专利名称：细胞松弛素d在制备抗肿瘤药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体为细胞松弛素D (CytochalasinD)在制备抗肿瘤药物中 的用途。
背景技术：
细胞松弛素D是一种真菌的代谢产物，王钧等曾经从竹菌(￡"g/eraW_yCM goete》7)中分 离得到，而我们也从一株分离自海南粗榧的内生真菌S49中分离得到。前人研究认为细胞松 弛素D是一种细胞微丝抑制剂，作用于食管癌细胞ECa109、乳腺癌细胞((MA782/5S-8102)、 人体肝癌BEL-7402等肿瘤细胞后，可使多数肿瘤细胞产生多核和排核等现象，而正常的人 胚肺细胞则不产生上述异常现象。正常细胞和肿瘤细胞对细胞松弛素D的不同反应，使得细 胞松弛素D可以选择性地杀死肿瘤细胞，从而应用于肿瘤的治疗。目前细胞松弛素D仅作为 一种研究生命现象的工具应用于对细胞分裂、细胞运动、细胞质与细胞核的关系等的研究中， 未见将其应用于对肿瘤的治疗中。我们在研究中发现，细胞松弛素D对不同的肿瘤细胞株也 具有一定的选择性，对食管癌细胞ECal09、胃癌细胞SGC-7901、肝癌细胞SMMC-7721等 活性显著，但是对慢性骨髓性白血病细胞K562却并未显示出活性。因此，可以将细胞松弛 素D针对性地应用于制备治疗食管癌、胃癌和肝癌的药物中。
发明内容
本发明的目的在于公开细胞松弛素D (CytochalasinD)在制备抗肿瘤药物中的新用途。 细胞松弛素D可以从真菌中利用包括吸附树脂柱层析、硅胶柱层析、反相硅胶柱层析， 减压柱层析等多种常规分离手段获得，或者通过合成以及半合成手段获得。可单独应用或者 合用，或与适宜的赋形剂相结合，按照常规方法制成各种剂型，应用于制备治疗食管癌、胃 癌和肝癌的药物中。
细胞松弛素D的结构如下
具体实施例方式
下面结合具体实例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。
实施例1:内生真菌S49的发酵培养及细胞松弛素D的提取分离
发酵培养基(PD):马铃薯200g,葡萄糖20g，定容至1L， pH自然。
内生真菌S49经PDA培养基斜面活化，接种于1L三角瓶，28 °C静置培养30 d，得发 酵液48L。
将菌株S49的48L发酵液固液分离后，发酵上清液于50。C减压浓縮至5 L。用乙酸乙 酯萃取后得到乙酸乙酯浸膏(6.0g)，之后经硅胶柱柱层析、重结晶得到细胞松弛素D(l.lg)。
实施例2:细胞松弛素D的结构鉴定
细胞松弛素D为白色针状结晶，喷上体积分数10%的硫酸显棕黄色。碘化铋钾显色剂显 色呈阳性。EI/MS[M+] 508.3，分子式为C3QH37N06。根据核磁共振及高分辨质谱等谱图数据 分析，鉴定了它的结构。并根据2D-NMR技术对其13C-NMR， ^-NMR数据进行了归属。 !H-NMR (400MHz， CD3OD>5: 7.33 (2H, d, /= 7.12 Hz， H-3'， H-5')， 7.27 (1H， t， /= 7.36, 10.28, 17.64 Hz， H-4'), 7.15 (2H, d， >/= 7.24 Hz， H-2', H-6')， 6.12 (1H， dd， </= 2.52， 15.68 Hz, H-13), 5.70 (1H, dd, /= 9.68, 15.48, 25.24 Hz， H-19), 5.64 (1H, d， ■/= 2.00 Hz， H-21), 5.36 (1H， m, H-14), 5.31(1H, s， H-12), 5.15 (1H， dd， /= 2.2， 15.76 Hz， H-20), 5.10(1H， s, H-12), 3.82 (1H， d， J= 10.64 Hz， H-7), 3.25 (1H， m, H隱3)， 2.86 (1H， t, /= 3.48， 10.16, 13.64 Hz, H-8)， 2.82 (1H, t， 《/- 7.40， 5.00, 12.40 Hz, H-IO)， 2.76 (2H, m, H-4, H-16)， 2.69 (1H, t, /= 4.08， 9.32, 13.40 Hz， H-IO)， 2.5.3 (1H, q, /= 11.12, 23.60,34.84 Hz, H-15)， 2.16 (1H， t,J- 4.20, 8.32 Hz， H-4), 2.28 (3H， s， H-25), 2.01 (1H， t， /= 5.76, 10.04 Hz, H-15), 1.52 (3H, s, H-23)， 1.21 (3H， d， /= 6.8 Hz， H-22)， 0.95 (3H， (!， / = 6.68 Hz, H-ll)。 13C-NMR(100 MHz， CD3OD) <5: 173.7 (C-l)， 53.5 (C-3)， 50.0 (C-4)， 32.6 (C-5),147.6 (C-6)， 69.8 (C陽7)， 47.0 (C-8), 53.3 (C-9)， 45.3 (C-10) ， 13.6 (C陽ll), 114.3 (C-12)， 132.3 (C-13)， 134.1 (C-14), 37.7 (C-15) , 42.3 (C-16), 210.2 (C-17), 77.6 (C-18), 130.6 (C-19), 127.6 (C-20), 77.1 (C-21)， 19.4 (C-22), 24.2 (C-23), 169.6 (C-24)， 20.8 (C-25)， 137.2 (C-l')， 129.1 (C-2'， C-6')， 128.9 (C-3'， C-5')， 127.0 (C-4')。
实施例3:细胞松弛素D的体外抑瘤实验
采用MTT法测试了细胞松弛素D对人体的食管癌细胞ECal09、胃癌细胞SGC-7901、 肝癌细胞SMMC-7721、慢性骨髓性白血病细胞K562的体外抑瘤活性(结果见表1)。活性测 试方法如下实验设阴性对照组(水)、DMSO溶剂对照组、阳性对照组(丝裂霉素C)和8个 不同浓度(0.8, 1.6, 3.2, 6.3, 12.5, 25， 50, 100 )的待测样品，每个浓度设2个平行。收集对数生 长期细胞，血球计数板计数，按每孔4500个癌细胞量接种于96孔平底细胞培养板中，置于 5%C02、湿度90%以上、37'C温箱中培养。24 h后取出加入一定量的待测样品，继续培养3 d后取出置于显微镜下观察每孔细胞形态，记录细胞形态变化情况，接着每孔加入5 mg/mL 的MTT溶液(溶于平衡盐溶液PBS) 50pL，37t:反应4h后，将细胞培养液吸出，每孔加入 lOOnLDMSO将Formazane充分溶解，将细胞培养板置于MK3酶标仪上，用570nm波长测 各孔的吸光度(A)，按下列公式求生长抑制率。
生长抑制率(％) =(1——用药组平均A值 Q%
阴性对照组平均A值7
以样品浓度为横坐标，以抑制率为纵坐标，作图并求出抑制率为50%时样品的浓度(1<:5())，
样品活性结果即以半数抑制浓度(IC5C)表示。
表l、细胞松弛素D的体外抑瘤结果 化合物_ ,mr')
ECal09 SMMC-7721SGC-7901 K562 细胞松弛素D 5.1 2.8 1.3 无活性
实施例4:细胞松弛素D 5g与微晶纤维素40g及硬脂酸镁5g混合，混合物用单冲压片 机打成直径5mm，重量200mg的片剂。本片剂中每片含细胞松弛素D 20mg。
实施例5:细胞松弛素D20g与乳糖25g及硬脂酸镁5g混合，以每500mg填充胶囊。 本胶囊剂中，每个胶囊含细胞松弛素D 200mg。
权利要求
1、细胞松弛素D在制备抗肿瘤药物中的用途。细胞松弛素D的结构如图所示2、如权利要求1所述的细胞松弛素D在制备抗肿瘤药物中的用途，其特征在于细胞松弛素D可单独应用或者合用，或与适宜的赋形剂相结合，按照常规方法制成各种剂型用于制备抗肿瘤药物。
2、 如权利要求1所述的细胞松弛素D在制备抗肿瘤药物中的用途，其特征在于细胞 松弛素D可单独应用或者合用，或与适宜的赋形剂相结合，按照常规方法制成各种剂型用于 制备抗肿瘤药物。
3、 如权利要求1所述的细胞松弛素D在制备抗肿瘤药物中的用途，其特征在于细胞松弛素D的制剂，可用于制备治疗食管癌、胃癌和肝癌的抗肿瘤药物。
全文摘要
本发明涉及医药技术领域，具体为细胞松弛素D(Cytochalasin D)在制备抗肿瘤药物中的用途。细胞松弛素D的结构式如下，可以从真菌中利用包括吸附树脂柱层析、硅胶柱层析、反相硅胶柱层析，减压柱层析等多种常规分离手段获得，或者通过合成以及半合成手段获得。可单独应用或者合用，或与适宜的赋形剂相结合，按照常规方法制成各种剂型，应用于制备治疗食管癌、胃癌和肝癌的药物中。
文档编号A61P35/00GK101416962SQ20081018690
公开日2009年4月29日 申请日期2008年12月5日 优先权日2008年12月5日
发明者娇 吴, 戴好富, 梅文莉, 苹 陈, 黄玖利 申请人:中国热带农业科学院热带生物技术研究所