专利名称：三嗪衍生物、含所述衍生物的组合物以及使用所述衍生物治疗癌症和自身免疫性疾病的方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2007年4月30日递交的临时申请60/924,111的优先权。
发明领域 本发明涉及下式的化合物
其中X是氟或氯；Y是氧、硫或亚氨基；R是氨基、羟基、氨磺酰或酰氨基或其N-一甲基或N-二甲基类似物；m是2至6的整数；且n是0至2的整数。所述化合物可用于治疗某些癌症和自身免疫性疾病。
背景技术：
癌症指具有一百多种临床不同形式的疾病。几乎机体的每个组织都能产生癌症，一些甚至能够产生几种类型的癌症。癌症以能够侵袭原组织或扩散至其他部位的细胞异常生长为特征。事实上，特定癌症的严重程度或其恶性程度基于癌细胞侵袭邻近组织和扩散的倾向。也就是说，各种人类癌症(例如恶瘤)在它们从原发部位或肿瘤扩散以及通过机体转移的能力方面明显不同。的确，正是肿瘤转移的过程对癌症患者长期生存有害。外科医生能够去除原发肿瘤，但是转移的癌症通常到达太多地方而不允许进行外科治愈。为成功转移，癌细胞必需从它们的原发部位脱离，侵入血管或淋巴管，在循环中行进到新的部位，并在该处建立肿瘤。
十二种主要的癌症是前列腺、乳房、肺、结直肠、膀胱、非何杰金氏淋巴瘤、子宫、黑色素瘤、肾、白血病、卵巢和胰腺癌。黑色素瘤是主要癌，并因其转移至体内包括淋巴结、肺、肝脏、脑和骨在内的大多数器官的能力而成为增长的全球健康问题。具有远处转移的患者的临床结果比在区域淋巴结转移看到的结果要显著的较差。具有肺转移的患者的平均生存时间是11个月，而具有肝脏、脑和骨转移的患者为四个月。四种类型的治疗法用于黑色素瘤远处转移手术、放疗、化疗和免疫治疗。手术最通常用于改善患者的生活质量，例如去除阻塞胃肠道的转移。放疗在转移的局部控制中具有一定程度的效果，但是主要限于皮肤和/或淋巴结转移。已评价了许多化疗药用于治疗转移性黑色素瘤。不过，仅两种细胞毒性药物能够获得10％或更高的反应率。这些药物是达卡巴嗪(DTIC)和亚硝基脲。在大多数国家中仅仅DTIC被批准用于治疗黑色素瘤。后来，用于治疗转移性黑色素瘤的手术、放疗和化疗的临床显著的、有益的、长期的效果的缺乏导致使用免疫治疗。迄今，对细胞因子白细胞介素2和干扰素α给予了最多的关注。临床试验用白细胞介素2获得了较好的结果，但是平均仅15％的转移性黑色素瘤患者表现出对应白细胞介素2的肿瘤负荷的显著降低。
与黑色素瘤类似，其他癌症也是一旦转移发生，则变得严重威胁生命。胰腺癌症在转移(例如第一次诊断)发生后具有3％的超过一年的生存机会。当用细胞毒性药物吉西他滨治疗时这仅仅增加到18％，当用吉西他滨、特罗凯和EGFr激酶抑制剂治疗时为24％。前列腺癌症只要癌症局限于前列腺则能够通过手术或放射成功地控制。但是一旦转移发生，尤其是如果雄激素剥夺治疗失败，则获得小的有效治疗。
其他癌症可以比黑色素瘤、胰腺或前列腺癌症更有效地用化疗药治疗。不过，化疗药具有两个主要的限制。第一，化疗药对癌细胞是非特异性的，特别是在高剂量时，它们对正常的快速分裂细胞具有毒性。第二，随着时间癌细胞对化疗药产生耐药，从而不再对患者提供益处。如对黑色素瘤所述，已开发了其他治疗形式以解决由使用化疗药引起的限制。虽然如此，但是这些其他治疗法对于其他癌症的治疗具有有限的成功。其他癌症治疗法及其限制的实例包括手术(不能完全去除广泛转移)，放射(不能选择性递送放射至癌细胞)，以及免疫治疗(毒性细胞因子的使用具有有限的效果)。因此。其他较新的治疗方法正在开发(例如抗血管生成剂、凋亡剂、基因治疗)，但是这些治疗相对而言处于其幼年期。因此，仍需要由新的化疗药所例证的新的方法，所述化疗药是有效的(例如降低肿瘤大小或转移的扩散)、对于癌症的治疗具有有限的毒性、延长产生药物耐药的时间以及它们的任何组合。
发明概述 在一个实施方案中，提供化合物、含有所述化合物的组合物以及制备药物的方法。
在另一个实施方案中，它们可以通过对至少一些癌症的治疗具有降低的毒性的有用的作用机制起作用。尽管它们可以单独用于治疗癌症，但是更有效的治疗可以包括使用所述化合物与其他抗癌药物或疗法的组合。所述化合物和化疗药的组合的使用可以提供有潜力的方法，该方法解决上述使用化疗引起的限制药物毒性和药物耐药。因此，所述化合物可以比其他化疗药具有相对小的毒性，如由细胞毒性和动物数据所证明，以及特别是如果当与本发明的化合物组合使用化疗药的剂量能被降低时，它们的不同作用机制应减少化疗药的耐药。所述化合物可以用在制备用于治疗癌症的药物中。
在另一个实施方案中，它们可以通过对至少一些自身免疫性疾病的治疗具有降低的毒性的有用的作用机制来起作用。尽管它们可以单独治疗自身免疫性疾病，但是更有效的治疗可以包括使用所述化合物与其他抗炎药物或疗法的组合。所述化合物可以用在制备用于治疗自身免疫性疾病的药物中。
从以下描述和权利要求书以及其中的概括，对于本领域技术人员而言，本发明的其他方面将是清楚的。
附图的简要说明
图1显示化合物V对PC-3细胞对多种基质(A)层粘连蛋白，(B)MATRIGELTM基底膜基质或(C)胶原的粘附的效果。
图2显示不同化合物对B16F10原发性黑色素瘤的抗肿瘤效果。在图2A中比较化合物I、化合物II或阿霉素的作用。在图2B中比较化合物V或环磷酰胺的作用。
图3显示化合物II、化合物IV、化合物V或环磷酰胺静脉内给予对DA-3乳房肿瘤的抗肿瘤效果。
图4显示化合物组合静脉内给予对DA-3乳房肿瘤的抗肿瘤效果。在图4A中比较化合物II、环磷酰胺和环磷酰胺+化合物II的效果。在图4B中比较化合物I、环磷酰胺和环磷酰胺+化合物的效果。在图4C中比较化合物V、环磷酰胺和环磷酰胺+化合物V的作用。
图5显示与化合物VII和顺铂组合相比，单独口服给予顺铂对DA-3乳房肿瘤的抗肿瘤功效。
图6显示化合物I、化合物II、化合物V或乙酰水杨酸对P815肥大细胞瘤的抗肿瘤功效。
图7显示化合物II对LL/2肺肿瘤的抗肿瘤功效。在图7A中比较化合物II和顺铂的效果。在图7B中比较化合物II单独、环磷酰胺单独、环磷酰胺+化合物II的组合的效果。
图8显示化合物II、化合物III、化合物VII或环磷酰胺对LL/2肺肿瘤的抗肿瘤功效。
图9显示化合物I、化合物V或吉西他滨对PAN02胰腺肿瘤的抗肿瘤功效。
图10显示化合物化合物II单独(图10A)、环磷酰胺+化合物II的组合(图10B)对PC-3前列腺肿瘤的抗肿瘤功效，并比较化合物V和环磷酰胺+化合物V的组合(图10C)。
图11显示化合物V对从J774A.1细胞由LPS诱导释放的PGE2抑制的效果。
图12显示化合物I对NZB x NZW小鼠死亡率的效果。
图13显示静脉内给予化合物I对迟发型超敏反应(DTH)发展的效果初次激发(图13A)和第二次激发(图13B)。
图14显示静脉内给予化合物II对迟发型超敏反应(DTH)发展的效果初次激发(图14A)和第二次激发(图14B)。
图15显示由DTH后的耳厚来测定的口服给予化合物IV或化合物V对炎症的效果。
图16显示口服给予化合物III对迟发型超敏反应(DTH)发展的效果初次激发(图16A)和第二次激发(图16B)。
图17显示由DTH后的耳厚来测定的静脉内给予化合物X或化合物XI对炎症的效果。
图18显示口服给予化合物I、化合物IV或化合物V对佐剂诱导的关节炎(AIA)的效果。
图19显示静脉内给予化合物II或化合物V对脂多糖(LPS)诱导的血白细胞计数的效果。
图20显示静脉内给予化合物II或化合物V对脂多糖(LPS)诱导后两小时大鼠气囊模型中不同可溶性介质TNFα(图20A)、PGE2(图20B)、LTB4(图20C)或MCP-1(图20D)的产生的效果。
图21显示静脉内给予化合物II或化合物V对脂多糖(LPS)诱导后十二小时大鼠气囊模型中不同可溶性介质TNFα(图21A)或PGE2(图21B)的产生的效果。
图22显示化合物V对远端结肠大体损伤的抑制。
图23显示化合物V对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的临床症状的效果。
发明的某些实施方案的描述 本发明的化合物或其药学上可接受的衍生物通过下式描述
其中X是F或Cl； Y是NH、O或S； R是NH2、OH、SO2NH2、SO2N(CH3)H、SO2N(CH3)2或CONH2； m是2、3、4、5或6；且 n是0、1或2，其中二碳片段(n＝2)可以由 Z＝H或OH的
代表。
在优选的实施方案中，可以使用以下的一个或多个 X＝F；和/或 Y＝NH或O；和/或 R＝NH2、OH、SO2NH2或SO2N(CH3)2；和/或 m＝4、5或6；和/或 n＝2。
特别优选的是具有以下结构的化合物I-XI
尽管以上通式描述了一些化合物，但是本领域技术人员应理解在所述式之外但是是显而易见的某些结构修饰落在本发明的范围之内。例如，可能合成苯环上不含卤素取代的上述化合物。制备了这些化合物，但是观察到它们通常比一氯-或氟苯基-取代的三嗪化合物更具毒性。类似地，二卤代苯基取代的三嗪化合物落在本发明的范围内。另外，尽管所述通式描述了对位取代(氨基、羟基、氨磺酰等)的苯乙基化合物，但是可能这些取代还能在苯乙基基团的苯环部分的邻位或间位上。最后，取代的苯乙基基团的乙烯基部分能够被具有苯环的不饱和乙烯基部分或稠环(五或六元环)结构所替代，以引入具有比苯乙基基团小的自由度的结构或更大的硬化。
治疗癌症的一个新方法在于有效降低肿瘤大小和/或转移扩散并且还能够减少炎症的新化合物的发现。本发明的化合物可以满足这一类用于治疗癌症的新化合物的要求。也就是，同时表现显著的抗癌和抗炎特征的化合物提供有潜力的双管齐下的方法，该方法靶向遗传不稳定的肿瘤细胞(高突变率和随后的化疗耐受)和在炎症组织中存在的遗传正常细胞两者。
该治疗癌症的双管齐下的方法因对慢性炎症和之后的癌症的发生之间存在的联系的增加的认识而更引人注目。该慢性炎症通常又是持续的非生命威胁的(当时)病毒或细菌感染的结果。的确，许多特定的癌症的病因可能与特定病原体直接相关。例如，人乳头瘤病毒、乙肝或丙肝病毒和E-B病毒(Epstein-Barr virus)分别是子宫颈癌、肝细胞癌和淋巴增殖性障碍的危险因素。幽门螺杆菌是胃癌的主要原因之一。最近发现与口腔中较高数量的细菌存在相关的慢性炎症性病症牙周(齿龈)疾病与显著更高的发生胰腺癌的危险相关。
癌症和炎症之间的联系看起来具有其分子水平的根源。与炎症或促炎免疫反应相关的分子与癌症的进展相关。例如，因为其调节其他促炎细胞因子(例如IL-I、IL-6、IL-8和GM-CSF)的产生，肿瘤坏死因子(TNFα)可看作是最重要的促炎细胞因子。有趣的是，给予带有肿瘤的动物高剂量的TNFα显示抗癌活性。不过，由重组TNFα进行的I期临床试验所证实，这在人中没有转变为显著的抗癌活性。更重要的是，TNFα在一些人肿瘤中表达，其存在通常与差的预后相关。的确，看起来在肿瘤微环境中慢性产生的相对低浓度的内源性TNFα增加了肿瘤发生和播散。也就是，TNFα的抗癌活性仅在该细胞因子的超生理浓度时观察到。最近被假设在癌症和炎症之间提供联系的另一个分子或一组蛋白分子是转录因子NFκB。DNA结合蛋白家族NFκB可能是哺乳动物细胞中最强的转录激活因子。该转录因子激活包括几种促炎细胞因子(包括TNFα)和趋化因子在内的多种蛋白的生物合成。如以上对TNFα所述，许多癌症增加了NFκB活性。用许多小鼠模型的工作阐述了NFκB的持续性激活可能将炎症与肿瘤促进和进展联系起来的机制。该工作最近由Karin & Greten(Nature Immunology，5749-759，2005)所综述。可以治疗的自身免疫性疾病的实例包括关节炎(例如类风湿性或银屑病性关节炎)、银屑病、克隆氏病、炎症性肠病、强直性脊柱炎、干燥综合征、斯蒂尔病(巨噬细胞活化综合征)、多发性硬化、葡萄膜炎、硬皮病、肌炎、赖特综合征、韦格纳综合征、系统性红斑狼疮(SLE)、免疫性血小板减少性紫癜(ITP)、肾小球肾炎和血管炎。
本发明的化合物作用于上述癌症和炎症之间分子连接中的至少之一的能力的一个指标，TNFα，在实施例21和22中阐述。在这些实施例中，显示在基于细胞的测定(WEHI-13VAR和J774A.1细胞)中本发明的化合物可以拮抗TNFα的促炎活性。也就是说，由它们抑制TNFα诱导的WEHI-13VAR细胞系中的凋亡或细胞毒性以及抑制J774A.1细胞系中LPS诱导的TNFα产生的能力所证实，这些化合物可以抑制TNFα的效果。
本发明的化合物作用于上述癌症和炎症之间其他分子连接的能力的另一个指标，花生四烯酸代谢物，在实施例28中阐述。在该实施例中，在LPS诱导的气囊模型中表明，本发明的化合物诱导对前列腺素E2(PGE2)和白三烯B4(LTB4)的产生的抑制。另外关于它们的促炎特性，已有文献很好地报道，在前列腺癌、乳癌和结肠癌中类花生酸途径被激活。环氧合酶(COX；前列腺素)和脂氧合酶(LOX；白三烯)代谢物通过促进细胞增殖、移动、侵入以及血管生成来参与疾病的进展。也就是说，由它们在气囊模型中抑制LPS诱导的炎症的能力所证实，这些化合物可以通过它们对PGE2和LTB4产生的抑制作用来抑制癌症和炎症性疾病。
本发明的化合物包括全部药学上可接受的衍生物，例如其盐和前药形式以及类似物和任何几何异构体和对映异构体。可以制备活性化合物的制剂以便以适合于肠道、粘膜(例如舌下、肺和直肠)、肠胃外(例如肌内、动脉内、皮内、皮下和静脉内)或局部(例如软膏、乳膏和洗剂)给药的形式提供药物组合物。特别地，本发明的组合物可以溶解在醇或多元醇溶剂(例如来自BASF的
HS 15 12-羟基硬脂酸的聚氧乙烯酯、甘油、乙醇等)，单糖或二糖的水性溶液或任何其他生物相容的溶剂例如二甲基亚砜(DMSO)或CREMOPHOR
聚乙氧基蓖麻油(也来自BASF)中。适宜地，所述制剂可以方便地存在于分开的剂量单元中，并可以通过药物制剂领域中熟知的任何方法制备。全部方法，包括将活性药物成分与液体载体或微细固体载体或者根据需要规定与两者置于一起的步骤。适宜地，调整上述制剂以提供活性药物组分的缓释。本领域熟知的缓释制剂包括使用团注、连续输注、生物相容性聚合物或脂质体。
可以进行给药剂量和时间、制剂和给药途径的合适选择，实现在哺乳动物中的有利反应的目标(即功效)以及避免对其产生不适当的毒性或其他损害(即安全性)。因此，“有效的”是指这样的选择，其包括对病症的常规操作以实现期望的效果例如降低癌症或自身免疫性疾病患者的发病率或死亡率；降低癌细胞生长或转移；改变细胞周期或凋亡；降低或者改善与对机体成分(器官和组织例如肾上腺、眼、肾、肝、肺、胰腺、神经系统、皮肤、滑膜关节、甲状腺等)的免疫反应相关的组织损伤；恢复免疫状态或使哺乳动物的病理性障碍/病症(抗体滴度、免疫细胞亚型、通过细胞因子或趋化因子的信号传导、抗体-抗原免疫复合物等)正常化；从循环中去除游离抗体和/或抗体-抗原免疫复合物；改善自身免疫性疾病的实验室指标(炎症可溶性介质的浓度或绝对量、自身抗体的存在、细胞增殖等)；增加常规化疗或抗炎症药物治疗的功效；以及它们的组合。特别地，常规化疗或抗TNFα治疗的有害作用可以避免。哺乳动物可以是动物或人患者。
给予的化合物的量取决于多种因素，例如化合物的生物活性和生物利用度(例如体内半衰期、稳定性和代谢)；所述化合物的化学性质(例如分子量、疏水性和溶剂度)；给药途径和方案；等等。还要理解对于任何具体患者要达到的特定剂量水平可能取决于多种因素，包括年龄、健康、医疗史、体重、与一种或多种其他化合物的组合以及疾病的严重程度。
术语“治疗”特别是指降低或减轻癌症或自身免疫性疾病的一个或多个症状。对于给定患者，症状的改善、其恶化、消退或进展可以通过客观或主观测量确定。
最后，本领域技术人员要理解，本文对治疗所指包括预防以及确立的癌症或自身免疫性疾病的治疗。因此，例如，本发明的化合物可以在手术去除原发肿瘤后或在手术或侵袭性化疗之前或甚至在患者缓解时使用。当与标准癌症治疗法相比，在体内小鼠研究中观察到的所述化合物的相对缺乏毒性(例如如在以下的实施例中所观察到的)允许具有比用常规疗法可取得的更大的预防应用。类似地，本发明的化合物可以与其他现有的癌症或自身免疫性疾病治疗模式或用于治疗癌症的试剂(例如细胞毒性药物、血管生成抑制剂、免疫刺激剂、蛋白激酶抑制剂)或自身免疫性疾病的试剂(例如抗炎皮质类固醇、非甾体抗炎药、甲氨蝶呤、DMARDs、生物剂例如重组蛋白或单克隆抗体)组合使用。可用于与一个或多个本发明的化合物一起使用的化疗药的实例包括达卡巴嗪、阿霉素、柔红霉素、环磷酰胺、长春碱、长春新碱、博莱霉素、足叶乙甙、托泊替康、伊立替康、泰索帝、紫杉醇、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、顺铂、卡铂、奥沙利铂、赛特铂和苯丁酸氮芥。可以与一个或多个本发明的化合物一起使用的治疗剂的实例包括阻断TNFα与其受体结合或之后的信号转导的那些(例如特异性地与TNFα、抗TNFα抗体、可溶性TNFα受体、小于1000MW的非蛋白质化合物结合的重组蛋白)。要给予的化合物的剂量最终由肿瘤专家、风湿病专家或其他医生所决定。不过，一般而言，剂量在约1至约75mg/kg/日的范围内。更优选地，范围为约2至约50mg/kg/日。
以下的实施例进一步例示本发明的实践，但是无意于限制本发明。
实施例 用于制备可用于本发明中的化合物的一般合成顺序概括在途径1和途径2(路线1)中。途径1例示氰尿酰氯与卤代苯胺反应得到二氯-三嗪中间体。然后，加入芳基或芳烷基胺，之后烷基胺。途径2例示如途径1中所述的二氯-三嗪中间体的制备，然后首先与烷基胺反应，然后加入芳基或芳烷基胺。最后步骤是除去保护基。
路线1
试剂(a)卤代苯胺，丙酮/水，-10℃→r.t.；(b)烷基二胺或烷醇胺或硫代烷基胺，NaHCO3/H2O/THF/丙酮，r.t.；(c)
NaHCO3，丙酮/H2O；(d)烷基二胺或烷醇胺或硫代烷基胺，THF/MeOH，130℃/10min，微波；(e)
Et3N，THF，65℃；(f)去除保护基(当适用时)。
仪器 所有的HPLC色谱和质谱均使用二极管阵列检测器在HP 1100 LC-MSAgilent装置上记录。使用6分钟内含0.01％TFA的1％-40％乙腈-水梯度且流速为2ml/min(方法1)的分析C18柱(75x 4.6mm，5微米)，6分钟内含0.01％TFA的15-99％乙腈-水梯度且流速为2ml/min(方法2)的分析C18柱(75x4.6mm，5微米)，5分钟内含0.01％TFA的0.1％-20％乙腈-水梯度且流速为1ml/min(方法3)的分析C18柱(75x4.6mm，5微米)，或者5分钟内含0.01％TFA的1％-50％乙腈-水梯度且流速为1ml/min(方法4)的分析C18柱(75x4.6mm，5微米)。
实施例1化合物I的合成(途径1的代表性实施例)。
将氰尿酰氯(10.0g，54.2mmol)以较低比例加入到水(50ml)和丙酮(50ml)的冷(-10℃)混合物中。将在丙酮(50ml)中的3-氟苯胺(5.2ml，54.2毫摩尔)溶液经50分钟缓慢加入，保持反应物温度低于-5℃。然后将反应物在室温下搅拌一小时。用饱和碳酸氢钠水溶液(200ml)将反应物的pH从2调节到8，并继续搅拌另外30分钟。通过过滤收集沉淀的固体，用水洗涤，并真空干燥。这得到2，4-二氯-3-氟苯基氨基-1，3，5-三嗪，为白色固体13.3g，收率94％；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ6.97-7.01(1H，m)，7.38-7.43(2H，m)，7.52-7.55(1H，m)，11.25(1H，br)；LRMS(ESI)m/z 259(MH+)；HPLC(方法2)4.1min。下一步骤中使用该产物，没有进一步纯化。在室温下将该二氯-三嗪衍生物(6.4g，24.7毫摩尔)溶解在THF(70ml)中，并用在丙酮(50ml)和水(50ml)混合物中的5-(叔丁氧羰基氨基)戊胺(7.5g，37.0毫摩尔)的溶液处理。然后将得到的溶液用饱和碳酸氢钠水溶液(70ml)处理。将反应物在室温下搅拌2.5小时至3小时。然后将混合物真空浓缩，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取液用饱和氯化钠水溶液、2M HCl水溶液、饱和氯化钠、饱和碳酸氢钠以及饱和氯化钠洗涤，然后干燥(硫酸镁-木炭)，通过CELITE硅藻土过滤，并真空浓缩至200ml。将该溶液在搅拌下倾倒入1.2L的己烷中，并通过过滤收集沉淀物，用己烷洗涤，并真空干燥，得到一氯-[1，3，5]三嗪衍生物，为白色固体6.6g，收率63％；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ1.23-1.30(2H，m)，1.31-1.56(2H，m)，1.34(9H，s)，1.44-1.56(2H，m)，2.85-2.91(2H，m)，3.20-3.30(2H，m)，6.70-6.77(1H，m)，6.79-6.85(1H，m)，7.25-7.33(1H，m)，7.38-7.43(1H，m)，7.67-7.75 & 7.76-7.85(1H，br)，8.14-8.21 & 8.22-8.30(1H，br)，10.05-10.11 & 10.15-10.26(1H，br)；LRMS(ESI)m/z 425(MH+)，447(MH+Na)；HPLC(方法2)4.5min。用酪胺(6.4g，46.7毫摩尔)和三乙胺(77.7mmol，10.9ml)处理在THF(300ml)中的一氯-三嗪(6.6g，15.6毫摩尔)溶液。将反应物在65-70℃下加热16小时至60小时，然后冷却至室温，并真空浓缩。将残余物用乙酸乙酯萃取，并过滤。将滤液用1M HCl水溶液、饱和氯化钠、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠洗涤，然后干燥(硫酸镁-木炭)，经CELITE硅藻土过滤，并真空浓缩。然后将残余物溶解在乙醚(150ml)中，并将该溶液在剧烈搅拌下逐滴加入到1.4L己烷中。通过过滤收集沉淀的固体，并真空干燥，获得三(氨基-取代)-[1，3，5]三嗪衍生物，为灰白色固体6.5g，收率80％；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ1.21-1.29(2H，m)，1.32-1.41(2H，m)，1.34(9H，s)，1.44-1.54(2H，m)，2.65-2.71(2H，m)，2.88(2H，dt，J＝6.5，6.5Hz)，3.15-3.27(2H，m)，3.33-3.42(2H，m)，6.61-6.70(1H，m)，6.67(2H，d，J＝8.5Hz)，6.71-6.76(1H，m)，6.84-7.02(1H，m)，7.01(2H，d，J＝8.5Hz)，7.16-7.23(1H，m)，7.39-7.47(1H，m)，7.87-7.91(1H，m)，8.92-8.94 & 9.00-9.06(1H，2x br)，9.13(1H，s)；LRMS(ESI)m/z 526(MH+)，548(MH+Na)；HPLC(方法2)2.9min。将在4M HCl/l，4-二噁烷(100ml)和水(10ml)中的Boc-保护的化合物(6.5g，12.4毫摩尔)溶液在室温下搅拌2小时。真空蒸发溶剂和过量的酸，通过用异丙醇(25ml)共蒸发(x2)去除痕量的水。将干燥的残余物溶解在异丙醇(25ml)中，并在剧烈搅拌下将溶液逐滴加入乙醚(450ml)中。通过过滤收集沉淀的固体，真空干燥，然后溶解在无热原的水(800ml)中，过滤(0.22μm)并冻干，得到脱保护的化合物I，为灰白色固体5.5g，收率89％；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ1.26-1.35(2H，m)，1.47-1.57(4H，m)，2.64-2.73(4H，m)，3.24-3.31(2H，m)，3.32-3.55(5H，m，CH2+NH3+)，6.63(2H，d，J＝8.5Hz)，6.82-6.89(1H，m)，6.93-7.06(2H，m)，7.24-7.39(2H，m)，7.61-7.73(1H，m)，7.81-7.93(3H，m)，8.15-8.25，8.40-8.60，9.10-9.30，10.25-10.40 & 10.55-10.65(2H，br)；19F NMR(376.5MHz，CD3OD)δ-114.50至-113.84(1F，m)；LRMS(ESI)m/z 426(MH+)，448(MH+Na)；HPLC(方法2)1.6min。
实施例2化合物V的合成(途径2的代表性实施例)。
根据实施例1，使用4-氟苯胺(18ml，190mmol)代替3-氟苯胺制备2，4-二氯-4-氟苯基氨基-1，3，5-三嗪，得到白色固体44.3g，收率90％；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ；LRMS(ESI)m/z 259(MH+)HPLC(方法2)4.0min。根据实施例1，使用酪胺代替5-(叔丁氧羰基氨基)戊胺，将二氯-三嗪(44.2g，0.2摩尔)与酪胺(35.1g，0.3摩尔)偶联，得到白色固体56.1g，收率91％；LRMS (ESI)m/z 360(MH+)，382(MH+Na)；HPLC(方法2)3.7min。将在四氢呋喃(125ml)和甲醇(60ml)中的一氯三嗪(15.0g，41.8毫摩尔)和1，5-二氨基戊烷(24.5ml，209毫摩尔)溶液分成九部分。将各部分在化学微波装置中在130℃下加热10分钟。然后将各部分合并，真空浓缩，并将残余物溶解在乙酸乙酯中。用水和饱和氯化钠洗涤乙酸乙酯溶液，然后用2M HCl水溶液萃取。将水性萃取液用乙酸乙酯洗涤，然后用饱和的碳酸氢钠水溶液碱化。将沉淀物用乙酸乙酯萃取，用饱和氯化钠洗涤萃取液，然后干燥(硫酸镁-木炭)，通过CELITE硅藻土过滤，并真空浓缩。将残余物溶解在甲醇(300ml)中，用在乙醚(60ml)中的1M HCl溶液处理该溶液，真空浓缩该溶液。将残余物溶解在热异丙醇(150ml)中，并在剧烈搅拌下将该溶液逐滴加入乙醚(1.5L)中。通过过滤收集沉淀的固体，真空干燥，然后溶解在无热原的水(1.6L)中，过滤(0.22μm)并冻干，得到化合物V，为其盐酸盐14.9g，收率72％；mp130-133℃；1H NMR(400MHz，D2O)δ1.16-1.27(2H，m)，1.37-1.54(4H，m)，2.53-2.64(2H，m)，2.76-2.83(2H，m)，3.09-3.17(2H，m)，3.21-3.48(2H，m)，6.56-6.64(2H，m)，6.85-7.02(4H，m)，7.16-7.27(2H，m)；19F NMR(376.5MHz，CD3OD)δ-118.1至-116.0(1F，m)；LRMS(ESI)m/z 426(MH+)；HPLC(方法2)1.6min。
实施例3化合物II 根据实施例1，使用4-[2-氨基乙基]苯磺酰胺代替酪胺制备以上化合物。白色固体，收率77％；mp 145-147℃；1H NMR(400MHz，D2O)δ1.14-1.26(2H，m)，1.33-1.44(2H，m)，1.46-1.55(2H，m)，2.64-2.84(4H，m)，3.04-3.15(2H，m)，3.33-3.56(2H，m)，6.68-6.84(1H，m)，6.88-6.99(1H，m)，7.09-7.32(4H，m)，7.44-7.63(2H，m)；19F NMR(376.5MHz，CD3OD)δ-114.50至-113.81(1F，m)；LRMS(ESI)m/z 489(MH+)；HPLC(方法2)1.6min。
实施例4化合物III 根据实施例2，使用N，N-二甲基-4-[2-氨基乙基]苯磺酰胺代替酪胺制备以上化合物。N，N-二甲基-4-(2-氨基乙基)苯磺酰胺如下合成用邻苯二甲酸酐(23.5g，0.2摩尔)处理在无水DMF(120ml)中的4-[2-氨基乙基]苯磺酰胺(26.5g，0.1摩尔)溶液，在70℃下加热反应物4小时。将反应物冷却至室温，并以小比例加入1，1’羰基二咪唑(21.5g，0.1摩尔)，并将反应物在室温下搅拌过夜。真空蒸发溶剂，用水洗涤残余物，干燥，并用乙酸乙酯磨碎，得到邻苯二甲酰基保护的化合物，为白色固体38.1g，收率89％；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ2.98(2H，t，J＝7.0Hz)，3.82(2H，t，J＝7.0Hz)，7.29(2H，s)，7.38(2H，d，J＝8.0Hz)，7.69(2H，t，J＝8.0Hz)，7.76-7.84(4H，m)；LRMS(ESI)m/z331(MH+)，348(MH+Na)；HPLC(方法2)2.9min。将在无水DMF(120ml)中的邻苯二甲酰基保护的化合物(12.7g，38.6毫摩尔)溶液在0℃和N2下用小比例NaH(60％分散体，在油中；3.5g，88.8mmol)处理15分钟，并在0℃和N2下搅拌反应物一小时。然后经15分钟逐滴加入碘代甲烷(4.8ml，77.2毫摩尔)，并且在0℃至室温和N2下将反应物搅拌过夜。将得到的黄色悬浮液倾倒在冰/水(1.4L)上，并搅拌30分钟。通过过滤收集沉淀物，依次用水、己烷和乙醚洗涤，然后真空干燥，得到N，N-二甲基-苯磺酰胺衍生物，为白色固体11.3g，收率81％；LRMS(ESI)m/z 359(MH+)，381(MH+Na)；HPLC(方法2)3.7min。将在95％乙醇(125ml)中的邻苯二甲酰基保护的化合物(11.3g，31.5毫摩尔)和水合肼(4.6ml，44.6毫摩尔)溶液加热回流2小时。将形成的白色固体通过过滤去除，并用乙醇洗涤。将合并的滤液和洗涤液真空浓缩，并将形成的固体通过过滤去除，并用乙醇洗涤。将该程序重复三次，将终过滤液真空蒸发至干。用乙酸乙酯萃取固体。将萃取液真空浓缩，得到游离胺，为黄色油状物4.8g，收率67％；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ2.65(6H，s)，2.84-2.92(4H，m)，7.47(2H，d，J＝8.5Hz)，7.71(2H，d，J＝8.5Hz)；LRMS(ESI)m/z 229(MH+)，251(MH+Na)；HPLC(方法2)2.3min。将该化合物用二氯三嗪处理，然后用烷基胺处理，然后脱保护，得到终产物。白色固体(2.2g，92％)；mp 143-146℃；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.42-1.53(2H，m)，1.64-1.78(4H，m)，2.60 & 2.64(6H，2x s)，2.92-2.99(2H，m)，3.01-3.07(2H，m)，3.39-3.48(2H，m)，3.68-3.78(2H，m)，6.83-6.92(1H，m)，7.24-7.37(2H，m)，7.42-7.71(5H，m)；LRMS(ESI)m/z 517(MH+)，539(MH+Na)；HPLC(方法1)4.3min。
实施例5化合物IV 根据实施例1，使用2-[4-氨基苯基]-乙基胺代替酪胺制备以上化合物。黄色固体，收率97％；mp 155-158℃；1H NMR(400MHz，D2O)δ1.42-1.53(2H，m)，1.63-1.76(4H，m)，2.87-3.02(4H，m)，3.40-3.48(2H，m)，3.62-3.77(2H，m)，7.07-7.15(2H，m)，7.28-7.38(3H，m)，7.40-7.49(1H，m)，7.52-7.63(2H，m)；LRMS(ESI)m/z 425(MH+)，447(MH+Na)；HPLC(方法3)1.9min。
实施例6化合物VI 根据实施例2，分别使用4-[2-氨基乙基]苯甲酰胺和3-氟苯胺代替酪胺和4-氟苯胺制备以上化合物。4-[2-氨基乙基]-苯甲酰胺如下制备将在甲醇(200ml)中的4-[2-氨基乙基]苯甲酸盐酸盐(5.0g，24.8毫摩尔)悬浮液用4M的在1，4-二噁烷(10ml，40毫摩尔)中的HCl溶液处理，然后将反应物加热回流过夜。真空去除溶剂和过量的酸。将残余物用乙醚研磨，并真空干燥，得到酯，为白色固体(5.5g，定量)；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ3.04(2H，t，J＝7.0Hz)，3.21(2H，td，J＝7.0，0.5Hz)，3.89(3H，s)，7.41(2H，dd，J＝8.0，0.5Hz)，8.00(2H，d，J＝8.0Hz)。将在四氢呋喃(60ml)和甲醇(30ml)中的该盐酸盐(5.4g，24.8毫摩尔)悬浮液用二异丙基乙胺(4.8ml，27.3毫摩尔)和二碳酸二叔丁酯(8.1g，37.2毫摩尔)处理。将反应物在室温和N2下搅拌5小时。将溶剂真空蒸发，并将残余物溶解在乙酸乙酯中。用水和饱和氯化钠洗涤溶液，然后干燥(硫酸镁)，过滤，并真空蒸发。将残余物用冷乙醚研磨，真空干燥，得到保护的化合物，为白色固体(5.6g，81％)；LRMS(ESI)m/z 192(MH+)，302(MH+Na)；HPLC(方法2)3.9min。用饱和的氨水溶液(36ml)处理在1，4-二噁烷(36ml)中的该酯(5.6g，20.0毫摩尔)溶液。将反应物在密封管中在100℃下加热过夜。冷却后，通过过滤收集沉淀的固体，用水洗涤，并真空干燥，得到酰胺，为白色固体(4.4g，82％)；LRMS(ESI)m/z 287(MH+Na)；HPLC(方法2)2.6min。通过在实施例2中的程序的修改进行叔丁氧羰基化合物(4.4g，16.5毫摩尔)的脱保护，其中省略水共溶剂，并真空干燥固体，代替冻干，得到白色固体(3.3g，定量)；LRMS(ESI)m/z 165(MH+)，187(MH+Na)；HPLC(方法2)0.3min。将该化合物与二氯-三嗪反应，然后与烷基胺反应，然后脱保护，得到终产物。白色固体，1.0g，收率20％；mp 190-192℃；1H NMR(400MHz，D2O)δ1.13-1.26(2H，m)，1.31-1.55(4H，m)，2.54-2.84(4H，m)，2.99-3.12(2H，m)，3.23-3.49(2H，m)，6.66-6.82(1H，m)，6.86-7.14(3H，m)，7.16-7.25(2H，m)，7.36-7.57(2H，m)；LRMS(ESI)m/z 453(MH+)；HPLC(方法2)1.5min。
实施例7化合物VII 通过实施例1中使用的程序的改变来对Boc保护的化合物(4.8毫摩尔)脱保护。在该情况下，使用在二氯甲烷(30ml)中的4M HCl/1，4-二噁烷(36ml)，在0℃至室温下，得到低密度的白色固体，收率87％；mp 165-168℃；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.40-1.51(2H，m)，1.62-1.74(4H，m)，2.87-3.04(4H，m)，2.93(2H，t，J 7.5Hz)，3.01(2H，t，J 6.5Hz)，3.41(2H，t，J 7.5Hz)，3.64-3.77(2H，m)，7.07-7.16(2H，m)，7.29-7.48(2H，m)，7.50-7.62(2H，m)，7.77-7.86(2H，m)；19F NMR(376.5MHz，CD3OD)δ-120.2至-119.8(1F，m)；LRMS(ESI)m/z245(MH+)，489(MH+Na)；HPLC(方法1)3.6min。
实施例8化合物VIII 根据实施例2，分别使用4-氨基苯磺酰胺和3-氟苯胺代替酪胺和4-氟苯胺制备以上化合物。浅米色固体，收率95％；mp 162-163℃；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.47-1.56(2H，m)，1.67-1.78(4H，m)，2.95(2H，t，J＝7.5Hz)，3.52(2H，t，J＝7.0Hz)，6.92-7.00(1H，m)，7.29-7.42(2H，m)，7.60-7.78(1H，m)，7.82-7.95(4H，m)；19F NMR(376.5MHz，CD3OD)δ-114.17至-113.71(1F，m)；LRMS(ESI)m/z 461(MH+)，483(MH+Na)；HPLC(方法4)3.7min。
实施例9化合物IX 根据实施例2，分别使用4-[2-氨基乙基]苯磺酰胺和4-氨基丁胺代替酪胺和5-氨基戊胺制备以上化合物。白色固体，收率74％；mp 181-184℃；1HNMR(400MHz，CD3OD)δ1.65-1.77(4H，m)，2.93-3.04(4H，m)，3.42-3.54(2H，m)，3.68-3.78(2H，m)，6.86-6.95(1H，m)，7.24-7.50(4H，m)，7.57-7.66(1H，m)，7.78-7.86(2H，m)；19F NMR(376.5MHz，CD3OD)δ-116.10至-115.43(1F，m)；LRMS(ESI)m/z 475(MH+)，497(MH+Na)；HPLC(方法1)3.6min。
实施例10化合物X 根据实施例2，使用N，N-二甲基-4-(2-氨基乙基)苯磺酰胺代替酪胺制备以上化合物。浅米色固体，收率57％；mp 290-295℃(分解)；1H NMR(400MHz，D2O)δ1.12-1.27(2H，m)，1.32-1.57(4H，m)，2.30-2.44(6H，m)，2.75-2.84(4H，m)，3.06-3.19(2H，m)，3.53-3.65(2H，m)，6.98-7.04(2H，m)，7.17-7.35(3H，m)，7.37-7.48(2H，m)，7.52-7.58(1H，m)；LRMS(ESI)m/z 517(MH+)，539(MH+Na)；HPLC(方法2)1.8min。
实施例11化合物XI 根据实施例2，使用[±]-酚乙醇胺代替酪胺制备以上化合物。白色固体，收率36％；mp 122-125℃；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.36-1.43(2H，m)，1.50(2H，tt，J＝7.0，7.0Hz)，1.57-1.63(2H，m)，2.62(2H，t，J＝7.0Hz)，3.28-3.40(2H，m)，3.45(1H，J＝13.5，8.0Hz)，3.54-3.63(1H，m)，4.67-4.75(1H，m)，6.69(2H，d，J＝8.5Hz)，6.96-7.00(2H，m)，7.13(2H，d，J＝8.5Hz)，7.56-7.67(2H，m)；LRMS(ESI)m/z 442(MH+)；HPLC(方法1)3.3min。
抗癌活性 实施例12在正常和癌细胞上测定的化合物的体外细胞毒性 进行该测定法以确定本发明的化合物对细胞的细胞毒性的效果。在化合物存在或不存在下在它们的各自条件培养基中孵育细胞。24小时或72小时孵育后，加入50μl 3-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-二苯基-2H-溴化四氮唑(MTT；2mg/ml)，并再孵育四小时。去除上清液，并加入100μl二甲基亚砜(DMSO)。用TecanSunrise ELISA平板读取器在570nm处读取吸光度。对照组由没有化合物的细胞组成，并指100％存活细胞。使用Prism软件确定IC50。
表1代表化合物对24小时或72小时细胞培养物中的正常(NHDF或正常人真皮成纤维细胞；HUVEC或人脐静脉内皮细胞)和癌(PC-3人前列腺癌细胞；P815鼠肥大细胞瘤细胞)细胞系的效果(IC50)。所有的化合物对细胞的细胞毒具有弱的作用。基于细胞毒测定法评价化合物对选择的癌细胞系的潜在体内抗癌活性的预测性应用在现有技术中已经建立，使用整个细胞而不是分离的蛋白受体或酶提供了更可靠的活性确定。参见例如Paull等(J.Nat’lCancer Inst.811088-1092，1989)；Monks等(J Nat’l Cancer Inst.83757-766，1991)；Bandes等(J.Nat’l Cancer Inst.86770-775，1994)；以及Kamate等(Int’lJ.Cancer 100571-579，2002)。
表1.化合物对24小时或72小时细胞培养物中的正常和癌细胞细胞毒的效果。
nd＝未测定 实施例13化合物对PC-3细胞迁移或侵袭的体外效果。
使用体外迁移测定法评价细胞二维运动性。将PC-3细胞置于12孔板上，并在RPMI+10％FBS中生长至汇合。用橡胶刮勺产生裸区。通过使用阻止细胞增殖和蛋白合成混淆事件的浓度的丝裂霉素C(0.5μM)处理使汇合的细胞处于静止。这些细胞还在内皮生长因子(EGF)和化合物存在或不存在下孵育24小时，然后对其进行拍照。
测定在体外迁移测定法中EGF和化合物V对PC-3细胞迁移或侵袭的效果。与对照(即没有加EGF)相比，EGF促进用丝裂霉素处理的PC-3细胞的迁移或侵袭。向细胞培养基中添加不同浓度(即1μM至10μM)的化合物V产生EGF诱导的PC-3迁移或侵袭的抑制。用化合物I观察到类似的结果。将不同浓度的化合物I添加到细胞培养物中在培养24小时后产生对EGF诱导的PC-3迁移或侵袭的抑制。
实施例14化合物对PC-3细胞粘附至细胞外基质成分的体外效果。
使用体外细胞粘附测定法评价化合物对癌细胞粘附的效果。在室温下用50μl/ml的粘附配体包被微滴定96孔板1小时，之前在PBS中，粘附配体就层粘连蛋白而言稀释至5μg/ml，就MATRIGELTM基底膜基质而言稀释至10μg/ml，或就胶原而言稀释至10μg/ml。用在PBS(100μl/孔)中的1％BSA溶液在37℃下封闭孔1小时。在37℃下用5μM钙黄绿素-AM溶液孵育PC-3细胞亚汇合培养物30分钟，然后通过在不含钙黄绿素-AM的培养基中孵育PC-3细胞来将自由钙黄绿素-AM洗去(30min)。用胰蛋白酶消化钙黄绿素-AM标记的细胞，洗涤，并重悬在粘附缓冲液(RPMI-1640，10％FBS，补充有1mM MgCl2)中。标记的PC-3细胞在化合物不存在或存在下预孵育30分钟，然后使终体积100μl的预孵育细胞在湿度孵箱中在37℃下粘附15min、30min或60min。通过用PBS洗涤两次去除未粘附的细胞，将粘附的细胞用在PBS中的100μl 1％Triton X-100溶液裂解。在激发波长485nm以及发射波长530nm的Tecan GENios Plus荧光读取器上读板。粘附的细胞数基于标准曲线计算。非特异性细胞粘附(粘附在用BSA包被的孔上)总是小于5％。
在上述体外细胞粘附测定法中加入的不同浓度的化合物V以剂量依赖性的方式抑制PC-3细胞对多种基质层粘连蛋白(图IA)、MATRIGELTM基底膜基质(图IB)或胶原(图1C)的粘附。
实施例15化合物对原发B16F10黑色素瘤肿瘤的抗肿瘤效果。
雌性6-8周龄C57BL/6小鼠在第0天皮内注射50μl来自ATCC的3.75x104存活B16F10黑色素瘤细胞(细胞培养物来源，Dr.I.J.Fidler)。在第14天，肿瘤达到80mm，动物随机分组用于治疗。然后将动物在第14天、第16天以及第18天静脉内注射盐水(阴性对照)或化合物(5mg/kg、25mg/kg或50mg/kg)或者在第14天10mg/kg阿霉素(阳性对照)。在第29天，处死小鼠。记录体重和肿瘤体积。使用公式0.4(a x b2)，通过用卡尺进行二维直径测量获得一系列肿瘤体积，其中″a″是肿瘤大直径，而″b″是垂直小直径。通过T/C可以定量抗肿瘤效果，T/C计算作(治疗的肿瘤体积/对照的肿瘤体积)x100％。
图2A显示化合物I或II对原发肿瘤B16F10细胞的抗肿瘤功效。与对照相比，两种化合物均诱导肿瘤体积的弱的降低(T/C，约80％)。图2B显示化合物V对原发肿瘤B16F10细胞的抗肿瘤功效。与对照相比，化合物V诱导肿瘤体积的显著降低(T/C＜40％，p＝0.001)。
实施例16化合物对原发DA-3乳房肿瘤的抗肿瘤效果。
同源DMB A3(DA-3，乳癌模型)细胞系由在雌性BALB/c小鼠中用7，12-二甲基苯并蒽处理的癌前损伤产生。DA-3细胞在塑料瓶中在含有0.1mM非必需氨基酸、0.1μM丙酮酸钠、2mM L-谷氨酰胺的RPMI-1640中作为单层培养物培养。进一步补充有50μM 2-巯基乙醇和10％胎牛血清。DA-3肿瘤通过皮内接种50μl 5x105个存活肿瘤细胞来进行体内系列传代，在6至8周龄BALB/c小鼠中产生局部肿瘤。然后通过手触证实肿瘤来系列监测动物。小鼠在第11天、第18天以及第25天用环磷酰胺(100mg/kg，静脉内注射)治疗，在第11天、第12天、第13天、第15天、第18天、第20天、第22天以及第25天用化合物静脉内治疗。从第27天至第55天处死小鼠。使用公式0.4(a x b2)，通过用卡尺进行二维直径测量来获得一系列肿瘤体积，其中″a″是肿瘤大直径，而″b″是垂直小直径。通常，接种后7天至10天可以触及肿瘤。国家癌症研究所(The National Cancer Institute，USA)定义如果T/C是≤40％，则产品是有效的。
图3显示静脉内给予(5mg/kg)化合物II、化合物IV、化合物V或环磷酰胺的抗肿瘤功效。所有的化合物诱导肿瘤体积的显著(p＜0.05)抑制，T/C在25％至70％之间。另外，与诱导肿瘤体积显著(p＜0.04)抑制的T/C在24％至50％之间的环磷酰胺相比，所有化合物与环磷酰胺类似直到第20天。还确定了针对DA-3肿瘤的化合物和CYTOXAN环磷酰胺的组合的抗肿瘤功效。
图4A比较单独静脉内给予(50mg/kg)化合物II与化合物II和环磷酰胺组合的抗肿瘤功效。化合物II诱导肿瘤体积的显著(p＜0.05)抑制，T/C在40％至70％之间。另外，与诱导肿瘤体积的显著(p＜0.05)抑制的T/C在24％至50％之间的环磷酰胺相比，用环磷酰胺和化合物II组合治疗的小鼠也显示对消退的肿瘤体积的显著(p＜0.0001)抑制，并且T/C低于10％。消退和细胞生长抑制作用(不生长)在组合方案中观察到。
图4B比较单独静脉内给予(50mg/kg)化合物I与化合物I和环磷酰胺组合的抗肿瘤功效。化合物I对DA-3肿瘤生长具有弱的抑制效果。环磷酰胺诱导肿瘤体积的显著(p＜0.01)抑制，T/C在20％至50％之间，用环磷酰胺和化合物I组合治疗的小鼠也显示肿瘤体积的显著(p＜0.05)抑制，T/C在10％至40％之间。细胞生长抑制作用(不生长)在组合方案中观察到直到第35天。所有治疗在第35天停止。保持环磷酰胺治疗的和组合CY+化合物I治疗的小鼠以观察肿瘤的再生长。肿瘤的再生长在两组中类似，但是在组合方案组中不太显著或是延迟的。
图4C比较单独静脉内给予(12.5mg/kg)化合物V与化合物V和环磷酰胺组合相比的抗肿瘤功效。所有方案诱导肿瘤体积的显著抑制(p＜0.04)直到第20天。用化合物V治疗的小鼠显示T/C为36％至74％的肿瘤体积的降低。但是，与诱导肿瘤体积抑制的T/C为30％至45％的环磷酰胺相比，用环磷酰胺和化合物V治疗的小鼠表现T/C在1％至20％之间的肿瘤体积的显著抑制。
图5比较单独口服给予(50mg/kg)顺铂与化合物VII和顺铂组合相比的抗肿瘤功效。顺铂诱导肿瘤体积的显著(p＜0.01)抑制，从第40天至第77天T/C在40％至77％之间。用顺铂和化合物VII组合治疗的小鼠也显示肿瘤体积的显著(p＜0.01)抑制，从第34天至第71天T/C在34％至71％之间。
实施例17化合物对原发P815肥大细胞瘤肿瘤的抗肿瘤效果。
同源P815是从ATCC(TIB64)获得的DBA/2(H-2d)衍生的肥大细胞瘤。P815细胞在含有10％胎牛血清的DMEM中培养。在第0天，在6至8周龄DBA/2小鼠中皮内注射50μl 5x105个存活P815细胞，以产生局部肿瘤。然后，通过手触证实肿瘤来系列监测动物。然后将小鼠每天口服给予载体(阴性对照)、乙酰水杨酸(阳性对照，50mg/kg)或化合物(50mg/kg)来治疗。在第23天处死小鼠。使用公式0.4(a x b2)，通过卡尺进行二维直径测量获得一系列肿瘤体积，其中″a″是肿瘤大直径，而″b″是垂直小直径。一般而言，在接种后3天至5天可以触及肿瘤。
图6显示口服给予的化合物I、化合物II、化合物V或乙酰水杨酸(阳性对照)对原发肿瘤P815细胞的效果。所有化合物诱导肿瘤生长的显著降低(T/C在40％至50％之间)。另外，所有化合物的效果与金标准可溶性乙酰水杨酸相当。
实施例18化合物对原发Lewis肺LL/2癌肿瘤的抗肿瘤效果。
同源LL/2是从ATCC(CRL-1642)获得的肺肿瘤细胞系。LL/2细胞在含有10％胎牛血清的DMEM中培养。在第0天，在6至8周龄小鼠中将50μl3x105个存活LL/2细胞皮内注射，以产生局部肿瘤。然后通过手触证实肿瘤来系列监测动物。然后每天口服给予载体(阴性对照)或化合物(50mg/kg)以及在第6天和第13天静脉内注射顺铂(5mg/kg)治疗小鼠。在第16天处死小鼠。使用公式0.4(a x b2)，通过卡尺进行二维直径测量获得一系列肿瘤体积，其中″a″是肿瘤大直径，而″b″是垂直小直径。一般而言，在接种后3天至5天可以触及肿瘤。
图7A显示口服给予化合物II或顺铂(阳性对照)对原发肿瘤LL/2细胞的效果。化合物II从第7天至第16天诱导肿瘤生长的显著降低(T/C在36％至60％，p＜0.04)。顺铂在第7天和第8天诱导肿瘤生长的显著降低(T/C在42％至84％之间，p＜0.04)。在另一实验中，使用环磷酰胺(100mg/kg)作为阳性对照，并在第9天和第15天注射。在第20天，处死小鼠。图7B显示环磷酰胺和化合物II的组合治疗效果。该组合治疗在原发肿瘤LL/2细胞的降低中获得协同活性。
图8显示口服给予化合物II、化合物III、化合物VII或环磷酰胺(阳性对照)对原发肿瘤LL/2细胞的效果。化合物II诱导肿瘤生长的降低(T/C在53％至74％之间)。化合物III诱导肿瘤生长的降低(T/C在67％至96％之间)。化合物VII诱导肿瘤生长的降低(T/C在72％至85％之间)。环磷酰胺诱导肿瘤生长的降低(T/C在50％至67％之间)。
实施例19化合物对PAN02胰腺肿瘤的抗肿瘤效果。
同源PAN02是从NCI(0507232)获得的胰腺肿瘤细胞系。PAN02在含10％胎牛血清的RPMI-1640中培养。在第0天，在6至8周龄的C57BL/6小鼠中将50μl 7.5x105个存活PAN02细胞皮内注射，以产生局部肿瘤。然后通过手触证实肿瘤来系列监测动物。然后每天口服给予载体(阴性对照)或化合物(50mg/kg)以及在第6天和第12天腹膜内注射吉西他滨(50mg/kg)治疗小鼠。在第40天处死小鼠。使用公式0.4(a x b2)，通过卡尺进行二维直径测量来获得一系列的肿瘤体积，其中″a″是肿瘤大直径，而″b″是垂直小直径。一般而言，在接种后3天至5天可以触及肿瘤。
图9显示口服给予化合物I、化合物V或吉西他滨(阳性对照)对原发肿瘤PAN02细胞的效果。化合物I和V两者均诱导肿瘤生长的弱降低(T/C分别在17％至67％之间以及在40％至84％之间)。另外，用于治疗胰腺癌症，所有化合物的效果与金标准吉西他滨(T/C在52％至77％之间)相当。
实施例20化合物对异种移植人前列腺PC-3肿瘤的抗肿瘤效果。
异种人前列腺肿瘤PC-3从ATCC(CRL1435)获得。PC-3细胞在含有10％胎牛血清的RPMI-1640中培养。在第0天，在6至8周龄的雄性CD1 nu/nu小鼠中皮内注射50μl存活PC-3(1.5至2X106)细胞，以产生局部肿瘤。然后通过手触证实肿瘤来系列监测动物。当肿瘤达到满意的体积时，将小鼠随机分组，然后第一、二和三周分别用静脉内注射载体(阴性对照)、环磷酰胺(阳性对照，100mg/kg)或化合物(5mg/kg)治疗四次、三次和三次。在56天至65天之间处死小鼠。使用公式0.4(a x b2)，通过用卡尺进行二维直径测量来获得一系列肿瘤体积，其中″a″是肿瘤大直径，而″b″是垂直小直径。
图10A显示化合物II或环磷酰胺对异种移植人前列腺PC-3肿瘤的效果。化合物II诱导肿瘤生长的显著降低(T/C在29％至75％之间)。环磷酰胺诱导肿瘤生长的显著降低(T/C在1％至52％之间)。另外，化合物II表明细胞生长抑制(无生长)作用直到第42天。
图10B显示化合物II、环磷酰胺或化合物II和环磷酰胺的组合对异种移植人前列腺PC-3肿瘤的效果。环磷酰胺诱导肿瘤生长的显著降低(T/C在8％至31％之间)。用化合物II和环磷酰胺组合治疗导致显著的降低(T/C在1％至23％之间)，之后肿瘤消退。肿瘤再生长在第48天治疗结束后在环磷酰胺治疗组较快。
图10C显示单独口服给予化合物V和与环磷酰胺一起给予对异种移植人前列腺PC-3肿瘤的抗肿瘤功效。口服给予化合物V诱导肿瘤体积的显著(p＜0.05)抑制，T/C在14％至40％之间。环磷酰胺诱导肿瘤体积的显著抑制(p＜0.05)，T/C在1％至39％之间。用环磷酰胺和口服给予化合物V组合治疗的小鼠显示肿瘤体积的显著(p＜0.01)抑制，T/C在1％至40％之间，伴有肿瘤消退。
抗炎活性 实施例21在WEHI-13VAR细胞系中化合物对TNFα诱导的凋亡的效果。
通过标准生物学测定法，使用WEHI-13VAR细胞测定化合物对TNFα诱导的凋亡的效果。这些细胞在它们在TNFα和放线菌素D存在下培养时经历凋亡。2x104 WEHI-13VAR细胞在补充有1％丙酮酸钠和10％FBS的RPMI中培养，在37℃下细胞粘附过夜。然后，将细胞在37℃下在1μg/ml放线菌素D(抑制蛋白合成)和0.04nM TNFα以及有或没有化合物下培养。16小时至24小时后，将50μl 2mg/ml MTT溶液加入各孔中，然后将板在37℃下孵育4小时。仅仅存活的细胞代谢MTT，形成甲
盐，其通过测量在570nm处的吸光度来检测。孵育后，将板倒转以去除培养基和死细胞。将150μLDMSO加入各孔中，以终止反应和溶解甲
盐。在Bio-Tek EL 800UV微板读取器上读取光密度。光密度的下降是TNFα诱导的细胞凋亡的直接证据。还比较化合物与抗TNFα中和抗体的活性。
表2代表在基于细胞的TNFα敏感的WEHI-13VAR细胞增殖测定法中检测的化合物的TNFα抑制百分比(凋亡)。化合物表明TNFα抑制活性在40-80％范围内。比较而言，TNFα抗体证明90-95％的TNFα抑制活性。该数据例示了本发明的化合物抑制TNFα对TNFα敏感的WEHI-13 VAR细胞的凋亡活性的能力。
表2.化合物对TNF-α抑制(凋亡)的效果。
实施例22化合物对小鼠J774A.1细胞系中LPS诱导的TNFα产生的效果。
使用LPS刺激的J774A.1细胞，通过ELISA测定化合物对TNFα产生的效果。J774A.1细胞在LPS和化合物存在或不存在下培养。细胞在37℃下培养24小时，然后收集上清液用于通过ELISA测定TNFα的浓度，ELISA如厂商(BD Biosciences)所推荐的进行。数据在Microsoft Excel软件中分析，并使用Prism软件计算抑制50％TNFα产生(IC50)的化合物的浓度。
表3总结化合物对由LPS对J774A.1细胞诱导的TNFα产生的效果。
表3.化合物对LPS诱导的TNFα产生的效果。
实施例23化合物对在小鼠J774A.1细胞系中LPS诱导的PGE2产生的效果。
化合物对PGE2产生的效果使用LPS刺激的J774A.1细胞通过ELISA进行测定。J774A.1细胞在LPS和化合物存在和不存在下培养。细胞在37℃下培养24小时，然后收集上清液用于通过ELISA测定PGE2浓度，ELISA如厂商(GE Healthcare)所推荐的进行。数据在Microsoft Excel软件中分析，并使用Prism软件计算抑制50％PGE2产生(IC50)的化合物的浓度。
图11显示化合物V在LPS刺激的J774A.1中对PGE2产生的效果。化合物V抑制PGE2产生，IC50为2μM。
实施例24化合物对外周血单核白细胞(PBML)细胞毒、DNA、RNA和蛋白合成的效果。
PBML从健康自愿者的外周血获得。用多型淋巴细胞分离液培养基(Cedarlane，Hornby，加拿大)对血进行梯度离心。收集含有单核白细胞的层，并在PBS中洗涤细胞三次。然后将细胞悬浮在补充有10％FBS(Hyclone，Logan USA)的RPMI(Gibco，Burlington，加拿大)中。通过锥虫蓝拒染法确定存活率大于99％。
将PBML以2x 106个细胞/ml悬浮。在化合物存在或不存在下在96孔微量滴定板中培养100μL PBML(2x105个细胞)48小时。细胞用刀豆蛋白A(con A；T细胞)或商陆促细胞分裂素(PWM；B细胞)静止或刺激。孵育后，将细胞用MTT处理(细胞毒性)或用1μCi[3H]-胸苷(DNA合成)、[3H]-尿苷(RNA合成)或[3H]-亮氨酸(蛋白合成)脉冲刺激6小时。将板在Tomteck上收集并在Microbetaβ计数仪上计数。
表4总结化合物对人外周血单核白细胞(PBML)的细胞毒、DNA、RNA和蛋白合成的效果。没有观察到细胞的细胞毒。不过，当PBML用刺激T细胞增殖的促细胞分裂原con A和刺激B细胞增殖的促细胞分裂原PWM刺激时所有的化合物抑制DNA。RNA合成在静止和刺激的(con A和PWM)PBML中均被抑制。不过，仅化合物I和II在刺激的PBML中抑制蛋白合成。这些结果表明T和B细胞都抑制。这些细胞强烈地参与炎症性疾病例如自身免疫性疾病。
表4.化合物对静止或刺激的PBML细胞毒、DNA、RNA以及蛋白合成的效果。
nd＝未测定 实施例25化合物对系统性红斑狼疮(SLE)的效果。
经NZB x NZW F1杂交的新西兰小鼠发生在人SLE中看到的多数自身免疫性异常，并死于SLE样免疫复合物(IC)介导的肾小球肾炎。小鼠产生高滴度的抗DNA(双链和单链)和核提取物(NE)抗体以及SLE相关的临床表现，包括白细胞减少、血小板减少、蛋白尿和肾小球肾炎。这些小鼠在3个月龄后产生抗DNA抗体，在7个月时发生抗DNA抗体反应高峰。之后，抗DNA抗体的血清浓度下降，预测结果是进展性尿毒症。该疾病的最初血清学表现发生在约150天(即5个月)。在约250天时评价它们的生存。
图12显示化合物I对NZB x NZW小鼠死亡率的影响。从第10周至第46周每周一次进行静脉内给予化合物或载体。结果表明化合物I降低NZB xNZW小鼠死亡率。
实施例26化合物对迟发型超敏反应(DTH)的效果。
检测化合物用于治疗小鼠中噁唑酮诱导的迟发型超敏反应(DTH)的能力。在第0天，用在5％丙酮中的100μL噁唑酮致敏小鼠。在第0天、第1天和第2天，通过静脉内(IV)或口服(PO)给予载体(对照)或甲氨蝶呤(MTX；阳性对照/IV)或氢化可的松(阳性对照/PO)或化合物来治疗小鼠，它们的浓度低于或等于50mg/kg或如所规定。小鼠通过在右耳的表面施用50μl噁唑酮来激发(第一次激发，在第3天；第二次激发，在第10天)。在第4天至第7天，以及在第11天至14天测量耳厚。还观察到发红和硬皮形成。在第14天处死小鼠。TDTH(CD4)细胞在调节DTH反应的强度中起重要作用。化合物可通过其抑制T细胞活性以及DNA、RNA和/或蛋白合成发挥对DTH反应的抑制性影响。
如图13A所示，静脉内给予(25mg/kg)化合物I诱导噁唑酮第一次激发后诱导的炎症的显著降低，这如降低的耳厚所见。另外，由化合物I诱导的炎症的抑制与由甲氨蝶呤的免疫抑制剂量所获得的结果相当。静脉内给予(25mg/kg)化合物I诱导噁唑酮第二次激发后诱导的炎症的显著降低，这如降低的耳厚所见(图13B)。另外，由化合物I诱导的炎症的抑制与由甲氨蝶呤的免疫抑制剂量所获得的结果相当。
如图14A所示，静脉内给予(5mg/kg)化合物II诱导噁唑酮第一次激发后诱导的炎症的显著降低，这如降低的耳厚所见。另外，由化合物II诱导的炎症的抑制与由甲氨蝶呤的免疫抑制剂量所获得的结果相当。静脉内给予(5mg/kg)化合物II诱导噁唑酮第二次激发后诱导的炎症的显著降低，这如降低的耳厚所见(图14B)。另外，由化合物II诱导的炎症的抑制与由甲氨蝶呤的免疫抑制剂量所获得的结果相当。
如图15所示，口服给予(50mg/kg)化合物IV或化合物V诱导炎症的显著降低，这如降低的耳厚所见。另外，由化合物IV或化合物V诱导的炎症的抑制与由氢化可的松的治疗剂量(50mg/kg)获得的结果相当。
图16显示在第一次(图16A)和第二次(图16B)噁唑酮激发后口服给予50mg/kg化合物III的效果。化合物III诱导炎症的显著降低，这如在两次激发中降低的耳厚所见。
图17显示在噁唑酮第一次激发后静脉内分别给予5mg/kg或25mg/kg化合物X或化合物XI的效果。化合物X和XI诱导炎症的显著降低，这如较低的耳重所见。另外，由化合物X或XI所诱导的炎症的抑制与由甲氨蝶呤的免疫抑制剂量获得的结果相当。
实施例27化合物对弗氏佐剂诱导的关节炎(AIA)的效果。
通过将悬浮在矿物油中的冻干乳酪分支杆菌(Mycobacterium butyricum)注射入足垫中来在雌性Lewis大鼠中诱导AIA。在佐剂注射后经3周时间监测关节炎的发生。在佐剂给予后的第3天炎症达到高峰。在第10天至第16天左右出现免疫活化。从第3至第21天口服给予化合物。记录体重。使用作为炎症(水肿)、发红以及关节僵硬的量度的关节炎指数监测疾病的发展。通过使用卡尺在中侧面和背腹面测量踝的两垂直直径来确定关节炎的程度。然后使用几何公式计算以毫米计的关节周长。
如图18所示，100％的动物快速发生滑膜炎。通过在第1天至第5天和从第8天至结束(by day 8 and over)口服给予消炎痛(阳性对照)观察到关节炎的严重程度的显著降低。使用化合物也可在第1天至第4天以及从第8天至第16天观察到类似的炎症指数的降低。
实施例28化合物对气囊模型炎症的效果。
大鼠气囊模型中LPS诱导的炎症认为是模拟在关节疾病例如关节炎中发生的病理过程。这是因为沿气囊形成的结缔组织与在慢性关节疾病中发现的那些类似。LPS诱导的炎症和慢性关节疾病具有其他共同特征，包括显著的升高的PGE2、中性粒细胞浸润、细胞因子形成以及组织损伤。
在第-6天通过皮下注射20ml无菌气体进入雄性Lewis大鼠(175至200g)背部的肩胛骨区(intrascapular)来产生气腔。在第-3天注射入另外的10ml气体以保持气腔开放。在第0天，静脉内给予化合物，并在一小时之后将脂多糖(LPS2.5ml 2μg/ml，在PBS中)注射入囊中产生炎症反应。在LPS处理2小时、4小时或18小时后，通过CO2窒息使动物安乐死，并将5ml PBS/肝素(10U/ml)/消炎痛(36μg/ml)注射入囊中。收集囊液体。测量流出物的体积，并通过Coulter计数仪确定流出物中存在的白细胞的数目。通过瑞氏-吉姆萨染色确定分类计数。通过特异的ELISA确定囊流出物中的PGE2、LTB4、MCP和TNFα。
如图19所示，静脉内给予化合物II或化合物V诱导在LPS诱导后两小时的白细胞计数的显著抑制。这些血白细胞的分类计数表明有大于90％中性粒细胞，如瑞氏-吉姆萨染色所见。通过化合物II或V得到的抑制与由阳性对照消炎痛获得的抑制类似。
图20A显示在气囊大鼠模型中静脉内给予化合物II或化合物V对LPS诱导的TNFα产生(诱导后两小时)的效果。化合物V诱导LPS诱导的TNFα产生的显著抑制。但是化合物II或消炎痛增加LPS诱导后两小时后的TNFα的浓度。
图20B显示在气囊大鼠模型中静脉内给予化合物II或化合物V对LPS诱导的PGE2产生(诱导后两小时)的效果。化合物V和消炎痛诱导LPS诱导的PGE2产生的显著抑制。但是用化合物II观察到弱且不显著的PGE2抑制。
图20C显示在气囊大鼠模型中静脉内给予化合物II或化合物V对LPS诱导的LTB4产生(诱导后两小时)的效果。化合物II和V诱导LPS诱导的LTB4产生的弱抑制。但是消炎痛不影响LTB4的产生。
图20D代表在气囊大鼠模型中静脉内给予化合物II或化合物V对LPS诱导的MCP-1产生(诱导后两小时)的效果。化合物V诱导LPS诱导的LTB4产生的弱抑制。但是消炎痛诱导显著的增加，而化合物II对LPS诱导后两小时后流出液中MCP-1的存在没有影响。
在另一组实验中，在LPS诱导后12小时后收集流出物。图21A代表静脉内给予化合物II或化合物V对LPS诱导的TNFα产生的效果。化合物V诱导LPS诱导的TNFα产生的显著抑制。但是化合物II对LPS诱导后十二小时后流出液中TNFα的浓度没有影响。消炎痛诱导对LPS诱导后十二小时后流出液中的TNFα的弱抑制。
图21B显示在气囊大鼠模型中静脉内给予化合物II或化合物V对LPS诱导的PGE2产生(诱导后十二小时)的效果。化合物V或消炎痛诱导LPS诱导的PGE2产生的显著抑制。但是用化合物II观察到PGE2的弱且非显著性增加。
实施例29化合物V对DNBS诱导的结肠炎的效果。
2，4-二硝基苯磺酸(DNBS)诱导的实验性结肠炎小鼠模型作为炎症性肠病模型。在第0天，CD1小鼠用DNBS通过结肠内滴注0.1ml DNBS(40mg/ml)乙醇溶液(30％)来致敏。在用DNBS致敏后1小时开始，将化合物V以25mg/kg和50mg/kg每天一次连续四天口服给予。在第4天，处死小鼠，收集8cm远端结肠，并纵向切开用于大体评价。
与阴性对照(载体)相比，化合物V诱导弱但是具有显著性的体重增加(25mg/kg时p＝0.049，而在50mg/kg时p＝0.038)，表明治疗的小鼠健康更好。的确，在对照组中观察到死亡率，但是在用化合物V治疗的组中没有观察到。
如图22所示，与阴性对照(载体)相比，化合物V诱导强且显著地DNBS诱导的结肠粘膜组织的大体损伤面积(在25mg/kg时p＝0.003，而在50mg/kg时p＝0.012)的降低。
实施例30化合物V对实验性自身免疫性脑脊髓炎的效果。
以PLP诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠模型作为多发性硬化模型。在第0天，SJL小鼠用乳化在弗氏完全佐剂中的75μg PLP(139-151)(200μl乳液/小鼠，皮下注射，分在四个部位)和用百日咳毒素(200ng，腹膜内)免疫。在第2天，重复腹膜内注射百日咳毒素。化合物V以25mg/kg和50mg/kg口服每天一次给予，在第0天开始，直至免疫后30天，每周六次。
观察小鼠EAE临床症状直至免疫后30天。根据以下标准进行症状的临床等级评定0＝无病，1＝尾无力，2＝中度截瘫，3＝重度截瘫，4＝濒死状态，5＝死亡。如图23所示，化合物V以剂量依赖性方式降低EAE症状的表现。与阴性对照(载体)相比，在50mg/kg时，化合物V表现显著的活性(p＝0.048)。
本文所引用的专利、专利申请以及其他出版物以它们的全部内容引入本文作为参考。
在权利要求书的含义及其法律等同物的范围内的所有修改和替换应包含在其范围内。使用连接词“包含”的权利要求允许在权利要求的范围内包含其他元素；代替“包含”术语，本发明还通过使用连接词“基本上由...组成”(即如果其他元素不实质性地影响发明的实施，允许在权利要求的范围内包含它们)和连接词“由...组成”(即除了通常与发明相关的杂质或无关紧要的活性外仅允许在权利要求中列出的元素)的这样的权利要求来描述。这三种连接词中的任何一种可用于要求本发明。
应该理解，本说明书中描述的元素不应该理解为限制所保护的权利要求，除非其在权利要求中清楚地指出。因此，权利要求是确定授权的法律保护的范围的基础而不是来自说明书的、曲解权利要求书的限制。相反，现有技术在至先占所要保护的发明或破坏新颖性的具体实施方式
的程度上被清楚地排出在本发明之外。
另外，无意于在权利要求的各限制之间设置特定的关系，除非该关系在权利要求中被清楚地指出(例如在产品权利要求中的组分的排列或在方法权利要求中步骤的顺序对权利要求没有限制，除非特别地指出如此)。本文公开的各个元素的所有可能组合和排列被认为是本发明的方面；类似地，对发明描述的概括认为是发明的一部分。
从前述，本领域技术人员将清楚，在不偏离本发明的精神或必要特征的前提下，本发明能够以其他特定的形式实施。所描述的实施方案应该认为仅是例示性的，而不是限制性的，因为提供的本发明的法律保护范围将通过所附的权利要求书而不是通过说明书来指出。
权利要求
1.下式的化合物
其中X是F或Cl；
Y是NH、O或S；
R是NH2、OH、SO2NH2、SO2N(CH3)H、SO2N(CH3)2或CONH2；
m是2至6的整数；且
n是0至2的整数，其中二碳片段(n＝2)包括
Z＝H或OH的
2.根据权利要求1所述的化合物，其中X＝F。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中Y＝NH或O。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中m＝4-6。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中n＝2。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中R＝NH2、OH、SO2NH2或SO2N(CH3)2。
7.一种化合物，其选自
8.一种组合物，其包含一种或多种权利要求1至7中任一项所述的化合物和药学上可接受的载体。
9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述药学上可接受的载体溶解所述一种或多种化合物，且选自醇、多元醇溶剂和单糖或二糖的水性溶液。
10.根据权利要求8所述的组合物，其进一步包含化疗药。
11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述化疗药选自达卡巴嗪、阿霉素、柔红霉素、环磷酰胺、长春碱、长春新碱、博莱霉素、足叶乙甙、托泊替康、伊立替康、泰索帝、紫杉醇、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、顺铂、卡铂、奥沙利铂、赛特铂和苯丁酸氮芥。
12.根据权利要求8所述的组合物，其进一步包含与TNFα结合的蛋白。
13.根据权利要求12所述的组合物，其中所述蛋白是抗TNFα抗体或可溶性TNFα受体。
14.根据权利要求8所述的组合物，其进一步包含能结合TNFα的低分子量化合物(非蛋白)。
15.根据权利要求8所述的组合物，其进一步包含甲氨蝶呤、抗炎皮质类固醇、非甾体抗炎药或其组合。
16.一种治疗癌症患者的方法，所述方法包括给予所述患者治疗有效量的一种或多种权利要求1-7中任一项所述的化合物或权利要求8至11中任一项所述的组合物。
17.一种或多种权利要求1-7中任一项所述的化合物或权利要求8至11中任一项所述的组合物用于制备用于治疗癌症的药物的应用。
18.一种治疗自身免疫患者的方法，所述方法包括给予所述患者治疗有效量的一种或多种权利要求1-7中任一项所述的化合物或权利要求8至9和12至15中任一项所述的组合物。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述自身免疫患者具有至少克隆氏病、炎症性肠病或多发性硬化。
20.一种或多种权利要求1-7中任一项所述的化合物或权利要求8至9和12至15中任一项所述的组合物用于制备用于治疗自身免疫性疾病的药物的应用。
21.一种或多种权利要求1至7中任一项所述的化合物降低哺乳动物中炎症的应用。
22.下式的化合物
其中X是F或Cl；
Y是NH、O或S；
R是NH2、OH、F或Cl；
m是2至6的整数；且
n是0至2的整数。
23.一种治疗癌症患者的方法，所述方法包括给予所述患者治疗有效量的一种或多种权利要求22所述的化合物。
24.一种治疗自身免疫患者的方法，所述方法包括给予所述患者治疗有效量的一种或多种权利要求22所述的化合物。
25.一种或多种权利要求22所述的化合物用于制备用于治疗癌症或自身免疫性疾病的药物的应用。
全文摘要
本发明描述所述通式(I)的化合物其中X是氟或氯；Y是氧、硫或氨基；R是氨基、羟基、氨磺酰或酰氨基或其N-一甲基或N-二甲基类似物；m是2至6的整数，且n是0至2的整数。所述化合物可用于治疗某些癌症和自身免疫性疾病。
文档编号A61P37/00GK101679321SQ200880014036
公开日2010年3月24日 申请日期2008年4月25日 优先权日2007年4月30日
发明者B·扎卡赖尔, C·彭尼, L·加尼翁, B·格劳克斯, L·格尔茨, S·D·阿博特 申请人:普罗米蒂克生物科学公司