芍药苷在预防和治疗抑郁症药物中的应用及其药物组合物的制作方法

专利名称：芍药苷在预防和治疗抑郁症药物中的应用及其药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及芍药苷的新医药用途及其药物组合物。
背景技术：
抑郁症严重危害着人类的生命与健康。抑郁症(Depression)是指以情绪低 落、思维迟緩并伴有兴趣减低、主动性下降等精神运动性迟滞症状为主要表 现的一类心境障碍综合症。发病率非常高，约15-17%，并且近年来更是呈逐 年上升的趋势；据世界卫生组织预计，到2020年，抑郁症将成为首位致残原 因，是21世纪人类的主要杀手(Murray,1997)。
芍药苦(paeoniflorin)为单帖类糖苷化合物，其分子式如式I所示。是一 种天然活性物质，源于毛莱科植物芍药Paeonia albiflom Pall的根，牡丹 P.suffrsticosa Andr的根，紫牡丹P.delarayi Franch的根，含量以赤芍为高。
目前已知芍药苷有多种药物应用芍药甙具有显著的镇痛、抗惊厥作用。 有研究报道，芍药甙(5-100mg.kg-l, i.p.)能够显著降低蜂毒引起的疼痛反 应。抗肿瘤作用，芍药苷能抑制肿瘤细胞膜上ATP酶的活性及升高腺苷酸，环 化酶(AC)活性的作用。该药抑制肿瘤细胞生成、与抑制膜上Na，K-ATPase并激 活AC密切相关。芍药苷2mg/ml、 lmg/ml及0.5mg/ml个有效药物浓度对提示
芍药苷能在一定程度上抑制人肝癌细胞的增殖以延緩肝癌的进程。并可诱导
HepG2凋亡,并能上调凋亡相关基因P53和bax表达，下调抗凋亡基因bcl-2表达。 现代药理研究表明芍药苷还具有调节免疫、镇痛、镇静、解痉、扩张血管、 抗炎、改善学习记忆行为等作用。芍药苷静脉注射能明显降低链脲霉素诱发 的糖尿病小鼠的血糖，血浆中含糖量也随着用药时间的延长而逐渐降低。最近 研究发现芍药苷还具有神经保护作用，但还不明确其作用机制。长期以来芍 药用于治疗痴呆性疾病，芍药苷能减轻东莱菪碱诱发的大鼠放射状谜宫辨别 障碍。
芍药苷的毒性非常低，有研究表明在培养的正常胸腺细胞中加入 0.1-1000ug/ml的芍药苷没有发生毒性反应；在U937细胞系(人骨髓单核细胞 系)中加入160-640ug/ml的芍药苦也没有发生毒性反应。
目前临床应用方面芍药苷主要用于冠心病的治疗和老年性疾病，增强体 质与免疫功能、抗炎止咳、祛痰平喘等方面，尤其是老年慢性呼吸道疾病的 治疗中可作辅助药物。

发明内容
本发明的目的在于提供芍药苷新的药用用途，即在预防和治疗抑郁症的 药物中的新应用。
本发明还提供一种预防和治疗抑郁症的药物组合物，该药物组合物毒副 作用小、见效快、价格低廉。
本发明的预防和治疗抑郁症的药物组合物，其包括有效剂量的芍药苷以 及药学上可接受的载体。所述药学上可接受的载体为常规药物赋形剂或辅剂。
所述药物组合物含有O. 1-50°/。重量的芍药苷。所述药物组合物的剂型为液 体剂型或固体剂型。其中，所述液体剂型为注射剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、
气雾剂。所述固体剂型为片剂、胶嚢、丸剂、粉针剂、緩释制剂及各种微粒 给药系统。
药效及药理学作用实验表明芍药苷能有效改善实验小鼠的抑郁状态。 在强迫游泳实验模型中，芍药苷腹腔连续注射七天后进行小鼠强迫游泳实验， 测定5min内游泳不动的时间。0.5和lmg/Kg腹腔注射剂量都能显著降低大鼠游 泳的不动时间，在短期和长期效果上与对照组相比较，上述的指标均有统计 学显著差异，表明芍药苷有很强的抗抑郁效果。氟罗西汀(Fluoxetine)和丙 咪。秦(Imizin)是常用的现行的治疗抑郁症的药物，芍药苷和这两种药物作对 比，在短期效果上，在芍药苷剂量为0.5mg/Kg时与上述两种药物的游泳不动 时间无显著性差异。当芍药苷剂量为lmg/Kg时游泳的不动时间比氟罗西汀和 丙咪嗪均有统计学明显差异；但在长期效果上，特别是发现芍药苷治疗7天， 停药后28天再检测动物行为发现，芍药苷仍能够缩短小鼠的不动时间，并且 效果较7天时更好。同组的氟罗西汀不能够缩短小鼠的不动时间，而丙咪嗪虽 然可缩短小鼠的不动时间，但其效果明显比7天时差。表明芍药苷的抗抑郁作 用更为持久，优于阳性对照药物氟罗西汀和丙咪嗪。
在大鼠慢性不可预知模型上，实验中比较了芍药苷与阳性对照氟罗西汀、 阴性对照生理盐水的抗抑郁作用，结果发现，与生理盐水相比，芍药苷能够 改善大鼠的清洁度、缩短新环境下大鼠进食的潜伏期(Latency of the novelty suppressed-feedingtest)、增加大鼠的自发活动能力，这些改善与氟罗西汀治疗 相似，说明芍药苷具有抗抑郁作用。
成年海马区的神经元再生在抑郁症的发生、发展过程中具有非常重要的 作用，已有证据表明抑郁症的发生和治疗与成年海马神经元再生密切相关 首先，几乎所有现行的抗抑郁药物或方法均是通过促进成年脑神经元再生而 起抗抑郁作用的。其次，临床脑成像技术研究发现，抑郁患者的海马体积明 显缩小，而随着抑郁病情的改善，海马的体积会逐渐增大。研究结果表明，
芍药苷显著增加脑室旁区Brdu阳性细胞数目，其中剂量0.5mg/Kg与对照组相 比有显著统计学差异(PO.05),剂量组1.0mg/Kg与对照组相比统计学差异更 为显著，PO.01);表明芍药苷具有促进神经前体细胞分裂的作用。
经实验研究证实本发明的预防和治疗抑郁症的药物组合物毒副作用小， 效果持久，价格低廉。
下面将结合具体实施方式
，详细介绍本发明的芍药苷在预防和治疗抑郁 症方面的应用以及含有芍药香成分的预防和治疗抑郁症的药物组合物。


图l水平活动距离柱状图(旷场实-睑，纵坐标为动物整个行动距离)； 图2强迫游泳实验的游泳不动时间柱状图(给药7天后检测)； 图3强迫游泳实验的游泳不动时间柱状图(给药7天继续铜养28后检测)； 图4进食量柱状图(新环境进食抑制实验，纵坐标为食物摄取量)； 图5进食的潜伏期柱状图(新环境进食抑制实验，纵坐标为进食时间)； 图6水平运动距离柱状图(旷场实验，纵坐标为动物行走的方格数量)； 图7清洁度柱状图(旷场实验，纵坐标为动物站起清洁修饰自己的次数)； 图8小鼠大脑SGZ区Brdu阳性细胞数目。其中，A为生理盐水组小鼠脑室 旁区Brdu阳性细胞显微照片图，B为芍药苷(0.5mg/kg)组小鼠脑室旁区Brdu 阳性细胞显微照片图，C为芍药苷(1.0mg/kg)组小鼠脑室旁区Brdu阳性细胞 显微照片图，D为实验组动物的小鼠脑室旁区Brdu阳性细胞数目统计柱状图。
具体实施例方式
本发明从芍药科植物芍药和牡丹的根中提取分离出的 一种天然活性物质 芍药苷，可以在治疗抑郁症药物中得到应用。 一、有效成分芍药苷的分离提纯
利用化学方法从芍药和牡丹的根为原料，制备芍药苷过程如下
芍药或牡丹的根，粉碎药材，以70%的乙醇回流提取、减压浓缩，得干 浸膏，浸膏加水充分溶解，过大孔吸附树脂柱，分别用水、20 %乙醇洗脱， 收集20°/。乙醇洗脱液，减压浓缩得浸膏，经硅胶柱层析分离得芍药苦单体化 合物。(姜换荣，裴旭红，胡海伟，大孔吸附树脂用于赤芍总戒分离方法的 探索，中成药1999,21(12))
二、药效及药理作用实一睑
1、强迫游泳实验(FST) : Porsolt等于1977年提出了强迫游泳模型，发 现不同的药物对在FST试验中强迫游泳不动时间的改变是不同的，抗抑郁药 能有效减少不动时间，该模型是筛选抗抑郁药的最为有效的方法。使动物被 迫在一个局限的空间游泳，它们首先挣扎试图逃跑，经过努力后便处于一种 不动状态，这种不动状态被认为是行为绝望，是一种类似于抑郁症的绝望状 态。玻璃缸内的水深是影响大鼠强迫游泳的重要因素，水深标准是使实验鼠 后肢伸直刚好能触到缸底但不足以支撑身体，针对大鼠的体重，本试验选择 的水深为40cm。具体步骤是第1天预试验，将实验鼠单个放入敞口透明玻璃 缸内(缸高50 cm ,直径18 cm，缸内水深40cm，水温23-25。C)，实验鼠力欠入水 中15min后取出，32。C烘干，放入笼内。预试验结束后24 h,重新将实-睑鼠 单个放入敞口玻璃缸内，测定5 min内游不动(Immobility)的时间，以此作为 药物抗抑郁作用的指标。标准为实验鼠微蜷身体，呈漂浮状态，鼻孔露出水 面。强迫实验鼠游泳实验为经典的筛选抗抑郁药物的实验模型，有效的抗抑 郁药物会使实验鼠游泳的不动时间缩短。
旷场实验(open field):将动物置于高50cm、边长100cm、周边和底面 均为黑色的方形旷场中，光照度为601ux,室内隔音。观察者在行为实验室内 用摄像系统记录动物在旷场内前3min的行为表现，包括水平活动距离(Totle Distance)、直立的次数、修饰、探究、呆滞和排便量。其中水平活动距离和
探究通过行为跟踪分析系统获得数据，直立、修饰行为是根据行为摄像仪统 计发生的次数。通过旷场实验确定实验动物的运动能力没有统计学差异。
实验动物SPF级成年雄性C57小鼠(18±2克)由南方医科大学实验动物 中心提供，自由摄食饮水，饲养于12小时为一个循环的明暗转换的环境(上 午7时关灯)。4巴动物随机分成6组，每组10只。从各组动物饲养7日开始腹腔 注射生理盐水、芍药苷、氟罗西汀和丙咪,，每天一次，连续7天，进行强迫 游泳实验，检测短期抗抑郁效果；实验动物继续饲养28天，再进行强迫游泳 实验，检测是否具有长期抗抑郁效果。
实验结果旷场实验中水平活动距离的指标结果表明，如图1所示，各实 验动物组的体力素质没有统计学差异；在小鼠强迫游泳实验中发现如图2所 示，在给药7天进行检测时，芍药苷能够显著缩短不动(immobility)的时间， 并呈剂量依赖性，与氟罗西汀、丙咪嗪等现行的抗抑郁药相比，芍药苷抗抑 郁效果最好，在芍药苷剂量为0.5mg/kg时有非常明显的差异(PO.05),而在 芍药苦给药浓度为lmg/kg时，能非常显著降低大鼠的游泳不动时间(PO.Ol )。 同时我们还观察到氟哌啶醇不能够缩短小鼠的不动时间，表明本实验研究具 有很好的可重复性。如图3所示，特别是发现治疗7天，停药后28天再检测动 物行为发现，芍药苷仍能够缩短小鼠的不动时间，并且效果较7天时更好，而 且以给药浓度为lmg/kg的剂量效果最好。同组的氟罗西汀不能够缩短小鼠的 不动时间，而丙咪，秦虽然可缩短小鼠的不动时间，但其效杲明显比7天时差， 表明芍药苷的抗抑郁作用更为持久。
2、慢性轻度不可预见性抑郁模型(CUS):按照已建立的方法，经旷场 试验和新环境进食实验选择得分相近动物，随机分组，孤独饲养。随机采用 夹尾(lmin)、制动(6h)、电击足底(电流强度lmA,10 s ,20次)、冰水游泳 (4。C，5min)、热应激(45。C,5 min)、禁食(24h)、禁水(24h)、频闪照明(120次/min，1
夜)、白噪声(4h)进行刺激，每天给予l种刺激，连续21天后造模成功并进行 旷场试验和新环境进食等行为学检测。
新环境进食抑制实验(NSF):边长50cm、高40cm箱底铺匀2cm高木削 的试验箱，箱底中央放置糖丸或小块食物于白纸上。试验前大鼠禁食24h,试 验时从任意箱角放大鼠入箱内，通过摄像系统观察6min,记录小鼠的活动量， 以小鼠在试验箱中走的格数技术，同时计算由放入小鼠到小鼠前肢抱起糖丸 进食的时间(latency)。小鼠的活动量和进食时间的长短反应了小鼠的抑郁程 度。随后动物放回笼中记录2min内食物消耗量，以排除食欲差异对进食时间 的影响。
实验动物SPF级成年雄性C57小鼠(18±2克)由南方医科大学实验动物 中心提供，自由摄食饮水，饲养于12小时为一个循环的明暗转换的环境，造 模饲养21日后开始注射芍药苷和氟罗西汀，每日1次，至35日结束，继续饲养 至42日开始进行4全测。
实验结果显示阴性对照生理盐水组，阳性对照氟罗西汀组和芍药苷给 药组，在新环境进食抑制实验中，在造模前(before CMS),造模后/给药前 (before treatment)以及给药后(after treatment)小鼠的进食量都无统计学食 欲差异(如图4所示)，说明小鼠的食欲差异对进食时间没有影响；在新环境 进食抑制实验检测小鼠进食的潜伏期(图5),发现在造模前各组小鼠的进食 时间很短，并且各组没有统计学差异，而在造模后各组小鼠在实验时间都没 有进食，说明造模成功，实验小鼠呈明显抑郁状态，在给药14天后，生理盐 水组的小鼠的进食时间没有明显改善，而芍药苷和氟罗西汀给药组明显加快 了小鼠的进食时间(PO.05),改善了小鼠的抑郁状态；在旷场实验中，检测 小鼠的水平运动距离(图6)和清洁度(图7)，在造模前各组实验小鼠的行 走的方格数和清洁修饰自己的次数都非常多，说明实验鼠处于很好的身体和 精神状态，造模后各组小鼠的这两组数据都明显降低，说明小鼠已处于抑郁
状态，而在给药14天后发现，生理盐水组的状态没有明显变化，而氟罗西汀 和芍药苷给药组小鼠的运动能力和清洁度都明显增高(PO.05),说明氟罗西 汀和芍药苷都明显改善了实验动物的抑郁程度。
3.成年脑神经元再生实验小鼠腹腔注射药物后，同时给予Brdu50 mg/kg 腹腔注射，24h后给予动物麻醉，用緩沖福尔马林灌注液(O.IMPB、 4%HCHO 的混合液、PH=7.2)，经主动脉灌注固定后取脑，制作连续脑部冠状冰冻切 片(10-30um)，免疫组织化学染色。用anti-Brdu抗体检测脑室旁区(SGZ区) Brdu阳性细胞并计数，400X下记录Brdu阳性细胞数目，比较各处理组促进神 经前体细胞增殖的效果。
实-睑动物SPF级成年雄性C57小鼠(18±2克)由南方医科大学实验动物 中心提供，自由摄食饮水，饲养于12小时为一个循环的明暗转换的环境，飼 养3天后，上午8点进行药物和Brdu抗体注射，次日上午8点进行灌注固定、取 脑，完成成年脑神经前体细胞增值的检测。
实验结果芍药苦单次腹腔注射溶液(O.lml)剂量为0.5mg/kg和 1.0mg/kg,以生理盐水阴性为对照组，结果表明(如图8)，芍药苷显著增加 脑室旁区Brdu阳性细胞数目，其中剂量0.5mg/Kg与对照组相比有显著统计学 差异(P0.05 )，剂量组1.0mg/Kg与对照组相比统计学差异更为显著，P<0.01); 表明芍药苷具有促进神经前体细胞分裂的作用。
以上实验证明芍药苷具有明显的抗抑郁的作用，因而，可用于制备预防 和治疗抗抑郁的药物。
本发明提供的含有芍药苷作为活性成分和常规药物赋形剂或辅剂的药物 组合物，通常含有0.1-50%重量的芍药苷。
本发明的药物组合物可根据本领域已知的方法制备。用于此目的时，如 果需要，可将活性成分与 一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合， 制成可作为人药使用的适当施用形式或剂量形式。
本发明的药物组合可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道， 如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。
本发明的药物组合物的给药途径可为注射给药。注射包括静脉注射、肌 肉注射、皮下注射、皮内注射和穴位注射等。
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。如液体剂型可以是溶液类、胶体 类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。其他剂型例如片剂、胶嚢、滴丸、气 雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂等。
本发明的组合物可以制成普通制剂、也可以是緩释制剂、控释制剂、靶 向制剂及各种微粒给药系统。
为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。
关于载体的例子是，如稀释剂与吸收剂淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露 醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝 等；湿润剂与粘合剂水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、 糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧曱基纤维素钠、紫胶、 曱基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸 盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂 肪酸酯、十二烷基磺酸钠、曱基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，如蔗 糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氨化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二 烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼 酸、液体石蜡、聚乙二醇等；还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣 片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
为了给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载 体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化
植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯 胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、 干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、曱基纤维素、乙基纤维素等。
为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体，例如 聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。
为了将栓剂制成胶嚢，将有效成分与上述的各种载体混合，并将由此得 到的混合物置于硬的明胶胶嚢或软胶嚢中，也可将有效成分制成微嚢剂，混 悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶嚢中或制成注射剂应用。
例如将本发明的组合物制成注射用制剂，如溶液剂、混悬剂溶液剂、乳 剂、冻干粉针剂，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和/或多种药效学 上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或^t剂， 如稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1, 3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、 多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射 液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以 添加常规的助溶剂、緩沖剂、pH调节剂等。这些辅料是本领域常用的。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味 剂、甜味剂或其他材料。
本发明的药物用组合物的给药剂量可以考虑个体差异在一定范围内变 化，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、 体重、性格及个体的反应，给药途径、给药次数等， 一般来讲，本发明中药 学成分的使用剂量是本领域技术人员公知的。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本 发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在 本发明的保护范围之内。
权利要求
1、芍药苷在制备预防和治疗抑郁症的药物中的应用。
2、 一种预防和治疗抑郁症的药物组合物，其包括有效剂量的芍药苷，以及药学上可接受的载体。
3、 如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有0.1-50%重量的芍药苷。
4、 如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型为液体剂型或固体剂型。
5、 如权利要求4所述的药物組合物，其特征在于，所述液体剂型为注射剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、气雾剂。
6、如权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述固体剂型为片剂、 胶嚢、丸剂、粉针剂、緩释制剂及各种微粒给药系统。
全文摘要
本发明涉及芍药苷在预防和治疗抑郁症药物中的应用及其药物组合物，所述药物组合物含有有效剂量的芍药苷和药学上可接受的载体。所述药物组合物可以制备成各种常规的液体剂型或固体剂型。经过大鼠强迫游泳实验、旷场实验和新环境进食抑制实验都验证芍药苷对于抑郁症有较好的疗效而且药效持续时间长。以芍药苷为有效成分的治疗和预防抑郁症的药物，效果好、持续时间长、毒副作用小、价格低廉。
文档编号A61P25/00GK101385736SQ20081021862
公开日2009年3月18日 申请日期2008年10月24日 优先权日2008年10月24日
发明者严华成, 孙丽荣, 方莹莹, 曲宏达, 朱心红, 李晓文, 李树基, 袁春华, 高天明 申请人:南方医科大学