+80代、49+80代、49+60代、60+80代、25+49+60+80代的PRRS病毒JXA1-R株培养物，接种后观察28天，动物精神状态及食欲良好，体温正常，未见发病。2、强毒(PRRS病毒NVDC-JXA1株)攻毒后观察至21天，JXA1-R株培养物接种过的20头猪全部健活；对照组5头猪全部发病，3/5死亡。说明4个混合代次的JXA-R株病毒，均能使猪对高致病性PRRS病毒NVDC-JXA1株产生良好的保护作用，详见下4个混合代次的PRRS病毒JXA1-R株动物试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>实施例4病毒返强的安全性试验实验动物取46周龄二元或三元杂交猪，共计25头，用PRRS病毒RT-PCR试剂盒检测抗原和ELISA检测抗体均为阴性。同居感染试验方法将实验室制备的PRRS病毒NVDCJXA1-R株(25代、49代、65代、80代和25+49+80代)培养物(1065TCID50/mL)，接种第一组5头阴性猪，每头肌肉注射2mL。第M天将其与第二组5头阴性猪同栏词养14天后，将第一组5头猪取出，将第三组5头阴性猪与第二组猪再同栏饲养14天，以此类推，连续传4代。所有取出的猪处死，观察有无病变。试验结果同居感染试验至第4代，25头实验猪临床观察和大体剖检均未见异常，表明该疫苗株无毒力返强现象，因此，在应用时对猪是安全的。实施例5PRRSV弱毒活疫苗制备与检验1、毒种繁殖制苗用毒株为猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1-R株(保藏编号为CGMCCNo.2467)，为第80代的次病毒，含量105GTCID50/ml以上。Marc-145细胞株，由中国动物疫病预防控制中心兽医诊断室保存。取生长良好的MARC-145细胞，用胰酶消化，接种于细胞瓶内，长成单层后倒去生长液，换以含5%毒种的细胞维持液，置37t!下培养4-5天，当70%的细胞出现病变时收获，置-40。C冻融2次，离心后分装，然后进行鉴定。2、细胞种子繁殖从液氮罐中取出细胞管置37'C水浴中融化，将细胞移入装有10ml无血清培养基的离心管中，1000rpm离心5min。用10%FBS的DMEM培养基悬浮细胞，37°C、5%C02培养，当覆盖率达到100%时用胰酶消化细胞，按1:3传代增殖培养。3、制备病毒液细胞单层培养将扩大培养的种子细胞接种到转瓶中培养，控制转速8—9转/小时。接种取所需数量的、细胞覆盖率达到80%以上的细胞转瓶，弃去生长培养基，按5%(V/V)接种病毒，加入含2%胎牛血清的细胞培养液，在37。C下旋转培养。收获在显微镜下观察由病毒引起的细胞病变(CPE)，直至CPE达到80-90%时收获细胞培养物，反复冻融2次，经离心或过滤除去细胞碎片，测定病毒液的TCID5o效价，40'C以下冻存备用。4、疫苗制备将病毒液与赋形剂(含保护剂)按1:1混合均匀，分装在疫苗瓶中，冷冻干燥，封盖。5、疫苗检验方法(O安全检验取46周龄猪蓝耳病抗原抗体阴性猪5头，每头耳后根肌肉注射疫苗2.0ml，观察21日。(2)效力检验取46周龄的猪蓝耳病抗原和抗体阴性猪IO头，其中5头肌肉注射疫苗2ml，另5头作为对照，相同条件下分别隔离饲养。28日后，所有猪肌肉注射IO倍稀释的NVDC-JXA1株病毒培养液(病毒含量105GTCID5o/ml以上)3ml，每天测温并观察21曰。(3)与灭活疫苗效力比较在进行效力检验时，另取取46周龄猪蓝耳病抗原抗体阴性猪5头，肉注射疫苗2ml，相同条件下隔离饲养。28日后，所有猪肌肉注射IO倍稀释的NVDC-JXA1株病毒培养液(病毒含量105QTCID5()/ml以上)3ml，每天测温并观察21日。结果(1)安全检验接种后观察21日未出现由疫苗引起的任何局部和全身不良反应。(2)效力检验PRRSV弱毒活疫苗(JXA1-R株)接种的5头猪全部存活；对照猪全部发病，且3/5死亡。(3)与灭活疫苗效力比较PRRSV灭活疫苗(NVDC-JXA1株)接种的5头猪存活4头、死亡l头。由此可见，PRRSV弱毒活疫苗(JXA1-R株)比我国现在使用的PRRSV灭活疫苗(NVDC-JXA1株)的免疫效力提高。<110>中国动物疫病预防控制中心<120>—种猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒株及免疫原性物质和疫苗<160>3<210>1<211>2473<212>PRT<23>动脉炎病毒属(Arterivirus)<400>1MetSerGlylieLeuAspArgCysThrCysThrProAsnAlaArgValPheValAlaGlu15101520GlyGinValTyrCysThrArgCysLeuSerAlaArgSerLeuLeuProLeuAsnLeuGin25303540ValProGluLeuGlyValLeuGlyLeuPheTyrArgProGluGluProLeuArgTrpThr45505560LeuProArgAlaPheProThrValGluCysSerProAlaGlyAlaCysTrpLeuSerAla65707580HePheProHeAlaArgMetThrSerGlyAsnLeuAsnPheGinGinArgMetValArg85卯95100ValAlaAlaGlulieTyrArgAlaGlyGinLeuThrProThrValLeuLysThrLeuGin105110115120ValTyrGluArgGlyCysArgTrpTyrProlieValGlyProValProGlyValGlyVal125130135140TyrAlaAsnSerLeuHisValSerAspLysProPheProGlyAlaThrHisValLeuThr145150155160AsnLeuProLeuProGinArgProLysProGluAspPheCysProPheGluCysAlaMet165170175180AlaAspValTyrAspIeGlyArgGlyAlaValMetTyrValAlaGlyGlyLysValSer185l卯195200TrpAlaProArgGlyGlyAsnGluValLysPheGluProValProLysGluLeuLysLeu205210215220ValAlaAsnArgLeuHisThrSerPheProProHisHisValValAspMetSerLysPhe225230235240ThrLeuMetThrProGlySerGlyValSerMetArgValGluTyrGinHisGlyCysLeu245250255260ProAlaAspThrValProGluGlyAsnCysTrpTrpArgLeuPheAspSerLeuProPro265270275280GluValGinTyrLysGlulieArgHisAlaAsnGinPheGlyTyrGinThrLysHisGly285290295300ValProGlyLysTyrLeuGinArgArgLeuGinVaAsnGlyLeuArgAlaValThrAsp305310315320ThrHisGlyProlieVallieGinTyrPheSerValLysGluSerTrplieArgHisLeu325330335340LysLeuValGluGluProSerLeuProGlyPheGluAspLeuLeuArgHeArgValGlu345350355360ProAsnThrSerProLeuAlaGlyLysAspGluLysliePheArgPheGlySerHisLys365370375380TrpTyrGlyAlaGlyLysArgAlaArgLysThrArgSerGlyAlaThrThrMetValAla3853卯395400HisHisAlaSerSerAlaHisGluThrArgGinAlaThrLysHisGluGlyAlaGlyAla405410415420AsnLysAlaGluHisLeuLysArgTyrSerProProAlaGluGlyAsnCysGlyTrpHis425430435440y445g450455460ArgValArgProSerAspAspTrpAlaThrAspGluAspLeuValAsnThrlieGinlie465470475480LeuArgLeuProAlaAlaLeuAspArgAsnGlyAlaCysGlySerAlaLysTyrValLeu485490495500LysLeuGluGlyGluHisTrpThrValSerVallieProGlyMetSerProThrLeuLeu505510515520ProLeuGluCysValGinGlyCysCysGluHisLysGlyGlyLeuValSerProAspAla525530535540ValGlulieSerGlyPheAspProAlaCysLeuAspArgLeuAlaLysValMetHisLeu545550555560ProSerSerThrlieProAlaAlaLeuAlaGluSerSerAspAspSerAsnArgProVal565570575580SerProAlaAlaThrThrTrpThrValSerGinPheTyrAlaArgHisArgGlyGlyAsp585590595600HisHisAspGinValCysLeuGlyLyslielieSerLeuCysGinVallieGluAspCys605610615620CysCysHisGinAsnLysThrAsnArgAlaThrProGluGluValAlaAlaLyslieAsp625630635640GinTyrLeuArgGlyAlaThrSerLeuGluGluCysLeuAlaLysLeuGluArgValSer645650655660ProProSerAlaAlaAspThrSerPheAspTrpAsnValValLeuProGlyValGluAla665670675680AlaAsnGinThrThrAspGinProHisValAsnSerCysCysThrLeuValProProVal6856%695700ThrGinGluProLeuGlyLysAspSerValProLeuThrAlaPheSerLeuSerAsnCys705710715720TyrTyrProAlaGinGlyAspGluValHisHisArgGluArgLeuAsnSerValLeuSer725730735740LysLeuGluGluValValLeuGluGluTyrGlyLeuMetSerThrGlyLeuGlyProArg7457507557609To乙乙io[nsonOO乙I0611S8Hs/(:)J3Sti3iu|￡>dsvnsinsqSjv々Dbiv"1叫丄s/Cq!b八叫丄nsicuj々￡)々￡)0811"UO"lS9U々DdsvPAdsvPA々￡)dsvJ3SJ3S0Jdn3ldsV叫丄叫dJ3S々OPA々￡)々D叫丄0911"IIOSIlSWIdsvbivoJdojjb!vJ3Snj{)dsvnjo§jvojjI3p\[0J<IdsvsXi(Misenonibivojjiq￡)dsysX;3!b八ojjrqos人icujb!vj3s0Jdsjvdsvnsqnsiozusnonsonnjodsv叫丄dsv人1D叩s人i/Qqiojjib八dsvn|0叫丄可v卩aj巧勾O0011S6010601S801叩叫丄n3ldsvn!dbivf八J3sojjbivo^y叫丄Sjv0Jdnaipp\ie八叫d0801SZXH0厶01S卯I人IDS!H0Jd0Jd叫lniDnsqanpjms/Ciojjnsq叫dn￡>siypjm々￡)O卯I0S0I，1usvnsi3jv叫dbivwd^丄它iv叫丄usvdJ丄叫丄ti3]dsyib八3jyOW)IS￡0l0￡0I，1dsvdJ丄ppv3jvj"n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特征在于保藏号为CGMCCNo.2467。4.一种用于诱导针对猪繁殖与呼吸综合征病毒引起疾病的免疫应答的免疫原性物质，其中包含根据权利要求1_3任一项的猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1-R株或其组合物。5、根据权利要求4所述的免疫原性物质，其中还包括药剂学上可以接受的稀释剂、赋形剂或免疫佐剂。6、一种利用权利要求1-3任一项所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒株制备的预防猪繁殖与呼吸综合征的疫苗。7、根据权利要求6的疫苗，其特征在于病毒含量105QTCID5o/ml以上或病毒是活的或疫苗是以冻干的形式。8、根据权利要求6-7任一项所述的疫苗的制备方法，包括(1)制苗用毒株为猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒株JXA1—R株，(保藏编号为CGMCCNo.2467)，培养该病毒用的细胞为MARC-145细胞。细胞先在培养瓶或转瓶中大量培养，再将病毒接种到细胞单层，也可将病毒与细胞悬液混合后接种。接种后培养26天，期间观察细胞病变，并可辅以免疫荧光、PCR等其他检测病毒含量的方法，判断病毒已大量增殖后，收获病毒培养物，经离心或过滤除去细胞碎片，测定病毒液的TCID5o效价。将病毒液与保护剂及赋形剂混合均匀，分装在疫苗瓶中，冷冻干燥，封盖。9.根据权利要求l-3任一项所述的病毒弱毒株或权利要求6-7任一项所述的疫苗在制备给猪免疫以抵御高致病性猪蓝耳病病病毒的药物中的应用。10.根据权利要求l一3任一项所述的病毒弱毒株或权利要求6-7任一项所述的疫苗在治疗猪繁殖与呼吸综合征或高致病性猪蓝耳病中的用途。全文摘要本申请涉及一种人工驯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒株(JXA1-R株)和包含这种病毒株的免疫原性物质，以及用该毒株研制的猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒活疫苗，用于预防猪繁殖与呼吸综合征，尤其是可用于预防高致病性猪蓝耳病。文档编号A61K39/12GK101307305SQ200810105390公开日2008年11月19日申请日期2008年4月30日优先权日2008年4月30日发明者田克恭申请人:中国动物疫病预防控制中心