5-苯亚甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物的用途的制作方法

专利名称：：5-苯亚甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物的用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及5-苯亚甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物的用途，属于化学医药领域。
背景技术：
：目前已上市的2，4-噻唑烷二酮类(TZDs)药物如曲格列酮(troglitazone)、罗格列酮(rosiglitazone)、吡格列酮(pioglitazone)、环格列酮(ciglitazone)等主要用于治疗糖尿病。近几年研究发现TZDs在治疗心血管疾病、抑制牛皮癣、抗肿瘤方面也显示出较好的医疗价值。抗动脉粥样硬化是TZDs对心血管最突出的作用，TZDs抗动脉粥样硬化的直接效应包括增加一氧化氮的生物利用度，减少白细胞和内皮细胞的相互作用，减少血管平滑肌细胞的迀移和增殖及巨噬细胞中胆固醇的外流等。曲格列酮是AMP激酶的活化剂，对角质化细胞的增殖也有抑制作用。该药可改善器官培养的牛皮癣皮肤的组织学特征，临床试验表明，部分患者服用曲格列酮后其牛皮癣症状有实质性的改善。Bhagavathula等合成了一种对PPARy有高亲和力的化合物BP-1107(式a)用于人皮肤的SCID(severe-combinedimmunodeficient)鼠移植模型进行试验，在体外试验中发现BP-1107是有效的角质化细胞生长抑制剂，显著降低了移植到SCID鼠的人牛皮癣皮肤的超常增生。Richard等研充发现，服用浓度为lnirol/L的罗格歹lj酮8小吋后，结肠癌细胞表面的CXCR4的表达显著减少，其他4种TZDs[曲格列酮、吡格列酮、环格列酮，MCC555(b)]也表现出类似的活性。5-苯亚甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物属于2，4-噻唑烷二酮类(TZDs)化合物。目前还未见5-苯亚甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物应用于医药领域，更未见其在制备治疗肝炎、结肠炎、免疫性心肌炎、胰腺炎和肺纤维化等免疫性疾病药物中的应用。本发明所要解决的技术问题是提供一类5-苯亚甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物在制备治疗肝炎、结肠炎、免疫性心肌炎、胰腺炎和肺纤维化等免疫性疾病药物中的用途。式I所示的5-苯亚甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物在制备治疗免疫性疾病药物中的用途，其中，Ri为氢、卤代基、羟基或烷氧基；R2为氢、卤代基、羟基或烷氧基。优选的，Ri为氢、羟基或烷氧基；R2为氢、羟基或烷氧基。最优的，Rl为甲氧基；R2为氢。进一步的，所述免疫性疾病为肝炎、结肠炎、免疫性心肌炎、胰腺炎或肺纤维化等。本发明的有益效果是创造性通过实验证明了式I所示的5-苯亚甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物具有很好的治疗肝炎、结肠炎、免疫性心肌炎、胰腺炎、肺纤维化等自身免疫性疾病的作用，为该类药物的制备提供了一种新的选择。图l是对小鼠实验性自身免疫性心肌炎的疗效观察图，a为正常组，b为对照组，c为模型组，d为治疗组。图2是对小鼠实验性自身免疫性心肌炎的疗效观察图，a为模型组，b为治疗组。图3是血清转氨酶ALT的生化学评价对比图。图4是血清转氨酶AST的生化学评价对比图。图5是肝组织H&E染色进行病理切片观察图，a:ConA模型组，b:50mg/kg5-(4-甲氧基苯亚甲基)-2，4-噻唑烷二酮灌胃治疗组。图6是RT-PCR及ELISA分析炎性细胞因子IL-IO，IL-2的改变图。图7是5-(4-甲氧基苯亚甲基)-2，4-噻唑烷二酮治疗ConcanavalinA诱导的慢性肝炎的PE染色疗效观察，a:模型组，b:治疗组。
发明内容图8是5-(4-甲氧基苯亚甲基)-2，4-噻唑烷二酮治疗ConcanavalinA诱导的慢性肝炎的免疫组化疗效观察，a:模型组，b:治疗组。图9是5-(4-甲氧基苯亚甲基)-2，4-噻唑烷二酮治疗博莱霉素诱导的肺纤维化的疗效观察，A:单纯BleO组；B:BleO+溶剂组；C:治疗组；D:单纯药物组；E:正常对照组。图10是5-(4-甲氧基苯亚甲基)-2，4-噻唑烷二酮治疗L-精氨酸诱导的急性坏死性胰腺炎的疗效观察图，a:血清AMY-P随时间的变化图，b:血清AMYL2随时间的变化图，1:模型组，2:治疗组。图ll是5-(4-甲氧基苯亚甲基)-2，4-噻唑烷二酮治疗L-精氨酸诱导的急性坏死性胰腺炎的疗效免疫组化实验观察图，a:正常对照组，b:模型组，C:治疗组。图12是5-(4-甲氧基苯亚甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Id)治疗蛙皮素诱导的水肿性胰腺炎的疗效免疫组化实验观察图，a:正常对照组，b:模型组，C:治疗组。具体实施例方式本发明5-苯亚甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物可采用公知常识制备得到，也可以采用以下方法以e-丙氨酸为催化剂，以醋酸为溶剂，相应结构的芳香醛与2，4-噻唑烷二酮在80130。C下反应l4小时；将反应液冷却，若有固体析出，直接过滤即得；若无固体析出，加少量的蒸馏水，即有固体析出，直接过滤也得到5-苯亚甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>以下结合实施例对本发明作进一步的阐述。实施例仅用于说明本发明，而不是以任何方式来限制本发明。下列化合物的制备方法可以采用公知方法制备得到，比如参考(Bioorganic&MedicinalChemistry(2006)，14(2)，567-574)所述的方法进行的。5-苯亚甲基-2，4-噻唑烷二酮(Ia)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>用质谱、^NMR鉴别收取的产品，实验数据如下4NMR(DMS0-d6)S:3.465(t，J=12腿z，1H，-CH=)m，5H，aromatic)，7.755(s，1H，NH)MS:m/z204.0197(M-)5-(4-溴苯亚甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Ib)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>用质谱、^NMR鉴别收取的产品，实验数据如下工HNMR(DMS0-d6)S:3.447(t，lH，-CH=)，7.609(q，2H，aromatic)m，2H，aromatic)，12.674(s，1H，NH)MS:m/z281.9303(M-)5-(4-羟基苯亚甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Ic)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>用质谱、^NMR鉴别收取的产品，实验数据如下工H丽R(DMS0-d6)S:3.492(d，lH，-CH=)，6.922(d，2H，aromatic)d，2H，aromatic)，7.698(s，lH，-0H)，10.303(s，lH，-NH-)MS:m/z220.0147(M-)5-(4-甲氧基苯亚甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Id)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>用质谱鉴别收取的产品，实验数据如下MS:m/z234.0303(M-)5-(3-甲氧基-4-羟基苯亚甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Ie)0<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>用质谱、^NMR鉴别收取的产品，实验数据如下工HNMR(DMS0-d6)S:3.802(s，3H，-CH3)，3.486(d，lH，-CH=)，6.919(d，1H，aromatic)，7.065(q，1H，aromatic)，7.173(d，1H，aromatic)，7.720(s，1H，-0H)，9.952(s，1H，NH)MS:m/z250.0252(M-)药效学试验部分试验例l5-(4-甲氧基苯亚甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Id)治疗小鼠实验性、自身免疫性心肌炎的疗效观察1、实验材料健康雌性68周龄Balb/C小鼠，清洁级，由四川大学动物实验中心提供。ConA剂量为15mg/Kg，无菌生理盐水配制；化合物Id剂量为50mg/Kg，无菌生理盐水配制；地塞米松(Dexamethasone)剂量为500ug/Kg。2、实验方法及分组正常组不做任何处理。对照组:腹腔注射地塞米松一小时后，ConA尾静脉给药。模型组ConA尾静脉给药。治疗组ConA尾静脉给药半小时后，50mg/kg化合物Id灌胃治疗。连续治疗3周，处死小鼠，取出心脏，观察心脏大小和颜色并取典型标本照相，称取心脏重量(需要微量天平)，将心脏横切，部分保存于液氮，其余保存于福尔马林，制作HE切片做免疫组化实验。3、对比结论自身免疫性心肌炎的疗效观察图la为正常组，心肌细胞排列清楚，无炎症细胞浸润和水肿；图lb为对照组，心肌细胞排列清楚，有极少量炎症细胞灶性浸润；图lc为模型组，心肌细胞排列紊乱，有大量炎症细胞浸润，心肌水肿并伴有坏死和纤维化；图ld为治疗组，心肌细胞排列较正常，炎症细胞灶性浸润，心肌水肿，伴少量坏死和纤维化。各组病理评分结果见表l:表l各组病理评分结杲<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>可见，治疗组的病理评分(1.83)处于对照组(0.67)和模型组(2.86)之间，说明Id对自身免疫性心肌炎具有治疗效果，但其疗效不如地塞米松显著。免疫组化后观察心肌中AKT磷酸化的表达和巨噬细胞、CD4、CD8细胞的浸润，图2a为模型组，可见较多巨噬细胞浸润；图2b为治疗组，有中等巨噬细胞。结果说明，使用Id治疗后，巨噬细胞数量减少，对炎症起到了减缓的作用。试验例25-(4-甲氧基苯亚甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Id)治疗ConcanavalinA(ConA)诱导的急性肝炎的疗效观察1、实验材料健康雌性68周龄Balb/C小鼠，清洁级，由四川大学动物实验中心提供。ConA剂量为15mg/Kg，无菌生理盐水配制；化合物Id剂量为50mg/Kg，无菌生理盐水配制；地塞米松(Dexamethasone)剂量为500ug/Kg。2、实验方法及分组正常组不做任何处理。对照组:腹腔注射地塞米松一小时后，ConA尾静脉给药。模型组ConA尾静脉给药。治疗组ConA尾静脉给药半小时后，50mg/kg化合物Id灌胃治疗。空载组ConA尾静脉给药半小时后，用药物媒介(0.5%羧甲基纤维素/0.25%吐温20)灌胃给药。以上各组小鼠ConA注射后20小时眼眶取血，分离血清。然后断颈处死，观察腹腔内各器官病理变化，肝组织保存于10%的中性甲醛中大于24小时，石蜡包埋切片。3、对比结论图3是血清转氨酶ALT的生化学评价。治疗组及对照组的ALT水平较模型组有显著下降，Id的治疗效果接近地塞米松。图4是血清转氨酶AST的生化学评价。治疗组及对照组的AST水平较模型组有显著下降，Id的治疗效果接近地塞米松。图5是肝组织HE染色进行病理切片观察图，A为ConA模型组，B为50mg/kg化合物Id灌胃治疗组。HE染色表明治疗组与模型组相比较尾静脉给药后20小时，小鼠可见广泛的肝细胞肿胀，部分肝细胞彻底坏死，坏死灶及血管周围有炎性细胞浸润，肝脏坏死灶及肝细胞水肿都明显改善。图6是RT-PCR及ELISA分析炎性细胞因子IL-IO，IL-2的改变图。图6a中治疗组的IL-10水平明显高于模型组，说明经Id治疗后可诱导抗炎细胞因子IL-lO水平升高，从而抑制炎性反应。图6b中Id治疗后脾细胞中IL-2的水平都高于未受应激者，但低于脂多糖诱导的IL-2水平。表明Id可增加免疫调节因子白介素2(IL-2)的表达，激活自身免疫能力，对杀灭炎性细胞起到积极作用。试验例3化合物Id治疗ConcanavalinA诱导的慢性肝炎的疗效观察1、实验材料健康雌性68周龄Balb/C小鼠，清洁级，由四川大学动物实验中心提供。ConA剂量为15mg/Kg，无菌生理盐水配制；化合物Id剂量为50mg/Kg，无菌生理盐水配制；地塞米松(Dexamethasone)剂量为500ug/Kg。2、实验方法及分组慢性肝炎模型组ConA(10mg/kg体重)每星期尾静脉注射，持续4周，在第4次ConA注射后7天，断颈处死小鼠，肝脏保存于10%的中性甲醛中大于24小时，石蜡包埋，切片，染色慢性肝炎治疗组ConA(10mg/kg体重)每星期尾静脉注射，持续4周，第2次ConA注射后口服Id(50mg/kg体重每日)，持续3个星期，最后l次ConA注射后口服化合物Id7次，断颈处死小鼠，肝脏保存于10%的中性甲醛中大于24小时，石蜡包埋，切片，染色。模型组ConA(10mg/kg体重)每星期尾静脉注射，持续4周，在第4次ConA注射后7天，断颈处死小鼠，肝脏保存于10%的中性甲醛中大于24小时，石蜡包埋，切片，免疫组化。治疗组ConA(10mg/kg体重)每星期尾静脉注射，持续4周，第2次ConA注射后口服Id后(50mg/kg体重每日)，持续3个星期，最后l次CONA注射后口服Id7次，断颈处死小鼠，肝脏保存于10%的中性甲醛中大于24小时，石蜡包埋，切片，免疫组化。3、对比结论慢性肝炎模型组观察结果见图7a，HE染色表明，尾静脉给药后20小时后，可见广泛的肝细胞肿胀，部分肝细胞彻底坏死，坏死灶及血管周围有炎性细胞浸润。慢性肝炎治疗组服E染色观察结果见图7b。HE染色表明，50mg/kgId灌胃治疗，肝脏坏死灶及肝细胞水肿都明显改善。模型组免疫组化观察结果见图8a，治疗组免疫组化观察结果见图8b。该图表明，治疗组与模型组比较，细胞浸润显著下降；并且经Id治疗后逆转了模型组中的肝纤维化。实施例45-(4-甲氧基苯亚甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Id)治疗老鼠肺纤维化大鼠的疗效观察1、实验材料20只无病原体ICR小鼠，清洁级，由四川大学动物实验中心提供；博莱霉素剂量为25mg/kg，无菌生理盐水配制；化合物Id用无菌生理盐水配制。2、实验方法及分组将老鼠分为5组，每组3到4只老鼠。单纯Bleo组动物麻醉后，每天通过动物声带向气管内注射生理盐水和0.5%甲基纤维素溶液，共持续14天。Bleo+溶剂组动物麻醉后，每天皮下注射O.5%甲基纤维素溶液，两个小时后通过动物声带向气管内注射博莱霉素，共持续14天。治疗组动物麻醉后，每天皮下注射50mg/kg体重的化合物Id溶液，两个小时后向气管内注射博莱霉素，共持续14天。单纯药物组动物麻醉后，每天皮下注射50mg/kg体重的化合物Id溶液，共持续14天。正常对照组取正常小鼠肺组织。将上述五组动物处死，取肺组织用10%福尔马林固定，做HE免疫组化实验。3、对比结论各组HE染色后观察结果见图9(放大倍数为100X)，A:单纯Bleo组；B:Bleo+溶剂组;C:治疗组；D:单纯药物组；E:正常对照组。气管内注入博莱霉素后可以引起明显的肺间质纤维化(A、B、C图)正常肺泡结构被破坏甚至消失，肺泡间隔增宽，肺组织纤维样变。治疗组(C图)较未治疗组(A、B图)，肺组织纤维化的范围及程度均明显减轻。单纯药物组(D图)肺组织情况与正常肺组织(E图)几乎相同，表明药物本身是安全的，不会引起肺纤维化。实施例55-(4-甲氧基苯亚甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Id)治疗精氨酸诱导的急性坏死性胰腺炎的疗效观察1、实验材料健康雄性Wistar大鼠(250-300g)，清洁级，由四川大学动物实验中心提供；L-精氨酸剂量为250mg/100g，无菌生理盐水配制；化合物Id剂量为50mg/Kg，无菌生理盐水配制。2、实验方法及分组正常对照组5只大鼠腹腔注射生理盐水(250mg/100g)，半小时后给予生理盐水灌胃，再过半小时后注射生理盐水(250mg/100g)，第一次灌胃后每隔3.5h生理盐水灌胃一次，第二天开始每天2次生理盐水灌胃。于第二次注射生理盐水后12h、24h、48h、72h取血。模型组9只大鼠腹腔注射L-精氨酸，半小时后给予生理盐水灌胃，半小时后注射L-精氨酸，第一次灌胃后每隔3.5h生理盐水灌胃一次，第二天开始每天2次生理盐水灌胃。分别在第二次注射L-精氨酸后12h、24h、48h、72h取血。治疗组9只大鼠腹腔注射L-精氨酸，半小时后给予化合物Id灌胃治疗，半小时后注射L-精氨酸，第一次治疗后每隔3.5h灌胃一次，第二天开始每天2次灌胃治疗。分别在第二次注射L-精氨酸后12h、24h、48h、72h取血。上述各组取得的血样分离血清，立即送检胰酶、淀粉酶。然后处死大鼠，观察腹腔内各器官病理变化，取胰腺放入10%福尔马林中固定，HE染色观察病理变化。3、对比结论胰酶随时间的变化见图10a，模型组的在L-精氨酸诱导12h后胰酶的含量开始升高，24h后达到高潮，此后开始慢慢的降低。治疗组的胰酶含量上升幅度较小，说明药物Id对L-精氨酸诱导的胰腺炎有确切的治疗效果。淀粉酶随时间的变化见图1Ob，模型组的在L-精氨酸诱导12h后淀粉酶的含量开始升高，24h后达到高潮，此后开始慢慢的降低。治疗组淀粉酶含量上升幅度较小，说明药物Id对L-精氨酸诱导的胰腺炎有确切的治疗效果。图lla、b、c分别为正常对照组、模型组和治疗组的免疫组化实验结果，由图中可以看出，相对正常胰腺组织(图lla)，L-精氨酸诱导后，胰腺组织肿大，间质充血水肿，大量中性粒细胞和单核细胞浸润图(图llb)，而经Id药物治疗后胰腺间质充血水肿明显减轻，炎性细胞浸润明显减少(图llc)。实施例65-(4-甲氧基苯亚甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Id)治疗蛙皮素(cerulein)诱导的水肿性胰腺炎的疗效观察1、实验材料健康雄性小鼠12只(20-22g)，清洁级，由四川大学动物实验中心提供；蛙皮素剂量为50yg/Kg，无菌生理盐水配制；化合物Id溶液剂量为50mg/Kg，无菌生理盐水配制。2、实验方法及分组分为治疗组10只，模型组10只，正常对照组10只，禁食18h，自由饮水。正常对照组腹腔注射6次生理盐水后(200uL，每小时l次)，灌胃生理盐水。模型组腹腔注射6次蛙皮素后(50yg/Kg，每小时l次)，灌胃生理盐水。治疗组腹腔注射6次蛙皮素后(50yg/Kg，每小时l次)，灌胃化合物Id溶液(50mg/Kg)。第一次注射24h后，取眼动脉血送淀粉酶和胰酶检测(治疗组和模型组各5只，正常组2只)，然后处死小鼠，观察腹腔内各器官病理变化，取胰腺、肝、脾、肾、肺、胃、回肠近胰端放入10%福尔马林中固定，并进一步做HE染色，观察病理变化。剩余小鼠继续饲养7天，期间治疗组每天灌胃化合物Id溶液(50mg/Kg)治疗1次，观察生存率有无变化。3、对比结论图12a、b、c分别为正常对照组、模型组和治疗组的免疫组化实验结果，由图中可以看出，相对正常胰腺组，腹腔注射6次蛙皮素后，胰腺组织肿大，间质充血水肿，大量中性粒细胞和单核细胞浸润，而经Id药物治疗后胰腺间质充血水肿明显减轻，炎性细胞浸润明显减少。权利要求1.式I所示的5苯亚甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物在制备治疗免疫性疾病药物中的用途，其中，R1为氢、卤代基、羟基或烷氧基；R2为氢、卤代基、羟基或烷氧基。2.根据权利要求l所述的式I所示的5-苯亚甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物在制备治疗免疫性疾病药物中的用途，其特征在于^为氢、羟基或烷氧基；&为氢、羟基或烷氧基。3.根据权利要求l所述的式I所示的5-苯亚甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物在制备治疗免疫性疾病药物中的用途，其特征在于^为甲氧基；&为氢。4.根据权利要求l所述的式I所示的5-苯亚甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物在制备治疗免疫性疾病药物中的用途，其特征在于所述免疫性疾病为肝炎、结肠炎、免疫性心肌炎、胰腺炎或肺纤维化。全文摘要本发明涉及5-苯亚甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物的用途，属于化学医药领域。本发明的5-苯亚甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物如式I所示，其中，R₁为氢、卤代基、羟基或烷氧基；R₂为氢、卤代基、羟基或烷氧基。通过实验证明了式I所示的5-苯亚甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物具有很好的治疗肝炎、结肠炎、免疫性心肌炎、胰腺炎和肺纤维化等自身免疫性疾病的作用，为该类药物的制备提供了一种新的选择。文档编号A61P1/00GK101361737SQ20081030472公开日2009年2月11日申请日期2008年9月28日优先权日2008年9月28日发明者吴晓华,罗有福,霞赵,陈俐娟,魏于全申请人:四川大学