专利名称：：几内亚胡椒碱的医药用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种化合物在制备防治心脑血管和肿瘤药物中的应用，具体涉及几内亚胡椒碱在制备防治心脑血管疾病和实体肿瘤疾病药物中的应用。
背景技术：
：心脑血管疾病的特点是发病急、死亡率高、致残率高。心脑血管疾病已成为危害人民健康的头号杀手。据卫生部统计，我国目前约有7000万中风及其后遗症患者，有6000万冠心病患者，40岁以上的中老年人中57%患有不同程度的心脑血管疾病。随着人口老龄化，心脑血管疾病的发病率呈上升趋势，其预防和治疗愈来愈重要。因此，从中药中寻找疗效明确且毒副作用小的防治药物成为医药研发领域的研究热点。胡椒科植物荜茇(PiperlongumL.)的干燥近成熟或成熟果穗中含有生物碱、挥发油、氨基酸和无机元素等活性成分。临床上用其提取物抗胃溃疡、抗惊、镇静、抗炎杀菌、降脂的治疗。几内亚胡椒碱(Guineensine)的医药用途研究较少，除能去除面包酵母、与从荜茇中分得的芝麻素等组合物组合具有体外抑制a-葡萄糖苷酶的活性和抑制ACAT(酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶)的活性。文献报道有些葡萄糖苷酶抑制剂通过抑制肿瘤转移和诱导肿瘤细胞凋亡两种途径治疗肿瘤。ACAT是调解体内胆固醇代谢平衡的关键蛋白之一，可减少食物中、及随胆汁排泄的胆固醇在小肠的吸收，降低血浆胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的水平；并可减少胆固醇的过量蓄积。虽然有的ACAT抑制剂在体外或动物的体内实验时，有明显的降血脂作用，但因体内生物利用度低和肾毒性问题严重，绝大多数药物的研究停止。如FR145237(脲类)可使正常家兔肾上腺皮质细胞出现明显坏死(参见MASAHIK0MATSU0，MASAHARUHASHIMOTO,JY丽ASUZUKI，et.al.，DifferencebetweenNormalandWHHLRabbitsinSusceptibilitytotheAdrenalToxicityofanAcyl-CoA:CholesterolAcyltransferaseInhibitor,FR145237,[J].ToxicologyandAppliedPharmacology,1996，140:387-392)。而且，临床试验中发现部分ACAT抑制剂不仅无降脂作用，反而不利于冠心病患者的治疗，并可能加速动脉粥样硬化的进展。如ACAT抑制剂pactimibe(CS-505)在III临床试验时，发现其反而促进动脉粥样硬化形成，现已停止研究(参见NissenS.E.，TuzenE.M.，BrewerH.B.，etal.，EffectofACATinhibitonontheprogressionofcoronaryatherosclerosis,NEWENGLANDJ.MED.2006，354(12):14)。本发明人对几内亚胡椒碱进行大鼠的长期毒性研究时，病理结果显示该药物对动物的肝、肾结构无明显损害。
发明内容本发明要解决的问题是研发对肝肾毒副作用小的用于防治心脑血管疾病和/或肿瘤疾病的药物。为解决上述问题，本发明提供技术方案如下。如下式所示的几内亚胡椒碱在制备防治心脑血管疾病和/或消化系统肿瘤药物中的应用尤其是几内亚胡椒碱在制备在治疗剂量范围内对哺乳动物肝肾没有明显毒副作用的防治心脑血管疾病和/或消化系统肿瘤药物中的应用几内亚胡椒碱制备防治心脑血管疾病药物的应用中，包括制备治疗急性缺血性心脑血管疾病药物的应用。所述心脑血管疾病包括冠心病、心肌梗死、心绞痛、脑血栓、脑出血。几内亚胡椒碱制备治疗消化系统肿瘤药物的应用中，包括制备诱导消化系统肿瘤细胞凋亡药物的应用。消化系统肿瘤包括肝脏肿瘤、胃肿瘤、结肠肿瘤或直肠肿瘤。几内亚胡椒碱制备的防治心脑血管疾病和/或消化系统肿瘤药物，在治疗剂量范围内，对哺乳动物肝肾没有明显毒副作用。前述应用中的药物是由有效量的几内亚胡椒碱和药学上可接受的辅料组成。药物的剂型包括经胃肠道、皮肤、粘膜、腔道和注射途径给药。经胃肠道给药剂型包括片剂、胶囊剂、滴丸剂、混悬剂、颗粒剂；皮肤给药包括贴剂、软膏剂；粘膜给药包括粘贴片、贴膜剂、舌下片剂；腔道给药包括泡腾片；注射给药包括乳剂、注射剂、纳米粒、脂质体。药物制剂包括片剂、胶囊剂、乳剂、贴剂、贴膜剂、注射剂。本发明包括防治心脑血管疾病和/或消化系统肿瘤的药物组合物，由有效治疗剂量的几内亚胡椒碱和药学上适用的载体或辅料组成。其心脑血管疾病包括急性缺血性心脑血管疾病；其消化系统肿瘤包括肝脏肿瘤、胃肿瘤、结肠肿瘤或直肠肿瘤。几内亚胡椒碱的化学名称(E，E，E)-N-异丁基-13-(3"，4〃-二氧亚甲基苯)-2，4，12-十三碳烯酰胺。分子式C24H33N03无色针晶，UV波谱在261、295和305nm处有强吸收。mp:114.6-116.(TC，分子量383，难溶于水。几内亚胡椒碱单体分布在胡椒科的多种植物中，从PiperchabaHunterde、P.guineesineSch丽chetTho皿.、P.long咖禾口P.nigrumL.的果实或茎叶中均分离得到。(杨秀伟，实用天然产物手册-生物碱，化学工业出版社，2005年版446)本发明人通过药效实验证实几内亚胡椒碱能较好的防治心脑血管和肿瘤疾病的作用，尤其适用于防治冠心病、缺血性脑血管疾病，消化系统肿瘤，如肝脏肿瘤、胃肿瘤、结肠肿瘤或直肠等相关疾病；特别适用于防治心肌梗死、心绞痛、脑血栓、脑出血和肝脏癌、胃或结肠癌等作用显著。本发明人采用了冠状动脉结扎所致的大鼠心肌缺血模型，以心电图表现、心肌缺血程度和范围、心肌缺血面积及心肌酶等作为观测指标，结果表明几内亚胡椒碱可明显改善缺血时心电图T波抬高，明显减轻心肌缺血程度，降低心肌缺血面积和血清心肌酶含量，提示其具有较好的防治缺血性心脑血管疾病的作用。本发明人采用了大鼠大脑中动脉结扎所致的大鼠脑梗死实验，以神经生物学评分，脑缺血程度及范围为观测指标，结果发现几内亚胡椒碱给药后可明显改善大鼠神经生物行为，明显降低脑缺血程度及范围，提示其具有显著的改善脑缺血的作用。本发明人采用了体外抗肝癌细胞H印G2、结肠癌细胞HCT-8、胃癌细胞BGC-823的实验，考察几内亚胡椒碱对三种细胞抑制作用强弱。结果可见当药物浓度在50ug/ml时，对三种肿瘤细胞的抑制率在50%左右，作用明显。本实验结果表明几内亚胡椒碱可以用于制备防治心脑血管疾病，尤其用于制备治疗冠心病、缺血性脑血管疾病及心脑血管缺血性的并发症，特别是在制备防治心肌梗死、心绞痛、脑血栓、脑出血的应用。本实验结果表明几内亚胡椒碱可以用于制备防治多种肿瘤疾病，包括肝脏、胃、结肠或直肠肿瘤，尤其在制备防治肝脏肿瘤、胃或结肠肿瘤防方面效果显著。在制备防治心脑血管疾病药物和抗肿瘤疾病药物时，尤其是在制备治疗心肌梗死、心绞痛、脑血栓、脑出血和肝脏肿瘤、胃或结肠肿瘤药物时，可以单独使用，也可以含有几内亚胡椒碱的药物组合物的形式使用。特别是几内亚胡椒碱在治疗心脑血管疾病时，能显著的降低心肌梗死的发生率和梗死面积，对治疗缺血性的心脑血管疾病作用显著。心脑血管疾病中，尤其是冠心病，相对于高血脂等原因，缺血是导致发病的直接原因，也是从根本上有效防治的途径。几内亚胡椒碱治疗冠心病，主要是起负性肌力的作用，"几内亚胡椒碱十二指肠给药对正常麻醉开胸犬血流动力学的影响实验"表明，它可明显降低左室等容期压力最大变化率(士dp/dtmax)，能明显的减弱左室的收縮功能，同时，降低心输出量和收縮压，并具有一定的减慢心率作用，进而减少左室做功，有效的减少心肌耗氧量，对病理状态下的犬发挥抗心肌缺血作用。几内亚胡椒碱可直接减弱心肌的收縮力，减少心肌耗氧量，直接发挥抗心肌缺血作用，迅速起效，可作为冠心病急性发作期(如心绞痛、心肌梗死)的治疗用药。依据药效学有效剂量为10mg/kg，建议人的临床日用量为170mg/天。本发明还提供了以几内亚胡椒碱为活性成分用于防治心脑血管疾病和抗肿瘤的药物组合物及其药物剂型。本发明提供的药物组合物可按本领域内已知方法制备，并可经胃肠道、皮肤、粘膜、腔道和注射等途径给药。本发明提供的药物组合物的剂型可按本领域已知方法制备，即以上述有效量的几内亚胡椒碱为有效活性成分，并包括了药剂学上可接受的其它辅料组分，其中所述的几内亚胡椒碱含量可以为1%99.99%。本发明提供的药物制剂中，经胃肠道给药包括片剂、胶囊剂、滴丸剂、混悬剂、颗粒剂；皮肤给药包括贴剂、软膏剂；粘膜给药包括粘贴片、贴膜剂、舌下片剂；腔道给药包括泡腾片；注射给药包括乳剂、注射剂、纳米粒、脂质体等剂型。本发明所述的剂型并不限于此。在制备片剂、胶囊时，可选用的辅料可以是淀粉、糊精或环糊精、蔗糖、硬脂酸盐等常规充填剂。在制备脂质体时可选用的辅料可以是卵磷脂、脑磷脂、或胆固醇等。在各制剂的后期制备工艺及设备均属制药领域的常规技术，本发明对此不再作限定，故在此不予详述。具体实施例方式实施例1、几内亚胡椒碱与荜茇总生物碱的制备本发明所述的几内亚胡椒碱可由胡椒属药材中分离得到(参见吴霞，于志斌，叶蕴华，荜茇化学成分的研究(1)，中草药，39(2):2008，178-180)，或用化学方法合成制得(参见0kwute，S.K.，Okogun，J.I.，0korie，D.A.，AhmaduBelloUniv.，Zaria，Nigeria,Revisedstructureandsynthesisofpiperoleinacids，guineensineandwisaninefromPiperguineense.，Tetrahedron,1984，40(13)，2541-5)。[OO33](—)几内亚胡椒碱的制备取15kg荜茇(PiperlongumL.)的干燥果穗，粉碎后加入10倍量体积的95%乙醇，回流提取3次，每次2h，将提取液浓縮后得浸膏，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，将二氯甲烷萃取层浓縮，得170g浸膏，通过硅胶柱层析粗分，利用石油醚丙酮(ioo:i-i:ioo)梯度洗脱得到多个流份，再分别对其中流份采用硅胶柱层析，再用二氯甲烷和甲醇不同比例梯度洗脱，重结晶得到6个化合物，通过核磁共振技术及质谱技术解析化合物结构，经与文献(杨秀伟，实用天然产物手册_生物碱，化学工业出版社，2005年版446)对照，其中，几内亚胡椒碱(2.2g)的理化性质及光谱数据与文献报道一致。实施例2、几内亚胡椒碱十二指肠给药对冠脉结扎致大鼠实验性心肌梗死的影响实验方法将Wistar大鼠96只，随机分为6组，每组16只分别为假手术组、模型组、阳性药组(尼莫地平30mg/kg)、几内亚胡椒碱分为小、中、大三个剂量组，分别为5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg。采用结扎冠状动脉左前降支造成急性心肌缺血损伤模型，考察其对心电图，心肌梗死面积，心肌酶的影响，并比较几内亚胡椒碱和阳性药的作用效果。几内亚胡椒碱是按实施例1的方法制备得到。实验结果(1)几内亚胡椒碱对冠脉结扎所致大鼠实验性心肌梗死T波变化绝对值的影响表1、几内亚胡椒碱十二指肠给药对冠脉结扎致大鼠实验性心肌梗死T波变化绝对值的影响(；±5，单位mV)6T波变化绝对值(m\r)剂量动物_组别迈g/kg数结扎后30min给药后30min给药后lh给药后3h给药后5h假手术组—160.03±0.020.05±0.030.04±0.030.04±0.030.03±0.02模型组—140.12±0.05iA40.13±0.07A"0,14±0.05出0,13±0.050.ll土O.04"盐酸地尔i克卓组6150.12±0.060.ll土O.050.11±0.060.07±0.06"0.06±0.04."几内亚胡#！^小剂量组150.13±0.110.13±0.110.11±0.100.10±0.080.05±0.06"'几内亚胡fe^中剂量组10150.11±0.070.10±0.080,10±0.060.07±0.05"0.06±0.04."几内亚胡^U^大剂量组20160.13±0.070.10±0.050.08±0.06"0.07±0.05"0.05±0.03"'与假手术组比较，AAAp<0.001;与模型组比较，*P<0.05**P<0.01或微P<0.001(2)几内亚胡椒碱对冠脉结扎致大鼠实验性心肌梗死心肌酶的影响表2、几内亚胡椒碱对冠脉结扎所致大鼠实验性心肌梗死心肌酶的影响(；±5，单位U/L)剂量组别mg/kgASTLDHCKCK-MB假手术组一277.2±288.1530.8±294.8708.2±308.0566.3±154.7模型组一1036.7±626.8出1806.9±615.6"A3090.1±1547.923.1±346.7"盐酸地尔硫卓组6852.5±272.01581.4±341.31878.2±820.3'665.4±209.1"几内亚胡椒碱小剂量组931.9±289.41589.6±465.32300.7±1057.6940.9±340.9几内亚胡椒碱中剂量组10807.1±232.81559.3±330.71707.5±778.3'647.2±279.5"几内亚胡椒碱;fc量組20750.1±204.21434.2±325.81179.6±1055.9"*505.9±465,2."与假手术组比较，AAAP<0.001;与模型组比较，*P<0.05**P<0.01或***P<0.001由上表可见，冠脉结扎后，与假手术组比较，模型组心肌细胞破坏严重，血清心肌酶AST、LDH、CK、CK-MB值显著升高；几内亚胡椒碱中、大剂量组、均可以保护心肌细胞免受破坏，降低CK、CK-MB水平，几内亚胡椒碱大剂量组降低心肌酶的作用最显著，作用好于阳性药。(3)几内亚胡椒碱对冠脉结扎所致大鼠心肌梗死面积占全心面积的百分比的影响表3、几内亚胡椒碱对冠脉结扎致大鼠心肌梗死面积占全心面积百分比的影响(;±《)组别剂量全心面积梗死面积梗死区占全心面(mg/kg)(咖2)积比例(％)正常组—565.7±65.4——<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01由表3可见，冠脉结扎后，模型组心肌梗死严重，心肌梗死面积显著。几内亚胡椒碱各剂量组均能很好改善心肌缺血导致的心肌梗死，显著縮小心肌梗死面积，其中，几内亚胡椒碱大剂量的作用效果最显著，明显优于阳性药组。综合以上结果，几内亚胡椒碱对冠脉结扎所致大鼠实验性心肌缺血有较好的治疗作用，可通过改善缺血，减少心肌细胞损伤和减少心肌梗死范围等，对冠脉结扎所致大鼠实验性心肌梗死发挥治疗作用。推测几内亚胡椒碱对人和哺乳动物的心绞痛、心肌梗死也会有较好的治疗作用。实施例3、几内亚胡椒碱对大脑中动脉结扎所致大鼠脑梗死的影响将Wistar大鼠96只，随机分为6组，每组16只分别为假手术组、模型组、阳性药组(尼莫地平30mg/kg)、几内亚胡椒碱为小、中、大三个剂量组，剂量分别为5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg。采用结扎大鼠大脑中动脉复制局部脑梗死的动物模型，观察其对局部脑缺血及梗死的影响，考察其对脑梗死面积的影响，并比较几内亚胡椒碱的作用效果。实验结果(1)几内亚胡椒碱对大脑中动脉结扎所致脑梗死面积占全脑面积的百分比的影响表4几内亚胡椒对大脑中动脉结扎所致脑梗死面积占全脑面积的百分比的影响("5)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>与模型组比较，**P<0.01，微P<0.001由上表可见，单侧大脑中动脉结扎后，模型组损伤严重，脑梗死面积显著增大。几内亚胡椒碱药物各剂量组均能很好改善脑动脉缺血导致的局部脑梗死，显著縮小脑梗死面积，改善梗死情况。尤其几内亚胡椒碱大剂量效果最显著，作用优于阳性药。综合以上结果，几内亚胡椒碱对大脑中动脉结扎所致的脑梗死大鼠模型的脑梗死具有显著的治疗作用，通过改善缺血，减少梗死范围等作用发挥对局部脑梗死的治疗作用。推测几内亚胡椒碱对人和其它哺乳动物的脑血栓、脑出血也有很好的治疗作用。可见，几内亚胡椒碱在治疗冠心病和缺血性脑血管病时，特别适用于急性病发作时治疗使用，比通过抑制部分环节，发挥间接的作用，有明显的优势。实施例4、几内亚胡椒碱体外对肝癌细胞H印G2、结肠癌细胞HCT-8、胃癌细胞BGC-823的影响用含10%FBS的DMEM细胞培养液将几内亚胡椒碱稀释成5个不同浓度，从200iig/ml设起，依次2倍比稀释，即200、100、50、25及12.5iig/ml，共配制三份上述药物，分别加入接种有H印^肝癌细胞、HCT-8结肠癌细胞、BGC-823胃癌细胞的三块96孔板中，每孔200ii1，每组设5个复孔，平行设置细胞对照组。置于37°〇，5%C02培养箱中培养，每日观察细胞状态。药物作用72小时后，取出96孔板，吸去各孔内培养液，并加入O.5mg/ml的MTT溶液200yl，平行设置空白对照组，置于37°C，5%C02培养箱中继续培养4小时后取出，吸出各孔内的MTT溶液，分别加入匿SO溶液200ii1，室温放置10分钟，充分震荡60秒后，于96孔板酶标检测仪上测定570nm处的OD值，计算各个浓度组药物对三种细胞的生长抑制率。实验结果见表5:表5几内亚胡椒碱体外对肝癌细胞H印^、结肠癌细胞HCT-8、胃癌细胞BGC-823的影响肝癌细胞H印G2结肠癌细胞HCT-8胃癌细胞BGC823MTT值0D57。抑制率MTT值0D57。抑制率MTT值0D"。抑制率(;土s,n=5)(%)(;士s,n=5)(%)(;±s，n=5)(%)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注与对照组相比，给药组细胞均受到明显抑制，具有统计学意义，*P<0.05，***P<0.001.从上表可以看出不同浓度的几内亚胡椒碱作用于!fepG2、HCT-8、BGC-823三种细胞后，细胞均受到明显的抑制，且随着药物浓度的增大，抑制作用亦增强。几内亚胡椒碱对H印G2、HCT-8、BGC-823三种细胞的IC50分别为:(76.09±7.23)iig/ml，(77.69±9.95)iig/ml，(54.49±6.13)yg/ml。几内亚胡椒碱是通过直接诱导细胞凋亡，抑制肿瘤细胞生长，起到治疗肿瘤的作用，推测其对肝脏、胃或结肠等实体瘤也有治疗作用。由此，我们可推断本发明所述的几内亚胡椒碱，也可以用于人和其他哺乳动物的肿瘤治疗，尤其是胃肿瘤、结肠或肝肿瘤。实施例5、几内亚胡椒碱的对肝肾功能的影响发明人进行"几内亚胡椒碱灌胃给药对大鼠的长期毒性试验"，考察给药后1个月，动物的血液生化指标(GLU，TP，ALB，BUN，Cr，TBIL，CH0L，ALP，G0T，GPT)的变化，结果各项检测值均在正常范围内，且与正常对照组比较无明显差异。病理报告显示给药1个月后，大鼠肝、肾的组织结构正常，表明几内亚胡椒碱无明显的肝肾毒性。实施例6、几内亚胡椒碱胶囊剂的制备取几内亚胡椒碱35g，研磨粉碎，过80目筛。加过80目筛的微晶纤维素35g混合均匀后，加入60%乙醇作为粘合剂制软材，过30目筛制颗粒，烘干后，过30-80目筛整粒，分装于3号胶囊中，用铝塑复合包装，即得。每粒胶囊含几内亚胡椒碱0.05g。口服给药，每日3次，每次2-3粒。实施例7、几内亚胡椒碱片剂的制备取几内亚胡椒碱50g，研磨粉碎，过80目筛。加过80目筛的微晶纤维素50g混匀后，加入2%的羟丙甲纤维素作为粘合剂进行制软材，制粒干燥整粒，加入4%的崩解剂羧甲基淀粉钠和润滑剂O.5%硬脂酸镁与细粉混合均匀整粒，混匀，压片，即得。每片含几内亚胡椒碱0.05g。口服给药，每日2次，每次2-3片。权利要求如下式所示的几内亚胡椒碱在制备防治心脑血管疾病和/或消化系统肿瘤药物中的应用F2008101808392C0000011.tif2.根据权利要求1所述的应用，其制备防治心脑血管疾病药物的应用中，包括制备治疗急性缺血性心脑血管疾病药物的应用。3.根据权利要求1或2所述的应用，其心脑血管疾病包括冠心病、心肌梗死、心绞痛、脑血栓、脑出血。4.根据权利要求1所述的应用，其制备治疗消化系统肿瘤药物的应用中，包括制备诱导消化系统肿瘤细胞凋亡药物的应用。5.根据权利要求4所述的应用，消化系统肿瘤包括肝脏肿瘤、胃肿瘤、结肠肿瘤或直肠肿瘤。6.根据权利要求l所述的应用，其制备的防治心脑血管疾病和/或消化系统肿瘤药物，在治疗剂量范围内，对哺乳动物肝肾没有明显毒副作用。7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述药物是由有效量的几内亚胡椒碱和药学上可接受的辅料组成。8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述药物的剂型包括片剂、胶囊剂、滴丸剂、混悬剂、颗粒剂；贴剂、软膏剂；粘贴片、贴膜剂、舌下片剂；泡腾片；乳剂、注射齐U、纳米粒、脂质体。9.防治心脑血管疾病和/或消化系统肿瘤的药物组合物，由治疗有效量的几内亚胡椒碱和药学上适用的载体或辅料组成。10.权利要求9的药物组合物，其心脑血管疾病包括急性缺血性心脑血管疾病；其消化系统肿瘤包括肝脏肿瘤、胃肿瘤、结肠肿瘤或直肠肿瘤。全文摘要本发明涉及几内亚胡椒碱在制备防治心脑血管疾病、抗肿瘤药物中的应用，试验证明，几内亚胡椒碱具有显著防治心绞痛、心梗、脑出血、脑血栓，及消化系统肿瘤等作用。本发明同时还提供了几内亚胡椒碱用于制备防治心脑血管疾病、抗肿瘤药物制剂。文档编号A61P9/00GK101732307SQ200810180839公开日2010年6月16日申请日期2008年11月25日优先权日2008年11月25日发明者周亚伟申请人:周亚伟