专利名称：见血封喉乳汁及其提取物在制备抗癌药物中的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种药用植物新的医疗用途，尤其是见血封喉乳汁及其提取物在制备抗癌药 物中的用途，属于中药、天然药物领域。
背景技术：
见血封喉[」"^an;s toc/can'of (Pers.) Lesch.]为桑科见血封喉属(^w"anX)植物。别名加布、 剪刀树、箭毒木。见血封喉属植物全世界约有4个种3个变种，分布于东南亚。我国仅产l 种，即见血封喉，分布于海南、云南、广东和广西等地。见血封喉据说是世界上木本植物中 最毒的树种之一，生长于海拔300-1000 m的山地常绿阔叶雨林和季雨林中。见血封喉鲜树汁 乳白色，有剧毒，入药用于泄泻，催吐，强心，还可用作麻醉剂；种子也有毒，入药解热止 泻，用于痢疾。
见血封喉乳汁和种子的主要成分为强心苷类化合物，目前，已经从见血封喉植物中分离 出二十多种。强心苷类化合物是治疗心力衰竭不可缺少的重要药物，临床上用以治疗心力衰 竭及节律障碍等心脏疾病。对见血封喉中分离得到的强心苷的强心作用已有报道，但本发明 所述的见血封喉乳汁及其提取物在制备抗癌药物中的新用途，至今尚未见文献报道和专利公开。
发明内容
本发明的目的是提供见血封喉乳汁新的医疗用途，即见血封喉乳汁及其提取物在制备抗 癌药物中的新用途。
本发明的内容是见血封喉乳汁及其提取物在制备抗癌药物中的新用途，所述用途特征在 于1、见血封喉乳汁提取物可通过下述步骤获得见血封喉乳汁(4 L)用80-95%乙醇浸泡提
取，也可渗漉提取，将提取液减压回收乙醇，得浓縮液，浓縮液加适量水稀释，依次用石油 醚、乙酸乙酯分别萃取，剩余部分上大孔吸咐柱先后用水和甲醇洗脱，减压回收石油醚、乙
酸乙酯萃取液和甲醇洗脱液，得到石油醚段浸膏A、乙酸乙酯段浸膏B和甲醇浸膏C，浸膏
B、 C干燥即得见血封喉提取物B和见血封喉提取物C; 2、见血封喉提取物B和/或见血封喉
提取物C，添加适当的药用辅料，按常规的制剂工艺，即可制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴
丸剂、口服液等口服药物制剂和注射药物制剂。
见血封喉提取物B、 C经薄层层析，用强心苷显色剂显色，显示见血封喉提取物B、 C含有强心苷类化合物。
本发明的见血封喉提取物B、 C，经体外活性筛选，统计处理结果显示均有较好的抗癌的 活性。由见血封喉提取物B、 C的体外活性筛选结果和初步临床疗效观察可以推导见血封喉 及其提取物可用于制备抗癌药物，即见血封喉及其提取物在制备抗癌药物方面的新用途。
本发明的有益效果是提供了见血封喉在通常用于制备治疗强心药物以外的新的医疗用 途，即见血封喉及其提取物在制备抗癌药物方面的新用途，并采用不同的溶媒得到见血封喉 提取物B、 C，见血封喉提取物B和/或见血封喉提取物C添加适当的药用辅料，按常规的制 剂工艺，即可制成口服和注射药物制剂。
一、体外活性筛选
下面是见血封喉提取物B、 C的体外活性筛选试验及其结果。
1. 抗癌活性测试。采用MTT法对人胃癌细胞SGC-7901、慢性骨髓性白血病细胞K562、 人口腔表皮癌细胞KB、骨纤维肉瘤HT-1080、骨肉瘤(G-292、 KHOS/NP)、前列腺癌LNCap 等细胞株的体外抑瘤活性。MTT法即四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法。其原理为MTT 化学名3_(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑，水溶液为黄色化合物，是一种接受氢离 子的染料，作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下 tetrazolium环开裂，生成蓝色的甲臜结晶(formazane)， formazane结晶的生成量仅与活细胞数 目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原)。
2. 活性测试方法为实验设阴性对照组(水)、DMSO溶剂对照组、阳性对照组(丝裂霉 素C)和8个不同浓度(O.l, 0.2, 0.4， 0.8, 1.6, 3.2, 6.3, 12.5 )的待测样品，每个浓度设3个平行。 收集对数生长期细胞，血球计数板计数，按每孔4500个癌细胞量接种于96孔平底细胞培养 板中，置于5。/。C02、湿度卯％以上、37。C温箱中培养。24h后取出加入一定量的待测样品， 继续培养3 d后取出置于显微镜下观察每孔细胞形态，记录细胞形态变化情况，接着每孔加 入5 mg/mL的MTT溶液(溶于平衡盐溶液PBS) 50 ^L, 37 。C反应4 h后，将细胞培养液吸 出，每孔加入100 pL DMSO将formazane充分溶解，将细胞培养板置于MK3酶标仪上，用 570 nm波长测各孔的吸光度(A)，按下列公式求生长抑制率。
生长抑制率(％) =(1——用药组平均A值 )xl(K)% ^ 、 阴性对照组平均A值
以样品浓度为横坐标，以抑制率为纵坐标，作图并求出抑制率为50%时样品的浓度(1(:50)，
样品活性结果即以半数抑制浓度(IC50)表示。
3.活性测试结果为样品对SGC-790K K562等肿瘤细胞株的毒性作用
细胞株
IC50 (吗/mL)
样品B
样品C
K5620.1350.38
SGC-79010.0780.14
KB0.4630.947
HT-10800.0340.17
G-2920.3550.693
KHOS/NP0.2460.572
LNCap0.4370.841
注毒性值IC5Q，即药物对细胞杀灭50%时的浓度值。IC5o值越大则毒性越小。 二、初步临床疗效观察 下面是见血封喉提取物B治疗100例直肠癌的临床疗效情况统计
1. 病例选择
100例病人，均经各大医院确诊为直肠癌晚期患者，其中男47例，女53例，年龄最小 者38岁，最大者59岁。
2. 治疗方法
对确诊为直肠癌晚期患者，给予本发明成药(约含0.01 g见血封喉提取物B的2号胶囊) 服用， 一日二次，每次一粒，开水冲服。每40天为一个疗程，连续两个疗程后停药休息一周， 详细观察病情变化进行检査。然后进行第三个疗程治疗，在服药期间停服其它药品。
3. 疗效标准
临床治愈症状及客观检查阳性征象消失，连续半年无复发者。
临床显著症状基本消失，癌灶縮小一半以上，其它客观检查有明显好转，观察半年以 上不再发展者。
临床有效症状有所改善，病灶基本稳定，观察在一个月以上者。 临床无效症状及客观检査无改善，或仅有短期改善，而又迅速恶化者。
4. 疗效观察结果
疗效总例数百分比备注
临床治愈 临床显著 临床有效 临床无效19 33 37 1119% 33% 37% 11%扩散转移
本发明的优点是
1、本发明无须煎煮，治疗方便，有效率达89%=
2、本发明能够控制癌细胞增生，防止癌细胞扩散，使癌细胞枯萎脱落消失。
具体实施方式
实施例1
取见血封喉乳汁(0.5L)，用11倍量95%乙醇分3次(5、 3、 3倍)浸提，减压回收乙醇， 浓縮干燥得到浸膏粉，浸膏粉加入淀粉适量，混均、制粒、干燥、整粒，装入胶囊，制成IOOO 粒即可。
实施例2
取见血封喉乳汁(0.5 L)，用9倍量90%乙醇渗漉，减压浓縮渗漉液至无醇味得浓縮液， 浓缩液加适量水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯分别萃取4次，剩余部分上大孔吸咐树脂D101 柱并先后用水和甲醇洗脱。减压回收乙酸乙酯萃取液和甲醇洗脱液，得到乙酸乙酯段浸膏B 和甲醇段浸膏C，浸膏B、 C干燥即得见血封喉提取物B和见血封喉提取物C。取见血封喉 提取物B10g，加入淀粉等适量辅料，混均、制粒、干燥，压制成1000片即可。
实施例3
取见血封喉乳汁(0.5 L)，用9倍量90%乙醇渗漉，减压浓縮渗漉液至无醇味得浓縮液， 浓縮液加适量水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯分别萃取4次，剩余部分上大孔吸咐柱DIOI 并先后用水和甲醇洗脱。减压回收乙酸乙酯萃取液和甲醇洗脱液，得到乙酸乙酯段浸膏B和 甲醇段浸膏C，浸膏B、 C干燥即得见血封喉提取物B和见血封喉提取物C。取见血封喉提 取物B、 C混合物10g，加入淀粉等适量辅料，混均、制粒、干燥，压制成1000片即可。
权利要求
1、见血封喉在制备抗癌药物中的新用途，其特征在于所述见血封喉为桑科见血封喉属(Antiaris)植物见血封喉[Antiaris toxicaria(Pers.)Lesch.]，药用乳汁。
2、 见血封喉乳汁提取物在制备抗癌药物中的新用途，其特征在于见血封喉乳汁提取物可 通过下述步骤获得见血封喉乳汁(4L)用80-95。/。乙醇浸泡提取，也可渗漉提取，将提取液减 压回收乙醇，得浓缩液，浓縮液加适量水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯分别萃取，剩余部 分上大孔吸咐柱先后以水和甲醇洗脱，减压回收石油醚、乙酸乙酯萃取液和甲醇洗脱液，得 到石油醚段浸膏A、乙酸乙酯段浸膏B和甲醇浸膏C，浸膏B、 C干燥即得见血封喉提取物 B和见血封喉提取物C。
3、 根据权利要求2所述见血封喉提取物，其特征在于所述见血封喉提取物B、 C含有强 心苷类化合物。
4、 根据权利要求K 2所述用途，其特征在于将见血封喉提取物B和/或见血封喉提取 物C,添加适当的药用辅料，按常规的制剂工艺，即可制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、 口服液等口服药物制剂和注射药物制剂。
全文摘要
本发明公开了见血封喉乳汁及其提取物在制备抗癌药物中的新用途，属于中药、天然药物领域。见血封喉通过乙醇提取，然后用石油醚，乙酸乙酯进行萃取，剩余部分上大孔吸咐树脂D101柱，先后用水和甲醇洗脱，得到不同的提取部位，实验证明，提取所得到的乙酸乙酯部位和上大孔吸咐柱甲醇洗脱部位具有抗肿瘤作用。
文档编号A61K9/20GK101352485SQ20081013764
公开日2009年1月28日 申请日期2008年7月2日 优先权日2008年7月2日
发明者娇 吴, 干玉娟, 戴好富, 曾艳波, 梅文莉 申请人:中国热带农业科学院热带生物技术研究所